CN109699866B - 紫檀芪在抑制葡萄汁中炭黑曲霉生长及赭曲霉毒素a产生的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了紫檀芪在抑制葡萄汁中炭黑曲霉生长及赭曲霉毒素A产生的应用。实验证明，紫檀芪作为有效的的抗菌剂，不仅能够抑制葡萄汁中炭黑曲霉的生长以及赭曲霉毒素A的产生，而且还能防止还原糖和可溶性蛋白的降解以及滴定酸的增多，可以保持葡萄汁的原有品质。因此，紫檀芪以增强抗菌效果和降低毒副作用，绿色，安全，有益人体健康，在葡萄汁的贮藏过程中有着很好的应用前景。

Description

紫檀芪在抑制葡萄汁中炭黑曲霉生长及赭曲霉毒素A产生的 应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及紫檀芪在抑制葡萄汁中炭黑曲霉生长及赭曲霉毒素A产生中的应用。

背景技术

炭黑曲霉(Aspergillus carbonarius)是葡萄及其制品中主要的赭曲霉毒素A产生菌，该毒素含量超标会对人体造成很大的伤害，甚至癌症，因此抑制产赭曲霉毒素A的炭黑曲霉的生长与产毒是控制葡萄及其制品中赭曲霉毒素A污染的重要措施。

对于抑制葡萄及其制品中炭黑曲霉生长和产赭曲霉毒素A的方法可以分为3类：生物方法、物理方法和化学方法。但是，随着人们对食品安全意识的不断提高，如何利用高效、天然、无毒无害的抑菌剂来控制食品原料和加工过程中的炭黑曲霉的生长与产毒，已经成为国内外研究热点。

紫檀芪(3,5-二甲氧基-4'-羟基二苯乙烯)作为一种广泛运用的植保素，其具有抗氧化剂、抗真菌、抗癌、抗细胞增殖、降血脂、抑制COX-1和COX-2等多种作用。

发明内容

本发明的目的在于为天然植物代谢产物紫檀芪提供一种新的应用。

为了保证葡萄汁的品质，本发明提供了紫檀芪在抑制葡萄汁中炭黑曲霉生长的应用，其中所述葡萄汁中紫檀芪的添加量是0.4～1.6mmol/L，优选紫檀芪的添加量是0.8～1.2mmol/L。

为了保证葡萄汁的品质，本发明还提供了紫檀芪在抑制葡萄汁中赭曲霉毒素A产生的应用，其中所述葡萄汁中紫檀芪的添加量是0.4～1.6mmol/L，优选紫檀芪的添加量是0.8～1.2mmol/L。

本发明的有益效果如下：

本发明的紫檀芪在葡萄汁的贮藏过程中能够有效的抑制产赭曲霉毒素A的菌还有一些易污染葡萄汁的真菌的生长，降低葡萄汁中赭曲霉毒素A的产生与积累。同时紫檀芪作为有效的抑菌剂，在葡萄汁的贮藏过程中可以防止果汁中可溶性蛋白和还原糖等被菌当作碳源和氮源消耗掉，而且还可以防止产生更多的可滴定酸，能保持葡萄汁的品质。因此紫檀芪作为有效的抑菌剂具有很好的应用前景。

附图说明

图1是紫檀芪对炭黑曲霉菌丝生长的影响。

图2是紫檀芪对赭曲霉毒素A的影响。

图3是葡萄汁中炭黑曲霉菌丝的生长量。

图4是葡萄汁中可溶性固形物含量。

图5是葡萄汁中可滴定酸的含量。

图6是葡萄汁中还原糖的含量。

图7是葡萄汁中可溶性蛋白质含量。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明的技术方案进行进一步的说明，但是本发明不仅限于下述实施情形。

下面实施例中所选取的原料葡萄是采摘于陕西渭南的红提；炭黑曲霉的名称为Aspergillus carbonarius，保藏编号为：2011004，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，保藏单位为：中国武汉武汉大学；紫檀芪由南京源植生物有限公司提供。

实施例1

1、紫檀芪对炭黑曲霉的抑制作用

将保存于斜面的炭黑曲霉划线接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上(PDA)，28℃培养5天后，用无菌水在平板上冲取孢子悬浮液，用血球计数板计数并且调整到浓度为1×10⁶个/mL。

将紫檀芪加入到50℃的PDA培养基中，使其终浓度为0～1.6mmol/L，然后将该培养基倒入培养皿中，待其凝固，在培养皿中间滴2μL上述炭黑曲霉孢子悬浮液，封口，在28℃下培养5天，测量菌落直径，结果见表1和图1。

表1紫檀芪对炭黑曲霉菌丝生长的影响

注：表中ND表示没有菌丝生长，不同的小写字母表示差异显著。

由表1和图1可知，随着紫檀芪浓度的升高，其对炭黑曲霉的抑制作用越强，当紫檀芪浓度为0.8mmol/L时，抑制率达到89％，当紫檀芪浓度为1.6mmol/L时，炭黑曲霉的生长被完全抑制了。

2、紫檀芪对赭曲霉毒素A的抑制作用

将紫檀芪加入到10mL马铃薯葡萄糖(PDB)培养基中，使其终浓度为0.4mmol/L，然后加入50μL炭黑曲霉孢子悬浮液，在28℃下培养3～12天，过滤；取1mL滤液，加入100μL磷酸，然后加入1mL氯仿，将混合液涡旋1min，收集下层氯仿层，这个过程重复两次。合并提取液，用旋转蒸发仪浓缩，之后用色谱乙腈溶解，使用UHPLC-QQQ-MS/MS测量赭曲霉毒素A的含量。同时以不加紫檀芪做空白对照试验，结果见图2。

由图2可知，空白组赭曲霉毒素A的含量明显高于紫檀芪处理组，当第6天时，空白组赭曲霉毒素A的量是紫檀芪处理组的185倍，由此可见，紫檀芪对抑制赭曲霉毒素A具有较强的作用。

3、紫檀芪在抑制葡萄汁中炭黑曲霉生长和赭曲霉毒素A产生的应用

选取无病虫害和机械损伤的葡萄，用质量浓度为0.1％的次氯酸钠水溶液消毒2min，蒸馏水清洗干净后室温晾干。将葡萄除梗破碎后，用四层无菌纱布过滤，滤液在5000rmp/min下离心5min，上清液装入无菌的试管中，80℃水浴灭菌30min，目的是钝化一些酶和除去一些其他的微生物菌落。

将紫檀芪加入到上述灭菌的葡萄汁中，使其终浓度为0.8mmol/L，然后加入炭黑曲霉孢子悬浮液，使炭黑曲霉终浓度为1×10³个/mL和1×10⁴个/mL，摇匀，封口，在28℃下培养7天。所有被感染的葡萄汁用称重好的滤纸过滤，在80℃下干燥至恒重，然后将菌丝称重，收集滤液。同时以只加炭黑曲霉不加紫檀芪，以及不加炭黑曲霉和紫檀芪做对照试验。

按照试验2中的方法提取滤液中的赭曲霉毒素A，并测定滤液中可溶性固形物含量、还原糖、可溶性蛋白和滴定酸，其中可溶性固形物含量使用手持折射计测量，还原糖的含量参照Miller(1959)利用二硝基水杨酸法测定，可溶性蛋白的含量参照Bradford(1976)利用考马斯G520法测定，滴定酸含量的测定方法为：用0.1mol/L NaOH水溶液滴定葡萄汁，滴定前稀释适当的倍数，1％的酚酞作为指示剂，结果表示为酒石酸的当量数(转换系数为K＝0.075)。试验结果见图3～7，图中T₀表示葡萄汁培养时间是0天，CK₀表示没添加炭黑曲霉和紫檀芪培养7天，CK表示添加炭黑曲霉，但是没添加紫檀芪培养7天，PTE表示添加了炭黑曲霉和紫檀芪培养7天，A表示炭黑曲霉的添加量是1×10⁴个/mL，B表示炭黑曲霉的添加量是1×10³个/mL。

由图3可知，当给葡萄汁中加入紫檀芪时，与对照组相比紫檀芪处理组基本没有炭黑曲霉菌丝产生，由此可知紫檀芪可以抑制果汁中炭黑曲霉的生长，防止果汁被污染。

由图4可知，没用紫檀芪处理组(CK)，由于炭黑曲霉的大量生长导致果汁中可溶性固形物含量明显下降。但是紫檀芪处理能明显减少葡萄汁中可溶性固形物的消耗量。

由图5可知，当葡萄汁被炭黑曲霉侵染之后，其可滴定酸的含量会增加6倍左右，但是紫檀芪处理之后，其产酸含量明显下降，并且与没有污染的葡萄汁没有明显的差别。

由图6和图7可知，当葡萄汁被炭黑曲霉侵染之后，由于炭黑曲霉要将还原糖和可溶性蛋白作为碳源和氮源，故CK组的还原糖和可溶性蛋白的含量明显下降，但是加入紫檀芪处理之后，可以提升这两种物质的含量。

综上所述，紫檀芪不仅在体外可以抑制炭黑曲霉生长和产毒，也可以在葡萄汁中抑制炭黑曲霉的生长及赭曲霉毒素A的产生，并且可以保持葡萄汁的营养品质。

Claims (4)

1.紫檀芪在抑制葡萄汁中炭黑曲霉生长的应用，所述葡萄汁中紫檀芪的添加量是0.4～1.6mmol/L。

2.根据权利要求1所述的紫檀芪在抑制葡萄汁中炭黑曲霉生长的应用，其特征在于：所述葡萄汁中紫檀芪的添加量是0.8～1.2mmol/L。

3.紫檀芪在抑制葡萄汁中赭曲霉毒素A产生的应用，所述葡萄汁中紫檀芪的添加量是0.4～1.6mmol/L。

4.根据权利要求3所述的紫檀芪在抑制葡萄汁中赭曲霉毒素A产生的应用，其特征在于：所述葡萄汁中紫檀芪的添加量是0.8～1.2mmol/L。

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