CN109655453B - 一种具有类酶活性的钴钼纳米材料及其制备和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及纳米材料和分析化学领域,具体涉及一种具有类酶活性的钴钼纳米材料及其制备和应用。所述钴钼纳米材料的制备方法,其步骤包括:1)将氢氧化钴和硫代钼酸铵放入N,N‑二甲基甲酰胺中,混合均匀后超声,得到混合溶液,其中,氢氧化钴与N,N‑二甲基甲酰胺的质量体积比为(5‑20):10,硫代钼酸铵与N,N‑二甲基甲酰胺的质量体积比为(3‑8):10;2)向步骤1)得到的混合溶液中滴加相当于N,N‑二甲基甲酰胺的2‑3体积%的水合肼,搅拌;3)把步骤2)得到的液体在200‑250℃加热12‑15h,分离所得固体即得。本发明一并提供利用上述纳米材料用以检测抗坏血酸及其浓度的应用,特别是用于生理环境中抗坏血酸浓度的检测的方法,所述检测方法制备简便,灵敏度较高,检测限低。
Description
技术领域
本发明涉及纳米材料和分析化学领域,具体涉及一种具有类酶活性的钴钼纳米材料及其制备和应用。
背景技术
天然酶是一种蛋白质,可以催化化学反应,人们已经将其应用于医学、生物学及环境保护等领域。与化学催化剂相比,酶具有底物特异性好、催化活性高等显著优点。但是,天然酶容易受环境影响变性,并且容易被蛋白酶消化。此外,高成本和难储存也限制它的应用。因此,发展新型的模拟酶非常有必要。模拟酶与天然酶相比具有诸多低成本,设计灵活性和高稳定性等优点,所以近年来人造模拟酶作为重要的催化剂已经引起了广泛的关注。纳米材料人造模拟酶(纳米酶)是一类新颖的模拟酶,具有优异的催化活性和物理化学性质,特异性高(Q.Wang,L.Zhang,C.Shang,Chem.Commun.,2016,52,5410-5413;C.M.Maroneze,G.P.dos Santos,V.B.de Moraes,Biosens.Bioelectron.,2016,77,746-751.)。据研究,多种金属氧化物纳米材料如Fe3O4,Co3O4,NiO,CeO2,V2O5,TiO2,MFe2O4纳米粒子(NPs)具有独特的类酶活性。但是这些纳米粒子一般只是具有类过氧化氢酶或者类氧化酶性质,具有多种类酶性质的模拟酶报道不多。
抗坏血酸(AA)是具有许多功能的最重要的神经化学物质之一,包括抗氧化剂和酶辅因子等。例如,Yun等人最近的研究表明高剂量的AA选择性地杀死结直肠癌细胞作为抗氧化剂的抗癌剂。了解AA在脑中的生物学和病理学作用是至关重要的,它只是中枢神经系统中的微摩尔水平,远低于其他体液。因此,探索可靠和高度敏感的测量方法是必要和迫切的,可以提供对复杂脑系统广泛关注的AA的现场和快速检测。本发明为此建立了一种简单、快速检测AA的方法。
发明内容
本发明提供一种具有类酶活性的钴钼纳米材料及其制备和分析应用。
本发明的第一个目的是提供一种具有类酶活性的钴钼纳米材料的制备方法,其步骤包括:
1)将氢氧化钴和硫代钼酸铵放入N,N-二甲基甲酰胺中,混合均匀后超声,得到混合溶;
其中,氢氧化钴与N,N-二甲基甲酰胺的质量体积比为(5-20):10,硫代钼酸铵与N,N-二甲基甲酰胺的质量体积比为(3-8):10;
2)向步骤1)得到的混合溶液中滴加相当于N,N-二甲基甲酰胺的2-3体积%的水合肼;
3)把步骤2)得到的液体在200-250℃加热12-15h,分离所得固体即得。
优选本发明还后处理的步骤:4)取步骤3)所得的黑色固体倒入离心管中,加入无水乙醇,重复离心2-5次,取固体干燥。
关于本发明步骤1),
优选地,所述氢氧化钴与N,N-二甲基甲酰胺的质量体积比(mg/mL)为(12-16):10,所述硫代钼酸铵与N,N-二甲基甲酰胺的质量体积比(mg/mL)为(5-6):10。
优选地,所述超声的时间为1-2h,更优选为1.5h;此处的超声操作不仅可破坏氢氧化钴的片层结构使其变成小尺寸的片状结构,还能够使硫代钼酸铵更均匀的分散在氢氧化钴片层上。
关于本发明步骤2),
优选地,在滴加水合肼后进行搅拌,搅拌的时间为0.1-1h,更优选为0.5h。
关于本发明步骤4),
优选地,所述无水乙醇的体积与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为(6-8):10。
优选地,所述干燥的温度为50-80℃,更优选为60℃;
按照上述方法制备得到的纳米材料的厚度为90-100nm,平均厚度为92.5nm。
若无特殊说明,本发明中所述质量体积比的单位均为mg/mL。
本发明的第二个目的,是提供上述制备方法所制备得到的具有类酶活性的钴钼纳米材料。
此种钴钼纳米材料的优点在于氢氧化钴的片层结构上覆盖一层钼的硫化物,同时具有类过氧化氢酶、类氧化酶、类歧化酶,这三种酶的活性,上述纳米材料的用途广泛,特别是在小分子检测上具有广泛的应用前景。
本发明的第三个目的,是提供上述钴钼纳米材料在检测抗坏血酸(AA)及其浓度的应用。
具体地,其检测方法步骤包括:
1)配制检测底液:取所述钴钼纳米材料与TMB溶液进行混合;混合比例
2)配制抗坏血酸标准品溶液:取所述检测底液分别与不同浓度的抗坏血酸溶液等体积混合后,得不同浓度的抗坏血酸标准品溶液;
3)检测标准品:通过紫外分光光度计测量所述不同浓度的抗坏血酸标准品溶液的吸光度值;绘制浓度-吸光度标准曲线;
4)待测样品的检测:将含抗坏血酸的待测样品与所述检测底液等体积混合,按照与步骤3)相同的条件进行检测,依据所述浓度-吸光度标准曲线计算待测样品中的抗坏血酸的浓度。
优选地,所述步骤3)中,所述吸光度值为在652nm处的吸光度值。
优选地,所述步骤3)为:通过紫外分光光度计测量至少6个不同浓度的标准品溶液的吸光度值;绘制浓度-吸光度标准曲线;
优选测量10-15个不同浓度的标准品溶液的吸光度值,范围为0.5-50μM,以至少0.5-10μM的间隔取值。即可基本保证其所得线性方程的准确性。
本发明所述的步骤1)配制检测底液,具体如下:
1.1)将所述钴钼纳米材料按照质量体积比1-3:10-20的比例加入二次水中,经超声即得纳米材料悬浊液。
1.2)取步骤1.1)所得钴钼纳米材料悬浊液与TMB溶液的体积比为(0.5-1.5):(1.5-0.5)混合即得检测底液,优选比例为1:1;
所述检测底液的pH值控制在3.0-5.0,优选为4.0。
上述钴钼纳米材料为粉末状,为便于制得悬浊液,可按照本领域常规手段对所述纳米材料进行研磨后再与TMB溶液进行混合,在此不做特殊限制。
关于步骤1.1),优选控制所述钴钼纳米材料悬浊液的浓度为80-120μg/mL,更优选为100μg/mL。
在此浓度范围时,以便更加准确地进行后续测量操作。
关于步骤1.2),所述TMB溶液可用常规技术手段制备,但针对本发明所提出的检测方法,提出一种优选的TMB溶液的制备方法,以保证检测结果的精度,所述TMB溶液的制备方法如下:
a)按照质量体积比(mg/ml)10-20:1的比例将TMB加入DMSO至完全溶解,得到A溶液;
b)按照质量体积比(mg/ml)30-50:1的比例将柠檬酸加入二次水至完全溶解,得到B溶液;
c)取所得A溶液1体积份以二次水稀释至19体积份,再加入1体积份的B溶液,即得TMB溶液。
采用本发明所提供的TMB的制备方法,可使制备出的TMB溶液在与纳米材料悬浊液进行配制时更易于检测,提升检测的精准度。
作为优选,所述TMB溶液为1.0-3.0mM,更优选为2.5mM;在此浓度范围下,更易于获得准确的检测结果。
紫外可见分光光度计检测所述不同浓度标准品溶液,在652nm处有一特征吸收峰,并以A来代表所测溶液的吸光度值,具体检测的样品为不同浓度的标准品溶液(AA溶液)。空白实验是由二次水代替已知浓度的AA标准溶液,在652nm处的吸光度记为A0。横坐标为标准品溶液中的AA的浓度,纵坐标为溶液的吸光度值A,以此建立标准曲线,具体的,所述标准曲线对应的拟合方程为:A=-0.012[AA]/μM+0.7026;[AA]是指溶液中抗坏血酸的浓度。
本发明所述步骤4),所用标准曲线的横坐标为待测样品中的AA的浓度(C),纵坐标为混合溶液的吸光度值A;其中,A为加入所述待检测样品后的溶液在652nm处的吸光度值;根据所测得的吸光度值,以拟合方程计算待测品溶液中的抗坏血酸的浓度,即可。
本发明提供的上述检测体系,可以检测多种待测样品,所述待测样品为液体时,可选自饮料、人体唾液、鼠脑透析液中的一种;优选地,所述待测样品为鼠脑透析液。
所述待测品为固体时,可根据本领域常规操作处理为液体态后,按照上述步骤操作,在此不做特殊限制,应属于本领域技术人员可知晓的范畴。
本发明的检测限为0.25μM;线性范围为0.5-50μM。
上述本发明提供的检测体系,即制得的钴钼纳米材料混合溶液直接与TMB溶液等体积混合得到的检测底液,因为具有类氧化酶性质的钴钼纳米材料在空气中可催化TMB氧化,使无色的TMB氧化成蓝色的oxTMB(氧化态),这就制得了上述的检测体系。同时,该钴钼纳米材料的悬浊液与H2O2和TMB等体积混合后,上述混合溶液由无色变为蓝色,说明该材料具有类过氧化氢酶的性质;该钴钼纳米材料的悬浊液与H2O2等体积混合后,静置一段时间后,溶液中的氧含量明显升高,说明该纳米材料具有类歧化酶的性质。
由于AA具有很强的还原性,所以当在检测底液中加入AA后,氧化态的oxTMB会被还原为TMB,溶液的蓝色会很快的褪去,而且加入不同浓度的AA,溶液颜色的变化也会不同,即AA的浓度越大,颜色褪去的程度越大。
本发明所提供的检测方法,具有的优势在于:
1)该钴钼纳米材料和TMB溶液制备简便,并且利用该材料类氧化酶的性质,建立一种简单、快速的比色方法来检测生理环境中的生物小分子。
2)该用于定量检测AA的方法灵敏度较高,检测限低于0.25μM。
附图说明
图1实施例1所得的钴钼纳米材料的表征图,其中,(A)为Co/Mo NPs的扫面电子显微镜(SEM)图;(B)为放大后的Co/Mo NPs的扫面电子显微镜(SEM)图;(C)为Co/Mo NPs的透射电子显微镜(TEM)图,其中插图为高分辨透射电子显微镜(HRTEM)图;(D)为选区电子衍射(SAED)图;
图2钴钼纳米材料具有三种类酶性质的探究紫外吸收峰图,其中(A)分别在Co/MoNPs+H2O2混合溶液中加入ABTS、OPD、TMB,离心后,取上清液测其紫外吸收值;(B)分别在Co/Mo NPs+TMB混合溶液中通入O2、Air、N2,离心后,取上清液测其紫外吸收值;(C)在盛有H2O2和对苯二甲酸溶液的离心管中分别加入不同浓度的Co/Mo NPs悬浊液;(D)图中TMB-Co/MoNPs检测底液AA的响应图。(横坐标为波长,纵坐标为吸光强度);
图3为加入不同浓度AA的紫外可见吸收光谱图。A图所示为在652nm处的紫外吸收光谱图,分别加入了AA溶液浓度为0、0.5、1、5、10、20、25、30、35、40和50μM的紫外可见吸收光度值A;B图为该比色法检测AA的标准曲线图。(A图的横坐标为波长,纵坐标为吸光强度;B图的横坐标为待测样品中AA的浓度C,纵坐标为混合溶液的吸光度值A);
图4为检测鼠脑微透析液中AA的含量的紫外可见吸收光谱图;(横坐标为紫外吸收波长,本实验的有效峰位置在652nm处,纵坐标为样品的紫外吸收强度值)。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
紫外可见分光光度计UV-2550;
以下各实施例中所采用的TMB溶液以如下制备方法制备得到:
将12.5mg的TMB粉末置于2mL的离心管中,然后加入1mL的DMSO使其完全溶解得到a溶液;0.042g柠檬酸颗粒置于2mL的离心管中,加入1mL的二次水使其全部溶解得到b溶液;然后把a溶液用二次水稀释至19mL,再加入1mL的柠檬酸溶液至20mL,最后即可得到2.5mM的TMB溶液。
实施例1
本实施例提供一种钴钼纳米材料及其制备。
将15mg Co(OH)2粉末与5.2mg的(NH4)2MoS4置于20mL的烧杯中,然后向烧杯中加入10mL DMF,混合均匀后,超声1.5h,得到深褐色混合溶液;向上述得到的混合溶液中滴加50μL N2H4·H2O,在常温下,搅拌0.5h;然后,把搅拌后的液体倒入25mL的高压反应釜中,放到烘箱里加热,200℃,15h;最后,把得到的黑色悬浊液,离心三次,干燥即可得到层状的钴钼纳米材料。
钴钼纳米材料的表征:如附图1的(A)和(B)可以看出钴钼纳米材料是层状结构且厚度为92.5nm;(C)为钴钼纳米材料的TEM图,图中可以看出,Co(OH)2的晶格间距为0.27nm;(D)中的亮点是(100)面的晶体结构。
实施例2
本实施例提供一种钴钼纳米材料及其制备。
将5mg Co(OH)2粉末与3mg的(NH4)2MoS4置于20mL的烧杯中,然后向烧杯中加入10mL DMF,混合均匀后,超声1.5h,得到深褐色混合溶液;向上述得到的混合溶液中滴加50μL N2H4·H2O,在常温下,搅拌0.5h;然后,把搅拌后的液体倒入25mL的高压反应釜中,放到烘箱里加热,200℃,15h;最后,把得到的黑色悬浊液,离心三次,干燥即可得到层状的钴钼纳米材料。
钴钼纳米材料的表征:与实施例1相同,无差别。
实施例3
本实施例提供一种利用本发明所述的纳米材料检测AA的方法,具体步骤如下:
1)检测底液的制备
将实施例1所制备得到的纳米材料经研磨,取1mg置于10mL的离心管中,再加入二次水至10mL,超声10min,使其分散均匀,得到纳米材料的悬浊液;然后上述悬浊液与TMB溶液等体积混合,摇匀后,静置5min,离心,取上清液即可得到稳定的检测底液,该溶液的pH值为4.0。
2)检测标准品
利用步骤2)所得检测底液对AA进行定量检测,具体步骤如下:取检测底液1mL置于2mL的离心管中,然后加入1mL的二次水,混合均匀后,取1.5mL的溶液于比色皿中,利用紫外可见分光光度计检测其在652nm处的吸光度,记为A0。
固定钴钼纳米材料悬浊液浓度为100μg/mL,TMB溶液的浓度为2.5mM,且混合时按体积比1:1。
利用紫外分光光度计来定量检测AA(检测时,检测底液与AA溶液的体积比为1:1)。
检测完成后,向检测底液中依次加入0、0.5、1、5、10、20、25、30、35、40和50μM的AA溶液后,摇匀后静置2~3s,倒入比色皿中用紫外可见分光光度计检测其紫外吸收强度,记为A。在上述所制的检测底液中,在652nm处的紫外可见吸收强度逐渐减小,如图3A所示。
其数据如表1所示。
表1
浓度 | 吸光度值 | 相对标准偏差 |
0 | 0.70747 | 0.08323 |
0.5 | 0.6925 | 0.08568 |
1 | 0.6713 | 0.09484 |
5 | 0.6236 | 0.079 |
10 | 0.5954 | 0.09484 |
20 | 0.4844 | 0.01235 |
25 | 0.41233 | 0.0943 |
30 | 0.3617 | 0.09484 |
35 | 0.29067 | 0.0795 |
40 | 0.2001 | 0.079 |
50 | 0.05509 | 0.01105 |
3)绘制标准曲线
得到不同浓度AA下的紫外吸收强度Ax,以此绘制紫外吸收强度Ax与AA浓度的线性关系。
如图3B所示,为紫外吸收强度与AA浓度的线性关系图,线性范围为0-50μM,线性方程为A=-0.012[AA]/μM+0.7026,相关系数为0.991。
4)配制待测品溶液:从冰箱中取出冻存的大鼠脑微透析液,在常温下密封冷却,与检测底液等体积混合即得;
5)检测待测品:用紫外分光光度计检测待测品溶液在652nm处的吸光度。
通过所得标准曲线计算浓度值,为2.53μM。
实施例4
本实施例在实施例3的基础上,进一步提供大鼠透析实验模型,目的在于让上述检测方法以更好地应用于活体中。
6)设置大鼠脑透析液实验模型,利用实施例3所得检测体系检测含有AA的大鼠脑微透析液:
在正常情况下对大鼠的脑区进行微透析,得到含有抗坏血酸的脑微透析液。利用本发明提供的检测体系测定抗坏血酸得到的紫外吸收可见光谱图,如图4所示。
根据上述方程求得正常大鼠脑微透析液中的AA浓度为2.53μM。后进行平行实验,在正常状态下大鼠脑透析液中AA平均含量为2.26±0.39μM,由此证明了本发明提供的检测体系具有对AA的高选择性及高灵敏检测的能力,并能够成功应用于实际生物样品的动物模型中,进一步体现了该方法的实际应用能力。
值得注意的是,虽然以本发明所述的检测方法在测量鼠脑微透析液中AA的含量时,所述数值与其真实数据与测得的数值有差距,是很正常的,因为在脑透析操作时,鼠脑会随着时间的增加,慢慢的进入脑缺血状态,而在这种状态下,脑透析液中的AA含量是存在增加的趋势的,在文献中都有报道记载,(Li,L.,Wang,C.,Liu,K.,Wang,Y.,Liu,K.,Lin,Y.Hexagonal cobalt oxyhydroxide-carbon dots hybridized surface:high sensitivefluorescence turn-on probe for monitoring of ascorbic acid in rat brainfollowing brain ischemia.Analytical chemistry,2015,87(6),3404-3411.)。
对比例1
本对比例提供一种利用具有类过氧化氢酶的CuNPs@C纳米材料检测AA的方法。
与实施例3相比,其区别在于用将本发明所述的钴钼纳米材料,替换为已知的CuNPs@C纳米材料,上述材料比色检测抗坏血酸的检测范围是10μM-1mM,且检测限为1.41μM,检测限高。
以上实验数据来源为:Tan,H.,Ma,C.,Gao,L.,Li,Q.,Song,Y.,Xu,F.,Wang,L.Metal-organic framework-derived copper nanoparticle@carbon nanocompositesas peroxidase mimics for colorimetric sensing of ascorbic acid.Chemistry-aEuropean Journal2014,20(49),16377-16383.
试验例1
本试验例提供所述的钴钼纳米材料具有类似过氧化氢酶性质类氧化酶、类歧化酶三种类酶性质的实验方法及结果。
保持实施例3所述的操作步骤,固定钴钼纳米材料悬浊液浓度为100μg/mL,TMB溶液的浓度为2.5mM,且混合时按体积比1:1。
就其可行性试验作图,如图2所示,(A)为在分别盛有1mL的钴钼纳米材料悬浊液和50mM H2O2的离心管中分别加入1mL的ABTS、OPD、TMB溶液待其颜色稳定后,置入比色皿中,测其紫外吸收强度;从图中可以看出,分别在410nm、445nm、652nm处有一特征吸收,插图中的照片可以看出,加入ABTS、OPD、TMB溶液后,溶液分别变成了绿色、黄色、蓝色,说明该纳米材料具有类过氧化氢酶的性质。
(B)为在分别盛有1mL的钴钼纳米材料悬浊液和TMB溶液的离心管中,通入O2,Air,N2,待其颜色稳定后,置入比色皿中,测其紫外吸收强度;从图中可以看出,与通入空气相比,往混合溶液中通入O2会使溶液颜色变深,通入N2会使溶液颜色变浅,插图照片也能看出颜色深浅的不同,说明该纳米材料具有类氧化酶的性质。
(C)为在分别盛有1mL 50mM H2O2和0.5mM的对苯二甲酸溶液的离心管中分别加入1mL的不同浓度的钴钼纳米材料悬浊液(0、10、25、50、100、200μg/mL),静置3h,测其荧光强度;从图中可以看出,加入的钴钼纳米材料的浓度越高,检测体系的荧光信号越强,主要是因为无荧光的对苯二甲酸能与羟基自由基反应生成有荧光的2-羟基对苯二甲酸,加入的该材料的浓度越高,溶液的荧光越强,说明该材料浓度越高,催化H2O2歧化过程中产生的羟基自由基越多,所以溶液中具有荧光信号的2-羟基对苯二甲酸含量越多,说明该纳米材料具有类歧化酶的性质。
(D)图中a为TMB-Co/Mo NPs检测底液的紫外吸光度值,b为向该溶液中加入等体积的40mM AA的紫外吸光度值,c为TMB溶液的紫外吸光度值,说明该检测底液对AA有很好的响应。
综上所述,该钴钼纳米材料具有类过氧化氢酶、类氧化酶、类歧化酶三种类酶性质,而且得到的检测底液对AA有很好的响应。
试验例2
本试验例提供本发明所述检测方法在抗坏血酸浓度为0.5μM时的检测及数据。
保持实施例3中的条件不变,(固定钴钼纳米材料悬浊液浓度为100μg/mL,TMB溶液的浓度为2.5mM,且混合时按体积比1:1。),利用紫外分光光度计来定量检测AA(检测时,检测底液与AA溶液的体积比为1:1)。
在上述所制的检测底液中依次加入0.5μM的AA溶液后,在652nm处的紫外可见吸收强度检出值为0.6925,由此可得在浓度为0.5μM本发明所提供的检测方法也有良好的精准度。
试验例3
本试验例提供本发明所述的检测方法检出精准度的验证。
保持实施例3中的条件不变,(固定钴钼纳米材料悬浊液浓度为100μg/mL,TMB溶液的浓度为2.5mM,且混合时按体积比1:1。),按照客观标准的方式配制0、0.5、1、5、10、20、25、30、35、40和50μM的AA溶液,在上述所制的检测底液中依次加入不同浓度的AA溶液后,测量吸光光度值。
所得结果如表2所示:
表2
浓度/μM | 吸光度值 | 相关性 |
0 | 0.7042 | 0.995 |
0.5 | 0.6899 | 0.996 |
1 | 0.6682 | 0.995 |
5 | 0.6207 | 0.995 |
10 | 0.5917 | 0.994 |
20 | 0.4878 | 0.993 |
25 | 0.4093 | 0.993 |
30 | 0.3604 | 0.996 |
35 | 0.2899 | 0.997 |
40 | 0.2011 | 0.995 |
50 | 0.0547 | 0.992 |
由此可得出,本发明所提供的检测方法的检出精准度超过99.2%。
虽然,上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验,对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (14)
1.一种具有类酶活性的钴钼纳米材料的制备方法,其特征在于,其步骤包括:
1)将氢氧化钴和硫代钼酸铵放入N,N-二甲基甲酰胺中,混合均匀后超声,得到混合溶液;
2)向步骤1)得到的混合溶液中滴加体积相当于N,N-二甲基甲酰胺的2-3%的水合肼;
3)将步骤2)得到的体系在200-250℃加热12-15 h,分离所得固体;
4)取步骤3)所得的黑色固体倒入离心管中,加入无水乙醇,重复离心2-5次,取固体干燥;
所述氢氧化钴与N,N-二甲基甲酰胺的质量体积比为(12-16):10;步骤1)中,所述硫代钼酸铵与N,N-二甲基甲酰胺的质量体积比为(5-6):10;步骤1)中,所述超声的时间为1.5h;步骤2)中,在滴加水合肼后进行搅拌,搅拌的时间为0.5 h;步骤4)中,所述无水乙醇的体积与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为(6-8):10;所述干燥的温度为60℃;
按照上述方法制备得到的纳米材料的厚度为90-100 nm,平均厚度为92.5 nm。
2.一种具有类酶活性的钴钼纳米材料,其特征在于,由权利要求1所述的方法所制备得到。
3.权利要求2所述的钴钼纳米材料在检测抗坏血酸及其浓度的应用。
4.一种利用权利要求2所述的钴钼纳米材料检测抗坏血酸浓度的方法,其特征在于,步骤包括:
1)配制检测底液:取所述钴钼纳米材料与TMB溶液进行混合;
2)配制抗坏血酸标准品溶液:取所述检测底液分别与不同浓度的抗坏血酸溶液等体积混合后,得不同浓度的抗坏血酸标准品溶液;
3)检测标准品:通过紫外分光光度计测量所述不同浓度的抗坏血酸标准品溶液的吸光度值;绘制浓度-吸光度标准曲线;
4)待测样品的检测:将含抗坏血酸的待测样品与所述检测底液等体积混合,按照与步骤3)相同的条件进行检测,依据所述浓度-吸光度标准曲线计算待测样品中的抗坏血酸的浓度。
5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述步骤3)中,所述吸光度值为在652nm处的吸光度值。
6.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述步骤3)为:通过紫外分光光度计测量至少6个不同浓度的标准品溶液的吸光度值;绘制浓度-吸光度标准曲线。
7.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,测量10-15个不同浓度的标准品溶液的吸光度值,范围为0.5-50 µM,以0.5-10µM的间隔取值。
8.根据权利要求4-7任一项所述的检测方法,其特征在于,
所述步骤1)为:
1.1)将所述钴钼纳米材料按照质量体积比(1-3):(10-20)的比例加入二次水中,经超声即得纳米材料悬浊液;
1.2)取步骤1.1)所得钴钼纳米材料悬浊液与TMB溶液的体积比为(0.5-1.5):(1.5-0.5)混合即得检测底液;
所述纳米材料悬浊液与TMB溶液的体积比为1:1。
9.根据权利要求8所述的检测方法,其特征在于,所述步骤1.2)中,所述TMB溶液的浓度为1.0-3.0mM。
10.根据权利要求9所述的检测方法,其特征在于,所述步骤1.2)中,所述TMB溶液的浓度为2.5mM。
11.根据权利要求4-7任一项所述的检测方法,其特征在于,所述纳米材料悬浊液的浓度为80-120 μg/mL。
12.根据权利要求4-7任一项所述的检测方法,其特征在于,所述纳米材料悬浊液的浓度为100 μg/mL。
13.根据权利要求4-7任一项所述的检测方法,其特征在于,
所述待测样品选自饮料、人体唾液、鼠脑透析液中的一种。
14.根据权利要求13所述的检测方法,其特征在于,所述待测样品为鼠脑透析液。
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PB01 | Publication | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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