CN109758378A - 一种补水、保湿和/或促进细胞增殖的组合物及其制备的化妆品 - Google Patents

Abstract

本发明涉及化合物技术领域，尤其涉及一种补水、保湿和/或促进细胞增殖的组合物及其制备的化妆品。本发明提供的组合物由棕榈酰寡肽、欧蓍草提取物和水解胶原组成，该组合物采用棕榈酰寡肽+水解胶原的组合实现皮肤结构上的修复，实现皮肤组织架构的完善，另外基于神经信号传递的修复，促进细胞分化、增殖和迁移，叠加使用了欧蓍草提取物，从而不仅在结构上修复和维持皮肤组织结构，而且保证了细胞间的神经信号的有效传递。各组分的叠加使用产生明显的增效协同作用，提高了皮肤屏障修复的功效结果，显著优于对照组。

Description

一种补水、保湿和/或促进细胞增殖的组合物及其制备的化 妆品

技术领域

本发明涉及化合物技术领域，尤其涉及一种补水、保湿和/或促进细胞增殖的组合物及其制备的化妆品。

背景技术

皮肤的生理结构，包括表皮层，基底膜和真皮层以及细胞神经通信等方面，随着人体的不断衰老以及外部的刺激，皮肤出现老化现象，表现为皱纹、松弛、弹性丧失、粗糙、色素沉着、皮肤萎缩及毛细血管扩张。而这些皮肤的老化现象可以归结为表皮层、基底膜和真皮层的损伤，以及损伤后带来的神经通信的不顺畅。表皮层和真皮层的损伤体现在角质形成细胞和成纤维细胞的衰亡和凋零，这也是目前较多的化妆品关注的点，而基底膜的损伤在目前关注还不是很多。基底膜的的变化对真皮和表皮会产生深远的影响，基底膜的连续性被破坏后，表皮细胞失去与基底膜的联系，直接与裸露的真皮相连，影响表皮和真皮的结构支撑及营养物质、水分的运输。表皮无法得到正常的营养和水分供给，自身的角质化就会收到影响，最终导致皮肤的最外层保护层-角质层的屏障功能的缺失。而且基底膜的受损也将导致几种生长因子在真皮和表皮中的传导，这些传导受阻也将进一步地导致皮肤结构受损。所以在修复角质层和真皮层，促进角质形成细胞和成纤维细胞增殖的同时，也应该注意基底膜的修复，使得皮肤的结构保持完整性。另外皮肤中控制细胞分化和细胞增殖的MC-2R和MOR-1神经受体的表达量不断地降低，神经受体的表达量降低，意味着当细胞发出促肾上腺皮质素和内啡肽时，由于MC-2R和MOR-1神经受体的缺失，导致细胞的分化、增殖和迁移受抑制，无法完成细胞的修复，从而导致皮肤无法完成自我修复。虽然大部分的原料都有促进细胞增殖的功效，但是只有在合理的调节神经受体的条件下，才能保证皮肤的细胞不仅仅是增殖，并能在增殖的情况下正常分化和迁移，从而实现皮肤结构的完整性。

现有的化妆品对皮肤的修复的机理更多的是建立在皮肤的结构的修复，即更多的是关注于皮肤表层的角质层的修复等，忽略了皮肤结构上其他方面的修复以及细胞的神经信号传递的修复。皮肤修复应该包括表皮，基底膜，真皮及细胞间的神经通信等方面。从多个维度的修复，实现受损皮肤的修复及健康皮肤的维持。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种补水、保湿和/或促进细胞增殖的组合物及其制备的化妆品，

本发明所述的补水、保湿和/或促进细胞增殖的组合物，其由如下质量份的组分组成：

棕榈酰寡肽 0.00001～0.025份；

欧蓍草提取物 0.0005～0.01份；

水解胶原 0.00005～0.025份。

一些实施例中，所述组合物由如下质量份的组分组成：

棕榈酰寡肽 0.00001份；

欧蓍草提取物 0.0005份；

水解胶原 0.00005份。

一些实施例中，所述组合物由如下质量份的组分组成：

棕榈酰寡肽 0.025份；

欧蓍草提取物 0.01份；

水解胶原 0.025份。

一些实施例中，所述组合物由如下质量份的组分组成：

棕榈酰寡肽 0.001份；

欧蓍草提取物 0.005份；

水解胶原 0.005份。

本发明提供的组合物由棕榈酰寡肽、欧蓍草提取物和水解胶原组成，该组合物采用棕榈酰寡肽+水解胶原的组合实现皮肤结构上的修复，实现皮肤组织架构的完善，另外基于神经信号传递的修复，促进细胞分化、增殖和迁移，叠加使用了欧蓍草提取物，从而不仅在结构上修复和维持皮肤组织结构，而且保证了细胞间的神经信号的有效传递。各组分的叠加使用产生明显的增效协同作用，提高了皮肤屏障修复的功效结果，显著优于对照组。

相对于单纯的化妆品基质而言，各组合物产生显著的补水、保湿、抗菌的效果(p<0.05)；与部分组分的组合物相比，多组分的组合效果更显著，说明各组分复配能够产生良好的增效协同作用。而与用量相当的但配比不同的对照样品相比，组合物的效果更显著，说明适当的配比有利于于各组分增效协同作用的产生。

本发明所述的组合物在制备修复皮肤生理结构的化妆品中的应用。

本发明中，所述修复包括补水、保湿和/或促进细胞增殖。

所述促进细胞增殖的细胞为成纤维细胞和/或角质形成细胞。

本发明中，所述的补水包括即时补水以及长效补水两方面。本发明实施例中提供的组合物能在30分钟时皮肤的水分含量增加到160.73％，120分钟时补水效果仍有164.85％左右，即时补水效果明显，持续时间较长。从长效的补水效果来看，持续的使用本发明的组合物，在28天时皮肤的水分含量增长约16.15％，继续使用，皮肤的水分含量会持续增长。

本发明中，所述的保湿包括即时保湿以及长效保湿两方面。从皮肤水分散失量的减少量来看，采用本发明的组合物能够降低皮肤水分散失量，使用30分钟时，皮肤的水分散失量的减少量达到9.11％。持续28天使用本发明的组合物，皮肤的水分散失量的减少量达到16.86％，即皮肤的水分散失量在不断的减少，体现了皮肤的屏障功能得到了有效的修复。

补水作用以及保湿作用的改善，表明本发明的组合物能够使皮肤的屏障功能得到有效恢复。

本发明中，所述的促进细胞增殖作用中，所述细胞为角质形成细胞和/或成纤维细胞。从成纤维细胞和角质形成细胞的的增殖效果来看，本发明组合物能有效的促进成纤维细胞和角质形成细胞的增殖。组合物对成纤维细胞增殖的促进作用证明该组合物可以有效的改善皮肤中真皮层的损伤；而组合物对角质形成细胞增殖的促进作用证明该组合物可以修复皮肤中的角质层的损伤，从而有效的防止皮肤结构的进一步被破坏，提高了皮肤的稳定性，对皮肤的生理结构产生良好的修复作用。

本发明还提供了一种修复皮肤生化结构的化妆品，其包括本发明所述的组合物及化妆品基质；其中本发明所述的组合物的质量分数为0.00056％～0.04％。

所述化妆品的基质包括：溶解剂、保湿剂、促渗剂、增稠剂和防腐剂；实验证明，本发明采用的化妆品基质不干扰组合物功效的产生，且对组合物功效能够起到更好的促进作用。

所述溶解剂为水、甘油、1,2-己二醇和1,3-丁二醇；

所述溶解剂中，甘油、丁二醇和己二醇不仅作为溶解剂使用，还具有一定的保湿作用。所述水、甘油、1,3-丁二醇和1,2-己二醇的质量比为(83.01293～81.795)：15：(0.025～0.5)：(0.001～0.5)。

所述保湿剂为透明质酸；本发明所述的保湿剂包括分子量为210万Da的透明质酸(高分子量透明质酸)以及经过酶切的分子量为1000～5000Da的透明质酸(小分子透明质酸)。所述高分子量透明质酸与小分子透明质酸的质量比为1:20。其中，大分子量的透明质酸作用于皮肤表面，而小分子透明质酸能够进入皮肤内部，起到补水保湿的作用。

所述增稠剂为黄原胶。所述增稠剂能够增加化妆品的浓稠度。所述化妆品中增稠剂的质量分数为0.0005％～0.01％。

所述促渗剂为羟乙基哌嗪乙烷磺酸和戊二醇；促渗剂又称经皮吸收促进剂(penetration enhancers)，能够降低活性物质通过皮肤的阻力，加速活性物质穿透皮肤的物质。本发明选择的促渗剂对皮肤皮肤无损害或刺激。所述化妆品中，促渗剂的质量分数为0.41％～0.6％。其中，所述羟乙基哌嗪乙烷磺酸和戊二醇的质量比为0.4：(0.01～0.2)。

所述防腐剂为对羟基苯乙酮和乙基己基甘油。防腐剂用于抑制化妆品中的微生物滋生，延长化妆品的保存期。化妆品中防腐剂的质量分数为0.5％～0.505％。其中所述对羟基苯乙酮和乙基己基甘油的质量比为0.5：(0.00001～0.005)。

适当浓度下，组合物制备的化妆品能够取得更显著的抑菌效果(p<0.05)。一些实施例中，本发明所述化妆品由如下质量分数的组分组成：

一些具体实施例中，本发明所述化妆品由如下质量分数的组分组成：

一些具体实施例中，本发明所述化妆品由如下质量分数的组分组成：

一些具体实施例中，本发明所述化妆品由如下质量分数的组分组成：

本发明所述化妆品的制备方法，包括：

制备棕榈酰寡肽和水解胶原的母液A：称取棕榈酰寡肽，加入1,2-己二醇，25℃以250～300r/min速度搅拌溶解，再加入水解胶原，以250-300r/min速度搅拌至溶解透明，加入乙基己基甘油，搅拌均匀后，以水稀释至水解胶原的质量分数为0.5％、棕榈酰寡肽的质量分数为0.1％；

制备欧蓍草提取物的母液B：称取欧蓍草提取物与等质量的黄原胶，加入欧蓍草提取物128倍质量的水，25℃以250～300r/min速度搅拌溶解，加入1,3-丁二醇和戊二醇，稀释至欧蓍草提取的质量分数为0.5％；

称取210万透明质酸、酶切透明质酸、羟乙基哌嗪乙烷磺酸、果糖和菊粉，加入水加热至75～80℃，以250～300r/min，搅拌溶解20min；

加入甘油和对羟基苯乙酮，温度控制为65～75℃，以300r/min，搅拌溶解15min；

依次加入所述母液A、母液B，温度控制45℃以下，以100r/min，搅拌15min,冷却至室温制得化妆品。

本发明中所述的室温为18～30℃。

本发明还提供了一种修复皮肤生理结构的方法，其为外用本发明所述的化妆品。所述外用为涂抹、喷洒、贴敷。

本发明提供的组合物由棕榈酰寡肽、欧蓍草提取物和水解胶原组成，该组合物采用棕榈酰寡肽+水解胶原的组合实现皮肤结构上的修复，实现皮肤组织架构的完善，另外基于神经信号传递的修复，促进细胞分化、增殖和迁移，叠加使用了欧蓍草提取物，从而不仅在结构上修复和维持皮肤组织结构，而且保证了细胞间的神经信号的有效传递。各组分的叠加使用产生明显的增效协同作用，提高了皮肤屏障修复的功效结果，显著优于对照组。

附图说明

图1专利组合的即时补水效果；

图2专利组合的长效补水效果；

图3皮肤水分散失量的减少量；

图4长效皮肤水分散失量的减少量；

图5成纤维细胞增值率；

图6角质形成细胞增值率。

具体实施方式

本发明提供了一种补水、保湿和/或促进细胞增殖的组合物及其制备的化妆品，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。

棕榈酰寡肽是一种通过模拟人体自身机理激活潜在无活性的组织生长因子(TGF-β)的寡肽，它能够显著提高细胞活性，同时能促进胶原合成。

水解胶原胶原蛋白是真皮细胞外基质的主要成分，属于结构性蛋白。胶原多肽作为水解后的胶原，能及时补充衰老或者受损皮肤中的胶原，同时，可以给肌肤带来紧致的肤感。

欧蓍草提取物提取自欧蓍草(Achillea millefolium)的地上部分，活性成分为黄酮类物质，能够促进MC-2R和MOR-1的表达，修复皮肤内细胞间的神经信号的传递，从而促使细胞增殖、迁移和分化，最终达到修复皮肤生理结构的目标。

本发明中所述化妆品的原液是指添加相对单一的高浓度护肤成分，能针对各种肌肤需要，给肌肤更直接、更安全、更强效的保养，让肌肤在短时间内恢复最佳状态的美容产品，原则上全成分不超过20个。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1～3

表1实施例1～3组方(单位：g)

制备方法包括：

1、采用冷配的方式制备棕榈酰寡肽和水解胶原的母液A。具体操作为称取0.1％的棕榈酰寡肽，加入10％的1,2-己二醇，以250-300r/min速度搅拌至溶解透明，再加入0.5％的水解胶原，以250-300r/min速度搅拌至溶解透明，加入0.1％乙基己基甘油，搅拌均匀后，加入89.3％的去离子水进行稀释。最后过滤后冷藏备用。

2、采用冷配的方式制备欧蓍草提取物的母液B。具体操作为称取0.5％的欧蓍草提取物浓缩液和0.5％的黄原胶，加入64％的去离子水，以250-300r/min速度搅拌至溶解透明，加入25％的1,3-丁二醇和10％戊二醇，搅拌均匀。最后过滤后冷藏备用。

3、按照表1组方称取210万透明质酸、酶切透明质酸、羟乙基哌嗪乙烷磺酸、果糖和菊粉，加入去离子水加热至75-80℃，以250-300r/min,搅拌20min,直至溶解透明；

4、按照表1组方加入15g甘油和对羟基苯乙酮，温度控制为65-75℃，以300r/min，搅拌15min，直至所有添加物全部溶解；

5、按照组方依次加入母液A、母液B，温度控制45℃以下，以100r/min，搅拌15min,静置恢复到室温即可。

对比例1～3

表2对比例1～3组方(单位：g)

制备方法包括：

1、采用冷配的方式制备棕榈酰寡肽和水解胶原的母液A。具体操作为称取0.1％的棕榈酰寡肽，加入10％的1,2-己二醇，以250-300r/min速度搅拌至溶解透明，再加入0.5％的水解胶原，以250-300r/min速度搅拌至溶解透明，加入0.1％乙基己基甘油，搅拌均匀后，加入89.3％的去离子水进行稀释。最后过滤后冷藏备用。

2、采用冷配的方式制备欧蓍草提取物的母液B。具体操作为称取0.5％的欧蓍草提取物浓缩液和0.5％的黄原胶，加入64％的去离子水，以250-300r/min速度搅拌至溶解透明，加入25％的1,3-丁二醇和10％戊二醇，搅拌均匀。最后过滤后冷藏备用。

3、按照表1组方称取210万透明质酸、酶切透明质酸、羟乙基哌嗪乙烷磺酸、果糖和菊粉，加入去离子水加热至75-80℃，以250-300r/min,搅拌20min,直至溶解透明；

4、按照表1组方加入15g甘油和对羟基苯乙酮，温度控制为65-75℃，以300r/min，搅拌15min，直至所有添加物全部溶解；

5、按照组方依次加入母液A、母液B，温度控制45℃以下，以100r/min，搅拌15min,静置恢复到室温即可。

功效评测

1)皮肤的即时及长效补水效果

-测试仪器：德国CK公司多功能皮肤测试仪，型号Corneometer CM825 MDD，

-测试原理：采用电容法测试人体皮肤角质层的水分含量，它的原理是基于水和其他物质的介电常数差异显著，按照皮肤含水量不同，测得皮肤的电容值不同，其观测参数可代表皮肤水分值。

-测试环境：测试环境温度为22±1℃，湿度为50±5％，并且进行实时动态检测；

-测试志愿者：有效志愿者至少30人，年龄在16-65岁之间(妊娠或浦乳期妇女除外)；前臂测试区域电容法皮肤水分测定意义的基础值在15-100之间；无严重系统疾病，无免疫缺陷或自身免疫性疾病者；既往对护肤类化妆品无严重过敏史者；近一个月内未曾使用激素类药物及免疫抑制剂者；未参加其他临床试验者；按规定使用受试药物且资料齐全；测试前所有自愿者应填写知情同意书。

-测试步骤：

测试前准备：受试部位前2-3天不能使用任何产品(化妆品或外用药品)。实验前，受试者需要同意清洁双手前臂内测，自然风干。清洁后受试者双手前臂内测做好测量区域标记。正式测试前应在符合标准房间内静坐至少30min，不能喝水，前臂暴露，呈测试状态放置，保持放松。

测试过程：实验中左右手臂内侧标记3×3cm²试验区域，同一手臂可以标记多个区域，区域间隔1cm。测试产品和空白对照均随机分布在左右手臂上。使用探头CorneometerCM825MDD进行受试区域和对照区域的皮肤水分含量测量。每个区域依照平行测定15次。先测量各测试区域的空白值，然后按0.072ml样品/cm²的用量，将样品注入到膜布中，并敷在试验区内，时间为20分钟。20分钟后揭掉面膜布，10分钟后测试该区域皮肤水分含量，即为30分钟时皮肤的水分含量。之后分别测量1小时，2小时，受试区域和空白对照区域的皮肤含水量(验证时按此时间测定)，同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成。

对于长效补水的测试，受试者每天在同一区域按照上述测试方法自行进行涂抹测试样品，并在第14、28天时在不涂抹待测样品的情况下，测试皮肤的水分含量。

测试数据：按实验的设计分别测得各时间段的皮肤水分含量，并计算各个时间点的皮肤水分含量的增加量。

实验结果：

1.1)即时补水结果

表3专利组合的即时补水效果

结果：从即时的补水效果来看，对照样-1为基础配方具有一定的补水效果，在30分钟时皮肤的水分含量增加量为127.65％。实例样-1在30分钟时皮肤的水分含量增加到160.73％，120分钟时补水效果仍有164.85％左右，即时补水效果明显，持续时间较长。

1.2)长效补水效果

表4专利组合的长效补水效果

结果：从长效的补水效果来看，持续的使用专利样的话，皮肤的水分含量会有一个增长的过程，在28天时皮肤的水分含量增长约16.15％。同时也侧面的反应了皮肤的屏障功能得到修复，使皮肤的水分含量得到提升。

相对于对照组1，各实验组的补水效果更显著(p<0.05)，说明本发明的组合物存在显著的补水效果；

与对照组2相比，实施例1～3的补水效果更显著(p<0.05)，说明多组分的组合产生更显著的增效协同作用，其效果优于其中部分组分的组合；

与对照组3相比，实例样1～3的补水效果存在统计学差异(p<0.05)，说明需在特定配比下，各组分才能产生更好的增效协同作用；

相对于实例样1～2，实例样3的补水效果更显著(p<0.05)，说明适当的浓度下，组合物的补水效果更显著。

2)皮肤的屏障修复效果(TEWL值)

-测试仪器：德国CK公司多功能皮肤测试仪，探头型号Tewameter TM300，

-测试原理：FICK菲克扩散定律：dm/dt＝D.A.dp/dx。通过两组温度、湿度传感器测定近表皮(约1cm内)由角质层水分散失在不同亮点形成的水蒸气压梯度，直接测出经皮散发的水分量。TEWL值是皮肤屏障好坏的一个重要标志，皮肤的TEWL值越低，说明皮肤的屏障功能越好，反之越差。

-测试环境：测试环境温度为22±1℃，湿度为50±5％，并且进行实时动态检测；

-测试志愿者：有效志愿者至少30人，年龄在16-65岁之间(妊娠或浦乳期妇女除外)；无严重系统疾病，无免疫缺陷或自身免疫性疾病者；既往对护肤类化妆品无严重过敏史者；近一个月内未曾使用激素类药物及免疫抑制剂者；未参加其他临床试验者；按规定使用受试药物且资料齐全；测试前所有自愿者应填写知情同意书。

-测试步骤：

测试前准备：受试部位前2-3天不能使用任何产品(化妆品或外用药品)。实验前，受试者需要同意清洁双手前臂内测，自然风干。清洁后受试者双手前臂内测做好测量区域标记。正式测试前应在符合标准房间内静坐至少30min，不能喝水，前臂暴露，呈测试状态放置，保持放松。

测试过程：实验中左右手臂内侧标记3×3cm²试验区域，同一手臂可以标记多个区域，区域间隔1cm。测试产品和空白对照均随机分布在左右手臂上。使用探头TewameterTM300进行受试区域和对照区域的皮肤水分散失量测量。每个区域依照平行测定15次。先测量各测试区域的空白值，然后按0.072ml样品/cm²的用量，将样品注入到膜布中，并敷在试验区内，时间为20分钟。20分钟后揭掉面膜布，10分钟后测试该区域皮肤水分散失含量，即为30分钟时皮肤的水分散失量。之后分别测量1小时，2小时，受试区域和空白对照区域的皮肤水分散失量，同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成。

对于长效的屏障修复的测试，受试者每天在同一区域按照上述测试方法自行进行涂抹测试样品，并在第14、28天时在不涂抹待测样品的情况下，测试皮肤的水分散失量TEWL。

测试数据：按实验的设计分别测得各时间段的皮肤水分散失量，并计算各个时间点的皮肤水分散失量的减少量。皮肤水分散失量的减少量越大，皮肤屏障修复的效果越好。

实验结果：

2.1)即时屏障修复效果

表5即时皮肤水分散失量的减少量

结果：从皮肤水分散失量的减少量来看，对照样-1为基础样具有一定的降低皮肤水分散失量的效果，30分钟时，皮肤的水分散失量的减少为5.88％，专利样的皮肤的水分散失量的减少量达到9.11％，显著降低了皮肤的水分散失量，体现了皮肤屏障的修复的效果。

2.2)长效屏障修复效果

表6长效皮肤水分散失量的减少量

结果：从长效的皮肤水分散失量的减少量的结果来看，持续28天实例样-1的使用，使得皮肤的水分散失量的减少量达到16.86％，即皮肤的水分散失量在不断的减少，体现了皮肤的屏障功能得到了有效的修复。

相对于对照组1，各实验组的保湿效果更显著(p<0.05)，说明本发明的组合物存在显著的保湿效果；

与对照组2相比，实施例1～3的保湿效果更显著(p<0.05)，说明多组分的组合产生更显著的增效协同作用，其效果优于其中部分组分的组合；

与对照组3相比，实例样1～3的保湿效果存在统计学差异(p<0.05)，说明需在特定配比下，各组分才能产生更好的增效协同作用；

相对于实例样1～2，实例样3的保湿效果更显著(p<0.05)，说明适当的浓度下，组合物的保湿效果更显著。

3)细胞增殖效果-MTT染色法

-实验原理

MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝，是一种黄颜色的染料。MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在540或720nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

-实验材料和方法

实验材料:DMEM、DPBS、Typsin-EDTA、Petri dish、96well dish、0.4％台盼蓝溶液、无水乙醇或95％乙醇溶液、普通显微镜、细胞计数板、移液枪、MTT、DMSO

-实验方法：

1.成纤维细胞(角质形成细胞)培养：将培养好的成纤维细胞(角质形成细胞)用Typsin-EDTA处理后收集，用DMEM悬浮后利用血细胞计数板计数后将悬浮液稀释到细胞的浓度为5×10⁴cells/ml备用。将准备好的细胞悬浮液分别分株到96well dish和6welldish中培养，其中96well dish接种量为100ul，6well dish接种量为2ml。在37℃，5％CO₂的培养箱中培养24小时。

2.样品添加：待测样品用DMEM培基稀释，稀释后的浓度分别为：1％(该浓度通过前面的MTT测试，结果为无毒)。细胞培养24小时后，移除之前的DMEM，然后用DPBS小心洗涤后。按照顺序加入第一步准备的添加了待测样品的DMEM培养基。在37℃，5％CO₂的培养箱中培养48小时。

3.MTT染色：冷冻保管的MTT粉末利用DPBS溶解，配制成浓度为2mg/ml的溶液。48小时培养后的96well dish中，移除培养基后，分别添加50ul/well的MTT溶液。在37℃，5％CO₂的培养箱中培养3小时。3小时后完全移除MTT溶液。MTT溶液完全移除后各个well中分别添加100ul/well的DMSO溶液使蓝紫色结晶甲瓒(formazan crystal)溶解。在595nm处测吸光光度。以空白样为基准，计算出各个样品的细胞增殖率。

实验结果如表7：

表7细胞增殖率

结果：从成纤维细胞和角质形成细胞的增殖效果来看，实例样-1能有效的促进成纤维细胞和角质形成细胞的增殖，实例样-1可以分别使成纤维细胞的增值率达到144.40％，角质形成细胞的增值率达到了135.61％，成纤维细胞的增殖可以有效的改善皮肤中真皮层的损伤，而角质形成细胞的增殖可以修复皮肤中的角质层的损伤，从而有效的防止皮肤结构的进一步被破坏，从而提高了皮肤的稳定性。

相对于对照组1，各实验组的促进细胞增殖的效果更显著(p<0.05)，说明本发明的组合物存在显著的促进细胞增殖的效果；

与对照组2相比，实施例1～3的促进细胞增殖的效果更显著(p<0.05)，说明多组分的组合产生更显著的增效协同作用，其效果优于其中部分组分的组合；

与对照组3相比，实例样1～3的促进细胞增殖的效果存在统计学差异(p<0.05)，说明需在特定配比下，各组分才能产生更好的增效协同作用；

相对于实例样1～2，实例样3的促进细胞增殖的效果更显著(p<0.05)，说明适当的浓度下，组合物的促进细胞增殖的效果更显著。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种补水、保湿和/或促进细胞增殖的组合物，其由如下质量份的组分组成：

棕榈酰寡肽 0.00001～0.025份；

欧蓍草提取物 0.0005～0.01份；

水解胶原 0.00005～0.025份。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，由如下质量份的组分组成：

棕榈酰寡肽 0.00001份；

欧蓍草提取物 0.0005份；

水解胶原 0.00005份。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，由如下质量份的组分组成：

棕榈酰寡肽 0.025份；

欧蓍草提取物 0.01份；

水解胶原 0.025份。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，由如下质量份的组分组成：

棕榈酰寡肽 0.001份；

欧蓍草提取物 0.005份；

水解胶原 0.005份。

5.权利要求1～4任一项所述的组合物在制备修复皮肤生理结构的化妆品中的应用。

6.一种修复皮肤生理结构的化妆品，其包括化妆品基质和权利要求1～4任一项所述的组合物；其中权利要求1～4任一项所述的组合物的质量分数为0.00056％～0.04％。

7.根据权利要求6所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品的基质包括：溶解剂、保湿剂、促渗剂、增稠剂和防腐剂；

所述溶解剂为水、甘油、1,2-己二醇和1,3-丁二醇；

所述保湿剂为透明质酸；

所述增稠剂为黄原胶；

所述促渗剂为羟乙基哌嗪乙烷磺酸和戊二醇；

所述防腐剂为对羟基苯乙酮和乙基己基甘油。

8.根据权利要求7所述的化妆品，其特征在于，所述透明质酸由质量比为1:20的高分子量透明质酸与小分子透明质酸组成。

9.根据权利要求6或7所述的化妆品，其特征在于，由如下质量分数的组分组成：

10.权利要求6～9所述化妆品的制备方法，包括：

制备棕榈酰寡肽和水解胶原的母液A：称取棕榈酰寡肽，加入1,2-己二醇，25℃以250～300r/min速度搅拌溶解，再加入水解胶原，25℃以250～300r/min速度搅拌溶解，加入乙基己基甘油，搅拌均匀后，以水稀释至水解胶原的质量分数为0.5％、棕榈酰寡肽的质量分数为0.1％；

制备欧蓍草提取物的母液B：称取欧蓍草提取物与等质量的黄原胶，加入欧蓍草提取物128倍质量的水，25℃以250～300r/min速度搅拌溶解，加入1,3-丁二醇和戊二醇，稀释至欧蓍草提取的质量分数为0.5％；

称取210万透明质酸、酶切透明质酸、羟乙基哌嗪乙烷磺酸、果糖和菊粉，加入水加热至75～80℃，以250～300r/min，搅拌溶解20min；

加入甘油和对羟基苯乙酮，温度控制为65～75℃，以300r/min，搅拌溶解15min；

依次加入所述母液A、母液B，温度控制45℃以下，以100r/min，搅拌15min,冷却至室温制得化妆品。