CN109738560B - 测定酒石酸光学异构体含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了测定酒石酸光学异构体含量的方法，该方法将待测酒石酸进行高效液相色谱检测，所述高效液相色谱检测是通过结合紫外检测器的高效液相色谱仪进行的，基于高效液相色谱检测结果，确定所述待测酒石酸中L(+)‑酒石酸和D(‑)‑酒石酸的含量，其中，所述待测酒石酸预先经过衍生化处理，所述衍生化处理后的酒石酸连接有发光基团。该方法可以很好地检测出酒石酸中L(+)‑酒石酸和D(‑)‑酒石酸的含量，且方法灵敏度高，专属性强，准确度高。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，具体地，涉及测定酒石酸光学异构体含量的方法。
背景技术
许多药物具有光学活性。一般显示具有光学活性的药物分子，其立体结构必定是手性的。手性是指其分子立体结构和它的镜像彼此不能重合。互为镜像关系而又不能重合的一对分子结构称为对映体。虽然对映异构体药物的理化性质基本相同，但由于药物分子所作用的受体或靶位是由氨基酸、核苷、膜等组成的手性蛋白质和核酸大分子等，后者对与之结合的药物分子的空间立体构型有一定的要求。因此，对映异构体在动物体内往往呈现出药效学和药动学方面的差异。鉴于此，美国食品药品监督管理局规定，今后研制具有不对称中心的药物，必须给出手性拆分结果，欧盟也提出了相应的要求。因此，手性拆分已成为药理学研究和制药工业迫切需要解决的问题。
在医药研究领域，L(+)-酒石酸常用作手性拆分剂，对混旋体的拆分具有良好的效果。但L(+)-酒石酸本身也具有光学活性，由此，在进行手性药物及中间体拆分时对L(+)-酒石酸自身的光学活性具有严格的要求。市售L(+)-酒石酸中往往含有少量异构体杂质D(-)-酒石酸，影响L(+)-酒石酸的手性拆分效果。酒石酸无紫外吸收，因此常规的紫外检测器无法测定L(+)-酒石酸及其光学异构体D(-)-酒石酸的含量。药典中记载的L(+)-酒石酸光学活性的检测方法为旋光度法，这种方法专属性及检测准确度差，且无法精确测定L(+)-酒石酸中的光学异构体含量。也有文献采用酸碱滴定法，测定的是酒石酸的总量，未检测出L(+)-酒石酸的光学异构体含量。
因此，开发准确、可靠的检测酒石酸中L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸含量的方法具有重要的意义。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种灵敏度高、专属性强、准确度好的针对酒石酸中L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸的分析检测方法。
在本发明的第一方面，本发明提出了一种测定酒石酸光学异构体含量的方法。根据本发明的实施例，将待测酒石酸进行高效液相色谱检测，所述高效液相色谱检测是通过结合紫外检测器的高效液相色谱仪进行的，基于高效液相色谱检测结果，确定所述待测酒石酸中L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸的含量，其中，所述待测酒石酸预先经过衍生化处理，所述衍生化处理后的酒石酸连接有发光基团。需要说明的是，发光基团的种类不受限制，只要能满足连接有该发光基团的酒石酸能具有紫外吸收即可，同时发光基团也可以叫生色基团，可以是一些含有共轭键的基团，如芳环基，杂芳环基等。根据本发明实施例的方法可以准确、可靠地检测酒石酸L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸的含量，且灵敏度高，专属性强。
根据本发明的实施例，所述待测酒石酸预先经过衍生化处理，所述衍生化处理是通过如下方式进行的：将待测酒石酸与苯甲酰氯发生缩合反应，以便获得衍生化待测酒石酸。酒石酸无紫外吸收的特点，对检测物质进行衍生化处理，使其含有苯环，具有含紫外吸收的化学结构，以便进行高效液相色谱检测。需要说明的是，缩合反应的条件不受特别限制，采用现有技术中的缩合方法即可。根据本发明的一个具体实施例，所述缩合反应可以通过将酒石酸与苯甲酰氯在浓硫酸为催化剂、甲苯为溶剂、温度为115℃的条件下进行3h。
根据本发明的实施例，所述紫外检测器的检测波长为241-243nm，优选为242nm。衍生化处理后的酒石酸在波长为241.5nm附近处有最大吸收，因此，紫外检测器的检测波长设置为241～243nm之间，均可进一步提高检测的准确度。
根据本发明的实施例，所述高效液相色谱的色谱柱为硅胶表面共价键合直链淀粉-三(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)的色谱柱(即IF柱)。发明人发现，色谱柱对酒石酸光学异构体的检测具有重要影响，当色谱柱采用其他多糖衍生化物耐溶剂型手性柱或多糖衍生物涂覆型手性柱，酒石酸不同光学异构体分离效果不理想，得到的峰形也并不理想，甚至无法检测出酒石酸光学异构体。根据本发明实施例的方法可以准确、可靠地检测酒石酸L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸的含量，且灵敏度高，专属性强。
根据本发明的实施例，基于高效液相色谱检测结果，确定L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸分别所对应的峰面积，进而分别确定L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸的含量。
根据本发明的实施例，所述高效液相色谱的流动相由正相有机溶剂组成，所述正相有机溶剂为选自正己烷、异丙醇、乙醇、叔丁基甲醚、四氢呋喃、正庚烷、二氯甲烷中的至少两种。由此，对L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸的分离效果佳。
根据本发明的实施例，所述正向有机溶剂为二氯甲烷和正己烷。由此，对L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸的分离效果进一步提高。
根据本发明的实施例，所述二氯甲烷在所述正向有机溶剂中的体积比为42％～48％，所述正己烷在所述正向有机溶剂中的体积比为58％～52％。进而，根据本发明实施例的检测方法的灵敏度更高，专属性更强、准确度更好。
根据本发明的实施例，所述高效液相色谱的洗脱方式为等度洗脱。
根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法的柱温为28～32℃。。
根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法的流速为0.9～1.1ml/min。
在本发明的第二方面，本发明提出了一种测定酒石酸光学异构体含量的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：1)将待测酒石酸与苯甲酰氯进行缩合反应，以便获得衍生化待测酒石酸，所述衍生化待测酒石酸含有发光基团，所述发光基团为苯环，2)将所述衍生化待测酒石酸溶于二氯甲烷，以便获得供试品溶液，所述供试品溶液中所述衍生化待测样品酒石酸的浓度为1mg/mL；3)将所述供试品溶液利用结合紫外检测器的高效液相色谱仪进行高效液相色谱检测，基于检测结果，获得待测酒石酸中L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸的含量，所述紫外检测器的检测波长为242nm，所述高效液相色谱的色谱柱为硅胶表面共价键合直链淀粉-三(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)的色谱柱，流速为0.9-1.1ml/min，柱温为28-32℃，流动相如下所示：
| 二氯甲烷(％V/V) | 正己烷(％V/V) |
| 42～48 | 58～52 |
根据本发明实施例的方法灵敏度高，专属性强，准确度高。根据本发明的实施例，进一步包括：获得标准曲线，所述标准曲线的获得是通过如下方式进行的：1)利用前面所述的方法测定不同酒石酸光学异构体标准品的浓度，其中，所述酒石酸光学异构体为L(+)-酒石酸，所述L(+)-酒石酸标准品的浓度为0.3091μg/ml，0.5152μg/ml，0.8242μg/ml，1.0303μg/ml，1.2364μg/ml，1.5455μg/ml，2.0606μg/ml，所述酒石酸光学异构体为D(-)-酒石酸，所述D(-)-酒石酸的浓度为0.2914μg/ml，0.4857μg/ml，0.7770μg/ml，0.9713μg/ml，1.1656μg/ml，1.4570μg/ml，1.9426μg/ml，2)以所述酒石酸光学异构体峰面积为纵坐标，以酒石酸光学异构体浓度为横坐标绘制标准曲线。由此，利用所述标准曲线，通过检测待测酒石酸样品中L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸所对应的峰面积，从而获知待测酒石酸样品中L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸所对应的含量。
根据本发明的实施例，本发明具有如下有益效果至少之一：
1、根据本发明的实施例，通过等度洗脱的方式，可以准确、可靠的检测L(+)-酒石酸中的光学异构体D(-)-酒石酸，方法可以很好地分离L(+)-酒石酸制备过程中引入的光学异构体D(-)-酒石酸。
2、根据本发明的实施例，本发明所建立的高效液相色谱法准确度高，所得的异构体测定色谱图基线平稳、峰型对称。而且通过本发明的方法对L(+)-酒石酸与D(-)-酒石酸的衍生化物以及衍生化过程中引入的试剂分离度好，专属性强，能对酒石酸中的L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸的含量进行准确测定。
附图说明
图1显示了根据本发明的一个实施例，L(+)-酒石酸衍生化物的紫外扫描图；
图2显示了根据本发明的一个实施例，L(+)-酒石酸经衍生化后供试品溶液的色谱图；
图3显示了根据本发明的一个实施例，L(+)-酒石酸衍生化物与其光学异构体及衍生化过程中引入的试剂同一色谱条件下的分离色谱图；
图4显示了根据本发明的一个实施例，L(+)-酒石酸经衍生化后供试品溶液的色谱图；
图5显示了根据本发明的一个实施例，L(+)-酒石酸经衍生化后供试品溶液的色谱图；
图6显示了根据本发明的一个实施例，流动相种类的选择(四氢呋喃-正己烷(30:70))；
图7显示了根据本发明的一个实施例，流动相种类的选择(二氯甲烷-正庚烷(30:70))；
图8显示了根据本发明的一个实施例，流动相种类的选择(二氧六环-正己烷(30:70))；
图9显示了根据本发明的一个实施例，L(+)-酒石酸经衍生化后供试品溶液的色谱图；
图10显示了根据本发明的一个实施例，L(+)-酒石酸经衍生化后供试品溶液的色谱图；
图11显示了根据本发明的一个实施例，L(+)-酒石酸经衍生化后供试品溶液的色谱图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售获得的常规产品。
根据本发明的一个具体实施例，L(+)-酒石酸中的光学异构体D(-)-酒石酸的分析检测方法包括以下步骤：
(1)L(+)-酒石酸衍生化取L(+)-酒石酸3.15g，苯甲酰氯8.85g，浓硫酸0.051g，甲苯3.5ml，置100ml三口烧瓶中，搅拌加热至115℃，保持内温反应3h，至无HCl气体冒出，加入9.5ml甲苯，撤去加热，待内温降至45℃时，旋干，即得衍生化样品(L(+)-二苯甲酰酒石酸酐)。
(2)取衍生化样品约10mg，精密称定，于10ml容量瓶中，加5ml二氯甲烷溶解后，用正已烷定量稀释至刻度，配制成每1ml约含衍生化样品1.0mg的溶液，作为供试品溶液。
(3)色谱条件：采用硅胶表面共价键合直链淀粉色谱柱，检测波长为242nm，流速为0.9-1.1ml/min，柱温为28-32℃，流动相组成见表1，等度洗脱，
表1：
| 二氯甲烷(％V/V) | 正己烷(％V/V) |
| 42～48 | 58～52 |
(4)取所述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。由此，能够快速有效地检测L(+)-酒石酸中的光学异构体D(-)-酒石酸，且分离度高、专属性强。
根据本发明的一个具体示例，所述色谱条件为：采用250mm×4.6mm，5μm的DaicelIF柱，流动相为二氯甲烷-正己烷(45：55)，检测波长为242nm，流速为0.9ml/min，柱温为30℃，等度洗脱。由此，能够快速有效地将L(+)-酒石酸及光学异构体D(-)-酒石酸的衍生化物分离，从而检测L(+)-酒石酸中的光学异构体D(-)-酒石酸，且分离度高、专属性强、准确度好。
根据本发明的一个具体示例，所述色谱条件为：采用250mm×4.6mm，5μm的DaicelIF柱，流动相为二氯甲烷-正己烷(45：55)，检测波长为242nm，流速为1.1ml/min，柱温为30℃，等度洗脱。由此，能够快速有效地将L(+)-酒石酸及光学异构体D(-)-酒石酸的衍生化物分离，从而检测L(+)-酒石酸中的光学异构体D(-)-酒石酸，且分离度高、专属性强、准确度好。
根据本发明的一个具体示例，所述色谱条件为：采用250mm×4.6mm，5μm的DaicelIF柱，流动相为二氯甲烷-正己烷(45：55)，检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为28℃，等度洗脱。由此，能够快速有效地将L(+)-酒石酸及光学异构体D(-)-酒石酸的衍生化物分离，从而检测L(+)-酒石酸中的光学异构体D(-)-酒石酸，且分离度高、专属性强、准确度好。
根据本发明的一个具体示例，所述色谱条件为：采用250mm×4.6mm，5μm的DaicelIF柱，流动相为二氯甲烷-正己烷(45：55)，检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为32℃，等度洗脱。由此，能够快速有效地将L(+)-酒石酸及光学异构体D(-)-酒石酸的衍生化物分离，从而检测L(+)-酒石酸中的光学异构体D(-)-酒石酸，且分离度高、专属性强、准确度好。
根据本发明的一个具体示例，所述色谱条件为：采用250mm×4.6mm，5μm的DaicelIF柱，流动相为二氯甲烷-正己烷(42：58)，检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，等度洗脱。由此，能够快速有效地将L(+)-酒石酸及光学异构体D(-)-酒石酸的衍生化物分离，从而检测L(+)-酒石酸中的光学异构体D(-)-酒石酸，且分离度高、专属性强、准确度好。
根据本发明的一个具体示例，所述色谱条件为：采用250mm×4.6mm，5μm的DaicelIF柱，流动相为二氯甲烷-正己烷(48：52)，检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，等度洗脱。由此，能够快速有效地将L(+)-酒石酸及光学异构体D(-)-酒石酸的衍生化物分离，从而检测L(+)-酒石酸中的光学异构体D(-)-酒石酸，且分离度高、专属性强、准确度好。
实施例1检测波长的确定
取L(+)-酒石酸的衍生化物(L(+)-二苯甲酰酒石酸酐)适量，用四氢呋喃溶解在紫外分光光度计上于200nm～400nm进行全扫描，紫外扫描图见图1，紫外扫描结果见表2。由图1和表2可知，L(+)-二苯甲酰酒石酸酐在241.5nm附近处有最大吸收，故选择242nm作为检测波长。
表2：
| 编号 | 波长 | 吸光度(ABS) | 描述 |
| 1 | 275.00 | 0.155 | 强吸收 |
| 2 | 241.50 | 1.027 | 最大吸收 |
实施例2
色谱条件：采用250mm×4.6mm，5.0μm的Daicel IF柱，流动相为二氯甲烷-正己烷(45:55)，检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，等度洗脱。
实验步骤：
1、取L-(+)酒石酸和D-(-)酒石酸各3.15g，苯甲酰氯8.85g，浓硫酸0.051g，甲苯3.5ml，置于100ml三口烧瓶中，搅拌加热至115℃，保持内温反应3h，至无HCl气体冒出，加入9.5ml甲苯，撤去加热，待内温降至45℃时，旋干，分别得L-(+)酒石酸和D-(-)酒石酸衍生化样品。
分别取L-(+)酒石酸和D-(-)酒石酸的衍生化样品各适量，于10ml容量瓶中，加少量二氯甲烷溶解后，用流动相定量稀释至刻度，配制成每1ml约含L-(+)酒石酸衍生化样品1.0mg、D-(-)酒石酸的衍生化1.5ug的溶液，作为供试混合溶液。
2、取供试混合溶液及空白溶剂按照上述色谱条件，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，L-(+)酒石酸中光学异构体的衍生化物色谱图见图2。
由图2的结果可知，空白溶剂峰不干扰L-(+)酒石酸及其光学异构体的衍生化物的检测，L-(+)酒石酸及其光学异构体的衍生化物峰的分离度为4.31，且峰形好，理论塔板数大于10000。
实施例3L(+)-酒石酸及其衍生化物光学异构体检测分析方法研究
1、色谱条件同实施例2。
2、检测条件的验证
(1)专属性
分别取L(+)-酒石酸衍生化物、D(-)-酒石酸衍生化物、甲苯、苯甲酰氯(其中，D(-)-酒石酸衍生化物为L(+)-酒石酸中的光学异构体的衍生化物，甲苯和苯甲酰氯为衍生化过程中引入的试剂)适量，加少量二氯甲烷溶解后正己烷稀释为每1ml含L(+)-酒石酸衍生化物、D(-)-酒石酸衍生化物、甲苯、苯甲酰氯均0.25mg的混合溶液。
L(+)-酒石酸衍生化物与其光学异构体及衍生化过程中引入的试剂同一色谱条件下的分离色谱图见图3。由图3的结果可以看出，该色谱图中主峰与各杂质分离度均大于1.5，表明根据本发明实施例的方法能够有效将L(+)-酒石酸衍生化物与其光学异构体及衍生化过程中引入的试剂分离，方法专属性好。
(2)衍生化过程回收率验证
D-(-)酒石酸储备液：取D-(-)酒石酸19.7mg，精密称定，于10ml量瓶中，加甲苯溶解并定容，摇匀，待用。
向三个100ml三口烧瓶中加入L-(+)酒石酸1.575g，苯甲酰氯4.425g，硫酸0.0255g，甲苯2ml后，分别在加入D-(-)酒石酸储备液0.5ml、1.0ml、2ml，撤去加热，待内温降至45℃时，旋干，即得0.05％衍生化样品、0.1％衍生化样品、0.2％衍生化样品。分别取0.05％衍生化样品、0.1％衍生化样品、0.2％衍生化样品约10mg，精密称定，于10ml量瓶中，加5ml二氯甲烷溶解后，加正己烷稀释至刻度，摇匀，作为衍生化过程回收率供试品溶液。分别取0.05％衍生化样品、0.1％衍生化样品、0.2％衍生化样品各进样10μl，注入色谱仪，计算回收率。该方法的平均回收率偏高，均大于100％，证明此衍生化过程能够有效检出D-(-)酒石酸含量。
(3)检测限
精密称取取L(+)-酒石酸衍生化物、D(-)-酒石酸衍生化适量，加流动相二氯甲烷-正己烷(体积比为45:55)逐步稀释后的溶液，取10μl注入色谱仪，记录色谱图，当信噪比为3时，L(+)-酒石酸衍生化物和D(-)-酒石酸衍生化的最小检出浓度为0.1μg/ml。
(4)线性
精密称取L(+)-酒石酸衍生化物、D(-)-酒石酸衍生化适量，加流动相二氯甲烷-正己烷(体积比为45:55)分别定量稀释成D(-)-酒石酸衍生化浓度为0.2914μg/ml，0.4857μg/ml，0.7770μg/ml，0.9713μg/ml，1.1656μg/ml，1.4570μg/ml，1.9426μg/ml和L(+)-酒石酸衍生化物浓度为0.3091μg/ml，0.5152μg/ml，0.8242μg/ml，1.0303μg/ml，1.2364μg/ml，1.5455μg/ml，2.0606μg/ml的溶液。各取10μl注入色谱仪，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，该D(-)-酒石酸衍生化曲线的线性回归方程为y＝15246x+507.24，r＝0.9994，线性范围为0.2914～1.9426μg/ml，L(+)-酒石酸衍生化物曲线的线性回归方程为y＝27952x+1827.7，r＝0.9991，线性范围为0.3091～2.0606μg/ml。
(5)方法准确度
D-二苯甲酰酒石酸酐储备液(10ug/ml)：D(-)-酒石酸衍生化物约10mg，精密称定，于10ml容量瓶中，加5ml二氯甲烷溶解后，加正己烷稀释定容至刻度，摇匀；取该溶于1ml于100ml量瓶中，加稀释液稀释到刻度，摇匀，即得。
对照品溶液配制：精密移取上述D-二苯甲酰酒石酸酐储备液(10ug/ml)1.0ml，于10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
分别称取L(+)-酒石酸衍生化物约10mg，于9个10ml容量瓶中，加5ml二氯甲烷使溶解，再分别加入D-二苯甲酰酒石酸酐储备液(10ug/ml)0.8ml、1.0ml、1.2ml，正己烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。平行配制三份。分别作为L(+)-酒石酸衍生化物的回收率80％、100％、120％的供试品溶液。分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入色谱仪，计算回收率。该方法的平均回收率为106.6％，RSD为0.85％。
对比例1色谱柱选择(AS-H手性柱)
色谱条件及检测方法如下：
色谱条件：采用250mm×4.6mm，5μm的Daicel AS-H柱，流动相为正己烷-异丙醇(80：20)，检测波长为230nm，流速为0.6～1.0ml/min，柱温为30℃，等度洗脱。
实验步骤：
取L(+)-酒石酸3.15g，苯甲酰氯8.85g，浓硫酸0.051g，甲苯3.5ml，置于100ml三口烧瓶中，搅拌加热至115℃，保持内温反应3h，至无HCl气体冒出，加入9.5ml甲苯，撤去加热，待内温降至45℃时，旋干，即得衍生化样品。取衍生化样品约10mg，精密称定，于10ml容量瓶中，加少量四氢呋喃溶解后，用流动相定量稀释至刻度，配制成每1ml约衍生化样品1.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取供试品溶液及空白溶剂按照上述色谱条件，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，L(+)-酒石酸经衍生化后中光学异构体色谱图见图4。
由图4的结果可知，供试品在3.727min出峰，该色谱图中主峰严重拖尾，且峰理论塔板数较小(209)，主峰响应差。
使用该色谱柱调整流动相比例[正己烷-异丙醇(80～90：20～10)]及流速(0.6～0.8ml/min)，未能改善主峰峰型、理论塔板数及峰响应。
对比例2色谱柱选择(IA手性色谱柱)
色谱条件及检测方法如下：色谱条件：采用250mm×4.6mm，5.0μm的Daicel IA柱，流动相为二氯甲烷-正己烷(30:70)，检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，等度洗脱。
实验步骤：
取L(+)-酒石酸3.15g，苯甲酰氯8.85g，浓硫酸0.051g，甲苯3.5ml，置于100ml三口烧瓶中，搅拌加热至115℃，保持内温反应3h，至无HCl气体冒出，加入9.5ml甲苯，撤去加热，待内温降至45℃时，旋干，即得衍生化样品。取衍生化样品约10mg，精密称定，于10ml容量瓶中，加少量二氯甲烷溶解后，用流动相定量稀释至刻度，配制成每1ml约衍生化样品1.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取供试品溶液及空白溶剂按照上述色谱条件，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，L(+)-酒石酸中光学异构体色谱图见图5。
由图5的结果可知，该方法未检测出L(+)-酒石酸及其光学异构体的任何衍生化物峰。
对比例3流动相种类的选择(四氢呋喃-正己烷(30:70))
色谱条件及检测方法如下：
色谱条件：采用250mm×4.6mm，5.0μm的Daicel IF柱，流动相为四氢呋喃-正己烷(30:70)，检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，等度洗脱。
实验步骤：
取L(+)-酒石酸3.15g，苯甲酰氯8.85g，浓硫酸0.051g，甲苯3.5ml，置于100ml三口烧瓶中，搅拌加热至115℃，保持内温反应3h，至无HCl气体冒出，加入9.5ml甲苯，撤去加热，待内温降至45℃时，旋干，即得衍生化样品。取衍生化样品约10mg，精密称定，于10ml容量瓶中，加少量二氯甲烷溶解后，用流动相定量稀释至刻度，配制成每1ml约衍生化样品1.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取供试品溶液及空白溶剂按照上述色谱条件，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，L-(+)酒石酸中光学异构体色谱图见图6。
由图6的结果可知，供试品色谱图中主峰无响应，未出峰。
对比例4流动相种类的选择(二氯甲烷-正庚烷(30:70))
色谱条件及检测方法如下：
色谱条件：采用250mm×4.6mm，5.0μm的Daicel IF柱，流动相为二氯甲烷-正庚烷(30:70)，检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，等度洗脱。
实验步骤：
取L(+)-酒石酸3.15g，苯甲酰氯8.85g，浓硫酸0.051g，甲苯3.5ml，置于100ml三口烧瓶中，搅拌加热至115℃，保持内温反应3h，至无HCl气体冒出，加入9.5ml甲苯，撤去加热，待内温降至45℃时，旋干，即得衍生化样品。取衍生化样品约10mg，精密称定，于10ml容量瓶中，加少量二氯甲烷溶解后，用流动相定量稀释至刻度，配制成每1ml约衍生化样品1.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取供试品溶液及空白溶剂按照上述色谱条件，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，L(+)-酒石酸中光学异构体色谱图见图7。
由图7的结果可知，供试品色谱图中主峰峰形分叉。
对比例5流动相种类的选择(二氧六环-正己烷(30:70))
色谱条件及检测方法如下：
色谱条件：采用250mm×4.6mm，5.0μm的Daicel IF柱，流动相为二氧六环-正己烷(30:70)，检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，等度洗脱。
实验步骤：
取L(+)-酒石酸3.15g，苯甲酰氯8.85g，浓硫酸0.051g，甲苯3.5ml，置于100ml三口烧瓶中，搅拌加热至115℃，保持内温反应3h，至无HCl气体冒出，加入9.5ml甲苯，撤去加热，待内温降至45℃时，旋干，即得衍生化样品。取衍生化样品约10mg，精密称定，于10ml容量瓶中，加少量二氯甲烷溶解后，用流动相定量稀释至刻度，配制成每1ml约衍生化样品1.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取供试品溶液及空白溶剂按照上述色谱条件，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，L(+)-酒石酸中光学异构体色谱图见图8。
由图8的结果可知，供试品色谱图中主峰峰形差，峰前沿。
对比例6流动相的选择(二氯甲烷-正己烷(60:40))
色谱条件及检测方法如下：
色谱条件：采用250mm×4.6mm，5.0μm的Daicel IF柱，流动相为二氯甲烷-正己烷(60:40)，检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，等度洗脱。
实验步骤：
取L(+)-酒石酸3.15g，苯甲酰氯8.85g，浓硫酸0.051g，甲苯3.5ml，置于100ml三口烧瓶中，搅拌加热至115℃，保持内温反应3h，至无HCl气体冒出，加入9.5ml甲苯，撤去加热，待内温降至45℃时，旋干，即得衍生化样品。取衍生化样品约10mg，精密称定，于10ml容量瓶中，加少量二氯甲烷溶解后，用流动相定量稀释至刻度，配制成每1ml约衍生化样品1.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取供试品溶液及空白溶剂按照上述色谱条件，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，L(+)-酒石酸中光学异构体色谱图见图9。
由图9的结果可知，供试品色谱图中主峰峰形差，且峰理论塔板数较小，主峰响应差。
对比例7流动相比例的选择(二氯甲烷-正己烷(90:10))
色谱条件及检测方法如下：
色谱条件：采用250mm×4.6mm，5.0μm的Daicel IF柱，流动相为二氯甲烷-正己烷(30:70)，检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，等度洗脱。
实验步骤见对比例6。
L(+)-酒石酸中光学异构体色谱图见图10。
由图7的结果可知，空白溶剂峰干扰L(+)-酒石酸的衍生化物的检测，专属性差。
对比例8流动相比例的选择(二氯甲烷-正己烷(30:70))
色谱条件及检测方法如下：
色谱条件：采用250mm×4.6mm，5.0μm的Daicel IF柱，流动相为二氯甲烷-正己烷(30:70)，检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，等度洗脱。
实验步骤见对比例6。
L(+)-酒石酸中光学异构体色谱图见图11。
由图11的结果可知，空白溶剂峰不干扰L(+)-酒石酸及其光学异构体的衍生化物的检测，但峰形不佳，峰分叉。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (6)
1.一种测定酒石酸光学异构体含量的方法，其特征在于，
将待测酒石酸进行高效液相色谱检测，所述高效液相色谱检测是通过结合紫外检测器的高效液相色谱仪进行的，
基于高效液相色谱检测结果，确定所述待测酒石酸中L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸的含量，
其中，所述待测酒石酸预先经过衍生化处理，所述衍生化处理后的酒石酸连接有发光基团，
其中，所述衍生化处理是通过如下方式进行的：将待测酒石酸与苯甲酰氯发生缩合反应，以便获得衍生化待测酒石酸；
所述紫外检测器的检测波长为241-243nm；
所述高效液相色谱的色谱柱为硅胶表面共价键合直链淀粉-三(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)的色谱柱；
所述高效液相色谱法的柱温为28～32℃；
所述高效液相色谱法的流速为0.9～1.1ml/min；
所述高效液相色谱的流动相由正相有机溶剂组成，所述正相有机溶剂为正己烷和二氯甲烷，所述二氯甲烷在所述正相有机溶剂中的体积比为42％～48％，所述正己烷在所述正相有机溶剂中的体积比为58％～52％；
所述高效液相色谱的洗脱方式为等度洗脱。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述紫外检测器的检测波长为242nm。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，基于高效液相色谱检测结果，确定L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸分别对应的峰面积，进而分别确定L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸的含量。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，进一步包括：获得标准曲线，所述标准曲线的获得是通过如下方式进行的：
1)利用权利要求1-3任一项所述的方法测定不同酒石酸光学异构体标准品的浓度，其中，所述酒石酸光学异构体为L(+)-酒石酸，所述L(+)-酒石酸标准品的浓度为0.3091μg/ml，0.5152μg/ml，0.8242μg/ml，1.0303μg/ml，1.2364μg/ml，1.5455μg/ml，2.0606μg/ml，所述酒石酸光学异构体为D(-)-酒石酸，所述D(-)-酒石酸的浓度为0.2914μg/ml，
0.4857μg/ml，0.7770μg/ml，0.9713μg/ml，1.1656μg/ml，1.4570μg/ml，1.9426μg/ml，
2)以所述酒石酸光学异构体峰面积为纵坐标，以酒石酸光学异构体浓度为横坐标绘制标准曲线。
5.一种测定酒石酸光学异构体含量的方法，其特征在于，包括：
1)将待测酒石酸与苯甲酰氯进行缩合反应，以便获得衍生化待测酒石酸，所述衍生化待测酒石酸含有发光基团，所述发光基团为苯环，
2)将所述衍生化待测酒石酸溶于二氯甲烷，以便获得供试品溶液，所述供试品溶液中所述衍生化待测样品酒石酸的浓度为1mg/mL；
3)将所述供试品溶液利用结合紫外检测器的高效液相色谱仪进行高效液相色谱检测，基于检测结果，获得待测酒石酸中L(+)-酒石酸和D(-)-酒石酸的含量，所述紫外检测器的检测波长为241-243nm，所述高效液相色谱的色谱柱为硅胶表面共价键合直链淀粉-三(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)的色谱柱，流速为0.9-1.1ml/min，柱温为28-32℃，流动相如下所示：
。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，进一步包括：获得标准曲线，所述标准曲线的获得是通过如下方式进行的：
1)利用权利要求5所述的方法测定不同酒石酸光学异构体标准品的浓度，其中，所述酒石酸光学异构体为L(+)-酒石酸，所述L(+)-酒石酸标准品的浓度为0.3091μg/ml，0.5152μg/ml，0.8242μg/ml，1.0303μg/ml，1.2364μg/ml，1.5455μg/ml，2.0606μg/ml，所述酒石酸光学异构体为D(-)-酒石酸，所述D(-)-酒石酸的浓度为0.2914μg/ml，0.4857μg/ml，0.7770μg/ml，0.9713μg/ml，1.1656μg/ml，1.4570μg/ml，1.9426μg/ml，
2)以所述酒石酸光学异构体峰面积为纵坐标，以酒石酸光学异构体浓度为横坐标绘制标准曲线。
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Non-Patent Citations (10)
| Title |
|---|
| Biobased Plasticizers from Tartaric Acid, an Abundantly Available, Annually Renewable Material;Bob A. Howell 等;《Industrial & Engineering Chemistry Research》;20181023;第1-25页 * |
| Chromatographic separations based on tartaric acid and its derivatives;Ladislav Habala 等;《Monatshefte für Chemie - Chemical Monthly》;20180214;第1-10页 * |
| Desorption of Copper from Soils Enchanced by dihydroxysuccinic acid;Xiaojun Hu 等;《Advanced Materials Research》;20140618;第955-959卷;第21-24页 * |
| L-二苯甲酰酒石酸为拆分剂结晶拆分L,D-薄荷醇;苏圳 等;《广州化工》;20111231;第39卷(第10期);第73-76页 * |
| Preparative separation of tetrahydrofurfurylamine enantiomers;D. M. Musatov 等;《Russian Journal of Organic Chemistry》;20071231;第43卷(第12期);第1813-1814页 * |
| Tartaric acid derivatives as chiral selectors in liquid chromatography;E. Heldin 等;《Chromatographia》;19911130;第32卷(第9/10期);第407-416页 * |
| Urszula Bernaś等.Tartaric acid and its acyl derivatives. Part 5. Direct synthesis of monoacyltartaric acids and novel mono(benzoyl)tartaric anhydride: unusual findings in tartaric acid acylation.《ARKIVOC》.2010,第1-12页. * |
| 流动相组成对酒石酸衍生固定相手性拆分热力学函数的影响;翁文 等;《应用化学》;20050731;第22卷(第7期);第800-803页 * |
| 高效液相色谱手性固定相法拆分重酒石酸去甲肾上腺素对映体;高丽萍 等;《应用化学》;20081130;第25卷(第11期);第1366-1368页 * |
| 高效液相色谱法测定二氧化氯固体消毒剂中DL-酒石酸的含量;张景艳 等;《中国兽药杂志》;20161231;第50卷(第10期);第40-43页 * |
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