CN109745303A - 一种增强抗肿瘤免疫应答的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种二甲双胍的第二医药用途，即在增强抗肿瘤免疫应答中的用途。本发明通过利用已经在临床中普遍使用的、机体耐受性良好的降血糖药物二甲双胍对肿瘤细胞进行处理，使得肿瘤细胞更容易受到宿主的免疫攻击，从而起到抗肿瘤的效应。因此，本发明的二甲双胍可用于制成增强抗肿瘤免疫应答的药物、抗肿瘤药物或增强抗肿瘤免疫应答的试剂盒中。

Description

一种增强抗肿瘤免疫应答的方法

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗技术领域，具体涉及二甲双胍在增强抗肿瘤免疫应答中的用途。

背景技术

目前最广泛使用的肿瘤一线治疗包括手术、放疗、化疗等手段，这些传统手段普遍具有特异性差等特点，即无法避免在发挥疗效的同时降低对正常细胞的损伤。另一方面，近年来免疫治疗兴起，因其具有高效的特征而备受关注，目前，如何进一步增强免疫治疗的疗效已经成为肿瘤治疗领域的热点和关键。虽然已有报道在化疗药物如铂类化疗药物的协同治疗的条件下，化疗药物通过肿瘤毒性使得肿瘤抗原得到释放，因而免疫治疗的疗效可能得到增强，但化疗药物本身对机体正常细胞会造成损伤，而且化疗药物对免疫细胞具有负面影响，可能会降低免疫治疗的效果，因而不是理想的增强免疫治疗疗效的辅助药物。

二甲双胍是一种已在临床中应用多年的用于治疗糖尿病的药物，其主要机制可能是通过促进组织或细胞中糖的无氧酵解，有效抑制或减缓胃肠道葡萄糖的吸收，并能抑制肝脏葡萄糖的产生，从而降低血糖浓度。多年来的临床应用显示，二甲双胍副作用小，是一种机体耐受性较高的药物。

发明内容

本发明的发明人在研究中惊奇地发现，利用在临床中普遍使用的、机体耐受性良好的降血糖药物二甲双胍处理肿瘤细胞，使得肿瘤细胞更容易受到宿主的免疫攻击，从而起到抗肿瘤的效应。本发明正是在上述发现的基础上提出的，具体包括如下方案：

根据第一方面，一种实施例中提供一种二甲双胍在制备增强抗肿瘤免疫应答的药物中的用途。

进一步地，上述肿瘤是红白血病或淋巴瘤。

进一步地，上述药物用于人肿瘤免疫治疗的辅助药物。

根据第二方面，一种实施例中提供一种二甲双胍在制备抗肿瘤药物中的用途。

进一步地，上述肿瘤是红白血病或淋巴瘤。

进一步地，上述药物用于人肿瘤免疫治疗的辅助药物。

根据第三方面，一种实施例中提供一种二甲双胍在制备增强抗肿瘤免疫应答的试剂盒中的用途。

进一步地，上述试剂盒用于增强体外培养的肿瘤细胞对免疫攻击的敏感性。

进一步地，上述肿瘤细胞是红白血病或淋巴瘤；更优选，人红白血病细胞K562细胞系，或小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞系。

进一步地，上述试剂盒用于增强体内肿瘤细胞对免疫攻击的敏感性。

进一步地，上述肿瘤细胞是淋巴瘤；更优选，小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞系。

进一步地，上述二甲双胍以0.3～10mM的浓度范围使用。

进一步地，上述二甲双胍以3mM的浓度使用。

本发明的有益效果是：

现有的抗肿瘤化疗药物普遍具有对正常细胞的毒性，而本发明通过利用已经在临床中普遍使用的、机体耐受性良好的降血糖药物二甲双胍进行处理，使得肿瘤细胞更容易受到宿主的免疫攻击，从而起到抗肿瘤的效应。因此，本发明的二甲双胍可用于制成增强抗肿瘤免疫应答的药物、抗肿瘤药物或增强抗肿瘤免疫应答的试剂盒中。

附图说明

图1示出了使用3mM二甲双胍或等体积的DMSO溶剂(对照)处理人红白血病细胞K562细胞系24小时后，用人原代NK细胞对K562细胞系进行体外杀伤实验的结果，显示二甲双胍显著增强人原代NK细胞对K562细胞的杀伤效应。

图2示出了使用3mM二甲双胍或等体积的DMSO溶剂(对照)处理小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞系24小时后，用小鼠原代NK细胞对YAC-1细胞系进行体外杀伤实验的结果，显示二甲双胍显著增强小鼠原代NK细胞对YAC-1细胞的杀伤效应。

图3示出了使用3mM二甲双胍或等体积的DMSO溶剂(对照)处理小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞系24小时后，将DMSO或二甲双胍处理的YAC-1细胞各100万，分别用不同的荧光染料标记，然后腹腔注射C57BL/6小鼠，4小时后收取腹腔灌洗液，通过计算残余的YAC-1细胞数量，显示二甲双胍处理过的YAC-1细胞在小鼠体内被清除的数量显著高于对照组。

具体实施方式

下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本发明能被更好的理解。然而，本领域技术人员可以毫不费力的认识到，其中部分特征在不同情况下是可以省略的，或者可以由其他元件、材料、方法所替代。在某些情况下，本发明相关的一些操作并没有在说明书中显示或者描述，这是为了避免本发明的核心部分被过多的描述所淹没，而对于本领域技术人员而言，详细描述这些相关操作并不是必要的，他们根据说明书中的描述以及本领域的一般技术知识即可完整了解相关操作。

本发明研究了用二甲双胍在体外对人或小鼠来源的肿瘤细胞进行处理，然后检测肿瘤细胞在体外及体内对免疫细胞攻击的敏感性。

具体而言，二甲双胍对肿瘤细胞的处理方法如下：

首先，相等数量的肿瘤细胞在适当的密度下用完全培养基重悬，加入浓度范围0.3～10mM之间的二甲双胍，或等体积的DMSO溶剂，37℃培养箱培养24小时。然后，用磷酸盐缓冲液或无血清培养基等，对经过二甲双胍或溶剂处理的肿瘤细胞进行洗涤至少2次，然后对肿瘤细胞进行后续的体外、体内杀伤实验。

具体而言，体外杀伤实验方法如下：

用常规方法从人外周血中分离并纯化出CD56⁺CD3^-NK细胞，或从小鼠脾脏中分离并纯化出NK1.1⁺CD3^-NK细胞，然后用CFSE-7AAD法对经过药物或溶剂处理的肿瘤细胞进行4小时的体外杀伤实验。

体内杀伤实验方法如下：

经过二甲双胍或溶剂处理的肿瘤细胞用不同的荧光染料按染料说明书方法进行区分标记(如Cell-Trace Far Red及Cell-Trace Violet)，然后将两组肿瘤细胞各100万个进行混合，腹腔注射C57BL/6小鼠。4-5小时后用流式细胞术检测腹腔中两种荧光染料标记的肿瘤细胞之间的相对比例，从而获知肿瘤细胞被清除的相对效率。

实验表明，经过二甲双胍处理的肿瘤细胞，更容易被免疫细胞如人或小鼠NK细胞(图1、图2)进行体外杀伤，或在体内被清除(图3)。因此，二甲双胍具有增强肿瘤细胞对免疫攻击敏感性的作用。

具体而言，如图1所示，使用3mM二甲双胍或等体积的DMSO溶剂(对照)处理人红白血病细胞K562细胞系24小时后，用人原代NK细胞对K562细胞系进行体外杀伤实验的结果，显示二甲双胍显著增强人原代NK细胞对K562细胞的杀伤效应。如图2所示，使用3mM二甲双胍或等体积的DMSO溶剂(对照)处理小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞系24小时后，用小鼠原代NK细胞对YAC-1细胞系进行体外杀伤实验的结果，显示二甲双胍显著增强小鼠原代NK细胞对YAC-1细胞的杀伤效应。如图3所示，使用3mM二甲双胍或等体积的DMSO溶剂(对照)处理小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞系24小时后，将DMSO或二甲双胍处理的YAC-1细胞各100万，分别用不同的荧光染料标记，然后腹腔注射C57BL/6小鼠，4小时后收取腹腔灌洗液，通过计算残余的YAC-1细胞数量，显示二甲双胍处理过的YAC-1细胞在小鼠体内被清除的数量显著高于对照组。

现有的抗肿瘤化疗药物普遍具有对正常细胞的毒性，而本发明通过利用已经在临床中普遍使用的、机体耐受性良好的降血糖药物二甲双胍进行处理，使得肿瘤细胞更容易受到宿主的免疫攻击，从而起到抗肿瘤的效应。因而与现有技术相比较，本发明的优点在于毒性较低，是已被临床中广泛使用的、机体耐受性良好的药物。

因此，在本发明中，二甲双胍可用于制成增强抗肿瘤免疫应答的药物、抗肿瘤药物或增强抗肿瘤免疫应答的试剂盒中。

本发明的药物中，除了有效成分二甲双胍以外，还可以包括药学上可接受的载体。这样的载体是指无毒的载体、佐剂或媒介物，其不会破坏与其一起配制的化合物(即二甲双胍)的药理学活性。可用于本发明的药物中的药学上可接受的载体、佐剂或媒介物包括但不限于：离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白例如人血清白蛋白，缓冲物质如磷酸盐类，甘氨酸，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物，水，盐类或电解质类例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐，胶体二氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，基于纤维素的物质，聚乙二醇，环糊精类，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯类，蜡类，聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段共聚物，聚乙二醇和羊毛脂等。

基于以上说明，本发明中的“药物”应当理解为至少包含二甲双胍，同时能够增强肿瘤细胞对免疫攻击敏感性的作用的物质。

在本发明的药物中，在包括药学上可接受的载体的情况下，有效成分二甲双胍与载体可以按照任意比例混合，没有特别限制，只要发挥增强肿瘤细胞对免疫攻击敏感性的作用即可，并且可以根据每天优选的有效成分摄入量适当确定，以药物的总质量计，该有效成分的量优选为0.0005至100质量％，更优选为0.005至90质量％，并且特别优选为0.05至80质量％。将药物有效成分与药学上可接受的载体一起制成适当的剂型的技术，是药物技术领域的技术人员公知的，因此可以按照公知的制备药物的方法将本发明中提到的二甲双胍与载体制成可服用的成品药物。

本发明的药物可以制成多种剂型，例如制成片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、煎膏剂或浸膏剂剂型等。每种剂型中二甲双胍的含量可以根据疗效需求确定。相应地，本发明的药物可以通过各种不同的服用方式服用，只要能够保证二甲双胍增强肿瘤细胞对免疫攻击敏感性的作用即可，例如口服、注射、经皮吸收等。

本发明中，对于药物的给药剂量和给药时间没有特别限制，可以是根据患者年龄、患者症状的严重性以及其他条件等适当选择。

本发明中的试剂盒，例如通常用于体外实验的试剂套装，这样的试剂盒可以作为商品化的试剂出售。

以上应用了具体个例对本发明进行阐述，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明。对于本发明所属技术领域的技术人员，依据本发明的思想，还可以做出若干简单推演、变形或替换。

Claims (10)

1.一种二甲双胍在制备增强抗肿瘤免疫应答的药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤是红白血病或淋巴瘤。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物用于人肿瘤免疫治疗的辅助药物。

4.一种二甲双胍在制备抗肿瘤药物中的用途。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述肿瘤是红白血病或淋巴瘤。

6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述药物用于人肿瘤免疫治疗的辅助药物。

7.一种二甲双胍在制备增强抗肿瘤免疫应答的试剂盒中的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述试剂盒用于增强体外培养的肿瘤细胞对免疫攻击的敏感性；

优选地，所述肿瘤细胞是红白血病或淋巴瘤；更优选，人红白血病细胞K562细胞系，或小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞系。

9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述试剂盒用于增强体内肿瘤细胞对免疫攻击的敏感性；

优选地，所述肿瘤细胞是淋巴瘤；更优选，小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞系。

10.根据权利要求7-9任一项所述的用途，其特征在于，所述二甲双胍以0.3~10mM的浓度范围使用；

优选地，所述二甲双胍以3mM的浓度使用。