CN109825571A - 抑郁症检测生物标记物及其试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用于检测抑郁症的生物标记物FLOT1基因、相关的试剂盒、检测方法，以及其在检测抑郁症(尤其是检测首发抑郁症)中的应用。其中，所述方法包括确定外周血白细胞中FLOT1的表达水平，并通过FLOT1的表达水平表明抑郁症的存在。本发明首次证实了外周血白细胞中FLOT1基因mRNA表达水平可以诊断抑郁症，其诊断结果的真阳性率(灵敏度)大于80％，假阳性率为23.33％(特异性大于75％)，表明其诊断结果灵敏度高、特异性强、以及准确度高，具有很高的诊断价值，可以有效地辅助临床诊断。

Description

抑郁症检测生物标记物及其试剂盒

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及用于检测抑郁症的生物标记物FLOT1基因、相关的试剂盒、检测方法，以及其在检测抑郁症(尤其是检测首发抑郁症)中的应用。

背景技术

重度抑郁症(major depressive disorder，MDD)是一种常见的以心境障碍为主体表现的精神疾病，其核心症状包括：情绪低沉、兴趣丧失、生活无望、睡眠失调及焦虑。作为世界第四大疾病，重度抑郁症(major depressive disorder，MDD)目前至少影响全球2亿人的生活。由于患病率高、发病早且复发率高的特点，它给社会带来沉重的负担。

一直以来，抑郁症的诊断是以临床症状诊断为主。尽管对于这些临床症状的诊断已有比较权威的国际通用的《精神疾病诊断及统计手册》(The Diagnostic andStatistical Manual of Mental Disorders，DSM)和《国际疾病分类》(the InternationalClassification of Diseases,ICD)的诊断标准为依据，然而，该诊断主要还是需要依靠评估据量表和医生经验。大量研究表明，抑郁症可由遗传和环境因素共同所致，其中遗传因素约占40％。随着全基因组关联研究(genome-wide association studies，GWAS)在抑郁症领域大量开展，迄今为止研究发现44个与抑郁症相关的风险变异点。然而，MDD相对低的遗传性，以及现有的与MDD相关的候选基因(例如SIRT1和LHPP)所显示出的显著的种族差异性，给使用生物生物标记物诊断抑郁症带来了困难。因此，开发一种具有普适性并且精准的生物分子标记物试剂盒辅助抑郁症诊断显得尤为重要。

浮舰蛋白-1(Flotillin-1，FLOT1)是脂筏的标记蛋白，在进化上高度保守，其功能尚未被完全确定。研究表明，FLOT1不仅参与正常细胞的生理活动，也可能与疾病的发生有关，例如，FLOT1的高表达，常见于多种肿瘤细胞、以及阿尔茨海默症(Alzheimer disease，AD)和帕金森综合症(Parkinson’s disease，PD)等神经退行性疾病患者的神经胶质细胞中，并与2型糖尿病风险增大有关(王旭研等，“Flotillin-1的生理功能及其在疾病中的作用研究进展”，生物技术通讯，Jan.2018,Vol.29No.1：105-108)。近期研究还发现，与正常人样本相比，FLOT1在MDD患者大脑和外周血样本中持续地被高表达，从而表明了FLOT-1的失调可能与MDD有关(Zhong等，https://www.nature.com/articles/s41386-019-0345-4)。与此同时，近期研究(Reisinger等，“Flotillin-1interacts with the serotonintransporter and modulates chronic corticosterone response”，Genes BrainBehav.2019Feb，18(2)：e12482)还表明，FLOT1能够作为与被用作抗抑郁药物的血清素转运蛋白(serotonin transporter，SERT)相互作用的显著候选蛋白，在与MDD相关的蛋白质-蛋白质相互作用中具有附加潜力，即：在慢性皮质酮(corticosterone，CORT)诱导的SERT调节和类抑郁症行为中被用作缓解因子。因此，由于抑郁症属于受到多因素起源影响的精神疾病，并且任何医学筛查或诊断测试的两个关键性的可评估的衡量是敏感性和特异性，现有技术虽指出了FLOT1在抑郁症发生时的表达水平的变化，并无法确切地证明FLOT1适用于抑郁症的医学筛查或诊断测试。目前，尚未见应用人体外周血中FLOT1的表达水平检测抑郁症(尤其是检测首发抑郁症)的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中的不足，开发一种具有普适性并且灵敏度高、特异性强、准确度高的抑郁症检测生物标记物及抑郁症检测试剂盒辅助抑郁症诊断，以克服抑郁症诊断依靠诊断量表和医生经验所带来的不确定性。

为了实现上述目的，本发明提供了用于检测抑郁症的生物标记物，为如SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或其组合所示的FLOT1基因片段。尤其地，该生物标记物可以用于检测首发抑郁症。

在本发明的一个实施方式中，用于扩增FLOT1基因片段SEQ ID NO.1的特异性引物对1为：

Human-FLOT1-qPCR-F1:5'CTCGAACAGCTCAAGTCCAAAAAG 3'(SEQ ID No.4)；

Human-FLOT1-qPCR-R1:5'GCCATCTCGATCTCACTCAGGTACT 3'(SEQ ID No.5)。

在本发明的另一个实施方式中，用于扩增FLOT1基因片段SEQ ID NO.2的特异性引物对2为：

Human-FLOT1-qPCR-F2:5'CTGGAGGGCGTGTCTTTGTC 3'(SEQ ID No.6)；

Human-FLOT1-qPCR-R2:5'GCCAGTGACTGAGATGGGGAC 3'(SEQ ID No.7)。

本发明还提供了一种抑郁症检测试剂盒，用于检测FLOT1的表达水平从而检测抑郁症(尤其是首发抑郁症)的存在。优选地，检测的样品是外周血。尤其地，该抑郁症检测试剂盒为首发抑郁症检测试剂盒。

在本发明的一个实施方式中，该抑郁症检测试剂盒是基于PCR的检测试剂盒，包括上述特异性引物对1、2中的一组或者两组。

进一步地，该抑郁症检测试剂盒是定量PCR(qPCR)检测试剂盒，其还包括荧光定量反应液、内参基因。优选地，该内参基因为ACTB基因。

在本发明的另一个实施方式中，该抑郁症检测试剂盒包括上述用于检测抑郁症的生物标记物或者其编码蛋白的探针。优选地，该抑郁症检测试剂盒包括cDNA基因芯片或者蛋白芯片。

本发明还提供了用于确定FLOT1基因的表达水平的试剂或者装置在制备用于检测抑郁症(尤其是首发抑郁症)的方法的试剂盒中的用途，其中，所述方法包括确定样品中FLOT1的表达水平，且FLOT1的表达水平表明所述抑郁症(尤其是首发抑郁症)的存在。优选地，检测的样品是外周血。作为本发明的优选实施例，所述用于检测抑郁症(尤其是首发抑郁症)的方法是通过定量PCR方法进行检测。

本发明还提供了一种检测抑郁症(尤其是首发抑郁症)的方法，其至少包括如下步骤：

1)提取外周血白细胞中的mRNA并合成cDNA；

2)扩增FLOT1基因序列；

3)定性或者定量地确定外周血白细胞中FLOT1的表达水平与标准品显著不同。

本发明实现的有益效果是：

1)本发明首次证实了FLOT1基因的表达水平可以用于检测抑郁症(尤其是首发抑郁症)，尤其是外周血白细胞中FLOT1基因mRNA表达水平可以检测抑郁症(尤其是首发抑郁症)。在本发明实施例中所例举的qPCR检测方法表明了，其检测结果的真阳性率(灵敏度)大于80％(在实施例1中为82.35％，在实施例2中为94.12％)，假阳性率为23.33％(特异性大于75％，在实施例1中为76.67％，在实施例2中为100％)，表明其检测结果灵敏度高、特异性强、以及准确度高。

2)由于本发明的检测数据来源于首发抑郁症患者样本，因而不受到患者因服用抗抑郁药物而对检测结果的影响，这使得本发明中所确定的生物标记物FLOT1基因和检测试剂盒具有很高的诊断和临床应用价值，可以有效地辅助临床诊断。

附图说明

图1为具有如SEQ ID No.1所示序列的FLOT1扩增产物和ACTB基因qPCR引物特异性电泳图。

图2为具有如SEQ ID No.2所示序列的FLOT1扩增产物和ACTB基因qPCR引物特异性电泳图。

图3为实施例1样本中目标FLOT1基因和内参基因ACTB mRNA表达水平情况。

图4为实施例1的数据ROC分析图。

图5为实施例2样本中目标FLOT1基因和内参基因ACTB的mRNA表达水平情况。

具体实施方式

下面结合说明书附图及具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。

在本发明中，术语“首发抑郁症患者”是指，尚未服用过任何抗抑郁药物的抑郁症患者。

在本发明中，检测方法的准确性根据ROC(Zweig，M.H.和Campbell，G.，临床化学39(1993)561-577)来描述。ROC曲线图(ROC curves)是表示灵敏度/特异性的图，所述灵敏度/特异性对是通过在观察到的整个数据范围内不断变化判定阈值而获得。其中，ROC曲线图通过绘制完整判定阈值范围内的灵敏度与1-特异性曲线示出了两个分布间的重叠部分。y轴是灵敏度，或者定义为[(真阳性测试结果数)/(真阳性+假阴性测试结果数)]的真阳性率(True positive rate)。在疾病或病症情况中，这也被称为阳性。它仅由受影响的子群计算得到。x轴是假阳性率(False positive rate)，或是1-特异性[定义为：(假阳性结果数)/(真阴性+假阳性结果数)]。这是特异性的一个指标，并完全由未受影响的子群计算得到。因为真、假阳性率是通过两个不同子群的测试结果而完全独立地计算，ROC曲线图与样品中的患病率无关。ROC曲线图中的每一个点表示与一个特定判定阈值对应的一个灵敏度/特异性对。一个具有优秀鉴别力的测试(两个结果的分布没有重叠)的ROC曲线图穿过左上角，其中真阳性率为1.0或100％(完美的灵敏度)，并且假阳性率为0(完美的特异性)。一个没有鉴别力的测试的理论图(两个群的结果分布相同)是一条从左下角到右上角的45°斜线。大多数曲线图落在这两个极端之间。定性地，曲线图离左上角越近，测试的整体准确性越高。

本发明提供了一种抑郁症(尤其是首发抑郁症)的检测方法，该方法通过测定被检测者外周血样品中的生物标记物FLOT1基因的表达水平以及其与对照组的该基因表达水平的比较，来检测抑郁症(尤其是首发抑郁症)的存在。与对照组相比，被检测者样品中的生物标记物FLOT1基因的表达水平发生显著的变化，则表明患者患有抑郁症(尤其是首发抑郁症)。

其具体检测方法可以包括如下步骤：1)提取外周血白细胞中的mRNA并合成cDNA；2)扩增FLOT1基因序列；3)定性或者定量地确定外周血白细胞中FLOT1基因的表达水平与标准品显著不同。其中，本领域技术人员可以知晓，步骤3)中可以是任何能够用于确定靶基因的表达水平与标准品显著不同的方法，例如：定量PCR，基因芯片等。

根据本发明，FLOT1基因片段被用于检测抑郁症的生物标记物，其可以为如SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或其组合所示的基于片段。

本发明还提供了一种抑郁症检测试剂盒，用于检测FLOT1的表达水平从而检测抑郁症(尤其是首发抑郁症)的存在。优选地，检测的样品是外周血。

根据本发明，该抑郁症检测试剂盒包括以下特异性引物对的一组或者两组作为特异性引物试剂：

用于扩增FLOT1基因片段SEQ ID NO.1的特异性引物序列对1为：

Human-FLOT1-qPCR-F1:5'CTCGAACAGCTCAAGTCCAAAAAG 3'(SEQ ID No.4)；

Human-FLOT1-qPCR-R1:5'GCCATCTCGATCTCACTCAGGTACT 3'(SEQ ID No.5)。

用于扩增FLOT1基因片段SEQ ID NO.2的特异性引物序列对2为：

Human-FLOT1-qPCR-F2:5'CTGGAGGGCGTGTCTTTGTC 3'(SEQ ID No.6)；

Human-FLOT1-qPCR-R2:5'GCCAGTGACTGAGATGGGGAC 3'(SEQ ID No.7)。

进一步地，该抑郁症检测试剂盒还包括：荧光定量反应液和作为内参基因的ACTB基因。

接下来，将以qPCR检测试剂盒为例，具体地描述基于FLOT1基因的mRNA表达水平检测抑郁症的方法及其用途：

下面的实施例中所使用的抑郁症首发患者和正常人血液样品的来源分别为：

抑郁症首发患者血液样品来源于云南省第一人民医院心理科。其中，抑郁症首发患者的诊断是由专业心理医师依据DSM-5标准进行。被诊断为患有抑郁症的首发患者必须在两周内具有以下至少5个症状：1)情绪低落；2)失去兴趣或愉快；3)重量显著变化；4)失眠或者过度睡眠；5)精神运动激动或迟缓；6)低能量或疲劳；7)感觉毫无价值；8)思考和集中的难度；9)反复思考死亡。样品不包括药物滥用或其他精神疾病的案例。17项汉密尔顿抑郁量表(HAMD17)用于评估MDD的抑郁症水平。

MDD案例的诊断正常人血液样品来源于云南省第一人民医院体检中心。样品不包括患有身体疾病和精神障碍的案例。

所有纳入人群均签署知情同意书。

实施例1

在实施例1中，使用基于qPCR的检测试剂盒检测了34例首发抑郁症患者和30例正常人(样本信息详见表1)血液样品中外周血白细胞的FLOT1基因mRNA表达水平，从而确定了使用qPCR检测试剂盒基于FLOT1基因mRNA表达水平检测首发抑郁症的诊断标准。其中，以人FLOT1基因cDNA序列(SEQ ID No.1)为靶序列，qPCR引物对1为引物试剂，并以人ACTB基因cDNA序列(SEQ ID No.8)作为内参基因。

表1：实施例1样本信息情况

具体包括如下步骤：

1、外周血白细胞分离：

1)将肝素抗凝管收集2mL全血转移至15mL离心管中，加入三倍体积红细胞裂解液(天根,RT-122)混匀，冰上裂解10min，且期间每2分钟颠倒混匀；

2)在4℃下4000rpm离心5min后弃上清，再往15mL离心管加入三倍体积红细胞裂解液混匀，冰上裂解10min，且期间每2分钟颠倒混匀；

3)在4℃下4000rpm离心5min后弃上清；

4)用移液器吸取1mL TRIzol^TMLS Reagent(Invitrogen,10296028)将沉淀吹散，并将其转移至无RNA酶1.5mL EP管中，室温裂解5min，待下一步mRNA提取。

2、mRNA提取(在无RNA酶环境进行)：

1)取200μL氯仿加入上述1.5mL EP管中，剧烈震动15s，室温孵育3min后4℃12000g离心15min；

2)小心取上清400μL至新的无RNA酶1.5mL EP管中，并加入等量的异丙醇混匀，室温孵育10min后4℃12000g离心10min；

3)吸弃上清，加入1mL75％乙醇，涡旋5s后4℃7500g离心5min；

4)吸弃上清，在无RNA酶环境中干燥RNA沉淀；

5)加入适量无RNA酶水溶解RNA沉淀，55℃溶解10min后混匀，测mRNA浓度及纯度；

3、cDNA合成：

取1μg上述RNA加入无RNA酶PCR管中，用无RNA酶水补足7μL,按照PrimeScript^TMRTreagent Kit with gDNAEraser(Takara,RR047A)说明书中gDNA Eraser体系进行配置混匀，在PCR仪器上用42℃反应2min后4℃保存，接下来按照反转录体系进行配置混匀，在PCR仪器上用37℃反应15min后接着85℃反应5s最后4℃保存。

4、qPCR检测FLOT1基因mRNA的表达水平：

1)引物及其特异性检测

对应于人FLOT1基因cDNA序列(SEQ ID No.3)(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/CCDS/CcdsBrowse.cgi？REQUEST＝CCDS&DATA＝CCDS4688)，使用如下qPCR引物对1，获得具有如SEQ ID No.1所示序列的扩增产物：

Human-FLOT1-qPCR-F1:5'CTCGAACAGCTCAAGTCCAAAAAG 3'(SEQ ID No.4)；

Human-FLOT1-qPCR-R1:5'GCCATCTCGATCTCACTCAGGTACT 3'(SEQ ID No.5)。

对应于人FLOT1基因cDNA序列(SEQ ID No.3)，使用如下qPCR引物对2，获得具有如SEQ ID No.2所示序列的扩增产物：

Human-FLOT1-qPCR-F2:5'CTGGAGGGCGTGTCTTTGTC 3'(SEQ ID No.6)；

Human-FLOT1-qPCR-R2:5'GCCAGTGACTGAGATGGGGAC 3'(SEQ ID No.7)。

对应于人ACTB基因cDNA序列(SEQ ID No.8)(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/CCDS/CcdsBrowse.cgi？REQUEST＝CCDS&DATA＝CCDS5341)，使用如下qPCR内参引物：

Human-actin-qPCR-F：5'CATGTACGTTGCTATCCAGGC 3'(SEQ ID No.9)；

Human-actin-qPCR-R：5'CTCCTTAATGTCACGCACGAT 3'(SEQ ID No.10)。

采用试剂Taq DNA Polymerase from Takara(Code number:R001A)

PCR体系

PCR反应程序

电泳检测：采用TAE电泳缓冲液制备1.2％琼脂糖胶进行电泳20min后用凝胶成像仪对具有序列SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的扩增产物进行检测，分别见图1和图2，结果显示引物特异性很好。在此，本领域技术人员应该知晓，对于均具有优良特异性的qPCR引物对1和qPCR引物对2，两者针对相同靶基因的扩增产物的不同不会对qPCR检测结果带来实质性的影响。因此，本实施例1中后续步骤的操作，将以qPCR引物对1为例。

2)qPCR检测FLOT1mRNA水平体系及程序

采用试剂：TB Green^TMPremix Ex Taq^TMII(Tli RNaseH Plus)(Takara,RR820A)采用仪器：QuantStudio^TM12K Flex(Applied Biosystems)instrument

PCR体系

qPCR反应程序

3)数据分析：本实验采用相对定量分析方法。每个样品做三个复孔，结果取三个复孔的平均CT值。△Ct＝目的FLOT1平均CT值-内参基因ACTB平均CT值；△△Ct＝△Ct抑郁症首发-△Ct正常人；相对表达量＝log2^(-△△Ct)，计算FLOT1的相对表达量。数据用R软件进行ROC分析，根据ROC曲线及曲线下面积(AUC)评估目标lncRNA诊断的敏感性和特异性以及计算最佳cut off值用于后续验证。

4)抑郁症首发患者外周血白细胞中FLOT1基因mRNA表达水平的诊断cut off值确定

在本实施例测试集样本中qPCR检测目标FLOT1基因和内参基因ACTB mRNA表达水平发现，与正常人相比，抑郁症首发患者外周血白细胞中FLOT1基因mRNA表达水平升高1.747±0.801倍(p＝0.0002)，见图3。

随后，用R语言对本实施例测试样品目标FLOT1基因和内参基因ACTB mRNA表达水平进行ROC曲线分析：

代码如下：

分析依据：

ROC曲线直观展示假阳性率(False positive rate，1-特异度)与真阳性率(Truepositive rate，敏感度)之间的关系情况：第一步：AUC即ROC曲线下的面积值介于0到1之间，AUC越接近1说明诊断效果越好；第二步：AUC的判断标准为：0.5以下不符合实际情况，0.5时说明完全无诊断价值，0.5～0.7之间诊断价值很低，0.7～0.9说明有一定诊断价值，0.9以上说明诊断价值高；第三步：最佳界值(约登指数最大值)是指诊断价值最大点，该值是对应真阳性率和真阴性率的最佳组合点。

分析结果：

本实施例的测试数据ROC分析图见图4，其AUC值为0.8157，说明具有一定诊断价值；其最佳分割值(best cut-off value)为1.3366(诊断阈值)，即若外周血白细胞中FLOT1基因mRNA表达水平是正常人的1.3366倍判断为抑郁症患者的真阳性率(True positiverate)为82.35％、假阳性率(False positive rate)为23.33％。因此，检测外周血白细胞中FLOT1基因mRNA表达水平具有较高的诊断价值。

实施例2

在实施例2中，使用在实施例1中的检测方法以及所获得的检测标准对另外一批测试集样本(首发抑郁症患者血液样品16例，正常人16例，)(样本信息详见表2)进行了检测，从而验证了外周血白细胞中FLOT1基因mRNA表达水平诊断抑郁症首发的准确性。

表2：实施例2样本信息情况

在实施例2中，使用qPCR检测目标FLOT1基因和内参基因ACTB mRNA表达水平发现，与正常人相比，抑郁症首发患者外周血白细胞中FLOT1基因mRNA表达水平显著升高2.857±0.470倍(p＝4.243*10^-11)，见图5。

由上表可以看出，在验证集中，外周血白细胞中FLOT1基因mRNA表达水平诊断抑郁症首发的准确度极高，达到96.875％。

上述实验表明：本发明提供的外周血白细胞中FLOT1基因mRNA表达水平诊断抑郁症首发的诊断性能优异，准确度和灵敏度高，特异性强。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

序列表

<110> 中国科学院昆明动物研究所

<120> 抑郁症检测生物标记物及其试剂盒

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 130

<212> DNA

<213> 人类(FLOT1 cDNA)

<400> 1

ctcgaacagc tcaagtccaa aaagatgcac ggattggaga agcagaggcc aagagagatg 60

ctgggatccg ggaagctaaa gccaagcagg aaaaggtgtc tgctcagtac ctgagtgaga 120

tcgagatggc 130

<210> 2

<211> 128

<212> DNA

<213> 人类(FLOT1 cDNA)

<400> 2

ctggagggcg tgtctttgtc ctgccctgca tccaacagat ccagaggatc tctctcaaca 60

cactgaccct caatgtcaag agtgaaaagg tttacactcg ccatggggtc cccatctcag 120

tcactggc 128

<210> 3

<211> 1284

<212> DNA

<213> 人类(FLOT1 cDNA)

<400> 3

atgtttttca cttgtggccc aaatgaggcc atggtggtct ccgggttctg ccgaagcccc 60

ccagtcatgg tggctggagg gcgtgtcttt gtcctgccct gcatccaaca gatccagagg 120

atctctctca acacactgac cctcaatgtc aagagtgaaa aggtttacac tcgccatggg 180

gtccccatct cagtcactgg cattgcccag gtaaaaatcc aggggcagaa caaggagatg 240

ttggcggccg cctgtcagat gttcctgggg aagacggagg ctgagattgc ccacattgcc 300

ctggagacgt tagagggcca ccagagggcc atcatggccc acatgactgt ggaggagatc 360

tataaggaca ggcagaaatt ctcagaacag gttttcaaag tggcctcctc agacctggtc 420

aacatgggca tcagtgtggt tagctacact ctgaaggaca ttcacgatga ccaggactat 480

ttgcactctt tggggaaggc tcgaacagct caagtccaaa aagatgcacg gattggagaa 540

gcagaggcca agagagatgc tgggatccgg gaagctaaag ccaagcagga aaaggtgtct 600

gctcagtacc tgagtgagat cgagatggcc aaggcacaga gagattacga actgaagaag 660

gccgcctatg acatcgaggt caacacccgc cgagcacagg ctgacctggc ctatcagctt 720

caggtggcca agactaagca gcagattgag gagcagcggg tgcaggtgca ggtggtggag 780

cgggcccagc aggtggcagt gcaggagcag gagatcgccc ggcgggagaa ggagctggag 840

gcccgggtgc ggaagccagc ggaagcggag cgctacaagc tggagcgcct agccgaggca 900

gagaagtccc aactaattat gcaggcggag gcagaagccg cgtctgtgcg gatgcgtggg 960

gaagctgagg cctttgccat aggggcccga gcccgagccg aggctgagca gatggccaag 1020

aaggcagaag ccttccagct gtaccaagag gctgctcagc tggacatgct gctagagaag 1080

ctgccccagg tggcagagga gatcagtggt cccttgactt cagccaataa gatcacactg 1140

gtgtccagcg gcagtgggac catgggggca gccaaagtga ctggggaagt actggacatt 1200

ctaactcgcc tgccagagag tgtggaaaga ctcacaggcg tgagcatctc ccaggtgaat 1260

cacaagcctt tgagaacagc ctga 1284

<210> 4

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ctcgaacagc tcaagtccaa aaag 24

<210> 5

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gccatctcga tctcactcag gtact 25

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

ctggagggcg tgtctttgtc 20

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

gccagtgact gagatgggga c 21

<210> 8

<211> 1128

<212> DNA

<213> 人类(ACTB cDNA)

<400> 8

atggatgatg atatcgccgc gctcgtcgtc gacaacggct ccggcatgtg caaggccggc 60

ttcgcgggcg acgatgcccc ccgggccgtc ttcccctcca tcgtggggcg ccccaggcac 120

cagggcgtga tggtgggcat gggtcagaag gattcctatg tgggcgacga ggcccagagc 180

aagagaggca tcctcaccct gaagtacccc atcgagcacg gcatcgtcac caactgggac 240

gacatggaga aaatctggca ccacaccttc tacaatgagc tgcgtgtggc tcccgaggag 300

caccccgtgc tgctgaccga ggcccccctg aaccccaagg ccaaccgcga gaagatgacc 360

cagatcatgt ttgagacctt caacacccca gccatgtacg ttgctatcca ggctgtgcta 420

tccctgtacg cctctggccg taccactggc atcgtgatgg actccggtga cggggtcacc 480

cacactgtgc ccatctacga ggggtatgcc ctcccccatg ccatcctgcg tctggacctg 540

gctggccggg acctgactga ctacctcatg aagatcctca ccgagcgcgg ctacagcttc 600

accaccacgg ccgagcggga aatcgtgcgt gacattaagg agaagctgtg ctacgtcgcc 660

ctggacttcg agcaagagat ggccacggct gcttccagct cctccctgga gaagagctac 720

gagctgcctg acggccaggt catcaccatt ggcaatgagc ggttccgctg ccctgaggca 780

ctcttccagc cttccttcct gggcatggag tcctgtggca tccacgaaac taccttcaac 840

tccatcatga agtgtgacgt ggacatccgc aaagacctgt acgccaacac agtgctgtct 900

ggcggcacca ccatgtaccc tggcattgcc gacaggatgc agaaggagat cactgccctg 960

gcacccagca caatgaagat caagatcatt gctcctcctg agcgcaagta ctccgtgtgg 1020

atcggcggct ccatcctggc ctcgctgtcc accttccagc agatgtggat cagcaagcag 1080

gagtatgacg agtccggccc ctccatcgtc caccgcaaat gcttctag 1128

<210> 9

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<212> DNA

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catgtacgtt gctatccagg c 21

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

ctccttaatg tcacgcacga t 21

Claims (10)

1.一种生物标记物，用于检测抑郁症，其特征在于，所述生物标记物为如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或其组合所示的基因片段。

2.如权利要求1所述的一种生物标记物，其特征在于，所述抑郁症是首发抑郁症。

3.一种抑郁症检测试剂盒，其特征在于，所述抑郁症检测试剂盒用于检测FLOT1的表达水平从而检测抑郁症的存在。

4.如权利要求3所述的抑郁症检测试剂盒，其特征在于，所述抑郁症检测试剂盒是基于PCR的检测试剂盒，包括如下特异性引物对1、特异性引物对2或其组合，其中：

特异性引物对1的序列为：

Human-FLOT1-qPCR-F1:5'CTCGAACAGCTCAAGTCCAAAAAG 3'(SEQ ID No.4)，

Human-FLOT1-qPCR-R1:5'GCCATCTCGATCTCACTCAGGTACT 3'(SEQ ID No.5)；

特异性引物对2的序列为：

Human-FLOT1-qPCR-F2:5'CTGGAGGGCGTGTCTTTGTC 3'(SEQ ID No.6)，

Human-FLOT1-qPCR-R2:5'GCCAGTGACTGAGATGGGGAC 3'(SEQ ID No.7)。

5.如权利要求4所述的抑郁症检测试剂盒，其特征在于，所述抑郁症试剂盒还包括荧光定量反应液、内参基因。

6.如权利要求5所述的抑郁症检测试剂盒，其特征在于，所述内参基因为ACTB基因。

7.如权利要求3所述的抑郁症检测试剂盒，其特征在于，所述抑郁症检测试剂盒为基于cDNA基因芯片的检测试剂盒，包括被用作探针的如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.3或其组合所示的FLOT1基因片段。

8.如权利要求3所述的抑郁症检测试剂盒，其特征在于，用于检测的样品是外周血。

9.用于确定FLOT1基因的表达水平的装置或者试剂在制备用于检测抑郁症的方法的试剂盒中的用途，其中，所述方法包括确定样品中FLOT1的表达水平，且FLOT1的表达水平表明所述抑郁症的存在。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述用于检测抑郁症的方法是通过定量PCR进行检测。