CN109762033B - 一种甘油葡萄糖苷晶体的制备方法 - Google Patents

一种甘油葡萄糖苷晶体的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种甘油葡萄糖苷晶体的制备方法:将质量浓度8‑10%甘油葡萄糖苷水溶液在50‑60℃、‑0.02~‑0.04MPa的条件下浓缩至甘油葡萄糖苷质量浓度为50‑55%,获得浓缩液;向浓缩液中加入4‑6倍体积的含有体积浓度1‑7%石油醚的有机溶剂,在70‑80℃下回流反应50‑80min后,缓慢降温至45‑55℃,趁热加入分子筛或浓硫酸,室温放置40‑48h,4‑8℃冰箱中冷却结晶2‑8天,在相对湿度为10‑20%的条件下抽滤,滤饼真空干燥,获得甘油葡萄糖苷晶体;采用本发明方法最终可以得到GG的晶体,且适于GG的大规模生产,收率达到51%,纯度达到86%。

Description

一种甘油葡萄糖苷晶体的制备方法
(一)技术领域
本发明涉及一种化妆品原料的制备,主要为甘油葡萄糖苷(2-O-(α-D-glucopyranosyl)-sn-glycerol,以下简称GG)的结晶工艺。
(二)背景技术
GG是一类由甘油分子与葡萄糖分子以糖苷键结合的物质,其通过糖苷键将一个D-吡喃葡萄糖和甘油2号位的羟基偶联。葡萄糖分子的构型结合甘油分子的位置分为多种,目前已经鉴定出六种,但作为天然渗透压抵抗分子的是GG。它是微生物在胁迫条件下合成的一种渗透保护物质,同时还是一种大分子稳定剂,可用于蛋白质药物等的长期保存;更是一种良好的化妆品添加剂,具有保湿,抗氧化和抗衰老等功效;更有研究发现GG还具有治疗过敏性呼吸系统疾病等多种人体保健功效。
Figure BDA0001957838680000011
由于GG在各个领域具有实用性,因此要求其为保藏稳定性良好、不含杂质或分解物等的高纯度物质。有关GG的合成方法已有报[Journal of the Agricultural ChemicalSociety of Japan,64卷,1821-1826页(2000年);Applied Microbiology&Biotechnology,100卷,6131-6139页(2016);Applied Biocatalysia,47卷,10086-10089页(2008年),但通常得到的是GG水溶液,GG易吸潮,难以获得晶体。晶体相对于水溶液来说纯度更高、更易运输及保存。为了满足工业规模的大量供给的需要,需要得到GG的晶体。
综上所述,目前由于GG具有非常强的吸水性,本领域缺乏大规模生产GG结晶的方法,GG产品也主要以水溶液为主,因此迫切需要开发一种高效的、稳定的GG结晶方法,提高GG的运输成本,便于GG的使用,同时提高结晶收率,降低成本,缩短结晶周期,提高产品质量。
(三)发明内容
本发明的目的在于提供一种GG的结晶方法,提高GG的结晶收率,降低成本,缩短结晶周期,提高产品质量。
本发明采用的技术方案:
本发明提供一种甘油葡萄糖苷晶体的制备方法,所述方法按如下步骤进行:
(1)将质量浓度8-10%甘油葡萄糖苷(GG)水溶液在温度50-60℃、真空度为-0.02~-0.04MPa的条件下旋转蒸发浓缩至GG质量浓度为50-55%,获得浓缩液;
(2)向步骤(1)浓缩液中加入4-6倍体积的含有体积浓度1-7%石油醚的有机溶剂,在70-80℃下加热回流反应50-80min,加热回流结束后缓慢降温至45-55℃(或室温),趁热加入分子筛或浓硫酸,室温(25-30℃)放置40-48h,4-8℃冰箱中冷却结晶2-8天,在相对湿度为10-20%的条件下抽滤,滤饼真空干燥,获得GG晶体;所述有机溶剂为丙酮、无水乙醇或无水甲醇;所述分子筛质量加入量以浓缩液体积计为0.01-0.1g/ml;所述浓硫酸体积加入量以浓缩液体积计为0.05-0.2%,所述浓硫酸是指质量浓度98%的硫酸。
进一步,步骤(1)中所述浓缩温度为55℃,真空度为-0.02MPa。
进一步,步骤(2)中石油醚的有机溶剂优选为体积浓度5%石油醚的丙酮。
进一步,步骤(2)加热回流的温度为80℃,时间为60min,缓慢降温至50℃。
进一步,步骤(2)分子筛为4A分子筛,分子筛质量加入量以浓缩液体积计为0.02g/ml;所述浓硫酸体积加入量以浓缩液体积计为0.1%。
进一步,步骤(2)冷却结晶温度为4℃,时间为7天。
进一步,步骤(2)真空干燥条件为真空度-0.02~-0.04MPa、温度42-45℃。
更进一步,步骤(2)真空干燥条件为真空度-0.02MPa,温度45℃,时间24h。
与现有技术相比,本发明方法有益效果主要体现在:
采用本发明方法最终可以得到GG的晶体,且适于GG的大规模生产,收率达到51%,纯度达到86%。
(四)附图说明
图1实施例1制备的GG晶体质谱图。
(五)具体实施例
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此:本实施例中所述百分浓度除特别说明外,均为质量百分浓度。
实施例1酶法制备GG
将1M蔗糖和1.5M甘油混合,加入含蔗糖磷酸化酶(NCBI登入号为MK370897)E.coli工程菌粗酶液,按文献(Luley-Goedl C,Sawangwan T,Mueller M,Schwarz A,Nidetzky B(2010)Biocatalytic Process for Production of alpha-Glucosylglycerol UsingSucrose Phosphorylase.Food Technol Biotech 48:276-283)制备,加入量以酶活计为1000μg/mL(定义:在温度30℃,pH7.0条件下,每分钟产生1μg GG为1个酶活单位),至OD600=10,在温度30℃,pH7.0条件下催化反应30h,反应结束后,取反应液采用HPLC-示差检测器(氨基柱;流动相为:80%乙腈+20水+0.1%氨水)检测,将催化液离心,去除菌体,上清液45℃旋转蒸发浓缩,获得质量浓度10%的GG水溶液。
实施例2
一种甘油葡萄糖苷的结晶方法,由如下步骤组成:
(1)将100ml实施例1方法制备的质量浓度10%GG水溶液在温度55℃、真空度为-0.02MPa的条件下旋转蒸发浓缩至GG质量浓度为55%,获得浓缩液18ml。
(2)向18ml步骤(1)浓缩液中加入4倍体积的含有体积浓度5%石油醚的丙酮,在80℃下加热回流反应60min,加热回流结束后缓慢降温至50℃,趁热加入0.36g4A分子筛(孔径:2mm-3mm,有效成分:Na12(AlO2)12(SiO2)12xH2O),室温放置48h,4℃冰箱中冷却结晶7天,在相对湿度为15%的条件下抽滤,滤饼放入真空干燥箱中,在真空度为-0.02MPa、温度为45℃条件下干燥24h,获得GG晶体4.93g,质谱见图1。HPLC-示差检测器分析(氨基柱;流动相为:80%乙腈+20水+0.1%氨水)并计算GG晶体收率及纯度,结果见表1。
同样条件下用无水乙醇和无水甲醇代替丙酮作为对照。
表1不同有机溶剂对GG结晶收率及纯度的影响
Figure BDA0001957838680000031
实施例3
一种甘油葡萄糖苷的结晶方法,步骤如下:
(1)将100ml实施例1方法制备的质量浓度10%GG水溶液在温度55℃、真空度为-0.02MPa的条件下旋转蒸发浓缩至GG质量浓度55%,获得浓缩液18ml。
(2)向18ml步骤(1)浓缩液中加入4倍体积的含有不同体积浓度石油醚的丙酮(1%、3%、5%、7%),在80℃下加热回流反应60min,加热回流结束后缓慢降温至50℃,趁热加入0.36g 4A分子筛,室温放置48h,4℃冰箱中冷却结晶7天,在相对湿度为15%的条件下抽滤,滤饼放入真空干燥箱中,在真空度为-0.02MPa、温度为45℃条件下干燥24h,获得GG晶体4.40-4.94g(具体数值如下表2)。HPLC-示差检测器分析并计算GG晶体收率及纯度,结果见表2。
表2丙酮溶液中石油醚的含量对GG结晶收率及纯度的影响
Figure BDA0001957838680000041
实施例4
一种甘油葡萄糖苷的结晶方法,步骤如下:
(1)将100ml实施例1方法制备的质量浓度10%GG水溶液在温度55℃、真空度为-0.02MPa的条件下旋转蒸发浓缩至GG质量浓度55%,获得浓缩液18ml。
(2)向18ml步骤(1)浓缩液中加入4倍体积的含有体积浓度5%石油醚的丙酮,在80℃下加热回流反应60min,加热回流结束后缓慢降温至50℃,趁热加入相对18ml浓缩液的不同质量(0、1%(0.01g/ml)、2%(0.02g/ml)、3%(0.03g/ml))4A分子筛,室温放置48h,4℃冰箱中冷却结晶7天,在相对湿度为15%的条件下抽滤,滤饼放入真空干燥箱中,在真空度为-0.02MPa、温度为45℃条件下干燥24h,获得GG晶体0-5.02g(具体数值如下表)。HPLC-示差检测器分析并计算GG晶体收率及纯度,结果见表3。
表3加分子筛与不加分子筛对GG结晶收率及纯度的影响
Figure BDA0001957838680000042
实施例5
一种甘油葡萄糖苷的结晶方法,步骤如下:
(1)将100ml实施例1方法制备的质量浓度10%GG水溶液在温度55℃、真空度为-0.02MPa的条件下旋蒸蒸发浓缩至GG质量浓度55%,获得浓缩液18ml。
(2)向18ml步骤(1)浓缩液中加入4倍体积的含有体积浓度5%石油醚的丙酮,在80℃下加热回流反应60min,加热回流结束后缓慢降温至50℃,趁热加入不同体积浓度(0、0.05%、0.1%、0.2%)浓硫酸(浓硫酸质量浓度98%),室温放置48h,4℃冰箱中冷却结晶7天,在相对湿度为15%的条件下抽滤,滤饼放入真空干燥箱中,在真空度为-0.02、温度为45℃条件下干燥24h,获得GG晶体0-4.90g。HPLC-示差检测器分析并计算GG晶体收率及纯度,结果见表4。
表4加分子筛与不加分子筛对GG结晶收率及纯度的影响
Figure BDA0001957838680000051
实施例6
将实施例2步骤(2)中4℃冰箱中冷却结晶7天改为12h、48h、72h、96h、120h、144h、192h,其他同实施例2,GG晶体收率及纯度见表5所示。
表5结晶时间对GG结晶收率及纯度的影响
Figure BDA0001957838680000052
实施例7
将实施例2步骤(2)中4℃冰箱中冷却结晶7天的温度改为8℃、室温(30℃),其他同实施例2,GG晶体收率及纯度见表6所示。
表6结晶温度对GG结晶收率及纯度的影响
Figure BDA0001957838680000053
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的条件下,还可以做出若干改进和修饰,这些改进和修饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种甘油葡萄糖苷晶体的制备方法,其特征在于所述方法按如下步骤进行:
(1)将质量浓度8-10%甘油葡萄糖苷水溶液在温度50-60℃、真空度为-0.02~-0.04MPa的条件下旋转蒸发浓缩至甘油葡萄糖苷质量浓度为50-55%,获得浓缩液;
(2)向步骤(1)浓缩液中加入4-6倍体积的含有体积浓度1-7%石油醚的有机溶剂,在70-80℃下加热回流反应50-80min,加热回流结束后缓慢降温至45-55℃,趁热加入分子筛或浓硫酸,室温放置40-48h,4-8℃冰箱中冷却结晶2-8天,在相对湿度为10-20%的条件下抽滤,滤饼真空干燥,获得甘油葡萄糖苷晶体;所述有机溶剂为丙酮、无水乙醇或无水甲醇;所述分子筛质量加入量以浓缩液体积计为0.01-0.1g/ml;所述浓硫酸体积加入量以浓缩液体积计为0.05-0.2%。
2.如权利要求1所述甘油葡萄糖苷晶体的制备方法,其特征在于步骤(1)所述浓缩温度为55℃,真空度为-0.02MPa。
3.如权利要求1所述甘油葡萄糖苷晶体的制备方法,其特征在于步骤(2)中含石油醚的有机溶剂为含体积浓度5%石油醚的丙酮。
4.如权利要求1所述甘油葡萄糖苷晶体的制备方法,其特征在于步骤(2)加热回流的温度为80℃,时间为60min,缓慢降温至50℃。
5.如权利要求1所述甘油葡萄糖苷晶体的制备方法,其特征在于步骤(2)分子筛为4A分子筛,分子筛质量加入量以浓缩液体积计为0.02g/ml;所述浓硫酸体积加入量以浓缩液体积计为0.1%。
6.如权利要求1所述甘油葡萄糖苷晶体的制备方法,其特征在于步骤(2)冷却结晶温度为4℃,时间为7天。
7.如权利要求1所述甘油葡萄糖苷晶体的制备方法,其特征在于步骤(2)真空干燥条件为真空度-0.02~-0.04MPa、温度42-45℃。
8.如权利要求1所述甘油葡萄糖苷晶体的制备方法,其特征在于步骤(2)真空干燥条件为真空度-0.02MPa,温度45℃,时间24h。
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