CN109864943B

CN109864943B - 一种白芨多酚的制备方法与应用

Info

Publication number: CN109864943B
Application number: CN201910265025.7A
Authority: CN
Inventors: 吴永祥; 章鏴; 吴丽萍; 王卫东; 耿玉闯; 卢玮玮; 戴毅; 胡长玉; 方建新; 吕顺清
Original assignee: Huangshan Feng Yuan Biological Science And Technology Co ltd
Current assignee: Huangshan Feng Yuan Biological Science And Technology Co ltd
Priority date: 2019-04-03
Filing date: 2019-04-03
Publication date: 2021-07-30
Anticipated expiration: 2039-04-03
Also published as: CN109864943A

Abstract

本发明公开了一种白芨多酚的制备方法，该方法通过微生物固态发酵促进白芨须根中可溶性多酚类物质的释放，采用超声波‑负压空化耦合双水相萃取技术制备白芨多酚组分，利用超滤膜截留技术去除其中的多糖和蛋白等生物大分子，结合大孔吸附树脂富集纯化，得到纯度高、活性强的白芨多酚。通过实验，发现了白芨多酚的抑菌、止血消炎效果，同时开发了一种白芨多酚中草药牙膏。

Description

一种白芨多酚的制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种白芨多酚的制备方法与应用，属于生物技术领域。

背景技术

白芨又名白根、紫兰、地螺丝等，为兰科植物白芨的干燥块茎，为我国传统常用中药材之一。白芨有很高的药用价值，具有补肺、收敛止血、消肿、生肌等功效，可用于治疗肺伤咳血、疮疡肿毒、外科创伤、胃及消化道溃疡疼痛等症状。白芨的主要化学成分是联苄类、菲类及其衍生物、多糖、黄酮类等，具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗炎症、抑制酪氨酸酶及促进创伤愈合等功效。目前《中国药典》只收载白芨的入药部位为块茎，其须根则弃之不用，而白芨须根与块茎产量上的比为1：3，且传统上的炮制需花大量人力去除须根，若能将白芨须根加以利用，在节约人力物力方面以及缓解目前白芨的资源短缺具有重要的现实意义。

多酚类物质是一类分子结构中包含多个酚羟基的化合物，是很好的氢或电子给予体，具有很强的消除自由基作用，对自由基相关的肿瘤、突变、病毒和糖尿病有一定预防作用。多酚类化合物通常以两种形式(可溶性多酚和不溶性～结合态多酚)存在于植物或者食品基质中。其中可溶性多酚类化合物很容易被提取出来，然而不溶性-结合态多酚类化合物通常与植物细胞壁中的纤维素、蛋白质或多糖相互作用形成共价化合物而难以提取。

目前植物基质中的结合态多酚物主要通过有机溶剂萃取法、酸或碱水解法、超声波提取法、高剪切分散乳化法、微波提取法等，但存在耗时太长、提取工艺不完善、易破坏活性物质或混入杂质、仪器设备成本高、不适合大规模工业生产等问题。当前，微生物发酵是一种温和的、绿色的生物加工技术，是以细菌、霉菌等微生物为体系对外源底物进行结构修饰的化学反应，能够破坏以纤维素为主的细胞壁结构，使得细胞内生物活性物质被充分释放，具有耗时短，反应温和，对设备和工艺的要求较少，对多酚类物质破坏小等优点，并且能够对药用植物或者食品起到协同增效作用。国内外学者对白芨的研究多集中在块茎，对须根的研究相对较少。

与本发明相关的中国专利(申请号：201410227575.7)公开了一种止血亮白清新口气型牙膏及其制备方法，所述的止血亮白清新口气型牙膏中含有以下物质：橄榄油、棕榈油、葡萄籽油、二氧化硅、万用自乳化复合型乳化剂、通用乳化剂、聚乙二醇6000、十二烷基硫酸钠、山梨醇、椰子提取液、白芨提取液、旱莲草提取液、薄荷提取液、火棘果提取液、甘油、饱和食盐水、甜蜜素、丙二醇、蒸馏水、尼泊金乙酯。该发明与现有技术相比，加入了天然植物提取物的成分，具有性质温和，安全性高，强效去除口臭，令口气芬芳，口腔清爽，有良好的起泡性，止血效果较好，同时具有抗炎作用，防治上火炎症侵害，修复粘膜组织创面，增强口腔黏膜抵抗力。其中所述白芨提取液的制备方法在经浓缩、真空冷冻干燥作为本发明制备白芨多酚的对比。

发明内容

本发明的目的是充分利用白芨须根废弃资源，提供一种白芨多酚的制备方法，该方法通过微生物固态发酵促进白芨须根中可溶性多酚类物质的释放，采用超声波-负压空化耦合双水相萃取技术制备白芨多酚组分，利用超滤膜截留技术去除其中的多糖和蛋白等生物大分子，结合大孔吸附树脂富集纯化，得到纯度高、活性强的白芨多酚。

本发明另一个目的在于提供一种含有白芨多酚的中草药牙膏，其止血消炎及抑菌效果优异、性能稳定。本发明的功效成分均来源于天然植物，通过各功效组分间的系统配伍，具有协同增效的作用。经体外抑菌及临床使用表明，本发明的白芨多酚中草药牙膏性质温和，安全性强，抑菌效果显著，能快速缓解牙龈红肿和抑制牙龈出血，对龋齿及牙龈炎具有预防和治疗作用，有利于牙齿的健康，满足人们的需要。

实现上述发明目的，解决上述技术问题，本发明实的技术方案如下：

一种白芨多酚的制备方法，包括如下步骤：

(1)原料预处理：将白芨须根原料洗净晾干并切成均匀细状的白芨须根原料，进行高压湿热灭菌；

(2)微生物固体发酵：向所述均匀细状的白芨须根原料中分别接种质量比为0.05％～5％的微生物菌悬液(所述菌种为如下至少一种：云芝菌Coriolus versicolor、桑黄菌Phellinus linteus、杏鲍菇菌Pleurotus eryngii、木蹄层孔菌Fomes fomentarius、灵芝Ganoderma lucidumor、裂褶菌Schizophyllum commune、酿酒酵母Saccharomycescerevisiae、木醋杆菌Acetobacter xylinus、德氏乳杆菌保加利亚亚种Lactobacillusdelbrueckii bulgaricus、嗜热链球菌Streptococcus thermophilus、两歧双歧杆菌Bifidobacteriumbifidum、乳酸乳球菌Lactococus lactis，菌悬液浓度为1×10⁶～1×10⁸CFU/mL)，发酵培养的温度28～45℃、发酵培养的时间为1～8d。将固体发酵后的白芨须根冷冻干燥，粉碎过60～100目筛，制得白芨须根发酵产物粉末。

(3)双水相体系组成：配制pH值范围为4.5～7.5的体系缓冲液，将亲水小分子有机溶剂和无机盐，用体系缓冲液溶解、混合，形成萃取白芨多酚的双水相体系。无机盐(所述无机盐为如下至少一种：硫酸铵、氯化钠、氯化钾、碳酸钾)在体系中的最终浓度范围为0.51％～48.98％、亲水小分子有机溶剂(所述无有机溶剂为如下至少一种：乙醇、异丙醇、甲醇、氟醇)在体系中的最终浓度范围为10.18％～78.89％。

(4)超声波-负压空化耦合双水相体系提取工艺：将所述的白芨须根发酵产物粉末按照固液比1:10～1:55(g/mL)的比例加入到所述萃取白芨多酚的双水相体系中，在负压强度-0.02～-0.08Mpa、超声功率50～450W、提取温度25～45℃、提取时间5～30min条件下萃取，然后静置30min。体系分为两相，目标物被萃取到有机相中。重复该步骤进行二次提取，合并两次提取液，制得白芨多酚提取液。

(5)膜过滤：将所述白芨多酚提取液通过3kD～10kD的超滤膜过滤，截留蛋白及多糖，合并滤液，制得白芨多酚滤液。

(6)分离纯化：将所述白芨多酚滤液加到非极性或弱极性大孔树脂(所述大孔树脂为如下至少一种：NKA-Ⅱ型，XDA-7型、D101型、ADS-17型)，按照洗脱溶剂8％～78％乙醇溶液、洗脱速度1.2～3.5BV/h进行动态洗脱，洗脱溶液经浓缩、真空冷冻干燥得白芨多酚。

一种含白芨多酚的中草药牙膏，由如下重量的原料制成：白芨多酚0.5～15份、白术多酚0.3～12份、松针精油0.05～10份、柳叶蜡梅叶精油0.1～5份、珠兰花精油0.05～8份、三七提取物3～12份、桑白皮提取物3～13份、香薷提取物2～10份、牙膏基质35～78份。所述牙膏基质由28～48份摩擦剂、1.5～7.5份保湿剂、1～6粘结剂、1～6份发泡剂、0.2～0.6份pH调节剂、0.1～0.5份缓冲剂、0.1～0.9份防腐剂和0.5～1份调味剂组成。

优选地，所述摩擦剂为碳酸钙和水合硅石，所述保湿剂为山梨醇和硅油，所述粘结剂为黄原胶、羧甲基纤维素和卡波姆，所述发泡剂为月桂醇硫酸酯钠，所述pH调节剂为氢氧化钠，所述缓冲剂为焦磷酸钠和磷酸氢钙，所述防腐剂为羟苯甲酯，所述调味剂为糖精钠、薄荷醇乳酸酯。其中，焦磷酸钠能与磷酸氢钙形成胶体，并起到稳定牙膏膏体的作用；薄荷醇乳酸酯的清凉口感相比薄荷脑更加温和，刺激小。

按照上述制备白芨多酚的方法将白芨须根原料替换为白术制备白术多酚。松针精油、柳叶蜡梅叶精油、珠兰花精油采用超临界萃取法制得。三七过120～400目筛，用500～2000目纱布袋装好，加5～20倍蒸馏水进行混合溶解；然后在负压强度-0.02～-0.08Mpa、超声功率100～450W、提取温度25～55℃、提取时间5～30min条件下萃取，直接将纱布袋拿出，余下的溶液即为三七提取液，真空浓缩，低温喷雾干燥，即得三七提取物。按照相同的操作方法分别制备桑白皮、香薷提取物。

通过实验，发现了白芨多酚的抑菌、止血消炎效果，开发了一种白芨多酚中草药牙膏，或他人利用白芨多酚的抑菌、止血消炎效果开发成其它形式的产品(漱口水、口腔喷雾等)。利用白芨多酚制备类似产品的应用亦在本发明的保护范围之内。

1)本发明为充分利用白芨须根废弃资源，提供了一种白芨须根微生物固体发酵的方法，该方法选择合适的菌种，不需要添加酶等外来物质，能显著促进白芨须根中可溶性多酚类物质的释放，相对于未发酵组，白芨多酚含量增加了2.15倍，不仅节约生产成本，而且最大化的简化了生产步骤，使该发酵技术能够实现大量生产、工业化生产。

2)本发明采用超声波-负压空化耦合双水相萃取技术制备白芨多酚组分，大大提高了多酚萃取率，具有提取时间短、提取温度低、对环境友好等优点，且最大程度的保持了多酚结构的完整性，提高了多酚的生物活性。利用超滤膜截留技术去除其中的多糖和蛋白等生物大分子，采用大孔吸附树脂富集纯化，具有回收率高、分离效果好、制备纯度高等优势。

3)本发明白芨多酚中草药牙膏的功效成分均来源于天然植物，各功效组分间不发生化学反应，且通过调整各功效组分的配比，具有协同增效的作用，能最大程度地发挥抑菌、止血消炎的效果；多酚类功效成分，在本发明制备的牙膏基质中，功效稳定性高。经体外抑菌及临床使用表明，本发明的白芨多酚中草药牙膏抑菌效果显著，能快速愈合牙龈出血、牙龈炎，且安全性高。

附图说明

图1为微生物发酵白芨多酚的变化趋势。

图2为提取方法对白芨多酚得率的影响。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明的具体实践情况作进一步详细说明。

实施例1一种白芨多酚的制备

一种白芨多酚的制备，包括如下步骤：

(2)微生物固体发酵：向所述均匀细状的白芨须根原料中分别接种质量比为0.05％的云芝菌菌悬液，菌悬液浓度为1×10⁶CFU/mL，发酵培养的温度35℃、发酵培养的时间为3d。将固体发酵后的白芨须根冷冻干燥，粉碎过100目筛，制得白芨须根发酵产物粉末。

(3)双水相体系组成：配制pH值范围为6.5的体系缓冲液，将亲水小分子有机溶剂(乙醇)和无机盐(硫酸铵)，用体系缓冲液溶解、混合，形成萃取白芨多酚的双水相体系。硫酸铵在体系中的最终浓度范围为0.51％、亲水小分子有机溶剂乙醇，在体系中的最终浓度范围为30％。

(4)超声波-负压空化耦合双水相体系提取工艺：将所述的白芨须根发酵产物粉末按照固液比1:10(g/mL)的比例加入到所述萃取白芨多酚的双水相体系中，在负压强度-0.02Mpa、超声功率200W、提取温度25℃、提取时间15min条件下萃取，然后静置30min。体系分为两相，目标物被萃取到有机相中。重复该步骤进行二次提取，合并两次提取液，制得白芨多酚提取液。

(5)膜过滤：将所述白芨多酚提取液通过5kD的超滤膜过滤，截留蛋白及多糖，合并滤液，制得白芨多酚滤液。

(6)分离纯化：将所述白芨多酚滤液加到非极性或弱极性大孔树脂(所述大孔树脂为NKA-Ⅱ型)，按照洗脱溶剂30％乙醇溶液、洗脱速度2BV/h进行动态洗脱，洗脱溶液经浓缩、真空冷冻干燥得白芨多酚。

实施例2一种白芨多酚的制备

一种白芨多酚的制备，包括如下步骤：

(2)微生物固体发酵：向所述均匀细状的白芨须根原料中分别接种质量比为5％的裂褶菌和酿酒酵母(1:1)微生物菌悬液，菌悬液浓度为1×10⁸CFU/mL，发酵培养的温度28℃、发酵培养的时间为8d。将固体发酵后的白芨须根冷冻干燥，粉碎过100目筛，制得白芨须根发酵产物粉末。

(3)双水相体系组成：配制pH值范围为4.5的体系缓冲液，将亲水小分子有机溶剂和无机盐，用体系缓冲液溶解、混合，形成萃取白芨多酚的双水相体系。无机盐(所述无机盐为物质的量1:1的氯化钠和氯化钾)在体系中的最终浓度范围为48.98％、亲水小分子有机溶剂(所述无有机溶剂为物质的量1:1的异丙醇和甲醇)在体系中的最终浓度范围为20％。

(4)超声波-负压空化耦合双水相体系提取工艺：将所述的白芨须根发酵产物粉末按照固液比1:55(g/mL)的比例加入到所述萃取白芨多酚的双水相体系中，在负压强度-0.08Mpa、超声功率450W、提取温度25℃、提取时间5min条件下萃取，然后静置30min。体系分为两相，目标物被萃取到有机相中。重复该步骤进行二次提取，合并两次提取液，制得白芨多酚提取液。

(5)膜过滤：将所述白芨多酚提取液通过3kD的超滤膜过滤，截留蛋白及多糖，合并滤液，制得白芨多酚滤液。

(6)分离纯化：将所述白芨多酚滤液加到非极性或弱极性大孔树脂(所述大孔树脂为如下D101型)，按照洗脱溶剂78％乙醇溶液、洗脱速度1.2BV/h进行动态洗脱，洗脱溶液经浓缩、真空冷冻干燥得白芨多酚。

实施例3一种白芨多酚的制备

一种白芨多酚的制备，包括如下步骤：

(2)微生物固体发酵：向所述均匀细状的白芨须根原料中分别接种质量比为3％的两歧双歧杆菌微生物菌悬液，菌悬液浓度为1×10⁸CFU/mL，发酵培养的温度35℃、发酵培养的时间为4d。将固体发酵后的白芨须根冷冻干燥，粉碎过80目筛，制得白芨须根发酵产物粉末。

(3)双水相体系组成：配制pH值范围为6.5的体系缓冲液，将亲水小分子有机溶剂和无机盐，用体系缓冲液溶解、混合，形成萃取白芨多酚的双水相体系。无机盐(所述无机盐为碳酸钾)在体系中的最终浓度范围为25％、亲水小分子有机溶剂(所述无有机溶剂为氟醇)在体系中的最终浓度范围为25％。

(4)超声波-负压空化耦合双水相体系提取工艺：将所述的白芨须根发酵产物粉末按照固液比1:25(g/mL)的比例加入到所述萃取白芨多酚的双水相体系中，在负压强度-0.04Mpa、超声功率250W、提取温度30℃、提取时间20min条件下萃取，然后静置30min。体系分为两相，目标物被萃取到有机相中。重复该步骤进行二次提取，合并两次提取液，制得白芨多酚提取液。

(6)分离纯化：将所述白芨多酚滤液加到非极性或弱极性大孔树脂(所述大孔树脂为ADS-17型)，按照洗脱溶剂50％乙醇溶液、洗脱速度3.5BV/h进行动态洗脱，洗脱溶液经浓缩、真空冷冻干燥得白芨多酚。

实施例4：一种白芨多酚的制备

(1)原料预处理：将白芨须根原料洗净晾干并切成均匀细状，进行高压湿热灭菌。

(2)微生物固体发酵：向(1)中接种1％的桑黄菌悬液(菌悬液浓度为1×10⁷CFU/mL)，发酵培养的温度28℃、发酵培养的时间为7d。将固体发酵后的白芨须根冷冻干燥，粉碎过60目筛，得白芨须根发酵产物粉末。

(3)双水相体系组成：配制pH值范围为6.5的体系缓冲液，将亲水小分子有机溶剂和无机盐用体系缓冲液溶解、混合，形成萃取白芨多酚的双水相体系。硫酸铵在体系中的最终浓度范围为5％、乙醇在体系中的最终浓度范围为70％。

(4)超声波-负压空化耦合双水相体系提取工艺：将(2)制备的白芨须根发酵产物粉末按照固液比1:40(g/mL)的比例加入到(3)中的双水相体系中，在负压强度～0.03Mpa、超声功率250W、提取温度40℃、提取时间10min条件下萃取，然后静置30min。体系分为两相，目标物被萃取到有机相中。重复该步骤进行二次提取，合并两次提取液。

(5)膜过滤：将(4)制备的多酚提取液通过10kD的超滤膜过滤，截留蛋白芨多糖，合并滤液。

(6)分离纯化：将(5)制备的多酚滤液加到NKA～Ⅱ型大孔树脂，按照洗脱溶剂58％乙醇溶液、洗脱速度2.0BV/h进行动态洗脱，洗脱溶液经浓缩、真空冷冻干燥得白芨多酚。

实施例5：一种含白芨多酚的中草药牙膏的制备

一种含白芨多酚的中草药牙膏，由如下重量的原料制成：白芨多酚6份、白术多酚5份、松针精油1份、柳叶蜡梅叶精油1份、珠兰花精油0.05份、三七提取物11份、桑白皮提取物10份、香薷提取物8份、牙膏基质57.95份。所述牙膏基质由45份摩擦剂、5份保湿剂、4份粘结剂、3份发泡剂、0.3份pH调节剂、0.1份缓冲剂、0.2份防腐剂和0.35份调味剂组成。所述摩擦剂为碳酸钙和水合硅石，所述保湿剂为山梨醇和硅油，所述粘结剂为黄原胶、羧甲基纤维素和卡波姆，所述发泡剂为月桂醇硫酸酯钠，所述PH调节剂为氢氧化钠，所述缓冲剂为焦磷酸钠和磷酸氢钙，所述防腐剂为羟苯甲酯，所述调味剂为糖精钠、薄荷醇乳酸酯。其中，焦磷酸钠能与磷酸氢钙形成胶体，并起到稳定牙膏膏体的作用；薄荷醇乳酸酯的清凉口感相比薄荷脑更加温和，刺激小。按照实施例4制备白芨多酚的方法制备的白术多酚。松针精油、柳叶蜡梅叶精油、珠兰花精油采用超临界萃取法制得。

三七过150目筛，用500目纱布袋装好，加10倍蒸馏水进行混合溶解；然后在负压强度-0.03Mpa、超声功率300W、提取温度45℃、提取时间15min条件下萃取，直接将纱布袋拿出，余下的溶液即为三七提取液，真空浓缩，低温喷雾干燥，即得三七提取物。按照相同的操作方法分别制备桑白皮、香薷提取物。

实施例6：对比实施例

6.1对比例1：将白芨须根不接种微生物进行的固体发酵作为不发酵对照组，其它操作方法相同于本发明中实施例4白芨多酚的制备。

6.2对比例2：将CN 201410227575.7公开的所述白芨提取液的制备方法(具体制备方法如该发明中实施例2所述，原料为白芨须根)，经浓缩、真空冷冻干燥作为本发明实施例4制备的白芨多酚的对照组。

6.3多酚含量测定：采用福林酚法，取0.000，0.025，0.050，0.100，0.150，0.200mL单宁酸(1mg/mL)，将溶液定容至1mL，制成待测液。取0.05mL各待测液和0.05mL Folin～Ciocalteu试剂(0.25mol/L)，反应3min后加入1mL 0.7mol/L碳酸钠溶液，30℃静置1h显色，精确吸取0.2mL于酶标仪750nm处测定吸光度。同时Folin～Ciocalteu试剂换成去离子水作为空白对照组，绘制质量浓度—吸光值的标准曲线。按同法测定白芨须根微生物发酵组与不发酵组、传统工艺组与本发明工艺组的多酚含量，结果以每克萃取物中含有相当单宁酸毫克数表示，即mg TA/g。

6.4图1为微生物发酵白芨多酚的变化趋势。结果表明，在发酵0～6天阶段，白芨多酚的含量随着发酵时间明显增加，在发酵第6天，多酚含量达到最高。而在发酵6天后，多酚的含量随着发酵时间增加保持不变或者轻微减少，这可能是由于一些多酚类化合物被氧化成其它化合物或者多酚化合物被当做碳源被微生物利用引起的。当用微生物发酵时，相对于未发酵组，白芨多酚含量增加了2.15倍。结果证实，通过本发明固态发酵方法可以显著促进白芨多酚的释放。

6.5图2为提取方法对白芨多酚得率的影响。结果表明，采用本发明的提取方法显著提高了白芨多酚的得率，相对于CN 201410227575.7公开的所述白芨提取液的制备方法，经测定，本发明白芨多酚含量增加了2.72倍。

实施例7：白芨多酚牙膏的抑菌作用实验

7.1菌种活化与菌悬液制备：将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、幽门螺旋杆菌等4种供试菌接种到试管营养琼脂培养基斜面进行活化，活化传代2次后，在无菌操作台内各挑取已活化好的菌种置于无菌生理盐水中，配置各菌悬液浓度约为10⁶～10⁷CFU/mL。

7.2抑菌活性测定：吸取100μL供试菌悬液均匀涂布各平板上，用移液枪于无菌直径6mm的滤纸片中央加入10μL白芨多酚及含白芨多酚的牙膏，以云南白药为阳性对照，以添加等量空白牙膏(本发明实施例2的牙膏基质)为空白对照组，37℃倒置培养24h后测量抑菌圈直径，结果重复5次，取平均值。

7.3表1为白芨多酚牙膏的抑菌作用效果。结果表明，白芨多酚对口腔内常见的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、幽门螺旋杆菌等均有显著的抑制作用。使用实施例5的白芨多酚中草药牙膏对口腔内4种常见菌的抑菌能力均比阳性对照云南白药牙膏(薄荷清爽型150g)强，可见白芨多酚的加入使牙膏的抑菌能力增强。

表1抑菌圈直径

实施例8：白芨多酚牙膏临床止血消炎功效测定实验

8.1牙膏临床止血消炎功效试验：按照纳入、排除标准筛选出90名有明显龈炎的受试者，随机分为3组，每组30人；分别使用本发明实施例2和空白对照组(本发明实施例5的牙膏基质)的牙膏；早晚各使用一次，受试者在试验期不使用其它牙膏或止血消炎药物，不改变饮食、生活习惯，检查使用前后5天的探诊出血指数。

8.2使用钝头牙周探针，结合视诊和探诊。检查全口牙龈的近中唇(颊)乳头、正中唇(颊)缘、远中唇(颊)乳头和舌侧龈缘的状况。

8.3表2为白芨多酚牙膏临床止血消炎功效测定的评价标准与结果。结果表明，使用实施例2的白芨多酚中草药牙膏7天后止血消炎功效明显，显效最高达83.3％，总有效率均达到96.7％，50％的受试者治愈；而使用云南白药的牙膏显效率仅为60％，没有本发明的白芨多酚牙膏显效率高。综上可得，本发明的白芨多酚中草药牙膏在短期内可快速止血消炎，显效率高于云南白药牙膏。

表2评价标准

功效	判断标准	牙龈状况
			治愈	完全健康	龈缘和龈乳头外观健康，轻探龈沟后不出血
显效	基本健康	龈缘和龈乳头呈轻度炎症，轻探龈沟后不出血
			有效	龈炎轻微	牙龈呈轻度炎症，有颜色改变，无肿胀或血肿，探诊后点状出血
无效	龈炎明显	牙龈呈中度炎症，有颜色改变和轻度水肿，探诊后出血

表3临床止血消炎功效(试验期7天)

组别	治愈	显效	有效	无效	显效率(％)	总有效率(％)
							空白牙膏			2	28	0	6.7
实施例2	15	10	4	1	83.3	96.7
							云南白药	10	8	12	0	60.0	100

Claims

1.一种白芨多酚的制备方法，包括如下步骤：

(2)微生物固体发酵：向所述均匀细状的白芨须根原料中分别接种质量比为0.05％～5％的发酵微生物菌种菌悬液，发酵培养的温度28～45℃、发酵培养的时间为1～8d；将固体发酵后的白芨须根冷冻干燥，粉碎过60～100目筛，制得白芨须根发酵产物粉末；

(3)双水相体系组成：配制pH值范围为4.5～7.5的体系缓冲液，将亲水小分子有机溶剂和无机盐，用体系缓冲液溶解、混合，形成萃取白芨多酚的双水相体系；

(4)超声波-负压空化耦合双水相体系提取工艺：将所述的白芨须根发酵产物粉末按照固液比1:10～1:55(g/mL)的比例加入到所述萃取白芨多酚的双水相体系中，在负压强度-0.02～-0.08Mpa、超声功率50～450W、提取温度25～45℃、提取时间5～30min条件下萃取，然后静置30min，体系分为两相，目标物被萃取到有机相中，制得白芨多酚提取液；

(5)膜过滤：将所述白芨多酚提取液通过3kD～10kD的超滤膜过滤，截留蛋白及多糖，合并滤液，制得白芨多酚滤液；

(6)分离纯化：将所述白芨多酚滤液加到非极性或弱极性大孔树脂，按照洗脱溶剂8％～78％乙醇溶液、洗脱速度1.2～3.5BV/h进行动态洗脱，洗脱溶液经浓缩、真空冷冻干燥得白芨多酚。

2.如权利要求1所述的白芨多酚的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，发酵微生物菌种为如下至少一种：云芝菌、桑黄菌、杏鲍菇菌、木蹄层孔菌、灵芝、裂褶菌、酿酒酵母、木醋杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜热链球菌、两歧双歧杆菌、乳酸乳球菌，所述发酵微生物菌种菌悬液浓度为1×10⁶～1×10⁸CFU/mL。

3.如权利要求1所述的白芨多酚的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中所述无机盐为如下至少一种：硫酸铵、氯化钠、氯化钾、碳酸钾，在体系中的最终浓度范围为0.51％～48.98％；所述亲水小分子有机溶剂为如下至少一种：乙醇、异丙醇、甲醇、氟醇，在体系中的最终浓度范围为10.18％～78.89％。

4.如权利要求1所述的白芨多酚的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)重复该步骤进行二次提取，合并两次提取液，制得白芨多酚提取液。

5.如权利要求1所述的白芨多酚的制备方法，其特征在于：所述步骤(6)中，所述大孔树脂为如下至少一种：NKA-Ⅱ型，XDA-7型、D101型、ADS-17型。

6.一种白芨多酚，由权利要求1～5任一所述白芨多酚的制备方法制得。

7.一种含白芨多酚的中草药牙膏，由如下重量的原料制成：白芨多酚0.5～15份、白术多酚0.3～12份、松针精油0.05～10份、柳叶蜡梅叶精油0.1～5份、珠兰花精油0.05～8份、三七提取物3～12份、桑白皮提取物3～13份、香薷提取物2～10份、牙膏基质35～78份；所述牙膏基质由28～48份摩擦剂、1.5～7.5份保湿剂、1～6粘结剂、1～6份发泡剂、0.2～0.6份pH调节剂、0.1～0.5份缓冲剂、0.1～0.9份防腐剂和0.5～1份调味剂组成，所述白芨多酚由权利要求6所述的白芨多酚的制备方法制得。

8.如权利要求7所述含白芨多酚的中草药牙膏，其特征在于：所述摩擦剂为碳酸钙和水合硅石，所述保湿剂为山梨醇和硅油，所述粘结剂为黄原胶、羧甲基纤维素和卡波姆，所述发泡剂为月桂醇硫酸酯钠，所述pH调节剂为氢氧化钠，所述缓冲剂为焦磷酸钠和磷酸氢钙，所述防腐剂为羟苯甲酯，所述调味剂为糖精钠、薄荷醇乳酸酯。

9.如权利要求7所述含白芨多酚的中草药牙膏，其特征在于：所述白术多酚由权利要求6所述的白芨多酚的制备方法中将白芨须根原料替换为白术制得。

10.如权利要求7所述含白芨多酚的中草药牙膏，其特征在于：所述三七提取物由以下方法制得：三七过120～400目筛，用500～2000目纱布袋装好，加5～20倍蒸馏水进行混合溶解；然后在负压强度-0.02～-0.08Mpa、超声功率100～450W、提取温度25～55℃、提取时间5～30min条件下萃取，直接将纱布袋拿出，余下的溶液即为三七提取液，真空浓缩，低温喷雾干燥，即得三七提取物。