CN109749958A - 一株用于高碱性环境脱氮除磷的好氧反硝化聚磷菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株用于高碱性环境脱氮除磷的好氧反硝化聚磷菌及其应用，菌株命名为Acinetobacter sp.属于不动杆菌属，保藏编号为：CGMCC No.16930。菌株为革兰氏阴性，在LB培养基上28℃培养18小时后，形成表面光滑、平铺，圆形、中央凸起、边缘整齐的乳白色菌落；细胞短杆状；其最适生长条件为温度28℃，pH值为11。本发明在好氧、碱性环境下对氮磷的去除率均能达到较高水平，实现同步聚磷和反硝化，硝化液不再回流，OH^‑不需要中和，大大减少系统空间和工程造价，也降低了操作难度和减少了二次污染，为简化脱氮除磷工艺提供可能。

Description

一株用于高碱性环境脱氮除磷的好氧反硝化聚磷菌及其应用

技术领域

本发明属于废水处理技术领域，尤其涉及高碱性环境废水脱氮除磷技术。

背景技术

过量氮磷等植物性营养元素的排放会引起水体富营养化，而控制富营养化程度的关键在于严格控制水体中氮磷的含量，为了控制水体的富营养化，改善水环境质量，国家和地方颁布实施了新的水污染物排放标准，其中明确规定了严格的总磷和总氮排放。针对日益严苛的废水排放标准，意味着原来执行《城镇污水处理厂污染物排放标准》(GB18918-2002)中的一级A/B排放标准的绝大多数污水处理厂，必须提高废水处理工艺的脱氮除磷效果以及对难降解有机物的去除性能，即提标改造以达到新的废水排放标准是绝大多数污水处理厂的迫切需求。

传统生物聚磷是在好氧条件下，基于聚磷菌(poly-phos-phate accumulatingorganisms，PAOs)的摄磷原理，将磷超量吸收并通过富磷污泥的排放达到除磷目的；传统的脱氮是铵态氮首先被氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化细菌在好氧(曝气池)条件下依次氧化为亚硝酸盐氮、硝酸盐氮，然后硝化液回流至厌氧池，由反硝化细菌在厌氧条件下将硝酸盐氮还原为氮气或氮氧化物。这种生物脱氮除磷技术意味着脱氮工艺和除磷工艺必须分开实现；同时硝化液回流，反硝化过程中释放OH^-所产生的碱度需要中和，不仅增加了处理成本，还可能造成二次污染。

Robertson等提出协同呼吸理论，指出在反硝化过程中，反硝化菌可以将电子从被还原的物质传递给氧气，同时也可以传递给硝酸盐，从而可以克服在细胞色素c和细胞色素aa3之间电子传递链中的“瓶颈现象”，允许电子流同时传输给反硝化酶以及分子氧，那么反硝化反应就可能在好氧环境中发生。

好氧反硝化聚磷菌(Denitrifying phosphorus accumulating bacteria， DNPB)是一类兼有脱氮和除磷特性的聚磷菌，它们能在好氧条件下以硝酸盐和氧气作为电子受体进行同步反硝化(脱氮)和过量吸磷(除磷)过程。它们的发现能成功解决传统工艺中脱氮和除磷两过程在时间和空间上难以统一的问题，并且硝化液无需回流，可实现脱氮除磷的同步进行。然而此类菌及其特性的研究都处于初级阶段，没有系统的分离筛选方法，也没有方便快捷的培养驯化方式。因此，筛选分离出更多的好氧反硝化聚磷菌，并探明它们的种属及特性，明确它们的生长影响因子，是对生物反硝化除磷理论的丰富和补充，将有助于废水生物脱氮除磷工艺的研究、开发和应用。

近年来，国内外学者相继对DNPB的种属组成及脱氮除磷性能展开了研究。CN102827787A于2012年12月19日公开了一株蜡状芽孢杆菌属(Pseudomonas sp.H-hrb01)的DNPB，通过往SBR反应器中投加菌液进行污水生物强化处理，经过13d的处理后，TP浓度由8.42mg/L降低为0.39mg/L，去除率为96.25％，氨氮由31.46mg/L降低至1.65mg/L，去除率为97.7％，同时COD_cr由88mg/L降低至23.72mg/L。CN102864098A于2013年1月9日公开一株铜绿假单胞菌,该菌经过缺磷培养基进行厌氧释磷培养后，转接于富磷培养基(KH₃PO₄ 25mg/L、NH₄Cl 305.52mg/L)中摇床培养，经过48h后，吸磷率为92％，氮去除率为87.7％。CN103103153A于2013年5月15日公开一株灿烂类芽孢杆菌，该专利中按照10％的接种量将种子液接入培养基(KNO₃ 1g/L，KH₂PO₄ 0.4g/L)中静置培养，经过 24h后TN、TP的去除率分别达到57.5％、50.2％。在2013年5月22日CN103114062A 公开了一株假产碱假单胞菌，同样按照10％接种量将种子液接入培养基(KNO₃ 1g/L，KH₂PO₄ 0.4g/L)中静置培养处理，24h后TN、TP去除率为56.93％、43.56％。在2015年06月24日CN103726366A公开一株克雷伯氏菌属的反硝化聚磷菌，该专利将菌悬液接入TP含量为2.8mg/L、硝酸盐氮为31.7mg/L的废水中进行摇床培养，经过24h处理后，二者的去除率分别达到85.94％、81.79％。同年 12月09日CN105132306A公开一株铜绿假单胞菌的反硝化聚磷菌，利用该菌对 TN、TP、COD_cr含量分别为78.5mg/L、4.63mg/L和279mg/L的生活污水进行摇床培养，48h后三者的去除率为93.7％、51％、90.7％。

可见，目前有关反硝化聚磷菌种属组成的研究仍处于初步阶段，发现的种属较为单一，其次已公开的菌株一般需要经过较长时间的厌氧/好氧培养才能显示出较强的脱氮除磷性能，其中最短培养时间24h的，但其处理的污水的初始浓度并不高，可见其难以适应污水的污染物浓度波动以及难以处理高浓度的含氮磷的污水。其次，目前对于具有特殊性能的反硝化聚磷菌的发现较少，目前已有的研究中有发现耐低温的、耐贫营养的反硝化聚磷菌，但在耐碱性方面还尚无发现。因此，进一步地研究反硝化聚磷的脱氮除磷性能及相关的耐性抗性性能对于适应不同的污水处理有显著的帮助，并且有利于改善脱氮除磷工艺。

与本发明最相近的实验方案为专利《一株具有脱氮除磷双重能力的反硝化聚磷菌及其应用》(CN103114062A)，该菌株为假产碱单胞菌，其最佳脱氮条件为温度25～30℃，pH为7.0～8.0，无亚硝酸盐积累。在其运用处理过程中，前 24h氮磷(KH2PO4:0.4g/L,KNO3:1g/L)去除率分别为56.93％、43.56％，整个生命周期(120h后进入衰亡期)氮磷去除率为75.6％和57.5％。

综上所述，对于高碱性污水的处理目前还缺乏相应的技术，以高效，不增加二次污染低成本的予以处理。

发明内容

鉴于现有技术的以上不足，本发明的目的是提供一株高碱性环境脱氮除磷的好氧反硝化聚磷菌及废水处理方法，以克服现有技术的以上缺点。

本发明是通过如下的手段实现的：

一株用于高碱性环境脱氮除磷的好氧反硝化聚磷菌，该菌株命名为Acinetobacter sp.，属于不动杆菌属，已于2018年12月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.16930。保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明的目的还在于，高碱性环境脱氮除磷的好氧反硝化聚磷菌在高碱性废水处理中的应用方法，其特征在于：

①使用前利用液体LB培养基进行菌株活化：挑取一环上述Acinetobacter sp.HZ8接种于50毫升新鲜的液体LB培养基中，在pH为11，温度为28℃条件下培养12h，离心后弃其上清液加入生理盐水，即可获得菌悬液，其OD₆₀₀值调整为0.5±0.02；

②取活化后的菌悬液接种于待处理的含高磷高氮的高碱性生活污水中，菌悬液接种量为污水体积的10％，在摇床设置温度为28℃，转速为150r/min下振荡培养；

③每12小时取样一次，检测反应器中COD_cr，总氮，总磷的浓度变化；检测方法为：TP，钼酸铵分光光度法；TN，碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法；COD_cr，重铬酸盐法。

采用本发明方案，其最适生长条件本专利菌株的应用实验方案，与专利CN105132306A菌株的应用实验方案最为相近。

该专利菌株是通过稀释涂布平板法、平板划线法等从曝气池中分离筛选出的，经过形态特征、生理生化特性及16S rDNA分子鉴定确定该菌为铜绿假单胞菌LLHD-1,其最适生长温度为25～37℃，最适生长pH为6～9。之后将该菌的菌悬液接种于含KNO₃ 0.6g/L及KH₂PO₄ 1g/L的培养基中，设置摇床摇速为 120r/min，温度30℃，培养24h后总磷去除率为51％，总氮去除率为93.7％。同时，也将该菌接种于实际的生活污水中，并将污水的KNO₃浓度调整至0.6g/L，在相同的反应环境下培养48h后，COD_cr的浓度279mg/L降低了55％～68％，总磷的浓度4.63mg/L降低了35.3％～43％，而总氮的去除率则为41.8％～60.0％。

本发明菌株能够在pH为11时保持脱氮除磷率为92.4％、94.2％，同时进行实际的污水处理应用时，采用摇床培养，对于相同水质污水的处理，本发明菌株更具高效性，在24h内实现COD_cr 84％、TP 95.7％、TN 79.2％的去除率。为温度28℃，pH值为11。本发明在好氧、碱性环境下对氮磷的去除率均能达到较高水平，实现同步聚磷和反硝化，大大减少系统空间和工程造价，硝化液不再回流，OH^-不需要中和，也降低了操作难度,运行成本和减少了二次污染，为简化脱氮除磷工艺提供可能。

附图说明

图1本发明菌株菌落形态图。

图2本发明菌株的显微镜观察图

图3本发明不同温度下菌的脱氮除磷效果图。

图4不同pH下菌的脱氮除磷效果图

图5不同摇速下菌的脱氮除磷效果图。

图6生长曲线图。

图7Acinetobacter sp.HZ8在污水中的脱氮除磷性能图。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明。

制备实施例：

A菌株的富集培养、纯化、筛选及鉴定

1、培养基

①反硝化富集培养基(/L)：琥珀酸钠2.84g；NaNO₃ 10mMol；KH₂PO₄ 1.36g； (NH₄)₂SO₄，0.27g；酵母提取物1g；MgSO₄·7H₂O 0.19g；微量元素溶液1mL，去离子水1000mL，Ph＝7.2。

②溴百里酚蓝(BTB)培养基(/L)：天冬酰胺1g；KNO₃ 1g；KH₂PO₄，1g； FeCl₂·6H₂O0.05g；CaCl₂·2H₂O 0.2g；MgSO₄·7H₂O 1g；BTB(1％量溶解于乙醇)1ml；琼脂20g；去离子水1000mL，pH 7.0～7.3。

③LB培养基(/L)：酵母浸膏10g，蛋白胨10g，NaCl 5g，双蒸水1000mL， pH7.0～7.2；固态培养基中添加琼脂20g。

④缺磷培养基(/L)：CH₃COONa.3H₂O 3.23g；Na₂HPO₄.2H₂O 23mg；NH₄Cl 152.8 mg；MgSO₄.7H₂O 81.12mg；K₂SO₄ 17.83mg；CaCl₂.2H₂O 11mg；微量元素溶液 2ml；ph＝7。

⑤反硝化富磷培养基(/L)：CH₃COONa.3H₂O 3.23g；KH₂PO4 50mg；NH₄Cl 250mg；MgSO₄.7H₂O，91.26mg；CaCl₂ 19.39mg；KNO₃ 100mg；微量元素溶液2mL； ph＝7.0-7.2。

微量元素溶液(/L)：50gEDTA、5gMnCl₂·4H₂O、1.6gCuSO₄·5H₂O、5gFeSO₄·7H₂O、50mgCoCl₂·6H₂O、10mgKI、1.1g(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O和50mgH₃BO₃。

2、菌株的富集培养、纯化

首先取四川郫县合作镇生活污水处理厂曝气池的活性污泥，将其混合均匀后取10mL污泥置于无菌的250mL锥形瓶中，加入100mL的无菌反硝化富集培养基，于摇床中培养(设置培养温度28℃、转速160r/min)，待培养基浑浊后，取10mL 菌悬液于新制的100mL反硝化富集培养基中继续摇床培养3d(设置培养温度28℃、转速160r/min)。

培养结束后用无菌移液管吸取1mL富集液于装有9mL无菌水的试管中，混匀，依此类推稀释至稀释度为10^-6；同时分别从稀释梯度为10^-3、10^-4、10^-5、10^-6的稀释液中取0.1mL分别涂布于LB培养基中，每个稀释度设置3个平行组，用无菌三角玻璃刮刀在培养基表面均匀涂布后，将平板倒置，放入28℃恒温生化培养箱中，培养至长出明显菌落。选取形态清晰的单菌落进行划线分离培养，共挑出形态、大小、颜色不同的菌落67株，然后单菌落继续转接纯化培养，重复划线培养数次，直至显微镜下观察显示无杂菌为止，即得纯菌落。

3、菌株的复筛

①进行蓝白斑初筛以证明其反硝化能力，即分别将67株纯菌落点接于溴百里酚蓝(BTB)培养基上，于28℃下培养至长出明显的菌落，选择具有蓝白斑培养现象的菌株作为初筛菌株，共有33株，分别命名为B1～B33。其次进行Albert染色复筛，检测初筛菌株是否含有poly-P颗粒具有聚磷作用，将菌株B1～B33接种于LB液体培养基中缺氧培养12h后进行Albert异染颗粒染色，有黑色聚磷颗粒物质的菌株即为聚磷菌；共9株菌体。结合蓝白斑筛选结果确定这9株菌为反硝化聚磷菌，将其接种保藏于LB斜面培养基上，4℃保存备用。

③脱氮除磷率测定：分别从9株初筛菌株的LB斜面培养基上挑取一环菌苔接种于50mL液体LB培养基中，振荡培养8h(设置温度为28℃、摇速为150r/min)后，于转速4000r/min下离心15min倾去上清液，利用无菌生理盐水洗涤2～3遍，再加入无菌生理盐水调节OD₆₀₀＝0.5±0.02作为菌悬液；取5mL菌悬液接种于50mL反硝化富磷培养基中，摇床培养48h(设置温度为28℃、摇速为150r/min)。培养结束后将培养液置于离心管中在4000r/min转速下离心15min，根据《水质总磷的测定钼酸铵分光光度法》(GB 11893-89)和《水质总氮的测定碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法》(HJ 636—2012)分别测定上清液中TP、TN的浓度值；同时测定灭菌后未接种菌体的空白培养基的TP、TN的含量。依据TP、TN的浓度变化，按下式分别计算菌株的除磷率和脱氮率，具体结果如下表1。

除磷率：

脱氮率：

式中，β₁、β₂为除磷率与脱氮率；c₀为灭菌后未接种菌体的空白培养基的TP、 TN的浓度值；c为接菌培养48h离心后的上清液的TP或TN的浓度值。

表1好氧培养筛选结果

根据筛选结果，B30具有最高的除磷率和脱氮率，分别为72.15％、65.71％，因此将其作为目的菌株进行进一步的鉴定及特性检测，并命名为SWB-30。

B菌株的鉴定

①本发明菌株SWB-30的菌落形态特征：在LB培养基上生长18h后菌落呈乳白色，不透明，圆形，表面光滑、湿润，中央凸起，边缘整齐，其菌落形态如图1所示；菌体为短杆状、无芽孢、有荚膜，大小约为1.0μm×2.5μm，显微镜观察图如图2所示。

②本发明菌株SWB-30生理生化鉴定：SWB-30为革兰氏阴性菌，有球杆变化，不具有运动性；营养要求不严格，在单一碳源的铵盐无机盐培养基上生长良好，利用硝酸盐为氮源，不需要生长因子，能水解淀粉、利用柠檬酸盐；氧化酶阴性，接触酶阳性，硝酸盐还原实验阳性；最适生长温度15～37℃，45℃以上不再生长。

③本发明菌株SWB-30的16S rDNA基因片段的PCR扩增及种属分析：以该细菌的基因组DNA为模板扩增16S rDNA，采用一对通用引物为扩增引物，用PCR仪 (T100，伯乐生命医学产品有限公司)进行扩增反应。

上游引物(27F)：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'

下游引物(1492R)：5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’

PCR反应体系(20μl)：10×Ex Taq buffer 2.0μl,5U Ex Taq 0.2μl,2.5mM dNTPMix 1.6μl,27F 1μl,1492R 1μl,DNA0.5μl,ddH2O13.7μl。PCR反应条件：95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸90s，共25个循环，反应前预变性5min(95℃)，循环结束后延伸10min(72℃)，0.8％琼脂糖凝胶电泳分析 PCR产物，并委托上海美吉生物医药科技有限公司使用3730XL测序仪进行一代双末端测序，测序后得到菌株SWB-30的16SrDNA的1493个有效碱基。

将菌株序列提交到NCBI进行blast检索，发现菌株SWB-30与Acinetobacter sp(GQ369439.1)菌株同源性为98.6％。根据我们对菌株SWB-30的形态学、培养特征、生理生化特征、16S rDNA基因的研究结果，菌株SWB-30具有典型的不动杆菌属(Acinetobacter)特征，鉴定本发明菌株SWB-30为Acinetobacter，命名为： Acinetobacter sp.HZ8。

C菌株的培养

1、培养基

①反硝化富磷培养基(/L)：CH₃COONa.3H₂O 3.23g；KH₂PO4 500mg；NH₄Cl 250mg；MgSO₄.7H₂O，91.26mg；CaCl₂ 19.39mg；KNO₃ 1g；微量元素溶液2mL； ph＝7.0-7.2。

②LB培养基(/L)：酵母浸膏10g，蛋白胨10g，NaCl 5g，双蒸水1000mL， pH＝7.0～7.2；固态培养基中添加琼脂20g。

2、菌株的最佳培养条件测定

从活化的LB斜面上挑取一环菌苔接种于LB液体培养基中，摇床震荡培养8小时(设置温度为28℃，转速为150r/min)，于转速4000r/min下离心15min倾去上清液，利用无菌生理盐水洗涤2～3遍，再加入无菌生理盐水调节OD₆₀₀＝0.5±0.02 作为菌悬液备用。实验时，按10％的接种量将菌悬液接种于反硝化培养基或污水中。

1)最佳培养温度

分别取5mL菌悬液接种于5个装有50mL的无菌反硝化培养基中，分别在温度为 18℃、23℃、28℃、33℃、38℃下，摇床振荡培养24h(设置摇速为150r/min)，测定培养液的OD₆₀₀值及离心(设置时间为15min、转速为4000r/min)后上清液中 TP、TN的浓度，计算脱氮率和除磷率，结果见图3。由图3可知，菌株在好氧培养 24h后，在18～28℃范围内OD₆₀₀、脱氮率、除磷率逐步上升。当温度为28℃时OD₆₀₀为0.77，脱氮率、除磷率分别为88.2％、89.4％，脱氮率除磷率均达到最高值，而在其他温度下均较难达到同样的脱氮除磷效果。可见，该菌株的适宜培养温度为25～30℃，最适宜温度为28℃。

2)最佳培养pH值

分别配制pH值为6、7、8、9、10、11、12的反硝化富磷培养基母液50mL，灭菌后接入5mL菌悬液，摇床震荡培养24h(设置温度为28℃、转速为150r/min)，培养结束后测定培养液的OD₆₀₀值及离心(设置时间为15min、转速为4000r/min)后上清液中TP、TN的浓度并计算脱氮率和除磷率，结果见图4。可见，本发明菌株在pH值为6～11的范围内OD₆₀₀值、脱氮率、除磷率逐步上升，在pH为11时生长情况最好，此时OD₆₀₀值为0.964，脱氮除磷效能最佳，除磷率为94.24％，脱氮率为 92.4％；但pH为6时OD₆₀₀值仅为0.263，脱氮除磷率最低，脱氮率为32.9％，除磷率为42.1％，即此条件下菌株生长缓慢，脱氮除磷效果不理想；菌株在pH为12的条件下也能较好的生长，此时OD₆₀₀为0.916，脱氮率除磷率依然保持在90％、 91％左右。因此，菌株SWB-30脱氮除磷的适宜pH为10～11，最佳pH为11。

3)最佳培养摇速

分别吸取5mL菌悬液接种于5个装有50mL反硝化富磷培养基的锥形瓶中，置于摇床摇速分别为110r/min、130r/min、150r/min、170r/min、190r/min中恒温28℃振荡培养24h，培养结束后测定培养液的OD₆₀₀值及离心(设置时间为15min、转速为4000r/min)后上清液中TP、TN的浓度并计算脱氮率和除磷率，结果见图5。可见，菌株在恒温培养24h后，当摇床摇速为150r/min时，生长最好，脱氮除磷效果最佳，其OD₆₀₀为0.93，除磷率为91.87％，脱氮率为88.7％；次之为摇速为170r/min时，其OD₆₀₀为0.88，除磷率为88.6％，脱氮率为85.9％。当摇速较低时，脱氮除磷效果相对降低，如当摇速为130r/min时，其OD₆₀₀为0.69，除磷率为78.2％，脱氮率为72.4％。因此，菌株SWB-30培养时最佳的摇床摇速为150r/min。

D菌株的生长曲线

从LB斜面培养基中挑取一环菌苔接种于装有50mL新鲜的LB液体培养基的锥形瓶中，摇床震荡培养8小时(设置温度28℃，转速150r/min)，离心(设置转速4000r/min，时间15min)倾去上清液，加入无菌生理盐水摇匀即得菌悬液；吸取2mL菌悬液接种于100mL新鲜LB液体培养基中，取5mL混合液用于测定OD₆₀₀值后，将其置于摇床中震荡培养(设置温度28℃，转速150r/min)，每隔4h取样测定其 OD₆₀₀值。以培养时间为横坐标，OD₆₀₀为纵坐标绘制菌株的生长曲线，结果如下图6。由图6可知菌株的对数生长期约为10-28h，生长迅速。

E本发明菌株在污水处理中的应用

取四川郫县合作镇污水处理厂调节池的污水1000mL，进行脱氮除磷试验，具体步骤如下：

为体现不动杆菌SWB-30的耐高碱性及高效的脱氮除磷性能，在污水中添加 KNO₃使污水中TN的浓度为0.5g/L，同时调节污水的pH为11，按照10％的接种量将 OD₆₀₀值为0.5±0.02的菌悬液加入300mL污水中，同时设置空白对照组，即按10％的比例将无菌水加入300mL污水中；设置反应器温度为28℃、摇床转速为 150r/min，振荡培养；每12小时取一次样，测定上清液中的TP、TN及COD_cr的浓度变化，结果见图7可见培养过程中上清液TP、TN和COD_cr的浓度均逐渐降低；24h 的反应，添加了不动杆菌SWB-30的污水的TP的浓度由4.83mg/L降低至0.21mg/L， TN的浓度由0.5g/L降低至0.104g/L，COD_cr由319g/L降低为51mg/L，去除率分别为 95.7％、79.2％、84％。同比于空白对照组三者的去除率分别提高了75.2％、49％和56％。

在已有的发明专利中，有些是利用厌氧-好氧、厌氧-缺氧进行反硝化聚磷菌的筛选的，过程较为繁琐，最终菌株的脱氮除磷效率也一般，例如；CN102864098A 于2013年1月9日公开一株铜绿假单胞菌,该菌经过缺磷培养基进行厌氧释磷培养后，转接于富磷培养基(KH₂PO₄ 25mg/L、NH₄Cl 305.52mg/L)中摇床培养，经过 48h后，吸磷率为92％，氮去除率为87.7％。有些是先进行菌株的活化培养制作为菌悬液进而投加于污水或者培养基中进行摇床培养的，过程简化，但其处理效率不高，难以适应高浓度含氮磷废水的处理以及难以满足快速高效地的要求。例如：在2015年06月24日CN103726366A公开一株克雷伯氏菌属的反硝化聚磷菌，该专利将菌悬液接入TP含量为2.8mg/L、硝酸盐氮为31.7mg/L的废水中进行摇床培养，经过24h处理后，三者的去除率分别达到85.94％、81.79％。同年12月09日CN105132306A公开一株铜绿假单胞菌的反硝化聚磷菌，利用该菌对TN、TP、COD_cr含量分别为78.5mg/L、4.63mg/L和279mg/L的生活污水进行摇床培养，48h后三者的去除率为93.7％、51％、90.7％。其次对于反硝化聚磷菌的耐受性能研究较为薄弱，更多的耐受性能菌株的发现将有利于解决不同水质污水的处理要求。因此，本发明专利菌株的高效脱氮除磷效率以及耐高碱性的生长特性对于目前污水的生物脱氮除磷工艺的升级具有重要的意义。

Claims (3)

1.一株用于高碱性环境脱氮除磷的好氧反硝化聚磷菌，其特征在于：该菌株命名为Acinetobacter sp.，属于不动杆菌属，已于2018年12月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.16930。

2.权利要求1所述之高碱性环境脱氮除磷的好氧反硝化聚磷菌在高碱性废水处理中的应用。

3.权利要求1所述之高碱性环境脱氮除磷的好氧反硝化聚磷菌在高碱性废水处理中的应用方法，其特征在于：

①使用前利用液体LB培养基进行菌株活化：挑取一环上述Acinetobacter sp.HZ8接种于50毫升新鲜的液体LB培养基中，在pH为11，温度为28℃条件下培养12h，离心后弃其上清液加入生理盐水，即可获得菌悬液，其OD₆₀₀值调整为0.5±0.02；

②取活化后的菌悬液接种于待处理的含高磷高氮的高碱性生活污水中，菌悬液接种量为污水体积的10％，在摇床设置温度为28℃，转速为150r/min下振荡培养；

③每12小时取样一次，检测反应器中COD_cr，总氮，总磷的浓度变化；检测方法为：TP，钼酸铵分光光度法；TN，碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法；COD_cr，重铬酸盐法。