CN109867704A - 一种乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法，包含如下步骤：（1）将粒径为5‑20目余甘子药材在40‑60℃条件下进行温浸提取，所述温浸提取采用的溶剂为50‑80%乙醇，得到提取液；将提取液浓缩，然后加水分散，并进行固液分离，离心或过滤，得上清液；（2）将步骤（1）分离出的液体经大孔吸附树脂HPD‑400吸附，吸附流速为0.5‑2ml/min，用水洗脱，洗脱流速为0.2‑3ml/min，将洗脱液减压干燥。该方法简便，含量、转移率较高，放大工艺验证结果也表明所建立的制备工艺稳定可行，适合于工业化生产需要。

Description

一种乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法

技术领域

本发明涉及一种中药活性成分的制备方法，具体地是一种乙醇温浸制备诃黎勒酸的方法。

背景技术

余甘子为双子叶植物药大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L. 的果实，具有化痰、生津、止咳、解毒的功效，主治感冒发热，咳嗽咽痛，白喉，烦热口干。分布福建、广东、广西、云南、贵州、四川、台湾等地。余甘子大多是野生或半野生，几乎不受工业污染，是名副其实的绿色食品加工原料。

余甘子新鲜果实含鞣质45%，未成熟果实含鞣质30%～35%，干燥果实中总鞣质含量可达到14%，其中已分离得到诃子酸(chebrlinic acid)、诃黎勒酸(chebulagic acid)、鞣云实素(corilagin)、原诃子酸(terchebin)、诃子裂酸(chebulic acid)及没食子酸、鞣花酸。另含余甘子酸(phyllemblic acid)、余甘子酚(emblicol)、粘酸(mucie acid)，以及丰富的维生素C(1.0～1.8g/100g)。

目前，国内对诃黎勒酸的研究较少，尚处于起步阶段，CN104945447A，2015年9月30日公开，涉及诃黎勒酸的制备方法，方法中采用诃子叶为原料，经酶解、超声波提取、陶瓷膜分离、大孔树脂吸附等步骤，如酶解、超声波提取在生产上应用不广泛，不利于产业化推广，而且含量不高、成本高昂。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明采用余甘子药材为原料，用乙醇温浸提取，扩大了制备诃黎勒酸的路径，降低了提取能耗，且采用果实药材为原料可避免采用叶子为原料带来的环境破坏，经济环保。

本发明提供一种乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法，包含如下步骤：

（1）将粒径为5-20目余甘子药材在40-60℃条件下进行温浸提取，所述温浸提取采用的溶剂为50-80%乙醇，得到提取液；将提取液浓缩至无醇味，然后加水分散，并进行固液分离，得上清液；

（2）将步骤（1）分离出的上清液经大孔吸附树脂HPD-400吸附，吸附流速为0.5-2ml/min，用水洗脱，洗脱流速为0.2-3ml/min，得洗脱液，将洗脱液干燥。

优选地，步骤（1）中，

余甘子药材粒径为5-10目；

和/或，所述温浸提取采用的溶剂为60-70%乙醇，优选65-68%；

和/或，乙醇用量为药材的6-10倍（w/w），优选8-9倍；

和/或，浓缩方式为减压浓缩；

和/或，所述固液分离方式为离心分离或过滤，优选离心，离心转速为2800-3200转/min；离心时间为20-40min；

和/或，所述温浸提取时间6-12h，优选8-10h。

优选地，步骤（2）中，

大孔吸附树脂型号为：HPD-400、HPD-500、HPD-826、Dianio HP-20p、AB-8，优选为：HPD-826、HPD-400、Dianio HP-20p；

和/或，树脂径高比为1:4-1:8，优选1:6-1:8；

和/或，吸附流速为0.6-1.2ml/min；

和/或，洗脱流速为0.5-1.2ml/min；

和/或，所述干燥为减压干燥，温度为40~80℃；

和/或，洗脱体积为2-5BV，优选为3-4BV；

和/或，洗脱用水为纯化水。

优选地，所述温浸提取次数2-4次；和/或，提取时间6-12h，优选为8-10h。

本发明提供一种乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法，包含如下步骤：

（1）将粒径为5-20目余甘子药材在40-60℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为50-80%乙醇，溶剂用量为药材的6-10倍（w/w），提取2-4次，每次提取时间6-12h，得到提取液；将提取液浓缩至无醇味，然后加水分散，并进行固液分离；

（2）将步骤（1）分离出的液体经大孔吸附树脂HPD-400吸附，吸附流速为0.5-2ml/min，用纯化水洗脱2-5BV，洗脱流速为0.2-3ml/min，将洗脱液减压干燥。

优选地，所述固液分离为离心或过滤。

本发明的有益技术效果：

1、本发明采用温浸提取方法，具有提取能耗低、热敏性成分充分保留的优点；且过程仅采用乙醇和水作为溶剂，有利于安全和环保。

2、本发明的纯化采用大孔吸附树脂HPD-400，诃黎勒酸转移率在65%以上，HPLC 归一化法检测含量98%以上。

3、本发明该方法简便，诃黎勒酸含量、转移率较高，放大工艺验证结果也表明所建立的制备工艺稳定可行，适合于工业化生产需要。

4、本发明采用余甘子药材为原料，用乙醇温浸提取，扩大了制备诃黎勒酸的路径，且采用果实药材为原料可避免采用叶子为原料带来的环境破坏，保护环境。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件进行选择。

实验仪器及条件：

Waters 1525 型高效液相色谱仪；2996 型 PAD 检测器；Empower 色谱工作站，25 μL可调进样器；十万分之一电子分析天平：Sartorious BT 25S 型（北京赛多利斯仪器有限公司）；超声波清洗器（功率：100W，型号：KQ-500DE 昆山超声仪器有限公司）；EYELA旋转蒸发仪（日本，型号：N-1000）；SHZ-D（Ⅲ）水循环真空泵（河南省予华仪器有限公司）。

试药及原料来源：

余甘子药材购自北京藏医院（产地尼泊尔），经北京中医药大学生药系阎玉凝教授鉴定为大戟科植物 Phyllanthus emblica L.的干燥果实。诃黎勒酸对照品自制，经UV、MS、¹HNMR、¹³ CNMR 鉴定结构，HPLC 检测，峰面积归一化法测定纯度大于 98.5%，符合定量要求。甲醇（Fisher 公司，色谱纯）；屈臣氏纯净水；其他试剂均为分析纯。色谱材料：大孔吸附树脂 C（沧州宝恩吸附材料科技有限公司）；Toyopearl HW-40（Coarse）、Toyopearl HW-40（Fine）（日本 Tosoh 公司）；MCI gel CHP 20P（日本三菱化学公司）；聚酰胺薄膜（薄层层析8cm*8cm）（浙江黄岩四青生化材料厂）；硅胶G 板（青岛海洋化工厂分厂）。展开剂：（1）丙酮：甲醇：甲酸：水（3：6：8：16）；（2）氯仿:甲醇:水（15:4:1）；（3）乙酸乙酯-甲酸-水（24：5：1）；（4）氯仿:甲醇:甲酸：水（7:3:0.5:0.5）；（5）氯仿:甲醇:甲酸:水（6.5:3.5:0.5:0.5）；（6）乙酸乙酯:甲酸:水（24:5:1）。显色剂： 2%FeCl ₃ 乙醇溶液，10%硫酸乙醇溶液。

实施例1

将粒径为5目余甘子药材100g在45℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为50%乙醇900ml，提取2次，每次提取10h，得到提取液；将提取液减压浓缩至无醇味，然后加50ml水分散至浓度相当于1g生药/ml的药液，并在3000转/min离心20min，得上清液。

实施例2

将粒径为10目余甘子药材100g在50℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为60%乙醇800ml，提取3次，每次提取6h，得到提取液；将提取液减压浓缩至无醇味，然后加35ml水分散至浓度相当于1.5g生药/ml的药液，并在3200转/min离心30min，得上清液。

实施例3

将粒径为20目余甘子药材100g在55℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为70%乙醇600ml，提取4次，每次提取8h，得到提取液；将提取液减压浓缩至无醇味，然后加100ml水分散至浓度相当于0.5g生药/ml的药液，并在2800转/min离心25min，得上清液。

实施例4

将粒径为8目余甘子药材100g在55℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为65%乙醇650ml，提取3次，每次提取9h，得到提取液；将提取液蒸发浓缩至无醇味，然后加20ml水分散至浓度相当于2g生药/ml的药液，并在3000转/min离心30min，得上清液。

实施例5

将粒径为10目余甘子药材100g在55℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为68%乙醇1000ml，提取3次，每次提取12h，得到提取液；将提取液蒸发浓缩至无醇味，然后加20ml水分散至浓度相当于0.75g生药/ml的药液，过滤，得滤液。

实施例6

将实施例1所得上清液经大孔吸附树脂HPD-826吸附，径高比1:8，吸附流速为1.2ml/min，待吸附完成后，用纯化水洗脱3BV，洗脱流速为1.2ml/min，收集水洗脱液，减压干燥，得固体1.89g，测定其诃黎勒酸的含量98.54%，计算转移率68.97%。

实施例7

将实施例2所得上清液经大孔吸附树脂HPD-400吸附，径高比1:7，吸附流速为0.6ml/min，待吸附完成后，用纯化水洗脱4BV，洗脱流速为0.5ml/min，收集水洗脱液，减压干燥，得固体2.04g，测定其诃黎勒酸的含量98.44%，计算转移率74.38%。

实施例8

将实施例3所得上清液经大孔吸附树脂Dianio HP-20p吸附，径高比1:6，吸附流速为2ml/min，待吸附完成后，用纯化水洗脱3BV，洗脱流速为1.5ml/min，收集水洗脱液，减压干燥，得固体2.18g，测定其诃黎勒酸的含量98.22%，计算转移率79.30%。

实施例9

将实施例4所得上清液经大孔吸附树脂HPD-500吸附，径高比1:5，吸附流速为0.5ml/min，待吸附完成后，用纯化水洗脱2BV，洗脱流速为2ml/min，收集水洗脱液，减压干燥，得固体1.99g，测定其诃黎勒酸的含量98.79%，计算转移率72.81%。

实施例10

将实施例5所得滤液经大孔吸附树脂AB-8吸附，径高比1:6，吸附流速为1.2ml/min，待吸附完成后，用纯化水洗脱4BV，洗脱流速为2ml/min，收集水洗脱液，减压干燥，得固体2.11g，测定其诃黎勒酸的含量98.79%，计算转移率77.29%。

实施例11

将实施例2所得滤液经大孔吸附树脂HPD-400吸附，径高比1:8，吸附流速为1.0ml/min，待吸附完成后，用纯化水洗脱3BV，洗脱流速为2ml/min，收集水洗脱液，减压干燥，得固体1.95g，测定其诃黎勒酸的含量98.79%，计算转移率75.09%。

Claims (6)

1.一种乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法，包含如下步骤：

（1）将粒径为5-20目余甘子药材在40-60℃条件下进行温浸提取，所述温浸提取采用的溶剂为50-80%乙醇，得到提取液；将提取液浓缩至无醇味，然后加水分散，并进行固液分离，得上清液；

（2）将步骤（1）分离出的上清液经大孔吸附树脂HPD-400吸附，吸附流速为0.5-2ml/min，用水洗脱，洗脱流速为0.2-3ml/min，得洗脱液，将洗脱液干燥。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，

余甘子药材粒径为5-10目；

和/或，所述温浸提取采用的溶剂为60-70%乙醇，优选65-68%；

和/或，乙醇用量为药材的6-10倍（w/w），优选8-9倍；

和/或，浓缩方式为减压浓缩；

和/或，所述固液分离方式为离心分离或过滤，优选离心，离心转速为2800-3200转/min；离心时间为20-40min；

和/或，所述温浸提取时间6-12h，优选8-10h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，

大孔吸附树脂型号为：HPD-400、HPD-500、HPD-826、Dianio HP-20p、AB-8，优选为：HPD-826、HPD-400、Dianio HP-20p；

和/或，树脂径高比为1:4-1:8，优选1:6-1:8；

和/或，吸附流速为0.6-1.2ml/min；

和/或，洗脱流速为0.5-1.2ml/min；

和/或，所述干燥为减压干燥，温度为40~80℃；

和/或，洗脱体积为2-5BV，优选为3-4BV；

和/或，洗脱用水为纯化水。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述温浸提取次数2-4次；和/或，提取时间6-12h，优选为8-10h。

5.一种乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法，包含如下步骤：

（1）将粒径为5-20目余甘子药材在40-60℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为50-80%乙醇，溶剂用量为为药材的6-10倍（w/w），提取2-4次，每次提取时间6-12h，得到提取液；将提取液浓缩至无醇味，然后加水分散，并进行固液分离；

（2）将步骤（1）分离出的液体经大孔吸附树脂HPD-400吸附，吸附流速为0.5-2ml/min，用纯化水洗脱2-5BV，洗脱流速为0.2-3ml/min，将洗脱液减压干燥。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述固液分离为离心或过滤。