CN109900909A - 一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条 - Google Patents

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曾令文
刘雨杰
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Abstract

本发明属于疾病检测、免疫传感技术领域,涉及一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条。本发明所述的试纸条包括底板、硝酸纤维素膜、结合垫、吸水纸以及样品垫;所述硝酸纤维素膜,粘结在所述底板的中部;所述硝酸纤维素膜的一端粘贴有结合垫,另一端粘贴有吸水纸,所述结合垫上粘贴有样品垫;所述硝酸纤维素膜上设有测试线和控制线,所述测试线上喷洒有骨桥蛋白单克隆抗体,所述控制线上喷洒有ssDNA,所述ssDNA是与骨桥蛋白适配体互补的单链DNA;所述结合垫上固定纳米金标记的链霉亲和素。本发明所述的一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条能够快速、简单地检测骨桥蛋白,且具有灵敏度高,特异性强的优点。

Description

一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条
技术领域
本发明属于疾病检测、免疫传感技术领域,具体涉及一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条。
背景技术
骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种磷酸化的酸性分泌型蛋白,具有多种生物学功能,广泛存在于各种组织和体液中,通过一定的信号传导途径参与细胞行为,如调节细胞黏附、迁移和信号传导等行为,且能够促进细胞的趋化、黏附和迁移。近几年的研究发现OPN在正常组织中呈现很低的表达水平,而在恶性肿瘤(乳腺癌、卵巢癌和结肠直肠癌等)中呈现高表达水平,且与肿瘤的侵袭、转移等恶性行为密切相关。因此,对骨桥蛋白进行检测在肿瘤预防和肿瘤监测方面具有重要意义。
骨桥蛋白的传统检测方法需要依靠大型仪器,尽管检测结果精准可靠、灵敏度高,但是存在仪器设备昂贵、耗时长、成本高,并且需要专业技术人员,难以实时快速检测的缺点。因此,开发出快捷、灵敏、精确、高效和低成本的检测手段显得尤为重要。
侧流免疫层析技术因其简单、快速、成本低等优点,近年来受到广泛关注。本发明设计了一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条,检测时,向样品垫上滴加生物素适配体化的待测骨桥蛋白溶液样品,5min可观察到实验结果。
发明内容
为了克服上述现有技术中存在的不足,提供一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条。
为了解决上述技术问题,本发明采取了如下技术措施:
首先,制备纳米金-链霉亲和素(AuNP-SA)探针,其方法包括以下步骤:
(1)制备纳米金AuNP溶液:在250mL的圆底烧瓶中加入100mL0.01%的氯金酸溶液,磁力搅拌加热至沸腾;然后向上述溶液中加入5mL1%柠檬酸钠,溶液变为酒红色后,继续煮沸10min,停止加热,继续搅拌15min,得到纳米金AuNP(胶体金)溶液,4℃避光保存。
(2)向1mL的胶体金溶液中加入0.1molL-1K2CO3(5μL)混匀,5min后加入8μg的SA(链霉亲和素),室温震荡30min。加入10%BSA(100μL)封闭30min,4℃离心(10×103rpm,10min),得到AuNP-SA(纳米金-链霉亲和素)探针。弃清液,用100μL硼酸缓冲液(0.2mol L-1,pH9.0)重悬AuNP-SA探针。
其次,一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条包括底板、硝酸纤维素膜、结合垫、吸水纸以及样品垫;所述硝酸纤维素膜,粘结在所述底板的中部;所述硝酸纤维素膜的一端粘贴有结合垫,另一端粘贴有吸水纸,所述结合垫上粘贴有样品垫。所述硝酸纤维素膜上设有测试线和控制线,所述测试线上是由骨桥蛋白的单克隆抗体(0.67mg mL-1,30μL)喷洒到硝酸纤维素膜上形成的;所述控制线是由ssDNA(0.67mg mL-1,30μL)喷洒到硝酸纤维素膜上形成的,所述ssDNA是与骨桥蛋白适配体互补的单链DNA。
优选地,所述样品垫是由玻璃纤维浸泡在含有1%BSA,2%Triton,2%PEG4000,20mmol L-1Tris-Ac和50mmol L-1NaAc的溶液中,晾干后形成的。
优选地,所述样品垫与结合垫之间有2-3mm的重叠,所述结合垫与硝酸纤维素膜之间有2-3mm的重叠,所述硝酸纤维素膜与所述吸水纸之间有2-3mm的重叠。
然后,一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条,其检测方法如下:
(1)将100μL的生物素化的骨桥蛋白适配体(Biotinylatedaptamer)和500μL待测骨桥蛋白溶液样品混合均匀,室温反应30min后,4℃离心3次(12×103rmp,10min),弃上清液,用100μL硼酸缓冲液(0.2mol L-1,PH9.0)重悬骨桥蛋白-适配体-生物素。
(2)取骨桥蛋白-适配体-生物素溶液60μL,滴加到所述试纸条的样品垫上。
与现有技术相比,本发明的优点和有益效果在于:
(1)本发明所述的一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条,实验结果在5min内用肉眼就能观察到,避免了传统检测方法操作步骤复杂,操作时间长等缺点。
(2)本发明所述的一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条具有很高的灵敏度和特异性,其他蛋白质对检测信号不产生干扰。
(3)本发明所述的一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条,操作方便,可用于乳腺癌、卵巢癌和肺癌的早期诊断,在医疗领域具有较好的应用前景。
附图说明
图1为本发明所述的一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条的侧面结构示意图。
图2为本发明所述的一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条检测原理示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
本发明所述的一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条,其制备方法如下:
A、制备纳米金-链霉亲和素AuNP-SA探针,其方法包括以下步骤:
(1)纳米金AuNP的制备:在250mL的圆底烧瓶中加入100mL 0.01%的氯金酸溶液,磁力搅拌加热至沸腾;然后向上述溶液中加入5mL 1%柠檬酸三钠,溶液变为酒红色后,继续煮沸10min,停止加热继续搅拌15min,得到纳米金AuNP(胶体金)溶液,4℃避光保存;
(2)向1mL的胶体金溶液中加入0.1mol L-1K2CO3(5μL)混匀,5min后加入8μg的SA(链霉亲和素),室温震荡30min。加入10%BSA(100μL)封闭30min,4℃离心(10×103rpm,10min),得到AuNP-SA(纳米金-链霉亲和素)探针。弃清液,用100μL硼酸缓冲液(0.2mol L-1,pH9.0)重悬AuNP-SA探针。
B、构建一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条,其方法如下:将骨桥蛋白的单克隆抗体OPN antibody(0.67mg mL-1,30μL)和ssDNA(与骨桥蛋白aptamer互补的单链DNA)(0.67mg mL-1,30μL)同时喷洒在硝酸纤维素(NC,nitrocellulose)膜上,分别形成检测线(Test Line)和控制线(Control Line)。将玻璃纤维浸泡在含有1%BSA,2%Triton,2%PEG4000,20mmol L-1Tris-Ac和50mmol L-1NaAc的溶液中,晾干后形成样品垫。将纳米金-链霉亲和素溶液喷在结合垫上(9μL cm-1)。如图1所示,样品垫(Sample pad),结合垫(Conjugate pad),硝酸纤维素膜(Nitro-membrance)和吸水纸(Absorbent pad)依次贴在具有粘性的底板(Backing pad)上,各部分有2-3mm的重叠。
实施例2
本发明所述的一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条,其检测方法如下:
A、制备骨桥蛋白-适配体-生物素(Aptamer-OPN complex)溶液:将100μL的生物素化的适配体和500μL待测的骨桥蛋白溶液混合均匀,室温反应30min后,4℃离心3次(12×103rmp,10min),弃上清液,用100μL硼酸缓冲液(0.2mol L-1,PH9.0)重悬骨桥蛋白-适配体-生物素,得Aptamer-OPN complex。
B、取所述骨桥蛋白-适配体-生物素溶液60μL,滴加到所述试纸条的样品垫上。5min后,观察实验结果。
实验结果表明,随着骨桥蛋白浓度的增加,T区的红色逐渐加深。当样品中不含骨桥蛋白时,只有C区显色,T区不显色。
实施例3
本发明所述的一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条,其特异性检测方法如下:
按照上述骨桥蛋白的检测方法,分别使用人血清白蛋白,人附睾蛋白4和癌胚抗原作为对照,分析本发明检测骨桥蛋白的特异性。检测结果表明,分别将对照蛋白(人血清白蛋白,人附睾蛋白4和癌胚抗原)制备的蛋白-适配体-生物素溶液滴加到本发明试纸条的样品垫上时,T区不显色,只有C区显色。而使用骨桥蛋白制备的骨桥蛋白-适配体-生物素溶液,用肉眼在T区就可以看到明显的红色条带。说明试纸条特异性好,检测结果不受其他蛋白的干扰。

Claims (6)

1.一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条,其特征在于,所述试纸条包括底板、硝酸纤维素膜、结合垫、吸水纸以及样品垫;所述硝酸纤维素膜,粘结在所述底板的中部;所述硝酸纤维素膜的一端粘贴有结合垫,另一端粘贴有吸水纸,所述结合垫上粘贴有样品垫。
2.根据权利要求1所述的试纸条,其特征在于,所述硝酸纤维素膜上设有测试线和控制线,所述测试线上是由骨桥蛋白的单克隆抗体(0.67mg mL-1,30μL)喷洒到硝酸纤维素膜上形成的;所述控制线是由ssDNA(0.67mg mL-1,30μL)喷洒到硝酸纤维素膜上形成的,所述ssDNA是与骨桥蛋白适配体互补的单链DNA。
3.根据权利要求1所述的试纸条,其特征在于,所述结合垫上固定纳米金标记的链霉亲和素,所述纳米金-链霉亲和素溶液是由纳米金和链霉亲和素混合溶液经BSA封闭后,用硼酸缓冲液(0.2mol L-1,pH9.0)重悬得到的。
4.根据权利要求1所述的试纸条,其特征在于,所述样品垫是由玻璃纤维浸泡在含有1%BSA,2%Triton,2%PEG4000,20mmol L-1Tris-Ac和50mmol L-1NaAc的溶液中,晾干后形成的。
5.根据权利要求1所述的试纸条,其特征在于,所述样品垫与结合垫之间有2-3mm的重叠,所述结合垫与硝酸纤维素膜之间有2-3mm的重叠,所述硝酸纤维素膜与所述吸水纸之间有2-3mm的重叠。
6.根据权利要求1所述的试纸条,其特征在于,所述试纸条是用于检测骨桥蛋白的。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111077313A (zh) * 2019-12-23 2020-04-28 佛山科学技术学院 一种检测金黄色葡萄球菌的胶体金试纸条及制备方法
CN111751540A (zh) * 2020-07-20 2020-10-09 烟台大学 一种用于核酸酶检测的sers横向流动试纸条及检测方法
CN112098643A (zh) * 2020-08-20 2020-12-18 广东省农业科学院农业生物基因研究中心 一种评估冠状病毒跨物种传染风险的方法和试纸条及其应用
CN115980343A (zh) * 2023-03-21 2023-04-18 北京大学 一种化学发光法侧流免疫检测方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120034711A1 (en) * 2010-08-05 2012-02-09 Oil Crops Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Science Digital immunochromatographic test strip for semi-quantitative detection of aflatoxin B1 and preparation method thereof
CN103389382A (zh) * 2013-08-07 2013-11-13 中国科学院广州生物医药与健康研究院 一种用于检测组蛋白甲基化的信号增强的试纸条生物传感器
CN103913568A (zh) * 2013-01-04 2014-07-09 广州万孚生物技术股份有限公司 一种人体自身抗体联检试纸条及其制备方法
CN104280549A (zh) * 2014-09-16 2015-01-14 中山生物工程有限公司 EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂及其制备方法
CN106370844A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 吕炜锋 人骨代谢标志物检测双胶体金试纸条及应用其的检测装置
CN210051775U (zh) * 2019-02-28 2020-02-11 中国科学院广州生物医药与健康研究院 一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120034711A1 (en) * 2010-08-05 2012-02-09 Oil Crops Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Science Digital immunochromatographic test strip for semi-quantitative detection of aflatoxin B1 and preparation method thereof
CN103913568A (zh) * 2013-01-04 2014-07-09 广州万孚生物技术股份有限公司 一种人体自身抗体联检试纸条及其制备方法
CN103389382A (zh) * 2013-08-07 2013-11-13 中国科学院广州生物医药与健康研究院 一种用于检测组蛋白甲基化的信号增强的试纸条生物传感器
CN104280549A (zh) * 2014-09-16 2015-01-14 中山生物工程有限公司 EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂及其制备方法
CN106370844A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 吕炜锋 人骨代谢标志物检测双胶体金试纸条及应用其的检测装置
CN210051775U (zh) * 2019-02-28 2020-02-11 中国科学院广州生物医药与健康研究院 一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111077313A (zh) * 2019-12-23 2020-04-28 佛山科学技术学院 一种检测金黄色葡萄球菌的胶体金试纸条及制备方法
CN111751540A (zh) * 2020-07-20 2020-10-09 烟台大学 一种用于核酸酶检测的sers横向流动试纸条及检测方法
CN111751540B (zh) * 2020-07-20 2023-03-03 烟台大学 一种用于核酸酶检测的sers横向流动试纸条及检测方法
CN112098643A (zh) * 2020-08-20 2020-12-18 广东省农业科学院农业生物基因研究中心 一种评估冠状病毒跨物种传染风险的方法和试纸条及其应用
CN112098643B (zh) * 2020-08-20 2022-02-15 广东省农业科学院农业生物基因研究中心 一种评估冠状病毒跨物种传染风险的方法和试纸条及其应用
CN115980343A (zh) * 2023-03-21 2023-04-18 北京大学 一种化学发光法侧流免疫检测方法
CN115980343B (zh) * 2023-03-21 2023-07-07 北京大学 一种化学发光法侧流免疫检测方法

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