CN109796407A - 一种模块化制备化学小分子探针的方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种模块化制备化学小分子探针的方法及应用，为药物寻找准确靶点，为创新药物的定位和优化奠定基础，化学小分子探针一般包括四个功能部位：结合基团、光亲和标记基团、连接部位和报告基团，结合基团为根据具体药物来确定的，光亲和标记基团、连接部位和报告基团均为模块化制备。本发明所述的一种模块化制备化学小分子探针的方法及应用，可以迅速、低成本、高通量的制备化学小分子探针，这将极大扩充化学小分子探针在药物发现领域的应用范围。

Description

一种模块化制备化学小分子探针的方法及应用

技术领域

本发明属于创新药物研发领域，尤其是涉及一种模块化制备化学小分子探针的方法及应用。

背景技术

当今创新药物的发现越来越依赖于靶点的发现以及靶点与活性化合物作用模式的确定，化学小分子探针在这两方面的特出优越性使其成为药物化学的研究热点。

药物可以挽救生命、治疗疾病、改善健康状况、缓解痛苦和各种不适，因此，可以说药物改变着我们的生活，也影响着整个世界。然而，目前开发新药的费用平均每个高达数亿美元，尽管投入如此之高，从研发到上市仍约需10-12年之久。因此新药研发迫切需要新技术、新理论，以提高效率、缩短周期。

现代药物的发现过程主要包括靶点(target)的识别、先导物的发现、结构优化、临床前及临床试验等阶段，其中正确的靶点识别是影响整个过程的关键步骤之一。靶点也称为受体(receptor)，是指与药物分子在体内相互作用的功能性大分子，通常是某种蛋白质(绝大部分靶点是蛋白质)、核酸、离子通道或DNA等。药物分子在体内作用于靶点的特定部位，形成复合物，从而诱发生物化学及生理学上的变化，产生药物效应，达到治疗疾病的目的。若能发现这些靶点，就可以在此基础上建立相应的筛选模型，对活性化合物进行高效率的活性评价。从而促进先导物发现和结构优化的进程。可见，现今药物的发现已越来越依赖于药物靶点的发现。

那么如何解决药物靶点的发现问题呢？虽然，生命科学领域的研究近年来取得了巨大成就，2001年人类基因组工程的完成更是一个里程碑式的进步。然而，何种蛋白质是针对某种疾病的小分子药物的靶点，在目前基因水平上的生物技术仍然无法解决。随着后基因时代的到来，人们逐渐认识到蛋白质才是生理功能的执行者，也是生命现象的直接体现者。这其中有可能蕴藏着开发疾病诊断方法和新药的“钥匙”，在基因组学基础上开展蛋白质组学研究将有可能导致药物开发方面的实质性突破。因此针对药物发现的技术重心已经由基因组转向了蛋白质组。利用化学小分子的多样性，选择适当的活性小分子，设计合成能够高选择性地探测蛋白质的功能、结构以及与活性小分子作用模式的探针——化学小分子探针，可以为重大疾病的诊断和防治提供新的标记物、新的药物作用靶点和新的先导结构，从而为创新药物的发现奠定基础。

在药物发现过程中，化学小分子探针主要有以下几个方面的作用：1.针对靶点已知的有药理活性的化合物，可以进行以下三个方面的研究：(1)了解药物分子与靶点作用部位的结构信息，为进一步的结构改造提供帮助；(2) 利用探针分子研究靶点蛋白在生理与病理状态下的分布情况，深入研究蛋白质的功能；(3)利用探针分子进行细胞或体内的标记实验，可能会发现一些与活性化合物有交叉作用的靶点蛋白，从而为已知的小分子药物可能产生的毒副作用提供预测。2.对于体内作用靶点未知，有药理活性的化合物，特别是来自天然产物的活性化合物，可以将其设计成探针分子，通过对细胞或动物的标记实验来发现其体内的作用靶点，建立新靶点的筛选模型，为先导物的结构优化服务。

探针分子一般是以其母体化合物(最初的活性化合物)为基础，根据初步的构效关系设计合成的。设计的探针分子应具有适当的活性，与靶点的作用机制应与母体化合物保持一致，在不影响其活性的条件下，选择在活性分子的适宜位置引入各个功能部位。活性化合物与靶点的作用方式主要有两种：一是活性化合物中含有某些反应基团，可以与靶点蛋白的活性部位发生反应形成共价键，因此这种结合非常稳定，是不可逆的；另一种是活性化合物与靶点蛋白通过离子键、偶极-偶极相互作用、范德华力、氢键等分子间引力相互吸引，形成复合物，这种作用相对较弱、不稳定，是可逆的。

但不论哪种化学小分子探针，其制备工艺都非常复杂，如果每一个小分子探针都从头开始制备，效率低下，而且成本极高。据此，我们发明一种化学小分子探针模块库来制备小分子探针的方法，可以极大简化小分子探针制备流程，降低成本。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种模块化制备化学小分子探针的方法及应用，以可以极大简化小分子探针的制备流程，降低成本。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种模块化制备化学小分子探针的方法，化学小分子探针一般包括四个功能部位：结合基团、光亲和标记基团、连接部位和报告基团；所述结合基团使探针分子与靶点作用，而不与环境中的其他生物分子作用；所述光亲和标记基团能够将探针分子共价修饰在靶点蛋白上；所述连接部位能够保持分子活性及提高标记效率；所述报告基团能够简单快速识别或纯化被标记蛋白；所述结合基团通过具体药物确定，所述光亲和标记基团、连接部位和报告基团能够通过模块化制备。

进一步的，光亲和标记基团的模块库制备：

(1)二异丙胺和重蒸的THF溶液,先后滴加正丁基锂、乙酰乙酸乙酯，加入溴丙炔，通过萃取、减压蒸馏得到化合物b1；

(2)加入化合物b2、乙二醇对甲苯磺酸和重蒸甲苯，减压旋蒸去除大部分甲苯溶液，通过萃取、减压蒸馏、柱层析分离得到目标化合物b3；

(3)加入重蒸四氢呋喃，四氢铝锂，将化合物b3溶于重蒸四氢呋喃中，缓慢滴入反应体系中，反应完成用盐酸水溶液淬灭反应，通过滤除、萃取、减压旋蒸、柱层析分离，得到目标化合物b4；

(4)加入对甲苯磺酸，将化合物b5溶于丙酮中，并注入反应体系中，反应完全用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭反应，通过萃取、减压旋蒸、柱层析分离，得到较纯的目标化合物b5；

(5)加入化合物b5，充入氨气，反应过程中将羟胺氧磺酸溶于无水甲醇中，滴入反应体系中，将反应中间体用二氯甲烷溶解，加入三乙胺，再将碘单质溶于二氯甲烷中，滴入，通过减压旋蒸、柱层析分离，得到较纯的目标化合物b6；

(6)将碘，咪唑和三苯基膦溶解二氯甲烷中，将化合物b6溶于二氯甲烷中，滴入，反应完全后通过萃取三次、减压旋蒸、柱层析分离，得到较纯的目标化合物b；

进一步的，所述光亲和标记基团的模块库制备中，充入氩气，在无水无氧条件下进行，并通过TLC监测反应完全；反应完全后通过无水硫酸钠进行干燥，乙酸乙酯进行萃取，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离。

进一步的，连接基团的模块库制备：

(1)加入g1，g2和三乙胺溶于DMF溶液中，反应完全加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，通过萃取、洗涤、干燥，减压旋蒸、柱层析分离，得到较纯的目标化合物g；

(2)加入g3和Pd/C溶于甲醇溶液中，充入氩气制作无水无氧环境，用氢气置换氩气，反应完全，通过减压旋蒸、柱层析分离，得到较纯的目标化合物g4；

进一步的，所述连接基团的模块库制备中，通过TLC监测反应完全；反应完全后通过无水硫酸钠进行干燥，通过二氯甲烷进行萃取，饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠进行干燥，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离。

进一步的，报告基团的模块化制备：

(1)加入罗丹明-B，Boc-哌嗪，HOBT，EDCI和三乙胺溶于二氯甲烷溶液中，反应完全，加入二氯甲烷，通过洗涤，干燥，减压旋蒸，柱层析分离，得到较纯的目标化合物f1；

(2)加入化合物f1溶于二氯甲烷中，将三氟乙酸溶于二氯甲烷中，滴入，反应完全，加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，通过萃取、干燥、减压旋蒸，得到化合物f2；

进一步的，所述报告基团的模块化制备中，通过TLC监测反应完全；反应完全后通过无水硫酸钠进行干燥，通过二氯甲烷进行萃取，饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠进行干燥，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离。

相对于现有技术，本发明所述的一种模块化制备化学小分子探针的方法及应用具有以下优势：

本发明所述的一种模块化制备化学小分子探针的方法及应用，包括四个功能部位：结合基团、光亲和标记基团、连接部位和报告基团，除了结合基团是根据具体药物来确定的，光亲和标记基团、连接部位和报告基团都可以模块化制备，可以极大简化小分子探针的制备流程，降低成本。

附图说明

图1为本发明实施例化学小分子探针示意图.

具体实施方式

除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下面结合实施例及附图来详细说明本发明。

实施例1：光亲和基团的模块库制备

(1)取2L的四口圆底烧瓶，向瓶中加入二异丙胺(66.8g，0.66mol) 和600ml的重蒸的THF溶液，充入氩气制作无水无氧环境，低温反应浴中缓慢降温至-75℃～-78℃,缓慢滴加正丁基锂(38.43g，0.60mol),滴加过程中体系放热，体系温度控制在＜-55℃,大约一个小时滴完，体系呈浅黄色清液变为深黄色清液，缓慢升温至-5℃到0℃，将乙酰乙酸乙酯(39.0g，0.3mol) 溶解在180ml的干燥的THF中，滴入体系并控制温度＜5℃,滴加过程中体系由浅黄色清液变为红棕色清液，滴完向体系中一次性加入溴丙炔(42.9g， 0.36mol)，0℃下反应半个小时后移至室温下反应12h，溶液由红棕色变为深褐色，TLC监测反应完全之后，向体系滴加45ml的冰乙酸，逐渐析出固体并伴有白烟冒出，减压旋蒸去除大部分THF,加入800ml水溶解，水相用250ml 的乙酸乙酯萃取3次，有机相合并用无水硫酸钠干燥，减压旋蒸得到化合物粗品，减压蒸馏(90-100℃/3mm Hg)，蒸馏得到化合物b1(40g，0.238mol)，收率为78％。该化合物1H NMR(400MHz,Chloroform-d):δppm 4.20(q, J＝7.1Hz,2H),3.45(s,2H),2.82(t,J＝7.2Hz,2H),2.48(dt, J＝9.5,6.8,2.6Hz,2H),1.96(t,J＝2.7Hz,1H),1.29(t,J＝7.1 Hz,3H)。

(2)取1000mL的三口口圆底烧瓶，加入化合物b2(20g，0.117mol)、乙二醇(14.47g，0.237mol)对甲苯磺酸(1.2g，5.75mmol)和600ml重蒸甲苯到反应瓶中，充入氩气制作无水无氧条件，搅拌均匀，缓慢升温至125℃～130℃回流，反应过程中体系产生水，用分水器将水放出，反应12h，反应TLC检测至原料不在变化，停止反应，减压旋蒸去除大部分甲苯溶液，, 加入饱和碳酸氢钠水溶解调PH为碱性，水相用150ml的乙酸乙酯萃取3次，有机相合并用无水硫酸钠干燥，减压旋蒸得到化合物粗品，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯体系)，得到目标化合物 b3(17.51g，0.0826mol)，产率为70％。该化合物1H NMR(400MHz, Chloroform-d):δppm 4.20(q,J＝7.1Hz,2H),3.46(s,2H),2.80(t,J＝7.2Hz, 2H),2.48(td,J＝7.4,2.6Hz,2H),1.96(t,J＝2.7Hz,1H),1.27(t,J＝7.1 Hz,3H)。

(3)取1000ml三口圆底烧瓶，加入400ml重蒸四氢呋喃，冰浴下降温至0℃，向体系中缓慢少量分批加入四氢铝锂(2.3g，61.41mmol)，将化合物b3(8.6g，40.55mmol)溶于重蒸四氢呋喃中，缓慢滴入反应体系中，控制滴速，使体系温度控制小于5℃，滴加完毕，室温搅拌1h，TLC检测原料反应完毕之后，将体系移入0℃，用浓度为1mol/L的盐酸水溶液淬灭反应，缓慢加入，过程中有白色乳状物氢氧化锂生成，调节体系PH为3～4，用硅藻土过滤除去氢化铝锂，收集液体，用100ml乙酸乙酯萃取三次，减压旋蒸浓缩得到化合物粗品，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯体系)，等到目标化合物b4(6.55g，38.53mmol)，产率为 95％。该化合物1H NMR(400MHz,Chloroform-d):δppm 3.99(m,4H),3.75(t, J＝5.6Hz,2H),2.63(s,1H),2.26(dt,2H),1.93(m,5H)。

(4)取向500ml三口圆底烧瓶，加入对甲苯磺酸(4.087g，23.76mmol)，充入氩气制得无水无氧体系，将化合物b5(16.03g，94.29mmol)溶于280 ml丙酮中，并注入反应体系中，室温下搅拌反应3h，TLC监测反应完全，用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭反应，并调节溶液PH至6～7，减压真空浓缩除去大部分丙酮，加入氯化钠固体调体系水相为饱和，用100ml乙酸乙酯萃取3次，有机相合并，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸除去溶剂得到化合物粗品，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离(石油醚/甲乙酸乙酯体系)，得到较纯的目标化合物b5(11.64g，92.4mmol)，产率95％。该化合物1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm)：3.86(t,J＝5.0Hz,2H),2.70(m,4H),2.45 (t,J＝7.2,2H),2.34(br,1H),1.97(t,J＝2.7Hz,1H)，13CNMR(101MHz, CDCl3)δ(ppm)：208.58,82.58,68.93,57.65,43.99,41.16,12.58.EI-MS:m/zcalcd:126.06；Found 126.09。

(5)取50ml三口圆底烧瓶，加入化合物b5(1g，7.93mmol)，充入氩气制得无水无氧体系，低温反应釜中降温至-78℃，缓慢充入氨气并且氨气液化，得到足够量的液氨后(大约10ml)，停止通入氨气，封闭体系，回温至-40℃，搅拌反应5小时，体系为微黄色清夜，缓慢降温至-78℃，降温过程中将羟胺氧磺酸(1.03g，9.12mmol)溶于3ml无水甲醇中，缓慢滴入反应体系中，控制内温小于-35℃，30min内滴完，滴加完毕后-35℃条件下搅拌1h，体系缓慢升温至室温，让液氨挥发，搅拌过夜。有白色沉淀生成， TLC监测反应完全，停止反应，过滤，用少量甲醇冲洗白色滤饼。减压旋蒸除去溶剂得到白色的反应中间体，取25ml的单口圆底烧瓶，将反应中间体用二氯甲烷(10ml)溶解于瓶中，降温至0℃，加入三乙胺(1.4ml，9.99mmol)，再将碘单质(2.92g，11.42mmol)溶于4ml二氯甲烷中，缓慢滴入反应体系，直至反应体系保持棕红色不褪去，室温下搅拌2h，TLC监测反应完全，停止反应，用饱和氯化铵溶液(20ml)洗涤一次，饱和硫代硫酸钠溶液(20 ml)洗涤一次，有机相合并，无水硫酸钠干燥，真空避光减压旋蒸去除固体的到粗品化合物，浓缩，避光条件下，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离(石油醚/甲乙酸乙酯体系)，得到较纯的目标化合物b6(260mg，1.88mmol)，产率为23.7％。该化合物1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm)： 3.50(t,J＝8.2Hz,2H),2.08(m,3H),1.71(m,5H).13C NMR(101MHz,CDCl3) δ(ppm)：82.76,69.13,57.27,35.44,32.55,28.22,13.13.EI-MS:m/z calcd:138.07；Found 138.12。

(6)取25ml三口圆底瓶，将碘(268mg，1.055mmol)，咪唑(179.5 mg，2.635mmol)和三苯基膦(254.5mg，0.97mmol)溶解二氯甲烷(5ml) 于瓶中，充入氩气制得无水无氧体系，降温至0℃搅拌10min。用锡箔纸包裹反应瓶，在避光条件下反应，将化合物b6(121mg，0.88mmol)溶于1ml 二氯甲烷中，缓慢滴入反应体系，滴加完毕，在0℃避光条件下，搅拌反应 4小时，TLC监测反应完全，停止反应，加入5ml硫代硫酸钠的饱和水溶液终止反应，用5ml乙酸乙酯萃取三次，收集有机相合并，用饱和氯化钠洗一次，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸除去溶剂得到反应粗品，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离(石油醚/甲乙酸乙酯体系)，得到较纯的油状目标化合物b(200mg，0.809mmol)，收率为92％。该化合物1H NMR(400MHz, CDCl3)δ(ppm)：2.88(t,J＝7.5,2H),2.12(t,J＝7.5,2H),1.97(m,3H),1.71 (t,J＝7.3,2H).13C NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)：82.40,69.24,60.02, 37.28,31.88,28.58,13.38.EI-MS:m/z calcd:247.98；Found 247.91。

实施例2：连接基团的模块库制备

(1)取10ml单口圆底烧瓶，加入g1(200mg，0.585mmol)，g2(153.4mg， 0.703mmol)和三乙胺(59mg，0.585mmol)溶于3mlDMF溶液于瓶中，室温下搅拌12h。TLC检测反应体系，直至反应完全，终止反应，加入10ml 饱和碳酸氢钠溶液淬灭，分别用二氯甲烷萃取3次和20ml饱和食盐水溶液洗涤，有机相合并，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸除去溶剂的得到粗品，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离(二氯甲烷/甲醇体系＝15/1)，得到较纯的目标化合物g(212mg，0.226mmol)，产率为40％。该化合物的 1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ6.58(t,J＝5.6Hz,1H),6.30(s,1H),5.36 (s,1H),4.50(t,J＝6.3Hz,1H),4.40–4.26(m,1H),3.72–3.60(m,10H),3.57 (t,J＝5.0Hz,2H),3.49–3.41(m,2H),3.39(t,J＝5.0Hz,2H),3.20–3.10(m, 1H),2.91(m,J＝12.8,4.9Hz,1H),2.74(d,J＝12.8Hz,1H),2.23(t,J＝7.6Hz, 2H),1.80(s,2H),1.79–1.60(m,4H),1.52–1.39(m,2H).13C NMR(101MHz, CDCl3)δ173.35,164.25,70.65,70.46,70.09,70.00,69.96,61.80,60.25,55.70, 50.68,40.50,39.14,36.00,28.30,28.12,25.63,6.34。

(2)取50ml三口圆底烧瓶，加入g3(594mg，1.34mmol)和Pd/C (118mg，0.67mmol)溶于20ml的甲醇溶液于瓶中，充入氩气制作无水无氧环境，然后用氢气置换氩气，室温下搅拌12h。TLC检测反应体系，直至反应完全，终止反应，用硅藻土抽滤，有机相减压旋蒸除去溶剂的得到粗品，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离(二氯甲烷/甲醇体系＝5/1)，得到较纯的目标化合物g4(357mg，0.854mmol)，产率为69％。该化合物的1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.14(d,J＝5.7Hz,1H),6.60(s,1H), 5.73(s,1H),4.55–4.42(m,1H),4.36–4.25(m,1H),3.62(d,J＝5.2Hz,8H), 3.57–3.47(m,4H),3.45–3.35(m,2H),3.19–3.08(m,1H),2.93–2.88 (m,1H),2.85(q,J＝5.2,4.4Hz,2H),2.72(d,J＝12.8Hz,1H),2.46(s,3H),2.21 (t,J＝7.5Hz,2H),1.82–1.55(m,4H),1.52–1.34(m,2H).13C NMR(101 MHz,MeOD)δ174.68,164.66,71.86,70.18,70.17,69.86,69.23,61.97,60.24, 55.60,40.68,39.67,38.95,35.35,28.36,28.12,25.44。

实施例3：报告基团的模块化制备

(1)取50ml三口圆底烧瓶，加入罗丹明-B(500mg，1.06mmol)， Boc-哌嗪(163mg，0.873mmol)，HOBT(13.2mg，1.16mmol)，EDCI (216mg，1.16mmol)和三乙胺(535.3mg，5.30mmol)溶于15ml二氯甲烷溶液中，室温下搅拌过夜。TLC检测反应体系，直至反应完全，终止反应，向反应液中加入125ml二氯甲烷，分别用75ml饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液洗涤，有机相合并，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸除去溶剂的得到粗品，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离(二氯甲烷/甲醇体系＝25/1)，得到较纯的目标化合物f1(374mg，0.62mmol)，产率为70.2％。该化合物的1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.64–7.59(m,2H),7.47(m, J＝5.8,3.2Hz,1H),7.29(dd,J＝5.8,3.1Hz,1H),7.15(d,J＝9.5Hz,2H), 6.88(d,J＝9.3Hz,2H),6.74(d,J＝2.4Hz,2H),3.59(m,J＝7.2Hz,9H), 3.28(d,J＝24.5Hz,4H),3.21–3.16(m,4H),1.26(t,J＝7.1Hz,12H)。

(2)取50ml两口圆底烧瓶中，加入化合物f1(0.5g，0.81mmol)溶于10ml二氯甲烷于瓶中，将反应体系移入低温反应浴，降温至0℃。将5ml 三氟乙酸溶于5ml二氯甲烷中，并缓慢滴入反应体系中，滴加完毕后将反应体系移至室温搅拌2h TLC检测反应体系，直至反应完全，终止反应，缓慢加入10ml饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，并用饱和的碳酸钠溶液调节溶液PH至12左右，用50ml二氯甲烷萃取三次，有机相合并，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸除去溶剂的得到深紫色固体，即化合物f2(389mg，0.76mmol)，收率为95.2％。1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.79(m,J＝5.6,3.4Hz, 2H),7.76–7.72(m,1H),7.57–7.49(m,1H),7.26(d,J＝9.5Hz,2H),7.07(m, J＝9.6,2.5Hz,2H),6.97(d,J＝2.5Hz,2H),3.75–3.65(m,8H),3.63(s,4H), 3.09(t,J＝5.4Hz,4H),1.31(t,J＝7.1Hz,12H)。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种模块化制备化学小分子探针的方法，其特征在于：化学小分子探针一般包括四个功能部位：结合基团、光亲和标记基团、连接部位和报告基团；所述结合基团使探针分子与靶点作用，而不与环境中的其他生物分子作用；所述光亲和标记基团能够将探针分子共价修饰在靶点蛋白上；所述连接部位能够保持分子活性及提高标记效率；所述报告基团能够简单快速识别或纯化被标记蛋白；所述结合基团通过具体药物确定，所述光亲和标记基团、连接部位和报告基团能够通过模块化制备。

2.根据权利要求1所述的一种模块化制备化学小分子探针的方法，其特征在于：

光亲和标记基团的模块库制备：

(1)二异丙胺和重蒸的THF溶液,先后滴加正丁基锂、乙酰乙酸乙酯，加入溴丙炔，通过萃取、减压蒸馏得到化合物b1；

(2)加入化合物b2、乙二醇对甲苯磺酸和重蒸甲苯，减压旋蒸去除大部分甲苯溶液，通过萃取、减压蒸馏、柱层析分离得到目标化合物b3；

(3)加入重蒸四氢呋喃，四氢铝锂，将化合物b3溶于重蒸四氢呋喃中，缓慢滴入反应体系中，反应完成用盐酸水溶液淬灭反应，通过滤除、萃取、减压旋蒸、柱层析分离，得到目标化合物b4；

(4)加入对甲苯磺酸，将化合物b5溶于丙酮中，并注入反应体系中，反应完全用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭反应，通过萃取、减压旋蒸、柱层析分离，得到较纯的目标化合物b5；

(5)加入化合物b5，充入氨气，反应过程中将羟胺氧磺酸溶于无水甲醇中，滴入反应体系中，将反应中间体用二氯甲烷溶解，加入三乙胺，再将碘单质溶于二氯甲烷中，滴入，通过减压旋蒸、柱层析分离，得到较纯的目标化合物b6；

(6)将碘，咪唑和三苯基膦溶解二氯甲烷中，将化合物b6溶于二氯甲烷中，滴入，反应完全后通过萃取三次、减压旋蒸、柱层析分离，得到较纯的目标化合物b；

3.根据权利要求2所述的一种模块化制备化学小分子探针的方法，其特征在于：所述光亲和标记基团的模块库制备中，充入氩气，在无水无氧条件下进行，并通过TLC监测反应完全；反应完全后通过无水硫酸钠进行干燥，乙酸乙酯进行萃取，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离。

4.根据权利要求1所述的一种模块化制备化学小分子探针的方法，其特征在于：

连接基团的模块库制备：

(1)加入g1，g2和三乙胺溶于DMF溶液中，反应完全加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，通过萃取、洗涤、干燥，减压旋蒸、柱层析分离，得到较纯的目标化合物g；

(2)加入g3和Pd/C溶于甲醇溶液中，充入氩气制作无水无氧环境，用氢气置换氩气，反应完全，通过减压旋蒸、柱层析分离，得到较纯的目标化合物g4；

5.根据权利要求4所述的一种模块化制备化学小分子探针的方法，其特征在于：所述连接基团的模块库制备中，通过TLC监测反应完全；反应完全后通过无水硫酸钠进行干燥，通过二氯甲烷进行萃取，饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠进行干燥，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离。

6.根据权利要求1所述的一种模块化制备化学小分子探针的方法，其特征在于：

报告基团的模块化制备：

(1)加入罗丹明-B，Boc-哌嗪，HOBT，EDCI和三乙胺溶于二氯甲烷溶液中，反应完全，加入二氯甲烷，通过洗涤，干燥，减压旋蒸，柱层析分离，得到较纯的目标化合物f1；

(2)加入化合物f1溶于二氯甲烷中，将三氟乙酸溶于二氯甲烷中，滴入，反应完全，加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，通过萃取、干燥、减压旋蒸，得到化合物f2；

7.根据权利要求6所述的一种模块化制备化学小分子探针的方法，其特征在于：所述报告基团的模块化制备中，通过TLC监测反应完全；反应完全后通过无水硫酸钠进行干燥，通过二氯甲烷进行萃取，饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠进行干燥，以200—300目硅胶为固定相进行柱层析分离。