CN109820810A - 一种美容护肤干细胞制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物制剂技术领域，具体公开了一种美容护肤干细胞制剂及其制备方法。所述的美容护肤干细胞制剂包含如下重量份的原料组分：骨髓间充质干细胞冻干粉30～50份；类人胶原蛋白20～30份；海藻糖10～20份；表皮细胞生长因子1～3份；维生素E 1～3份；还原型谷胱甘肽1～3份；L‑谷氨酰胺0.5～1份；缬氨酸0.5～1份；精氨酸0.5～1份。本发明所述的美容护肤干细胞制剂是一种全新组成的生物类护肤品，具有较高的安全性；所述的美容护肤干细胞制剂同时还具有非常显著的去皱及紧肤活性，尤其是该美容护肤干细胞制剂还能再较长的时间内保持活性，具有广阔的市场前景。

Description

一种美容护肤干细胞制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于生物制剂技术领域，具体涉及一种美容护肤干细胞制剂及其制备方法。

背景技术

间充质干细胞是一种多能干细胞，它具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力；存在于如骨髓、脐带血和脐带、胎盘、脂肪等组织中。骨髓间充质干细胞是存在哺乳动物的骨髓基质中的一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群。间充质干细胞的临床研究已经在许多国家开展，随着间充质干细胞技术的日益成熟，我国也批准了多项临床试验。目前间充质干细胞主要应用于造血干细胞移植、组织损伤修复、自身免疫性疾病或作为基因治疗的载体。

但是，目前将间充质干细胞应用于美容护肤方面的应用并不太多，尤其是将骨髓间充质干细胞应用于美容护肤领域。目前现有的美容护肤品大多数是化学用品，随着女性开始注重护肤品的质量和安全性，生物来源的美容护肤品越来越受到青睐。因此，以骨髓间充质干细胞为原料制备一种美容护肤干细胞制剂具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种美容护肤干细胞制剂，所述的美容护肤干细胞制剂具有非常优异的紧肤除皱功效；此外，本发明所述的美容护肤干细胞制剂为生物来源的制剂，具有较高的安全性。

本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：

一种美容护肤干细胞制剂，其包含如下重量份的原料组分：

骨髓间充质干细胞冻干粉30～50份；类人胶原蛋白20～30份；海藻糖10～20份；表皮细胞生长因子1～3份；维生素E 1～3份；还原型谷胱甘肽1～3份；L-谷氨酰胺0.5～1份；缬氨酸0.5～1份；精氨酸0.5～1份。

优选地，所述的美容护肤干细胞制剂，其包含如下重量份的原料组分：

骨髓间充质干细胞冻干粉40～50份；类人胶原蛋白20～25份；海藻糖15～20份；表皮细胞生长因子1～2份；维生素E 2～3份；还原型谷胱甘肽1～2份；L-谷氨酰胺0.5～0.8份；缬氨酸0.5～0.8份；精氨酸0.5～0.8份。

最优选地，所述的美容护肤干细胞制剂，其包含如下重量份的原料组分：

骨髓间充质干细胞冻干粉40份；类人胶原蛋白25份；海藻糖15份；表皮细胞生长因子2份；维生素E 2份；还原型谷胱甘肽1份；L-谷氨酰胺0.5份；缬氨酸0.8份；精氨酸0.5份。

优选地，所述的骨髓间充质干细胞冻干粉通过如下方法制备得到：

(1)取动物骨髓间充质干细胞进行传代培养至18～22代；

(2)收集传代至18～22代的动物骨髓间充质干细胞，用DMEM(A)培养基继续培养16～32h；

(3)收集步骤(2)得到的干细胞以及上清液；并加入聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精，得干细胞混合液；

(4)将步骤(3)中制备得到的干细胞混合液先于-10～-15℃中预冷冻8～12h，然后于-60～-70℃中冷冻干燥48～60h即得所述的骨髓间充质干细胞冻干粉。

进一步优选地，所述的骨髓间充质干细胞冻干粉通过如下方法制备得到：

(1)取动物骨髓间充质干细胞进行传代培养至20代；

(2)收集传代至20代的动物骨髓间充质干细胞，用DMEM(A)培养基继续培养24h；

(3)收集步骤(2)得到的干细胞以及上清液；并加入聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精，得干细胞混合液；

(4)将步骤(3)中制备得到的干细胞混合液先于-12℃中预冷冻10h，然后于-65℃中冷冻干燥52h即得所述的骨髓间充质干细胞冻干粉。

进一步优选地，步骤(3)中聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精的重量用量与上清液的体积用量比为1～3g：3～8g：30～50mL。

进一步优选地，步骤(3)中聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精的重量用量与上清液的体积用量比为2g：5g：40mL。

本发明还提供一种上述美容护肤干细胞制剂的制备方法，其包含如下步骤：将骨髓间充质干细胞冻干粉作为A组分保存；将类人胶原蛋白、海藻糖、表皮细胞生长因子、维生素E、还原型谷胱甘肽、L-谷氨酰胺、缬氨酸以及精氨酸混合后作为B组分保存；使用时将A组分和B组分混合后加去离子水溶解即可。

有益效果：本发明提供了一种由骨髓间充质干细胞冻干粉、类人胶原蛋白、海藻糖、表皮细胞生长因子、维生素E、还原型谷胱甘肽、L-谷氨酰胺、缬氨酸以及精氨酸等全新组分组成的美容护肤干细胞制剂，该制剂具有非常优异的紧肤除皱功效；同时，本发明所述的美容护肤干细胞制剂为生物来源的制剂，具有较高的安全性。此外，在骨髓间充质干细胞冷冻过程中加入了聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精一方面可以增加骨髓间充质干细胞冻干粉在后续使用过程中的溶解性，尤其是在骨髓间充质干细胞冷冻过程中加入了聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精可以显著地延长骨髓间充质干细胞保存活性，由该方法制备得到的骨髓间充质干细胞冻干粉，其美容护肤活性在1年内并无衰减。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步解释本发明，然而本发明的保护范围并非仅仅局限于以下实施例。

实施例1美容护肤干细胞制剂的制备

重量份的原料组成：骨髓间充质干细胞冻干粉40份；类人胶原蛋白25份；海藻糖15份；表皮细胞生长因子2份；维生素E 2份；还原型谷胱甘肽1份；L-谷氨酰胺0.5份；缬氨酸0.8份；精氨酸0.5份；

所述的骨髓间充质干细胞冻干粉通过如下方法制备得到：(1)取动物骨髓间充质干细胞进行传代培养至20代；(2)收集传代至20代的动物骨髓间充质干细胞，用DMEM(A)培养基继续培养24h；(3)收集步骤(2)得到的干细胞以及上清液；并加入聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精，得干细胞混合液；所述聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精的重量用量与上清液的体积用量比为2g：5g：40mL；(4)将步骤(3)中制备得到的干细胞混合液先于-12℃中预冷冻10h，然后于-65℃中冷冻干燥52h即得所述的骨髓间充质干细胞冻干粉。

制备方法：将骨髓间充质干细胞冻干粉作为A组分保存；将类人胶原蛋白、海藻糖、表皮细胞生长因子、维生素E、还原型谷胱甘肽、L-谷氨酰胺、缬氨酸以及精氨酸混合后作为B组分保存；使用时将A组分和B组分混合后加去离子水溶解即可。

实施例2美容护肤干细胞制剂的制备

重量份的原料组成：骨髓间充质干细胞冻干粉50份；类人胶原蛋白20份；海藻糖20份；表皮细胞生长因子3份；维生素E 3份；还原型谷胱甘肽0.5份；L-谷氨酰胺1份；缬氨酸1份；精氨酸1份；

所述的骨髓间充质干细胞冻干粉通过如下方法制备得到：(1)取动物骨髓间充质干细胞进行传代培养至20代；(2)收集传代至20代的动物骨髓间充质干细胞，用DMEM(A)培养基继续培养24h；(3)收集步骤(2)得到的干细胞以及上清液；并加入聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精，得干细胞混合液；所述聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精的重量用量与上清液的体积用量比为2g：5g：40mL；(4)将步骤(3)中制备得到的干细胞混合液先于-12℃中预冷冻10h，然后于-65℃中冷冻干燥52h即得所述的骨髓间充质干细胞冻干粉。

制备方法：将骨髓间充质干细胞冻干粉作为A组分保存；将类人胶原蛋白、海藻糖、表皮细胞生长因子、维生素E、还原型谷胱甘肽、L-谷氨酰胺、缬氨酸以及精氨酸混合后作为B组分保存；使用时将A组分和B组分混合后加去离子水溶解即可。

实施例3美容护肤干细胞制剂的制备

重量份的原料组成：骨髓间充质干细胞冻干粉30份；类人胶原蛋白30份；海藻糖10份；表皮细胞生长因子1份；维生素E 1份；还原型谷胱甘肽0.5份；L-谷氨酰胺1份；缬氨酸0.2份；精氨酸1份；

所述的骨髓间充质干细胞冻干粉通过如下方法制备得到：(1)取动物骨髓间充质干细胞进行传代培养至22代；(2)收集传代至22代的动物骨髓间充质干细胞，用DMEM(A)培养基继续培养30h；(3)收集步骤(2)得到的干细胞以及上清液；并加入聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精，得干细胞混合液；所述聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精的重量用量与上清液的体积用量比为1g：7g：50mL；(4)将步骤(3)中制备得到的干细胞混合液先于-15℃中预冷冻8h，然后于-70℃中冷冻干燥48h即得所述的骨髓间充质干细胞冻干粉。

制备方法：将骨髓间充质干细胞冻干粉作为A组分保存；将类人胶原蛋白、海藻糖、表皮细胞生长因子、维生素E、还原型谷胱甘肽、L-谷氨酰胺、缬氨酸以及精氨酸混合后作为B组分保存；使用时将A组分和B组分混合后加去离子水溶解即可。

对比例1美容护肤干细胞制剂的制备

重量份的原料组成：骨髓间充质干细胞冻干粉40份；类人胶原蛋白25份；海藻糖15份；表皮细胞生长因子2份；维生素E 2份；还原型谷胱甘肽1份；L-谷氨酰胺0.5份；缬氨酸0.8份；精氨酸0.5份；

所述的骨髓间充质干细胞冻干粉通过如下方法制备得到：(1)取动物骨髓间充质干细胞进行传代培养至20代；(2)收集传代至20代的动物骨髓间充质干细胞，用DMEM(A)培养基继续培养24h；(3)收集步骤(2)得到的干细胞以及上清液得干细胞混合液；(4)将步骤(3)中制备得到的干细胞混合液先于-12℃中预冷冻10h，然后于-65℃中冷冻干燥52h即得所述的骨髓间充质干细胞冻干粉。

制备方法：将骨髓间充质干细胞冻干粉作为A组分保存；将类人胶原蛋白、海藻糖、表皮细胞生长因子、维生素E、还原型谷胱甘肽、L-谷氨酰胺、缬氨酸以及精氨酸混合后作为B组分保存；使用时将A组分和B组分混合后加去离子水溶解即可。

对比例1与实施例1的区别在于，对比例1在冷冻干燥之前的步骤(3)中不加入聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精。

对比例2美容护肤干细胞制剂的制备

重量份的原料组成：骨髓间充质干细胞冻干粉40份；类人胶原蛋白25份；海藻糖15份；表皮细胞生长因子2份；维生素E 2份；还原型谷胱甘肽1份；L-谷氨酰胺0.5份；缬氨酸0.8份；精氨酸0.5份；

所述的骨髓间充质干细胞冻干粉通过如下方法制备得到：(1)取动物骨髓间充质干细胞进行传代培养至20代；(2)收集传代至20代的动物骨髓间充质干细胞，用DMEM(A)培养基继续培养24h；(3)收集步骤(2)得到的干细胞以及上清液；并加入聚山梨酯，得干细胞混合液；所述聚山梨酯的重量用量与上清液的体积用量比为7g：40mL；(4)将步骤(3)中制备得到的干细胞混合液先于-12℃中预冷冻10h，然后于-65℃中冷冻干燥52h即得所述的骨髓间充质干细胞冻干粉。

制备方法：将骨髓间充质干细胞冻干粉作为A组分保存；将类人胶原蛋白、海藻糖、表皮细胞生长因子、维生素E、还原型谷胱甘肽、L-谷氨酰胺、缬氨酸以及精氨酸混合后作为B组分保存；使用时将A组分和B组分混合后加去离子水溶解即可。

对比例2与实施例1的区别在于，对比例1在冷冻干燥之前的步骤(3)中仅仅加入聚山梨酯，不加入羟丙基-β-环糊精。

对比例3美容护肤干细胞制剂的制备

重量份的原料组成：骨髓间充质干细胞冻干粉40份；类人胶原蛋白25份；海藻糖15份；表皮细胞生长因子2份；维生素E 2份；还原型谷胱甘肽1份；L-谷氨酰胺0.5份；缬氨酸0.8份；精氨酸0.5份；

所述的骨髓间充质干细胞冻干粉通过如下方法制备得到：(1)取动物骨髓间充质干细胞进行传代培养至20代；(2)收集传代至20代的动物骨髓间充质干细胞，用DMEM(A)培养基继续培养24h；(3)收集步骤(2)得到的干细胞以及上清液；并加入羟丙基-β-环糊精，得干细胞混合液；所述羟丙基-β-环糊精的重量用量与上清液的体积用量比为7g：40mL；(4)将步骤(3)中制备得到的干细胞混合液先于-12℃中预冷冻10h，然后于-65℃中冷冻干燥52h即得所述的骨髓间充质干细胞冻干粉。

制备方法：将骨髓间充质干细胞冻干粉作为A组分保存；将类人胶原蛋白、海藻糖、表皮细胞生长因子、维生素E、还原型谷胱甘肽、L-谷氨酰胺、缬氨酸以及精氨酸混合后作为B组分保存；使用时将A组分和B组分混合后加去离子水溶解即可。

对比例3与实施例1的区别在于，对比例1在冷冻干燥之前的步骤(3)中仅仅加入羟丙基-β-环糊精，不加入聚山梨酯。

实验例1

取60名年龄在30～40岁的眼部有皱纹且皮肤松弛的女性，分成3组，每组20人，分别取实施例1～3制备得到的美容护肤干细胞制剂(所述的美容护肤干细胞制剂为保存时间为1个月内的产品)加去离子水溶解后，涂抹于眼部周围，每天2次，使用1周后观察去皱及紧肤效果并记录结果，结果见表1。

表1.美容护肤干细胞制剂去皱以及紧肤效果

从表1去皱以及紧肤效果可以看出，使用保存1个月的本发明制备得到的美容护肤干细胞制剂具有明显的去皱及紧肤效果，且效果显著。

实验例2

取80名年龄在30～40岁的眼部有皱纹且皮肤松弛的女性，分成4组，每组20人，分别取实施例1以及对比例1～3制备得到的美容护肤干细胞制剂(所述的美容护肤干细胞制剂为保存时间为1年的产品)加去离子水溶解后，涂抹于眼部周围，每天2次，使用1周后观察去皱及紧肤效果并记录结果，结果见表2。

表2.美容护肤干细胞制剂去皱以及紧肤效果

产品	效果显著	效果一般	效果不明显
				实施例1美容护肤干细胞制剂	16	4	0
对比例1美容护肤干细胞制剂	0	6	14
				对比例2美容护肤干细胞制剂	0	12	8
对比例3美容护肤干细胞制剂	0	14	7

从表2去皱以及紧肤效果可以看出，本发明实施例1制备得到的美容护肤干细胞制剂在保存1年后仍具有较高的去皱及紧肤效果，说明本发明所述的美容护肤干细胞制剂能够长时间保持活性。

从实施例1和对比例1的效果可以看出，对比例1所述的美容护肤干细胞制剂在保存1年后其去皱及紧肤效果大大降低。这说明在骨髓间充质干细胞冷冻干燥之前的步骤(3)中加入聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精可以使得美容护肤干细胞制剂在较长的时间内保持去皱及紧肤活性。从实施例1与对比例2和3的效果可以看出，只有在骨髓间充质干细胞冷冻干燥之前的步骤(3)中同时加入聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精才能使得美容护肤干细胞制剂在较长的时间内保持去皱及紧肤活性，单独加入聚山梨酯或羟丙基-β-环糊精不能显著延长美容护肤干细胞制剂在较长的时间内保持活性。

Claims (8)

1.一种美容护肤干细胞制剂，其特征在于，包含如下重量份的原料组分：

骨髓间充质干细胞冻干粉30～50份；类人胶原蛋白20～30份；海藻糖10～20份；表皮细胞生长因子1～3份；维生素E 1～3份；还原型谷胱甘肽1～3份；L-谷氨酰胺0.5～1份；缬氨酸0.5～1份；精氨酸0.5～1份。

2.根据权利要求1所述的美容护肤干细胞制剂，其特征在于，包含如下重量份的原料组分：

骨髓间充质干细胞冻干粉40～50份；类人胶原蛋白20～25份；海藻糖15～20份；表皮细胞生长因子1～2份；维生素E 2～3份；还原型谷胱甘肽1～2份；L-谷氨酰胺0.5～0.8份；缬氨酸0.5～0.8份；精氨酸0.5～0.8份。

3.根据权利要求2所述的美容护肤干细胞制剂，其特征在于，包含如下重量份的原料组分：

骨髓间充质干细胞冻干粉40份；类人胶原蛋白25份；海藻糖15份；表皮细胞生长因子2份；维生素E 2份；还原型谷胱甘肽1份；L-谷氨酰胺0.5份；缬氨酸0.8份；精氨酸0.5份。

4.根据权利要求1所述的美容护肤干细胞制剂，其特征在于，所述的骨髓间充质干细胞冻干粉通过如下方法制备得到：

(1)取动物骨髓间充质干细胞进行传代培养至18～22代；

(2)收集传代至18～22代的动物骨髓间充质干细胞，用DMEM(A)培养基继续培养16～32h；

(3)收集步骤(2)得到的干细胞以及上清液；并加入聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精，得干细胞混合液；

(4)将步骤(3)中制备得到的干细胞混合液先于-10～-15℃中预冷冻8～12h，然后于-60～-70℃中冷冻干燥48～60h即得所述的骨髓间充质干细胞冻干粉。

5.根据权利要求4所述的美容护肤干细胞制剂，其特征在于，所述的骨髓间充质干细胞冻干粉通过如下方法制备得到：

(1)取动物骨髓间充质干细胞进行传代培养至20代；

(2)收集传代至20代的动物骨髓间充质干细胞，用DMEM(A)培养基继续培养24h；

(3)收集步骤(2)得到的干细胞以及上清液；并加入聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精，得干细胞混合液；

(4)将步骤(3)中制备得到的干细胞混合液先于-12℃中预冷冻10h，然后于-65℃中冷冻干燥52h即得所述的骨髓间充质干细胞冻干粉。

6.根据权利要求4所述的美容护肤干细胞制剂，其特征在于，步骤(3)中聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精的重量用量与上清液的体积用量比为1～3g：3～8g：30～50mL。

7.根据权利要求6所述的美容护肤干细胞制剂，其特征在于，步骤(3)中聚山梨酯以及羟丙基-β-环糊精的重量用量与上清液的体积用量比为2g：5g：40mL。

8.权利要求1～7任一项所述的美容护肤干细胞制剂的制备方法，其特征在于，将骨髓间充质干细胞冻干粉作为A组分保存；将类人胶原蛋白、海藻糖、表皮细胞生长因子、维生素E、还原型谷胱甘肽、L-谷氨酰胺、缬氨酸以及精氨酸混合后作为B组分保存；使用时将A组分和B组分混合后加去离子水溶解即可。