CN109868249B - 一株具有好氧反硝化能力的海杆菌及其应用 - Google Patents

Abstract

一株具有好氧反硝化能力的海杆菌及其应用，涉及海杆菌。所述海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215，是从西南印度洋4432m的深层海水中分离获得。海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215能在有氧和无氧条件下，分别以硝酸盐和亚硝酸盐为唯一氮源进行反硝化脱氮，且反硝化终产物为N₂，不释放N₂O。脱氮作用在含氮模拟废水中进行，所述含氮模拟废水的碳源分别为柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠、琥珀酸钠、丙酸钠、甘油、麦芽糖。可在含氮废水、海淡水养殖生物脱氮中应用。

Description

一株具有好氧反硝化能力的海杆菌及其应用

技术领域

本发明涉及海杆菌，尤其是涉及一株具有好氧反硝化能力的海杆菌及其应用。

背景技术

天然水体中，氮以-3至+5九种不同价态形式存在，在生物及非生物因素的共同作用下，它们在水体内不断地迁移转化，构成一个复杂的动态循环。随着现代工农业的发展，氮素对环境污染问题日益加剧。氨氮、硝酸盐和亚硝酸盐污染水体造成的水体富营养化现象日趋严重，不仅对淡水和海洋生态系统造成极大破坏，而且导致地下水和饮用水的污染。同时，在现代商业化养殖模式的集约化管理与高密度养殖下，水体中氮素的积累也成为威胁水产养殖环境健康的一个重要诱因。硝酸盐和亚硝酸盐对人体以及养殖动物具有毒害作用，可将血液中的亚铁血红蛋白(Fe²⁺)氧化成高铁血红蛋白(Fe³⁺)，从而抑制血液的载氧能力，严重时会导致生物体缺氧而窒息死亡。亚硝酸盐还是强烈的致癌物质。因此，水体环境中过量氮素污染去除问题不仅作为世界性环境问题之一引起广泛的研究和关注，也是实现健康水产养殖的一个研究热点。

相较于物理、化学脱氮方法，目前认为生物脱氮法去除氮素污染更为经济有效。参与生物脱氮的微生物主要包括硝化细菌和反硝化细菌。反硝化细菌可通过参与反硝化过程的一系列酶将硝酸盐和亚硝酸盐转化成气态氮，将氮素从水体环境中脱除，改善养殖环境水质，避免水体富营养化。传统理论认为，细菌的反硝化作用是一个严格的厌氧过程，反硝化细菌会优先利用氧气作为最终电子受体。好氧反硝化细菌的发现，突破了传统的认识，同时也为人们研究新的生物脱氮技术提供了新的依据。

好氧反硝化是指在有氧条件下能以NO₃ ^--N、NO₂ ^--N作为最终电子受体，进行反硝化，释放N₂O和N₂等气体产物的过程。由于N₂O还原酶对氧气浓度非常敏感，目前分离出的好氧反硝化菌的最终气体产物大多为N₂O。而N₂O是重要的温室气体，而其辐射增温潜势是CO₂的296倍。随着大气中N₂O浓度的不断上升以及由此所带来的环境问题，使得控制N₂O释放成为人们研究的焦点，也是废水的生物脱氮技术的一个新的关注点。目前关于好氧反硝化细菌的报道不少，但海洋来源的耐盐好氧反硝化细菌相对较少，以氮气为终产物，不释放N₂O的好氧反硝化菌更少，因此分离筛选来源于海洋环境的具有盐度适应范围广、脱氮效率高，低产或不产N₂O的微生物菌株，开发源于海洋菌株的微生物制剂是净化养殖水体、高盐污水脱氮以及海洋氮素污染修复的有效策略。

中国专利CN201310660825公开一种海杆菌及其应用。具体涉及一种海杆菌(Marinobacterhydrocarbonoclasticus.)NY-4，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2013428，保藏日期为2013年9月14号。还提供了该菌株在废水和高盐废水中的应用。该菌株能耐受较高的盐浓度，且在好氧条件下具有高效的反硝化能力，能够有效地去除高盐废水中的硝酸盐氮和亚硝酸盐氮。

中国专利CN201510703056公开了一种具有反硝化功能的除烃海杆菌STW2及其应用。涉及一种具有反硝化功能的除烃海杆菌(Marinobacterhydrocarbonoclasticus)STW2，其保藏编号为CCTCC NO：M 2014339。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有好氧反硝化能力的海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215。该菌株在好氧条件下，能快速高效去除硝酸盐和亚硝酸盐，反硝化终产物为N₂,不释放N₂O。

本发明的第二个目的在于提供所述海杆菌(Marinobactersp.)1A14215在含氮废水生物脱氮以及在海淡水养殖生物脱氮中的应用。

所述海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215已于2018年11月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，邮编：430072，保藏中心保藏编号为CCTCC NO：M2018822。

所述海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215，是从西南印度洋(E50°45.06′S33°16.74′)4432m的深层海水中分离获得。

所述海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215具有以下特征：

1)形态：海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215，革兰氏阴性，在Marine Agar固体培养基上28℃培养48h，菌落呈米白色、表面光滑、微凸起、边缘规则、不透明，菌落直径大小约为1～2mm。菌株个体呈杆状，无芽孢，有鞭毛。

2)生理生化：海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215生长盐度为0～12％，15％以上不生长，最适为3％；生长pH为7～9，最适为7；生长温度为10～40℃，最适为28～33℃；能水解吐温20、40、60、80；不能水解酪蛋白、纤维素、淀粉、DNA酶(-)氧化酶(+)、接触酶(+)、硝酸盐还原(+)、亚硝酸盐还原(+)、吲哚试验(-)；不能发酵D-葡萄糖产酸、精氨酸双水解酶(+)、赖氨酸脱羧酶(-)、鸟氨酸脱羧酶(-)、色氨酸脱羧酶(-)、明胶液化(-)、尿素酶(-)、4-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(-)；能利用苹果酸和枸橼酸盐；不能利用D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-甘露糖、D-甘露醇、N-乙酰-葡萄糖胺、麦芽糖、葡萄糖酸盐、羊蜡酸、己二酸、苯乙酸；不能利用葡萄糖、甘露醇、肌醇、山梨醇、鼠李糖、蔗糖、蜜二糖、苦杏仁苷、阿拉伯糖发酵产酸。

API ZYM结果显示，海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215具有碱性磷酸酶、酯酶、类脂酯酶、亮氨酸氨肽酶、缬氨酸氨肽酶、酸性磷酸酶、N-乙酰-葡萄糖胺酶；不具有胱氨酸氨肽酶、胰蛋白酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-胰凝乳蛋白酶、β-葡(萄)糖苷酸酶、α-葡(萄)糖苷酶、β-葡(萄)糖苷酶、α-甘露糖苷酶、α-岩藻糖苷酶等酶活性。

3)16S rRNA和gyrB基因序列分析：按照常规方法抽提海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215的基因组DNA，并对16S rRNA和gyrB基因序列进行测定，海杆菌(Marinobactersp.)1A14215的16S rRNA和gyrB基因序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

经BLAST比对分析，海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215的16S rRNA基因与Marinobactersalexigens HJR7(T)相似性最高，分别为98.08％，其次为M.antarcticusZS2-30(T)和M.maritimus CK47(T)，分别为96.99％和96.92％。gyrB基因序列的比对结果表明，海杆菌(Marinobactersp.)1A14215与模式种MarinobactersalexigensHJR7(T)的同源性分别为84.8％。

综合菌株的形态特征、生理生化特性以及16S rDNA和gyrB基因序列分析结果，本发明的海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215属于海杆菌属，为该属的一个新种，具体为海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215。

本发明的海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215能在有氧和无氧条件下，分别以硝酸盐和亚硝酸盐为唯一氮源进行反硝化脱氮，且反硝化终产物为N₂，不释放N₂O。

脱氮作用在含氮模拟废水中进行，所述含氮模拟废水的碳源分别为柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠、琥珀酸钠、丙酸钠、甘油、麦芽糖等，优选碳源为琥珀酸钠和柠檬酸钠。

所述含氮模拟废水的C/N为3～24，优选C/N为9～24。

所述含氮模拟废水的pH值为7～9，优选pH值为7.5～8。

所述含氮模拟废水的盐度为0～90g/L，优选为20g/L。

所述含氮模拟废水的温度为10～33℃，优选为28℃。

在以琥珀酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠为混合碳源，33℃有氧培养条件下，海杆菌(Marinobactersp.)1A14215能在28h内去除110mg/L的NO₃ ^--N，最终气体产物为氮气，不产氧化亚氮。菌株生物量很低，OD600约为0.2，单位生物量的菌体具有高效脱氮能力。

由此可见，海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215可在含氮废水、海淡水养殖生物脱氮中应用。

本发明与现有技术相比有如下突出效果：

1.本发明的海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215以铵盐、硝酸盐或亚硝酸盐为唯一氮源均能生长及脱氮，可适用于各种含氮废水的生物脱氮处理，是一株新发现的具有高效脱氮性能的好氧反硝化菌株。该菌在有氧、无氧情况下均能进行无机氮素的去除，突破了传统反硝化菌受氧气抑制的限制。

2.本发明的海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在以硝酸盐或亚硝酸盐为唯一氮源进行反硝化脱氮时，最终气体产物为氮气，不释放氧化亚氮，对环境友好。

3.本发明的海杆菌(Marinobactersp.)1A14215来源于海洋生境，盐度适应范围较广(0-12％NaCl)，该特性大大增加了海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215的实用性能。

4.本发明的海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215能在28h内去除110mg/L的NO₃ ^--N，但菌体生物量(OD₆₀₀)不到0.2，单位生物量的菌体具有高效脱氮能力。

5.本发明的海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在以琥珀酸钠、柠檬酸钠等为唯一或混合碳源的模拟废水中脱氮生长时，菌体聚集成圆形小球，易于收集和固定。

附图说明

图1为不同碳源对海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215去除硝酸盐的影响。

图2为不同C/N比对海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215去除硝酸盐的影响。

图3为不同盐度对海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215去除硝酸盐的影响。

图4为不同pH值对海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215去除硝酸盐的影响。

图5为不同温度对海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215去除硝酸盐的影响。

图6为海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在以140mg/L NO₃ ^—N为唯一氮源的模拟废水中生长及脱氮情况。在图6中，a为NO₃ ^--N，b为NO₂ ^--N，c为OD₆₀₀。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步的说明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下述的实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。

实施例1海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215的分离和鉴定

1、菌株的分离：取西南印度洋(E50°45.06′S33°16.74′)4432m的沉积物上覆水样品，采用梯度稀释涂布平板法，用Marine Agar固体培养基涂板分离纯化得到海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215单菌。

2、菌株的生理生化特征和分子鉴定

形态特征：海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215，革兰氏阴性，在Marine Agar固体培养基上28℃培养48h，菌落呈米白色、表面光滑、微凸起、边缘规则、不透明，菌落直径大小约为1～2mm。菌株个体呈杆状，无芽孢，有鞭毛。

生理生化特征：海杆菌(Marinobactersp.)1A14215生长盐度为0～12％，15％以上不生长，最适为3％；生长pH为7～9，最适为7。生长温度为10～40℃，最适为28～33℃。能水解吐温20、40、60、80；不能水解酪蛋白、纤维素、淀粉、DNA酶(-)氧化酶(+)、接触酶(+)、硝酸盐还原(+)、亚硝酸盐还原(+)吲哚试验(-)；不能发酵D-葡萄糖产酸、精氨酸双水解酶(+)、赖氨酸脱羧酶(-)、鸟氨酸脱羧酶(-)、色氨酸脱羧酶(-)、明胶液化(-)、尿素酶(-)、4-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(-)；能利用苹果酸、枸橼酸盐；不能利用D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-甘露糖、D-甘露醇、N-乙酰-葡萄糖胺、麦芽糖、葡萄糖酸盐、羊蜡酸、己二酸、苯乙酸；不能利用葡萄糖、甘露醇、肌醇、山梨醇、鼠李糖、蔗糖、蜜二糖、苦杏仁苷、阿拉伯糖发酵产酸。

API ZYM结果显示，海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215具有碱性磷酸酶、酯酶、类脂酯酶、亮氨酸氨肽酶、缬氨酸氨肽酶、酸性磷酸酶、N-乙酰-葡萄糖胺酶；不具有胱氨酸氨肽酶、胰蛋白酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-胰凝乳蛋白酶、β-葡(萄)糖苷酸酶、α-葡(萄)糖苷酶、β-葡(萄)糖苷酶、α-甘露糖苷酶、α-岩藻糖苷酶等酶活性。

分子鉴定：按照常规方法抽提海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215的基因组DNA，并对16S rRNA和gyrB基因序列进行测定，海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215的16S rRNA和gyrB基因序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。经BLAST比对分析，海杆菌1A14215的16S rRNA基因与Marinobactersalexigens HJR7(T)相似性最高，分别为98.08％，其次为M.antarcticusZS2-30(T)和M.maritimus CK47(T)，分别为96.99％和96.92％。gyrB基因序列的比对结果表明，海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215与模式种Marinobactersalexigens HJR7(T)的同源性分别为84.8％。

综合菌株的形态特征、生理生化特性以及16S rDNA和gyrB基因序列分析结果，本发明的海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215属于海杆菌属，为该属的一个新种，具体为海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215。

实施例2海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215基因组草图测序及反硝化基因分析

按照常规方法抽提海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215的基因组DNA，送至上海美吉基因公司，采用Hiseq平台，进行基因组草图测序，并对所得序列质控、组装和注释。经注释发现海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215的基因组具有完整的反硝化代谢途径：包括硝酸盐还原酶基因(nar)、亚硝酸盐还原酶基因(nir)、一氧化氮还原酶基因(nor)、一氧化二氮还原酶基因(nos)以及其他与反硝化相关的转运调控基因。

实施例3海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215的脱氮条件优化

挑取海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215的单菌落接种至100mL Marine Broth2216(购自BD Difco)液体培养基中，28℃150rpm培养24h后，取30mL离心收集菌体，0.8％生理盐水重悬，离心，重复洗涤2～3次，最后用生理盐水制成菌悬液，菌液浓度调制2×10⁸cfu/mL，按0.2％的接种量接种到含140mg/L NO₃ ^--N的基础培养基中，测定菌株在不同碳源，C/N比，pH值，盐度，温度条件下的脱氮情况，进行反硝化条件优化。

基础培养基：KH₂PO₄0.5g/L、Na₂HPO₄0.5g/L、MgSO₄·7H₂O 0.05g/L、FeSO₄·7H₂O0.02g/L、CaCl₂ 0.02g/L，蒸馏水1000mL，121℃灭菌20min。

实验测定方法：硝酸盐氮测定采用GB T12763锌镉还原法测定；亚硝酸盐氮测定采用GB 7493-87一盐酸萘乙二胺分光光度法。

1.不同碳源对海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215反硝化性能的影响：

以140mg/LNO₃ ^--N为唯一氮源，分别以甲酸钠、葡萄糖、柠檬酸钠、乙酸钠、酒石酸钾钠、琥珀酸钠、蔗糖、麦芽糖、乳酸钠、甘油、丙酸钠、甲醇、乙醇、甘露醇做为唯一碳源，在C/N＝15，pH＝7.5，盐度3％，28℃，150rpm条件下，震荡培养36h，测定菌浊度(OD₆₀₀)、硝酸盐及亚硝酸盐含量。实验结果表明，海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在柠檬酸钠、丙酮酸钠、乙酸钠、丁二酸钠和丙酸钠中长势很好，乳酸钠，甘油中次之；麦芽糖中再次之，葡萄糖，蔗糖，酒石酸钾钠，甲醇，乙醇，甘露醇中不长。海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在反硝化培养基中生长时会聚集成球，沉降在培养瓶底部。部分碳源脱氮情况如图1所示，海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在琥珀酸钠中脱氮效率最高，培养36h脱氮率为100％，在柠檬酸钠中脱氮效率也较高，培养36h脱氮率为74％。

2.不同C/N对海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215反硝化性能的影响：

以140mg/LNO₃ ^--N为唯一氮源，柠檬酸钠为碳源，pH＝7.5，盐度3％，设置不同C/N比(3、6、9、12、15、18、21、24)，28℃，150rpm条件下，震荡培养36h，测定菌浊度(OD₆₀₀)、硝酸盐及亚硝酸盐含量。结果见图2，结果表明海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在C/N比为3-24时均能生长，在C/N为9、12、15、18、21、24时，36h内海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215脱氮率为79.6％～84.3％。

3.不同盐度对海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215反硝化性能的影响：

以140mg/LNO₃ ^--N为唯一氮源，柠檬酸钠为碳源，pH＝7.5，C/N＝15，设置不同盐度(0％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％)，28℃，150rpm条件下，震荡培养30h，测定菌浊度(OD₆₀₀)、硝酸盐及亚硝酸盐含量。结果见图3，结果表明海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在盐度为0～9％均能生长，在盐度为1％～2％时菌体生长快，脱氮效率高，36h脱氮率为67％～68％。

4.不同pH对海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215反硝化性能的影响：

以140mg/LNO₃ ^--N为唯一氮源，柠檬酸钠为碳源，盐度为3％，C/N＝15，设置不同pH(7、7.5、8、8.5、9)，28℃，150rpm条件下，震荡培养30h，测定菌浊度(OD₆₀₀)、硝酸盐及亚硝酸盐含量。结果见图4，结果表明海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在pH为7～9均能生长，在盐度为7.5～8时菌体生长快，脱氮效率高，36h脱氮率为69.3％～73.9％。

5.不同温度对海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215反硝化性能的影响：

以140mg/LNO₃ ^--N为唯一氮源，柠檬酸钠为碳源，盐度为3％，C/N＝15，pH＝7.5，设置不同培养温度(10℃、15℃、20℃、25℃、28℃、33℃、37℃、40℃)，150rpm条件下，震荡培养36h，测定菌浊度(OD₆₀₀)、硝酸盐及亚硝酸盐含量。结果见图5，结果表明海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在20～33℃均能生长，在28℃时菌体生长较快，脱氮效率较高，36h脱氮率约为79.7％。培养5d，1A14215在温度为10-33℃均能生长。

实施例4海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215模拟废水脱氮实验

挑取海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215的单菌落接种至50mL Marine Broth2216(购自BD Difco)液体培养基中，28℃150rpm培养24h后，取20mL离心获得菌体，用5mL无氮海水培养基重悬，离心，重复洗涤2～3次，最后用无氮海水培养基制成菌悬液，菌液浓度调制2×10⁸cfu/mL，按0.1％的接种量接种到100mL以140mg/LNO₃ ^--N为唯一氮源的模拟废水中(以乙酸钠、琥珀酸钠、柠檬酸钠为碳源，C/N＝10.5，盐度3％)，于33℃，150rpm摇床中培养，每隔4h或8h取样检测亚硝酸盐和硝酸盐的浓度以及菌体浓度OD₆₀₀，结果见图6。模拟废水成分如下：琥珀酸钠3.5g/L、柠檬酸钠2.5g/L、乙酸钠1g/L、KH₂PO₄0.5g/L、Na₂HPO₄0.5g/L、MgSO₄·7H₂O 0.05g/L、FeSO₄·7H₂O 0.02g/L、CaCl₂ 0.02g/L、NaCl 30g/L、Na¹⁵NO₃0.85g/L，蒸馏水1000mL，pH＝7.8，121℃灭菌20min。结果表明，海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在上述条件下，对硝酸盐和亚硝酸盐去除效率较高，28h时的脱氮率达到80％，脱氮速率为4mg-N/l·h，菌体OD₆₀₀为0.192。上述菌悬液按0.5％接种量接种到30mL以70mg/LNO₃ ^--N为唯一氮源的海水厌氧培养基(碳源成分，C/N，pH，盐度同上)中，于33℃培养，每隔1d取样检测亚硝酸盐和硝酸盐的浓度，结果表明，1A14215在上述厌氧条件下5d脱氮率达57.9％。

实施例5海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215反硝化气体产物测定

挑取海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215的单菌落接种至50mL Marine Broth2216(购自BD Difco)液体培养基中，28℃150rpm培养24h后，取20mL离心获得菌体，用5mL无氮海水培养基重悬，离心，重复洗涤2～3次，最后用无氮海水培养基制成菌悬液，菌液浓度调制2×10⁸cfu/mL按0.1％的接种量接种到30mL以70mg/L NO₃—N¹⁵为唯一氮源的模拟废水培养基(以乙酸钠、琥珀酸钠、柠檬酸钠为碳源，C/N＝10.5，pH＝7.8，盐度3％，顶空初始氧气浓度30％+70％He，加刃天青指示溶氧情况)中，于33℃，150rpm摇床中培养，24h取样检测亚硝酸盐和硝酸盐的浓度，并采用气相色谱仪(Agilent7890B)检测N₂O含量，采用稳定同位素比质谱仪(Thermo Fisher Mat253)检测N₂浓度。结果表明，海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在上述条件下培养24h，脱氮率100％，无亚硝酸盐积累，测得N₂O含量与空气相近，测得³⁰N₂同位素δ值44548.67，R值为0.1674，远高于空气中氮气的R值(0.00367)，反硝化产氮气含量约为总投加氮源的13.32％。

本发明的海杆菌(Marinobactersp.)1A14215是从西南印度洋(E50°45.06′S33°16.74′)4432m的深海水体中分离获得的，能够以N₂为唯一终产物的高效好氧反硝化细菌。该菌株在好氧、无氧条件下，均能高效利用水体环境中的硝酸盐和亚硝酸盐，且不释放温室气体N₂O。该菌株在含氮废水及海淡水养殖生物脱氮中具有良好的应用前景。

序列表

<110> 自然资源部第三海洋研究所；中国大洋矿产资源研究开发协会（中国大洋事务管理局）

<120> 一株具有好氧反硝化能力的海杆菌及其应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1463

<212> DNA

<213> 海杆菌 1A14215(Marinobacter sp. 1A14215)

<400> 1

attgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgagc ggtaacaggg gtagcttgct 60

acccgctgac gagcggcgga cgggtgagta atgcttagga atctgcccag tagtggggga 120

caacagtcgg aaacggctgc taataccgca tacgcccttt gggggaaagc aggggatctt 180

cggaccttgc gctattggat gagcctaagt cggattagct agttggtggg gtaatggctc 240

accaaggcga cgatccgtag ctggtctgag aggatgatca gccacatcgg gactgagaca 300

cggcccgaac tcctacggga ggcagcagtg gggaatattg gacaatgggg gaaaccctga 360

tccagccatg ccgcgtgtgt gaagaaggct ttcgggttgt aaagcacttt cagtgaggag 420

gaaggcctta aagctaatac ctttaaggat tgacgttact cacagaagaa gcaccggcta 480

actccgtgcc agcagccgcg gtaatacgga gggtgcaagc gttaatcgga attactgggc 540

gtaaagcgcg cgtaggtggt tgagtaagcg agatgtgaaa gccccgggct taacctggga 600

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ggtgaaatgc gtagatatag gaaggaacac cagtggcgaa ggcggctacc tggaccaaca 720

ctgacactga ggtgcgaaag cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg 780

ccgtaaacga tgtcaactag ccgttgggga tcttgaatcc ttagtggcgc agctaacgca 840

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gctgcatggc cgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg taacgagcgc 1080

aacccctatc cctagttgct agcaggttat gctgagaact ctagggagac tgccggtgac 1140

aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcagg tcatcatggc ccttacggcc agggctacac 1200

acgtgctaca atggtacgta cagagggttg caaacccgcg agggggagct aatctcacaa 1260

aacgtatcgt agtccggatc ggagtctgca actcgactcc gtgaagtcgg aatcgctagt 1320

aatcgtgaat cagaatgtca cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca 1380

caccatggga gtagattgca ccagaagtag ttagtctaac cttcgggagg acgattacca 1440

cggtgtggtt tatgactggg gtg 1463

<210> 2

<211> 1101

<212> DNA

<213> 海杆菌 1A14215(Marinobacter sp. 1A14215)

<400> 2

atggtgtagg cgtttcggtt gtaaatgcgt tgtcctctac cctcaccctg actatccgtc 60

gcgatggcaa ggtgtatgaa caggtgtaca cacacggtgt gcccgttgcg cccctggcac 120

ctgttggcga tacggaagct tctggtaccc gggtacattt cataccgtct ccggaaacct 180

tttctactat tgagttccac tacgaaattc tggcaaaacg catcagggaa ctggcgtttc 240

tgaacagtgg cgttcgcatt cgtctgacgg atgagcgcag tggaaaggaa gaaatttttg 300

agtacgaagg cggattgaga gcgtttgttg agcatctcaa taccaataaa acgcctataa 360

accgggtttt ccattttacc cgggaacggg aagacggcat cgtggttgaa gttgccatgc 420

aatggaatga tgccttccag gaaaacatct actgcttcac taacaatatt ccccagcggg 480

atggtggtac tcacctggca ggtttccgtt cagcacttac ccgctccctg aacaactaca 540

ttgaacagga aggtctgggt aaaaaggcaa aggtaagcac ctccggtgac gacgcccgcg 600

aaggtctgac ggctatcatc agtgtgaaag ttcctgatcc caagttctct tcgcaaacaa 660

aagacaaact ggtttcttcg gaagtaaaaa cggccgttga gcaggagctc taccagagct 720

ttgccgaata cctgcaagag cagcctaacg aagccaaact gatcgttaac aagatgattg 780

aagcagcgcg tgcccgtgaa gcagcgcgta aagctcggga catgacccgt cgcaaaggtg 840

ctctggatat cgccggccta cccggcaagc tggcagactg ccaggagaaa gaccccgctc 900

tatccgaact gttcatagtg gagggtgact cggccggcgg tagcgccaaa cagggccgag 960

accgcaaaac ccaggctatc ctgccgctga aaggtaagat cctgaacgtg gagaaagcac 1020

gttttgacaa gatgctgtcc tctgccgaag tgggtactct cattacggct ttggggtgtg 1080

gcattggtcg ggaagagttc a 1101

Claims (3)

1.一株具有好氧反硝化能力的海杆菌，其特征在于所述海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215已于2018年11月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏中心保藏编号为CCTCCNO：M 2018822。

2.如权利要求1所述海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在含氮废水生物脱氮中应用。

3.如权利要求2所述应用，其特征在于海杆菌(Marinobacter sp.)1A14215在养殖水体生物脱氮中应用。

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