CN109880831A - 桃生长素原初响应因子PpIAA1基因及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及桃生长素原初响应因子基因PpIAA1及其应用。从桃果实中克隆得到PpIAA1基因，进一步将上述PpIAA1基因稳定转化Micro‑Tom番茄进行功能验证。结果表明，和野生型番茄相比，PpIAA1转基因株系植株根系分支减少、叶片颜色明显变绿、果实提前成熟和货架期变短。同时转PpIAA1基因株系的番茄果实成熟期提前6～8天。通过1‑MCP处理‘中油桃13号’能明显抑制基因PpIAA1表达，NAA或乙烯处理‘中油桃16号’能显著促进基因PpIAA1表达，说明该基因在桃果实成熟软化过程中起重要作用。本发明筛选的PpIAA1基因将有助于研究在桃果实成熟期生长素和乙烯共同促进桃果实成熟的响应机制。

Description

桃生长素原初响应因子PpIAA1基因及其应用

技术领域

本发明属于生长素应答因子基因及其应用领域，具体涉及桃生长素原初响应因子PpIAA1基因及其应用。

背景技术

桃[Prunuspersica (L). Batsch]果实一般为溶质型（melting flesh，MF），属于呼吸跃变型果实，在乙烯跃变后迅速软化，达到商品成熟，而硬质型桃果实成熟期（stonyhard，SH）没有乙烯跃变高峰，果实不变软。Tatsuki等（Tatsuki et al., 2013）比较溶质型和硬质型桃成熟期果实发现，两者间不仅乙烯释放量存在差异，同时生长素和脱落酸积累也存在明显的差异，且硬质型桃乙烯合成水平较低可能是由于其生长素（IAA）的水平较低。采用生长调节剂萘乙酸（1-Naphthaleneacetic acid，NAA）处理硬质桃果实可以诱导ACS1表达迅速提升，从而产生大量乙烯，果实变软。

生长素在果实发育的各个阶段均起重要的调节作用。生长素在转录水平上的调控作用受到诸多蛋白的影响。生长素/吲哚乙酸蛋白（auxin/indoleacetic acids protein，Aux/IAA）和生长素反应因子（auxin response factor，ARF）是两类重要的调控蛋白。生长素通过对Aux/IAA（auxin/indole-3-acetic acid）蛋白水平的调节进而快速诱导一系列的生长素响应基因表达。Aux/IAA家族的基因属于生长素原初反应基因，编码半衰期较短的核定位蛋白质。大量研究表明这些核定位蛋白可以通过与生长素响应因子ARF形成异源二聚体而在生长素信号传导过程中起到抑制的作用。在果实发育的各个阶段Aux/IAA家族基因均起着十分重要的作用。在番茄中，沉默SlIAA9基因会引起番茄的单性结实，同时番茄叶片由单叶变为复叶。沉默SlIAA27基因引起了番茄的单性结实，并且改变了果实的大小和形状。近来研究发现，沉默番茄SlIAA17基因后转基因植株果实细胞明显增大，果皮增厚，果实变大，同时果实可溶性固形物、pH值、硬度均发生改变。而桃果实中PpIAA1基因的研究却鲜有报道。

发明内容

本发明的目的之一是提供桃生长素原初响应因子PpIAA1基因在减少番茄侧根数目和/或加深番茄叶片颜色中的应用。

本发明的目的之二是提供桃生长素原初响应因子PpIAA1基因在促进番茄果实成熟和/或减少番茄果实储藏时间中的应用。

桃生长素原初响应因子PpIAA1基因序列如SEQ ID NO:1所示。

进一步地，桃生长素原初响应因子PpIAA1基因所编码的蛋白如SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供含有桃生长素原初响应因子PpIAA1基因的重组植物表达载体以及含有该表达载体的宿主细胞。

为达到以上目的，所采取的技术方案为：

从桃果实中提取RNA，通过反转录试剂盒（天根，北京）获得单链cDNA，以单链cDNA为模板，以下述序列为引物，通过PCR获得PpIAA1基因的全长序列。引物序列为：

正向IAA1f：5'- ATGAACATGCCACCGGATGCTG -3'，如SEQ ID NO:3所示；

反向IAA1r：5'- TTGTGGCAGAACCTGAGACGTC -3'，如SEQ ID NO:4所示；退火温度为58℃。

将目的片段通过pTOPO-blunt载体克隆，然后用一步克隆试剂盒连接到pK2GW7载体上。检测阳性克隆的引物序列分别为

vIAA1f：5'- GGAGTCCACCATGGTAATGAACATGCCACCGGATGCTG -3'，如SEQ ID NO:5所示；

vIAA1r：5'- TAGCGTTAACACTAGTCATTGTGGCAGAACCTGAGACGTC -3'，如SEQ ID NO:6所示。用1%琼脂糖电泳检测PCR扩增产物，阳性克隆送至上海生工生物科技股份有限公司测序。

鉴于桃尚未建立高效、成熟的遗传转化体系，故采用模式植物Micro-Tom番茄用PpIAA1基因的功能验证，番茄转化方法参照Sun et al（2006），Bee Lynn Chew and Yu Pan（诺丁汉大学）优化。Micro-Tom 番茄种子用75%酒精表面消毒，无菌水漂洗3次后，10%次氯酸钠消毒1 h。取出后在无菌水中清洗6次，滤纸上晾干。种子播种于pH 5.9，含有0.8%琼脂的50%MS培养基中。植物在14 h /10 h 光暗，25℃，80%相对湿度、250 μmol m^-2 s^-1光强的组培室中培养。

利用农杆菌介导的叶盘法将构建的含有PpIAA1基因的pK2GW7载体导入Micro-Tom番茄中，经过共培养、潮霉素筛选培养、生根培养等过程获得潮霉素抗性植株，结合抗生素筛选、PCR分子鉴定阳性植株，确保下一步转基因植株材料的准确性。

PCR鉴定阳性植株所用的引物：

pK2GW7F：5'- TTCTTGTTCCCATTTCTCTCT -3'，如SEQ ID NO:7所示；

pK2GW7R：5'- AGCTGGTCACCTGTAATTCAC -3'，如SEQ ID NO:8所示，用于证实片段插入。

本发明方法是克隆桃Aux/IAA相关的基因家族成员，分析该基因在溶质型桃果实成熟过程中的表达模式，最后用农杆菌介导的方法转入Mcro-Tom番茄中验证目的基因的功能。有利于从分子机制上阐明在桃成熟过程中的生长素信号的响应机制，对进一步实现桃有目的、有针对性的品质和性状改良，创制桃新种质，具有积极的指导作用。

本发明研究了PpIAA1基因在转基因番茄中的作用，以野生型为对照，测定了其在生长10 d时植株根系，结果植株侧根数目明显少于野生型。观察植株性状发现，转基因株系的叶片颜色明显深于野生型株系；对番茄果实的观察发现，转基因成熟明显早于野生型，采后观察发现，转基因株系的果实储藏时间明显短于野生型，因此PpIAA1基因改变了番茄成熟及采后货架期。

由此，将本发明PpIAA1基因基因引入到目标植物或植物细胞中，能够有效改变目标植物的营养生长和生殖生长能力。

本发明还提供了一种培育转PpIAA1基因植物的方法，包括：( 1 )构建含有所述PpIAA1基因的重组植物表达载体；( 2 )将所构建的重组植物表达载体转化到植物细胞或植物组织中；( 3 )培育筛选得到转基因植物。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

本发明通过克隆桃生长素响应因子PpIAA1，分析该基因在溶质型桃果实成熟过程中的表达模式，采用酵母单杂交、烟草双荧光素酶和桃瞬时表达技术，揭示生长素可以通过PpIAA1直接调控乙烯合成关键基因PpACS1、脱落酸（ABA）合成关键基因PpNCED2/3以及细胞壁降解相关基因PpPG1。最后用农杆菌介导的方法转入Micro-Tom番茄中验证目的基因的功能，从分子机制上阐明在桃成熟过程中的生长素信号的作用机制，对进一步实现桃有目的、有针对性的品质和性状改良，培育桃新品种，具有积极的指导作用。

附图说明

图1为桃PpIAA1基因PCR扩增电泳图，M: DL 2000 marker，泳道1和2为PpIAA1基因，大小为768bp。

图2为PpIAA1基因在CN13和CN16不同成熟期的表达情况。（a）果实成熟过程中基因PpIAA1的表达。（b）CN13采后1-MCP处理对基因PpIAA1表达的影响。（c、d）CN16采后乙烯或NAA处理对基因PpIAA1表达水平的影响。

图3为PpIAA1直接结合并激活基因PpNCED2、PpNCED3、PpPG1和PpACS1的启动子活性。（a）酵母单杂交实验结果图。（b）双荧光素酶实验结果图。（c）桃果实中瞬时超表达PpIAA1基因结果图。

图4 为转基因阳性植株的PCR扩增产物电泳图。M为Marker，泳道1为野生型，泳道2～11为转基因株系。

图5为WT和PpIAA1转基因株系叶片颜色比较图。

图6为WT和PpIAA1转基因叶绿素含量（a）及其合成基因表达量（b）比较图。

图7为WT和PpIAA1转基因株系叶片透射电镜比较图，图中PpIAA1表示PpIAA1转基因株系。

图8为WT和PpIAA1转基因株系侧根数目比较图。

图9为WT和PpIAA1转基因株系果实成熟期比较图。

图10果实成熟时的乙烯释放和硬度变化图。（a）野生型WT和转基因株系PpIAA1-16、PpIAA1-21番茄成熟过程中乙烯的释放量，（b）野生型WT和转基因株系PpIAA1-16、PpIAA1-21番茄成熟过程中硬度变化。

图11为番茄果实不同时期乙烯合成基因（SlACO1、SlACS2、SlACS4）、乙烯信号转导基因（SlEIL1、SlETR2）、果实成熟相关基因（SlNOR、SlRIN）和细胞壁降解相关基因（SlPG）的定量分析图。

图12为WT和PpIAA1转基因株系果实采后0～4周变化图。

图13为番茄果实采后的乙烯合成相关基因（SlACO1、SlACS2、SlACS4）、细胞彭压相关基因（SlCER1、SlPDF2）和细胞壁降解相关基因（SlPE、SlPG、SlPL）的定量分析图。

图14为番茄采后不同时间细胞壁降解相关基因的表达分析图。（a）WT和转基因PpIAA1-16和PpIAA1-21番茄果实采后乙烯释放量。（b）WT和转基因PpIAA1-16和PpIAA1-21番茄果实采后果实硬度变化。

图中WT表示野生型番茄，PpIAA1-16和PpIAA1-21分别表示转基因番茄株系16和21，DPA表示花后天数。

图中*表示差异显著（p<0.05），**表示差异极显著（p<0.01），***表示差异极显著（p<0.001）。S3表示果实第二次指数生长时期，S4 表示果实跃变前期，S4表示果实跃变期，S4表示果实跃变后期。IAA1-16和IAA1-21分别表示转基因株系PpIAA1-16和PpIAA1-21。

具体实施方式

下面结合具体实施实例来进一步描述本发明。但是应理解所述实例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。

试验材料：溶质型桃品种‘中油桃13号’（CN13）和硬质型桃品种‘中油桃16号’（CN16）均来自中国农业科学院郑州果树研究所桃育种苗圃。

实施例1桃PpIAA1基因的分离及鉴定

利用植物多糖多酚试剂盒（DP441，天根，北京）提取桃果肉RNA，通过反转录试剂盒（天根，北京）获得单链cDNA，以单链cDNA为模版，以下述序列为引物，通过PCR获得PpIAA1基因的全长序列，如SEQ ID NO:1所示，PCR扩增产物的电泳图见图1。PCR扩增程序：预变性98℃3min，变性98℃ 30s，退火59℃ 30s，延伸72℃ 30s，30个循环；PCR扩增体系：上游引物0.5ul（10uM/ml），下游引物0.5ul（10uM/ml），DNA 1ul（20ng/ul），PCR Mix25ul，最有用ddH₂O补齐至50ul。引物序列为：

正向IAA1f：5'- ATGAACATGCCACCGGATGCTG -3'，如SEQ ID NO:3所示；

反向IAA1r：5'- TTGTGGCAGAACCTGAGACGTC -3'，如SEQ ID NO:4所示。

将PpIAA1基因片段通过pTOPO-blunt载体克隆，然后用一步克隆试剂盒（Vazyme，中国南京）连接到pK2GW7载体上。PCR检测阳性克隆。PCR扩增程序：预变性98℃3min，变性98℃ 30s，退火58℃ 30s，延伸72℃ 30s，30个循环；PCR扩增体系：上游引物0.25ul （10uM/ml），下游引物0.25ul （10uM/ml），DNA 0.5ul（20ng/ul），PCR Mix10ul，最有用ddH₂O补齐至20ul。检测阳性克隆的引物序列分别为：

vIAA1f：5'- GGAGTCCACCATGGTAATGAACATGCCACCGGATGCTG -3'，如SEQ ID NO:5所示；

vIAA1r：5'- TAGCGTTAACACTAGTCATTGTGGCAGAACCTGAGACGTC -3'，如SEQ ID NO:6所示。用1%琼脂糖电泳检测PCR扩增产物，阳性克隆送至上海生工生物科技股份有限公司测序。

实施例2 桃PpIAA1基因表达分析

采用qRT-PCR检测PpIAA1基因在CN13桃成熟不同时期的表达情况。选取Actin（ppa007242m）作为内参基因，用2^-ΔΔCt公式计算基因相对表达量，qRT-PCR扩增程序：预变性95℃ 5min，变性95℃ 30s，退火60℃ 30s，延伸72℃ 30s，45个循环；qRT-PCR扩增体系：上游引物0.3ul （10uM/ml），下游引物0.3ul （10uM/ml），cDNA 1ul（20ng/ul），Mix 7.5ul，最有用ddH₂O补齐至15ul。定量分析引物序列为：

正向RTIAA1f：5'- GGCTGTTGGGATAGCTCCAA -3'，如SEQ ID NO:9所示；

反向RTIAA1r：5'- GCTTGATCAGTACCATTCATTTCATT-3'，如SEQ ID NO:10所示。

结果显示，PpIAA1基因在CN13桃果实不同成熟期均有表达，同时PpIAA1基因随着CN13桃果实的发育迅速增长，并在S4III时期达到高峰；但基因PpIAA1在CN16桃果实整个成熟时期表达量都很低（基因PpIAA1在CN16中的表达量过低，柱状图上无法显示出来）。CN13采后1-MCP处理能显著的抑制基因PpIAA1的表达（图2b）；CN16采后乙烯或NAA处理能在处理后第4天明显地促进基因PpIAA1的表达（图2c和2d）。酵母单杂交、双荧光素酶实验和瞬时侵染桃等实验结果表明PpIAA1能直接结合PpNCED2、PpNCED3、PpPG1和PpACS1启动子，并对启动子有促进作用，见图3。图3a为酵母单杂交实验结果，表明PpIAA1 可以结合在PpNCED2、PpNCED3、PpPG1、PpACS1的启动子上，金担子素（AbA）为筛选标记，所用到的AbA最低抑制浓度分别为50、280ng/ml。Rec-P53 和 P53-promoter为酵母单杂交实验的阳性对照。图3b为双荧光素酶实验结果，表明 PpIAA1 为转录激活子，可以促进PpNCED2、PpNCED3、PpPG1、PpACS1的转录。含 PpIAA1 或PpNCED2、PpNCED3、PpPG1、PpACS1启动子的 GV3101 农杆菌注射本氏烟烟草叶片，和空载阴性对照相比， PpIAA1 能显著的提高PpNCED2、PpNCED3、PpPG1、PpACS1的 LUC/REN 比率，表明 PpIAA1 能激活PpNCED2、PpNCED3、PpPG1、PpACS1启动子的转录活性。图3c为桃果实中瞬时超表达PpIAA1 基因结果，表明瞬时超表达 PpIAA1基因可以提高基因PpNCED2、PpNCED3、PpPG1、PpACS1的转录水平，并能提高 ABA 的含量，空载的35S:PpIAA1 质粒为阴性对照。

实施例3 PpIAA1基因的功能鉴定试验

为研究PpIAA1基因是否参与到桃成熟过程中的生长素信号途径中，通过转基因番茄来分析鉴定其功能。

3.1转基因番茄阳性株的筛选

番茄转化方法参照Sun et al（2006），Bee Lynn Chew and Yu Pan（诺丁汉大学）优化。Micro-Tom番茄种子用75%酒精表面消毒，无菌水漂洗3次后，10%次氯酸钠消毒1 h。取出后在无菌水中清洗6次，滤纸上晾干。种子播种于pH 5.9，含有0.8%琼脂的50%MS培养基中。植物在14 h /10 h 光暗，25℃，80%相对湿度、250 μmol m^-2 s^-1光强的组培室中培养。

过表达载体PpIAA1-pK2GW7的构建，用 PCR 扩增目的基因的 CDS 序列，用含部分attB接头的基因特异性引物，进行第一轮 PCR，取第一轮的 PCR 产物做模板，加入通用引物，进行第二轮，产物回收后与含有attP位点的入门载体 pDONR201 进行 BP反应（BPClonase™Enzyme Mix，Invitrogen）。挑取 BP 反应的阳性克隆提取质粒后与含attR位点的终载体pK2GW7进行 LR 反应（GATEWAY™ LR Clonase™Enzyme Mix，Invitrogen）以构建过表达载体PpIAA1-pK2GW7。

含部分attB接头的基因特异性引物：

attB1-PpIAA1-F5'-AAAAAGCAGGCTCCATGGCAAGACCGCAA-3’，如SEQ ID NO:11所示，

attB2-PpIAA1-R5'-AGAAAGCTGGGTTTTAAAGGGCTTGTGGTGC -3’，如SEQ ID NO:12所示。

通用引物：

attB1-adapter-F 5’-GGGGACAAGT TTGTACAAAAAAGCAGGCT -3’，如SEQ ID NO:13所示，

attB2-adapter-R 5’-GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGT -3’，如SEQ ID NO:14所示。

提取经过测序的PpIAA1-pK2GW7载体的质粒，液氮冻融法转入农杆菌GV3101中。调整农杆菌菌液浓度OD至0.5，用叶盘法浸染转化Micro-Tom番茄，并在生根培养基上分化叶和根。待长成小苗后，提取DNA，常规PCR鉴定阳性植株，见图4。PCR鉴定阳性植株所用的引物：

pK2GW7F：5'- TTCTTGTTCCCATTTCTCTCT -3'，如SEQ ID NO:7所示；

pK2GW7R：5'- AGCTGGTCACCTGTAATTCAC -3'，如SEQ ID NO:8所示，用于证实片段插入。

收获T0代种子后，在含有潮霉素的1/2MS培养基上筛选阳性植株。转基因阳性植株含有抗生素基因，在含有抗生素的培养基上长出真叶和主根后移栽到土壤中培养并收获T1代种子。T1代种子播下后，利用T2代转基因番茄观察与野生型的差别。

3.2超表达PpIAA1基因对番茄叶片的影响。

与野生型相比，2个典型的转基因株系（株系16、21）生长45 d的叶片颜色较深（见图5），2个典型的转基因株系的叶绿素（叶绿素a和叶绿素b）的含量较高（见图6a）、叶绿素合成基因（GUN4、CHLI、CHLH、Amino、HEMA、ProtoA）的表达量较高，见图6b。透射电镜结果显示转基因株系叶片叶绿体形态发生明显变化（图7）。

3.3超表达PpIAA1基因对番茄果实发育的影响。

PpIAA1在二个转基因株系（株系16、21）果实发育中超表达导致果实成熟期发生了改变。经过观察，野生型和转基因果实成熟期明显不同，转基因的果实成熟期明显提前6～8天，见图9。

3.4 超表达PpIAA1基因对番茄植株根系的影响

与野生型相比，转基因番茄植株的根系数量明显减少，见图8。

3.5PpIAA1基因对番茄果实硬度和乙烯的影响

对番茄果实发育期Br（转色期）、Br+1（转色1天）、Br+2（转色2天）、Br+3（转色3天）和Br+6（转色6天）的硬度和乙烯进行测定，野生型和转基因果实硬度随着果实成熟不断下降，与野生型相比，转基因果实的硬度稍有下降（图10b）。乙烯释放量在果实成熟前期不断上升，野生型在B3时达到峰值，随后释放量开始下降。与野生型相比，PpIAA1转基因株系的乙烯释放在花后33天达到峰值，并且花后34/37天乙烯释放量也相对较高（图10a）。乙烯合成酶关键基因SlACS2、SlACS4和SlACO1基因的表达和乙烯释放量一致，乙烯信号转导基因SlETR2、SlEIL1在Br+1时的表达量明显高于野生型，果实成熟相关转录因子SlNOR、SlRIN和细胞壁降解相关基因SlPG在转基因番茄中的表达量也明显上调（图11）。上述结果说明PpIAA1基因促进了番茄果实的成熟。

3.6 PpIAA1基因对番茄果实采后的影响

为理解PpIAA1基因在番茄采后过程中的作用，取转色6天的果实放置0、1、2、3周，并检测乙烯释放量和果实硬度及细胞壁降解相关基因的表达，结果显示，与野生型相比，转基因果实提前变皱变软，见图12。转基因株系番茄果实的货架期明显缩短。转基因番茄果实采后乙烯释放量高，果实硬度下降速度快，并且乙烯合成基因（SlACO1、SlACS2、SlACS4）和细胞壁降解相关基因（SlCER1、SlPDF2、SlPG、SlPE、SlPL）的表达量也上调，见图13和14。

以上所述之实施例，只是本发明的较佳实施例而已，仅仅用以解释本发明，并非限制本发明实施范围，对于本技术领域的技术人员来说，当然可根据本说明书中所公开的技术内容，通过置换或改变的方式轻易做出其它的实施方式，故凡在本发明的原理及工艺条件所做的变化和改进等，均应包括于本发明申请专利范围内。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国农业科学院郑州果树研究所

<120> 桃生长素原初响应因子PpIAA1基因及其应用

<130> 无

<160> 14

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 768

<212> DNA

<213> Prunus persica

<400> 1

atgaacatgc caccggatgc tgttgacgat gatgatgtca gcaaaagcat ggattttaag 60

gacactgagc tcaccttagg actgcctggt cgtccacgac gttgttcttc atcagcagct 120

gatcatttct tcggaggaat caagagtggt agctgcagcg tgaaacgggg gttcatggag 180

accgttgatc agaatattgg cctggaaagc tttaccagct gcgagccacg tagccaaatc 240

aaagtggatg ggaagttgga agctcattac aacaactact cctcctccag ctcaagtagc 300

aggacaacta ctgccgtgaa atccccagct gcaatggcaa gagtagttgg gtggcctcca 360

gtgagatcgt tgagacagaa ggcgttggtg gagagcaaga tgaagagcaa gagcacgtat 420

gtaaaagtgg gtgcagatgg agctccttac ttgcggaaac tagacttaga catgtacaaa 480

agttatcagg agctattgag agccttagac caaatgttcc cttccttcat tacaagcggt 540

aagtatgtgg aggatactac gagcaaccag gagcagctta tgaaacctgc agtgaaagga 600

atggatgaat atatggtgat gacatatgaa gacaaggatg gggactggat gttagttgga 660

gacgtccctt ggaaaatgtt tatagaatca tgcaagcgta ttcggttgat gaaaagttca 720

gaggctgttg ggatagctcc aaggacgtct caggttctgc cacaatga 768

<210> 2

<211> 255

<212> PRT

<213> Prunus persica

<400> 2

Met Asn Met Pro Pro Asp Ala Val Asp Asp Asp Asp Val Ser Lys Ser

1 5 10 15

Met Asp Phe Lys Asp Thr Glu Leu Thr Leu Gly Leu Pro Gly Arg Pro

20 25 30

Arg Arg Cys Ser Ser Ser Ala Ala Asp His Phe Phe Gly Gly Ile Lys

35 40 45

Ser Gly Ser Cys Ser Val Lys Arg Gly Phe Met Glu Thr Val Asp Gln

50 55 60

Asn Ile Gly Leu Glu Ser Phe Thr Ser Cys Glu Pro Arg Ser Gln Ile

65 70 75 80

Lys Val Asp Gly Lys Leu Glu Ala His Tyr Asn Asn Tyr Ser Ser Ser

85 90 95

Ser Ser Ser Ser Arg Thr Thr Thr Ala Val Lys Ser Pro Ala Ala Met

100 105 110

Ala Arg Val Val Gly Trp Pro Pro Val Arg Ser Leu Arg Gln Lys Ala

115 120 125

Leu Val Glu Ser Lys Met Lys Ser Lys Ser Thr Tyr Val Lys Val Gly

130 135 140

Ala Asp Gly Ala Pro Tyr Leu Arg Lys Leu Asp Leu Asp Met Tyr Lys

145 150 155 160

Ser Tyr Gln Glu Leu Leu Arg Ala Leu Asp Gln Met Phe Pro Ser Phe

165 170 175

Ile Thr Ser Gly Lys Tyr Val Glu Asp Thr Thr Ser Asn Gln Glu Gln

180 185 190

Leu Met Lys Pro Ala Val Lys Gly Met Asp Glu Tyr Met Val Met Thr

195 200 205

Tyr Glu Asp Lys Asp Gly Asp Trp Met Leu Val Gly Asp Val Pro Trp

210 215 220

Lys Met Phe Ile Glu Ser Cys Lys Arg Ile Arg Leu Met Lys Ser Ser

225 230 235 240

Glu Ala Val Gly Ile Ala Pro Arg Thr Ser Gln Val Leu Pro Gln

245 250 255

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<400> 3

atgaacatgc caccggatgc tg 22

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence）

<400> 4

ttgtggcaga acctgagacg tc 22

<210> 5

<211> 38

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence）

<400> 5

ggagtccacc atggtaatga acatgccacc ggatgctg 38

<210> 6

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence）

<400> 6

tagcgttaac actagtcatt gtggcagaac ctgagacgtc 40

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence）

<400> 7

ttcttgttcc catttctctc t 21

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence ）

<400> 8

agctggtcac ctgtaattca c 21

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence ）

<400> 9

ggctgttggg atagctccaa 20

<210> 10

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence ）

<400> 10

gcttgatcag taccattcat ttcatt 26

<210> 11

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence）

<400> 11

aaaaagcagg ctccatggca agaccgcaa 29

<210> 12

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence）

<400> 12

agaaagctgg gttttaaagg gcttgtggtg c 31

<210> 13

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence）

<400> 13

ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggct 29

<210> 14

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence）

<400> 14

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggt 29

Claims (8)

1.桃生长素原初响应因子PpIAA1基因在减少番茄侧根数目和/或加深番茄叶片颜色中的应用，其特征在于，所述PpIAA1基因序列如SEQ ID NO:1所示。

2.桃生长素原初响应因子PpIAA1基因在促进番茄果实成熟和/或减少番茄果实储藏时间中的应用，其特征在于，所述PpIAA1基因序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，PpIAA1基因所编码的蛋白如SEQ ID NO:2所示。

4.含有权利要求1或2所述PpIAA1基因的植物重组表达载体。

5.含有权利要求4所述重组载体的宿主细胞。

6.桃生长素原初响应因子PpIAA1基因在植物育种中的应用，其特征在于，所述PpIAA1基因序列如SEQ ID NO:1所示。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述植物为番茄或桃。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，培育转PpIAA1基因番茄，具体包括：（1）构建含有所述PpIAA1基因的重组植物表达载体；（2）将所构建的重组植物表达载体转化到番茄细胞或组织中；（3）培育筛选得到转基因番茄。