CN109862913B

CN109862913B - 用于免疫疗法的αvβ8整联蛋白复合物的中和抗体

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Publication number: CN109862913B
Application number: CN201780060796.1A
Authority: CN
Inventors: S·L·尼西穆拉; 楼建龙; J·D·马克斯; J·L·巴龙; 程亦凡; S·吴; A·科米尔; N·纳卡萨卡
Original assignee: University of California
Current assignee: University of California
Priority date: 2016-09-29
Filing date: 2017-09-29
Publication date: 2023-09-05
Anticipated expiration: 2037-09-29
Also published as: EP3518973A1; CA3223687A1; US11591402B2; US10954304B2; CA3036232A1; AU2017335991B2; US20190218298A1; US20230331851A1; AU2017335991A1; CN109862913A; WO2018064478A1; EP3518973A4; US20210230279A1

Abstract

提供了一种特异性结合人ανββ并阻断TGFp肽与ανβ8结合的抗体，其中该抗体结合人β8的特异性决定环(SDL)。在一些实施方式中，抗体进一步结合人av‑头部结构域、人β8的a1螺旋或人β8的a1螺旋中的1个、2个或所有3个。在一些实施方式中，该抗体是人源化的或嵌合的。在一些实施方式中，抗体连接可检测标记物。还提供了一种增强人个体免疫应答的方法，其包括向个体给予足量的抗体，从而增强免疫应答。还提供了药物组合物，其包含抗‑ανββ抗体或其抗原结合分子。

Description

用于免疫疗法的αvβ8整联蛋白复合物的中和抗体

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年9月26日提交的美国临时专利申请62/401,570和2017年7月6日提交的美国临时专利申请62/529,381的优先权，其各自通过引用将其全部内容纳入本文。

联邦资助的研究与开发下作出发明的权利声明

本发明是在政府支持下由国家卫生研究院授予的基金号U54 HL119893资助完成。政府对本发明拥有一定的权利。

背景技术

转化生长因子β(TGFβ)最初被表征为能够在非肿瘤细胞中诱导转化表型的致癌基因。基于相似氨基酸结构域的存在，从那时起已经表征了许多TGFβ家族成员。

一些TGF-β同种型在哺乳动物中普遍表达(TGF-β1-3)，但是通过与前肽的非共价相互作用维持在无活性形式，所述前肽是TGF-β的潜伏相关结构域(latency associateddomain)(LAP)。对于TGFβ发出信号，它必须通过称为TGFβ活化的过程从其无活性的复合物中释放。该潜伏TGF复合物包括3个组分：活性(成熟)TGFβ二聚体，LAP(潜伏相关肽)和LTBP(潜伏TGFβ结合蛋白)。LAP是通过二硫键连接的二聚体，其表示TGFβ前体蛋白的N-末端。成熟TGFβ蛋白表示前体的C末端(约25kD)。TGFβ和LAP之间的键在高尔基体内被蛋白水解切割，但是TGF-β前肽保持通过非共价相互作用与TGFβ结合。TGFβ和LAP的复合物被成为小潜伏复合物(small latent complex)(SLC)。LAP和TGFβ的关联赋予了潜伏性。LAP-TGFβ结合是可逆的，并且分离的纯化化合物可以重组以形成无活性的SLC。SLC和较大复合物在本文指代潜伏TGFβ，因为两种都是无活性的。

通常，整联蛋白是粘附分子并且介导细胞与细胞外基质蛋白的连接。整联蛋白αvβ8结合TGF-β的LAP，并且介导TGF-β1和3的活化(Mu等(2002)J.Cell Biol.159:493)。体内活化TGF-β(即释放成熟TGF-β多肽)需要整联蛋白αvβ8介导的TGF-β活化，因此αvβ8是TGF-β功能的看门人(gatekeeper)。整联蛋白αvβ8在正常的上皮细胞(例如，气道上皮细胞)，间叶细胞和神经元组织中表达。

整联蛋白β8(Itgb8)与叉头框P3(Foxp3)-阳性T细胞和调节性T特异性表观遗传重塑相关。参见例如，Vandenbon,等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA第113卷，第17期，第E2393–E2402页(2016)。FoxP3是参与调节性T(Treg)细胞发育的转录因子。人和小鼠效应Treg细胞表达功能性TGF-β-活化整联蛋白αvβ8。参见，Worthington,Immunity第42卷，第5期，第903–915页(2015年5月)。T细胞体内平衡并不需要Treg细胞整联蛋白αvβ8介导的TGF-β活化并且Treg细胞表达的整联蛋白αvβ8抑制活性炎症。

定义

除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有本领域普通技术人员通常所理解的同样含义。参见例如Lackie，DICTIONARY OF CELLAND MOLECULAR BIOLOGY(《细胞分子生物学词典》)，埃尔斯威尔出版社(Elsevier)(第4版2007)；Sambrook等，MOLECULARCLONING,A LABORATORY MANUAL(《分子克隆，实验室手册》)，冷泉港实验室出版社(冷泉港，纽约1989)。本发明的实践中可以使用与本文所述类似或等价的任何方法、装置和材料。本文提供的以下定义是用来帮助理解本文经常用到的某些术语，不对本发明的范围构成限制。

本文所用术语“抗-αvβ8抗体”、“αvβ8特异性抗体”、“αvβ8抗体”和“抗-αvβ8”可作为同义词使用表示特异性结合αvβ8的抗体。相似地，抗-β8抗体(以及类似的术语)表示特异性结合β8的抗体。本文所述抗-αvβ8抗体和抗-β8抗体结合表达在表达αvβ8的细胞上的蛋白质。

与αvβ8相关的紊乱是通过存在表达αvβ8的细胞表征的病症，相对于正常无疾病的对照，所述细胞表达αvβ8的水平增加，或者增加表达αvβ8的细胞的数量。与TGFβ相关的紊乱(紊乱以比正常TGFβ活性高为特征)包括与αvβ8相关的紊乱，因为在如本文所述的某些情况中，αvβ8涉及活化TGFβ。

“核酸”指脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其单链或双链形式的聚合物，及其互补物。术语“多核苷酸”指核苷酸的线性序列。术语“核苷酸”一般指多核苷酸的一个单位，即单体。核苷酸可以是核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸、或其修饰形式。本文考虑的多核苷酸的示例包括单链和双链DNA，单链和双链RNA，以及具有单链和双链DNA和RNA的混合物的杂合分子。

词语“互补”或“互补性”表示多核苷酸中核酸与第二个多核苷酸中另一核酸形成碱基对的能力。例如，序列A-G-T与序列T-C-A互补。互补性可以是部分的，其中只有一些核酸根据碱基配对匹配，或者可以是完整的，其中所有的核酸根据碱基配对匹配。

术语“蛋白质”、“肽”和“多肽”可互换使用以表示一种氨基酸聚合物或一组两种或更多种相互作用或结合的氨基酸聚合物。该术语可应用于某种氨基酸聚合物，在所述氨基酸聚合物中一个或多个氨基酸残基是相应天然产生氨基酸的人工化学模拟物，以及天然产生的氨基酸聚合物(含有经修饰的残基的聚合物)和非天然产生的氨基酸聚合物。

术语“氨基酸”指天然产生的氨基酸和合成的氨基酸，以及以功能类似于天然产生的氨基酸的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然产生的氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸，以及随后修饰的氨基酸，如羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物指与天然产生的氨基酸具有相同基本化学结构的化合物，即α碳结合于氢、羧基、氨基和R基，如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。这种类似物可具有修饰的R基(如正亮氨酸)或修饰的肽主链，但基本化学结构保持与天然产生的氨基酸相同。氨基酸模拟物指如下化合物：其结构不同于氨基酸的普通化学结构，但功能类似于天然产生氨基酸。

本文中氨基酸可按IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的通常已知的三字母符号或单字母符号表述。核苷酸同样可由其普遍接受的单字母代码表述。

“保守修饰变体”可应用于氨基酸和核酸序列。对于特定的核酸序列，保守修饰变体指编码相同或基本相同的氨基酸序列的核酸，或者当核酸不编码氨基酸序列时，指基本相同或相关的序列，例如天然毗连的序列。由于遗传密码的简并性，大量功能相同的核酸编码大多数的蛋白。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU都编码氨基酸丙氨酸。因此，在密码子指定丙氨酸的每个位置上，可将密码子改变成所述的另一种相应密码子而不改变编码的多肽。这种核酸变异是“沉默变异”，是保守修饰变异的一种。本文编码多肽的每种核酸序列也描述了所述该核酸的沉默变异。本领域技术人员应认识到在某些文本中可修饰核酸中的各个密码子(除了AUG和TGG，AUG通常是甲硫氨酸的唯一密码子，TGG通常是色氨酸的唯一密码子)，以产生功能相同的分子。相应地，编码多肽的核酸的沉默变异相对于表达产物隐含在所述序列中，但不是相对于实际的探针序列。

至于氨基酸序列，本领域技术人员将认识到，对核酸、肽、多肽或蛋白序列进行单个取代、缺失或加入以在编码序列中改变、加入或删除一个氨基酸或少量氨基酸是“保守修饰变体”，其中所述改变导致氨基酸被化学上相似的氨基酸所取代。提供功能上相似氨基酸的保守取代表是本领域熟知的。此类保守修饰的变体是本发明的多态性变体、种间同源物和等位基因的补充且并不排除它们。下述氨基酸通常互相保守取代：1)丙氨酸(A)、甘氨酸(G)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)；7)丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；和8)半胱氨酸(C)甲硫氨酸(M)(参见例如Creighton，Proteins(《蛋白质》)(1984))。

提及两种或更多种多核酸或两种或更多种多肽时，术语“相同”或“相同性百分比”指采用BLAST或BLAST 2.0序列比对算法，利用默认参数，或通过手动比对和视觉检查测量为相同的，或具有特定百分比的相同核苷酸或氨基酸(即，当在比较窗或指定区域上以最大对应性比较和比对时，在特定区域上具有约60％相同性，优选65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高相同性)的两个或更多个序列或子序列。参见例如NCBI网站ncbi.nlm.nih.gov/BLAST。然后，可称这些序列“基本相同”。该定义还指或者可以适用于核苷酸测试序列的互补。该定义还包括具有缺失和/或添加的序列，以及具有取代的那些序列。如下所述，算法可以考虑缺口等。通常，相同性存在于抗体表位，或包含长度为至少约25个氨基酸或核苷酸的序列的区域上，或长度为50-100个氨基酸或核苷酸的区域上，或参考序列的整个长度的区域上。

用于例如细胞或核酸、蛋白质或载体时，术语“重组”表示所述细胞、核酸、蛋白质或载体已通过引入异源核酸或蛋白质或者对天然核酸或蛋白质的改变进行修饰，或所述细胞源自经此修饰的细胞。因此，例如重组细胞表达不存在于天然(非重组)形式细胞内的基因或表达原本异常表达、低表达或完全不表达的天然基因。

用于核酸部分时，术语“异源”指所述核酸包含在天然情况下互相之间没有相同来源关系的两个或更多子序列。例如，所述核酸一般是重组产生的，具有两个或多个来自无关基因的序列，它们经排列组成新的功能性核酸，例如启动子来自一个来源而编码区来自另一来源。相似地，异源蛋白表示该蛋白质包含天然情况下彼此不存在于同一关系中的两个或多个子序列(如融合蛋白)。

当术语“分离的”应用于核酸或蛋白质时表示所述核酸或蛋白质基本上没有在自然状态下与其相关的其他细胞组分。优选的是处于均一状态。其可以是干燥的或水性溶液。通常使用分析化学技术(如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱)来测定纯度和均一性。作为制剂中存在的主要物质的蛋白质是基本纯的。具体地，将分离的基因从开放阅读框分离，所述开放阅读框侧接基因并且编码不同于感兴趣基因的蛋白质。术语“纯化的”指核酸或蛋白质在电泳凝胶中基本上产生一条条带。具体地，这意味着核酸或蛋白质是至少85％纯、更优选至少95％纯，并且最优选至少99％纯。

术语“抗体”指包含由免疫球蛋白基因编码的框架区的多肽或其片段，其特异性结合并识别抗原，例如，人αvβ8，特定细胞表面标志物或任何所需靶标。通常，“可变区”包含有抗体的抗原结合区(或其功能性等价物)并且对于结合的特异性和亲和性是至关重要的。参见Paul，Fundamental Immunology(《基础免疫学》)(2003)。

示例性免疫球蛋白(抗体)的结构单元包含四聚体。各四聚体包含相同的两对多肽链，每对包含一条“轻”链(约25kD)和一条“重”链(约50-70kD)。每条链的N末端确定约100至110个或更多个氨基酸构成的可变区，所述可变区主要负责抗原识别。术语轻链可变区(V_L)和重链可变区(V_H)分别指这些轻链和重链。

“同种型”是由重链恒定区确定的一类抗体。本文所述抗体可以是同种型类别的任何同种型。免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因。轻链被归类为κ或λ。重链被归类为γ、μ、α、δ或ε，这进而确定了同种型类别，分别为IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。

抗体可以完整的免疫球蛋白形式或任何包含特异性抗原结合活性的多种已充分表征片段的形式存在。这样的片段可以通过用多种肽酶消化来产生。胃蛋白酶在铰链区中的二硫键以下消化抗体，产生Fab的二聚体F(ab)'₂，Fab本身是由二硫键接合到V_H-C_H1的轻链。可在温和条件下还原F(ab')₂以打断铰链区中的二硫键，从而将F(ab')₂二聚体转化为Fab'单体。Fab'单体本质上是附带有部分绞链区的Fab(参见《基础免疫学》(FundamentalImmunology)，Paul编，第3版，1993年)。1993).虽然根据对完整抗体的消化定义了多种抗体片段，但是本领域技术人员会理解，这类片段也可用化学方法或重组DNA方法从头合成。因此，本文中所用术语抗体，也包括通过修饰整个抗体而生成的抗体片段，或用重组DNA方法从头合成所产生(例如，单链Fv)，或使用噬菌体展示文库鉴定的那些抗体片段(参见如McCafferty等，Nature 348:552-554(1990))。

对于制备单克隆或多克隆抗体，可以使用本领域已知的任何技术(参见例如，Kohler和Milstein,Nature 256:495-497(1975)；Kozbor等，Immunology Today4:72(1983)；Cole等，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy(《单克隆抗体和癌症治疗》)，第77-96页，ARL公司(Alan R.Liss,Inc.)1985。可以调整用于生产单链抗体的技术(美国专利号4,946,778)以产生本发明多肽的抗体。同样，转基因小鼠或其他生物体诸如其他哺乳动物可以用于表达人源化的抗体。或者，可采用噬菌体展示技术来鉴定特异性结合至所选抗原的抗体和杂聚Fab片段(参见，例如，McCafferty等，同上；Marks等，Biotechnology 10:779-783(1992))。

本领域熟知人源化或灵长类化非人抗体的方法。通常，人源化抗体具有从非人来源引入的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基常被称为输入残基，它们一般取自输入可变区。人源化可基本按照Winter和共事者的方法进行(参见，例如，Jones等，Nature321:522-525(1986)；Riechmann等，Nature332:323-327(1988)；Verhoeyen等，Science239:1534-1536(1988)和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992))，通过取代啮齿类CDR或CDR序列为人抗体的对应序列来完成。因此，这类人源化抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中明显小于完整的人可变区被来自非人物种的相应序列所取代。在实践中，人源化抗体一般是一些互补决定区(“CDR”)残基，可能是一些框架(“FR”)残基被啮齿动物抗体中相似位点的残基所取代的人抗体。

本发明的抗体或抗原结合分子还包含一个或多个免疫球蛋白链，其与其他蛋白质化学偶联或与其他蛋白质表达成融合蛋白。其还包含双特异性抗体。双特异性或双功能性抗体是具有两个不同的重/轻链对和两个不同的结合位点的人工杂交抗体。本发明的其他抗原结合片段或抗体部分包含二价scFv(双抗体)、双特异性scFv抗体，其中抗体分子识别两个不同的表位、单结合结构域(dAb)和微抗体(minibody)。

本文所述的各种抗体或抗原结合片段可以通过酶促或化学修饰完整抗体产生，或用重组DNA方法从头合成所产生(例如，单链Fv)，或使用噬菌体展示文库鉴定的那些抗体片段(参见如McCafferty等，Nature 348:552-554(1990))。例如，微抗体可以使用本领域所述的方法生成，例如，Vaughan和Sollazzo,Comb Chem High Throughput Screen.4:417-302001。双特异性抗体可以通过各种方法产生，包括融合杂交瘤或连接Fab'片段。参见例如，Songsivilai和Lachmann,Clin.Exp.Immunol.79:315-321(1990)；Kostelny等,J.Immunol.148,1547-1553(1992)。可以使用噬菌体展示文库或核糖体展示文库，基因改组(gene shuffled)文库鉴定单链抗体。可由合成的、半合成的或天然的和免疫活性来源构建这类文库。

“单克隆抗体”是指对于抗原上的给定表位具有单一的结合特异性和亲和性的抗体的克隆制备物。“多克隆抗体”指的是抗体的制备物，其针对单一抗原产生，但是具有不同的结合特异性和亲和性。

本文所用“V区”指包含框架1，CDR1，框架2，CDR2，框架3，CDR3和框架4的区段的抗体可变区结构域。这些区段作为B细胞分化期间重链和轻链V区基因重排的结果包含于V区段中。

本文所用“互补决定区(CDR)”是指在每条链上的三个高变区，其中断由轻链和重链可变区建立的4个“框架”区。CDR主要负责与抗原表位的结合。每条链的CDR一般被称为CDR1、CDR2和CDR3，依次从N末端开始编号，并且也通常由特定CDR位于的链来鉴定。因此，V_HCDR3位于发现V_H CDR3的抗体的重链可变区上，而V_L CDR1是来自发现V_L CDR1的抗体的轻链可变区的CDR1。

不同的轻链或重链的框架区序列在物种内是相对保守的。抗体的框架区即组成轻链和重链的组合的框架区，其用作在三维空间中定位和对齐CDR。

CDR和框架区的氨基酸序列能够采用本领域中熟知的不同定义来确定，例如Kabat，Chothia，国际免疫遗传学数据库(IMGT)和AbM(参见例如，Johnson和Wu,NucleicAcids Res.2000Jan 1；28(1):214–218和Johnson等,Nucleic Acids Res.,29:205-206(2001)；Chothia和Lesk,(1987)J.Mol.Biol.196,901-917；Chothia等(1989)Nature 342,877-883；Chothia等(1992)J.Mol.Biol.227,799-817；Al-Lazikani等,J.Mol.Biol 1997,273(4))。除非另外指定，根据Kabat确定CDR。在以下文献中也描述了抗原结合位点的定义：Ruiz等，Nucleic Acids Res.,28,219–221(2000)；和Lefranc Nucleic Acids Res.1月1日；29(1):207-9(2001)；MacCallum等，J.Mol.Biol.,262:732-745(1996)；和Martin等，Proc.Natl Acad.Sci.USA,86,9268–9272(1989)；Martin等，Methods Enzymol.,203:

121–153,(1991)；Pedersen等，Immunomethods,1,126,(1992)；和Rees等，在(In)Sternberg M.J.E.(编)，Protein Structure Prediction(《蛋白结构预测》)，牛津的牛津大学出版社(Oxford University Press,Oxford)，141–172 1996)。

“嵌合抗体”是一种抗体分子，其中(a)恒定区或其部分被改变、替代或交换，从而使抗原结合位点(可变区，CDR或其部分)连接至类型、效应物功能和/或种类不同或变化的恒定区，或连接至赋予所述嵌合抗体新性质的完全不同的分子(例如，酶、毒素、激素、生长因子、药物等)；或(b)可变区或其部分被具有不同或变化的抗原特异性的可变区(例如，来自不同物种的CDR和框架区)改变、替代或交换。

“人源化”抗体是保留非人抗体的活性同时在人中有较低免疫原性的抗体。例如，这可以通过保留非人CDR区并用其他人对应物替换抗体的剩余部分实现。参见例如，Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984)；Morrison和Oi,Adv.Immunol.,44:65-92(1988)；Verhoeyen等,Science,239:1534-1536(1988)；Padlan,Molec.Immun.,28:489-498(1991)；Padlan,Molec.Immun.,31(3):169-217(1994)。

抗体结合抗原上的“表位”。表位是抗原上的特异性抗体结合相互作用位点，并且可包括几个氨基酸或几个氨基酸的部分，例如，5或6个，或更多，例如20个或更多氨基酸，或这些氨基酸的部分。在一些情况中，表位包括非蛋白质组分，例如，来自糖、核酸或脂质。在一些情况中，表位是三维部分。因此，例如，在靶标是蛋白质的情况中，该表位可由连续氨基酸、或来自蛋白质的不同部分的氨基酸组成，这些部分部分通过蛋白质折叠靠近(例如，不连续表位)。这对于形成三维结构的其它类型的目标分子也是一样的。

术语“特异性(地)结合”指分子(例如，抗体或抗体片段)与其靶标的结合亲和力比非靶标化合物高至少2倍，例如，至少4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、25倍、50倍或100倍。例如，特异性结合β8的抗体通常以与非β8靶标(例如，不同的整联蛋白亚基，例如，β6)相比高至少2倍的亲和力结合β8。

相对于细胞类型的术语“结合”(例如，结合纤维化细胞、肝细胞、软骨细胞等的抗体)一般表示物质与这些细胞的纯群体中大多数细胞结合。例如，结合给定细胞类型的抗体一般结合指定细胞群中至少2/3的细胞(例如，75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)。本领域技术人员应理解，取决于测定结合的方法和/或阈值，可出现一些变化。

相较于不存在第一抗体的情况下第二抗体的结合，当第二抗体与靶标的结合在第一抗体存在的情况下可检测地减少时，本文所用第一抗体或其抗原结合部分与第二抗体或其抗原结合部分“竞争”结合靶标。在第一抗体与靶标的结合在第二抗体存在的情况下也可检测地减少的情况下，替代方法可以但不一定是这种情况。也就是，第二抗体可以抑制第一抗体与靶标的结合，而第一抗体不会抑制第二抗体与靶标的结合。然而，在各抗体可检测地抑制其他抗体预期关联表位或配体的结合的情况下(无论是相同的、更大的或更小的程度)，抗体为称为彼此之间“交叉竞争”其相应表位的结合。本发明包含竞争和交叉竞争抗体。术语“竞争物”可以适用于第一或第二抗体，其可以由本领域技术人员确定。在一些情况中，竞争物抗体(例如，第一抗体)的存在将使第二抗体与靶标的结合降低至少10％，例如，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％或更多，例如，从而在第一(竞争物)抗体存在的情况下检测不到第二抗体与靶标的结合。

术语“差异表达的”或“差异调节的”通常指相较于至少一种其他样品在一种样品中过表达(上调)或低表达(下调)的蛋白质或核酸生物标志物。在本发明的上下文中，该术语通常指相较于正常细胞，在疾病细胞上生物标志物(例如，αvβ8)的过表达。

例如，术语“过表达”或“上调”可互换地指这样的蛋白质或核酸，通常是生物标志物，其以可检测地大于对照水平的水平转录或翻译。该术语包括由于转录，转录后加工，翻译，翻译后加工，细胞定位(例如，细胞器，细胞质，细胞核，细胞表面)和RNA和蛋白质稳定性的过表达。可以使用用于检测生物标志物(mRNA(即，RT-PCR，杂交)或蛋白质(即，流式细胞术，成像，ELISA，免疫组织化学技术))的常规技术检测过表达。过表达相比正常细胞可以是10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。

术语“激动剂”、“激活剂”、“诱导物”等指相较于对照增加活性或表达的分子。激动剂是例如结合、刺激、增加、激活、增强活化、敏化或上调靶标活性的物质。表达或活性相比对照可以增加10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多。在某些示例中，活化相较于对照是1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍或更多倍。

术语“抑制剂”、“阻遏物”或“拮抗剂”或“下调物”可互换地指相较于对照导致表达或活性水平可检测降低的物质。抑制的表达或活性相比对照可以是10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更少。在某些示例中，抑制相较于对照是1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍或更多倍。

“对照”样品或值是指用作参比，通常是已知参比的样品，其用于与测试样品比较。例如，测试样品可取自测试条件，例如，在测试化合物存在下，并且与来自已知条件的样品比较，例如，在没有测试化合物的条件下(阴性对照)，或存在已知化合物的条件下(阳性对照)。对照也可代表从多个测试或结果中收集的平均值。本领域技术人员会认识到可设计对照来评价任意数量的参数。例如，可以设计对照以基于药理学数据(例如，半衰期)或治疗测量值(例如，益处和/或副作用的比较)比较治疗益处。可以针对体外应用设计对照。本领域技术人员会理解何种对照在给定的情况中有价值，并且能够基于与对照值的比较来分析数据。对照对于确定数据的显著性也具有价值。例如，如果给定参数的值在对照中是广泛变化的，则不认为测试样品中的变化是显著的。

“标记物”或“可检测部分”是可通过分光镜、光化学、生物化学、免疫化学、化学或其它物理手段检测到的组合物。例如，可用的标记物包括³²P、荧光染料、高电子密度试剂、酶(例如，ELISA中常用)、生物素、地高辛或半抗原以及做成可检测的蛋白质或其他实体，例如通过将放射性标记物整合至与靶标肽特异性反应的肽或抗体中使之可测。可以采用本领域已知的用于使抗体偶联所述标记物的任何方法，例如，使用如下文献中所述的方法：Hermanson，《生物结合技术》(Bioconjugate Techniques)1996，圣迭戈的学术出版社有限公司(Academic Press，Inc.)。

“标记的”分子(例如，核酸、蛋白质或抗体)是共价(通过接头或化学键)或非共价(通过离子、范德华力、静电或氢键)地结合标记的分子，从而可通过检测与该分子结合的标记来检测是否存在该分子。

术语“诊断”是指存在于对象中的紊乱诸如癌症或炎性病症的概率。类似地，术语“预后”是指对象中可能出现特定未来结果的相对概率。例如，预后可以指个体将显现TGFβ或αvβ8相关紊乱，具有复发，或疾病可能的严重程度(例如，症状的严重程度，功能减退的速率，存活等)的可能性。术语并不是绝对的，如医学诊断领域的任意技术人员所理解。

本文所用“活检”或“来自患者的生物样品”指获自患有或怀疑患有TGFβ或αvβ8相关紊乱的患者的样品。在一些实施方式中，样品可以是组织活检，如针活检、细针活检、外壳活检等。样品还可以是血液样品或血液部分，例如，白细胞部分、血清或血浆。样品可以包括具有病灶或疑似病灶的组织样品，虽然生物样品还可以源自其他位点，例如，疑似转移、淋巴结或来自血液的位点。在一些情况中，生物样品还可以来自邻近病灶或疑似病灶的区域。

“生物样品”可以获自患者，例如，活检，获自动物，如动物模型，或获自培养的细胞，例如，由患者取出并在培养生长用于观察的细胞系或细胞。生物样品包括组织和体液，例如，血液、血液部分、淋巴、唾液、尿液、粪便等。

术语“治疗”、“处理”和“缓解”指症状严重程度的任何减少。在处理炎性病灶的情况中，处理可以指降低例如炎性细胞因子的血液水平，活性成熟TGFβ的血液水平，疼痛、膨胀、免疫细胞的招募等。在治疗癌症的情况下，处理可以指降低例如肿瘤大小，癌细胞的数量，生长速率，代谢活性，非癌细胞的细胞死亡等。本文所用术语“处理”和“预防”并不是绝对术语。处理和预防可以指任何延缓发作，减轻症状，改善患者存活，增加存活时间或速率等。处理和预防可以是完整的(没有剩余的可检测的症状)或部分的，从而与没有本文所述处理的患者相比，症状的严重程度较低。处理的效果可以与没有接受处理的个体或个体的汇集比较，或者与处理之前的或处理期间不同时间的相同患者比较。在一些方面，相较于例如给药前的个体或没有进行处理的对照个体，疾病的严重性降低至少10％。在一些方面，疾病的严重性降低至少25％、50％、75％、80％或90％，或者在一些情况中，使用标准的诊断技术不再能检测到。

术语“有效量”、“有效剂量”或“治疗有效量”等指如上所述足以减缓疾病的治疗性物质的量。例如，对于给定的参数，治疗有效量将显示治疗效果至少5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或至少100％的增加或减少。治疗功效还可以“倍数”增加或减少表示。例如，治疗有效量可以比对照至少1.2倍、1.5倍、2倍、5倍或更多倍有效。

本文所用术语“药学上可接受的”与生理学上可接受的和药理学上可接受的作为同义词使用。药物组合物通常包含用于在存储中缓冲和保存的物质，并且可以包含缓冲液和运载体用于适当的递送，这取决于给药的途径。

术语“剂量”和“用量”在本文中可互换使用。剂量指每次给药给予个体的活性成分量。对于本发明，剂量可以指抗体或相关成分的浓度，例如，治疗剂的量或放射性标记物的用量。剂量根据多种因素将各不相同，包括给药的频率；个体的大小和耐受；病症的严重程度；副作用的风险；给药的途径；和可检测部分成像的形态(如果存在)。本领域技术人员将意识到剂量可以根据上述因素或基于治疗进展进行改进。术语“剂量形式”指药物的特定形式，并且取决于给药的途径。例如，剂量形式可以是液体，例如，用于注射的盐水溶液。

“对象”、“患者”、“个体”和类似术语可互换使用并指代，除非另外说明，哺乳动物如人和非人灵长类，以及兔、大鼠、小鼠、山羊、猪和其它哺乳动物物种。该术语并不必然表示对象已经诊断患有特定疾病，但一般指代处于医疗监督下的个体。患者可以是寻求治疗、监测、调节或改进现有治疗方案等的个体。

“炎性病症”指个体中的任何炎症，并且可以是暂时的(例如，响应病原体或过敏源的暴露)或慢性的。炎症通过炎性细胞因子表征，如IFN-γ、IL-6和TNF-α，其招募并激活巨噬细胞和其他白细胞。在一些情况中，炎症可以可以发展成慢性的、有害的病症或自身免疫病症(例如，MS，狼疮，类风湿性关节炎，克罗恩病)。炎症可以是明显局部的(例如，在感染或暴露的局部部位)或全身的(例如，动脉粥样硬化，高血压)。在一些实施方式中，本文所述抗体组合物和方法可以用于处理炎性病症。

“癌症”、“肿瘤”、“转化的(transformed)”等术语包括癌前、瘤性、转化的和癌性细胞，并且可以指实体瘤或非实体瘤(参见例如，Edge等AJCC Cancer Staging Manual(《AJCC 癌症分期手册》)(2009年第7版)；Cibas和Ducatman Cytology:Diagnostic principles and clinical correlates(《细胞学：诊断原则和临床相关》)(2009年第3版))。癌症包括良性和恶性肿瘤(异常生长)。“转化”指自发或诱导的表型变化，例如，细胞的固定，形态学改变，异常细胞生长，接触抑制和锚固减少，和/或恶性肿瘤(参见，Freshney,Culture of Animal Cells a Manual of Basic Technique(《动物细胞培养的基本技术手册》)(1994年第3版))。虽然转化可以产生于以转化病毒的感染和新基因组DNA的纳入，或外源性DNA的摄取，但是其也可以在暴露于致癌物质的同时或之后产生。

术语“癌症”可以指癌，肉瘤，腺癌，淋巴瘤，白血病，实体和淋巴癌症等。不同类型癌症的例子包括但不限于：肺癌(例如，非小细胞肺癌或NSCLC)、卵巢癌、前列腺癌、结肠直肠癌、肝癌(即，肝细胞癌(hepatocarcinoma))、肾癌(即，肾细胞癌)、膀胱癌、乳腺癌、甲状腺癌、胸膜癌(pleural cancer)、胰腺癌、子宫癌、子宫颈癌、睾丸癌、肛癌、胰腺癌、胆道癌、肠胃道类肿瘤、食管癌、胆囊癌、阑尾癌、小肠癌、胃(胃部)癌、中枢神经系统癌、头颈癌、血癌、骨肉瘤、纤维肉瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、小细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、单核细胞性靶细胞、髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病(AML)、急性髓细胞白血病(CML)和多发性骨髓瘤。在一些实施方式中，本文所述抗体组合物和方法可以用于治疗癌症。

术语“共给予”指个体的血液中同时存在两种活性物质。可以同时或连续递送共给予的活性物质。

发明内容

在一些方面中，提供了这样的抗体，其特异性结合人αvβ8并阻断TGFβ肽与αvβ8的结合，其中，所述抗体结合人αvβ8上的表位，所述人αvβ8包含出现于SEQ ID NO:393的人αv的氨基酸D148、A149、D150、G151和Y178，以及出现于SEQ ID NO:394的人β8的氨基酸H118、S170、D171、Y172、N173、L174、D175、H200和R201。

在一些实施方式中，提供了这样的抗体(任选地是嵌合的或人源化的抗体)，其包含重链CDR SEQ ID NO:562，SEQ ID NO:563和SEQ ID NO:564以及轻链CDR SEQ ID NO:569，SEQ ID NO:570和SEQ ID NO:571。

在一些实施方式中，提供的抗体(任选地是嵌合的或人源化的抗体)包含：

重链CDR SEQ ID NO:313，SEQ ID NO:314和SEQ ID NO:315；和轻链CDR SEQ IDNO:334，SEQ ID NO:335和SEQ ID NO:336；或

重链CDR SEQ ID NO:319，SEQ ID NO:320和SEQ ID NO:321；和轻链CDR SEQ IDNO:340，SEQ ID NO:341和SEQ ID NO:342；或

重链CDR SEQ ID NO:316，SEQ ID NO:317和SEQ ID NO:318；和轻链CDR SEQ IDNO:337，SEQ ID NO:338和SEQ ID NO:339；或

重链CDR SEQ ID NO:322，SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:324；和轻链CDR SEQ IDNO:343，SEQ ID NO:344和SEQ ID NO:345；或

重链CDR SEQ ID NO:322，SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:324；和轻链CDR SEQ IDNO:346，SEQ ID NO:347和SEQ ID NO:348；或

重链CDR SEQ ID NO:322，SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:324；和轻链CDR SEQ IDNO:349，SEQ ID NO:350和SEQ ID NO:351；或

重链CDR SEQ ID NO:325，SEQ ID NO:326和SEQ ID NO:327；和轻链CDR SEQ IDNO:352，SEQ ID NO:353和SEQ ID NO:354；或

重链CDR SEQ ID NO:325，SEQ ID NO:326和SEQ ID NO:327；和轻链CDR SEQ IDNO:355，SEQ ID NO:356和SEQ ID NO:357；或

重链CDR SEQ ID NO:325，SEQ ID NO:326和SEQ ID NO:327；和轻链CDR SEQ IDNO:358，SEQ ID NO:359和SEQ ID NO:360；或

重链CDR SEQ ID NO:367，SEQ ID NO:368和SEQ ID NO:369；和轻链CDR SEQ IDNO:373，SEQ ID NO:374和SEQ ID NO:375；或

重链CDR SEQ ID NO:364，SEQ ID NO:365和SEQ ID NO:366；和轻链CDR SEQ IDNO:373，SEQ ID NO:374和SEQ ID NO:375；或

重链CDR SEQ ID NO:367，SEQ ID NO:368和SEQ ID NO:369；和轻链CDR SEQ IDNO:376，SEQ ID NO:377和SEQ ID NO:378；或

重链CDR SEQ ID NO:370，SEQ ID NO:371和SEQ ID NO:372；和轻链CDR SEQ IDNO:373，SEQ ID NO:374和SEQ ID NO:375；或

重链CDR SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:332和SEQ ID NO:333；和轻链CDR SEQ IDNO:382，SEQ ID NO:383和SEQ ID NO:384；或

重链CDR SEQ ID NO:379，SEQ ID NO:380和SEQ ID NO:381；和轻链CDR SEQ IDNO:361，SEQ ID NO:362和SEQ ID NO:363；或

重链CDR SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:332和SEQ ID NO:333；和轻链CDR SEQ IDNO:361，SEQ ID NO:362和SEQ ID NO:363；或

重链CDR SEQ ID NO:508，SEQ ID NO:509和SEQ ID NO:510；和轻链CDR SEQ IDNO:529，SEQ ID NO:530和SEQ ID NO:531；或

重链CDR SEQ ID NO:511，SEQ ID NO:512和SEQ ID NO:513；和轻链CDR SEQ IDNO:532，SEQ ID NO:533和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:514，SEQ ID NO:515和SEQ ID NO:516；和轻链CDR SEQ IDNO:535，SEQ ID NO:536和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:517，SEQ ID NO:518和SEQ ID NO:519；和轻链CDR SEQ IDNO:538，SEQ ID NO:539和SEQ ID NO:540；或

重链CDR SEQ ID NO:520，SEQ ID NO:521和SEQ ID NO:522；和轻链CDR SEQ IDNO:541，SEQ ID NO:542和SEQ ID NO:543；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:544，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:526，SEQ ID NO:527和SEQ ID NO:528；和轻链CDR SEQ IDNO:547，SEQ ID NO:548和SEQ ID NO:549；或

本文所述其他抗体。

在一些实施方式中，抗体连接可检测标记物。

在一些实施方式中，抗体还包含分别为SEQ ID NO:558，SEQ ID NO:559，SEQ IDNO:560和SEQ ID NO:561的重链框架序列FR1、FR2、FR3和FR4，以及分别为SEQ ID NO:565，SEQ ID NO:566，SEQ ID NO:567和SEQ ID NO:568的轻链框架序列FR1、FR2、FR3和FR4。

在一些实施方式中，抗体还包含分别为SEQ ID NO:550，SEQ ID NO:551，SEQ IDNO:552和SEQ ID NO:553的重链框架序列FR1、FR2、FR3和FR4，以及分别为SEQ ID NO:554，SEQ ID NO:555，SEQ ID NO:556和SEQ ID NO:557的轻链框架序列FR1、FR2、FR3和FR4。

在一些实施方式中，所述抗体是人源化的。在一些实施方式中，人源化的抗体包含SEQ ID NO:395，SEQ ID NO:403，SEQ ID NO:411；SEQ ID NO:419，SEQ ID NO:427，SEQ IDNO:443，SEQ ID NO:451，SEQ ID NO:459，SEQ ID NO:467；SEQ ID NO:475，SEQ ID NO:484或SEQ ID NO:500。

还提供了一种抗体，其结合αvβ8和αvβ6并包含含有序列RGDL的轻链CDR1。在一些实施方式中，抗体包含可变区，其包含重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ IDNO:525；和轻链CDR SEQ ID NO:544，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或重链CDR SEQ IDNO:526，SEQ ID NO:527和SEQ ID NO:528；和轻链CDR SEQ ID NO:547，SEQ ID NO:548和SEQ ID NO:549。

在一些实施方式中，所述抗体是人源化的。

在一些实施方式中，抗体连接可检测标记物。

还提供了一种特异性结合人ανβ8并阻断TGFβ肽与ανβ8结合的抗体，其中该抗体结合人β8的特异性决定环(SDL)。在一些实施方式中，抗体进一步结合人αv-头部结构域、人β8的α1螺旋或人β8的α2螺旋中的1个、2个或所有3个。在一些实施方式中，该抗体是人源化的或嵌合的。在一些实施方式中，抗体连接可检测标记物。

还提供了药物组合物，其包含药物上可接受的赋形剂中如上所述或本文其他地方所述的抗体。

还提供了一种增强人个体对病毒感染的免疫应答的方法。在一些实施方式中，该方法包括向个体给予足量的如上所述或本文其他地方所述的抗体，从而增强对病毒感染的免疫应答。

在一些实施方式中，病毒感染是肝炎感染。在一些实施方式中，病毒感染是乙肝感染。

还提供了一种增强人个体对病毒感染的免疫应答的方法，该方法包括向所述个体给予足量的所述抗体，其中所述抗体特异性结合人αvβ8并阻断TGFβ肽与αvβ8的结合或通过结合TGFβ人αvβ8阻断αvβ8的活化，从而增强对所述病毒感染的免疫应答。

还提供了一种增强人个体对癌症的免疫应答的方法，该方法包括向所述个体给予足量的如上所述或本文其他地方所述的抗体，从而增强对癌症的免疫应答。

在一些实施方式中，癌症是肺癌。在一些实施方式中，所述癌症是转移性癌症。在一些实施方式中，所述癌症是原发性癌症。

还提供了一种增强人个体对幽门螺杆菌(H.pyroli)的免疫应答的方法，该方法包括向所述个体给予足量的如上所述或本文其他地方所述的抗体，从而增强对幽门螺杆菌的免疫应答。

在一些实施方式中，所述人个体患有肽溃疡、胃癌或MALT淋巴瘤。

还提供了一种抗体，其特异性结合人αvβ8并且其包含人重链CDR SEQ ID NO:299，SEQ ID NO:301和SEQ ID NO:303；和轻链CDR SEQ ID NO:307，SEQ ID NO:309和SEQ IDNO:311。或者，可以使用具有图53所示重链可变区或重链CDR以及来自图54所示对应序列的轻链可变区或轻链CDR的任何抗体。

在一些实施方式中，抗体连接可检测标记物。

还提供了一种在样品中检测人存在、不存在或数量的方法，该方法包括将样品接触这样的抗体，所述抗体特异性结合人αvβ8并且包含人重链CDR SEQ ID NO:299，SEQ IDNO:301和SEQ ID NO:303；和轻链CDR SEQ ID NO:307，SEQ ID NO:309和SEQ ID NO:311，并且对抗体与样品的结合进行检测或定量。

在一些实施方式中，样品是福尔马林固定的样品。

附图说明

图1显示了用于构建复合抗体C6D4的克隆的重链氨基酸序列。B13C415-8：所有序列(SEQ ID NO:1)，框架1(SEQ ID NO:2)，CDR1(SEQ ID NO:3)，框架2(SEQ ID NO:4)，CDR2(SEQ ID NO:5)，框架3(SEQ ID NO:6)，CRD3(SEQ ID NO:7)和框架4(SEQ ID NO:8)；B13C415-10：所有序列(SEQ ID NO:9)，框架1(SEQ ID NO:10)，CDR1(SEQ ID NO:11)，框架2(SEQID NO:12)，CDR2(SEQ ID NO:13)，框架3(SEQ ID NO:14)，CRD3(SEQ ID NO:15)和框架4(SEQ ID NO:16)；B13H3.2：所有序列(SEQ ID NO:17)，框架1(SEQ ID NO:18)，CDR1(SEQ IDNO:19)，框架2(SEQ ID NO:20)，CDR2(SEQ ID NO:21)，框架3(SEQ ID NO:22)，CRD3(SEQ IDNO:23)和框架4(SEQ ID NO:24)；B13C1231015：所有序列(SEQ ID NO:25)，框架1(SEQ IDNO:26)，CDR1(SEQ ID NO:27)，框架2(SEQ ID NO:28)，CDR2(SEQ ID NO:29)，框架3(SEQ IDNO:30)，CRD3(SEQ ID NO:31)和框架4(SEQ ID NO:32)；B15B11Vh：所有序列(SEQ ID NO:33)，框架1(SEQ ID NO:34)，CDR1(SEQ ID NO:35)，框架2(SEQ ID NO:36)，CDR2(SEQ IDNO:37)，框架3(SEQ ID NO:38)，CRD3(SEQ ID NO:39)和框架4(SEQ ID NO:40)；B2B2 15-9：所有序列(SEQ ID NO:41)，框架1(SEQ ID NO:42)，CDR1(SEQ ID NO:43)，框架2(SEQ IDNO:44)，CDR2(SEQ ID NO:45)，框架3(SEQ ID NO:46)，CRD3(SEQ ID NO:47)和框架4(SEQID NO:48)；R11D12715.3：所有序列(SEQ ID NO:49)，框架1(SEQ ID NO:50)，CDR1(SEQ IDNO:51)，框架2(SEQ ID NO:52)，CDR2(SEQ ID NO:53)，框架3(SEQ ID NO:54)，CRD3(SEQ IDNO:55)和框架4(SEQ ID NO:56)；RSDLVH-1：所有序列(SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:65)，框架1(SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:66)，CDR1(SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:67)，框架2(SEQ IDNO:60和SEQ ID NO:68)，CDR2(SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:69)，框架3(SEQ ID NO:62和SEQID NO:70)，CRD3(SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:71)和框架4(SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:72)；RSDLVH-3：所有序列(SEQ ID NO:73)，框架1(SEQ ID NO:74)，CDR1(SEQ ID NO:75)，框架2(SEQ ID NO:76)，CDR2(SEQ ID NO:77)，框架3(SEQ ID NO:78)，CRD3(SEQ ID NO:79)和框架4(SEQ ID NO:80)；RSDLVH-16：所有序列(SEQ ID NO:81)，框架1(SEQ ID NO:82)，CDR1(SEQ ID NO:83)，框架2(SEQ ID NO:84)，CDR2(SEQ ID NO:85)，框架3(SEQ ID NO:86)，CRD3(SEQ ID NO:87)和框架4(SEQ ID NO:88)；29和44：所有序列(SEQ ID NO:89)，框架1(SEQ ID NO:90)，CDR1(SEQ ID NO:91)，框架2(SEQ ID NO:92)，CDR2(SEQ ID NO:93)，框架3(SEQ ID NO:94)，CRD3(SEQ ID NO:95)和框架4(SEQ ID NO:96)；A1＝B4＝F9：所有序列(SEQ ID NO:97)，框架1(SEQ ID NO:98)，CDR1(SEQ ID NO:99)，框架2(SEQ ID NO:100)，CDR2(SEQ ID NO:101)，框架3(SEQ ID NO:102)，CRD3(SEQ ID NO:103)和框架4(SEQ IDNO:104)；A5＝C6：所有序列(SEQ ID NO:105)，框架1(SEQ ID NO:106)，CDR1(SEQ ID NO:107)，框架2(SEQ ID NO:108)，CDR2(SEQ ID NO:109)，框架3(SEQ ID NO:110)，CRD3(SEQID NO:111)和框架4(SEQ ID NO:112)；D4＝E6：所有序列(SEQ ID NO:113)，框架1(SEQ IDNO:114)，CDR1(SEQ ID NO:115)，框架2(SEQ ID NO:116)，CDR2(SEQ ID NO:117)，框架3(SEQ ID NO:118)，CRD3(SEQ ID NO:119)和框架4(SEQ ID NO:120)；和C6D4：所有序列(SEQID NO:121)，框架1(SEQ ID NO:122)，CDR1(SEQ ID NO:123)，框架2(SEQ ID NO:124)，CDR2(SEQ ID NO:125)，框架3(SEQ ID NO:126)，CRD3(SEQ ID NO:127)和框架4(SEQ ID NO:128)。

图2显示了用于构建复合抗体C6D4的克隆的轻链氨基酸序列。B2B235-20：所有序列(SEQ ID NO:129)，框架1(SEQ ID NO:130)，CDR1(SEQ ID NO:131)，框架2(SEQ ID NO:132)，CDR2(SEQ ID NO:133)，框架3(SEQ ID NO:134)，CRD3(SEQ ID NO:135)和框架4(SEQID NO:136)；B2B2 35-26：所有序列(SEQ ID NO:137)，框架1(SEQ ID NO:138)，CDR1(SEQID NO:139)，框架2(SEQ ID NO:140)，CDR2(SEQ ID NO:141)，框架3(SEQ ID NO:142)，CRD3(SEQ ID NO:143)和框架4(SEQ ID NO:144)；B15B11vk34-26：所有序列(SEQ ID NO:145)，框架1(SEQ ID NO:146)，CDR1(SEQ ID NO:147)，框架2(SEQ ID NO:148)，CDR2(SEQ ID NO:149)，框架3(SEQ ID NO:150)，CRD3(SEQ ID NO:151)和框架4(SEQ ID NO:152)；B15B11vk33-24：所有序列(SEQ ID NO:153)，框架1(SEQ ID NO:154)，CDR1(SEQ ID NO:155)，框架2(SEQ ID NO:156)，CDR2(SEQ ID NO:157)，框架3(SEQ ID NO:158)，CRD3(SEQID NO:159)和框架4(SEQ ID NO:160)；B15B11vk35-26：所有序列(SEQ ID NO:161)，框架1(SEQ ID NO:162)，CDR1(SEQ ID NO:163)，框架2(SEQ ID NO:164)，CDR2(SEQ ID NO:165)，框架3(SEQ ID NO:166)，CRD3(SEQ ID NO:167)和框架4(SEQ ID NO:168)；B13C12134-25：所有序列(SEQ ID NO:169)，框架1(SEQ ID NO:170)，CDR1(SEQ ID NO:171)，框架2(SEQ IDNO:172)，CDR2(SEQ ID NO:173)，框架3(SEQ ID NO:174)，CRD3(SEQ ID NO:175)和框架4(SEQ ID NO:176)；B13C12133-26：所有序列(SEQ ID NO:177)，框架1(SEQ ID NO:178)，CDR1(SEQ ID NO:179)，框架2(SEQ ID NO:180)，CDR2(SEQ ID NO:181)，框架3(SEQ ID NO:182)，CRD3(SEQ ID NO:183)和框架4(SEQ ID NO:184)；B13C4 35-20：所有序列(SEQ IDNO:185)，框架1(SEQ ID NO:186)，CDR1(SEQ ID NO:187)，框架2(SEQ ID NO:188)，CDR2(SEQ ID NO:189)，框架3(SEQ ID NO:190)，CRD3(SEQ ID NO:191)和框架4(SEQ ID NO:192)；B15B11vk35-20：所有序列(SEQ ID NO:193)，框架1(SEQ ID NO:194)，CDR1(SEQ IDNO:195)，框架2(SEQ ID NO:196)，CDR2(SEQ ID NO:197)，框架3(SEQ ID NO:198)，CRD3(SEQ ID NO:199)和框架4(SEQ ID NO:200)；B13C12335-25：所有序列(SEQ ID NO:201)，框架1(SEQ ID NO:202)，CDR1(SEQ ID NO:203)，框架2(SEQ ID NO:204)，CDR2(SEQ ID NO:205)，框架3(SEQ ID NO:206)，CRD3(SEQ ID NO:207)和框架4(SEQ ID NO:208)；B13C1233520：所有序列(SEQ ID NO:209)，框架1(SEQ ID NO:210)，CDR1(SEQ ID NO:211)，框架2(SEQ ID NO:212)，CDR2(SEQ ID NO:213)，框架3(SEQ ID NO:214)，CRD3(SEQ ID NO:215)和框架4(SEQ ID NO:216)；RSDLVK-1：所有序列(SEQ ID NO:217)，框架1(SEQ ID NO:218)，CDR1(SEQ ID NO:219)，框架2(SEQ ID NO:220)，CDR2(SEQ ID NO:221)，框架3(SEQID NO:222)，CRD3(SEQ ID NO:223)和框架4(SEQ ID NO:224)；RSDLVK-6：所有序列(SEQ IDNO:225)，框架1(SEQ ID NO:226)，CDR1(SEQ ID NO:227)，框架2(SEQ ID NO:228)，CDR2(SEQ ID NO:229)，框架3(SEQ ID NO:230)，CRD3(SEQ ID NO:231)和框架4(SEQ ID NO:232)；RSDLVK-10：所有序列(SEQ ID NO:233)，框架1(SEQ ID NO:234)，CDR1(SEQ ID NO:235)，框架2(SEQ ID NO:236)，CDR2(SEQ ID NO:237)，框架3(SEQ ID NO:238)，CRD3(SEQID NO:239)和框架4(SEQ ID NO:240)；RSDLVK-13：所有序列(SEQ ID NO:241)，框架1(SEQID NO:242)，CDR1(SEQ ID NO:243)，框架2(SEQ ID NO:244)，CDR2(SEQ ID NO:245)，框架3(SEQ ID NO:246)，CRD3(SEQ ID NO:247)和框架4(SEQ ID NO:248)；29：所有序列(SEQ IDNO:249)，框架1(SEQ ID NO:250)，CDR1(SEQ ID NO:251)，框架2(SEQ ID NO:252)，CDR2(SEQ ID NO:253)，框架3(SEQ ID NO:254)，CRD3(SEQ ID NO:255)和框架4(SEQ ID NO:256)；44：所有序列(SEQ ID NO:257)，框架1(SEQ ID NO:258)，CDR1(SEQ ID NO:259)，框架2(SEQ ID NO:260)，CDR2(SEQ ID NO:261)，框架3(SEQ ID NO:262)，CRD3(SEQ ID NO:263)和框架4(SEQ ID NO:264)；A1＝B4＝F9：所有序列(SEQ ID NO:265)，框架1(SEQ ID NO:266)，CDR1(SEQ ID NO:267)，框架2(SEQ ID NO:268)，CDR2(SEQ ID NO:269)，框架3(SEQID NO:270)，CRD3(SEQ ID NO:271)和框架4(SEQ ID NO:272)；A5＝C6：所有序列(SEQ IDNO:273)，框架1(SEQ ID NO:274)，CDR1(SEQ ID NO:275)，框架2(SEQ ID NO:276)，CDR2(SEQ ID NO:277)，框架3(SEQ ID NO:278)，CRD3(SEQ ID NO:279)和框架4(SEQ ID NO:280)；D4＝E6：所有序列(SEQ ID NO:281)，框架1(SEQ ID NO:282)，CDR1(SEQ ID NO:283)，框架2(SEQ ID NO:284)，CDR2(SEQ ID NO:285)，框架3(SEQ ID NO:286)，CRD3(SEQ ID NO:287)和框架4(SEQ ID NO:288)；和C6D4：所有序列(SEQ ID NO:289)，框架1(SEQ ID NO:290)，CDR1(SEQ ID NO:291)，框架2(SEQ ID NO:292)，CDR2(SEQ ID NO:293)，框架3(SEQID NO:294)，CRD3(SEQ ID NO:295)和框架4(SEQ ID NO:296)。

图3是不同浓度的变构抑制剂B5和复合抗体C6D4的转化生长因子-β(TGF-β)结合抑制百分比的图表。

图4显示了哺乳动物中表位的保守性，指示可以用于多种临床前动物模型并且具有广泛的实用性(包括在兽医应用中)的抗体。人αv(SEQ ID NO:591)；黑猩猩αv(SEQ IDNO:592)；恒河猴(Rhesus)αv(SEQ ID NO:593)；猕猴(cyno)αv(SEQ ID NO:594)；牛αv(SEQID NO:595)；猪αv(SEQ ID NO:596)；马αv(SEQ ID NO:597)；小鼠αv(SEQ ID NO:598)；大鼠αv(SEQ ID NO:599)；犰狳αv(SEQ ID NO:600)；鸭嘴兽αv(SEQ ID NO:601)；人β8(SEQ IDNO:602)；黑猩猩β8(SEQ ID NO:603)；恒河猴β8(SEQ ID NO:604)；猕猴β8(SEQ ID NO:605)；牛β8(SEQ ID NO:606)；猪β8(SEQ ID NO:607)；马β8(SEQ ID NO:608)；小鼠β8(SEQID NO:609)；大鼠β8(SEQ ID NO:610)；犰狳β8(SEQ ID NO:611)；和鸭嘴兽β8(SEQ ID NO:612)。

图5显示了整联蛋白αV(SEQ ID NO:394)和β8(SEQ ID NO:395)序列。C6D4的表位为粗体下划线斜体。

图6显示了cryoEM结果，着重显示了C6D4和β8的(SDL)环、β8的α1和α2螺旋和αv的头部之间的相互作用。

图7显示了结合后直接与C6D4相互作用的整联蛋白αvβ8的αv头部和β8α1和α2螺旋和SDL的残基。整联蛋白αv的头部序列是FNLDVDSPAEYSGPEGSYFGFAVDFFVPSASSRMFLLVGAPKANTTQPGIVEGGQVLKCDWSSTRRCQPIEFDATGNRDYAKDDPLEFKSHQWFGASVRSKQDKILACAPLYHWRTEMKQEREPVGTCFLQDGTKTVEYAPCRSQDIDADGQGFCQGGFSIDFTKADRVLLGGPGSFYWQGQLISDQVAEIVSKYDPNVYSIKYNNQLATRTAQAIFDDSYLGYSVAVGDFNGDGIDDFVSGVPRAARTLGMVYIYDGKNMSSLYNFTGEQMAAYFGFSVAATDINGDDYADVFIGAPLFMDRGSDGKLQEVGQVSVSLQRASGDFQTTKLNGFEVFARFGSAIAPLGDLDQDGFNDIAIAAPYGGEDKKGIVYIFNGRSTGLNAVPSQILEGQWAARSMPPSFGYSMKGATDIDKNGYPDLIVGAFGVDRAILYRARP(SEQ ID NO:623)。序列C6D4 Vh CDR1(SEQ ID NO:613)；C6D4 Vh CDR2(SEQ ID NO:614)；C6D4 Vh CDR3(SEQ ID NO:615)；C6D4 Vk CDR1(SEQ ID NO:616)；C6D4Vk CDR2(SEQ ID NO:617)；C6D4 Vk CDR3(SEQ ID NO:618)；β8,α1螺旋(SEQ ID NO:619)；β8,SDL(SEQ ID NO:620)；β8,α2螺旋(SEQ ID NO:621)；和αV,β-螺旋桨式结构域叶片(propeller domain blade)W3(SEQ ID NO:622)。

图8显示了相对于整联蛋白与潜伏TGF-β的关联，C6D4表位与整联蛋白αvβ8的配体结合口袋的重叠。

图9是以Lewis肺癌(LLC)细胞注射的小鼠的存活百分比的图表。去除原发性肿瘤，并以C6D4鼠IgG2a或SV5同种型对照以每周一次7mg/kg的剂量处理对象。在该模型中，在由于原发性肿瘤的复发或由于转移而导致减少20％体重后，将小鼠安乐死。

图10是作为C6D4处理的结果从慢性感染小鼠模型清除的HepB表面抗原(HBSag)的表格。

图11A-B显示了用于构建工程改造的抗体4F1F9的克隆的氨基酸序列，所述工程改造的抗体4F1F9是用于在人组织中检测αvβ8的抗体。图11A序列-4F1：所有序列(SEQ ID NO:624)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:628)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQID NO:634)，框架3(SEQ ID NO:637)，CDR3(SEQ ID NO:651)，框架4(SEQ ID NO:655)，6B9：所有序列(SEQ ID NO:656)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ IDNO:632)，CDR2(SEQ ID NO:635)，框架3(SEQ ID NO:638)，CDR3(SEQ ID NO:652)，框架4(SEQ ID NO:655)，6B9.1：所有序列(SEQ ID NO:657)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:638)，CDR3(SEQ ID NO:653)，框架4(SEQ ID NO:655)，A1：所有序列(SEQ ID NO:658)，框架1(SEQ IDNO:626)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:639)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，A2：所有序列(SEQ IDNO:659)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:640)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，A8：所有序列(SEQ ID NO:660)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:641)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，A11：所有序列(SEQ ID NO:661)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:630)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:638)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，B1：所有序列(SEQ ID NO:662)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:642)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，B3：所有序列(SEQ ID NO:663)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:643)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQID NO:655)，C4＝F10：所有序列(SEQ ID NO:664)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ IDNO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:644)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，C7＝D1：所有序列(SEQ ID NO:665)，框架1(SEQID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:644)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，D3＝F1：所有序列(SEQID NO:666)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:645)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，D10＝E5：所有序列(SEQ ID NO:667)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:646)，CDR3(SEQID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，G4：所有序列(SEQ ID NO:668)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQID NO:647)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，C4：所有序列(SEQ ID NO:669)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:650)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，D10：所有序列(SEQ ID NO:670)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ IDNO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:646)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，4F1A11：所有序列(SEQ ID NO:671)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:650)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，4F1E1：所有序列(SEQ ID NO:672)，框架1(SEQID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:631)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:638)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，4F1G3：所有序列(SEQID NO:673)，框架1(SEQ 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图12显示了C6D4表位如何与整联蛋白αVβ8的配体结合口袋直接重叠，防止整联蛋白αVβ8与L-TGFβ关联并因此活化L-TGFβ。通过负染色电子显微镜观测整联蛋白复合物的代表性类别平均值。

图13显示了使用CHIMERA和MODELLER以基于β3的β8模型如何由αVβ3的晶体结构(PDB ID:3IJE)产生复合物的模型(Yang等,J Struct Biol.2012年9月；179(3):269-78)。在COOT中的刚性体中完成模型精细化至冷冻电子显微镜图(Emsley P,等,ActaCrystallographica Section D-Biological Crystallography.2010,66:486-501)，然后在PHENIX中完全精细化(Adams等,Acta Cryst.2010；D66:213-221)。

图14显示了C6D4 Vk CDR1(SEQ ID NO:616)与整联蛋白αV(SEQ ID NO:622，位置46-52和75-79)的相互作用：αVβ8/C6D4 Fab复合物的模型。以棍表示相互作用的残基。虚线表示介于2.5至之间的原子间距离，表明潜在的相互作用。

图15显示了C6D4与整联蛋白β8的SDL区的相互作用：αVβ8/C6D4 Fab复合物的模型。以棍表示相互作用的残基。虚线表示介于2.5至之间的原子间距离，表明潜在的相互作用。C6D4 Vh CDR1(SEQ ID NO:707)，C6D4 Vh CDR3(SEQ ID NO:615)，β8，SDL(SEQ IDNO:620)，C6D4 Vk CDR1(SEQ ID NO:616)，C6D4 Vk CDR2(SEQ ID NO:708)和C6D4 Vk CDR3(SEQ ID NO:618)。

图16显示了C6D4 Vk CDR2(SEQ ID NO:617)与整联蛋白β8的α1螺旋(SEQ ID NO:619)的相互作用：αVβ8/C6D4 Fab复合物的模型。以棍表示相互作用的残基。虚线表示介于2.5至之间的原子间距离，表明潜在的相互作用。

图17显示了C6D4 Vk CDR1(SEQ ID NO:613)与整联蛋白β8的α2螺旋(SEQ ID NO:621)的相互作用：αVβ8/C6D4 Fab复合物的模型。以棍表示相互作用的残基。虚线表示介于2.5至之间的原子间距离，表明潜在的相互作用。

图18显示了C6D4阻断L-TGFβ与整联蛋白β8的配体结合口袋的接触，并且与整联蛋白αVβ8结合的C6D4与L-TGFβ的RGDLGRLKK环的位置(SEQ ID NO:712)直接冲突。示出了αVβ8/C6D4 Fab复合物的表面。表面是αVβ8，而卡通图是C6D4。在棍中叠加残基RGDLGRLKK(SEQID NO:712)，其来自与整联蛋白αVβ6(PDB 4UM9)结合时存在的L-TGFβ的整联蛋白结合环((4)对潜伏TGF-β具有特异性的整联蛋白β-亚基的结构决定簇。Dong X,等.Nat.Struct.Mol.Biol.2014年12月；21(12):1091-6)。

图19显示了C6D4是分泌的αvβ8与L-TGF-b3肽结合的有效的抑制剂。

图20显示了C6D4是细胞αvβ8介导的对L-TGF-b3肽的细胞粘附的有效的抑制剂。

图21显示了在来自感染幽门螺旋杆菌(H.Pylori)(A、B)或显示正常组织学(C、D)的患者的福尔马林固定的石蜡包埋的切片中的整联蛋白b8亚基免疫检测。切片用克隆F9以兔IgG形式染色，并使用TSA信号放大(帕金埃尔默公司(Perkin Elmer))检测。棕色沉淀物表示阳性染色，并用苏木精对核进行复染。箭头指示具有染色的隐窝上皮细胞的阳性隐窝的示例。结果显示b8整联蛋白亚基在患有幽门螺旋杆菌的患者的胃中的表达增加。

图22显示了在来自感染幽门螺旋杆菌、显示正常组织学或轻度慢性炎症的患者的福尔马林固定的石蜡包埋的切片中的整联蛋白b8亚基免疫检测的定量。切片用克隆F9以兔IgG形式染色，并使用TSA信号放大(帕金埃尔默公司(Perkin Elmer))检测。设计下述评分系统通以捕获隐窝上皮细胞染色，0＝无染色，1＝只是对照+，2＝分散的，3＝弥漫和基质染色，0＝无染色，1＝只是对照+，2＝分散的，3＝弥漫。显示的是组合的评分，并且示出n。ANOVA和西达克(Sidak)多重比较检验。**p<0.01,*p<0.05。

图23显示了碱性磷酸酶(AP)αvβ3、αvβ6和αvβ8融合蛋白与CagL、源自TGFB3序列DDHGRGDLGRLK(SEQ ID NO:713)的MAP RGD肽、纤连蛋白、源自TGFB2序列的玻连蛋白或MAP肽的结合试验，所述TGFB2序列对应包含TGFB1和TGFB3序列的RGD。所有蛋白质以5ug/ml涂覆于ELISA板上，并且AP受体的输入标准化至AP活性。显示的结果表示高于涂覆BSA的孔的信号。结果显示了，αvβ8(和αvβ6)结合CagL以及TGFb3肽，而αvβ3结合FN和VN，较差地结合TGFB3并且完全不结合CagL。αvβ3和αvβ8显示了没有结合，并且αvβ6显示了与对照TGFb2肽非常弱的结合。显示的是S.E.M。

图24显示了碱性磷酸酶(AP)αvβ8融合蛋白与CagL在C6D4，变构抑制剂，B5，或针对与B5相同表位的非阻断抗体，克隆68存在的情况下的结合试验，克隆68作为阴性对照。CagL以5ug/ml涂覆于ELISA板上。显示的结果表示高于涂覆BSA的孔的信号。结果显示，αvβ8与CagL的结合被C6D4完全抑制并且被B5部分抑制。

图25显示了稳定表达人ITGAV和ITGB8的Cho Lec细胞与指定浓度下的重组CagL蛋白(马里兰州马里兰大学Eric.Sundberg的馈赠)的粘附试验。与用多种抗原呈递肽涂覆的孔比较结合，所述多种抗原呈递肽包含源自TGFB3序列DDHGRGDLGRLK(SEQ ID NO:713)的RGD肽，其对应人TGF-b3的aa257-268(NP_003230)。在RT下使50x10^3个细胞与孔粘附30分钟。未结合的细胞用PBS洗去。结果表示为用结晶紫染色后检测到的染色细胞(OD590)。显示的结果表示高于模拟转染的Cho Lec细胞与涂覆CagL或TGFB3的孔(5μg.ml)的标称结合的信号。结果显示，αvβ8介导对CagL以及对TGFb3肽的细胞粘附。显示的是S.E.M。显著性通过ANOVA和西达克多重比较检验确定，****＝p<0.00001。

图26显示了稳定表达人ITGAV和ITGB8的Cho Lec细胞与TGF-b3 RGD MAP肽(DDHGRGDLGRLK(SEQ ID NO:713))(涂覆浓度5ug/ml)的粘附试验。将50x10^³个细胞用cagL以指定浓度的CagL相对PBS对照在RT下预孵育15分钟，然后在RT下使细胞与孔粘附30分钟。未结合的细胞用PBS洗去。结果表示为用结晶紫染色后检测到的染色细胞(OD590)。显示的结果表示高于模拟转染的Cho Lec细胞与涂覆TGFB3的孔(5ug/ml)的标称结合的信号。结果显示，αvβ8介导对CagL的细胞粘附是RGD依赖性的。显示的是S.E.M.N＝3。

图27显示了稳定表达人ITGAV和ITGB8的修饰的中华仓鼠卵巢细胞(Cho Lec)细胞与5ug/ml涂覆浓度下的重组CagL蛋白质的粘附试验，50x10^3个细胞与Mab在指定浓度下混合，并在RT下使其与孔粘附30分钟。B5之前被描述为与TGF-B的αvβ8结合的变构抑制剂，并且L230之前被描述为抗-av阻断抗体。未结合的细胞用PBS洗去。结果表示为用结晶紫染色后检测到的染色细胞(OD590)。显示的结果表示相对于对照结合的％抑制，所述对照结合由以相同浓度的同种型对照抗体(抗-SV5)存在的情况下的结合定义。显示的是S.E.M。显著性通过ANOVA和西达克多重比较检验确定，****＝p<0.00001,***p<0.001,*<0.05。结果显示了C6D4比B5或L230更高效地阻断αvβ8介导对CagL的细胞粘附。

图28显示了使用LLC肿瘤细胞系用于评估肺转移的小鼠模型，所述LLC肿瘤细胞系不表达整联蛋白αvβ6或αvβ8。LLC肿瘤细胞系与宿主C57B/6株是同系的。LLC.1细胞系已经通过小鼠传代一次并且由肺转移再生。2周后，皮下注射的肿瘤(1x10⁶)LLC.1细胞形成大的肿瘤结节(约1cm)。手术去除肿瘤，并且当动物体重减少20％时将它们安乐死。

图29A和29B使用图28中所示的LLC肿瘤细胞系模型，显示了C6D4对小鼠存活的影响。存活曲线(图29A)表示因为局部复发或体重减少而安乐死的小鼠。图29B显示了当由于局部复发而去除的动物被排除时的存活曲线。尸体解剖时，体重减少20％的动物在其肺中全部具有转移性植入物。因此，在存活的动物中，已经注射C6D4抗体长达90天。进行该实验11次，每次提供相似的结果(数据未显示)。此外，尸体剖检在检测的组织中并未揭示任何不正常的炎症反应。

图30A-F显示了使用图28中所示的LLC肿瘤细胞系模型，C6D4对肿瘤生长和肿瘤免疫应答的影响。这里，接受同种型对照(B5，其仅与人b8反应，而不与小鼠b8反应)或C6D4(其与小鼠和人交叉反应)两次注射的小鼠中切除的LLC.1原发性肿瘤，记录原发性肿瘤重量，测量尺寸，并且酶促分解肿瘤并且分离并计数免疫细胞。在肿瘤浸润免疫细胞上进行流式细胞术，并且使用Percoll梯度离心从肿瘤细胞分离肿瘤浸润免疫细胞。此处显示的是3个实验中的1个，其各自提供相似的结果。在各组中，n等于或大于10。

图31显示了使用B16-F10肿瘤细胞用于评估转移性疾病的小鼠模型。B16-F10高转移性肿瘤细胞系与宿主C57B/6株是同系的。该细胞系不表达整联蛋白αvβ6或αvβ8。用鼠itgb8转染B16-F10，并在选择和分选后以高水平表达表面αvβ8。当经由尾静脉静脉内注射时，在第14天前出现可见的肺转移。

图32A-H是用抗-b8(图32E-H)或抗-PD-L1(E1L3N，细胞信号公司(Cellsignaling))图32A-D染色的肺腺癌样品。这里，观察到β8表达与PD-L1表达负相关。

图33A显示了以PD-L1或β8染色的图32(n＝29)的肺腺癌样品的分布。图33B在所有情况中显示，至少30％的以β8或PD-L1染色的被分组在一起，并且染色比例是关联的。

图34A-C显示了相较于同种型样品，B16肺转移的抑制。图34A是前部和后部视图中代表性肺的图像，并且对可见的肺转移进行计数，并且评估与转移相关的全部肺表面区域。图34B显示了C6D4对肺转移总数量的影响。B16-F10高转移性肿瘤细胞系与宿主C57B/6株是同系的，并且不表达整联蛋白αvβ6或αvβ8。用鼠itgb8转染B16-F10肿瘤细胞。在G418中选择以及两轮分选后，将高表达αvβ8细胞的汇集经由尾静脉静脉内注射。在第0天、第7天和第14天以7mg/kg三次注射(i.p.)同种型对照(SV5)或C6D4后，在第18天将小鼠安乐死。图34C显示了通过转移性黑色素瘤占肺总表面积的百分比测量的C6D4的影响。

图35A-H显示了C6D4作用巨噬细胞极化成促炎症表型。通过肿瘤相关巨噬细胞和树突细胞增加MHCII表达在对肿瘤抗原的宿主免疫应答中十分重要。

图36A-C显示了C6D4通过肿瘤相关树突细胞增加MHCII表达。通过抗原呈递细胞增加MHCII将增加抗原呈递。

图37A-G是显示整联蛋白介导的小鼠Treg细胞的分化的散点图。肿瘤相关CD4+调节性T细胞在抑制宿主免疫应答和帮助肿瘤逃逸免疫监督中起重要作用。Treg的分化需要TGF-β。认为通过诸如整联蛋白αvβ8介导的活化的机制提供的TGF-β对于Treg分化和功能十分重要。这里，我们将各种整联蛋白的胞外域(2mg/ml)固定在ELISA板上(与抗-CD3共涂覆)，并且将幼稚小鼠脾CD4+细胞与hIL-2和视黄酸接种。5天后，将细胞固定、透性化并用抗-CD4和FoxP3染色。作为阳性和阴性对照，在rTGF-b存在(+)或不存在(-)的情况下，将细胞接种在仅有抗-CD3(无整联蛋白)的孔上。表达FoxP3的细胞的比例在各散点图(Q2)中显示。

图38A-D显示了C6D4衍生物(称为“RGD3”或“CD64-RGD3”)的结构代表，所述C6D4衍生物与αvβ6和αvβ8交叉反应，但是不与αvβ1、αvβ3或αvβ5交叉反应。图38A显示了与源自cryoEM图的αvβ8形成复合物的C6D4-RGD3(金色)的特写视图。绿色是av亚基，而蓝色是β8亚基。以红色示出的是源自与整联蛋白αvβ6形成复合物的潜伏-GTFB1的结构的LTGF-B1肽。(αvβ6(SEQ ID NO:709)，αIIbβ3(SEQ ID NO:710(GRGDSP)和SEQ ID NO:711(AKQRGDV)。图38B显示了hTGFβ1-3的序列比对，以及TGFβ1(SEQ ID NO:714)和TGFβ3(SEQ ID NO:715)中RGD结构域的位置。TGFβ2(SEQ ID NO:716)没有RGD序列。图38C显示了3个突变D4 Vk CDR1环的序列，所述突变D4 Vk CDR1环包含本文所研发的hTGFB3 RGD序列(以红色表示)的部分(C6D4 vk(SEQ ID NO:717)；C6D4-RDG1(SEQ ID NO:718)；C6D4-RDG2(SEQ ID NO:719)和C6D4-RDG3(SEQ ID NO:720)。图38D显示了D4环(以金色示出)以及与整联蛋白αvβ6形成复合物的TGFβ1的结合的RGD序列的位置的冲突的放大图像。

图39显示了以RGD1、RGD2或RGD3突变体(如图38所示)表达为兔IgG的C6Vh的细胞表面染色实验。与表达αvβ8的人Cho细胞的结合表达为C6D4结合的百分比。

图40显示了以D4 Vk或RGD1、RGD2或RGD3突变体表达为兔IgG的C6Vh的表面染色实验。示出与表达人αvβ8的Cho细胞或表达αvβ6的SW480细胞的结合。相对结合被定义与非转染的Cho或SW480细胞的染色相比较的染色。

图41显示了以D4 Vk或RGD1、RGD2或RGD3突变体表达为兔IgG的C6Vh对各种av-整联蛋白的结合实验。将所有的整联蛋白以2mg/ml涂覆于ELISA板上，用BSA封闭，并允许抗体结合。用抗-兔HRP检测C6D4和C6D4-RGD3的结合。结果相对于用抗-av(克隆8B8)涂覆的对照孔示出，其中av-整联蛋白以识别非重叠表位(L230-生物素)的另一种av-抗体检测，然后进行SA-HRP。

图42显示了阳离子对C6D4和C6D4-RGD3与各种受体的结合的影响。包含EDTA的缓冲液中的结合定义阳离子依赖性，因为EDTA结合Ca++和Mg++。镁阳离子缓冲液含有1mM Ca++和1mM Mg++。因此，结果相对于抗-av，克隆11D12V2。所有的抗体以5ug/ml涂覆于ELISA板上。αvβ8或αvβ6受体(0.5μg/ml)进行1小时结合，然后用生物素化的抗-av克隆8B8检测。EDTA缓冲液中少量αvβ8与C6D4-RGD3结合(相较于在EDTA缓冲液中没有αvβ6与C6D4-RGD3结合)表明与αvβ6的结合比与αvβ8的结合更加依赖于Vk CDR1的RGD结合环。

图43A和43B显示了抑制αvβ8粘附和TGF-β活化。将以b8转染的Cho3.2.8.1细胞用于对涂覆支化GRGDLGRLK肽(SEQ ID NO:721)(10ug/ml)的孔的粘附试验。在存在各种浓度的C6D4、RGD3或对照Mab的情况下，允许Cho-b8细胞在粘附试验中结合(图43A)。在存在各种浓度的C6D4、RGD3或对照Mab的情况下，允许Cho-b8细胞粘附具有TMLC TGF-β报告细胞的孔(图43B)。以对照Mab(SV5)对照的比例显示这些值。结果表明，C6D4-RGD3和C6D4相似地阻断αvβ8功能。

图44A-B显示了粘附试验，而图44C-D显示了TGF-β活化。这里，用ARP和LTGFB1转染Cho3.2.8.1细胞。GARP(LRRC32)是存在于Treg细胞表面的细胞表面支架分子并将LTGF-b结合于细胞表面。上组图(图44A和44B)显示了在抗-β8(C6D4)、3G9(抗-β6)或双特异性抗体RGD3(抗-β6和抗-β8)存在的情况下进行的表达GARP/LTGFB的Cho细胞的粘附试验，所述GARP/LTGFB粘附于固定的αvβ8(图44A)或αvβ6(图44B)。下组图(图44C和44D)中，在抗-β8(C6D4)、3G9(抗-β6)或双特异性抗体RGD3(抗-β6和抗-β8)存在的情况下进行将TGF-β报告细胞TMLC添加到各孔以确定响应αvβ8(图44C)或αvβ6(图44D)的TGF-β活化的量。以对同种型对照抗体(SV5)处理的孔的相对荧光素酶活性报告结果。下述各图表是各抑制性抗体的EC50。

图45显示了αvβ6与TGFβ3肽的结合试验。Mab 3G9是αvβ6介导的TGF-b活化的潜在抑制剂。C6D4-RGD3显示了与3G9结合的交叉竞争，表明它们具有重叠结合足迹或别构地影响彼此的结合。然而，这些抗体具有不同的作用模式，3G9结合αvβ6不是阳离子依赖性的，而C6D4-RGD3结合是阳离子依赖性的。

图46显示了用于构建复合人源化抗体C6D4的克隆的重链和轻链氨基酸序列。VH序列-C6D4：所有序列(SEQ ID NO:722)，框架1(SEQ ID NO:732)，CDR1(SEQ ID NO:733)，框架2(SEQ ID NO:734)，CDR2(SEQ ID NO:735)，框架3(SEQ ID NO:736)，CDR3(SEQ ID NO:737)，框架4(SEQ ID NO:738)；HuC6D4 V1：所有序列(SEQ ID NO:723)，框架1(SEQ ID NO:739)，CDR1(SEQ ID NO:733)，框架2(SEQ ID NO:740)，CDR2(SEQ ID NO:735)，框架3(SEQID NO:741)，CDR3(SEQ ID NO:737)，框架4(SEQ ID NO:738)；Mutclone A3：所有序列(SEQID NO:724)，框架1(SEQ ID NO:739)，CDR1(SEQ ID NO:733)，框架2(SEQ ID NO:740)，CDR2(SEQ ID NO:735)，框架3(SEQ ID NO:741)，CDR3(SEQ ID NO:737)，框架4(SEQ ID NO:738)；Mutclone B7：所有序列(SEQ ID NO:725)，框架1(SEQ ID NO:742)，CDR1(SEQ ID NO:733)，框架2(SEQ ID NO:740)，CDR2(SEQ ID NO:735)，框架3(SEQ ID NO:743)，CDR3(SEQID NO:744)，框架4(SEQ ID NO:738)；Mutclone E5：所有序列(SEQ ID NO:726)，框架1(SEQID NO:739)，CDR1(SEQ ID NO:733)，框架2(SEQ ID NO:740)，CDR2(SEQ ID NO:735)，框架3(SEQ ID NO:741)，CDR3(SEQ ID NO:744)和框架4(SEQ ID NO:738).VK序列-C6D4：所有序列(SEQ ID NO:727)，框架1(SEQ ID NO:745)，CDR1(SEQ ID NO:746)，框架2(SEQ ID NO:747)，CDR2(SEQ ID NO:748)，框架3(SEQ ID NO:749)，CDR3(SEQ ID NO:750)，框架4(SEQID NO:751)；HuC6D4 V1：所有序列(SEQ ID NO:728)，框架1(SEQ ID NO:752)，CDR1(SEQ IDNO:746)，框架2(SEQ ID NO:747)，CDR2(SEQ ID NO:748)，框架3(SEQ ID NO:753)，CDR3(SEQ ID NO:750)，框架4(SEQ ID NO:754)；Mutclone A3：所有序列(SEQ ID NO:729)，框架1(SEQ ID NO:755)，CDR1(SEQ ID NO:756)，框架2(SEQ ID NO:747)，CDR2(SEQ ID NO:748)，框架3(SEQ ID NO:753)，CDR3(SEQ ID NO:750)，框架4(SEQ ID NO:754)；MutcloneB7：所有序列(SEQ ID NO:730)，框架1(SEQ ID NO:757)，CDR1(SEQ ID NO:746)，框架2(SEQID NO:747)，CDR2(SEQ ID NO:748)，框架3(SEQ ID NO:758)，CDR3(SEQ ID NO:750)，框架4(SEQ ID NO:754)；Mutclone E5：所有序列(SEQ ID NO:731)，框架1(SEQ ID NO:752)，CDR1(SEQ ID NO:756)，框架2(SEQ ID NO:747)，CDR2(SEQ ID NO:748)，框架3(SEQ ID NO:753)，CDR3(SEQ ID NO:750)和框架4(SEQ ID NO:754)。

图47显示了人源化C6D4或RDG3与重组αvβ8的结合试验。人源化C6D4或RGD3(框架和CH1是人的；铰链和CH2-3是小鼠的)在指定的浓度下被固定于ELISA板。作为阴性对照，以相同的浓度用抗-SV5涂覆一些孔。用BSA封闭非特异性的结合位点。向各孔添加重组αvβ8胞外域(0.5ug/ml)，并在结合缓冲液(1mM Ca和Mg)中结合和洗涤后，用生物素化的抗-αv(8b8)检测和用SA-HRP检测结合的αvβ8。结果以特异性结合显示(减SV5对照)。

图48显示了C6D4/αvβ8卡通模型与C6D4/αvβ8线图的叠加(图48A和48C)与相同C6D4/αvβ8卡通模型与C6D4-RGD3/αvβ8线图的叠加(图48B和D)的比较。两图的比较显示了C6D4-RGD3的CDR1 Vk环朝向β8亚基配体结合位点的不同取向。

图49A-C显示了具有相似定位的C6D4和C6D4-RGDαvβ8复合物的CryoEM图。因此，基于cryoEM来源的密度图，C6D4 Fab-αvβ8(图49A)与RGD3-αvβ8图(图49B)比较，或处于覆盖(图49C)。将抗-αv 11D12V2 Fab用于增加复合物的分子质量并协助颗粒取向。

图50显示了用于构建复合人源化抗体C6D4和C6D4-RGD3的克隆的重链氨基酸序列。提供了用于C6D4和C6D4-RGD3人源化形式的共有序列。VH序列-HuC6D4V1:所有的(SEQID NO:395)，框架1(SEQ ID NO:396)，CDR1(SEQ ID NO:397)，框架2(SEQ ID NO:398)，CDR2(SEQ ID NO:399)，框架3(SEQ ID NO:400)，CDR3(SEQ ID NO:401)和框架4(SEQ ID NO:402)；HuC6D4A3:所有的(SEQ ID NO:403)，框架1(SEQ ID NO:404)，CDR1(SEQ ID NO:405)，框架2(SEQ ID NO:406)，CDR2(SEQ ID NO:407)，框架3(SEQ ID NO:408)，CDR3(SEQ ID NO:409)和框架4(SEQ ID NO:410)；HuC6D4B7:所有的(SEQ ID NO:411)，框架1(SEQ ID NO:412)，CDR1(SEQ ID NO:413)，框架2(SEQ ID NO:414)，CDR2(SEQ ID NO:415)，框架3(SEQID NO:416)，CDR3(SEQ ID NO:417)和框架4(SEQ ID NO:418)；HuC6D4E5:所有的(SEQ IDNO:419)，框架1(SEQ ID NO:420)，CDR1(SEQ ID NO:421)，框架2(SEQ ID NO:422)，CDR2(SEQ ID NO:423)，框架3(SEQ ID NO:424)，CDR3(SEQ ID NO:425)和框架4(SEQ ID NO:426)；C6D4：所有序列(SEQ ID NO:722)，框架1(SEQ ID NO:732)，CDR1(SEQ ID NO:733)，框架2(SEQ ID NO:734)，CDR2(SEQ ID NO:735)，框架3(SEQ ID NO:736)，CDR3(SEQ ID NO:737)和框架4(SEQ ID NO:738)；HuC6D4:所有的(SEQ ID NO:427)，框架1(SEQ ID NO:428)，CDR1(SEQ ID NO:429)，框架2(SEQ ID NO:430)，CDR2(SEQ ID NO:431)，框架3(SEQ ID NO:432)，CDR3(SEQ ID NO:433)和框架4(SEQ ID NO:434)；C6D4-RGD3:所有的(SEQ ID NO:435)，框架1(SEQ ID NO:436)，CDR1(SEQ ID NO:437)，框架2(SEQ ID NO:438)，CDR2(SEQID NO:439)，框架3(SEQ ID NO:440)，CDR3(SEQ ID NO:441)和框架4(SEQ ID NO:442)；HuC6D4-RGD3:所有的(SEQ ID NO:443)，框架1(SEQ ID NO:444)，CDR1(SEQ ID NO:445)，框架2(SEQ ID NO:446)，CDR2(SEQ ID NO:447)，框架3(SEQ ID NO:448)，CDR3(SEQ ID NO:449)和框架4(SEQ ID NO:450)；和共有VH:框架1(SEQ ID NO:558)，CDR1(SEQ ID NO:563)，框架2(SEQ ID NO:559)，CDR2(SEQ ID NO:563)，框架3(SEQ ID NO:560)，CDR3(SEQ ID NO:564)和框架4(SEQ ID NO:561)。

图51显示了用于构建复合人源化抗体C6D4和C6D4-RGD3的克隆的轻链氨基酸序列。提供了用于C6D4和C6D4-RGD3人源化形式的共有序列。VL序列-HuC6D4V1:所有的(SEQID NO:451)，框架1(SEQ ID NO:452)，CDR1(SEQ ID NO:453)，框架2(SEQ ID NO:454)，CDR2(SEQ ID NO:455)，框架3(SEQ ID NO:456)，CDR3(SEQ ID NO:457)和框架4(SEQ ID NO:458)；HuC6D4A3:所有的(SEQ ID NO:459)，框架1(SEQ ID NO:460)，CDR1(SEQ ID NO:461)，框架2(SEQ ID NO:462)，CDR2(SEQ ID NO:463)，框架3(SEQ ID NO:464)，CDR3(SEQ ID NO:465)和框架4(SEQ ID NO:466)；HuC6D4B7:所有的(SEQ ID NO:467)，框架1(SEQ ID NO:468)，CDR1(SEQ ID NO:469)，框架2(SEQ ID NO:470)，CDR2(SEQ ID NO:471)，框架3(SEQID NO:472)，CDR3(SEQ ID NO:473)和框架4(SEQ ID NO:474)；HuC6D4E5:所有的(SEQ IDNO:475)，框架1(SEQ ID NO:476)，CDR1(SEQ ID NO:478)，框架2(SEQ ID NO:479)，CDR2(SEQ ID NO:480)，框架3(SEQ ID NO:481)，CDR3(SEQ ID NO:482)和框架4(SEQ ID NO:483)；C6D4：所有序列(SEQ ID NO:727)，框架1(SEQ ID NO:745)，CDR1(SEQ ID NO:746)，框架2(SEQ ID NO:747)，CDR2(SEQ ID NO:748)，框架3(SEQ ID NO:749)，CDR3(SEQ ID NO:750)和框架4(SEQ ID NO:751)；HuC6D4：所有序列(SEQ ID NO:484)，框架1(SEQ ID NO:485)，CDR1(SEQ ID NO:486)，框架2(SEQ ID NO:487)，CDR2(SEQ ID NO:488)，框架3(SEQID NO:489)，CDR3(SEQ ID NO:490)和框架4(SEQ ID NO:491)；C6D4-RGD3:所有的(SEQ IDNO:492)，框架1(SEQ ID NO:493)，CDR1(SEQ ID NO:494)，框架2(SEQ ID NO:495)，CDR2(SEQ ID NO:496)，框架3(SEQ ID NO:497)，CDR3(SEQ ID NO:498)和框架4(SEQ ID NO:499)；HuC6D4-RGD3:所有的(SEQ ID NO:500)，框架1(SEQ ID NO:501)，CDR1(SEQ ID NO:502)，框架2(SEQ ID NO:503)，CDR2(SEQ ID NO:504)，框架3(SEQ ID NO:505)，CDR3(SEQID NO:506)和框架4(SEQ ID NO:507)；和共有VL:框架1(SEQ ID NO:565)，CDR1(SEQ IDNO:569)，框架2(SEQ ID NO:566)，CDR2(SEQ ID NO:570)，框架3(SEQ ID NO:567)，CDR3(SEQ ID NO:571)和框架4(SEQ ID NO:568).RDG3环(SEQ ID NO:721)。

图52显示了用于构建复合抗体F9的克隆的重链氨基酸序列。序列-4F1：所有序列(SEQ ID NO:624)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:628)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:634)，框架3(SEQ ID NO:637)，CDR3(SEQ ID NO:651)，框架4(SEQID NO:655)，6B9：所有序列(SEQ ID NO:656)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:635)，框架3(SEQ ID NO:638)，CDR3(SEQID NO:652)，框架4(SEQ ID NO:655)，6B9.1：所有序列(SEQ ID NO:657)，框架1(SEQ IDNO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:638)，CDR3(SEQ ID NO:653)，框架4(SEQ ID NO:655)，A1：所有序列(SEQ IDNO:658)，框架1(SEQ ID NO:626)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:639)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，A2：所有序列(SEQ ID NO:659)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:640)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，A8：所有序列(SEQ ID NO:660)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:641)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，A11：所有序列(SEQ ID NO:661)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:630)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:638)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，B1：所有序列(SEQ ID NO:662)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:642)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQID NO:655)，B3：所有序列(SEQ ID NO:663)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:643)，CDR3(SEQID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，C4＝F10：所有序列(SEQ ID NO:664)，框架1(SEQ IDNO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:644)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，C7＝D1：所有序列(SEQID NO:665)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:644)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，D3＝F1：所有序列(SEQ ID NO:666)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:645)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，D10＝E5：所有序列(SEQ ID NO:667)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQID NO:646)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，E8：所有序列(SEQ ID NO:667)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:646)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，F2：所有序列(SEQ ID NO:667)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ IDNO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:646)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，G4：所有序列(SEQ ID NO:668)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ IDNO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:647)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，C4：所有序列(SEQ ID NO:669)，框架1(SEQ IDNO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:650)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，D10：所有序列(SEQ IDNO:670)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:633)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:646)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，4F1A11：所有序列(SEQ ID NO:671)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:650)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，4F1E1：所有序列(SEQ ID NO:672)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:631)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:638)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，4F1G3：所有序列(SEQ ID NO:673)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:631)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:648)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，4F1E10：所有序列(SEQ ID NO:674)，框架1(SEQ ID NO:627)，CDR1(SEQ ID NO:631)，框架2(SEQ IDNO:632)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:638)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，4F1E9：所有序列(SEQ ID NO:675)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQID NO:629)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:638)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，4F1H12：所有序列(SEQ ID NO:676)，框架1(SEQID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:631)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:649)，CDR3(SEQ ID NO:654)，框架4(SEQ ID NO:655)，F9：所有序列(SEQ IDNO:677)，框架1(SEQ ID NO:625)，CDR1(SEQ ID NO:631)，框架2(SEQ ID NO:632)，CDR2(SEQ ID NO:636)，框架3(SEQ ID NO:638)，CDR3(SEQ ID NO:654)和框架4(SEQ ID NO:655)。

图53显示了用于构建复合抗体F9的克隆的轻链氨基酸序列。VL序列-4F1：所有序列(SEQ ID NO:678)，框架1(SEQ ID NO:692)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQID NO:698)，6B9：所有序列(SEQ ID NO:679)，框架1(SEQ ID NO:699)，CDR1(SEQ ID NO:700)，框架2(SEQ ID NO:701)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQID NO:702)，框架4(SEQ ID NO:698)，6B9.1：所有序列(SEQ ID NO:680)，框架1(SEQ IDNO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，A1：所有序列(SEQ IDNO:681)，框架1(SEQ ID NO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，A2：所有序列(SEQ ID NO:681)，框架1(SEQ ID NO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，A8：所有序列(SEQ ID NO:682)，框架1(SEQ ID NO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，A11：所有序列(SEQ ID NO:683)，框架1(SEQ ID NO:704)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，B1：所有序列(SEQ ID NO:684)，框架1(SEQ ID NO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQID NO:698)，B3：所有序列(SEQ ID NO:685)，框架1(SEQ ID NO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，C4＝F10：所有序列(SEQ ID NO:681)，框架1(SEQ IDNO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，C7＝D1：所有序列(SEQID NO:681)，框架1(SEQ ID NO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，D3＝F1：所有序列(SEQ ID NO:681)，框架1(SEQ ID NO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，D10＝E5：所有序列(SEQ ID NO:686)，框架1(SEQ ID NO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，E8：所有序列(SEQ ID NO:686)，框架1(SEQ ID NO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:755)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，F2：所有序列(SEQ ID NO:681)，框架1(SEQ ID NO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ IDNO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，G4：所有序列(SEQ ID NO:681)，框架1(SEQ ID NO:703)，CDR1(SEQ IDNO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，C4：所有序列(SEQ ID NO:687)，框架1(SEQ IDNO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:706)，D10：所有序列(SEQ IDNO:688)，框架1(SEQ ID NO:699)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:706)，4F1E1＝1F1G3＝4F1B5＝4F1G11＝4F1A9＝4F1B9＝4F1H9＝4F1D10＝4F1E9＝4F1F10＝4F1H11＝4F1H12：所有序列(SEQ ID NO:689)，框架1(SEQ ID NO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，4FA11：所有序列(SEQ ID NO:690)，框架1(SEQ IDNO:705)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)，框架4(SEQ ID NO:698)，F9：所有序列(SEQ IDNO:691)，框架1(SEQ ID NO:703)，CDR1(SEQ ID NO:693)，框架2(SEQ ID NO:694)，CDR2(SEQ ID NO:695)，框架3(SEQ ID NO:696)，CDR3(SEQ ID NO:697)和框架4(SEQ ID NO:706)。

图54A-54D是显示了不同细胞表面标志物的细胞染色阳性的百分比的图表。用Lewis肺癌(LLC)细胞和SV5(同种型对照)或C6D4以7mg/kg的剂量每周一次注射小鼠。

发明详述

I.绪论

发明人已经发现了结合人整联蛋白αvβ8并导致配体结合功能至少部分降低的某些抗体。基于该发现，他们已经研发了详细的结构模型以协助发现这样的抗体，所述抗体在特定表位结合整联蛋白αvβ8，任选地阻断整联蛋白αvβ8的配体结合位点。一些鉴定的抗体结合αv-整联蛋白亚基头部结构域和β8-整联蛋白亚基头部结构域，以有效地覆盖整联蛋白αvβ8的配体结合位点，而不与配体结合位点本身结合(即，作为配体模拟物)。

此外，发明人已经发现，阻断与整联蛋白αvβ8结合的配体有效抑制癌症(包括但不限于转移性癌症)，并且还在治疗病毒感染中有效。并不限于所述发明的范围，据信整联蛋白αvβ8在阻断调节性T细胞(Treg)功能和/或发育中起作用，并且因此，本文所述抗体激发对肿瘤细胞和病毒的免疫力。相应地，本文提供了抗体及其使用方法，以及其他方面。

发明人还已经鉴定了将“RGDL”序列(SEQ ID NO:756)导入抗-αvβ8抗体的CDR并且已经显示，这样的导入使抗体能够结合αvβ6，同时基本维持对αvβ8相同的结合活性。

II.抗体

本文提供了结合人(和在一些实施方式中，其他哺乳动物，例如，小鼠、豚鼠、猪和兔)整联蛋白αvβ8的抗体。在一些实施方式中，抗体是分离的，是嵌合的(包含至少一些异源性氨基酸序列)，是被标记的或共价连接其他分子，如细胞毒剂或其组合。在一些实施方式中，抗体特异性结合人整联蛋白αvβ8并且阻断配体与人整联蛋白αvβ8的结合。示例性的配体可以包括例如TGFβ和LAP。在一些实施方式中，抗体以阳离子依赖性的方式结合或者在阳离子存在时具有增强的结合。

在一些实施方式中，人整联蛋白αvβ8上由本文所述抗体结合的表位包含存在于天然人整联蛋白αvβ8蛋白质中的(1)整联蛋白β8蛋白的特异性决定环(SDL)(例如，TVSPYISIHPERIHNQCSDYNLDCMPPH(SEQ ID NO:620))，(2)β8整联蛋白的α1(例如，SASMHNNIEKLNSVGNDLSRKMAFFS(SEQ ID NO:619))或α2(例如，NITEFEKAVHR(SEQ ID NO:621))螺旋，(3)αv蛋白的头部(例如，DADGQ(SEQ ID NO:757)；SFYWQ(SEQ ID NO:758)；FDDSY(SEQ ID NO:759))或

KQDKILACAPLYHWRTEMKQEREPVGTCFLQDGTKTVEYAPCRSQDIDADGQGFCQGGFSIDFTKADRVLLGGPGSFYWQGQLISDQVAEIVSKYDPNVYSIKYNNQLATRTAQAIFD(SEQ ID NO:760)的其他部分(4)其组合(例如，1和2，2和3，1和3，或1、2和3)中的氨基酸，包括例如人整联蛋白αvβ8所有列出部分。在一些实施方式中，抗体结合选自下述的SDL中的一个或多个或所有氨基酸：D175(例如，在NLDCM(SEQ ID NO:761)中)，L174(例如，在YNLDC(SEQ ID NO:762)中)或S170，D171或Y172(例如，在QCSDYNL(SEQ ID NO:763)中)或其组合，其中编号基于人整联蛋白β8蛋白(SEQ ID NO:394)。参见例如图7。在一些实施方式中，抗体结合β8整联蛋白的α1螺旋中的氨基酸H118(例如，在SMHNN中)(SEQ ID NO:764))，其中编号基于人整联蛋白β8蛋白(SEQ ID NO:394)。在一些实施方式中，抗体结合β8整联蛋白的α2螺旋中的氨基酸H200或R201(例如，在AVHRQ中)或其组合，其中编号基于人整联蛋白β8蛋白(SEQ ID NO:394)。在一些实施方式中，抗体结合选自下述的αv蛋白质头部中的1个或多个或所有氨基酸(下划线的)：D148，A149，D150，G151或Y178(例如，在SFYWQ(SEQ ID NO:758)中)或其组合，其中编号基于人整联蛋白αv蛋白(SEQ ID NO:393)。在一些实施方式中，抗体结合本段落所述的上述指定的(下划线的)氨基酸中的每一种。由图12-18可以看出，与整联蛋白αvβ8的上述结构域的相互作用是有益的。

如上所述，在一些实施方式中，抗体特异性结合人整联蛋白αvβ8并且阻断配体与人整联蛋白αvβ8的结合。可以通过抑制在细胞表面表达的可溶形式的αvβ8或全长形式的αvβ8与包含序列RGDL的固定的潜伏-TGF-β或其部分的结合来确定抗体阻断配体结合αvβ8整联蛋白的能力，参见例如，Ozawa,A,等J Biol Chem.291(22):11551-65(2016)。

在一些实施方式中，抗体包含如下所示的一个或多个CDR(或克隆的所有重链CDR，或克隆的所有轻链CDR)：

/>

在一些实施方式中，本文所述的抗体包含如下表所示成对的重链和轻链CDR：

/>

在一些实施方式中，如本文所述的抗体包含此处提供的框架序列中的1、2、3或所有4个：

/>

在一些实施方式中，抗体包含如本文所提供的CDR1、CDR2和CDR3重链序列，其包括但不限于，例如，

SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7；

SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；

SEQ ID NO:19，SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:23；

SEQ ID NO:27，SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:31；

SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:39；

SEQ ID NO:43，SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:47；

SEQ ID NO:51，SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:55；

SEQ ID NO:59，SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:63；

SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:71；

SEQ ID NO:75，SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:79；

SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:87；

SEQ ID NO:91，SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:95；

SEQ ID NO:99，SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:103；

SEQ ID NO:107，SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:111；

SEQ ID NO:115，SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:119；

SEQ ID NO:123，SEQ ID NO:125和SEQ ID NO:127；

SEQ ID NO:291，SEQ ID NO:293和SEQ ID NO:295；

SEQ ID NO:313，SEQ ID NO:314和SEQ ID NO:315；

SEQ ID NO:316，SEQ ID NO:317和SEQ ID NO:318；

SEQ ID NO:319，SEQ ID NO:320和SEQ ID NO:321；

SEQ ID NO:322，SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:324；

SEQ ID NO:325，SEQ ID NO:326和SEQ ID NO:327；

SEQ ID NO:328，SEQ ID NO:329和SEQ ID NO:330；

SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:332和SEQ ID NO:333；

SEQ ID NO:367，SEQ ID NO:368和SEQ ID NO:369；

SEQ ID NO:364，SEQ ID NO:365和SEQ ID NO:366；

SEQ ID NO:370，SEQ ID NO:371和SEQ ID NO:372；

SEQ ID NO:379，SEQ ID NO:380和SEQ ID NO:381；

SEQ ID NO:397，SEQ ID NO:399和SEQ ID NO:401；

SEQ ID NO:405，SEQ ID NO:407和SEQ ID NO:409；

SEQ ID NO:413，SEQ ID NO:415和SEQ ID NO:417；

SEQ ID NO:421，SEQ ID NO:423和SEQ ID NO:425；或

SEQ ID NO:429，SEQ ID NO:431和SEQ ID NO:433。

在一些实施方式中，抗体包含上述重链CDR1、CDR2和CDR3序列，但是相较于上面所列的那些，其在1、2或多个CDR序列中包含1、2或3个保守氨基酸取代。

在一些实施方式中，抗体包含如本文所提供的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，其包括但不限于，例如，

SEQ ID NO:131，SEQ ID NO:133和SEQ ID NO:135；

SEQ ID NO:139，SEQ ID NO:141和SEQ ID NO:143；

SEQ ID NO:147，SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:151；

SEQ ID NO:155，SEQ ID NO:157和SEQ ID NO:159；

SEQ ID NO:163，SEQ ID NO:165和SEQ ID NO:167；

SEQ ID NO:171，SEQ ID NO:173和SEQ ID NO:175；

SEQ ID NO:179，SEQ ID NO:181和SEQ ID NO:183；

SEQ ID NO:187，SEQ ID NO:189和SEQ ID NO:191；

SEQ ID NO:195，SEQ ID NO:197和SEQ ID NO:199；

SEQ ID NO:203，SEQ ID NO:205和SEQ ID NO:207；

SEQ ID NO:211，SEQ ID NO:213和SEQ ID NO:215；

SEQ ID NO:219，SEQ ID NO:221和SEQ ID NO:223；

SEQ ID NO:227，SEQ ID NO:229和SEQ ID NO:231；

SEQ ID NO:243，SEQ ID NO:245和SEQ ID NO:247；

SEQ ID NO:251，SEQ ID NO:253和SEQ ID NO:255；

SEQ ID NO:259，SEQ ID NO:261和SEQ ID NO:263；

SEQ ID NO:267，SEQ ID NO:269和SEQ ID NO:271；

SEQ ID NO:275，SEQ ID NO:277和SEQ ID NO:279；

SEQ ID NO:283，SEQ ID NO:285和SEQ ID NO:287；

SEQ ID NO:291，SEQ ID NO:293和SEQ ID NO:295；

SEQ ID NO:307，SEQ ID NO:309和SEQ ID NO:311；

SEQ ID NO:334，SEQ ID NO:335和SEQ ID NO:336；

SEQ ID NO:337，SEQ ID NO:338和SEQ ID NO:339；

SEQ ID NO:340，SEQ ID NO:341和SEQ ID NO:342；

SEQ ID NO:343，SEQ ID NO:344和SEQ ID NO:345；

SEQ ID NO:346，SEQ ID NO:347和SEQ ID NO:348；

SEQ ID NO:349，SEQ ID NO:350和SEQ ID NO:351；

SEQ ID NO:352，SEQ ID NO:353和SEQ ID NO:354；

SEQ ID NO:355，SEQ ID NO:356和SEQ ID NO:357；

SEQ ID NO:358，SEQ ID NO:359和SEQ ID NO:360；

SEQ ID NO:361，SEQ ID NO:362和SEQ ID NO:363；

SEQ ID NO:373，SEQ ID NO:374和SEQ ID NO:375；

SEQ ID NO:376，SEQ ID NO:377和SEQ ID NO:378；

SEQ ID NO:382，SEQ ID NO:383和SEQ ID NO:384；

SEQ ID NO:453，SEQ ID NO:455和SEQ ID NO:457；

SEQ ID NO:461，SEQ ID NO:463和SEQ ID NO:465；

SEQ ID NO:469，SEQ ID NO:471和SEQ ID NO:473；

SEQ ID NO:478，SEQ ID NO:480和SEQ ID NO:482；或

SEQ ID NO:486，SEQ ID NO:488和SEQ ID NO:490。

在一些实施方式中，抗体包含上述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，但是相较于上面所列的那些，其在1、2或多个CDR序列中包含1、2或3个保守氨基酸取代。在一些实施方式中，轻链CDR1序列长度为12-18个氨基酸，例如，14-17，例如，12、13、14、15、16、17或18个氨基酸长度。

在一些实施方式中，抗体包含如本文所提供的重链和轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，其包括但不限于，例如，

重链CDR SEQ ID NO:526，SEQ ID NO:527和SEQ ID NO:528；和轻链CDR SEQ IDNO:547，SEQ ID NO:548和SEQ ID NO:549。

在一些实施方式中，抗体包含上述重链和轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，但是相较于上面所列的那些，其在1、2或多个CDR序列中包含1、2或3个保守氨基酸取代。

在一些实施方式中，本文所述的任何抗体可以包含含有RGD序列的轻链CDR1，例如，如下表所提供的：

/>

在一些实施方式中，本文所述的任何抗体可以包含选自SEQ ID NO:572，SEQ IDNO:573，SEQ ID NO:574，SEQ ID NO:575，SEQ ID NO:576，SEQ ID NO:577，SEQ ID NO:578，SEQ ID NO:579，SEQ ID NO:580，SEQ ID NO:581，SEQ ID NO:582，SEQ ID NO:583，SEQ IDNO:584，SEQ ID NO:585，SEQ ID NO:586，SEQ ID NO:587，SEQ ID NO:588，SEQ ID NO:589和SEQ ID NO:590的CDR中的一个作为CDR1。

在一些实施方式中，抗体可以包含如下所提供的重链和轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，其包括但不限于，例如，

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:572，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:573，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:574，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:575，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:576，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:577，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:578，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:579，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:580，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:581，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:582，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:583，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:584，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:585，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:586，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:587，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:589，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:590，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:546；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:572，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:573，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:574，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:575，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:576，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:577，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:578，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:579，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:580，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:581，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:582，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:583，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:584，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:585，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:586，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:587，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:588，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:589，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:590，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:534；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:572，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:573，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:574，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:575，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:576，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:577，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:578，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:579，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:580，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:581，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:582，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:583，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:584，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:585，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:586，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:587，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:588，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:589，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537；或

重链CDR SEQ ID NO:523，SEQ ID NO:524和SEQ ID NO:525；和轻链CDR SEQ IDNO:590，SEQ ID NO:545和SEQ ID NO:537。

在一些实施方式中，本文所公开的任何抗体可以包含选自下述的重链可变区中的一个：SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:17，SEQ ID NO:25，SEQ ID NO:33，SEQ IDNO:41，SEQ ID NO:49，SEQ ID NO:57，SEQ ID NO:65，SEQ ID NO:73，SEQ ID NO:81，SEQ IDNO:89，SEQ ID NO:97，SEQ ID NO:105，SEQ ID NO:113，SEQ ID NO:121或SEQ ID NO:297或SEQ ID NO:395，SEQ ID NO:403，SEQ ID NO:411，SEQ ID NO:419，SEQ ID NO:427，SEQ IDNO:435或SEQ ID NO:443。

在一些实施方式中，本文所公开的任何抗体可以包含选自下述的轻链可变区中的一个：SEQ ID NO:129，SEQ ID NO:137，SEQ ID NO:145，SEQ ID NO:153，SEQ ID NO:161，SEQ ID NO:169，SEQ ID NO:177，SEQ ID NO:185，SEQ ID NO:193，SEQ ID NO:201，SEQ IDNO:209，SEQ ID NO:217，SEQ ID NO:225，SEQ ID NO:233，SEQ ID NO:241，SEQ ID NO:249，SEQ ID NO:257，SEQ ID NO:265，SEQ ID NO:273，SEQ ID NO:281，SEQ ID NO:289，SEQ IDNO:305或SEQ ID NO:451，SEQ ID NO:459，SEQ ID NO:467，SEQ ID NO:475，SEQ ID NO:484，SEQ ID NO:492或SEQ ID NO:500。

在一些实施方式中，本文所公开的抗体可以包含选自SEQ ID NO:565，SEQ ID NO:566，SEQ ID NO:567，SEQ ID NO:568，SEQ ID NO:569，SEQ ID NO:570或SEQ ID NO:571的轻链可变区(CDR或框架区)中的1个或多个或所有。

在一些实施方式中，本文所公开的任何抗体可以包含选自SEQ ID NO:558，SEQ IDNO:559，SEQ ID NO:560，SEQ ID NO:561，SEQ ID NO:562，SEQ ID NO:563或SEQ ID NO:564的重链可变区(CDR或框架区)中的1个或多个或所有。

重链可变区可以如所需与轻链区配对，包括或不限于包含如上所示配对的CDR的可变区。

此外，如上所述，发明人已经发现，可以将RGDL序列(SEQ ID NO:756)插入结合αvβ8的抗体中的轻链CDR1序列，以获得具有总共6个CDR并且结合αvβ8和αvβ6的抗体。抗体至少部分地阻断配体结合功能。参见例如，图38A-D。因此，在一些实施方式中，提供了这样的抗体，其结合αvβ8和αvβ6并且在轻链CDR1序列中包含RGDL序列(SEQ ID NO:756)。例如，在一些实施方式中，轻链CDR1介于20-22个氨基酸之间(例如，21个氨基酸)，任选地包含KSSQSLLGRGDLGRLKK(SEQ ID NO:765)或含有1、2或3个保守氨基酸取代的序列。

此外，发明人已经发现，可以将RGDL序列(SEQ ID NO:756)插入结合αvβ8的抗体中的轻链CDR1序列，以获得具有6个CDR并且结合αvβ8、αvβ6和αvβ6(即，是三特异性的)的抗体。参见实施例12。

在一些实施方式中，本文所述的任何抗体可以包含选自但不限于下述的轻链CDR1序列：SEQ ID NO:572，SEQ ID NO:573，SEQ ID NO:574，SEQ ID NO:575，SEQ ID NO:576，SEQ ID NO:577，SEQ ID NO:578，SEQ ID NO:579，SEQ ID NO:580，SEQ ID NO:581，SEQ IDNO:582，SEQ ID NO:583，SEQ ID NO:584，SEQ ID NO:585，SEQ ID NO:586，SEQ ID NO:587，SEQ ID NO:588，SEQ ID NO:589和SEQ ID NO:590。在一些实施方式中，本段落所示的任何轻链CDR1序列可以与本文所示的任何轻链CDR2、轻链CDR3、重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3组合。

在一些实施方式中，相较于前述的那些(即，SEQ ID NO:572-590)，包含前述段落中所述轻链CDR1序列的抗体在CDR1序列中可以含有1、2或3个保守氨基酸取代。

在一些实施方式中，抗体可以包含如本文所提供的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，其包括但不限于，例如，

SEQ ID NO:437，SEQ ID NO:439和SEQ ID NO:441；或

SEQ ID NO:445，SEQ ID NO:447和SEQ ID NO:449。

在一些实施方式中，抗体可以包含上述重链CDR1、CDR2和CDR3序列，但是相较于上面所列的那些，其在1、2或多个CDR序列中包含1、2或3个保守氨基酸取代。

在一些实施方式中，抗体可以包含如本文所提供的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，其包括但不限于，例如，

SEQ ID NO:494，SEQ ID NO:496和SEQ ID NO:498；或

SEQ ID NO:502，SEQ ID NO:504和SEQ ID NO:506。

在一些实施方式中，抗体可以包含上述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，但是相较于上面所列的那些，其在1、2或多个CDR序列中包含1、2或3个保守氨基酸取代。

为制备和应用本文所述的合适抗体，例如，重组、单克隆或多克隆抗体，可采用本领域已知的多种技术(参见，例如，Kohler和Milstein，Nature256:495-497(1975)；Kozbor等，Immunology Today 4:72(1983)；Cole等，Monoclonal Antibodies and CancerTherapy(《单克隆抗体和癌治疗》)的第77-96页，Alan R.Liss公司(1985)；Coligan，Current Protocols in Immunology(《新编免疫学方案》)(1991)；Harlow和Lane，Antibodies，A Laboratory Manual(《抗体，实验室手册》)(1988)；和Goding，MonoclonalAntibodies:Principles and Practice(《单克隆抗体：原理和实践》)(第2版.1986))。编码感兴趣抗体的重链和轻链的基因可以克隆自细胞，例如，编码单克隆抗体的基因可以克隆自杂交瘤并且用于产生重组的单克隆抗体。编码单克隆抗体的重链和轻链的基因文库还可以由杂交瘤或血浆细胞产生。随机重组重链和轻链基因产生具有不同抗原特异性的抗体的大量汇集(参见例如，Kuby,Immunology(《免疫学》)(1997年第三版))。可以调整用于生产单链抗体或重组抗体的技术(美国专利号4,946,778、美国专利号4,816,567)以产生本发明多肽的抗体。同样，转基因小鼠或其他生物体诸如其他哺乳动物可以用于表达人源化的抗体或人抗体(参见例如，美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016，Marks等,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg等,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-13(1994)；Fishwild等,NatureBiotechnology 14:845-51(1996)；Neuberger,Nature Biotechnology 14:826(1996)；和Lonberg和Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。或者，可采用噬菌体展示技术来鉴定特异性结合至所选抗原的抗体和杂聚Fab片段(参见，例如，McCafferty等，Nature348:552-554(1990)；Marks等，Biotechnology 10:779-783(1992))。抗体还可以是双特异性的，即，能够识别2个不同的抗原(参见例如，WO 93/08829，Traunecker等,EMBO J.10:3655-3659(1991)；和Suresh等,Methods in Enzymology 121:210(1986))。抗体还可以是异质偶联物(heteroconjugate)，例如，两种共价接合的抗体，或免疫毒素(参见，例如，美国专利号4,676,980，WO 91/00360；WO 92/200373；和EP 03089)。

可以使用任何数量的表达系统，包括原核和真核表达系统产生抗体。在一些实施方式中，表达系统是哺乳动物细胞表达系统，如杂交瘤表达系统，或CHO细胞表达系统。许多这类系统可广泛购自供应商。在其中抗体包含V_H和V_L区的实施方式中，V_H和V_L区可以使用单个载体表达，例如，在双顺反子表达单元中，或受控于不同的启动子。在其他实施方式中，V_H和V_L区可以使用分开的载体表达。本文所述的V_H或V_L区可以任选地包含N-末端处的蛋氨酸。

还可以不同的形式产生本文所述的抗体，包括作为Fab、Fab'、F(ab')₂、scFv或dAB。可以通过各种方法获得抗体片段，包括用酶消化完整的抗体，如胃蛋白酶(以生成(Fab')₂片段)或木瓜蛋白酶(以生产Fab片段)；或重头合成。可以使用重组DNA方法合成抗体片段。在一些实施方式中，抗-β8抗体包含特异性结合β8的F(ab')₂片段。本发明的抗体可以还包括人恒定区。参见，Fundamental Immunology(《基础免疫学》)(Paul编著，第4版1999)；Bird,等,Science 242:423(1988)；和Huston,等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879(1988)。

本领域熟知人源化或灵长类化非人抗体的方法。通常，人源化抗体具有从非人来源引入的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基常被称为输入残基，它们一般取自输入可变区。人源化可基本按照Winter和共事者的方法进行(参见，例如，Jones等，Nature321:522-525(1986)；Riechmann等，Nature 332:323-327(1988)；Verhoeyen等，Science239:1534-1536(1988)和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992))，通过取代啮齿类CDR或CDR序列为人抗体的对应序列来完成。这类人源化抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中明显小于完整的人可变区被来自非人物种的相应序列所取代。在实践中，人源化抗体一般是一些CDR残基以及可能的一些FR残基被啮齿动物抗体中相似位点的残基所取代的人抗体。

在一些情况中，抗体或抗体片段可以与其他分子偶联，例如，聚乙二醇(PEG化)或血清白蛋白以提供延长的体内半衰期。抗体片段PEG化的示例在Knight等Platelets 15:409,2004(对于阿昔单抗)；Pedley等,Br.J.Cancer 70:1126,1994(对于抗-CEA抗体)；Chapman等.,Nature Biotech.17:780,1999；和Humphreys,等,Protein Eng.Des.20:227,2007)中提供。抗体或抗体片段还可以被标记，或与下述治疗剂偶联。

通常，抗体结合的特异性可以定义为相较于环境中的抗体和其他物质或通常不相关的分子的解离常数，抗体对靶标(例如，β8)的比较性解离常数(Kd)。通常，抗体相对于不相关物质的Kd将比相对于靶标的Kd高至少2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、200倍或更高。

取决于是将抗体用于诊断还是治疗，抗体所需的亲和力，例如，高(pM至低nM)、中(低nM至100nM)或低(约100nM或更高)可以不同。例如，具有中亲和力的抗体相较于具有高亲和力的抗体可以更成功地定位到所需组织。因此，具有不同亲和力的抗体可以用于诊断和治疗应用。

靶向部分将通常以小于约1000nM的Kd结合，例如，小于250、100、50、20或更低的nM。在一些实施方式中，亲和力的Kd小于15、10、5或1nM。在一些实施方式中，Kd是1-100nM、0.1-50nM、0.1-10nM或1-20nM。解离常数(Kd)的值可以通过熟知的方法确定，并且通过例如Caceci等,Byte(1984)9:340-362中所公开的方法甚至可以计算复合混合物的Kd值。

抗体或任何靶向剂对靶标的亲和力可以根据本领域已知的方法确定，例如，如Ernst等.确定均衡解离常数(Determination of Equilibrium DissociationConstants),Therapeutic Monoclonal Antibodies(Wiley和Sons编著2009)中所概述。

可以使用定量ELISA和相似的基于阵列的亲和力方法。ELISA(酶联免疫吸附测定)是基于抗体的方法。在一些情况中，将对感兴趣靶标具有特异性的抗体固定于基质，并且与怀疑含有靶标的样品接触。然后，洗涤表面以去除未结合的物质。可以各种方式检测靶标结合，例如，使用具有标记的抗体的第二步骤，直接标记靶标，或标记具有这样标记物的一抗，所述标记物在抗原结合后可以被检测到。在一些情况中，抗原固定于基质(例如，使用对于蛋白质具有高亲和力的基质，或链霉亲和素-生物素相互作用)，并且使用标记的抗体(或其他靶向部分)检测。已经研发了原始ELISA方法的多个排列，并且为本领域已知(综述参见Lequin(2005)Clin.Chem.51:2415-18)。

Kd、Kon和Koff还可以使用表面等离子体共振(SPR)确定，例如，通过使用BiacoreT100系统或使用动力学排斥测试(kinetic exclusion assay)(例如，)测量。SPR计数在例如Hahnfeld等.使用SPR生物传感器确定动力学数据(Determination of KineticData Using SPR Biosensors),Molecular Diagnosis of Infectious Diseases(2004)中综述。在典型的SPR实验中，将一个相互作用物(靶标或靶向剂)固定在流动池中的SPR活性、金涂覆的玻璃载玻片，并且将包含另一个相互作用物的样品导入以流过该表面。当给定频率的光照射在表面上时，金的光学反射率的改变表示结合，以及结合的动力学。动力学排斥试验是确定亲和力优选的方法，除非另有说明。该技术在Darling等.,试验和药物研发技术(Assay and Drug Development Technologies)第二卷,序号6647-657(2004)中描述。

结合亲和力还可以通过将生物素化的相互作用物与链霉亲和素(SA)传感器芯片锚固确定。然后，将另一个相互作用物与芯片接触并检测，例如，如Abdessamad等(2002)Nuc.Acids Res.30:e45中所述。

还提供了编码本文所述抗体或其结合片段的多核苷酸，其至少包含重链或轻链CDR或两者，例如，编码包含本文所述的互补决定区的重链或轻链可变区或区段的多核苷酸，表达盒(例如，连接编码序列的启动子)或表达载体。在一些实施方式中，针对表达优化多核苷酸序列，例如，针对哺乳动物表达优化或针对在特定细胞类型中的表达优化。

III.治疗方法

本文所述抗-αvβ8抗体(包括其αvβ8结合片段，标记的抗体，免疫偶联物，药物组合物等)以及如本文所述结合αvβ8和αvβ6两者的抗体或其结合片段可以用于检测、治疗、缓解或预防慢性阻塞性肺病(COPD)和哮喘，炎症性肠病，炎症性脑自身免疫疾病，多发性硬化症，脱髓鞘疾病(如横贯性脊髓炎，德维克病(Devic's disease)，格林-巴利综合征)，神经炎症，肾脏疾病或胶质瘤，关节炎，纤维化紊乱，如气道纤维化，特发性肺纤维化，非特异性间质性肺炎，感染后肺纤维化，弥漫性肺泡损伤，胶原-血管疾病相关肺纤维化，药物诱导的肺纤维化，矽肺，石棉相关性肺纤维化，呼吸毛细支气管炎，呼吸性细支气管炎，间质性肺病，脱屑性间质纤维化，隐源性组织性肺炎，慢性过敏性肺炎，药物相关性肺或肝纤维化，肾纤维化和肝纤维化(如酒精，药物使用，脂肪性肝炎，病毒感染(如乙型肝炎或丙型肝炎)，胆汁淤积等诱导的以及癌症，包括但不限于腺癌，鳞状细胞癌，乳腺癌和癌症的生长和转移。相应地，本文所述抗体和药物组合物可以合适的剂量给予患有或疑似患有上文所列疾病中的任一种的人，以缓解或治疗疾病中的一种或其至少一种症状。

并不旨在限制本发明的范围，在一些实施方式中，据信本文所述的抗体部分通过在抗原呈递细胞中引起MHCII表达增加起作用，参见例如，图36A-F。

此外，本文所述的抗-αvβ8抗体(包括其αvβ8结合片段，标记的抗体，免疫偶联物，药物组合物等)可以用于治疗、缓解或预防病毒感染(例如，通过刺激免疫应答)。特异性结合αvβ8并且阻断一个或多个αvβ8配体结合的其他抗体，例如WO2011/103490或WO2015/026004中所述的那些，也可以用于治疗、缓解或预防病毒感染。示例性的病毒感染包括但不限于，甲肝、乙肝(HBV)和丙肝(HCV)，单纯疱疹病毒(例如，HSVI、HSVII)，HIV和流感感染，其所有都通过Treg介导的免疫抑制增强(Keynan,Y,等,Clin Infect Dis.2008年4月1日；46(7):1046-52。

还提供了药物组合物，其包含公开的抗-αvβ8抗体或抗原结合分子以及如本文所述结合αvβ8和αvβ6的抗体或其结合片段，其中任一个可以与药学上可接受的运载体一起配制。组合物可以额外地包含适合用于治疗或预防给定紊乱的其他治疗剂。药学上的运载体可增强或稳定组合物，或促进组合物的制备。药学上可接受的运载体包括溶剂，分散介质，包被，抗细菌剂和抗真菌剂，等渗剂和吸收延迟剂以及生理上相容的等等。

本文所述的药物组合物可以通过本领域已知的多种方法给予。给药途径和/或模式取决于希望的结果而各不相同。优选地是，给药是静脉内，肌肉内，腹膜内或皮下，或在靶位点附近给予。药学上接受的运载体应当适于静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、鼻内、吸入、脊柱或表皮给予(例如，通过注射或输注)。取决于给予途径，该活性化合物(即抗体)可被包被在某材料中，以保护该化合物免受酸和可能使该化合物失活的其它自然条件的作用。

可将抗体(单独或与其它合适成分组合)制成气溶胶制剂(即，其可以是“雾化”形式)以通过吸入方式给予。可将该气溶胶制剂置于加压的可接受推进剂中，如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气等。

在一些实施方式中，药物组合物是无菌的，并且是液体的。例如，通过应用涂覆材料如卵磷脂、通过在分散体的情况中维持所需的粒度以及通过使用表面活性剂，可以维持合适的流动性。在许多情况下，组合物中可优选地包含等张剂，例如糖，多元醇如甘露醇或山梨醇，和氯化钠。可在组合物中包含延迟吸收的试剂(如单硬脂酸铝和明胶)以获得可注射组合物延长的吸收。

本发明的药物组合物可以根据本领域熟知和常规操作的方法制备。药学上可接受的运载体部分取决于需给予的特定组合物以及用来给予组合物的特定方法。因此，存在本发明的药物组合物的多种合适制剂。配制抗体并确定合适剂量和时间表的适用方法存在于例如，Remington:The Science and Practice of Pharmacy(《雷明登：药物科学与实践》),第21版,费城的科学大学编著,Lippincott Williams和Wilkins(2005)；和Martindale:TheComplete Drug Reference(《马丁代尔大药典》),Sweetman,2005,伦敦:药物出版社(Pharmaceutical Press)，和Martindale,Martindale:The Extra Pharmacopoeia(《马丁代尔附加药典》),第31版,1996,Amer制药协会(Amer Pharmaceutical Assn)，和Sustainedand Controlled Release Drug Delivery Systems(《缓释和控释药物递送系统》),J.R.Robinson编著,马塞尔-德克公司(Marcel Dekker,Inc.),纽约,1978，其各自通过引用纳入本文。优选在GMP条件下制备药物组合物。通常，在本发明的药物组合物中采用治疗有效剂量或有效剂量的抗-αvβ8抗体。通过本领域技术人员已知常规方法将抗-αvβ8抗体配制成药学上可接受的剂量形式。给药方案经调节能提供所需应答(例如治疗应答)。在确定治疗性或预防性有效剂量中，可以给予低剂量，然后逐步增加直到所需应答实现并且具有最小或没有不希望的副作用。例如，可以是一次推注，按时间分次给药或根据治疗情况的紧急性成比例地降低或增加剂量。尤其有利的是配制成单位剂型的胃肠道外组合物以便于给药和剂量均一性。本文中单位剂型指作为单个剂量用于待治疗对象的物理上离散的单位，每个单位包含预定量的活性化合物与所需药物运载体，该预定量经测算能够产生所需治疗效果。

可改变本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平，从而获得就具体患者、组合物与给药方式有效实现所需治疗应答且对患者无毒性的活性成分量。所选剂量水平取决于多种药代动力学因素，包括所用的本发明特定组合物或其脂、盐、酰胺的活性，给药途径，给药时间，所用特定化合物的排泄速率，治疗持续时间，与所用特定组合物联用的其他药物、化合物和/或材料，所治疗病人的年龄、性别、体重、病症、整体健康状况和病史以及类似因素。

在一些实施方式中，药学组合物包含抗-αvβ8抗体或抗体结合分子(例如，其阻断配体结合或阻断通过配体结合的活化)和第二药剂的混合物。并不旨在限制本发明的范围，注意的是发明人已经发现胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)在急性和慢性HBV的小鼠模型中是病毒清除的诱导物，并且因此能够用于组合TSLP与本文所述的抗体用于抗病毒处理。此外，发明人已经发现，OX40激动剂与本文所述抗体组合有效刺激对HBV的免疫应答。

作为在药物组合物中混合抗-αvβ8抗体和第二药剂的替代，抗-αvβ8抗体和第二药剂可以在时间范围(例如，在3、2或1天内，或彼此之间在24、13、6或3小时内)内分开地给予有此需要的人。

IV.诊断组合物和应用

整联蛋白αvβ8表达在纤维母细胞，星状细胞，软骨细胞，活化的巨噬细胞以及T和B细胞的亚组上。整联蛋白αvβ8在COPD和肺纤维化中的纤维母细胞中增加表达，并且可以用作纤维母细胞增加量的替代标志物。因此，当前公开的抗体可以广泛地应用于生物成像策略以检测纤维炎性(fibroinflammatory)过程。当前公开的治疗性和诊断性抗体可以适用于：炎性肠病(IBD)，慢性阻塞性肺病(COPD)，哮喘，关节炎，肝纤维炎性紊乱，酒精性肝损伤，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，病毒性肝炎和原发性胆汁性肝硬化(PBC)，肝移植后的移植物排斥，自身免疫性肝炎，自身免疫紊乱，红斑狼疮，硬皮病，皮肌炎，大疱性类天疱疮，寻常型天疱疮，肺纤维化紊乱，炎性脑自身免疫疾病，多发性硬化症，脱髓鞘疾病，神经炎症，肾疾病，肾小球肾炎，肝细胞癌(HCC)，腺癌，鳞状细胞癌，神经胶质瘤，黑色素瘤，前列腺癌，卵巢癌，子宫癌和乳腺癌。

发明人已经发现，β8和PD-L1表达负相关。因此，本文所述的抗-αvβ8抗体可以用作PD-L1表达的标志物，并且任选地用于选择最有可能受益于抗-αvβ8处理的个体。

本文所述的抗-αvβ8抗体(包括其αvβ8结合片段，亲和力成熟的变体或scFv)可以用于体内或体外诊断(例如，使用获自个体的生物样品)。除了上述抗体，具有下述CDR的抗体可以用于诊断和预后：重链CDR SEQ ID NO:299，SEQ ID NO:301和SEQ ID NO:303；和轻链CDR SEQ ID NO:307，SEQ ID NO:309和SEQ ID NO:311。在一些实施方式中，抗体具有含有SEQ ID NO:297的重链可变区和SEQ ID NO:305的轻链可变区。或者，可以使用具有图53所示重链可变区或重链CDR以及来自图54所示对应序列的轻链可变区或轻链CDR的任何抗体。抗体在检测已经被固定的样品，例如福尔马林固定的样品中，包括例如福尔马林固定的石蜡包埋的(FFPE)生物(组织或细胞)样品中的αvβ8特别有用。

当将抗体用于检测或诊断时，抗体通常与可检测的标记物偶联或以其他方式关联。关联可以是直接地，例如，共价键，或间接的，例如，使用二级结合剂，螯合剂或接头。

可以向个体提供标记的抗体以确定目的治疗的适用性。例如，标记的抗体可以用于检测疾病区域内的整联蛋白β8密度。对于旨在靶向TGFβ或αvβ8活性的治疗(以减少TGFβ或αvβ8活性)，β8的密度相对于非疾病组织通常较高。标记的抗体可以还指示疾病区域可以进行治疗。因此，可以基于成像结果可以选择患者进行治疗。可以使用标准成像技术(例如，CT扫描，MRI，PET扫描等)完成解剖学表征，如确定癌症的精确边界。这类体内方法可以使用当前公开的抗体中的任一种进行。

当前公开的抗体中的任一种还可以用于体外诊断或监测方法，例如，使用来自患者样品的细胞或组织。在一些实施方式中，使用了标记的F9(或β8结合片段或亲和力成熟的变体)，因为其可以结合固定的细胞以及未固定的细胞。

在一些实施方式中，诊断性抗体是单链可变区片段(scFv)。完整的抗体(例如，IgG)可以用于放射免疫疗法或靶向递送治疗剂，因为它们显示出高摄取和保留。在一些情况中，完整mAb循环中的持续性可以导致高背景(Olafsen等(2012)Tumour Biol.33:669-77；Cai等(2007)J Nucl Med.48:304-10)。通常具有约25kD分子量的ScFv被肾脏快速地排泄，但是单价的并且可以具有较低的亲和力。单价性的问题可以藉由先进抗体工程改造(如本文所示)克服，其中亲和力可以改善到低nM至pM范围。这类抗体具有能够用作成像剂的足够短的半衰期并且具有对组织靶向合适的结合特征(Cortez-Retamozo等(2004)CancerRes.64:2853-7)。如本文所示，我们创建了4F1的非常高亲和力scFV抗体衍生物6B9，其被称之为F9，其可以被转化成人源化的scFV平台。这些改善的抗体没有阻断功能，并且因此可以用于与靶向β8的治疗剂组合。

包含本文所述抗体的诊断剂可以包含本领域已知的任何诊断剂，例如，在下述参考文献中提供的那些：Armstrong等,Diagnostic Imaging(《诊断成像》),第5版,布莱克威尔出版社(Blackwell Publishing)(2004)；Torchilin,V.P.,编著,Targeted Delivery ofImaging Agents(《成像剂的靶向递送》),CRC出版社(1995)；Vallabhajosula,S.,Molecular Imaging:Radiopharmaceuticals for PET and SPECT(《分子成像：PET和SPECT的放射性药物》),斯普林格出版社(Springer)(2009).术语“可检测试剂”、“可检测部分”、“标记物”、“成像剂”等术语在本文作为同义词使用。诊断剂可以通过各种方式检测，包括作为提供和/或增强可检测信号的物质。可检测信号包括但不限于，发射γ的信号、放射性信号、回波信号、光学信号、荧光信号、吸收性信号、磁性信号或断层扫描信号。用于对诊断剂进行成像的技术包括但不限于，单光子发射计算机断层扫描(SPECT)，磁共振成象(MRI)，光学成像，正电子发射断层扫描(PET)，计算机断层扫描(CT)，x射线成像，γ射线成像等。PET是特别敏感的并且定量的，因此对表征体内纤维化过程有价值(Olafsen等(2012)TumourBiol.33:669-77；Cai等(2007)J Nucl Med.48:304-10)。这在伴随诊断之外是有用的，并且通常可用于在任何治疗方案期间诊断，临床分期和跟踪纤维化患者。

放射性同位素可以被纳入本文所述的诊断剂，并且包括发射γ射线、正电子、β和α粒子和X射线的放射性核素。合适的放射性核素包括但不限于：²²⁵Ac、⁷²As、²¹¹At、¹¹B、¹²⁸Ba、²¹²Bi、⁷⁵Br、⁷⁷Br、¹⁴C、¹⁰⁹Cd、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、¹⁸F、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、³H、¹⁶⁶Ho、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I、¹³⁰I、¹³¹I、¹¹¹In、¹⁷⁷Lu、¹³N、¹⁵O、³²P、³³P、²¹²Pb、¹⁰³Pd、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、⁴⁷Sc、¹⁵³Sm、⁸⁹Sr、^99mTc、⁸⁸Y和⁹⁰Y。在某些实施方式中，放射性试剂可以包括¹¹¹In-DTPA，^99mTc(CO)₃-DTPA，^99mTc(CO)₃-ENPy2，^62/64/ ⁶⁷Cu-TETA，^99mTc(CO)₃-IDA和^99mTc(CO)₃三胺(环状或线性)。在其他实施方式中，试剂可以包括DOTA和其具有¹¹¹In，¹⁷⁷Lu，¹⁵³Sm，^88/90Y，^62/64/67Cu或^67/68Ga的各种类似物。在一些实施方式中，如下述参考文献所提供，通过纳入与螯合物连接的脂质，如DTPA-脂质，可以标记纳米颗粒：Phillips等,威利跨学科评论:纳米医学和纳米生物学(Wiley InterdisciplinaryReviews:Nanomedicine and Nanobiotechnology),1(1):69-83(2008)；Torchilin,V.P.和Weissig,V.编著.Liposomes(《脂质体》)第2版:牛津大学出版社(Oxford Univ.Press)(2003)；Elbayoumi,T.A.和Torchilin,V.P.,Eur.J.Nucl.Med.Mol.Imaging 33:1196–1205(2006)；Mougin-Degraef,M.等,Int’l J.Pharmaceutics344:110-117(2007)。

在一些实施方式横纵，诊断剂可以包括螯合剂，其结合例如金属离子以用于各种诊断成像技术。示例性的螯合剂包括但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)，[4-(1,4,8,11-四氮杂环十四烷-1-基)甲基]苯甲酸(CPTA)，环己二胺四乙酸(CDTA)，乙烯双(氧乙烯次氮基)四乙酸(EGTA)，二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)，柠檬酸，羟乙基乙二胺三乙酸(HEDTA)，亚氨基二乙酸(IDA)，三乙烯四胺六乙酸(TTHA)，1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四(亚甲基磷酸)(DOTP)，1,4,8,11-四氮杂环十四烷-1,4,8,11-四氮杂环十四烷(TETA)，1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)，N¹,N¹-双(吡啶-2-基甲基)乙烷-1,2-二胺(ENPy2)和其衍生物。

在一些实施方式中，诊断剂可以与二级结合配体关联，或者结合在与显色底物接触后产生有色产物的酶(酶标签)。合适酶的示例包括尿素酶，碱性磷酸酶，(辣根)氢过氧化物酶和葡糖氧化酶。二级结合配体包括，例如，本领域所知的生物素和亲和素或链霉亲和素化合物。

在一些实施方式中，诊断剂可以包括光学试剂，如荧光剂、磷光剂、化学发光剂等。多种试剂(如染料、探针、标签或指示剂)是本领域已知的并可用于本发明。(参见例如英杰公司(Invitrogen)，The Handbook—A Guide to Fluorescent Probes and LabelingTechnologies(《手册——荧光探针和标记技术指导》)，第10版(2005))。荧光剂可包括各种有机和/或无机小分子或各种荧光蛋白及其衍生物。例如，荧光剂可包括但不限于：花青、酞菁、卟啉、吲哚菁、若丹明、吩噁嗪、苯基呫吨、吩噻嗪、吩硒嗪、荧光素、苯并卟啉、方酸菁、二吡咯并嘧啶酮、并四苯、喹啉、吡嗪、咕啉、克酮酸、吖啶酮、菲啶、若丹明、吖啶、蒽醌、硫族吡喃鎓(chalcogenopyrylium)类似物、绿素类、萘菁、次甲基染料、方菁染料、偶氮化合物、甘菊蓝、氮杂甘菊蓝、三苯基甲烷型染料、吲哚、苯并吲哚、吲哚羰花青、苯并吲哚羰花青、和BODIPY^TM衍生物。

实施例

提供以下实施例以说明而非限制所要求的发明。

实施例1.构建复合抗体C6D4

用重组人整联蛋白αVβ8蛋白质免疫ITGB-8敲除小鼠。生成了大约5000个杂交瘤，并且筛选它们在酶联免疫吸收试验(ELISA)中结合αvβ8的能力。结果通过细胞染色确认，藉由使用转化生长因子-β(TGF-β)生物试验确定阻断功能。针对经工程改造缺少β8头部结构域异性决定环(SDL)的αvβ8的重组形式筛选阻断抗体。然后，选择不结合该工程改造的αvβ8的抗体。

然后，分离来自8个杂交瘤的可变(V)基因，进行测序并发现包括独特但是相关的7个V_H和11个V_K基因。图1和图2提供了这些V_H和V_K基因产物的序列信息。序列信息使用Kabat编号方案。在诱变条件下扩增各V基因，并且通过混合扩增的cDNA和使用剪接重叠构建单链可变片段(scFV)文库。使用设计成补充表达双重V_H和V_L载体的兔IgG的引物，将文库作为扩增模板。测序>100个随机克隆后鉴定11个不同的V_H基因和16个不同的V_K基因，并以165个不同组合转染到293细胞中。通过细胞染色和FACS分析，并且通过测量对表达αvβ8的CHO细胞的结合亲和力，确定产生最佳结合物的8对。这8对各自包含选自RSDLVH-1，RSDLVH-3和RSDLVH-16的V_H结构域；以及选自RSDLVK-1，RSDLVK-6，RSDLVK-10和RSDLVK-13的V_K结构域；这些序列示于图1和图2。

然后，使用这8个兔IgG V_H/V_K对产生新的诱变scFV酵母展示文库，将其插入酵母表达文库载体。鉴定来自该选择和亲和力成熟步骤的2个高亲和力结合物，并指定为克隆29和克隆44。然后，由克隆29和44的基因产生随机突变诱变文库，并且由这些文库，选择并确定较高亲和力结合克隆C6和D4(图1和图2)。鉴定C6 V_H和D4 V_K的互补决定区(CDR)中的突变，并将两条链组合以产生复合抗体C6D4(图1和图2)。

实施例2.C6D4结合亲和力的表征

使用动力学排除试验测量C6D4的结合亲和力。测定鼠IgG2a的亲和力为832pM。作为重组IgG，发现C6D4导致αvβ8介导的TGF-β活化基本上完全的阻断。该结果表明，比使用B5的阻断更好，所述B5是αvβ8介导的TGF-β活化的变构抑制剂(Minagawa,等,Sci Trans Med.2014年6月18日；6(241):241ra79)。/>

C6D4还显示出阻断细胞与固定的潜伏TGF-β的粘附。在8赖氨酸核心(多重抗原呈递肽，BioSyn公司)上合成具有序列DDHGRGDLGRLK(SEQ ID NO:713)的肽(其对应人TGF-β3的aa 257-268(NP_003230))，并且以1ug/ml用于涂覆96孔ELISA板。将与碱性磷酸酶框内融合的αvβ8短截的分泌形式(Gline SE,等J Biol Chem.2004Dec 24；279(52):54567-72)与Mab以指定浓度添加。结果(图19)显示了C6D4相对B5的优势，以及C6D4相较于克隆13C12的改善。表格以μg/ml给出IC50值。

此外，在8赖氨酸核心(多重抗原呈递肽，BioSyn公司)上合成具有序列DDHGRGDLGRLK(SEQ ID NO:713)的肽(其对应人TGF-β3的aa 257-268(NP_003230))，并且以0.51ug/ml用于涂覆96孔ELISA板。使用αvβ8稳定转染的CHO lec细胞在RT下与涂覆肽的孔结合30分钟。未结合的细胞用PBS洗去。以指定浓度添加Mab C6D4。结果表示为用结晶紫染色后检测到的染色细胞(OD590)。结果(图20)显示，C6D4几乎完全阻断细胞与肽的粘附。

实施例3.C6D4结合结构的表征

目前对整联蛋白结构的理解面临着必须调和整联蛋白构象两种截然相反的观点的障碍。一方提出整联蛋白一直是弯曲的。另一方认为，整联蛋白在活化时必需经历从弯曲的构象向延伸的构象的显著的构象“弹簧刀(switchblade)”改变，打开整联蛋白的“头部(headpieces)”至完全功能化。这种整联蛋白延伸模型提出了生物学中最大的三级和四级结构重排之一。

由于与结构生物学中常规使用的技术相关的妥协和缺点，这种构象极端的证明受到了阻碍。传统的晶体学产生具有原子分辨率的晶体结构，但依赖于可以形成晶体的条件和构象。在整联蛋白的情况下，通过晶体学仅看到紧密的闭合构象。或者，在活化条件下整联蛋白的尺寸排阻色谱(SEC)已经证明，尺寸的大的变化与整联蛋白延伸一致。使用负染色电子显微镜(EM)研究已经直接观察到构象中的这类变化，但是处于低分辨率下。因此，整联蛋白配体结合和整联蛋白激活机制的原子细节仍未解决。

单粒子低温电子显微镜(cryoEM)可以用于确定没有晶体的生物大分子的结构，因此提供了一种替代方案，可以避免了处于延伸形式的整联蛋白进行结晶的障碍。最近的硬件和软件开发表明，单粒子cryoEM能够提供传统上难以研究的分子的原子级结构理解。因为单粒子cryoEM不需要形成晶体，并且允许在不受晶体填充力或高盐结晶缓冲剂影响的天然功能构象中进行检查，所以该方法特别适合于理解难以结晶的蛋白质或整联蛋白-配体或整联蛋白-Fab复合物的结构。这里，我们使用单粒子cryoEM来解决结构生物学中一些最大的谜团，整联蛋白活化的结构机制，以及相反地，整联蛋白抑制剂的作用机制。

之前公开的αvβ6的潜伏TGF-β精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽的晶体结构显示，TGF-βRGD在αvβ6结合口袋中的定位以及TGF-βRGD的R的定位接近αv头部。新的复合抗体C6D4结构的冷冻电子显微镜检现在已经产生了结合αvβ8的C6D4 Fab的约4-5埃分辨率结构。为了生成与C6D4复合的αvβ8的结构，通过尺寸排阻色谱法分离纯化的重组αvβ8和C6D4Fab复合物，然后在液氮中冷冻在网格上。选择通过电子显微镜捕获的约61,000个单独粒子图像的图像以产生3D电子密度图，使用具有相似CDR的整联蛋白αvβ3、αIIbβ3和Fab的现有蛋白质数据库(Protein Data Bank)(PDB))条目将其用于构建与C6D4 Fab复合的αvβ8的模型。

图13A和13B提供了显示C6D4 Fab与整联蛋白αvβ8在头部结构域处结合的cryoEM结果。图13A和13B以进一步的细节显示了这种C6D4和αvβ8之间的结合。藉由图6的C6D4抗体足迹，可以看出，C6D4主要结合β8的SDL环，产生与β8α1和α2螺旋上和αv的头部上其他二级结构的额外接触。综上，结合构象的这些部分导致配体结合口袋几乎完全的阻塞。与C6D4直接相互作用的αv头部和β8α1和α2螺旋的残基在图7中进一步叙述。

阐明的结构显示，D4 V_L的CDR1结构域在先前公开的αvβ6-RGD晶体结构中靠近与RGD的R的接触位点结合。因为αv亚基为αvβ6和αvβ8共有，所以这一发现表明，D4 V_L的CDR1环被最佳地定位，以在空间上抑制潜伏TGF-β的RGD的R与αvβ8的结合。SDL的另一侧是疏水性结合口袋，其具有紧随RGD之后的L，形成RGDL肽。已经证明该疏水性口袋作为用于潜伏TGF-βRGD肽与αvβ6结合的二级结合位点是必不可少的。参见例如，Shi M,等,Nature 474(7351):343-9(2011)。也已经证明了L或RGDL对潜伏TGF-βRGD肽与αvβ6的结合是必不可少的(参见例如，Ozawa,A,等J Biol Chem.291(22):11551-65(2016)。现在已经证明C6 V_H的CDR3环以基本上覆盖位于β8亚基头部结构域上的疏水性结合口袋的方式结合。此外，发现C6D4与β8的SDL大量地相互作用。图8显示了C6D4表位与整联蛋白αvβ8的配体结合口袋的重叠，其显示了其如何可以放置整联蛋白与潜伏TGF-β的关联并且因此活化潜伏TGF-β。重要地是，所有具有C6D4的接触残基在所有哺乳动物物种的αvβ8中被认为是保守的。这与变构抑制剂B5相反，其仅针对人αvβ8显著地反应。

实施例4.C6D4对肺癌存活影响的建模

用于肺癌研究的同基因模型非常有限。Lewis肺癌(LLC)模型是当前广泛使用的唯一的可繁殖的同基因模型肺癌模型。LLC是由携带原发性Lewis肺癌的C57BL小鼠的肺建立的细胞系。该细胞系是高度致癌性的，并且用于模拟原发性肿瘤切除后产生的肺转移。以此方式，模型与临床情景非常相似。这是用于评估化疗剂体内效力的一个有用的模型。LLC模型的一个优势是肿瘤细胞是免疫相容的，不同于用于大多数其他异种移植模型中的免疫缺陷型种族。LLC模型被用作临床前模型在将长春瑞滨用于临床试验之前评估长春瑞滨。将LLC细胞系皮下注射到C57B6小鼠的皮下组织，并且在2周内原发性肿瘤可再生产地达到达到10mm的尺寸。原发性肿瘤切除后，肺转移在2-4周出现。该模型中的主要终点是体重减少和肺转移数量。

图9提供了表明C6D4在LLC模型中增加存活的结果。小鼠在原发性肿瘤去除时(第0天)接受腹膜内注射C6D4小鼠IgG2a或SV5同种型对照(7mg/kg)，然后每周一次直到体重减少超过20％。阳性结果表明首次证明抗-β8抗体抑制肺癌转移。C6D4在该模型中抑制肺癌转移的事实表明其作为预防肺癌转移的治疗的潜能。因为该抗体在癌症中的机制有可能涉及抑制免疫抑制Treg细胞的功能或发育，C6D4可以具有对任何数量其中Treg细胞起免疫抑制作用的癌症的广泛应用。

图28提供了本文用于评估肺转移的LLC模型的示意图。LLC肿瘤细胞系与宿主C57B/6株是同系的。该细胞系不表达整联蛋白αvβ6或αvβ8。LLC.1细胞系已经通过小鼠传代一次并且由肺转移再生。2周后，皮下注射的肿瘤(1x10⁶)LLC.1细胞形成大的肿瘤结节(约1cm)。手术去除肿瘤，并且当动物体重减少20％时将它们安乐死。

将之前段落中所述LLC模型肺转移实验重复十一(11)次，并且发现11次实验各自的结果是相似的(数据未示出)。图29A和29B提供了来自11次实验的数据，表明C6D4在LLC模型中增加存活的结果。在各示例中，小鼠在原发性肿瘤去除时(第0天)接受腹膜内注射C6D4鼠IgG2a或SV5同种型对照(7mg/kg)，然后每周一次直到体重减少超过20％。结果表明抗-β8抗体(C6D4)抑制肺癌转移。图29A中的存活曲线表示因为局部复发或体重减少而安乐死的小鼠。图29B中，将由于局部复发而去除的动物排除。尸体解剖时，体重减少20％的动物在其肺中全部具有转移性植入物。在存活的动物中，注射C6D4抗体长达90天。有趣地是，尸体剖检在检测的组织中并未揭示任何不正常的炎症反应。C6D4该模型中抑制肺癌转移的事实表明其作为预防肺癌转移的治疗的潜能。因为该抗体在癌症中的机制有可能涉及抑制免疫抑制Treg细胞的功能或发育，C6D4可以具有对任何数量其中Treg细胞起免疫抑制作用的癌症的广泛应用。

还评估了C6D4相对于肿瘤生长和肿瘤免疫应答的作用。对于接受同种型对照(B5，其仅与人b8反应，而不与小鼠b8反应)或C6D4(其与小鼠和人交叉反应)两次注射的小鼠中切除的LLC.1原发性肿瘤，记录原发性肿瘤重量并测量尺寸。将肿瘤酶促分解并分离和计数免疫细胞。进行流式细胞术，并使用Percoll梯度离心由肿瘤细胞分离肿瘤浸润免疫细胞。图30A-F是具有相似结果的3个实验中的一个(余下的数据未示出)。在各实验中，各测试组中n大于或等于10。

实施例5.使用黑素瘤疾病模型C6D4对转移性疾病的作用

本文测试了用于研究转移的模型，其利用B16-F10肿瘤细胞系。B16-F10高转移性肿瘤细胞系与宿主C57B/6株是同系的。该细胞系不表达整联蛋白αvβ6或αvβ8。用鼠ITGb8转染B16-F10细胞系，并在G418中选择以及两轮分选后，鉴定αvβ8高表达的细胞汇集。当经由尾静脉静脉内注射时，在14天内出现可见的肺转移。图31中提供了该段落所述转移性疾病黑素瘤模型的示意图。在第0天、第7天和第14天以7mg/kg三次注射(i.p.)同种型对照(SV5)或C6D4后，在第18天将小鼠安乐死。图34A显示了前部和后部视图中代表性肺的图像；对可见的肺转移进行计数，并且评估与转移相关的全部肺表面区域。图34B显示了转移的总数量，而图34C显示了转移性黑色素瘤占肺总表面积的百分比。

实施例6.C6D4对乙肝感染和疾病结果的建模

因为乙肝病毒(HBV)不感染小鼠，研究通常聚焦于使用转基因和敲除小鼠模型来研究HBV免疫。在该模型中，肝中的病毒抗原被暴露于免疫系统，所述免疫系统不是免疫耐受的并且之前并未暴露于HBV。目标是模拟在最初HBC感染期间通常将发生的免疫事件。此外，该模型允许操控这样的免疫系统，所述免疫系统被暴露于病毒，能够识别和区分导致慢性肝炎或疾病结果的趋化因子、细胞因子和细胞。

为了产生该模型，通过与免疫缺陷型株回交消除HBV转基因小鼠驻留的(耐受的)免疫系统(Mombaerts等(1992)Nature 360:225和Mombaerts等(1992)Cell 68:869)。该育种策略在不存在耐受的免疫系统的情况下产生在肝中表达高水平病毒抗原(HBV-Env)或病毒(HBV-复制)的动物(Baron等(2002)Immunity 16:583)。将来自野生型小鼠的HBV-天然同基因脾细胞(完整的脾脏的相等物)转移到这些小鼠中以重建免疫系统，模拟最初感染点，并且测试细胞和可溶性介导物在HBV病理学中的重要性。仔细地检测免疫应答和病理学结果已经揭示了该模型在模拟或修饰急性和慢性HBV感染中的实用性(Publicover等(2011)J.Clin.Investigation 2011:1154和Publicover等(2013)J.Clin.Investigation 123:3728)。以此方式，小鼠模型提供了实验系统以检测促进HBV持续保留的经改变的免疫致敏的可逆性，并且测试免疫调节治疗。

图10中示出的结果表明C6D4在慢性感染小鼠模型中诱导HBV病毒清除并且不导致肝炎。在图中，HepB表面抗原(HBSag)是完整HBV的替代物。HBSag的清除是HBV清除的标志物。ATL是被监测以测量肝炎症和损失的肝酶。ALT的正常范围是15-40。可以从数据中看出，C6D4抗体在4个慢性HBV小鼠模型中的3个中促进HBsAg清除。

实施例7.复合抗体4F1F9的表征和构建

使用来自杂交瘤克隆6B9和4F1的V基因产生酵母展示scFV文库，从该文库选择新的克隆6B9.1，然后使用6B9.1的V基因和随机突变产生另一酵母展示scFV文库，将来自该第二文库的16个亲和力成熟的变体的结合亲和力表征，并且将2个克隆C4和D10转化成兔IgG形式，两者在福尔马林固定的石蜡包埋的组织中与人β8较弱地反应。然后由这2种抗体的可变区产生第三诱变scFV文库并且插入噬菌体展示载体并且在噬菌体表面作为scFv展示(图11A-B)。诱导的噬菌体文库针对固定的石蜡包埋的人αvβ8筛选。进行多轮选择，并且在采集最终克隆F9(图11A-B)并且转化成IgG形式用于体外表征之前，将15个噬菌体克隆详细地表征。

发现处于IgG形式的克隆F9在福尔马林固定的石蜡包埋的组织中有效工作。克隆可以适合用作伴随诊断，例如以确定表达αvβ8的肿瘤或通过表达αvβ8的免疫细胞(即，树突细胞，Treg细胞)浸润的肿瘤作为生物成像试剂，用于测量β8特异性肿瘤摄取和用于告知C6D4治疗决策。F9抗体还可以用于使用ELISA在液体或组织裂解物样品中检测αvβ8。

实施例8.抑制和/或处理幽门螺旋杆菌病原性的方法

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori(H.pylori))细菌感染大约一半世界人口的胃，并且与消化性溃疡疾病、胃癌和胃淋巴瘤(MALToma)相关。幽门螺旋杆菌的病原性连接于IV型分泌系统和细胞毒性相关基因病原性岛cagPAI。cagPAI蛋白转录自编码约31个基因的幽门螺旋杆菌DNA的40kb伸展，其中一个cagL包含RGDL整联蛋白结合基序。认为该RGDL基序将作为整联蛋白的受体，从而使幽门螺旋杆菌菌毛可以与胃上皮细胞相互作用，然后穿透细胞膜，并且致癌毒素cagA可以被注射到细胞中(参见Kwok,等,Nature,,2007449,862-866，和Barden,等,Journal of Molecular Biology,2015,427(6)B部分,1304-1315)。我们已经使用抗-β8克隆F9来染色人胃活检，并且已经发现整联蛋白αvβ8由胃隐窝上皮细胞表达，并且该表达在患者中随着由于幽门螺旋杆菌感染导致的慢性活动性胃炎增加(参见图21和22)。整联蛋白αvβ6和αvβ8的胞外域已经显示经由RGDL依赖性机制优先地结合CagL，但是其他结合RGD的整联蛋白(αvβ1、αvβ3、αvβ5和α5β1)没有(参见Barden,等,Gastroenterology,2010,138(3)。之前，人们认为α5β1整联蛋白是胃上皮细胞上的主要CagL受体(参见Kwok,等,Nature,2007,449(7164):862-6。我们已经发现，整联蛋白αvβ6和αvβ8以相似的效率结合CagL，而αvβ3整联蛋白不结合CagL(参见图23)。αvβ8介导的与CagL的结合可以通过C6D4有效地阻断(参见图24)。αvβ8整联蛋白还介导与CagL的强细胞粘附(参见图25)并且CagL可以竞争αvβ8介导的与TGF-β3RGD肽的细胞粘附，这表明αvβ8结合GagL的RGD位点(参见图26)。C6D4可以有效地阻断与CagL的细胞粘附(参见图27)。

阻断αvβ8介导的CagL与C6D4或其衍生物(即IgA、单体或二聚体)的结合可以用作通过阻断致癌毒素CagA进入来抑制幽门螺旋杆菌病原性(即，消化性溃疡疾病、胃癌或MALToma)的方法。此外，通过抑制Treg功能并且增加针对幽门螺旋杆菌、胃癌和MALToma更加有效的免疫力，C6D4可以提供针对幽门螺旋杆菌自身或来自其间接的致癌和毒性作用的保护。这类作用可以通过在鼠模型中的发现预测，其中已经证明幽门螺旋杆菌免疫逃逸通过树突细胞诱导的Treg偏移(skewing)和Th17抑制介导(参见Kao,等,Gastroenterology,2010 138(3):1046-54)。因为已经证明Treg发育和功能需要整联蛋白αvβ8介导的TGF-β活化(参见Worthington,等,Immunity,2015,第42卷,第5期,第903–915页)，使用C6D4或其衍生物抑制αvβ8介导的TGF-β活化将通过增强对幽门螺旋杆菌自身的免疫力同时增加抗肿瘤的免疫力保护免于幽门螺旋杆菌感染的致癌作用。以C6D4或其衍生物阻断αvβ8介导的TGF-β活化可以阻断Treg功能的另一种可能的机制是通过抑制Treg向幽门螺旋杆菌感染的胃粘膜迁移。趋化因子CCL20是Treg和树突细胞有效的趋化因子，其是Treg分化所需要的，并且αvβ8介导的TGF-β活化提供了对于CCL20产生和功能的主要贡献(参见Cook,等,Gut(2014),63(10):1550-9；Brand,等,J Biol Chem,2015,290(23):14717-28，Hashimoto,等JImmunol 195(3):1182-90.)。因此，以C6D4或其他抗-αvβ8抗体单独，与针对其他CagL结合整联蛋白(α5β1、Act-1或αvβ6、3G9)的抗体组合或与标准幽门螺旋杆菌疗法(即，铋盐，质子泵抑制剂，大环内酯类，阿莫西林，甲硝唑)组合治疗患者将不仅治疗幽门螺旋杆菌的致病机制，还将增强免疫力以更有效地消除幽门螺旋杆菌，而同时保护和/或治疗慢性幽门螺旋杆菌感染的恶性并发症。

实施例9.构建复合的人源化抗体C6D4

图46、图50和图51显示了各种C6D4人源化克隆的序列比对。图50和51还提供了人源化C6D4相关克隆的重链和轻链氨基酸共有序列。C6D4抗体人源化聚焦于重链和轻链的V结构域框架区。进行人源化过程以包括3个标准：(1)抗体(HuC6D4)的人源化形式应当具有与鼠形式C6D4对αvβ8相似的或改善的亲和力和特异性；(2)HuC6D4抗体框架区中最后的氨基酸应当尽可能地接近人种系形式的翻译的抗体框架区，人种系形式被选为靶基因家族(VH1/VK3)；(3)处于IgG或其他样式的最终人源化形式(HuC6D4)的生产水平应当可以放大到工业应用。

我们基于人抗体选择的种系(VH1/VK3)和UCSF开发的人源化算法和抗体人药物开发其他公开的信息设计了鼠C6D4潜在的人源化引导(lead)形式，并且主要考虑了IgG一般结构，VH-VL界面，IgG折叠包装，表面可及性，游标区影响，人源化热点和其他危险因素。

这些设计的引导形式使用酵母展示合成并表达为scFV。测量的Kd显示了与亲本鼠C6D4 scFv大约2倍的减少。

随后，使用人源化引导形式作为起始点产生基于酵母scFv展示文库的随机突变，并且进行FACS分选由展示的酵母文库采集αvβ的最佳结合物。选择3个突变的候选物(C6D4-RGD1、C6D4-RGD2和C6D4-RGD3)以IgG形式进行进一步测试(参见例如图38C和图39)。

实施例10.人源化C6D4和CD64-RGD3结合亲和力的表征

图39显示了以RGD1、RGD2或RGD3突变体(如图8所公开)表达为兔IgG的C6Vh的表面染色实验。与表达αvβ8的人Cho细胞的结合表达为C6D4结合的百分比。该结果显示，相较于野生型C6D4、RGD1突变体或RDG2突变体，RGD3突变体具有对αvβ8显著较高的相对结合。

图40显示了以D4 Vk或RGD1、RGD2或RGD3突变体(如图8所公开)表达为兔IgG的C6Vh的表面染色实验。示出与表达人αvβ8的Cho细胞或表达αvβ6的SW480细胞的结合。相对结合被定义与非转染的Cho或SW480细胞的染色相比较的染色。该结果显示，相较于野生型C6D4、RGD1突变体或RDG2突变体，C6D4-RGD3突变体具有对αvβ6显著较高的相对结合。

图41显示了以D4 Vk或RGD1、RGD2或RGD3突变体(如图8所公开)表达为兔IgG的C6Vh对各种av-整联蛋白的结合实验。整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6和αvβ8购自R&D系统公司(R&D systems)。将所有的整联蛋白以2mg/ml涂覆于ELISA板上，用BSA封闭，并允许抗体结合。用抗-兔HRP检测C6D4和RGD3的结合。结果相对于用抗-av(克隆8B8)涂覆的对照孔示出，其中av-整联蛋白以识别非重叠表位(L230-生物素)的另一种av-抗体检测，然后进行SA-HRP。结果显示，RGD3突变体具有对αvβ6显著较高的结合，而C6D4具有对αvβ8显著较高的结合。

还显示了C6D4和C6D4-RGD3与αvβ8亲和结合。人源化C6D4或C6D4-RGD3(框架和CH1是人的；铰链和CH2-3是鼠的)在指定的浓度下被固定于ELISA板。作为阴性对照，以相同的浓度用抗-SV5涂覆一些孔。用BSA封闭非特异性的结合位点。向各孔添加重组αvβ8胞外域(0.5ug/ml)，并在结合缓冲液(1mM Ca⁺⁺和Mg⁺⁺)中结合和洗涤后，用生物素化的抗-αv(8b8)检测和用SA-HRP检测结合的αvβ8。该实验结果以特异性结合显示(减SV5对照)(图47)。结果显示，C6D4和C6D4-RGD3通过亲和结合αvβ8优于鼠C6D4和C6D4-RGD3抗体。

实施例11.人源化C6D4-RGD3结合结构的表征

如实施例3所示，建模和CryoEM图可以用于提供关于抗体结合的结构信息。图48提供了结合αvβ8配体口袋的RGD3的图。该图源自与αvβ8复合的C6D4，并且与和αvβ8复合的C6D4-RGD3比较。当与和LTGFβ1复合的αvβ6的头部比较时，密度图显示了LTGFB1的RGD残基位置与C6D4-RGD3的RGD残基的相似性。红线表示RGD3+αvβ8密度图，黑色表示C6D4+αvβ8密度图；金色表示C6D4 Fab；绿色表示αv亚基；蓝色表示β8亚基。

图49是显示C6D4-RGD3的CDR Vk1环占据αvβ8的配体结合口袋的cryoEM图。这里，基于源自cryoEM的密度图，C6D4 Fab-αvβ8的模型(图49A)与RGD3-αvβ8图(图49B)比较或处于覆盖(图49C)。将抗-αv 11D12V2 Fab用于增加复合物的分子量并且协助颗粒取向。结果显示，C6D4和C6D4-RGD3复合物具有高度相似的定位。

实施例12.具有RGD的各种环长度并且侧接序列Pro-TGF-β3的D4-RGD3突变体的表征

潜伏-TGF-β1和潜伏-TGF-β3的R-G-D序列后存在两亲性α螺旋。D4的3个工程改造的形式(RGD1、RGD2、RGD3)中，仅有RGD3包含两亲性螺旋。因此，我们工程改造了包含RGD部分并且侧接Pro-TGF-β3序列的各种环，以确定环长度是否改变各克隆的亲和力、特异性或产生。因为Vh没有被改变，我们将所有新的构建体克隆到了C6D4鼠IgG表达载体的CDRL1区并且将各种新的D4-RGD3-突变体转染到293细胞中。10天后，使用鼠IgG ELISA比较蛋白质表达(以相对表达水平在以下提供的表格中示出)。将整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6或αvβ8(R&D系统公司)在室温下涂覆于Immulon 4HBX ELISA板(赛默飞世尔科技公司(ThermoScientific))1小时，然后用5％牛血清白蛋白溶液(西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich))在4℃下封闭过夜。在室温下将具有各种RGD3突变抗体的上清液以1/10稀释施加于孔1小时。用抗-小鼠IgG-HRP抗体(GE医疗公司(GE Healthcare))检测结合整联蛋白的抗体，并用TMB底物(皮尔斯公司(Pierce))显示。通过以0-4的强度(0表示没有明显的结合；4表示强烈的结合)将结合定量，并将结果标准化至表达。从下表提供的数据可以看出，不同的CDR_L1交换到Vk D4中显示不同的结合特异性。因此，我们鉴定了具有双特异性(例如，RGD3-2和RGD3-3)或三特异性(例如，RGD3-7和RGD3-8)结合特异性的多个突变体。

实施例13.C6D4诱导Th1偏倚并增加产生CD8 IFN-γ的细胞

用注射10⁶Lewis肺癌(LLC)肿瘤细胞注射17只C57B/7小鼠，并用抗-SV5(同种型对照)IP注射8只小鼠或者用C6D4注射9只小鼠(两组以7mg/kg)。在第7天重复Mab注射，并在第11天收获肿瘤。通过酶消化和Percoll梯度离心由肿瘤分离肿瘤浸润淋巴细胞，并对CD45、TCRb、CD4、CD8染色，和IFNg表面捕获试验。将活CD45+细胞门选，并将B220、Ly6g、CD11c、CD11b阴性、TCRb阳性细胞分隔成CD4、CD8、IFN-g阳性子集。该实验的结果在图54A-54D中示出。显示的是百分比，*p<0.05，**p<0.01。

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可获得本发明的多种修改形式和变化形式而不背离本发明的精神和范围，这对于本领域技术人员而言是显见的。本文所述的具体实施方式仅起示例作用，且不意于构成任何方式的限制。本说明书和实施例应仅视为示例性的，本发明真正的范围和精神由所附权利要求书来说明。

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Claims

1.一种抗体，其特异性结合人αvβ8并且其包含重链互补决定区(CDR) SEQ ID NO:299，SEQ ID NO:301和SEQ ID NO:303；和轻链CDR SEQ ID NO:307，SEQ ID NO:309和SEQ IDNO:311。

2.如权利要求1所述的抗体，其中抗体包含重链可变区，其包含SEQ ID NO:297。

3.如权利要求1所述的抗体，其中抗体包含轻链可变区，其包含SEQ ID NO:305。

4.如权利要求1所述的抗体，其中抗体包含重链可变区，其包含SEQ ID NO:297，且包含轻链可变区，其包含SEQ ID NO:305。

5.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是单链可变片段(scFv)。

6.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是IgG。

7.如权利要求1所述的抗体，其中，所述抗体连接可检测标记物。

8. 一种在样品中检测人avβ8存在、不存在或量的非诊断性方法，所述方法包括：

将权利要求1-7任一所述的抗体与所述样品接触，和

检测或定量所述抗体与所述样品的结合。

9.如权利要求8所述的方法，其中，所述样品是福尔马林固定的样品。

10.如权利要求8所述的方法，其中所述样品是福尔马林固定的石蜡包埋的(FFPE)样品。

11.如权利要求8所述的方法，其中所述样品是癌症样品。

12.如权利要求1-7任一所述的抗体的用途，用于制备试剂，所述试剂用于在样品中检测人avβ8存在、不存在或量的方法，所述方法包括：

将所述抗体与所述样品接触，和

检测或定量所述抗体与所述样品的结合。

13.如权利要求12所述的用途，其中，所述样品是福尔马林固定的样品。

14.如权利要求13所述的用途，其中所述样品是福尔马林固定的石蜡包埋的(FFPE)样品。

15.如权利要求12所述的用途，其中所述样品是癌症样品。