CN109730942A - 一种含有胶原蛋白水解物,保湿补水的护肤品及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含有胶原蛋白水解物，保湿补水的护肤品及其制备方法和应用。所述的护肤品中含有胶原蛋白水解物以及天然植物提取物，所述的天然植物提取物由人参提取物、龙胆草提取物、火棘提取物、益母草提取物以及玉竹提取物组成。本发明将人参提取物、龙胆草提取物、火棘提取物、益母草提取物以及玉竹提取物通过合理配伍使用，再添加胶原蛋白水解物，最后辅以化妆品常用基质成分，如乳化剂、润肤剂、保湿剂、增稠剂、防腐剂等制成了一种具有保湿补水、抗衰老作用的护肤品。所述天然植物提取物除了提高产品的美白、保湿补水、抗衰老作用外，还赋予了产品一定的抑菌效果，可适量的减少防腐剂的用量，提高产品的安全性。

Description

一种含有胶原蛋白水解物，保湿补水的护肤品及其制备方法 和应用

技术领域

本发明涉及一种护肤品及其制备方法和应用，特别涉及一种含有胶原蛋白水解物，保湿补水的护肤品及其制备方法和应用。本发明属于日化用品技术领域。

背景技术

痤疮、斑点、暗沉、皮肤松弛等是困扰很多爱美人士的最大问题。随着年龄的增长，皮肤的胶原蛋白逐渐流失，而皮肤细胞的再生能力也在慢慢下降，随之而来的是皱纹的增长，色素的沉积。

目前市场上的具有祛斑美白、保湿以及抗衰老作用的美容护肤品很多，也有一些通过先进设备的治疗手段应运而生，但是其仍然难以达到令人满意的效果。一些美容护肤品含有大量的化学合成物质，长期使用不但不能解决肌肤的问题，还会增加肌肤的负担引发一些过敏反应。例如，大多数的护肤品主要以化学抗衰老因子发挥作用，在抗衰老的同时会带来一些副作用，长期使用反而形成激素皮肤，导致皮肤易过敏、吸收差、油腻等问题。激光祛斑、光子嫩肤等是近年来运用比较多的技术，该手段虽然在短时期内能够有立竿见影的效果，但是效果难以维持，而且治疗费用高昂，不适宜推广使用。

胶原蛋白是一种高分子蛋白质，能使皮肤保持结实而有弹性，它存在于人体皮肤，骨骼，矛齿，肌腱等部位。在皮肤方面，它与弹力纤维合力构成网状支撑体，提供真皮层坚定有力的支撑。随年龄增长，人体胶原蛋白含量会逐渐流失，皮肤便会失去弹性并变薄老化。因此可以说人的皮肤老化的确与胶原蛋白流失有着千丝万缕的关系。但大分子的胶原蛋白并不易被人体吸收，因此通过酶解反应制备得到小分子的胶原蛋白，能够提高皮肤的吸收率，对促进皮肤成纤维细胞生长有显著效果。如何通过酶解反应制备高生物活性的小分子胶原蛋白，是目前胶原蛋白在化妆品领域应用的重要研究课题。

天然植物药中所含有宏量元素钙、磷、钠、镁；微量元素锌、铁、锰、铜、硒等宏微量元素能有效地补充人体皮肤元素含量不足，而且天然绿色植物药中微量元素对人体是安全无毒的。因而，采用绿色、无污染的天然活性成分制作的具有美白、保湿、抗衰老作用的护肤品越来越受到人们的亲睐。

发明内容

本发明的目的在于提供一种含有胶原蛋白水解物以及天然植物提取物成分的，具有保湿补水、抗衰老作用的护肤品及其制备方法和应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明一种含有胶原蛋白水解物，保湿补水的护肤品，所述的护肤品中含有胶原蛋白水解物以及天然植物提取物，所述的胶原蛋白的水解物的重量份为1-10重量份，所述的天然植物提取物由以下重量份的各原料组成：人参提取物5-10重量份、龙胆草提取物1-5重量份、火棘提取物5-10重量份、益母草提取物1-5重量份以及玉竹提取物3-5重量份。

其中，优选的，所述的胶原蛋白的水解物的重量份为8重量份，所述的天然植物提取物由以下重量份的各原料组成：人参提取物8重量份、龙胆草提取物3重量份、火棘提取物5重量份、益母草提取物5重量份以及玉竹提取物4重量份。

其中，优选的，所述的胶原蛋白水解物，通过以下步骤制备得到：

(1)取三文鱼鱼皮，于60℃干燥4～6h，剪碎，鱼皮经0.5％w/vNaOH浸泡过夜，过滤，滤渣用蒸馏水清洗2～3次，然后按1∶5(mg/mL)加异丙醇，于60℃水浴恒温脱脂，滤渣于60℃干燥4～6h，得到脱脂鱼皮粉；

(2)准确称取10g脱脂鱼皮粉分别分散于100mL温度为80℃纯水中，恒温水浴磁力搅拌下提取4h，取出过滤，收集滤液；

(3)滤液冷却至50℃后，向滤液中加入其重量0.5％的复合蛋白酶进行水解反应3小时，后加热煮沸维持20分钟灭酶活，离心去除不溶性杂质，上清液抽滤，在-40℃真空冷冻干燥得到胶原蛋白水解物，其中，所述的复合蛋白酶由风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、脯氨酸蛋白酶按照重量比1∶1∶1组合而成。

其中，优选的，所述的护肤品中还包括乳化剂5-10重量份、润肤剂5-10重量份、保湿剂10-20重量份、增稠剂1-5重量份、pH调节剂0.1-2重量份、防腐剂0.2-0.5重量份以及去离子水100-120重量份。

其中，优选的，所述的乳化剂包括卵磷脂、聚甘油-6二硬脂酸酯、聚甘油-3蜂蜡酸酯、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、山梨坦橄榄油酸酯、鲸蜡硬脂醇、丙烯酸(酯)类共聚物钠中的一种或两种以上的组合；

所述润肤剂包括、C10-18脂酸甘油三酯类、角鲨烷、生育酚乙酸酯、辛基聚甲基硅氧烷、碳酸二辛酯、辛酸/癸酸甘油三酯、聚二甲基硅氧烷、氢化聚异丁烯、棕榈酸乙基己酯、季戊四醇四异硬脂酸酯、季戊四醇四(乙基己酸)酯、异硬脂醇异硬脂酸酯、异壬酸异壬酯、棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、聚二甲基硅氧烷交联聚合物、聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物、聚二甲基硅氧烷醇、霍霍巴籽油以及甜扁桃油中的一种或两种以上的组合；

所述的保湿剂包括甘油、二丙二醇、丁二醇、透明质酸以及海藻糖中的一种或两种以上的组合；

所述的增稠剂包括卡波姆、黄原胶、果胶、阿拉伯胶树胶、小核菌胶、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、皱波角叉菜提取物和聚丙烯酸钠中的一种或两种以上的组合；

所述pH调节剂选自氨甲基丙醇、氢氧化钠、氢氧化钾、精氨酸、三乙醇胺中的一种或两种以上组合；

所述防腐剂选自羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯氧乙醇、苯甲醇、苯甲酸钠、山梨酸钾中的一种或两种以上组合。

其中，优选的，所述的天然植物提取物分别通过以下方法制备得到：

(1)人参提取物的制备

将干燥人参茎叶为原料，粉碎至50-100目，加去离子水回流提取3次，干燥人参茎叶与去离子水的质量体积比g/mL为1～3∶10～30，提取时间分别为90min、60min以及60min，冷却后，抽滤，合并滤液，真空浓缩至相对密度为1.2-1.3，得到人参提取物；

(2)龙胆草提取物的制备

取风干后的龙胆草根，粉碎至50-100目，加去离子水回流提取2次，风干后的龙胆草根与去离子水的质量体积比g/mL为1～3∶10～30，提取时间分别为90min以及60min，冷却后，抽滤，合并滤液，得到水提取液；滤渣用体积百分比为60％～95％的乙醇在75～85℃下进行回流提取，滤渣与乙醇的质量体积比g/mL为1～3∶10～50，回流提取2-3h，共进行2次，然后将提取物合并，冷却至20℃～30℃，50～100目滤布过滤，得滤液，向得到的滤液中加入与乙醇相同体积量的1，3-丁二醇混溶均匀，减压浓缩出溶液中的乙醇，得到乙醇提取液；将水提取液和乙醇提取液混合均匀，真空浓缩至相对密度为1.2-1.3，得到龙胆草提取物；

(3)火棘提取物的制备

将风干后的火棘果实，粉碎至50-100目，用体积百分比为60％～95％的乙醇在75～85℃下进行回流提取，火棘果实与乙醇的质量体积比g/mL为1～3∶10～50，回流提取2-3h，共进行2-3次，然后将提取物合并，冷却至20℃～30℃，50～100目滤布过滤，得滤液；向得到的滤液中加入与乙醇相同体积量的1，3-丁二醇混溶均匀，减压浓缩出溶液中的乙醇，真空浓缩至相对密度为1.2-1.3，得到火棘提取物；

(4)益母草提取物的制备

将益母草加去离子水回流提取2次，益母草与去离子水的质量体积比g/mL为1～3∶10～30，提取时间分别为90min、60min，冷却后，抽滤，合并滤液，真空浓缩至相对密度为1.2-1.3，得到益母草提取物；

(5)玉竹提取物的制备

取风干后的玉竹根茎，粉碎至50-100目，加去离子水回流提取2次，风干后的玉竹根茎与去离子水的质量体积比g/mL为1～3∶10～30，提取时间分别为90min以及60min，冷却后，抽滤，合并滤液，得到水提取液；滤渣用体积百分比为60％～95％的乙醇在75～85℃下进行回流提取，滤渣与乙醇的质量体积比g/mL为1～3∶10～50，回流提取2-3h，共进行2次，然后将提取物合并，冷却至20℃～30℃，50～100目滤布过滤，得滤液，向得到的滤液中加入与乙醇相同体积量的1，3-丁二醇混溶均匀，减压浓缩出溶液中的乙醇，得到乙醇提取液；将水提取液和乙醇提取液混合均匀，真空浓缩至相对密度为1.2-1.3，得到玉竹提取物。

进一步的，本发明还提出了一种制备所述的含有胶原蛋白水解物，保湿补水的护肤品的方法，包括以下步骤：

1)按照所述的重量份分别称取各原料；

2)将保温剂、增稠剂加入去离子水中，搅拌分散至均匀，搅拌加热至70～75℃；

3)将润肤剂、乳化剂搅拌加热至75～80℃，熔解均匀；

4)将步骤3)制备的油相加入步骤2)制备的水相中，加入pH调节剂，高速均质3～8分钟；

5)搅拌冷却至35～40℃，加入防腐剂、胶原蛋白水解物、人参提取物、龙胆草提取物、火棘提取物、益母草提取物以及玉竹提取物，继续搅拌冷却至室温；

6)分装，即得。

更进一步的，本发明还提出了所述的护肤品作为人体外用制剂在补水保湿、抗衰老中的应用。

相较于现有技术，本发明的有益效果是：

1、本发明通过实验发现，采用复合蛋白酶(按重量计，风味蛋白酶∶木瓜蛋白酶∶脯氨酸蛋白酶＝1∶1∶1)水解三文鱼鱼皮，得到的胶原蛋白水解物不仅分子量易于吸收，而且具有很强的抗氧化能力，自由基抑制率实验证明，该方法得到的胶原蛋白水解物自由基抑制率能够达到87.56％，高于其他酶解产物。

2、本发明将参提取物、龙胆草提取物、火棘提取物、益母草提取物以及玉竹提取物通过合理配伍使用，其中，人参具有大补元气、安神增智的功效，对于因气虚而面色不华、须发不生者有较好的疗效。人参有使皮肤毛细血管扩张，加速血液循环，增强细胞活力，增进毛囊的营养供给等作用。因此，有着较好的美容效果。龙胆草味苦，性寒，无毒，入肝、胆经，具有泻肝胆实火，除下焦湿热之功效。主要用于湿热黄疸，阴肿阴痒，带下，强中，湿疹瘙痒，目赤，耳聋，胁痛，口苦，惊风抽搐等症的治疗，同时外用还具有舒缓、镇静及滋润肌肤的功效。火棘果实含有丰富的有机酸、蛋白质、氨基酸、维生素和多种矿质元素，可鲜食，具有清热解毒，生津止渴、止泻、散瘀、消食等功效。益母草为唇形科植物益母草的新鲜或干燥地上部分。具有活血调经，利尿消肿，清热解毒之功效。来源于百合科植物玉竹干燥根茎，主要含甾体皂苷类，多糖类，白屈菜酸等活性成分。其中所含玉竹黏多糖具有很好的吸湿性，能够有效提高皮肤水分含量，并能清除体内自由基，抑制黑素的形成，发挥润肤祛斑的作用。所述的植物提取物除了提高了护肤品美白、保湿补水、抗衰老作用外，还具有一定的抑菌效果，对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌等具有一定的抑制效果，可适量的减少防腐剂的用量，提高产品的安全性。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不应理解为是对本发明的限制。

实施例1 一种含有胶原蛋白，保湿补水的护肤品的制备

1、胶原蛋白水解物的制备

按照以下方法中的任一项进行：

方法一：

(1)取三文鱼鱼皮，于60℃干燥4～6h，剪碎，鱼皮经0.5％w/vNaOH浸泡过夜，过滤，滤渣用蒸馏水清洗2～3次，然后按1∶5(mg/mL)加异丙醇，于60℃水浴恒温脱脂，滤渣于60℃干燥4～6h，得到脱脂鱼皮粉；

(2)准确称取10g脱脂鱼皮粉分别分散于100mL温度为80℃纯水中，恒温水浴磁力搅拌下提取4h，取出过滤，收集滤液；

(3)滤液冷却至50℃后，向滤液中加入其重量0.5％的复合蛋白酶(按重量计，风味蛋白酶∶木瓜蛋白酶∶脯氨酸蛋白酶＝1∶1∶1)进行水解反应3小时，后加热煮沸维持20分钟灭酶活，离心去除不溶性杂质，上清液抽滤，在-40℃真空冷冻干燥得到胶原蛋白水解物。经测定胶原蛋白水解物中分子量大多居于200-2000Da，占比为93％。

方法二：

(1)取三文鱼鱼皮，于60℃干燥4～6h，剪碎，鱼皮经0.5％w/vNaOH浸泡过夜，过滤，滤渣用蒸馏水清洗2～3次，然后按1∶5(mg/mL)加异丙醇，于60℃水浴恒温脱脂，滤渣于60℃干燥4～6h，得到脱脂鱼皮粉；

(2)准确称取10g脱脂鱼皮粉分别分散于100mL温度为80℃纯水中，恒温水浴磁力搅拌下提取4h，取出过滤，收集滤液；

(3)滤液冷却至50℃后，向滤液中加入其重量0.5％的碱性蛋白酶进行水解反应3小时，后加热煮沸维持20分钟灭酶活，离心去除不溶性杂质，上清液抽滤，在-40℃真空冷冻干燥得到胶原蛋白水解物。经测定胶原蛋白水解物中分子量大多居于200-2000Da，占比为62％。

方法三：

(1)取三文鱼鱼皮，于60℃干燥4～6h，剪碎，鱼皮经0.5％w/vNaOH浸泡过夜，过滤，滤渣用蒸馏水清洗2～3次，然后按1∶5(mg/mL)加异丙醇，于60℃水浴恒温脱脂，滤渣于60℃干燥4～6h，得到脱脂鱼皮粉；

(2)准确称取10g脱脂鱼皮粉分别分散于100mL温度为80℃纯水中，恒温水浴磁力搅拌下提取4h，取出过滤，收集滤液；

(3)滤液冷却至50℃后，向滤液中加入其重量0.5％的风味蛋白酶进行水解反应3小时，后加热煮沸维持20分钟灭酶活，离心去除不溶性杂质，上清液抽滤，在-40℃真空冷冻干燥得到胶原蛋白水解物。经测定胶原蛋白水解物中分子量大多居于200-2000Da，占比为85％。

方法四：

(1)取三文鱼鱼皮，于60℃干燥4～6h，剪碎，鱼皮经0.5％w/vNaOH浸泡过夜，过滤，滤渣用蒸馏水清洗2～3次，然后按1∶5(mg/mL)加异丙醇，于60℃水浴恒温脱脂，滤渣于60℃干燥4～6h，得到脱脂鱼皮粉；

(2)准确称取10g脱脂鱼皮粉分别分散于100mL温度为80℃纯水中，恒温水浴磁力搅拌下提取4h，取出过滤，收集滤液；

(3)滤液冷却至50℃后，向滤液中加入其重量0.5％的木瓜蛋白酶进行水解反应3小时，后加热煮沸维持20分钟灭酶活，离心去除不溶性杂质，上清液抽滤，在-40℃真空冷冻干燥得到胶原蛋白水解物。得到胶原蛋白水解物。经测定胶原蛋白水解物中分子量大多居于200-2000Da，占比为82％。

方法五：

(1)取三文鱼鱼皮，于60℃干燥4～6h，剪碎，鱼皮经0.5％w/vNaOH浸泡过夜，过滤，滤渣用蒸馏水清洗2～3次，然后按1∶5(mg/mL)加异丙醇，于60℃水浴恒温脱脂，滤渣于60℃干燥4～6h，得到脱脂鱼皮粉；

(2)准确称取10g脱脂鱼皮粉分别分散于100mL温度为80℃纯水中，恒温水浴磁力搅拌下提取4h，取出过滤，收集滤液；

(3)滤液冷却至50℃后，向滤液中加入其重量0.5％的脯氨酸蛋白酶进行水解反应3小时，后加热煮沸维持20分钟灭酶活，离心去除不溶性杂质，上清液抽滤，在-40℃真空冷冻干燥得到胶原蛋白水解物。经测定胶原蛋白水解物中分子量大多居于200-2000Da，占比为75％。

方法六：

(1)取三文鱼鱼皮，于60℃干燥4～6h，剪碎，鱼皮经0.5％w/vNaOH浸泡过夜，过滤，滤渣用蒸馏水清洗2～3次，然后按1∶5(mg/mL)加异丙醇，于60℃水浴恒温脱脂，滤渣于60℃干燥4～6h，得到脱脂鱼皮粉；

(2)准确称取10g脱脂鱼皮粉分别分散于100mL温度为80℃纯水中，恒温水浴磁力搅拌下提取4h，取出过滤，收集滤液；

(3)滤液冷却至50℃后，向滤液中加入其重量0.5％的复合蛋白酶(按重量计，风味蛋白酶∶木瓜蛋白酶∶碱性蛋白酶＝1∶1∶1)进行水解反应3小时，后加热煮沸维持20分钟灭酶活，离心去除不溶性杂质，上清液抽滤，在-40℃真空冷冻干燥得到胶原蛋白水解物。经测定胶原蛋白水解物中分子量大多居于200-2000Da，占比为87％。

2、胶原蛋白水解物的抗氧化性试验

(1)DPPH标准曲线的制作

准确称取DPPH 2.5mg，用甲醇定容到100mL，配制成质量浓度为2.5×10^-2mg/mL的标准溶液，置冰箱中备用(现用现配)。分别取0、2、4、6、8、10mL标准溶液，用甲醇定容至10mL，最终质量浓度分别为0、5、10、15、20、25μg/mL。测定上述标准溶液在515nm波长处的吸光度，制作标准曲线。

(2)分别取方法一至方法六制备的胶原蛋白水解物分别用蒸馏水配制成3mg/ml的供试品溶液1-6，取供试品溶液1-5各100μL，量取浓度为1.0×10^-1mol/L的DPPH溶液4mL。立即混匀，用比色皿在515nm波长处进行测定，在一定时间间隔内测定吸光度，直到读数稳定。

通过公式：清除率＝[1-A1/A0]×100％来计算自由基抑制率

式中A0为溶剂的DPPH在515nm处的吸光度，A1为胶原蛋白水解物与DPPH反应后的515nm处的吸光度

每个供试品做三次平行试验，得到平均值，结果如下表1所示：

表1 自由基抑制率

供试品溶液	自由基抑制率
		供试品溶液1	87.56％
供试品溶液2	63.89％
		供试品溶液3	71.26％
供试品溶液4	72.35％
		供试品溶液5	75.68％
供试品溶液6	79.23％

从表1结果可以看出，采用复合蛋白酶(按重量计，风味蛋白酶∶木瓜蛋白酶∶脯氨酸蛋白酶＝1∶1∶1)水解鱼皮胶原蛋白所得的水解产物具有最好的抗氧化性。

3、植物提取物的制备

(1)人参提取物的制备

将干燥人参茎叶为原料，粉碎至100目，加去离子水回流提取3次，干燥人参茎叶与去离子水的质量体积比g/mL为1∶10，提取时间分别为90min、60min以及60min，冷却后，抽滤，合并滤液，真空浓缩至相对密度为1.2，得到人参提取物；

(2)龙胆草提取物的制备

取风干后的龙胆草根，粉碎至100目，加去离子水回流提取2次，风干后的龙胆草根与去离子水的质量体积比g/mL为1∶10，提取时间分别为90min以及60min，冷却后，抽滤，合并滤液，得到水提取液；滤渣用体积百分比为75％的乙醇在80℃下进行回流提取，滤渣与乙醇的质量体积比g/mL为1∶10，回流提取3h，共进行2次，然后将提取物合并，冷却至20℃～30℃，100目滤布过滤，得滤液，向得到的滤液中加入与乙醇相同体积量的1，3-丁二醇混溶均匀，减压浓缩出溶液中的乙醇，得到乙醇提取液；将水提取液和乙醇提取液混合均匀，真空浓缩至相对密度为1.2，得到龙胆草提取物；

(3)火棘提取物的制备

将风干后的火棘果实，粉碎至100目，用体积百分比为75％的乙醇在80℃下进行回流提取，火棘果实与乙醇的质量体积比g/mL为1∶10，回流提取2h，共进行3次，然后将提取物合并，冷却至20℃～30℃，100目滤布过滤，得滤液；向得到的滤液中加入与乙醇相同体积量的1，3-丁二醇混溶均匀，减压浓缩出溶液中的乙醇，真空浓缩至相对密度为1.2，得到火棘提取物；

(4)益母草提取物的制备

将益母草加去离子水回流提取2次，益母草与去离子水的质量体积比g/mL为1∶10，提取时间分别为90min、60min，冷却后，抽滤，合并滤液，真空浓缩至相对密度为1.2，得到益母草提取物；

(5)玉竹提取物的制备

取风干后的玉竹根茎，粉碎至100目，加去离子水回流提取2次，风干后的玉竹根茎与去离子水的质量体积比g/mL为1∶10，提取时间分别为90min以及60min，冷却后，抽滤，合并滤液，得到水提取液；滤渣用体积百分比为75％的乙醇在80℃下进行回流提取，滤渣与乙醇的质量体积比g/mL为1∶10，回流提取2h，共进行2次，然后将提取物合并，冷却至20℃～30℃，100目滤布过滤，得滤液，向得到的滤液中加入与乙醇相同体积量的1，3-丁二醇混溶均匀，减压浓缩出溶液中的乙醇，得到乙醇提取液；将水提取液和乙醇提取液混合均匀，真空浓缩至相对密度为1.2，得到玉竹提取物。

4、护肤品的制备

1)按照下表2所述的重量份分别称取各原料：

表2

2)将称取的保湿剂、增稠剂加入去离子水中，搅拌分散至均匀，搅拌加热至70～75℃；

3)将润肤剂、乳化剂搅拌加热至75～80℃，熔解均匀；

4)将步骤3)制备的油相加入步骤2)制备的水相中，加入pH调节剂，高速均质3～8分钟；

5)搅拌冷却至35～40℃，加入防腐剂、胶原蛋白水解物、人参提取物、龙胆草提取物、火棘提取物、益母草提取物以及玉竹提取物，继续搅拌冷却至室温。

6)分装，即得。

实施例2 一种具有美白、保温、抗衰老作用的护肤品的制备

1、胶原蛋白水解物的制备

按照实施例方法一制备。

2、植物提取物的制备

同实施例1。

3、护肤品的制备

1)按照下表3所述的重量份分别称取各原料：

表3

2)将称取的保湿剂、增稠剂加入去离子水中，搅拌分散至均匀，搅拌加热至70～75℃；

3)将润肤剂、乳化剂搅拌加热至75～80℃，熔解均匀；

4)将步骤3)制备的油相加入步骤2)制备的水相中，加入pH调节剂，高速均质3～8分钟；

5)搅拌冷却至35～40℃，加入防腐剂、胶原蛋白水解物、人参提取物、龙胆草提取物、火棘提取物、益母草提取物以及玉竹提取物，继续搅拌冷却至室温。

6)分装，即得。

实施例3 一种具有美白、保温、抗衰老作用的护肤品的制备

1、胶原蛋白水解物的制备

按照实施例方法一制备。

2、植物提取物的制备

同实施例1。

3、护肤品的制备

1)按照下表4所述的重量份分别称取各原料：

表4

2)将称取的保湿剂、增稠剂加入去离子水中，搅拌分散至均匀，搅拌加热至70～75℃；

3)将润肤剂、乳化剂搅拌加热至75～80℃，熔解均匀；

4)将步骤3)制备的油相加入步骤2)制备的水相中，加入pH调节剂，高速均质3～8分钟；

5)搅拌冷却至35～40℃，加入防腐剂、胶原蛋白水解物、人参提取物、龙胆草提取物、火棘提取物、益母草提取物以及玉竹提取物，继续搅拌冷却至室温。

6)分装，即得。

实验例1 酪氨酸酶活性以及黑色素合成抑制实验

1、受试样品：

样品1：人参提取物8重量份、龙胆草提取物3重量份、火棘提取物5重量份、益母草提取物5重量份以及玉竹提取物4重量份；

样品2：人参提取物10重量份、龙胆草提取物2重量份、火棘提取物5重量份、益母草提取物5重量份以及玉竹提取物5重量份；

样品3：人参提取物5重量份、龙胆草提取物5重量份、火棘提取物10重量份、益母草提取物3重量份以及玉竹提取物3重量份；

样品4：人参提取物7重量份、龙胆草提取物1重量份、火棘提取物2重量份、益母草提取物5重量份以及玉竹提取物5重量份。

样品5：人参提取物5重量份、龙胆草提取物5重量份、火棘提取物10重量份、益母草提取物2重量份以及玉竹提取物3重量份。

上述各植物提取物均按照实施例1方法制备，将称取的植物提取物充分混合均匀，即得。

2、方法：

1)酪氨酸酶活性抑制试验

取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞，接种于6孔细胞培养板，培养过夜。分别加入终体积分数为5％的受试样品，以未处理组作细胞对照组，每组2个复孔。培养48h后用PBS洗涤1次，每孔加入100μL裂解液，刮取收集细胞，离心取上清液。取50μL细胞上清液至96孔板，再加入50μL 1％L-多巴溶液，于37℃孵育1h。M3读板仪于475nm处读取吸光度值。

相对酪氨酸酶活性＝(测定孔吸光度值-空白对照组吸光度值)/(细胞对照组吸光度值-空白对照组吸光度值)×100％。

2)黑色素合成抑制实验

取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞，接种于T25细胞培养瓶，培养过夜。分别加入终体积分数为5％的受试样品，以未处理组作为细胞对照组。培养48h后用PBS洗涤1次，加入1mL 1mol/L NaOH溶液，刮取收集细胞，放入80℃水浴中30min，取上清液加入96孔板，M3读板仪于475nm处读取吸光度值。

相对黑色素含量＝(测定孔吸光度值-空白对照组吸光度值)/(细胞对照组吸光度值-空白对照组吸光度值)×100％。

3)结果

植物提取物对细胞内酪氨酸酶活性以及黑色素合成抑制情况如下表4所示：

表5 植物提取物对细胞内酪氨酸酶活性以及黑色素合成的抑制

分组	酪氨酸酶活性(％)	黑色素合成(％)
			样品1	83.24±2.36	75.47±3.57
样品2	72.57±3.56	65.32±2.56
			样品3	73.85±4.21	62.34±2.58
样品4	69.23±3.35	61.56±3.56
			样品5	70.38±1.25	65.23±2.54

从表5结果可以看出，再用量相同的情况下，样品1相较于其他样品能够更显著的提高对小鼠黑色素瘤B16细胞内的酪氨酸酶活性以及黑色素合成的抑制。

实验例2 防腐挑战试验

本次实验采取的是一次加菌的28d防腐性能测试，称取实施例1-3制备的护肤品样品20g，分别添加0.2mL的混合细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌混合接种，3种菌的接种数量保持在同一数量级)和混合真菌(黑曲霉和白色假丝酵母菌混合接种，2种菌的接种数量保持在同一数量级)的悬菌液，使受检样品的细菌或真菌的数量级分别达到10⁵或10⁶CFU/g，在接菌后的第2、7、28天取样分析样品中的含菌量。同时采用不含有植物提取物的护肤品样品(其他成分同实施例1)作为对照。

判定标准参照CTFA(化妆品和香精香料协会)一次加菌防腐挑战性试验评价标准、国内参照CTFA加菌防腐挑战性试验评价标准和《化妆品卫生规范》2015版：

CTFA一次加菌防腐挑战性试验评价标准：

要求在第七天时霉菌降低90％，细菌降低99.9％，并且在28天内菌数持续下降。

国内参照CTFA加菌防腐挑战性试验评价标准：

(1)第28天时，样品中含细菌或霉菌＞1000CFU/g(mL)，该样品不能通过挑战试验，表明样品中的防腐体系不能有效的抑制卫生物的作用，产品在生产、贮藏和使用中很容易受到微生物的污染。

(2)第28天时，样品中含细菌或霉菌在100CFU/g～1000CFU/g(mL)，该样品有条件通过挑战试验，即当产品中蛋白质或其它动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境负荷要求，包装物不易发生二次污染时，该防腐体系可以使用，否则不能。

(3)第28天时，样品中含细菌或霉菌在10CFU/g～100CFU/g(mL)，表明该样品的防腐体系对微生物有较强的抑杀效果，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时很不容易受到微生物污染。

(4)从第7天起，样品中的细菌或霉菌＜10CFU/g(mL)，说明该样品的防腐体系对微生物有特强的抑杀作用，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时不容易被微生物污染。

《化妆品卫生规范》2015版评价标准：

(1)菌落总数(CFU/g或CFU/mL)≤1000

(2)霉菌和酵母菌总数(CFU/g或CFU/mL)≤100

(3)金黄色葡萄球菌不得检出、铜绿假单胞菌不得检出、耐热大肠菌群不得检出。

实验数据如下表6所示：

表6防腐挑战试验结果

实验结论：

通过实验结果可以看出，实施例1-3所提供的护肤品样品能够满足CTFA一次加菌防腐挑战性试验评价标准、国内参照CTFA加菌防腐挑战性试验评价标准和《化妆品卫生规范》2015版内的微生物评价标准，而没有添加植物提取物成分的护肤品虽然添加有防腐剂成分，但仍不能够通过满足上述标准，因此说明了所述植物提取物成分对护肤品中的细菌和真菌有一定的抑制效果，能够在减少防腐剂用量的情况下依旧达到满意的防腐效果。

实验例3 人体效果试验

募集200名女性志愿者，年龄30-45岁，随机平均分成4组，每组50人。

第一组志愿者每天早、晚用温水清洁皮肤并擦干后，取适量实施例1制备得到的护肤品均匀涂抹于脸部，并适当按摩帮助吸收；

第二组志愿者每天早、晚用温水清洁皮肤并擦干后，取适量不含有植物提取物的护肤品(其他成分同实施例1)得到的护肤品均匀涂抹于脸部，并适当按摩帮助吸收；

第三组志愿者每天早、晚用温水清洁皮肤并擦干后，取适量不含有植物提取物且不含有胶原蛋白水解物的护肤品(其他成分同实施例1)均匀涂抹于脸部，并适当按摩帮助吸收；

第四组志愿者每天早、晚用温水清洁皮肤并擦干后，取适量市售护肤品均匀涂抹于脸部，并适当按摩帮助吸收；

使用1个月。然后对使用效果打分。

使用者根据使用产品的美白效果、保湿效果以及抗衰老(皱纹改善、皮肤弹性)效果进行评价，总分为5分：5分为最高分，表示很好；4分为较好；3分为可以接受；2分为不好；1分为不能接受。同时对过敏反应人数进行统计。统计最后得分结果，以平均分表示，结果如下表7所示：

表7人体效果试验结果

实验组	过敏反应人数	美白效果	保湿效果	抗衰老效果
					第一组	0	4.8	4.8	4.8
第二组	0	3.8	4.2	3.8
					第三组	0	2.2	3.6	2.6
第四组	6	4.2	4.2	3.8

通过表7数据可以看出，本发明通过添加胶原蛋白水解物以及植物提取物成分提高了护肤品的美白效果、保湿效果以及抗衰老效果，同时相较于市售的护肤品有更好的护肤效果。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (8)

1.一种含有胶原蛋白水解物，保湿补水的护肤品，其特征在于，所述的护肤品中含有胶原蛋白水解物以及天然植物提取物，所述的胶原蛋白的水解物的重量份为1-10重量份，所述的天然植物提取物由以下重量份的各原料组成：人参提取物5-10重量份、龙胆草提取物1-5重量份、火棘提取物5-10重量份、益母草提取物1-5重量份以及玉竹提取物3-5重量份。

2.如权利要求1所述的含有胶原蛋白水解物，保湿补水的护肤品，其特征在于，所述的胶原蛋白的水解物的重量份为8重量份，所述的天然植物提取物由以下重量份的各原料组成：人参提取物8重量份、龙胆草提取物3重量份、火棘提取物5重量份、益母草提取物5重量份以及玉竹提取物4重量份。

3.如权利要求1所述的含有胶原蛋白水解物，保湿补水的护肤品，其特征在于，所述的胶原蛋白水解物，通过以下步骤制备得到：

(1)取三文鱼鱼皮，于60℃干燥4～6h，剪碎，鱼皮经0.5％w/v NaOH浸泡过夜，过滤，滤渣用蒸馏水清洗2～3次，然后按1∶5(mg/mL)加异丙醇，于60℃水浴恒温脱脂，滤渣于60℃干燥4～6h，得到脱脂鱼皮粉；

(2)准确称取10g脱脂鱼皮粉分别分散于100mL温度为80℃纯水中，恒温水浴磁力搅拌下提取4h，取出过滤，收集滤液；

(3)滤液冷却至50℃后，向滤液中加入其重量0.5％的复合蛋白酶进行水解反应3小时，后加热煮沸维持20分钟灭酶活，离心去除不溶性杂质，上清液抽滤，在-40℃真空冷冻干燥得到胶原蛋白水解物，其中，所述的复合蛋白酶由风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、脯氨酸蛋白酶按照重量比1∶1∶1组合而成。

4.如权利要求1-3任一项所述的含有胶原蛋白水解物，保湿补水的护肤品，其特征在于，所述的护肤品中还包括乳化剂5-10重量份、润肤剂5-10重量份、保湿剂10-20重量份、增稠剂1-5重量份、pH调节剂0.1-2重量份、防腐剂0.2-0.5重量份以及去离子水100-120重量份。

5.如权利要求4所述的含有胶原蛋白水解物，保湿补水的护肤品，其特征在于，所述的乳化剂包括卵磷脂、聚甘油-6二硬脂酸酯、聚甘油-3蜂蜡酸酯、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、山梨坦橄榄油酸酯、鲸蜡硬脂醇、丙烯酸(酯)类共聚物钠中的一种或两种以上的组合；

所述润肤剂包括、C10-18脂酸甘油三酯类、角鲨烷、生育酚乙酸酯、辛基聚甲基硅氧烷、碳酸二辛酯、辛酸/癸酸甘油三酯、聚二甲基硅氧烷、氢化聚异丁烯、棕榈酸乙基己酯、季戊四醇四异硬脂酸酯、季戊四醇四(乙基己酸)酯、异硬脂醇异硬脂酸酯、异壬酸异壬酯、棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、聚二甲基硅氧烷交联聚合物、聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物、聚二甲基硅氧烷醇、霍霍巴籽油以及甜扁桃油中的一种或两种以上的组合；

所述的保湿剂包括甘油、二丙二醇、丁二醇、透明质酸以及海藻糖中的一种或两种以上的组合；

所述的增稠剂包括卡波姆、黄原胶、果胶、阿拉伯胶树胶、小核菌胶、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、皱波角叉菜提取物和聚丙烯酸钠中的一种或两种以上的组合；

所述pH调节剂选自氨甲基丙醇、氢氧化钠、氢氧化钾、精氨酸、三乙醇胺中的一种或两种以上组合；

所述防腐剂选自羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯氧乙醇、苯甲醇、苯甲酸钠、山梨酸钾中的一种或两种以上组合。

6.如权利要求1所述的含有胶原蛋白水解物，保湿补水的护肤品，其特征在于，所述的天然植物提取物分别通过以下方法制备得到：

(1)人参提取物的制备

将干燥人参茎叶为原料，粉碎至50-100目，加去离子水回流提取3次，干燥人参茎叶与去离子水的质量体积比g/mL为1～3∶10～30，提取时间分别为90min、60min以及60min，冷却后，抽滤，合并滤液，真空浓缩至相对密度为1.2-1.3，得到人参提取物；

(2)龙胆草提取物的制备

取风干后的龙胆草根，粉碎至50-100目，加去离子水回流提取2次，风干后的龙胆草根与去离子水的质量体积比g/mL为1～3∶10～30，提取时间分别为90min以及60min，冷却后，抽滤，合并滤液，得到水提取液；滤渣用体积百分比为60％～95％的乙醇在75～85℃下进行回流提取，滤渣与乙醇的质量体积比g/mL为1～3∶10～50，回流提取2-3h，共进行2次，然后将提取物合并，冷却至20℃～30℃，50～100目滤布过滤，得滤液，向得到的滤液中加入与乙醇相同体积量的1，3-丁二醇混溶均匀，减压浓缩出溶液中的乙醇，得到乙醇提取液；将水提取液和乙醇提取液混合均匀，真空浓缩至相对密度为1.2-1.3，得到龙胆草提取物；

(3)火棘提取物的制备

将风干后的火棘果实，粉碎至50-100目，用体积百分比为60％～95％的乙醇在75～85℃下进行回流提取，火棘果实与乙醇的质量体积比g/mL为1～3∶10～50，回流提取2-3h，共进行2-3次，然后将提取物合并，冷却至20℃～30℃，50～100目滤布过滤，得滤液；向得到的滤液中加入与乙醇相同体积量的1，3-丁二醇混溶均匀，减压浓缩出溶液中的乙醇，真空浓缩至相对密度为1.2-1.3，得到火棘提取物；

(4)益母草提取物的制备

将益母草加去离子水回流提取2次，益母草与去离子水的质量体积比g/mL为1～3∶10～30，提取时间分别为90min、60min，冷却后，抽滤，合并滤液，真空浓缩至相对密度为1.2-1.3，得到益母草提取物；

(5)玉竹提取物的制备

取风干后的玉竹根茎，粉碎至50-100目，加去离子水回流提取2次，风干后的玉竹根茎与去离子水的质量体积比g/mL为1～3∶10～30，提取时间分别为90min以及60min，冷却后，抽滤，合并滤液，得到水提取液；滤渣用体积百分比为60％～95％的乙醇在75～85℃下进行回流提取，滤渣与乙醇的质量体积比g/mL为1～3∶10～50，回流提取2-3h，共进行2次，然后将提取物合并，冷却至20℃～30℃，50～100目滤布过滤，得滤液，向得到的滤液中加入与乙醇相同体积量的1，3-丁二醇混溶均匀，减压浓缩出溶液中的乙醇，得到乙醇提取液；将水提取液和乙醇提取液混合均匀，真空浓缩至相对密度为1.2-1.3，得到玉竹提取物。

7.一种制备权利要求1-6任一项所述的含有胶原蛋白水解物，保湿补水的护肤品的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)按照权利要求1以及4所述的重量份分别称取各原料；

2)将保湿剂、增稠剂加入去离子水中，搅拌分散至均匀，搅拌加热至70～75℃；

3)将润肤剂、乳化剂搅拌加热至75～80℃，熔解均匀；

4)将步骤3)制备的油相加入步骤2)制备的水相中，加入pH调节剂，高速均质3～8分钟；

5)搅拌冷却至35～40℃，加入防腐剂、胶原蛋白水解物、人参提取物、龙胆草提取物、火棘提取物、益母草提取物以及玉竹提取物，继续搅拌冷却至室温；

6)分装，即得。

8.权利要求1-6任一项所述的护肤品作为人体外用制剂在补水保湿、抗衰老中的应用。