CN104845920B - 一株海洋卓贝尔氏菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

一株海洋卓贝尔氏菌及其应用,属于微生物应用技术领域。海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1‑8,保藏编号:CCTCC NO:M 2015267。海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1‑8可在处理亚硝酸盐废水、在海淡水养殖生物脱氮、在亚硝酸盐毒害去除、在制备用于任何形式的好氧厌氧反硝化脱氮活菌制剂等中应用。所述海淡水养殖生物脱氮包括但不限于海水养殖废水或淡水养殖废水的脱氮。

Description

一株海洋卓贝尔氏菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物应用技术领域,具体是涉及一株海洋卓贝尔氏菌及其应用。
背景技术
天然水体中,氮以-3至+5九种不同价态形式存在,在生物及非生物因素的共同作用下,它们在水体内不断地迁移转化,构成一个复杂的动态循环。其中亚硝酸盐是这一循环过程中的一个重要中间产物,同时也是一种具有潜在毒性的无机氮化合物。水体中亚硝酸盐作为氮素转化的中间产物其产生及消除主要包含在硝化与反硝化两个反应中。正常情况下,水体中存在的亚硝酸盐含量很低,不会影响养殖动物的正常生长。但是由于现代商业化养殖模式的集约化管理与高密度养殖很容易引起硝化细菌活性失调、反硝化过程不平衡,从而导致水体亚硝酸盐的积累,对养殖动物产生毒害作用甚至引起养殖动物的死亡,最终造成巨大的经济损失。因而如何从养殖废水中去除氮素污染成为了水产养殖的一个研究热点。相较于物理、化学脱氮方法,目前认为生物脱氮法去除氮素污染更为经济有效。参与生物脱氮的微生物主要包括硝化细菌和反硝化细菌。反硝化细菌可通过参与反硝化过程的一系列酶将硝酸盐和亚硝酸盐转化成气态氮,将氮素从水体环境中脱除,改善养殖环境水质,避免水体富营养化。
传统理论认为,细菌的反硝化作用是一个严格的厌氧过程,反硝化细菌会优先利用氧气作为最终电子受体。好氧反硝化细菌的发现,突破了传统的认识,同时也为人们研究新的生物脱氮技术提供了新的依据。好氧反硝化,是指在有氧条件下能以NO3 --N、NO2 --N作为最终电子受体,进行反硝化过程。然而,目前关于好氧反硝化菌的专利和文献资料不多,尤其是海洋来源的更少,并且已报道的菌株对于高浓度含氮废水的脱除效率不高。分离筛选具有盐度适应范围广、脱氮效率高的好氧反硝化细菌,并将之应用到含氮废水的处理中具有实际的意义。
中国专利CN201310100699公开一株好氧反硝化细菌及其应用。涉及一株好氧反硝化细菌卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)NKDN-01,CGMCC No.7330,及利用该菌进行污水处理去除污水中总氮的方法。菌株接种至LB培养基中,30℃振荡培养至菌浓为OD600=2.0,以1%~5%的接种量接种于高氮废水中,20~30℃振荡培养2~4d,维持溶氧在2.5ppm以上;离心取上清,测定总氮、亚硝态氮和硝态氮,结果显示总氮去除效果明显。该菌在污水处理工程中有很好的应用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一株海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8。
本发明的第二目的在于提供海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8在海淡水养殖生物脱氮中的应用。
所述海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8,已于2015年04月29日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址:中国武汉武汉大学;保藏编号:CCTCC NO:M 2015267。
所述海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8,是从南美白对虾海水养殖池定向富集分离获得。所述海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8也保藏于中国海洋微生物菌种保藏管理中心(MCCC),保藏编号为:MCCC 1A10905。
海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8具有以下特征:
1、形态:海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8,革兰氏阴性,在Marine Agar固体培养基上28℃培养24h,菌落呈米白色、表面光滑、微凸起、边缘规则、不透明,菌落直径大小约为1~2mm。
2、生理生化:海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8生长盐度为0~12%,15%以上不生长,最适为0~3%;生长pH为5~11,最适为6.5~9.5。生长温度为10~45℃,最适为30~40℃。氧化酶(+),接触酶(-),硝酸盐还原(+),吲哚试验(-),能发酵D-葡萄糖产酸,明胶液化(-),尿素酶(+),β-葡萄糖苷酶(-),β-半乳糖苷酶(-),能利用D-葡萄糖、D-甘露醇、N-乙酰-葡萄糖胺、麦芽糖、葡萄糖酸盐、苹果酸、柠檬酸、苯乙酸,不能利用癸酸、己二酸、、L-阿拉伯糖、D-甘露糖。
API ZYM结果显示,海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8具有碱性磷酸酶、酯酶、类脂酯酶、亮氨酸氨肽酶、缬氨酸氨肽酶、酸性磷酸酶、β-葡(萄)糖苷酶,不具有胱氨酸氨肽酶、胰蛋白酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-胰凝乳蛋白酶、β-葡(萄)糖苷酸酶、α-葡(萄)糖苷酶、N-乙酰-葡萄糖胺酶、α-甘露糖苷酶、α-岩藻糖苷酶等酶活性。
3、16S rRNA和gyrB基因序列分析:按照常规方法抽提海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8的基因组DNA,并对16S rRNA和gyrB基因序列进行测定,海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8的16S rRNA和gyrB基因序列如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示。
经BLAST比对分析,海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8的16S rRNA基因与Zobellella denitrificans ZD1(T)DQ195675相似性最高,分别为99.04%,其次为Z.aerophila JC2671(T)HM475140和Z.taiwanensis ZT1(T)DQ19567,分别为97.46%和97.06%。gyrB基因序列的比对结果表明,海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8与Zobellella denitrificans ZD1(T)和Z.taiwanensis ZT1(T)两株模式种的同源性分别为91.4%、91.3%。
综合菌株的形态特征、生理生化特性以及16S rDNA和gyrB基因序列分析结果,本发明的海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8属于卓贝尔氏菌属,为该属的一个潜在新种,具体为海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8。
本发明的海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8能快速高效去除硝酸盐和亚硝酸盐,且对高浓度亚硝酸盐具有很强的耐受性及去除能力。
海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8的脱氮作用在含氮液体中进行,所述含氮液体溶解氧浓度为0~7ppm。
所述含氮液体的碳源为甲酸钠、葡萄糖、柠檬酸钠、乙酸钠、酒石酸钾钠及琥珀酸钠,优选碳源为柠檬酸钠。
所述含氮液体的C/N为3~24,优选C/N为12~24。
所述含氮液体的pH值为5.5~0.5,优选pH值为6.5~9.5。
所述含氮液体的盐度为0~60g/L,优选为0~30g/L。
所述含氮液体的温度为15~45℃,优选为30~40℃。
在优选条件下,海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8能在16h内将100mL的NO3 --N和NO2 --N完全去除,分别在72h、84h、96h和168h将500mL、600mL、700mL和1000mL NO2 --N完全脱除,具有高效脱氮能力。
该菌株在好氧条件下,能快速高效去除水体环境中的硝酸盐和亚硝酸盐,且对高浓度的亚硝酸盐具有很强的耐受性和去除能力。
由此可见,海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8可在处理亚硝酸盐废水、在海淡水养殖生物脱氮、在亚硝酸盐毒害去除、在制备用于任何形式的好氧厌氧反硝化脱氮活菌制剂等中应用。
所述海淡水养殖生物脱氮包括但不限于海水养殖废水或淡水养殖废水的脱氮。
本发明与现有技术相比有如下突出效果:
1、本发明的海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8以铵盐、硝酸盐或亚硝酸盐为唯一氮源均能正常生长及脱氮,可适用于各种含氮废水的生物脱氮处理,是一株新发现的具有高效脱氮性能的好氧反硝化菌株。该菌在有氧、无氧情况下均能进行无机氮素的去除,突破了传统反硝化菌受氧气抑制的限制。
2、本发明的海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8的pH和盐度适应范围较广,在pH 6.5~9.5以及盐度0~3%时都具有很高的脱氮效率。该特性大大增加了海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8的实用性能。
3、本发明的海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8脱氮效率高,对高浓度的亚硝酸盐耐受性强。在以硝酸盐/铵盐为唯一氮源的含氮废水中,能在16h内将100mL NO3 N/NH4 +-N完全去除,无亚硝酸盐累积。以亚硝酸盐为唯一氮源进行生长时,分别能在16h、72h、84h、96h和168h内将100mL、500mL、600mL、700mL及1000mL NO2 --N完全去除,表明海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8具有高的脱氮效率及亚硝酸盐耐受性,可适用于各类含氮废水的脱氮处理。
附图说明
图1为不同碳源对海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8去除硝酸盐的影响(右侧纵坐标对应NO2 --N的含量及菌体浓度OD600两个值)。
图2为不同C/N对海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8去除硝酸盐的影响(右侧纵坐标对应NO2 --N的含量及菌体浓度OD600两个值)。
图3为不同pH对海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8去除硝酸盐的影响(右侧纵坐标对应NO2 --N的含量及菌体浓度OD600两个值)。
图4为不同盐度对海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8去除硝酸盐的影响(右侧纵坐标对应NO2 --N的含量及菌体浓度OD600两个值)。
图5为不同温度对海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8去除硝酸盐的影响(右侧纵坐标对应NO2 --N的含量及菌体浓度OD600两个值)。
图6为海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8在最适条件下对硝酸盐的去除能力(右侧纵坐标对应NO2 --N的含量及菌体浓度OD600两个值)。
图7为海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8在最适条件下对亚硝酸盐的去除能力。
图8为海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8对高浓度亚硝酸盐的脱氮效果(以500、600、700、1000mg/l NO2 --N为唯一氮源)。
图9为海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8对养殖废水的脱氮效果。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步的说明,但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下述的实施例中的方法,如无特别说明,均为常规方法。
实施例1海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8的富集、分离和鉴定
1、菌株的富集和分离:取漳州南美白对虾海水养殖池沉积物样品10g,加入90mL富集培养基(乙酸钠1L,柠檬酸钠2.5L,NaCl 30L,KH2PO4 2L,Na2HPO4 3L,MgSO4·7H2O0.05L、FeSO4·7H2O 0.02L、CaCl2 0.02L,蒸馏水1000mL,pH 7.6~8.2,121℃灭菌20min),以0.5LNO2 --N作为唯一氮源,28℃,160rpm/min震荡培养,进行好氧反硝化细菌的第一次富集。15天后,从初次富集培养液中取10mL样品液,转接到新鲜富集培养液中,以1.0L NO2 --N作为唯一氮源,28℃,160rpm/min震荡培养,进行第二次富集。15d后,从二次富集培养液中取10mL样品液,转接到新鲜的富集培养液中,添加1.5L NO2 --N作为唯一氮源,28℃,160rpm/min震荡培养,进行第三次富集。完成三次富集培养后,采用梯度稀释涂布平板法,分别用MarineAgar固体培养基涂板分离纯化得到海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8单菌。该菌株也保藏于中国海洋微生物菌种保藏管理中心(MCCC),保藏编号为:MCCC 1A10905。
2、菌株的生理生化特征和分子鉴定
形态特征:海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8,革兰氏阴性,在MarineAgar固体培养基上28℃培养24h,菌落呈米白色、表面光滑、微凸起、边缘规则、不透明,菌落直径大小约为1~2mm。
生理生化特征:菌株生长盐度为0~12%,15%以上不生长,最适为0~3%;生长pH为5~11,最适为6.5~9.5。生长温度为10~45℃,最适为30~40℃。氧化酶(+),接触酶(-),硝酸盐还原(+),吲哚试验(-),能发酵D-葡萄糖产酸,明胶液化(-),尿素酶(+),β-葡萄糖苷酶(-),β-半乳糖苷酶(-),能利用D-葡萄糖、D-甘露醇、N-乙酰-葡萄糖胺、麦芽糖、葡萄糖酸盐、苹果酸、柠檬酸、苯乙酸,不能利用癸酸、己二酸、L-阿拉伯糖、D-甘露糖。
API ZYM结果显示,海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8具有碱性磷酸酶、酯酶、类脂酯酶、亮氨酸氨肽酶、缬氨酸氨肽酶、酸性磷酸酶、β-葡(萄)糖苷酶,不具有胱氨酸氨肽酶、胰蛋白酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-胰凝乳蛋白酶、β-葡(萄)糖苷酸酶、α-葡(萄)糖苷酶、N-乙酰-葡萄糖胺酶、α-甘露糖苷酶、α-岩藻糖苷酶等酶活性。
分子鉴定:按照常规方法抽提海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8的基因组DNA,并对16S rRNA和gyrB基因序列进行测定。经BLAST比对分析,海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-816S rRNA基因与Zobellella denitrificans ZD1(T)DQ195675相似性最高,为99.04%,其次为Z.aerophila JC2671(T)HM475140和Z.taiwanensis ZT1(T)DQ19567,分别为97.46%和97.06%。gyrB基因序列的比对结果表明,海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8与Zobellella denitrificans ZD1(T)和Z.taiwanensis ZT1(T)两株模式种的同源性分别为91.4%和91.3%。
综合菌株的形态特征、生理生化特性以及16S rRNA和gyrB基因序列分析结果,本发明的海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8属于卓贝尔氏菌属,为该属的一个潜在新种,具体为海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8,海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8的16S rRNA和gyrB基因序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
实施例2海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8的脱氮条件优化
从MA平板上刮取新鲜的菌体,用无菌海水重悬,菌种浓度调至109cfu/mL,按照0.2%的接种量接种到含有一定浓度的NO3 --N或者NO2 --N的基础培养基中,测定菌株在不同碳源,pH值,温度,盐度,C/N比时的脱氮情况,进行反硝化条件的优化。
基础培养基:KH2PO4 2L,Na2HPO4 3L,MgSO4·7H2O 0.05L、FeSO4·7H2O 0.02L、CaCl2 0.02L,蒸馏水1000mL,121℃灭菌20min。
实验测定方法:硝酸盐氮测定采用GB T12763锌镉还原法测定;亚硝酸盐氮测定采用GB 7493-87一盐酸萘乙二胺分光光度法。
1.不同碳源对海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8反硝化性能的影响:以100mL NO3 --N为唯一氮源,分别以甲酸钠、葡萄糖、柠檬酸钠、乙酸钠、酒石酸钾钠、琥珀酸钠作为唯一碳源,在C/N=15,pH=7.6,盐度3%,28℃,160r/min条件下震荡培养16h,测定菌浊度(OD600)及硝酸盐及亚硝酸盐含量。实验结果如图1所示,菌株在以柠檬酸钠为唯一碳源时,生长好且脱氮效率最高,能在16h内能将100mL NO3 --N完全去除且无亚硝酸盐积累。
2.不同C/N比对海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8反硝化性能的影响:以100mL NO3 --N为唯一氮源,柠檬酸钠为碳源,pH=7.6,盐度3%,设置不同C/N比(3、6、9、12、15、18、21、24),28℃,160r/min震荡培养16h,测定菌浊度(OD600)及硝酸盐和亚硝酸盐含量。结果见图2,结果表明海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8在C/N为时3-24均能生长,在C/N为12、15、18、21、24时,16h内海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8能将100mLNO3 --N去除完全。
3.不同pH值对海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8反硝化性能的影响:以100mL NO3 --N为唯一氮源,柠檬酸钠为碳源,C/N=12,盐度3%,设置不同的pH值(5.5、6.5、7.5、8.5、9.5、10.5),28℃,160r/min震荡培养16h,测定菌浊度(OD600)及硝酸盐和亚硝酸盐含量。结果见图3,结果表明海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8脱氮pH范围较广,偏酸(pH=6.5)或者偏碱(pH=9.5)时,海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8对硝酸盐的去除率均达到100%,无亚硝酸盐残留。
4.不同盐度对海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8反硝化性能的影响:以100mL NO3 --N为唯一氮源,柠檬酸钠为碳源,C/N=12,pH=7.8,设置不同盐度(0、10、20、30、40、50、60L),28℃,160r/min震荡培养16h,测定菌浊度(OD600)及硝酸盐和亚硝酸盐含量。结果见图4,结果表明海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8在盐度为0~3%时,菌体生长较快且脱氮效果高,16h内脱氮效率均达到100%,并且无亚硝酸盐累积。
5.不同温度对菌株反硝化性能的影响:以100mL NO3 --N为唯一氮源,柠檬酸钠为碳源,C/N=12,pH=7.8,盐度为3%,设置不同温度(15℃、25℃、35℃、40℃、45℃),160r/min震荡培养16h,测定菌浊度(OD600)及硝酸盐和亚硝酸盐含量。结果见图5,结果表明35~40℃,海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8生长速度快,16h时OD600分别为0.745和0.950,硝酸盐去除效率达到100%且无亚硝酸积累。
实施例3最优条件下卓贝尔氏菌的反硝化性能测定
挑取海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8的单菌落划线至Marine Agar固体平板上,28℃培养24h后取出,刮取新鲜菌体,用无氮培养基制成菌悬液,菌种浓度调至109cfu/mL,按照0.2%的接种量分别接种到以100mL NO3 --N或NO2 --N为唯一氮源的海水培养基中(以柠檬酸钠为唯一碳源,C/N=12,pH=7.8,盐度3%),于35℃,160r/min摇床中培养,每隔4h取样检测亚硝酸盐和硝酸盐的浓度、菌体浓度OD600。结果见图6和7,结果表明海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8在最优条件下,对硝酸盐和亚硝酸盐去除效率高,16h时的脱氮率达到100%,脱氮速率为6.25mg-N/l·h。
实施例4海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8对高浓度NO2 --N耐受性及脱氮效果
培养方法同实施例3。以500mL、600mL、700mL、1000mL NO2 --N为唯一氮源对海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8生长情况及脱氮性能进行测定。结果见图8,结果表明海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8对高浓度亚硝酸盐具有很好的耐受性和去除能力,分别能在72h、84h、96h和168h内将500mL、600mL、700mL和1000mL亚硝酸盐完全脱除,脱除速率分别为:6.94mg-N/l·h、7.14mg-N/l·h、7.29mg-N/l·h、5.95mg-N/l·h。
实施例5海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8在海水养殖生物脱氮中的应用
选择已养殖4个月的南美白对虾高位池,采集养殖水12L,0.22μm滤膜过滤除菌。收集海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8新鲜菌体,用无菌生理盐水洗涤后接种到装有2L上述无菌养殖水的玻璃缸中,调整菌体浓度使得水体中海洋卓贝尔氏菌(Zobellellasp.)CYT1-8初始菌体浓度为1×107cfu/mL。同时设置不加菌液的过滤养殖海水为对照,每组设3个平行。在每个缸中放养20尾体长约0.5cm的南美白对虾幼苗,在水温28℃下进行实验,每隔24h取水样测定养殖海水中的COD、NO3 --N、NO2 --N和NH4 --N浓度,以及培养液的OD600,同时统计虾苗的存活情况。96h后,经统计分析虾苗存活率在85%~95%,实验组和对照组之间的虾苗存活率无显著差异,说明海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8对海水养殖对虾没有毒害作用。此外,如图9所示,经过海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8处理4d后,养殖水的NO3 --N、NO2 --N和NH4 --N浓度由初始的25.5mL、5.38mL和13.5mL分别降到9.6mL、3.05mL和4.98mL,总脱氮率达到60.3%。并且COD也从87.3mL降为52.5mL。而对照组在处理过程中和原养殖水水质差别不大。因此海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8对养殖水体氮素有较好的脱除效果,且对养殖生物无毒害作用,在海水养殖生物脱氮中具有较好的应用前景。

Claims (6)

1.海洋卓贝尔氏菌(Zobellellasp.) CYT1-8,已于2015年04月29日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO: M 2015267。
2.如权利要求1所述海洋卓贝尔氏菌(Zobellellasp.) CYT1-8在处理亚硝酸盐废水中应用。
3.如权利要求1所述海洋卓贝尔氏菌(Zobellellasp.) CYT1-8在海水和淡水养殖生物脱氮中应用。
4.如权利要求3所述应用,其特征在于:所述海水和淡水养殖生物脱氮包括但不限于海水养殖废水或淡水养殖废水的脱氮。
5.如权利要求1所述海洋卓贝尔氏菌(Zobellellasp.) CYT1-8在亚硝酸盐毒害去除中应用。
6.如权利要求1所述的海洋卓贝尔氏菌(Zobellellasp.) CYT1-8在制备用于好氧反硝化脱氮活菌制剂中应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105586290B (zh) * 2015-12-24 2019-07-23 中国科学院重庆绿色智能技术研究院 一种具有异养硝化和好氧反硝化功能的菌株及其应用
CN109402107B (zh) * 2018-06-08 2021-11-05 中国海洋大学 一种高效脱氮菌的固定化和菌剂包的制备方法与应用
CN109609419B (zh) * 2019-01-31 2021-08-03 黑龙江八一农垦大学 一株卓尔贝氏菌属细菌及其在提高植物抗逆性中的应用
CN109897804B (zh) * 2019-03-26 2022-07-26 广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) 一株同时具有硝化和反硝化功能的卓贝尔氏菌及其应用
CN109868249B (zh) * 2019-04-11 2020-07-10 自然资源部第三海洋研究所 一株具有好氧反硝化能力的海杆菌及其应用
CN113336337B (zh) * 2021-06-04 2022-04-12 中国科学院重庆绿色智能技术研究院 一种新型一体化脱氮装置及应用
CN113308410B (zh) * 2021-07-08 2022-05-31 山东绿邦生物科技有限公司 一种高效脱氮的反硝化细菌及其应用
CN113913336A (zh) * 2021-10-20 2022-01-11 大连海洋大学 一种耐盐好氧反硝化复合菌与应用
CN113800652B (zh) * 2021-10-28 2022-07-26 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) 一种耐盐好氧反硝化菌及其耦合活性炭在强化水体污染治理中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103232954A (zh) * 2013-03-27 2013-08-07 南开大学 一株好氧反硝化细菌及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103232954A (zh) * 2013-03-27 2013-08-07 南开大学 一株好氧反硝化细菌及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Zobellella aerophila sp. nov., isolated from seashore sand, and emended description of the genus Zobellella;Yi H等;《Int J Syst Evol Microbiol.》;20111031;2491-5 *
Zobellella denitrificans gen. nov., sp. nov. and Zobellella taiwanensis sp. nov., denitrifying bacteria capable of fermentative metabolism;Yu-Te Lin等;《International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology》;20060630;1209-1215 *
一株含盐污水降解菌的分离鉴定及其降解特性研究;张晓青 等;《化学与生物工程》;20131231;第30卷(第12期);48-52 *

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