CN109641878B - Diprovocim：一类有效的tlr激动剂 - Google Patents

Diprovocim：一类有效的tlr激动剂 Download PDF

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Abstract

公开了在结构上对应于结构式V的diprovocim化合物，其中A、W、Z、R1、R2、R3和R4(当存在时)如本文所限定。diprovocim化合物对于培养物中的人和小鼠细胞以及对于小鼠的体内免疫具有免疫佐剂性质。还公开了含有diprovocim的组合物和使用化合物的方法。diprovocim化合物的免疫刺激活性类似于LPS的免疫刺激活性，与LPS没有明显的结构类似性。预期的化合物与TLR1/TLR2脂蛋白激动剂和任何其他合成的TLR激动剂都没有结构类似性，非常容易制备和合成修饰。
Figure DEST_PATH_IMAGE002

Description

DIPROVOCIM：一类有效的TLR激动剂
政府支持
本发明是在国立卫生研究院授予的AI082657和CA042056的政府支持下完成的。政府拥有本发明的某些权利。
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年6月29日提交的美国申请序列号62/356,314 的优先权，其公开内容通过引用结合于此。
背景技术
人体免疫系统由两部分组成，即先天免疫系统和适应性免疫系统。先天免疫系统被编码到生物体的种系中，构成哺乳动物的第一道防线，通过启动细胞内信号传导级联应答病原体和异常细胞，该信号传导级联导致转录因子的激活，该转录因子触发细胞因子和趋化因子的产生，且伴随多种细胞类型的参与，包括树突细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和自然杀伤细胞[Beutler,Mol.Immunol.2004,40:845–859]。
随后的适应性免疫系统被获得并且涉及由抗原呈递树突细胞介导的抗原特异性T细胞和B细胞应答，并且通过T细胞受体和抗体的作用以中和病原体和异常细胞，用于提供宿主更长期保护[Beutler, Mol.Immunol.2004,40:845–859；和Hoebe等人,Nat.Immunol.2004, 5:971–974]。
Toll样受体(TLR)[(a)Moresco等人,Curr.Biol.2011, 21:R488–R493；(b)Blasius等人,Immunity 2010,32:305–315；(c)Kawai 等人,Nat.Immunol.2010,13:373–384；(d)Beutler,Blood 2009, 113:1399–1407；(e)Hashimoto等人,Cell 1988,52:269–279；(f)Lemaitre等人,Cell 1996,86:973；(g)Poltorak等人,Science 1998, 282:2085–2088；(h)Beutler等人,J.Endotoxin Res.2001,7:277–280；(i) Beutler等人,Nat.Rev.Immunol.2003,3:169–176；和Medzhitov等人, Nature 1997,388:394–397]是最广泛认可的一组病原体相关或损伤相关分子模式(PAMP和DAMP)受体，它们识别病原体或异常细胞的分子成分并引领最初的先天免疫应答。3,5[(a)Moresco等人,Curr.Biol. 2011,21:R488–R493；(b)Blasius等人,Immunity 2010,32:305–315；(c) Kawai等人,Nat.Immunol.2010,13:373–384；(d)Beutler,Blood 2009, 113:1399–1407；(e)Poltorak等人,Science 1998,282:2085–2088；(f) Beutler等人,J.Endotoxin Res.2001,7:277–280；(g)Beutler等人,Nat. Rev.Immunol.2003,3:169–176]。它们还诱导适应性免疫应答[Medzhitov等人,Nature 1997,388:394–397]，并且疫苗的作用部分是由于TLR系统的激活[(a)Vogel,Clin.Infect.Dis.2000,30(增刊 3):S266–S270；(b)Guy,Nat.Rev.Microbiol.2007,5:505–517；和(c) Coffman等人,Immunity 2010,33:492–503]。
TLR激动剂不仅可用于治疗感染性疾病，而且还可用于治疗癌症，代表了新兴免疫治疗领域的互补小分子方法。[(a)Vogel,Clin.Infect. Dis.2000,30(增刊3):S266–S270；(b)Guy,Nat.Rev.Microbiol.2007, 5:505–517；(c)Coffman等人,Immunity 2010,33:492–503；(d) Czarniecki,J.Med.Chem.2008,51:6621–6626；(e)Peri等人,J.Med. Chem.2014,57:3612–3622；(f)Wang等人,Chem.Soc.Rev.2013, 42:4859–4866；(g)Hennessy等人,Nat.Rev.Drug Discovery 2010, 9:293–301；(h)Meyer等人,Expert Opin.Invest.Drugs2008, 17:1051–1065；(i)Hoebe等人,Curr.Pharmaceut.Des.2006, 12:4123–4134；和(j)Kanzler等人,Nat.Med.2007,13:552–559]。因此，它们作为通过明确定义的机制起作用的用于感染性疾病和肿瘤的新的疫苗佐剂，作为针对病原体暴露的预防剂(例如，生物防御)[(a) Amlie-Lefond等人,J.Allergy Clin.Immunol.2005,116:1334；和(b) O’Neill等人,Pharmacol.Rev.2009,61:177]或作为单独的或与其他药物联合使用的免疫刺激剂是有吸引力的。然而，已发现有限数量的小分子类别表现为TLR激动剂[(a)Amlie-Lefond等人,J.Allergy Clin. Immunol.2005,116:1334；和(b)O’Neill等人,Pharmacol.Rev.2009,61:177]，特别是肿瘤学方面[(a)Czarniecki,J.Med.Chem.2008, 51:6621–6626；(b)Peri等人,J.Med.Chem.2014,57:3612–3622；(c) Wang等人,Chem.Soc.Rev.2013,42:4859–4866；(d)Hennessy等人, Nat.Rev.Drug Discovery 2010,9:293–301；(e)Meyer等人,Expert Opin. Invest.Drugs 2008,17:1051–1065；(f)Hoebe等人,Curr.Pharmaceut.Des.2006,12:4123–4134；和(g)Kanzler等人,Nat.Med.2007, 13:552–559]。
值得注意的例子包括TLR7激动剂咪喹莫特[Prins等人,J. Immunol.2005,176:157–164]、isotoribine[Lee等人,Proc.Natl.Acad. Sci.USA 2003,100:6646–6651]和8-氧代-9-苄基腺嘌呤[Lee等人,Proc. Natl.Acad.Sci.U.S.A.2006,103:1828–1833]，以及TLR7/8激动剂雷西莫特[Smits等人,Cancer Immunol.Immunother.2010,59:35–46]，其在今天仍然用作几乎所有这些工作的启示[Beesu等人,J.Med.Chem. 2014,57:7325–7341；和Wu等人,Sci.Transl.Med.2014, 6(263):263ra160]。
最近，在设计以发现免疫系统的小分子刺激物或新的信号传导受体的无偏见研究中，本发明人和同事公开了一类新的TLR4激动剂 neoseptin[Johnson,Curr.Top.Med.Chem.2008,8:64–79；(b)Casella等人,Cell Mol.Life Sci.2008,65:3231–3240；(c)Persing等人,Trends Microbiol.2002,10:S32–S37；(d)Neve等人,J.Med.Chem.2014, 57:1252–1275；(e)Chan等人,J.Med.Chem.2013,56:4206–4223；和(f)Zimmer等人,J.Biol.Chem.2008,283:27916-27926]的鉴定、表征 [Wang等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2016,113:E884–E893]和系统的结构-活性关系研究[Morin等人,J.Med.Chem.2016,59:4812-4830]， neoseptin与细菌脂多糖(LPS)或其活性核心脂质A(LPA)没有结构相似性[Johnson,Curr.Top.Med.Chem.2008,8:64–79；(b)Casella等人,Cell Mol.Life Sci.2008,65:3231–3240；(c)Persing等人,Trends Microbiol.2002,10:S32–S37]。
与本文公开的研究相关，几十年前的研究已经定义并系统地考察了一系列TLR激动剂，这些激动剂来源于细菌三酰化脂蛋白和脂肽的活化N-末端片段(例如PAM3CSK4[(a)Metzger等人,Int.J.Peptide Protein Res.1991,37:46；(b)Bessler等人,J.Immunol.1985,135:1900；和(c)Deres等人,Nature 1989,342:561]，后来显示通过在细胞表面的 TLR1/TLR2的异二聚化发挥作用[(a)Alexopoulou等人,Nat.Med. 2002,8:878；(b)Takeuchi等人,J.Immunol.2002,169:10；(c)Jin等人, Cell 2007,130:1071；和综述:(d)Jin等人,Curr.Opin.Immunol.2008, 20:414–419]。基于并模拟脂蛋白和脂肽的这样的激动剂是有效的疫苗佐剂(与抗原混合或共价连接)[(a)Metzger等人,Int.J.PeptideProtein Res.1991,37:46；(b)Bessler等人,J.Immunol.1985,135:1900；和(c) Deres等人,Nature 1989,342:561]，并且今天继续使用和进一步优化 [(a)Salunke等人,J.Med.Chem.2013,56:5885-5900；(b)Salunke等人, J.Med.Chem.2012,55:3353–3363；和(c)Agnihotri等人,J.Med.Chem. 2011,54:8148]。
在TLR中，TLR2需要与TLR1或TLR6进行异二聚化，以用细菌三酰化脂蛋白激活。广泛认可的激活TLR1/TLR2的激动剂是 PAM3CSK4，细菌二酰化脂多肽如MALP-2刺激TLR2/TLR6 [Muhlradt等人,J.Exp.Med.1997,185:1951])。那些激动剂的结构式从左到右、从氨基末端到羧基末端如下所示[Buwitt-Beckmann等人,J. Biol.Chem.2006,281:9049]
Figure BDA0001927318020000041
最近的研究描述了第一类但效力较小的小分子TLR2/TLR1激动剂的发现[(a)Guan等人,J.Biol.Chem.2010,285,:23755-23762；和(b) Cheng等人,Sci.Adv.2015,1:e1400139]，作为对最近的研究的补充，在此公开了名为diprovocim的化合物的发现。这种特别有效的类别的 TLR2/TLR1激动剂来自于筛选设计以促进细胞表面受体二聚化的独特化学文库[Goldberg等人,J.Am.Chem.Soc.2002,124:544–555]。以下公开内容提供了关于这一新类别的合成的TLR激动剂的更多细节。
发明简述
预期的diprovocim化合物在结构上对应于结构式V，
Figure BDA0001927318020000051
在式V中，
-A是氢(H)或-C(O)NH-R4。R1、R2、R3和R4相同或不同，为2-(4- 氟苯基)乙基、反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)环丙基或者 C3-C18烃基，条件是1)R1、R2、R3和R4(R1-4)中的至少两个或当-A是氢时R1、R2和R3(R1-3)中的至少两个是反式-2-苯基环丙基或反式-2-(4- 氟苯基)环丙基或其混合物，或R1、R2、R3和R4各自为2-(4-氟苯基)- 乙基，和2)至少一个描述的3,4-吡咯烷基二羧基(或吡咯烷基二羧基) 具有(S,S)构型，并且当R1-4的每个都不是2-(4-氟苯基)乙基时，除了 C3-C18烃基之外的每个描述的R取代基是反式-2-苯基环丙基、反式 -2-(4-氟-苯基)环丙基或其混合物，3)R1-4中不多于两个是C3-C18烃基，和4)当A是氢时，R1-3中只有一个是C8-C18烃基且所描述的含R3的吡咯烷基甲酰胺基具有R或S构型，或两种构型的混合物。更优选地，两个吡咯烷基二羧基当存在时，具有(S,S)构型。
W是氮(N)，使得所描述的中心芳族环是取代的吡啶基，或W是 CH，使得该芳族环是取代的苯基。
在式V中，-Z是卤素(氟、氯或溴)、–H、-NH2、-OH、-OCH3、 -NO2、-OCH2CO2H、-O(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、 -OCH2CONH(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、 -NHCOCH2O-(CH2CH2O)nCH2CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CH OH)CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCHCO2H(CH2CO2H)、-OCH2CO NHCH2CONHCH(CHOH)(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONHC H2CONHCH(CHOH)(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONHCH2CO NHCH[(CH2)4NH2]CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CH2OH)CO{N HCH[(CH2)4NH2]CO}mNHCH-[(CH2)4NH2]CO2H(SEQ ID NO: 3-8)、-OCH2CONHCH2CO{NHCH[(CH2)4NH2]CO}pNHCH[(CH2)4NH2 ]CO2H(SEQ ID NO:9-13) 和-OCH2CONHCH2CO{NHCH(CH2OH)CO}qNHCH(CH2OH)CO2H(SEQ ID NO:14-18)中的一种或多种。下文中的数据说明了使用其中 -Z基团是上述那些的式V化合物诱导培养的人THP-1细胞和/或小鼠单核细胞释放TNF-α的活性。
“n”是平均值为1至约8，优选2至约5的数。因此，预期具有一个至约五个连接的氧基亚乙基的低聚聚氧基亚乙基键合在Z取代基内。低聚氧基亚乙基通常是具有不同的重复氧基亚乙基单元的数的混合物，使得“n”被称为平均值的数。
“m”是值为1至约6，优选为2至约5的数。
“p”是值为1至约6，优选为2至约5的数。
“q”是值为1至约6，优选为2至约5的数。
在一些优选的方面，当式V化合物用作药物或其他组合物中游离的活性成分时(不与更大的分子偶联)，或者用作与连接基或更大分子偶联之前的中间体时，取代基-Z优选为-H(氢)、-OH(羟基)或 -NH2(氨基)。
本发明的一个特别优选的方面预期下面的式I化合物，其也是式 V的化合物，其中
Figure BDA0001927318020000071
-A是-C(O)NH-R4。因此，所描述的R1-4、W和Z部分如上所述。
优选地，取代基对R1和R3或R1和R2中的至少一者是反式-2-苯基-环丙基或反式-2-(4-氟苯基)环丙基。还优选R1和R3或R1和R2中的至少一者具有反式-2-苯基环丙基或反式-2-(4-氟苯基)环丙基的 (1S,2R)构型。更优选地，R1、R2、R3和R4中的至少三个是反式-2-苯基环丙基或反式-2-(4-氟苯基)环丙基的(1S,2R)对映体。在另一个优选方案中，R1、R2、R3和R4中的每一个是2-(苯基)乙基。
在本发明的另一个优选方面，式V化合物的W为CH，使得所预期的化合物具有中心芳族环，其为取代的苯基。进一步优选的方案中，式V和Ia(下文)中存在(描述)的两个3,4-吡咯烷基-二羧基中的每一个具有相同的构型。该相同的构型
Figure BDA0001927318020000072
优选地是如上所示的(S,S)构型，其中波浪线表示为了增加清楚性而未示出分子的其他部分。说明这些优选方案的结构式Ia如下所示，其中R1、R2、R3和R4和Z如前所述。
Figure BDA0001927318020000073
预期的化合物可以作为小分子使用，也可以与另一种分子如抗体或蛋白质或肽抗原连接。因此，当用作小分子时，-Z优选为-H、-NH2或-OH，或当用作与更大分子偶联的中间体时，-Z为-NH2或-OH。还优选预期的化合物作为单一对映体存在。
式V化合物的又一个优选方面是式Va化合物，
Figure BDA0001927318020000081
当式V的-A是氢并且R1-3中的一个是C8-C18烃基，而R1-3中的另外两个是时其存在。R1-3中的每一个也可以是反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟-苯基)环丙基或其混合物。因此，所描述的R1-3取代基中的至少两个是反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)环丙基或其混合物，并且W和Z如前所定义。
在一个特别优选的说明性化合物中，R1和R2是反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)环丙基或两种取代基的混合物，R3是C8-C18烃基。所描述的-C(O)-R3基团可以是R构型、S构型或作为两种构型的混合物存在。
本发明还预期药物组合物，其包含有效诱导从体外培养的人 PMA分化的THP-1细胞中释放TNF-α的量的式V化合物或子通式I、 Ia或Va的化合物。该化合物存在于溶解或分散于生理学上可耐受的稀释剂中的组合物中。
本发明的另一方面预期增强免疫原特异性体液免疫应答的方法。在该方法中，使免疫细胞与佐剂有效量的权利要求1的化合物和待针对其增强免疫应答的免疫原接触。
术语“烃基”在本文中用作非芳族基团的简称术语，包括仅含有碳和氢的直链和支链脂族以及环状基团或残基。由于脂环族基团是环状脂族基团，因此认为这些取代基包含在脂族基团内。因此，预期烷基、烯基和炔基。
当使用“烃基”一词时，遵循通常的化学后缀命名法，除了通常的去除末端“基”并添加适当后缀的做法并不总是被遵循，因为得到的名称可能相似于一种或多种取代基的名称。
当意指特定的脂族烃基取代基时，则列举该基团；即，C1-C4烷基、甲基或叔丁基。示例性的烃基含有3至16个碳原子，优选3至约10个碳原子，更优选约5至约10个碳原子的链。
特别优选的烃基是烷基。因此，通过在本文列举的任何取代基中用“烷基”代替描述符“烃基”，可以列举概括的但更优选的取代基。当意指特定的脂族烃基取代基时，则列举该基团；即，C1-C4烷基、甲基或2-丙基。
直链和支链烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基。还预期支链C5-C18，但是太多而没有具体说出。说明性的环状烷基包括环丙基、环戊基、3- 甲基环戊基和环己基。合适的烯基的实例包括乙烯基(乙烯基)、2-丙烯基、3-丙烯基、1,4-丁二烯基、1-丁烯基、2-丁烯基和3-丁烯基、 2-戊烯基和3-己烯基。炔基的实例包括乙炔基、2-丙炔基、1-丙炔基、 1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基和1-甲基-2-丙炔基、3-甲基-1-丁炔基和2-甲基-1-戊炔基。还预期说明性的C7-C18烃基取代基的单-、二- 和三-烯，以及单-、二-和三-炔，并且太多而没有具体说出。环状炔烃类似于环状烯烃。
如技术人员将理解的，不能存在的取代基例如C1烯基或炔基或 C1-C2环状基团不意图包括在词语“烃基”中，尽管具有两个或更多个碳原子的这些取代基预期用于环状取代基以外的取代基。
附图的简述
在形成本公开的一部分的附图中，
图1A是显示通过测量来自分化的人THP-1细胞的受刺激的 TNF-α释放获得的受体二聚化文库(板39G-H孔和板40所有孔)的筛选结果的示意图(在50μM下测试的10种化合物混合物)。星号孔中的化合物混合物作为单独化合物制备。图1B显示了文库的含有R2残基 4和9的活性混合物的结构式，其中R1是单个定义的取代基，X是 10种连接基的混合物。
图2A说明了合成用于鉴定活性化合物连接基的板39G9中的各个化合物的步骤。图2B说明了图2A所示反应中使用的十种连接基X(C1至C10)的结构式。图2C是测量来自分化的人THP-1细胞的受刺激的TNF-α释放的受体二聚化文库的板39G9混合物中各个化合物的相对活性图(除非另有说明，以50μM测试)。
图3显示了化合物的结构式，其确立了在板39G9中自活性先导物(10)衍生的2-苯基环丙基胺残基的存在和数量的重要性。EC50值来源于从分化的THP-1细胞或小鼠巨噬细胞的受刺激的TNF-α释放的剂量-反应曲线，显示在化合物8-12的每个合适的结构式下面。半数最大有效浓度(EC50)是指在指定的暴露时间后诱导在基线和最大之间的一半反应的药物、抗体或毒物的浓度。它通常用作药物效力的衡量指标。
图4显示了diprovocim-1和diprovocim-2和其他关键类似物的全部外消旋混合结构的结构式和活性数据。EC50值来源于从分化的人 THP-1细胞或小鼠巨噬细胞的受刺激的TNF-α释放的剂量-反应曲线。
图5是显示使用来自含有编码mTLR和下游信号传导蛋白的基因的失能种系突变或敲除的小鼠的巨噬细胞，用3处理时，TNF-α释放的测定结果的图。所有结果均代表两个独立实验。误差棒表示SEM。
图6是显示3的剂量依赖性佐剂活性的图。通过100μg OVA连同媒介物或者指定剂量的媒介物中的3经i.m.免疫C57BL/6小鼠(每组4只)。21天后，通过ELISA测量OVA特异性IgG的血清滴度。误差棒表示SEM。
优选实施方案的详述
本发明预期式V化合物，其在本文中常称为diprovocim。最具活性的diprovocim在非常低的浓度(EC50＝100pM)下在培养的人细胞中引发完全激动剂活性，比Pam3CSK4或任何其他已知的TLR激动剂更有效。该化合物类别具有精细的结构-活性关系，通过明确定义的机制(TLR1/TLR2激动剂)起作用，并且所选成员在人和鼠系统中具有活性。观察到的功效与天然强效激动剂如LPS或脂肽的功效相符，但观察到甚至更大的效力，并且diprovocim作为佐剂在体内具有活性。该化合物类别与TLR1/TLR2脂蛋白激动剂或任何其他合成TLR激动剂不具有结构相似性，并且它们非常容易制备和合成修饰。
因此，优选的diprovocim化合物在结构上对应于结构式V，
Figure BDA0001927318020000111
在式V中，-A是氢(H)或-C(O)NH-R4。R1、R2、R3和R4相同或不同，为2-(4-氟苯基)乙基、反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基) 环丙基或者C3-C18烃基，条件是1)R1、R2、R3和R4(R1-4)中的至少两个或R1、R2和R3(R1-3)中的至少两个是反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)环丙基或其混合物，或R1-4各自为2-(4-氟苯基)乙基，2)至少一个描述的吡咯烷基二甲酰胺基具有(S,S)构型，并且当R1-4的每个都不是2-(4-氟苯基)乙基时，除了C3-C18烃基之外的每个描述的R取代基都是反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)环丙基或其混合物，3) 当-A是-C(O)NH-R4时，R1-4中不多于两个是C3-C18烃基，和4)当A 是氢时，R1-3中一个可以是C8-C18烃基且所描述的含R3的吡咯烷基甲酰胺基可具有R或S构型，或两种构型的混合物。
在式V中，-Z是卤素(氟、氯或溴)、–H、-NH2、-OH、-OCH3、 -NO2、-OCH2CO2H、-O(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、 -OCH2CONH(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、 -NHCOCH2O-(CH2CH2O)nCH2CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CH OH)CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCHCO2H(CH2CO2H)、-OCH2CO NHCH2CONHCH(CHOH)(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONHC H2CONHCH(CHOH)(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONHCH2CO NHCH[(CH2)4NH2]CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CH2OH)CO{N HCH[(CH2)4NH2]CO}mNHCH-[(CH2)4NH2]CO2H(SEQ ID NO: 3-8)、-OCH2CONHCH2CO{NHCH[(CH2)4NH2]CO}pNHCH[(CH2)4NH2 ]CO2H(SEQ ID NO:9-13) 和-OCH2CONHCH2CO{NHCH(CH2OH)CO}qNHCH(CH2OH)CO2H(SEQ ID NO:14-18)中的一种或多种。
当氨基酸残基存在于如上所示-Z基团中时，优选每个残基为L- 构型，除了甘氨酸没有L构型。
当式V化合物用作药物或其他组合物中游离的活性成分时(不与更大的分子偶联)，或者用作与连接基或更大分子偶联之前的中间体时，取代基-Z优选为-H(氢)、-OH(羟基)或-NH2(氨基)。
W是氮(N)或CH。因此，当W是N时，化合物具有中心取代的吡啶基部分，而当W是CH时，中心部分是取代的苯基。
“n”是平均值为1至约8，优选2至约5的数。因此，预期具有一个至约五个连接的氧基亚乙基的低聚聚氧基亚乙基键合在Z取代基内。低聚氧基亚乙基通常是具有不同的重复氧基亚乙基单元的数的混合物，使得“n”被称为平均值的数。
“m”是值为1至约6，优选为2至约5的数。
“p”是值为1至约6，优选为2至约5的数。
“q”是值为1至约6，优选为2至约5的数。
关于“m”、“p”和“q”，数据显示所涉及的数具有活性其中不同数量的重复元素涉及那些数。因此，多于或少于所述上限数的几个重复元素的存在为所述化合物提供一些活性。
本发明特别优选的方面预期下面的式I化合物，其是式V的子通式化合物
Figure BDA0001927318020000131
其中-A是-C(O)NH-R4。因此，所描述的R1-4、W和Z部分如上所述。
在一种优选的式I化合物中，取代基对R1和R3中的至少一个成员(R1或R3)或取代基对R1和R2中的至少一个成员(R1或R2)是反式-2- 苯基环丙基或反式-2-(4-氟苯基)环丙基。还优选取代基对R1和R3中的至少一个成员或取代基对R1和R2中的至少一个成员具有反式-2- 苯基环丙基或反式-2-(4-氟-苯基)环丙基的(1S,2R)构型。
更优选R1、R2、R3和R4的至少三个取代基具有反式-2-苯基环丙基或反式-2-(4-氟苯基)环丙基的(1S,2R)构型。更优选地，R1、R2、R3和R4中的每一个具有反式-2-苯基环丙基或反式-2-(4-氟苯基)环丙基的(1S,2R)构型。
在另一个优选的方案中，每个描述的吡咯烷基二甲酰胺基具有 (S,S)构型，并且每个描述的R1-4取代基是反式-2-苯基环丙基、反式 -2-(4-氟-苯基)环丙基或其混合物，与环丙基部分的键具有(1S,2R)构型。
在另一个方面，式V或其子通式之一的化合物中的R1-4的至多两个可以是C3-C16烃基。优选烃基为烷基，长度为3至约10个碳原子，更优选为约5至约10个碳原子。直链烃基也是优选的，尽管可以存在至多两个甲基和乙基取代基或两者，也可以存在碳环，也可以存在一个或两个双键或三键。在讨论使用“烃基”一词时，先前讨论了特定的C3-C16烃基。
从式V可以看出，每个分子含有至少一个，优选两个3,4-吡咯烷基二羧基。羧基与胺封端的R1、R2、R3和R4取代基键合，形成四(或三)个酰胺基键。因此，所述两个吡咯烷基二羧基也可以称为两个吡咯烷基二甲酰胺基。
与吡咯烷基二羧基的羧基键合的取代基可以是顺式或反式构象，即所述两个取代基可以都投影在所描述的环的平面上方或下方(顺式)，或者一个可以投影在该平面上方，另一个取代基投影在下方(反式)。具有两个相同取代基的顺式-二取代的吡咯烷基-二羧基具有对称构型并且不具有对映体形式。具有该相同的两个相同取代基的反式二取代的吡咯烷基二羧基具有不对称(手性)构型并具有对映体形式。两种手性构型称为(S,S)和(R,R)，如下所示。
Figure BDA0001927318020000141
优选至少一个，更优选两个3,4-吡咯烷基二羧基均具有(S,S)构型。
另一方面，当式V的-A是氢且R1-3中的一个是C8-C18烃基时，优选的化合物在结构上对应于下面的式Va，
Figure BDA0001927318020000142
其中描述的R1-3、W和Z部分如上所述。所描述的-C(O)-R3基团可以是R构型、S构型或作为两种构型的混合物存在。
在式Va的化合物中，此处R3基团的碳原子数优选为8至18，更优选10至16个碳原子。该烃基还更优选为作为直链取代基的烷基，尽管可以容忍甲基和乙基支链，也可以容忍链中的双键和/或三键。也可以使用环状烃基取代基化合物和含碳环的取代基。
也优选W为CH。如下所示的结构式Ia包含几个上述优选项。
Figure BDA0001927318020000143
其中-Z为氢(-H)的式Ia优选化合物的结构式如下所示为式A、B、 C、D、E、F、G和H的化合物，并且还以其合成化合物编号显示并显示为diprovocim编号化合物。
Figure BDA0001927318020000151
Figure BDA0001927318020000161
药物组合物和方法
预期的式V化合物diprovocim及其子通式的化合物也可用于制备药物(药物组合物)。当如此使用时，预期的式V化合物以有效诱导体外培养的人PMA分化的THP-1细胞释放TNF-α的量(或浓度)溶解或分散在药学上可接受的稀释剂(或载体)中。
这种组合物的一种用途是作为疫苗的佐剂或用于在培养的细胞中诱导免疫应答的佐剂。因此，预期增强免疫原特异性体液免疫应答的改进方法，该方法包括使免疫细胞与佐剂有效量的式V化合物和待针对其增强该应答的免疫原接触。在活哺乳动物中，该方法是接种疫苗的方法，其中给需要接种疫苗的哺乳动物施用有效量的免疫原和有效量的作为佐剂的式V化合物。此处，改进包括使用式V化合物或其药学上可接受的盐作为佐剂。
例如，本文其他地方说明的研究中，diprovocim-1作为强效的体内佐剂或TLR1/TLR2激动剂起作用，当其与作为免疫原的卵白蛋白通过肌内途径共注射时，以0.25-5mg/kg(i.m.)在小鼠体内诱发有效的 TLR2依赖性佐剂活性。另外，当用作佐剂时，diprovocim-1没有显示出LPS施用特有的明显毒性。
预期的组合物通常还含有药学上可接受的盐、缓冲剂和类似赋形剂，其统称为药学上(或生理学上)可接受的稀释剂或载体，不同于不意图用于药学用途的组合物中(如在体外测定中)可以存在的那些。
可以提供本发明化合物以其本身或作为药学上可接受的盐使用。预期的式I化合物苯胺是弱碱。母体苯胺
Figure BDA0001927318020000171
离子报道的pKa值为4.6。羧基也存在于该分子中，其优选被酯化，但可以盐的形式存在。
可用于预期的化合物的示例性盐包括但不限于以下：硫酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、环戊烷丙酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、甲磺酸盐和十一烷酸盐。羧酸根基团的盐包括钠、钾、镁、钙、铝、铵和多取代的铵盐。
关于与药物化合物形成药学上可接受的盐的常用药学上可接受的酸和碱的列表，读者可以参考Berge,J.Pharm.Sci.1977 68(1):1-19。
在某些情况下，盐也可用作分离、纯化或拆分本发明化合物的辅助剂。在这些用途中，所用的酸和制备的盐不需要是药学上可接受的。
从下面的数据可以看出，所预期的化合物以微摩尔量在体内和体外测定研究中具有活性。当在诸如体外测定的测定中使用时，预期的化合物以足以提供约10μM至约100μM浓度的量存在于组合物中以接触待测定的细胞。
预期的药物组合物含有有效量的在生理学上(药学上)可接受的载体中溶解或分散的式V化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，使用佐剂有效(TLR2激动剂有效)量。这种组合物可以在体外如在细胞培养物中施用于哺乳动物细胞以接触那些细胞，或者可以在体内如在有需要的活的宿主哺乳动物中接触该细胞。
当用作疫苗佐剂时，式V化合物优选与选择的免疫原一起施用。两种组分优选一起存在于单一组合物中。然而，这两种成分可以存在于单独施用的组合物中，并且那些单独的组合物可以间隔最多约1至约2小时施用。优选当施用两种单独的组合物时，在时间上尽可能接近地施用它们。
式V化合物示例性地以约0.25至约10，优选约0.5至约5mg/kg 的每千克受试动物的佐剂重量在体内施用。通常，本文预期的式V 化合物以每平方米接受者体表面积(bsa)的重量体内胃肠外施用。对于成人，该量通常为约1至约20mg/m2bsa，并且对于儿童约为该量的一半。
预期的组合物通常在一个月内多次(例如每天或每周)在体内施用于有需要的受试者，并且可以在数月至数年的时间内施用。更通常地，在整个治疗过程中多次施用预期的组合物。
预期的药物组合物可以根据需要在含有常规无毒的药学上可接受的载体、佐剂和媒介物的制剂中口服(经口)或胃肠外(优选的)给予。本文所用的术语胃肠外包括皮下注射、静脉内、肌肉内(最优选)、胸骨内注射或输注技术。药物的制剂讨论于例如Hoover,JohnE., Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania；1975和Liberman,H.A.和Lachman,L.,编辑, Pharmaceutical DosageForms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980。
预期的药物组合物优选适用于胃肠外施用。因此，药物组合物在施用时优选为液体形式，并且最优选地，液体是含水液体，尽管如下所讨论的，预期其他液体，并且目前最优选的组合物是可注射制剂。
因此，可以使用合适的分散剂或润湿剂和助悬剂根据已知技术配制可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性溶液或悬浮液。无菌可注射制剂也可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如，作为在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的媒介物和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液、磷酸盐缓冲盐水。
其他液体药物组合物包括例如适用于胃肠外施用的溶液。式V 化合物的无菌水溶液或式V化合物在包含水、乙醇或丙二醇的溶剂中的无菌溶液是适于胃肠外施用的液体组合物的实例。在一些方面，将预期的式V化合物提供为干粉，其待在使用前溶解在适当的液体介质如氯化钠中用于注射。
另外，无菌的固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的固定油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸可用于制备可注射组合物。可以使用二甲基乙酰胺、包括离子和非离子洗涤剂在内的表面活性剂、聚乙二醇。溶剂和润湿剂的混合物如上面讨论的那些也是可用的。
无菌溶液可以通过将活性组分溶解在所需的溶剂系统中，然后使所得溶液通过膜过滤器以使其灭菌，或者通过在无菌条件下将无菌化合物溶解在预先灭菌的溶剂中来制备。
用于口服施用的固体剂型可包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。固体剂型中预期的式V化合物(diprovocim)的量如前所述为足以提供血清或血浆中约10mM至约100mM，优选约1nM至约50nM的浓度的量。固体剂型也可在一周时间内多次施用。
在这种固体剂型中，本发明化合物通常与一种或多种适合于所示施用途径的佐剂组合。如果口服施用，则所述化合物可与乳糖、蔗糖、淀粉粉末、烷酸纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，然后压片或包囊以方便施用。这种胶囊或片剂可含有控释制剂，也可以在活性化合物在羟丙基甲基纤维素中的分散体中提供。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可包含缓冲剂，例如柠檬酸钠、碳酸镁或碳酸钙或碳酸氢镁或碳酸氢钙。片剂和丸剂可另外用肠溶包衣制备。
需要治疗和向其施用含有式V化合物的药物组合物的哺乳动物 (受试者)可以是灵长类动物，例如人，猿如黑猩猩或大猩猩，猴子如食蟹猴或猕猴，实验动物如大鼠、小鼠或兔子，伴侣动物如狗、猫、马，或食物动物如母牛或阉牛、绵羊、羊羔、猪、山羊、美洲驼等。
在预期体外测定的情况下，可以使用待测定的样品，例如细胞和组织。这些体外组合物通常含有水、氯化钠或氯化钾和一种或多种缓冲盐例如乙酸盐和磷酸盐、Hepes等、金属离子螯合剂如EDTA，其被缓冲至所需的pH值，例如pH 4.0-8.5，优选约pH 7.2-7.4，取决于要进行的测定，这是众所周知的。
优选地，药物组合物是单位剂型。在这种形式中，将所述组合物分成含有适量活性化合物的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，该包装含有离散量的制剂，例如，在小瓶或安瓿中。
在另一个优选的实施方案中，预期的式V化合物作为佐剂与一种或多种免疫原性物质一起作为疫苗施用。本文说明了一种这样的组合物，其中在C57BL/6J小鼠的疫苗接种中使用卵白蛋白作为免疫原。
结果和讨论
筛选和结果
TLR的作用的发现出现在整个生物体的遗传研究中，其使用随机核酸突变来鉴定源自影响免疫系统的改变的基因的表型变化(由于突变和失能的TLR4所致缺乏对LPS的敏感性)。[(a)Poltorak等人, Science 1998,282:2085–2088；(b)Beutler等人,J.EndotoxinRes.2001, 7:277–280；(c)Beutler等人,Nat.Rev.Immunol.2003,3:169–176.]。作为对这种努力的补充，研究了备选的无偏见的化学遗传学方法的应用 [O'Connor等人,Chem.Soc.Rev.2011,40:4332–4345]，其在基于细胞的功能测定中针对刺激的免疫应答的信号传导筛选化合物文库。
使用新开发的功能测定法，用近100,000种化合物进行筛选活动 [(a)Whitby等人,Acc.Chem.Res.2012,45:1698–1709；和(b)Boger等人, Angew.Chem.Int.Ed.2003,42:4138–4176]，该测定法测量从部分分化的经处理的人THP-1细胞及巨噬细胞系的刺激的TNF-α释放[发明人和同事的未公开的结果]。通过该测定法测量的功能活性是罕见的激活事件(激活剂/激动剂对比抑制剂/拮抗剂)并且非常敏感，使得甚至微弱和罕见的TNF-α释放的刺激也证明是可以检测到的。努力筛选的文库代表了非传统化合物构成的独特的化合物集合[(a)Whitby等人,Acc.Chem.Res.2012,45:1698–1709；和(b)Boger等人,Angew.Chem.Int.版本2003,42:4138–4176]，其经设计以靶向蛋白质-蛋白质 [(a)Shaginian等人,J.Am.Chem.Soc.2009,131:5564–5572；和(b) Whitby等人,J.Am.Chem.Soc.2011,133:10184–10194]，或蛋白质 -DNA相互作用[Stover等人,J.Am.Chem.Soc.2009,131:3342–3348] 以及主要的酶类[Otrubova等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.2014, 24:3807–3813]。
对部分分化的人THP-1细胞中的TNF-α产生的文库筛选导致发现几类化合物，其中最有效的化合物在本文中报道。这里描述的先导化合物来自经设计以促进细胞表面受体二聚化的化合物文库(约 6,000种化合物)的1000个成员的子集，C2对称化合物的每一半单体经设计以结合每种蛋白质受体单体[Goldberg等人,J.Am.Chem.Soc. 2002,124:544–555]。
出现先导物的子库被制备为反式吡咯烷-3,4-二甲酸核心模板上的10种化合物的100种混合物[Whitby等人,J.Am.Chem.Soc.2011, 133:10184–10194]，由10种定义的R1和另外10种定义的R2取代基和10种连接基(由X表示，图1A和1B)的混合物的所有个体组合所构成[Goldberg等人,J.Am.Chem.Soc.2002,124:544–555]。该化合物被评估为非对映异构体的混合物，其使用在原始文库中发现的外消旋反式-吡咯烷-3,4-二甲酸和外消旋反式-2-苯基环丙基胺制备。该子库的化合物的一般结构式如下式X所示。
Figure BDA0001927318020000211
对来自分化的人THP-1细胞的刺激的TNF-α释放的筛选结果是显著的，提供了10种化合物的集合，其每当在测试的集合中R2亚单位是4-氟苯乙胺(残基4，板孔X4)或反式-2-苯基环丙基胺(残基9，板孔X9)时都显示出活性，与R1的结构无关。如Goldberg等人,J.Am.Chem.Soc.2002,124:544–555中所述的，具有不同核心(例如，亚氨基二乙酸、异吲哚啉-4,5-二甲酸)、另外的R1和R2取代基、备选的连接基团群体和甚至更高等级呈现(例如，三聚体，四聚体)的类似文库未能在筛选中提供活性。
甚至更值得注意的事实是，在所述先导物自其中出现的子库中存在大量密切相关的无活性的R1和R2取代基，包括苯乙胺、(4-甲氧基苯)乙胺、(4-羟基苯)乙胺、(3-甲氧基苯)乙胺、苄胺和一系列取代的衍生物。10种X、R1和R2取代基的集合的这些组合示于下表中。
Figure BDA0001927318020000221
因此，根据最初的筛选结果，还确定即使与该结构的小偏差也导致检测不到活性，提供直接来自筛选的第一级结构-活性关系(SAR) 研究。不仅检测到的活性是强效和结构特异性的，而且每次在所述化合物中出现残基4或残基9R2取代基时显著的重复观察到的与R1的身份无关的活性，进一步表明该活性不是未识别的赝象的结果。
Diprovocim-1
在筛选中观察到的两个活性孔(板39G4和板39G9)，其含有残基 4或残基9R2取代基，将其以它们各自的化合物制备并重新测试，仅鉴定了两个活性连接基，其中苯-1,4-二甲酸连接基是迄今为止最有效的。这在图2A至2C中示出，图2A至2C具有在板39G9中发现的各个化合物的测试的结果。
观察到结构特异性活性，甚至在空间上或结构上与苯-1,4-二甲酸相关的二羧酸连接基也是无活性的(例如，C5对比C4或C9和C10)。为简单起见，与含有R2残基4[(4-氟苯)乙胺]取代基的板39G4同时进行了类似的研究，其需要鉴定在孔中的活性化合物及其优化，在对板39G9进行的按时间顺序工作的讨论之后被单独地详述。
因为R2侧链是活性的关键，所以制备了一组含有鉴定的连接基 (苯-1,4-二甲酸)的五种化合物，以系统地确定存在于板39G9中的化合物中的相对于苯乙胺(R1)侧链的2-苯基环丙基胺(R2)侧链的存在和数量的重要性(图3)。该化合物制备自三种吡咯烷-3,4-二甲酰胺5-7 以及
Figure BDA0001927318020000231
与苯-1,4-二甲酸(2当量PyBrOP,i-Pr2NEt,DMF,23℃)的同时(8、10 和12)偶联
Figure BDA0001927318020000241
或依次(9和11)偶联，
Figure BDA0001927318020000242
所述依次偶联以苯-1,4-二甲酸的单甲酯开始，伴随甲酯的中间水解(4 当量LiOH,THF:MeOH:H2O 4:1:1,23℃)。
他们的评估结果令人震惊。虽然不含或含有一个2-苯基环丙基胺取代基的化合物是无活性的(8和9)，但每个增加的2-苯基环丙基胺取代基(两个(如文库中发现的)、三个和四个)逐步地(每个3-5倍)增加了效力(伴随残基9侧链的数量的效力：0和1<2<3<4)。含有三个和四个2-苯基环丙基胺取代基的化合物(11和12)比从文库中出现的原始先导物10(EC50＝80nM)更有效，含有四个这样的取代基的化合物 12特别有效(EC50＝10nM)并且与LPS同样有效。
同样显著地，尽管从筛选文库中出现的先导物在刺激小鼠巨噬细胞释放TNF-α中无活性，表明物种选择性活性，但化合物12在这方面具有活性，尽管效力较低(EC50＝100nM)。虽然在鼠系统中缺乏活性不会不利于它们对于人类研究的推进，但用12和随后的相关类似物在小鼠巨噬细胞中的活性观察结果对于在小鼠模型中进行药理学体内研究特别有用。
12的这种活性甚至更令人印象深刻，因为它是用原始文库中发现的外消旋反式吡咯烷-3,4-二甲酸和外消旋反式-2-苯基环丙基胺制备的。因此，虽然吡咯烷核心和侧链取代基中的各反式立体化学关系是固定的，但12仍然是使用外消旋物质产生的所有可能的21种非对映异构体和对映体的混合物。
尽管这看起来可能令人生畏，这种复杂的非对映异构体混合物中活性的拆解令人惊讶地证明是直截了当的。2-苯基环丙基胺的每种对映体(1S,2R和1R,2S)是可商购的[Bridgewater,NJ 08807]，并且报道的拆分[Bao等人,美国专利6,489,354B1]被用于获得N-Boc-吡咯烷 -3,4-二甲酸的这两种对映体(S,S和R,R)。将这些用于制备四种吡咯烷 /侧链亚单位15-18，
Figure BDA0001927318020000251
其代表被2-苯基环丙基胺的每种对映体(在两个位点各自的相同对映体)独立地取代的N-Boc-吡咯烷-3,4-二甲酸的每种对映体的所有组合 (方案1，下文)。
最初，为简单起见，未检测其中吡咯烷核心上的两个取代位点含有2-苯基环丙基胺的两种不同对映体(1S,2R和1R,2S)的组合。然后将四种取代的吡咯烷核心单体15-18进行N-Boc去保护(4N HCl，二噁烷,23℃,2小时)，并同时或依次与苯-1,4-二甲酸偶联以提供含有各对映体地定义的单体(10种化合物)的每种和所有组合的连接二聚体。与特定的受体相互作用一致，用完全的剂量-反应曲线进行的它们的评估的结果非常显著且清晰。
仅在含有(S,S)-吡咯烷-3,4-二甲酸核心的化合物中并且仅在存在 (1S,2R)-2-苯基-环丙基胺侧链时观察到活性。事实上，活性随着(1S,2R)-对比(1R,2S)-2-苯基环丙基胺取代基的数量增加而以与在侧链系列8-12中观察到的方式大致相同的方式增加。这进一步表明，在还含有活性1S,2R对映体的吡咯烷单体中掺入无活性的(1R,2S)-2- 苯基环丙基胺对映体会是徒然的(剩余的11种化合物)。此外，这种活性跨越范围很广，除了其中一种化合物外，所有化合物的效力都低于全部外消旋体或完全无效(方案1，下文)。
如本文所用，短语“全部外消旋体”是指反式立体异构体内的所有可能的非对映异构体和对映体。因此侧链可具有对映体关系的组合。
化合物3(diprovocim-1)，
Figure BDA0001927318020000261
由吡咯烷核心二羧酸的单一对映体(S,S)和2-苯基环丙基胺的单一对映体(1S,2R)构成，被证明是迄今最具活性的非对映异构体，在刺激 TNF-α从人分化的THP-1细胞中释放方面表现出惊人的效力 (EC50＝100pM)。该活性被证明是全部外消旋体12(EC50＝10nM)的100 倍更有效，在定量上相当于其负责在由21种非对映异构体构成的原始的全部外消旋体混合物中观察到的基本上所有活性。它(3)也被发现效力为任何其他非对映异构体的大约30倍以上；并且该组中没有其他非对映异构体超过全部外消旋体混合物的效力。此外， diprovocim-1(3)是有效的(EC50＝1nM)，有效刺激小鼠巨噬细胞释放 TNF-α。
此外，(3)被证明比全部外消旋体12更有效，而所有其他非对映异构体活性低得多，并且没有其他接近或匹配全部外消旋体的活性 (方案1)。在刺激从分化的人THP-1细胞中释放TNF-α的测定中进行的直接并排比较中，diprovocim-1(3)被证明同样有效，但效力高于 Pam3CSK4(1,EC50＝0.91nM)。
因此，制备了全部外消旋体12的十种非对映异构体，鉴定了活性组分。EC50值来源于通过3(diprovocim-1)和19-27进行的来自分化的人THP-1细胞和小鼠巨噬细胞的TNF-α的刺激释放的剂量-反应曲线，EC50值连同所用的各种化合物对显示在下面的方案1中。
方案1
Figure BDA0001927318020000271
Figure BDA0001927318020000281
a来自人THP-1细胞的TNF-α释放的EC50。
b来自小鼠巨噬细胞的TNF-α释放的EC50。
Figure BDA0001927318020000282
还制备了化合物8作为来自15的单一的全部(S)-对映体，并且发现其与全部外消旋体混合物一样无活性(EC50＞5μM)，不能刺激从部分分化的THP-1细胞或小鼠巨噬细胞释放TNF-α。同样显著地，发现其不能充当拮抗剂，当以5μM共同施用时，抑制diprovocim-1(3)的活性。这表明8以及假定相关的化合物缺乏激动剂活性是由于与靶 TLR的无效结合，并不是由于有效结合而未能诱导活性二聚体受体构象。
为了明确确定每个(1S，2R)-2-苯基环丙基-胺酰胺取代基的存在的重要性并排除存在备选取代基的抑制作用，diprovocim-1(3)的完整系列的缺失类似物被制备，依次去除了每个侧链。使用(3S,4S)-吡咯烷 -3,4-二甲酰胺15、(3S)-吡咯烷-3-甲酰胺28[从商购的(3S)-吡咯烷-3- 甲酸(S)-β-脯氨酸三步制备]、脯氨酸和二甲胺(未显示)，依次进行酰胺偶联，其以苯-1,4-二甲酸的单甲酯开始，伴随甲酯的中间水解，在三个或更少的步骤中提供了每种缺失类似物29-33。
Figure BDA0001927318020000291
在这些化合物中，只有29(含有四个(1S,2R)-2-苯基环丙基胺甲酰胺取代基中的三个)在小鼠巨噬细胞测定中显示出显著的活性 (EC50＝200nM，THP-1)，并且发现它活性为diprovocim-1(3)的二千分之一。含有具有两个侧链的两个完整单体之一的化合物30表现出少量活性(EC50＝2μM，THP-1)，在小鼠巨噬细胞中的活性甚至为29的十分之一，为diprovocim-1的二万分之一。所有其他(31-33)即使在 5μM下测定也是无活性的。
类似地，化合物34构成吡咯烷的无环类似物，仅缺乏吡咯烷 C3-C4碳-碳键并除去了四个手性中心，由商购的N-Boc-亚氨基二丙酸和苯-1,4-二甲酸在三步中制备。当以最大5μM的浓度测试时，发现它在小鼠巨噬细胞中也是无活性的。
因此，各个和每个(1S,2R)-2-苯基环丙基胺酰胺取代基的存在和立体化学、两个完整的(S,S)-吡咯烷-3,4-二甲酸核心的存在和立体化学以及苯-1,4-二甲酸连接基对于diprovocim-1(3)的表达的活性都是必需的和特异的。
重新检查在原始文库中发现的化合物连接基，但现在仅招用取代的吡咯烷-3,4-二甲酰胺(15)的活性对映体，从而产生带有四个 (1S,2R)-2-苯基环丙基胺酰胺取代基的化合物，代替仅含有两个这样的外消旋取代基的全部外消旋体。各自在单一偶联步骤中由15和连接基二羧酸制备(2当量PyBrOP,i-Pr2NEt,DMF,23℃,18小时)。
并不奇怪的是，苯-1,4-二甲酸仍然是该系列中最有效的连接基。下面的表1显示了反应顺序和EC50值，EC50值来源于通过3 (diprovocim-1)和化合物35-43进行的从分化的人THP-1细胞或小鼠巨噬细胞的TNF-α的刺激释放的剂量-反应曲线。
表1
Figure BDA0001927318020000311
a来自人THP-1细胞的TNF-α释放的EC50。
b来自小鼠巨噬细胞的TNF-α释放的EC50。
在这些比较中值得注意的是对于这一种连接基活性仍然是多么特异地，所有其他的甚至密切相关的连接基的活性为一千分之一以下，大多数甚至在>50,000倍的浓度下显示无活性。显然，连接基对3的活性的贡献与取代的吡咯烷-3，4-二甲酰胺单体的贡献同样特异和必需。
在这些研究的延续中，检查了一组在结构上与活性苯-1，4-二甲酸接近的扩展的二羧酸连接基，试图更仔细地确定其结构要求，并可能进一步改善diprovocim-1惊人的活性。这部分地受到用原始连接基组中联苯-4，4’-二甲酸连接基(EC50＝90nM)观察到的弱活性的启发。
检查的初始系列将两个羧酸置于苯基或萘基芳族环上，但所处的空间位置相比于diprovocim-1中所见的略微改变(表2)。各自在单一偶联步骤中由15和连接基二羧酸制备(2当量PyBrOP，i-Pr2NEt，DMF， 23℃，18小时)。对于通过44-48进行的从分化的人THP-1细胞和小鼠巨噬细胞刺激的TNF-α释放，在该小系列中没有化合物显示出接近于diprovocim-1的活性的活性。除了44以外全部都是无活性的， 44的活性为diprovocim-1的十分之一不到，尽管其效力明显优于具有联苯-4，4’-二甲酸连接基的化合物的效力。
表2
Figure BDA0001927318020000321
a来自人THP-1细胞的TNF-α释放的EC50。
b来自小鼠巨噬细胞的TNF-α释放的EC50。
随着进一步认识到在连接基结构中二羧酸的精确间隔的重要性，进行了对备选连接基的更有针对性的检查。因此，检查的连接基包括苯环的电子等排替代物(49)、可能改变物理性质(例如溶解度)或限定相邻吡咯烷-3，4-二甲酰胺取向的六元杂环二羧酸(50，51)、可能灵活地取代苯的无环不饱和的二羧酸连接基(52)、引入官能团用于与候选抗原缀合的一系列进一步取代的苯-1,4-二甲酸(53-58)以及用于探索二取代的那些(59-63)。后一系列特别令人关注，因为取代基通过将空间相互作用去稳定或稳定氢键而对相邻吡咯烷-3,4-二甲酰胺采取的优选的构象取向具有显著影响。各自通过15的酸催化的N-Boc去保护(4N HCl，二噁烷，23℃)和与连接基二甲酸的单一偶联步骤(2当量 PyBrOP,i-Pr2NEt,DMF,23℃,18小时)而制备。
显著地且与许多变化一样温和，所有这些检查的化合物都不如 diprovocim-1强效，再次突出了连接基促成生物活性的表达的独特作用。虽然结论所基于的化合物的数量少，但随着(相邻)取代基的大小增加，效力似乎平稳地降低(例如，效力：3>53＝55>58>54>57 和3>60>61>62>63)。虽然对于它们的应用不是必需的，但该系列中的化合物(53和55)仍然表现出优异的效力，其足以可靠地确定连接基核心上的官能化位点可用于在准许时与候选抗原缀合。这些结果如表3所示。
表3
Figure BDA0001927318020000341
Figure BDA0001927318020000351
a来自人THP-1细胞的TNF-α释放的IC50。
b来自小鼠巨噬细胞的TNF-α释放的IC50。
Diprovocim-2
使用活性板39G4孔进行类似但更直接的系列研究。与导向 diprovocim-1的结果相似，对孔混合物中的10种单独化合物的检查鉴定了活性连接基(苯-1，4-二甲酸，未显示)。因为R2侧链是独立于 R1结构的在原始筛选中看到的重复活性的观察结果的关键，而，所以用活性苯-1，4-二甲酸连接基制备了一组五种化合物，以确定在板 39G9孔中的化合物中存在的相对于苯乙胺(R1)侧链的4-氟苯乙胺(R2) 侧链的存在和数量的重要性(表4)。
表4
Figure BDA0001927318020000361
五种化合物由三种吡咯烷-3,4-二甲酰胺6、64和65，同时(8、67 和69)或依次(66和68)分别与苯-1,4-二甲酸或其单甲酯偶联而制备。他们的评估结果清楚。随着添加各个和每个4-氟苯乙胺侧链，活性增强(约3-5倍)，69(含有4个)是该组中最有效的(EC50＝100nM，外消旋体)化合物。
因为4-氟苯乙酰胺上的4-氟取代基独特地赋予化合物活性(苯乙酰胺无活性)，所以检查了一系列备选取代基，其中4-氟基团被移至 3-和2-位，保守地用其他卤素(Cl和Br)代替，用一系列小的和温和的给电子或吸电子基团(包括能够作为氢键供体或受体的一些基团)代替，用大的苯基代替，或掺入2-萘基芳族环(表5)。
表5
Figure BDA0001927318020000371
通过偶联外消旋N-Boc反式-吡咯烷-3,4-二甲酸与芳基乙胺(2当量，EDCI，1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAt)，2,6-二甲基吡啶，DMF， 23℃，16小时)，然后进行N-Boc去保护(4N HCl，二噁烷23℃，3 小时)，随后与苯-1,4-二甲酸(2当量PyBrOP,i-Pr2NEt,DMF,23℃,18–24小时)偶联，制备作为外消旋体的每种化合物。
值得注意和令人震惊的是，除了84(EC50＝1μM，活性为十分之一不到)外所有这些都在最高5μM浓度下在刺激从人分化的THP-1细胞释放TNF-α方面无活性，84掺入了将氟取代基从p-位移动到m-位(3- 氟苯乙酰胺对比4-氟苯乙酰胺)的最保守的变化。显然氟取代基和4- 氟苯乙酰胺侧链是必需的，并且对于所述化合物的生物学性质的表达具有显著的特异性。
化合物69是三种化合物(两种对映体和一种内消旋化合物)的混合物，使得确定混合物中的活性对映体变得直接。N-Boc-吡咯烷-3,4- 二甲酸[Bao等人,美国专利6,489,354B1]的两种对映体(S,S和R,R) 中的每一种与4-氟苯乙胺偶联(EDCI,HOAt,2,6-二甲基吡啶,23℃, 16小时)以制备两种可能的对映体吡咯烷-3,4-二甲酰胺(S,S)-和 (R,R)-65(表6)。将这些独立但同时与苯-1,4-二甲酸偶联(2当量 PyBrOP,i-Pr2NEt,DMF,23℃,18–24小时)，得到两种对映体4和98，其分别具有全部S或全部R构型。类似地，(S,S)-和(R,R)-65与苯-1,4- 二甲酸的单甲酯的依次偶联(PyBrOP,i-Pr2NEt,DMF,23℃)以及甲酯的中间水解(LiOH,THF/MeOH/H2O,23℃)得到内消旋异构体99。
证明全部S对映体4(EC50＝50nM，diprovocim-2)效力为全部外消旋体(EC50＝150nM)的3倍，而其全部R对映体98通过比较为无活性的(EC50＝>5μM，效力为一百分之一不到)。有趣的是，含有S,S-和R,R- 吡咯烷-3,4-二甲酰胺的该第三种内消旋异构体99(EC50＝70nM)也具有活性，几乎与全部S对映体的效力相匹配。尽管在人THP-1细胞中具有这种有效活性，但该系列中没有化合物刺激从小鼠巨噬细胞释放 TNF-α。
表6
Figure BDA0001927318020000391
使用对映体纯(S,S)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺65，原始文库中的二羧酸连接基以及用diprovocim-1证明最引人关注的那些的亚组现在用含有所有四个4-氟苯乙酰胺侧链的化合物重新检查，如下表7中所示。在对映体纯(S,S)-65的酸催化去保护之后，在连接基二羧酸的单个偶联步骤(2当量PyBrOP,i-Pr2NEt,DMF,23℃,18–24小时)中制备每一种化合物。在这个系列中，没有一种备选连接基提供的化合物在人 THP-1细胞或小鼠巨噬细胞中有活性，只有苯酚110，就像与 diprovocim-1相比的53的行为一样，几乎与diprovocim-2活性相匹配。这些化合物(100-110)的活性如下表7所示。
表7
Figure BDA0001927318020000401
Figure BDA0001927318020000411
a来自人THP-1细胞的TNF-α释放的EC50。
b来自小鼠巨噬细胞的TNF-α释放的EC50。
diprovocim-1和diprovocim-2的杂合结构和其他关键类似物
鉴于仅两种所检查的侧链显示的独特且明显特异性的相互作用及其对3和4表达的生物学特性的重要性，研究了含有所述两个侧链的组合的化合物(113)(图4)。在进行这些研究中，还制备并检查了另外一小系列的关键diprovocim-1和diprovocim-2类似物(111和112)。
这些研究首先用外消旋体6和65以及全部外消旋体非对映异构体混合物7进行，以组成111-113。这些化合物的制备是通过65或7 的N-Boc去保护，并将其与苯-1,4-二甲酸的单甲酯偶联，然后进行甲酯水解，并与衍生自6的游离胺盐酸盐偶联，并在7的情况下也与衍生自65的胺偶联而进行的。
得到的化合物(图5)显示出一致的趋势，其中用4-氟苯乙胺侧链替代苯乙胺侧链改善了活性，并且其中用2-苯基环丙基胺替代4-氟苯乙胺侧链进一步改善了活性。因此，可以互换地使用所述侧链，对生物学效力的影响是可预测的(反式-2-苯基环丙基胺>4-氟苯乙胺)，这表明它们在其靶标以类似方式在影响活性的相同位点结合。有趣的是，结构111和112(其中两个2-苯基环丙基胺或4-氟苯乙胺侧链在相同的吡咯烷核心上)的活性被证明比化合物10和67(其中所述两个侧链在相对的吡咯烷核心上)更有效。
将最有效的这些杂合物(113)作为单一对映体制备，具有衍生自 15和(S,S)-或(R,R)-65的鉴定的活性对映体(表8)。评估它们刺激从分化的人THP-1细胞和小鼠巨噬细胞释放TNF-α，确定了114 (diprovocim-4)和115(diprovocim-5)的有效活性。
表8
Figure BDA0001927318020000421
这些研究确立，具有两个(S,S)-吡咯烷核心的杂合结构114 (diprovocim-4)是在人THP-1细胞和小鼠巨噬细胞中都有活性的有效的TLR1/TLR2激动剂。因此，114显示类似于diprovocim-1那些的性质。然而，它比diprovocim-1效力更低，并且比diprovocim-2更有效，显示出效力介于它衍生自的化合物之间。含有一个衍生自(R,R)-65 的亚单位的类似杂合结构115(diprovocim-5)在人THP-1细胞中的活性为五分之一，在小鼠巨噬细胞中无活性，反映了较低的效力和较大的物种区别。
Diprovocim-3
另外，检查了将在diprovocim-2中发现的氟基团掺入 diprovocim-1的侧链取代基中。因此，将(1S,2R)-2-(4-氟苯基)-环丙基胺[Benelkebir等人,Bioorg.Med.Chem.2011,19:3709制备了 (1R,2S)-116对映体，而这里使用相反的对映体(1S,2R)-116)(116,2当量)与(S,S)-14偶联(EDCI,HOAt,2,6-二甲基吡啶,DMF,23℃,16小时)，接着进行117的Boc去保护(4N HCl,二噁烷,23℃,3小时)，并将所得胺与苯-1,4-二甲酸偶联(PyBrOP,i-Pr2NEt,DMF,23℃, 18–24小时)，提供118(diprovocim-3)，方案2，如下。
方案2
Figure BDA0001927318020000431
对刺激的从分化的人THP-1细胞(EC50＝130pM)和小鼠巨噬细胞 (EC50＝1.2nM)释放TNF-α的评估显示118的活性与diprovocim-1(3) 的活性无法区分，显示出特别有效的活性。因此，加入对位氟基团没有进一步增强3的效力，但其存在也没有破坏3的活性。
观察该结果的另一种方式是将四个刚化环丙烷引入diprovocim-2 ()中使活性提高至400倍。此外，小鼠巨噬细胞中的活性表明氟原子在鼠系统中良好耐受。
具有掺入的在内源性TLR2/TLR1和TLR2/TLR6配体中发现的脂质侧链的杂合结构
在TLR中，TLR2需要与TLR1或TLR6进行异二聚化以便激活，细菌三酰化脂蛋白是最广泛认可的激活TLR1/TLR2的激动剂[例如 Pam3CSK4；见,Metzgeret等人,Int.J.PeptideProtein Res.1991,37, 46；Bessleret al.,J.Immunol.1985,135,1900；Deres等人,Nature 1989, 342,561；Alexopoulou等人,J.Immunol.2002,169,10；Jin等人,Cell 2007,130,1071；综述:Jin等人,Curr.Opin.Immunol.2008,20, 414–419；Salunke等人,J.Med.Chem.2013,56,5885-5900；Salunke等人,J.Med.Chem.2012,55,3353–3363；Agnihotri等人,J.Med.Chem. 2011,54,8148]，细菌二酰化脂多肽刺激TLR2/TLR6[例如MALP-2；见Muhlradt等人,J.Exp.Med.1997,185,1951；Buwitt-Beckmann等人,J.Biol.Chem.2006,281,9049]。
TLR1/TLR2优先结合三酰基脂肽并仅弱结合二酰基脂肽，而 TLR2/TLR6仅结合二酰基脂肽。已经解析了与hTLR1/TLR2结合的 Pam3CSK4(三条脂质链)和与mTRL2/TLR6结合的Pam2CSK4(两条脂质链)的晶体结构[Jin等人,Cell 2007,130,1071–1082；Kang等人,Immunity 2009,31,873–884]。
这些研究表明，Pam3CSK4的酰胺脂质链插入TLR1的疏水通道，而剩余的两个酯脂质链结合在TLR2的疏水通道中，形成并填充在TLR1/TLR2异二聚体界面跨越两种蛋白质的长的连续疏水口袋。相比之下，Pam2CSK4与类似地结合于TLR2的两个酯脂质链结合，但不含或不需要与TLR6的酰胺脂质结合以促进和稳定活性 TLR2/TLR6二聚体形成。事实上，TLR6缺乏容纳三酰基脂肽和蛋白质的第三酰胺脂质链所需的脂质结合口袋。
在diprovocim中，酰胺侧链可能起到脂质链的作用，延伸到跨越 TLR1/TLR2的疏水口袋中。区别在于对称的diprovocim包含四个而不是三个这样的基团。因此，为了研究备选的疏水取代基，我们检查了用一系列脂质酰胺替代物代替反式-2-苯基-环丙基胺和4-氟苯乙胺衍生的酰胺，研究了含有三个以及四个侧链的杂合结构。检查的第一个系列是含有三个侧链、将diprovocim-1的一半与单个脂质侧链酰胺连接的那些，所述脂质侧链酰胺直接连接到苯-1，4-二甲酸连接基 (121-124)或作为酰胺取代基连接到(R)-或(S)-吡咯烷-3-甲酸(125-132)。通过将120与相应的胺和(R)-或(S)-吡咯烷-3-甲酰胺偶联(EDCI，HOAt，2，6-二甲基吡啶，DMF-CH2Cl2，25℃，3-4小时)来有效地制备它们。对它们刺激从分化的人THP-1细胞和小鼠巨噬细胞中释放 TNF-α的评估显示，最简单的系列121-124中没有化合物显示出激动剂活性。
Figure BDA0001927318020000451
a来自人THP-1细胞的TNF-α释放的EC50。
b来自小鼠巨噬细胞的TNF-α释放的EC50。
相比之下，其中脂质酰胺取代基通过吡咯烷-3-甲酰胺连接的系列刺激了人THP-1细胞和小鼠巨噬细胞释放TNF-α。与diprovocim-1 一样，每种化合物在人THP-1细胞中比在小鼠巨噬细胞中更有效(>10 倍，通常约100倍)。
无论脂质链通过(R)-或(S)-吡咯烷-3-甲酰胺连接，观察到几乎没有区别。观察了对脂质链长度的偏好，中等长度显示出最大效力 (126/130>127/131)，并且检查的最长链(125/129)似乎在小鼠相对于人细胞中显示出独特的有害作用，可能代表了信号传导受体中的物种区别。该系列中最好的效力在人THP-1细胞中为diprovocim-1的二十分之一以下，在小鼠巨噬细胞中效力为二百分之一不到，其性质与 diprovocim-3相当，比diprovocim-2更有效。
用含有两个这样的脂质侧链的杂合结构进行了甚至更重大的组的观察。检查的系列是含有四个侧链、将diprovocim-1的一半与衍生自(S,S)-吡咯烷-3,4-二甲酸的对称二酰胺连接、带有两个脂质侧链酰胺的那些。通过将(S,S)-14与相应的烷基胺偶联(EDCI,HOAt,2,6-二甲基吡啶,DMF–CH2Cl2,25℃)单步制备(S,S)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺，然后除去N-Boc(4N HCl,二噁烷,25℃)，并将所得胺与120偶联 (EDCI,HOAt,2,6-二甲基吡啶,DMF–CH2Cl2,25℃,3–4小时)，提供了一系列含有两个脂质侧链的杂合结构133-139。
由于在初始较小组中观察到的活性，制备并检查了一组全面的脂质侧链长度。含有中等脂质链长度(6-10个碳)的该系列中的三种化合物(136-138)表现出显著地有效和强力的活性(EC50＝280-170pM， THP-1细胞)，比Pam3CSK4更有效并接近diprovocim-1的活性。
具有较长脂质链长度的化合物尽管仍然非常有效，显示逐渐降低的有效活性(135>134>133)，具有较短链长的化合物(139)显著更低效。人与小鼠细胞TNF-α释放的刺激之间效力的差异随着链长缩短而平滑且逐渐地减少，138在两种细胞系中表现出最有效的活性，并且差异为20倍。138含有密切接近于diprovocim-1和diprovocim-2侧链存在的碳原子的长度和数量的两个C6脂质侧链，其在人THP-1细胞和小鼠巨噬细胞中的行为(EC50分别为180pM和4nM)几乎匹配 diprovocim-1的行为，效力仅比diprovocim-1低至二分之一和四分之一。由于这种6个碳的脂质链长度、其接近diprovocim-1的活性及其偶然的按时间顺序的发现，它是我们选择的称为diprovocim-6的化合物(138)。
Figure BDA0001927318020000471
a来自人THP-1细胞的TNF-α释放的EC50。
b来自小鼠巨噬细胞的TNF-α释放的EC50。
制备并检查了diprovocim的一系列类似物，其中所有四个侧链都被一组全面的脂质侧链酰胺代替。含有两个酰胺脂质侧链(16-4个碳) 的相同(S，S)-吡咯烷-3，4-二甲酰胺在一步中与苯-1，4-二甲酸(C5)偶联 (EDCI，HOAt，2，6-二甲基吡啶，DMF-CH2Cl2，25℃，4-5小时)，得到 140-146。
然而，证明该系列中没有化合物能够刺激人THP-1细胞或小鼠巨噬细胞释放TNF-α(EC50＞5μM)。值得注意的是，这一系列化合物也显示出特别差的溶解性，并且不能排除这造成在基于细胞的功能测定中观察到的活性的缺乏。
Figure BDA0001927318020000481
a来自人THP-1细胞的TNF-α释放的EC50。
b来自小鼠巨噬细胞的TNF-α释放的EC50。
官能化衍生物
预期抗原肽的共价连接，并认识到diprovocim与TLR1/TLR2结合的可能方式，即，以类似于Pam3CSK4方式将其侧链芳基取代基延伸到相邻二聚化TLR1和TLR2上的脂质结合口袋中[(a)Jin等人， Cell 2007，130：1071；和综述：(b)Jin等人，Curr.Opin.Immunol.2008， 20：414-419]，下面检查了diprovocim-1的一小系列的其他官能化衍生物。这些是通过酰化或烷基化如下所示化合物中那样的与中心连接基的苯环结合的酚或胺，由53或55制备。在小鼠巨噬细胞中的早期筛选未能检测到这类化合物，表明在化合物文库中发现的该类中的初始成员对待检测的mTLR没有足够的活性。优化的成员在小鼠和人细胞中是有活性的，但仍然对人靶标和在人细胞的功能测定中显著更有效。
Figure BDA0001927318020000491
a来自人THP-1细胞的TNF-α释放的EC50。
b来自小鼠巨噬细胞的TNF-α释放的EC50。
在ELISA测定中针对从人PMA分化的THP-1细胞的刺激的 TNF-α释放确证中标物，该测定用于确立剂量-反应曲线和测量EC50值。
使用Z-官能化的diprovocim-1的进一步结果如下所示。说明性化合物在下表中显示为式V化合物的Z基团部分。波浪线表示Z-基团与diprovocim分子的其余部分结合的位置。
Figure BDA0001927318020000501
Figure BDA0001927318020000511
显示Diprovocim-1依赖于TLR1/TLR2，通过异二聚化及其下游信号传导促进活化。发现其独立于TLR6，表明它不通过促进 TLR2/TLR6异二聚化起作用，并且发现其独立于所有其他TLR。在这些研究中，还显示其依赖于TLR1/TLR2信号传导分子MyD88和 IRAK4/TRIF。与Pam3CSK4和MALP-2一样，它激活THP-1细胞和小鼠巨噬细胞中的NF-κβ、JNK和p38信号传导途径，并且它可在体外诱导B16-F10细胞中IL-6的产生。它以0.25–5mg/kg(i.m.)在小鼠体内表现出有效的佐剂活性，其依赖于TLR2，在TLR2KO小鼠中无效。
一般程序
除非另有说明，否则所有商业试剂无需进一步纯化即使用。除非另有说明，否则所有反应均在烘箱干燥(200℃)的玻璃器皿中和在无水Ar的惰性气氛下进行。用硅胶60进行柱色谱。在EMD Millipore 硅胶(250μm)F254玻璃板上进行TLC，并通过UV显现斑点。在EMDMillipore硅胶(250和500μm)F254玻璃板上进行PTLC。
在室温(23℃)下使用钠D线(λ＝589nm)在Rudolph Research AnalyticalAutopol III自动旋光仪上测定旋光度，并报告如下：[α]D 23，浓度(c＝g/100mL)和溶剂。
在Bruker 500MHz和600MHz光谱仪上记录1H NMR。化学位移以相对于残留CHCl3(δ7.26，对于1H)的内标的ppm报告。质子化学数据报告如下：化学位移(δ)，多重性(ovlp＝重叠，br＝宽，s＝单重态， d＝双重态，t＝三重态，q＝四重态，m＝多重态)，偶联常数和积分。
使用Agilent ESI-L低浓度调节混合物作为内部高分辨率校准标准，在AgilentESI-TOF/MS上获得高分辨率质谱。在Agilent 1100 LC/MS仪器上使用
Figure BDA0001927318020000521
SB-C8柱(3.5mm,4.6mm×50mm,流速为0.75mL/分钟，检测波长为220和254nm)以及10-98％乙腈/水/0.1％甲酸梯度，测定每种测试化合物的纯度(>95％)。
胺与N-Boc-吡咯烷-3,4-二甲酸偶联的一般程序
将N-Boc-吡咯烷-3,4-二甲酸(0.19或3.00mmol)、伯胺(0.42或6.15 mmol,2.05–2.2当量)和1-羟基-7-氮杂苯并-三唑(HOAt；0.48或6.60 mmol,2.20–2.50当量)在N2气氛下溶解于无水DMF(2或15mL)。缓慢添加2,6-二甲基吡啶(0.96或15.0mmol,5.00当量)。试剂溶解后 (约15分钟)，一次性添加EDCI·HCl(7.50mmol,2.50当量)，将反应混合物搅拌18小时，然后将其倒入1N HCl水溶液(150mL)和EtOAc (100mL)。水相用EtOAc(2×75mL)萃取，合并的有机相依次用1N HCl水溶液(75mL)、饱和NaHCO3水溶液(75mL)和饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。许多化合物不经纯化即用于下一步，但在说明的情况下，通过快速柱色谱(SiO2,50％ EtOAc/己烷)纯化，得到二酰胺产物(67–75％)。
N-Boc-吡咯烷去保护的一般程序
将吡咯烷-1-甲酸叔丁酯衍生物(2.00mmol)在室温下悬浮于无水 THF(2mL)。将4NHCl(8mL,4.0M二噁烷溶液)滴加至剧烈搅拌的反应溶液。在室温下搅拌3小时(在此期间一些产物通常由反应混合物沉淀出来)后，通过N2流在16小时内除去溶剂。将残留固体悬浮于无水THF，在真空中再浓缩(3×5mL)以确保完全除去二噁烷。该过程用无水Et2O(3×5mL)重复，提供盐酸盐(87–99％)，为无定形白色固体。
连接二酸偶联的一般程序
将吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(0.1或1.10mmol,2.20当量)和连接二酸(0.045或0.50mmol,1.00当量)在23℃溶解于无水DMF(0.5 或6mL)。添加i-Pr2NEt(0.23或1.50mmol,3.00–5.00当量)，接着在 5分钟后添加溴三吡咯烷-1-基
Figure BDA0001927318020000532
六氟磷酸盐(PyBrOP；0.10或1.00 mmol,2.00–2.20当量)。18–24小时后，将反应混合物用EtOAc(10 或150mL)稀释，用0.5N HCl水溶液(2×10或100mL)洗涤。水相用EtOAc(1×10或75mL)萃取。合并的有机相用0.5N HCl水溶液(2 ×10mL)、饱和NaHCO3水溶液(25或75mL)和饱和NaCl水溶液(25 或50mL)洗涤。有机相经Na2SO4干燥，倾析并浓缩以提供偶联产物，该产物被少量(约10％)的三(吡咯烷-1-基)氧化膦污染。污染物通过用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc(3×5mL)研磨除去，倾析液相，以提供所需的双吡咯烷二酰胺(65–97％)。必要时，采用快速柱色谱(SiO2,5–8％MeOH/CH2Cl2)纯化产物。
Diprovocim-1的合成
Figure BDA0001927318020000531
S-1:(3S,4S)-4-((S)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)吡咯烷-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯
将(3S,4S)-1-苄基-4-((S)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)吡咯烷-3- 甲酸乙酯[根据美国专利号6,489,354B1制备为单一立体异构体](3.43g，7.86mmol)和Boc2O(1.80g,8.25mmol,1.05当量)在室温下溶于EtOH(50mL)。加入Pd(OH)2/C(500mg)并将反应混合物用N2搅动15分钟。连接了配有H2气球和真空源的3向冲洗适配器。将反应混合物上方的顶部空间抽空直至溶剂开始沸腾，然后用H2回填。将该真空/填充过程重复10-15次以使顶部空间中的H2最大化。将反应混合物在23℃下搅拌18小时。18小时后，将反应混合物过滤通过 6cm
Figure BDA0001927318020000541
塞，用EtOH(3×15mL)冲洗，浓缩。快速柱色谱(SiO2,25％EtOAc/己烷)得到2.93g(84％)N-Boc吡咯烷产物，为透明粘性油状物。使用相同的程序，用(3R,4R)-非对映异构体：(3R,4R)-1-苄基-4-((S)-4- 苄基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)吡咯烷-3-甲酸乙酯1(3.06g,7.01mmol), Boc2O(1.60g,7.36mmol),Pd(OH)2/C(500mg)和EtOH(50mL)得到 2.73g(87％)的(3R,4R)-S-1，为透明的粘性油状物。(3S,4S)-非对映异构体的数据：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40–7.19(m,5H),4.69(dd,J ＝9.0,4.5Hz,1H),4.52(q,J＝7.7Hz,1H),4.29–4.14(m,4H),3.95– 3.75(m,2H),3.60(m,2H),3.52–3.27(m,2H),2.86–2.71(m,1H), 1.46(s,9H),1.28(t,J＝7.5Hz,3H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C23H31N2O7[M+H]+447.2126,实测值：447.2126。(3R,4R)-非对映异构体的数据:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39–7.28(m,3H),7.19(d, J＝7.3Hz,2H),4.72(ddd,J＝11.3,6.7,3.4Hz,1H),4.33–4.20(m, 2H),4.17(q,J＝8.0,7.6Hz,2H),3.97(d,J＝9.6Hz,1H),3.92–3.79 (m,1H),3.65(d,J＝9.8Hz,1H),3.59–3.33(m,2H),3.24(d,J＝13.0 Hz,1H),2.84(dd,J＝13.4,9.2Hz,1H),1.48(s,9H),1.26(td,J＝7.1, 1.6Hz,3H)。
Figure BDA0001927318020000542
(S,S)-14和(R,R)-14：(3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸 [修改的来自Ma等人,Tetrahedron Asymm.1997,8；883–887的程序]
将(3S,4S)-4-((S)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)吡咯烷-1,3-二甲酸 1-叔丁酯3-乙酯((3S,4S)-S-1；2.06g,4.63mmol)溶于无水THF(20mL) 中并冷却至0℃。将过氧化氢(2.10mL，约18.5mmol，4.0当量，30％ w/v)滴加到搅拌的反应溶液中。3-5分钟后，加入LiOH·H2O(500mg, 11.9mmol)。2小时后，加入另外的LiOH(470mg,11.2mmol)以及 H2O(10mL)和THF(15mL)。将反应混合物搅拌3小时，升温至室温。加入饱和Na2SO3水溶液(10mL)，在N2流下除去THF。将所得混合物倒入H2O(200mL)中并用CH2Cl2(2×100mL)萃取以除去噁唑烷酮。将水相用1N HCl水溶液酸化至pH2(约75mL)。水相用 EtOAc(3×125mL)萃取，并将有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到1.13g(94％)的(3S,4S)-14，为白色固体，未对其进一步纯化。使用相同的程序，用(3R,4R)-S-1非对映异构体：(3R,4R)-4-((S)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)吡咯烷-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯(1.88g,4.22 mmol)，过氧化氢(1.90mL，16.9mmol)，LiOH·H2O(885mg,21.1mmol) 和THF(20mL)，得到927mg(85％)的(3R,4R)-14，为白色固体。对于(S,S)-14:1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ3.59–3.48(m,2H),3.41–3.31(m,2H),3.30–3.18(m,2H),1.39(s,9H)。
Figure BDA0001927318020000551
15:(3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷 -1-甲酸叔丁酯.
将(3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(14；775mg,2.99 mmol)、(1S,2R)-反式-2-苯基环丙基胺((1S,2R)-13；816mg,6.13mmol, 2.05当量)和HOAt(895mg,6.58mmol,2.20当量)在N2气氛下溶解于无水DMF(15mL)。缓慢添加2,6-二甲基吡啶(1.75mL,14.9mmol, 5.00当量)。试剂溶解后(15分钟)，一次性添加EDCI·HCl(1.43g,7.47mmol,2.50当量)，将反应混合物搅拌18小时，然后倒入1N HCl水溶液(150mL)和EtOAc(100mL)。将水相用EtOAc(2×75mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(75mL)、饱和NaHCO3水溶液(75mL)和饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。快速柱色谱(SiO2,50％EtOAc/己烷)产生1.02g(70％)的 15。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33–7.24(m,5H),7.23–7.09(m, 5H),6.61(s,1H),6.43(s,1H),3.85(t,J＝9.7Hz,1H),3.68(m,1H), 3.60(t,J＝10.5Hz,1H),3.42(t,J＝10.4Hz,1H),3.27(q,J＝10.0,9.3 Hz,1H),3.12(t,J＝9.7Hz,1H),2.88(m,2H),2.05(ddt,J＝9.8,6.4,3.4 Hz,2H),1.46(s,9H),1.24(q,J＝6.6Hz,2H),1.13(dt,J＝10.1,5.3Hz, 2H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C29H36N3O4[M+H]+490.2700,实测值：490.2705。
Figure BDA0001927318020000561
S-2:(3S,4S)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
将(3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1- 甲酸叔丁酯(15；998mg,2.04mmol)在室温下悬浮于无水THF(2 mL)。将4N HCl(8mL,4.0M二噁烷溶液)滴加至剧烈搅拌的反应溶液。在室温下搅拌3小时后(在此期间一些产物从反应混合物沉淀)，通过N2流在16小时内除去溶剂。将残留固体悬浮于无水THF，在真空中再浓缩(3×5mL)以确保完全除去二噁烷。该过程用无水Et2O(3 ×5mL)重复以得到870mg(99％)的S-2，为无定形白色固体。1H NMR (500MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,2H),8.76(d,J＝4.4Hz,2H),7.26(t,J＝7.6Hz,4H),7.20–7.06(m,6H),3.76–3.62(m,1H),3.55–3.42(m, 1H),3.26(t,J＝8.2Hz,2H),3.21–3.11(m,2H),2.90–2.78(m,2H), 1.99(ddd,J＝9.6,6.3,3.4Hz,2H),1.26–1.13(m,4H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C24H28N3O2[M+H]+390.2176,实测值： 390.2178。
Figure BDA0001927318020000562
3(Diprovocim-1):(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
将(3S,4S)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基-环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-2；500mg,1.17mmol,2.20当量)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,89mg,0.53mmol,1.00当量)在室温下溶解于无水DMF(6mL)。添加i-Pr2NEt(0.280mL,1.60mmol,3.00当量)，然后在5分钟后添加 PyBrOP(497mg,1.07mmol,2.00当量)，将混合物在23℃搅拌18 小时。18小时后，将反应混合物用EtOAc(300mL)稀释并用0.5N HCl 水溶液(2×150mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×50mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(100mL)和饱和NaCl水溶液(75mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。快速柱色谱(SiO2,5–8％ MeOH/CH2Cl2)提供被少量(约10％)三(吡咯烷-1-基)氧化膦污染的3。通过用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc(3×5mL)研磨除去污染物，倾析液相以得到421mg(86％)的3。
Figure BDA0001927318020000571
IR(纯)νmax3259, 1633,1539,1426,1386,1073,695cm–1。1H NMR(600MHz,DMSO-d6) δ8.42(d,J＝4.3Hz,2H),8.29(d,J＝4.3Hz,2H),7.56(s,4H),7.27– 7.21(m,8H),7.19–7.09(m,8H),7.09–7.03(m,4H),3.80(dd,J＝12.0, 8.6Hz,2H),3.71–3.58(m,2H),3.51(ddd,J＝15.6,11.2,8.2Hz,4H), 3.19(q,J＝8.4Hz,2H),3.10(q,J＝8.1Hz,2H),2.90–2.80(m,2H),2.80–2.73(m,2H),1.97(ddd,J＝9.6,6.4,3.4Hz,2H),1.86(ddd,J＝ 9.5,6.3,3.4Hz,2H),1.21–1.13(m,4H),1.13–1.05(m,4H).13C NMR (151MHz,DMSO-d6)δ171.65,170.93,167.46,141.28,141.19,137.71, 128.17,128.14,127.09,125.83,125.79,125.60,51.48,48.74,46.95, 45.83,45.07,32.54,32.45,25.87,23.90,23.81,15.33,15.24。HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C56H57N6O6[M+H]+909.4334,实测值： 909.4334。
Figure BDA0001927318020000572
S-3:反式-1-(叔丁氧基羰基)-4-((反式-2-苯基环丙基)氨基甲酰基) 吡咯烷-3-甲酸
将外消旋的反式-1-(叔丁氧基羰基)-吡咯烷-3,4-二甲酸[Padwa等人,J.Org.Chem.1987,52:235–244；和Sarmiento等人,Tetrahedron: Asymmetry,2003,14:1547–1551](250mg,0.964mmol)、EDCI·HCl (185mg,0.964mmol,1.00当量)、HOAt(144mg,1.06mmol,1.10当量)和2,6-二甲基吡啶(0.56mL,4.82mmol,5.00当量)在室温下溶解于无水DMF(5mL)。搅拌1小时后，添加外消旋的反式-2-苯基环丙基胺盐酸盐(164mg,0.964mmol,1.00当量)，将混合物在23℃搅拌 18小时。将混合物倒入1N HCl水溶液(50mL)和EtOAc(50mL)。将水相用EtOAc(2×50mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl 水溶液(50mL)和饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。快速柱色谱(SiO2,60:40:0.1EtOAc/己烷/AcOH) 产生157mg(43％)的S-3。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.24(t,J＝7.1Hz,2H),7.20–7.03(m,3H),6.64(s,1H),3.86–3.77(m,1H),3.69 –3.58(m,2H),3.54(t,J＝9.7Hz,1H),3.42–3.32(m,1H),3.27–3.19 (m,1H),3.14(d,J＝7.9Hz,1H),2.89–2.83(m,1H),2.06–2.00(m, 1H),1.46(s,9H),1.18(dd,J＝10.5,7.2Hz,2H)。
Figure BDA0001927318020000581
5:反式-3-(苯乙基-氨基甲酰基)-4-((反式-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将反式-1-(叔丁氧基羰基)-4-((反式-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-甲酸(S-3；100mg,0.267mmol)、苯乙基胺(32mg,0.267mmol, 1当量)和i-Pr2NEt(140μL,0.801mmol,3.00当量)在室温下溶解于无水DMF(1.5mL)。添加(苯并三唑-1-基-氧基)三吡咯烷-1-基-
Figure BDA0001927318020000582
六氟磷酸盐(PyBOP；153mg,0.294mmol,1.10当量)，将混合物搅拌16小时。将混合物用EtOAc(50mL)稀释，依次用1N HCl水溶液(40mL)、饱和NaHCO3水溶液(30mL)和饱和NaCl水溶液(30mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。快速柱色谱(SiO2,50％EtOAc/己烷)提供44mg(34％)的5。1H NMR(500MHz,丙酮-d6)δ7.68(d,J＝ 4.4Hz,1H),7.45(s,1H),7.39–7.19(m,10H),3.84–3.69(m,3H),3.58 –3.48(m,3H),3.42(dt,J＝13.3,9.7Hz,2H),3.36–3.23(m,1H),2.88 (qd,J＝7.5,6.6Hz,2H),2.16–2.08(m,1H),1.52(s,9H),1.31–1.23 (m,2H)。
Figure BDA0001927318020000591
S-4:反式-N3-苯乙基-N4-(反式-2-苯基-环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
将反式-3-(苯乙基氨基甲酰基)-4-((反式-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5；40mg,0.0819mmol)在室温下溶解于4N HCl/二噁烷溶液(1.00mL,4.00mmol,49当量)。2.5小时后，将混合物在N2流下浓缩以得到35mg(99％)的S-4。
Figure BDA0001927318020000592
6:反式-3,4-双(苯乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷-3,4-二酸的偶联的一般程序：使用外消旋的反式 -1-(叔丁基氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(500mg,1.93mmol)、苯乙基胺(468mg,3.86mmol)、2,6-二甲基吡啶(1.12mL,9.64mmol)、 EDCI·HCl(924mg,4.82mmol)、HOAt(580mg,4.24mmol)和DMF(10mL)。快速柱色谱(SiO2,50％EtOAc/己烷)提供563mg(63％)的6。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.35–7.26(m,4H),7.25–7.20(m,2H), 7.19–7.13(m,4H),6.20(s,1H),5.94(s,1H),3.75(t,J＝9.3Hz,1H), 3.64–3.40(m,6H),3.36(t,J＝10.2Hz,1H),3.17(q,J＝9.9Hz,1H),2.99(q,J＝9.4Hz,1H),2.79(t,J＝6.8Hz,4H),1.45(s,9H)。
Figure BDA0001927318020000601
S-5:反式-N3,N4-二苯乙基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用N-Boc-吡咯烷去保护的一般程序：使用N-Boc吡咯烷6(202 mg,0.434mmol)、无水THF(2mL)和4N HCl/二噁烷(4mL)。从Et2O (3×3mL)再浓缩产生174mg(99％)的S-5。
Figure BDA0001927318020000602
7:反式-3,4-双((反式-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将外消旋的反式-1-(叔丁氧基羰基)-吡咯烷-3,4-二甲酸(250mg, 0.964mmol)和外消旋的反式-2-苯基环丙基胺盐酸盐(327mg,1.93 mmol,2.00当量)在N2气氛下溶解于无水DMF(5mL)。缓慢添加 i-Pr2NEt(250μL,1.93mmol,2.00当量)。试剂溶解后，一次性添加EDCI·HCl(407mg,2.12mmol,2.20当量)，将反应混合物搅拌18小时，然后倒入0.5N HCl水溶液(75mL)和EtOAc(100mL)。将水相用 EtOAc(2×75mL)萃取，将合并的有机相再依次用0.5N HCl水溶液 (50mL)、饱和NaHCO3水溶液(50mL)和饱和NaCl水溶液(25mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。快速柱色谱(SiO2,25–50％ EtOAc/己烷梯度)产生115mg(24％)的7。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.30–7.24(m,5H),7.23–7.07(m,5H),6.59(s,1H),6.34(s,1H),3.84 (t,J＝9.8Hz,1H),3.69(t,J＝9.6Hz,1H),3.59(t,J＝10.6Hz,1H),3.45(t,J＝10.8Hz,1H),3.24(q,J＝10.2Hz,1H),3.13–3.07(m,1H),2.90 (ddt,J＝16.8,7.6,3.6Hz,2H),2.09–1.96(m,2H),1.46(s,9H),1.30– 1.21(m,2H),1.20–1.09(m,2H)。
Figure BDA0001927318020000611
S-6:反式-N3,N4-双(反式-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
将反式-3,4-双((反式-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(7；67mg,0.137mmol)在室温下溶解于4N HCl/二噁烷(5mL, 145当量HCl)。搅拌2小时后，在N2流下除去溶剂达12小时。将残留固体悬浮于无水THF(1mL)，在真空中再浓缩(3×1mL)以确保完全除去二噁烷。该过程用无水Et2O(3×5mL)重复以得到58mg (99％)的S-6。
Figure BDA0001927318020000612
8:反式,反式-1,1'-对苯二甲酰基双-(N3,N4-二苯乙基吡咯烷-3,4- 二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：使用吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐 S-5(30mg,0.0746mmol)、对苯二甲酸(5.6mg,0.0339mmol)、 i-Pr2NEt(18μL,0.102mmol)、PyBrOP(32mg,0.0679mmol)和无水 DMF(375μL)。需要温和加热(约50℃)以溶解试剂。产物沉淀为白色固体。用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc研磨后，分离21.2mg(73％)的8。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.22(t,J＝5.5Hz,2H),8.11–8.01(m, 2H),7.56(d,J＝1.2Hz,4H),7.28(t,J＝7.5Hz,4H),7.19(dd,J＝8.5, 6.7Hz,10H),7.17–7.07(m,6H),3.75(dd,J＝11.8,8.7Hz,2H),3.59(t, J＝9.1Hz,2H),3.46(t,J＝9.6Hz,2H),3.39(td,J＝9.3,4.7Hz,2H), 3.31–3.15(m,10H),3.12(t,J＝8.0Hz,2H),2.72(t,J＝7.6Hz,4H), 2.64(dt,J＝8.9,6.6Hz,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C52H57N6O6[M+H]+861.4334,实测值：861.4334。
Figure BDA0001927318020000621
S-7:4-(反式-3,4-双-(苯乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸甲酯
将反式-N3,N4-二苯乙基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-5；20mg, 0.0498mmol)、对苯二甲酸单甲酯(9.0mg,0.0498mmol,1.00当量)和 i-Pr2NEt(26μL,0.149mmol,3.00当量)在室温下溶解于无水DMF (0.25mL)。添加PyBrOP(23mg,0.0498mmol,1.00当量)，将混合物搅拌18小时。将混合物用EtOAc(20mL)稀释，用1N HCl水溶液(10 mL)洗涤。将水相用EtOAc(10mL)萃取，将合并的有机层用饱和 NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤。将有机相用 Na2SO4干燥，过滤并浓缩。快速柱色谱(SiO2,75％EtOAc/己烷)提供17.1mg(66％)的S-7。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.07(d,J＝8.6 Hz,2H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.35–7.07(m,10H),6.43(t,J＝5.5 Hz,1H),6.32–6.22(m,1H),4.09(dd,J＝12.1,8.7Hz,1H),3.94(s, 3H),3.75(t,J＝10.3Hz,1H),3.65(t,J＝11.2Hz,1H),3.59(dd,J＝10.9, 8.2Hz,1H),3.53(dd,J＝13.4,6.6Hz,1H),3.47–3.39(m,3H),3.23(q, J＝9.4Hz,1H),3.10(q,J＝9.6Hz,1H),2.80–2.71(m,4H)。
Figure BDA0001927318020000631
S-8:4-(反式-3,4-双(苯乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸
将4-(反式-3,4-双(苯乙基-氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸甲酯(S-7；14.7mg,0.0279mmol)在室温下溶解于THF/MeOH/H2O(分别为100μL,20μL,20μL)。一次性添加LiOH·H2O(5mg,0.111mmol, 4.00当量)。3小时后，将混合物用EtOAc(10mL)稀释，用1NHCl 水溶液(10mL)洗涤。将水相用EtOAc(5mL)萃取一次，将合并的有机层用Na2SO4干燥，倾析并浓缩以得到13.5mg(94％)的S-8。
Figure BDA0001927318020000632
9:反式-1-(4-(反式-3,4-双(苯乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3-苯乙基-N4-(反式-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺
将4-(反式-3,4-双(苯乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸 (S-8；9.6mg,0.0186mmol)、反式-N3-苯乙基-N4-(反式-2-苯基环丙基)- 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-4；7.7mg,0.0186mmol,1.00当量)和 i-Pr2NEt(10μL,0.0558mmol,3.00当量)在室温下溶解于无水DMF (100μL)。添加PyBrOP(8.8mg,0.0186mmol,1.00当量)，将混合物搅拌16小时。将混合物用EtOAc(5mL)稀释，用1N HCl水溶液(2mL) 洗涤。将水相用EtOAc(2mL)萃取，将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到16mg(98％)的9。1H NMR(500MHz,DMSO-d6) δ8.15(d,J＝5.6Hz,2H),7.99(t,J＝5.6Hz,2H),7.57(s,4H),7.28(dd, J＝8.7,8.3Hz,4H),7.24–7.07(m,16H),3.83–3.72(m,2H),3.64– 3.55(m,2H),3.52–3.35(m,4H),3.29–3.15(m,6H),3.12(q,J＝7.8, 7.1Hz,2H),2.72(t,J＝7.2Hz,4H),2.64(p,J＝7.7Hz,4H),1.99–1.91 (m,2H),1.28–1.04(m,2H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C53H57N6O6[M+H]+873.4334,实测值：873.4333。
Figure BDA0001927318020000641
10:反式,反式-1,1'-对苯二甲酰基双(N3-苯乙基-N4-(反式-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
将反式-N3-苯乙基-N4-(反式-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-4；15.0mg,0.0362mmol,2.2当量)、对苯二甲酸(2.7mg, 0.0165mmol,1.0当量)和i-Pr2NEt(8.6μL,0.0494mmol,3.0当量)在室温下溶解于无水DMF(200μL)。一次性添加PyBrOP(15.4mg, 0.0329mmol,2.0当量)，将混合物搅拌18小时。将混合物用EtOAc(5 mL)稀释，用1N HCl水溶液(2mL)洗涤。将水相用EtOAc(2mL)萃取，将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到13.2mg(92％)的10。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.47–8.24(m,1H),8.24 –8.12(m,1H),8.01(q,J＝6.0,5.2Hz,2H),7.57(s,4H),7.32–7.02(m, 20H),3.85–3.72(m,2H),3.72–3.55(m,2H),3.55–3.35(m,4H),3.31 –3.24(m,2H),3.24–3.16(m,4H),3.14–3.06(m,4H),2.71(t,J＝7.7 Hz,2H),2.68–2.59(m,2H),1.97–1.80(m,2H),1.20–1.03(m,4H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C54H57N6O6[M+H]+885.4334,实测值： 885.4335。
Figure BDA0001927318020000651
S-9:4-(反式-3,4-双((反式-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1- 羰基)苯甲酸甲酯
将反式-N3,N4-双(反式-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-6；11.5mg,0.0270mmol)、对苯二甲酸单甲酯(4.9mg,0.0270 mmol,1.00当量)和i-Pr2NEt(14μL,0.0810mmol,3.00当量)在室温下溶解于无水DMF(0.15mL)。添加PyBrOP(12.6mg,0.0270mmol, 1.00当量)，将混合物搅拌18小时。将混合物用EtOAc(5mL)稀释，用1N HCl水溶液(5mL)洗涤。将水相用EtOAc(5mL)萃取，将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(6mL)和饱和NaCl水溶液(4mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。快速柱色谱(SiO2,75％EtOAc/己烷)产生7.6mg(51％)的S-9。1H NMR(500MHz,丙酮-d6) δ8.08–8.03(m,2H),7.70–7.62(m,3H),7.56(s,1H),7.25(p,J＝7.0 Hz,5H),7.20–7.09(m,5H),3.95(t,J＝8.2Hz,1H),3.91(s,3H),3.79 –3.61(m,3H),3.33–3.20(m,2H),2.98–2.90(m,1H),2.88–2.84(m,1H),1.98(q,J＝9.4Hz,1H),1.25–1.10(m,4H)。
Figure BDA0001927318020000652
S-10:4-(反式-3,4-双((反式-2-苯基环丙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1- 羰基)-苯甲酸
将4-(反式-3,4-双((反式-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯甲酸甲酯(S-9；7.6mg,0.0138mmol)在室温下溶解于 THF/MeOH/H2O(分别为100μL,20μL,20μL,)。一次性添加 LiOH·H2O(2.3mg,0.0551mmol,4.00当量)。1.5小时后，将混合物用EtOAc(5mL)稀释，用2N HCl水溶液(4mL)洗涤。将水相用EtOAc (5mL)萃取一次，将合并的有机层用Na2SO4干燥，倾析并浓缩得到 6.8mg(92％)的S-10。
Figure BDA0001927318020000661
11:反式-1-(4-(反式-3,4-双((反式-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3-苯乙基-N4-(反式-2-苯基环丙基)吡咯烷 -3,4-二甲酰胺
将4-(反式-3,4-双((反式-2-苯基环丙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(S-10；6.8mg,0.0126mmol)、反式-N3-苯乙基-N4-(反式-2- 苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-4；5.2mg,0.0126mmol, 1.00当量)和i-Pr2NEt(5μL,0.0380mmol,3.00当量)在室温下溶解于无水DMF(200μL)。添加PyBrOP(6.5mg,0.0139mmol,1.10当量)，将反应混合物搅拌16小时。将混合物用EtOAc(5mL)稀释，用1N HCl水溶液(5mL)洗涤。将水相用EtOAc(4mL)萃取，将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(5mL)和饱和NaCl水溶液(4mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到11mg(97％)的11。1H NMR (600MHz,DMSO-d6)δ8.45–8.40(m,2H),8.30(d,J＝9.7Hz,2H), 7.62–7.52(m,4H),7.33–7.00(m,20H),3.86–3.72(m,2H),3.72– 3.58(m,2H),3.59–3.42(m,4H),3.24–3.14(m,2H),3.10(p,J＝6.8 Hz,2H),2.92–2.81(m,2H),2.80–2.75(m,2H),2.75–2.59(m,2H), 2.00–1.89(m,2H),1.86(q,J＝6.8,5.7Hz,2H),1.17(ddd,J＝17.1,6.8, 5.8Hz,3H),1.09(q,J＝6.7,5.6Hz,3H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C55H57N6O6[M+H]+897.4334,实测值：897.4333。
Figure BDA0001927318020000671
12:反式,反式-1,1'-对苯二甲酰基双-(N3,N4-双-(反式-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
将反式-N3,N4-双(反式-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-6,1.87g,4.40mmol,2.05当量)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,356 mg,2.15mmol,1.00当量)在室温下溶解于无水DMF(20mL)。添加 i-Pr2NEt(1.12mL,6.44mmol,3.00当量)，接着在5分钟后添加PyBrOP (2.00,4.29mmol,2.00当量)。24小时后，将反应混合物用EtOAc(400 mL)稀释，用0.5N HCl水溶液(2×200mL)洗涤。将水相用EtOAc(1 ×100mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(100mL)和饱和NaCl水溶液(75mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩得到偶联产物，其被少量(约10％)的三(吡咯烷-1-基)氧化膦污染。用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc(3×10mL)研磨除去污染物，倾析液相以得到 1.93g(98％)的12。
Figure BDA0001927318020000672
S-1:(3S,4S)-4-((S)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)吡咯烷-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯
将(3S,4S)-1-苄基-4-((S)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)吡咯烷-3- 甲酸乙酯[根据美国专利号6,489,354B1制备为单一立体异构体，] (3.43g,7.86mmol)和Boc2O(1.80g,8.25mmol,1.05当量)在室温下溶解于EtOH(50mL)。添加Pd(OH)2/C(500mg)，将反应混合物用 N2搅动15分钟。连接了配有H2气球和真空源的3向冲洗适配器。将反应混合物上方的顶部空间抽空直至溶剂开始沸腾，然后用H2回填。将该真空/填充过程重复10-15次以使顶部空间中的H2最大化。18小时后，将反应混合物过滤通过6cm
Figure BDA0001927318020000681
塞，用等分的EtOH(3×15mL) 冲洗，充分浓缩。快速柱色谱(SiO2,25％EtOAc/己烷)提供2.93g(84％) S-1，为透明粘性油状物。使用相同的程序，用(3R,4R)-非对映异构体：吡咯烷-3-甲酸酯(3.06g,7.01mmol)、Boc2O(1.60g,7.36mmol)、 Pd(OH)2/C(500mg)和EtOH(50mL)，得到2.73g(87％)的N-Boc吡咯烷，也为透明粘性油状物。(3S,4S)-非对映异构体的数据:1H NMR (400MHz,CDCl3)δ7.40–7.19(m,5H),4.69(dd,J＝9.0,4.5Hz,1H), 4.52(q,J＝7.7Hz,1H),4.29–4.14(m,4H),3.95–3.75(m,2H),3.60 (m,2H),3.52–3.27(m,2H),2.86–2.71(m,1H),1.46(s,9H),1.28(t,J ＝7.5Hz,3H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C23H31N2O7[M+H]+ 447.2126,实测值：447.2126。(3R,4R)-非对映异构体的数据:1H NMR (400MHz,CDCl3)δ7.39–7.28(m,3H),7.19(d,J＝7.3Hz,2H),4.72 (ddd,J＝11.3,6.7,3.4Hz,1H),4.33–4.20(m,2H),4.17(q,J＝8.0,7.6 Hz,2H),3.97(d,J＝9.6Hz,1H),3.92–3.79(m,1H),3.65(d,J＝9.8Hz,1H),3.59–3.33(m,2H),3.24(d,J＝13.0Hz,1H),2.84(dd,J＝13.4, 9.2Hz,1H),1.48(s,9H),1.26(td,J＝7.1,1.6Hz,3H)。
Figure BDA0001927318020000682
(S,S)-14和(R,R)-14:(3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸 [修改的来自Ma等人,Tetrahedron Asymm.1997,8:883–887的程序]
将(3S,4S)-4-((S)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)吡咯烷-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯(2.06g,4.63mmol)溶解于无水THF(20mL)并冷却至 0℃。将过氧化氢(2.10mL,约18.5mmol,4.0当量,30％w/v)滴加至搅拌的反应溶液。3-5分钟后，添加LiOH·H2O(500mg,11.9mmol)。 2小时后，添加另外的LiOH(470mg,11.2mmol)以及H2O(10mL)和 THF(15mL)。将反应混合物搅拌3小时，温热至室温。添加Na2SO3饱和水溶液(10mL)，在N2流下除去THF。将所得混合物倒入H2O(200 mL)，用CH2Cl2(2×100mL)萃取以除去噁唑烷酮。将水相用1N HCl 水溶液酸化至pH 2(约75mL)。
将水相用EtOAc(3×125mL)萃取，将有机萃取物用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到1.13g(94％)的(S,S)-14，为白色固体。使用相同的程序，用(3R,4R)-非对映异构体：吡咯烷-3-甲酸酯(1.88g,4.22 mmol)、过氧化氢(1.90mL,16.9mmol)、LiOH·H2O(885mg,21.1mmol) 和THF(20mL)，得到927mg(85％)的(3R,4R)-14，为白色固体。(S,S)-14的数据：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ3.59–3.48(m,2H), 3.41–3.31(m,2H),3.30–3.18(m,2H),1.39(s,9H)。
Figure BDA0001927318020000691
15:(3S,4S)-3,4-双-(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷 -1-甲酸叔丁酯
将(3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸((3S,4S)-14,775 mg,2.99mmol)、(1S,2R)-反式-2-苯基环丙基胺((1S,2R)-13,816mg, 6.13mmol,2.05当量)和HOAt(895mg,6.58mmol,2.20当量)在N2气氛下溶解于无水DMF(15mL)。缓慢添加2,6-二甲基吡啶(1.75mL, 14.9mmol,5.00当量)。试剂溶解后(约15分钟)，一次性添加 EDCI·HCl(1.43g,7.47mmol,2.50当量)，将反应混合物搅拌18小时，然后倒入1N HCl水溶液(150mL)和EtOAc(100mL)。将水相用 EtOAc(2×75mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(75 mL)、饱和NaHCO3水溶液(75mL)和饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。快速柱色谱(SiO2,50％EtOAc/ 己烷)产生1.02g(70％)的15。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33– 7.24(m,5H),7.23–7.09(m,5H),6.61(s,1H),6.43(s,1H),3.85(t,J＝9.7Hz,1H),3.68(m,1H),3.60(t,J＝10.5Hz,1H),3.42(t,J＝10.4Hz, 1H),3.27(q,J＝10.0,9.3Hz,1H),3.12(t,J＝9.7Hz,1H),2.88(m,2H), 2.05(ddt,J＝9.8,6.4,3.4Hz,2H),1.46(s,9H),1.24(q,J＝6.6Hz,2H), 1.13(dt,J＝10.1,5.3Hz,2H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C29H36N3O4[M+H]+490.2700,实测值：490.2705。
Figure BDA0001927318020000701
S-2:(3S,4S)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
将(3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1- 甲酸叔丁酯(15,998mg,2.04mmol)在室温下悬浮于无水THF(2mL)。将4N HCl(8mL,4.0M二噁烷溶液)滴加至剧烈搅拌的反应溶液。在室温下搅拌3小时，在此期间一些产物从反应混合物沉淀，之后通过 N2流在16小时内除去溶剂。将残留固体悬浮于无水THF，在真空中再浓缩(3×5mL)以确保完全除去二噁烷。该过程用无水Et2O(3×5 mL)重复，得到870mg(99％)的S-2，为无定形白色固体。1H NMR (500MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,2H),8.76(d,J＝4.4Hz,2H),7.26(t,J＝ 7.6Hz,4H),7.20–7.06(m,6H),3.76–3.62(m,1H),3.55–3.42(m, 1H),3.26(t,J＝8.2Hz,2H),3.21–3.11(m,2H),2.90–2.78(m,2H), 1.99(ddd,J＝9.6,6.3,3.4Hz,2H),1.26–1.13(m,4H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C24H28N3O2[M+H]+390.2176,实测值：390.2178。
Figure BDA0001927318020000711
16:(3R,4R)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷 -1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序：使用(3R,4R)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸((R,R)-14,40mg,0.154mmol)、(1S,2R)-反式 -2-苯基环丙基胺((1S,2R)-13,42mg,0.316mmol)、2,6-二甲基吡啶(90 μL,0.771mmol)、EDCI·HCl(74mg,0.386mmol)、HOAt(46mg,0.340 mmol)和DMF(0.75mL)。快速柱色谱(SiO2,50％EtOAc/己烷)提供56 mg(75％)的16。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33–7.22(m,4H),7.18 (t,J＝7.3Hz,2H),7.10(m,4H),6.64(s,1H),6.43(s,1H),3.84(m,1H), 3.68(m,1H),3.62(m,1H),3.43(m,1H),3.26(dd,J＝9.7Hz,1H),3.08 (dd,J＝10.0Hz,1H),2.91(dq,J＝7.6,3.8Hz,2H),2.01(ddd,J＝9.7, 6.3,3.4Hz,2H),1.46(s,9H),1.26(ddd,J＝9.4,7.3,5.0Hz,3H),1.16 (ddd,J＝10.1,5.9,4.5Hz,2H)。
Figure BDA0001927318020000712
S-12:(3R,4R)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序：使用N-Boc吡咯烷16(45 mg,0.0919mmol)、无水THF(1mL)和4N HCl/二噁烷(2mL)。从Et2O (3×3mL)再浓缩，产生39mg(99％)的S-12。
Figure BDA0001927318020000721
17:(3S,4S)-3,4-双(((1R,2S)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷 -1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序：使用(3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸((S,S)-14,40mg,0.154mmol)、(1R,2S)-反式 -2-苯基环丙基胺((1R,2S)-13,42mg,0.316mmol)、2,6-二甲基吡啶(90 μL,0.771mmol)、EDCI·HCl(74mg,0.386mmol)、HOAt(46mg,0.340 mmol)和DMF(0.75mL)。快速柱色谱(SiO2,50％EtOAc/己烷)提供44 mg(58％)的17。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.31–7.22(m,4H),7.22 –7.16(m,2H),7.11(m,4H),6.68(s,1H),6.49(s,1H),3.85(t,J＝9.7 Hz,1H),3.68(t,J＝9.7Hz,1H),3.61(t,J＝10.5Hz,1H),3.43(t,J＝ 10.4Hz,1H),3.26(q,J＝9.9Hz,1H),3.08(q,J＝9.8Hz,1H),2.96– 2.86(m,2H),2.01(ddd,J＝9.7,6.3,3.4Hz,2H),1.46(s,9H),1.30– 1.21(m,2H),1.15(ddd,J＝9.6,6.0,4.5Hz,2H)。
Figure BDA0001927318020000722
S-13:(3S,4S)-N3,N4-双((1R,2S)-2-苯基-环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序：使用N-Boc吡咯烷17(44 mg,0.0899mmol)、无水THF(1mL)和4N HCl/二噁烷(3mL)。从Et2O (5×3mL)浓缩，产生38mg(99％)的S-13。
Figure BDA0001927318020000731
18:(3R,4R)-3,4-双(((1R,2S)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷 -1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序：使用(3R,4R)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸((R,R)-14,40mg,0.154mmol)、(1R,2S)-反式 -2-苯基环丙基胺((1R,2S)-13,42mg,0.316mmol)、2,6-二甲基吡啶(90 μL,0.771mmol)、EDCI·HCl(74mg,0.386mmol)、HOAt(46mg,0.340 mmol)和DMF(0.75mL)。快速柱色谱(SiO2,50％EtOAc/己烷)提供46 mg(60％)的18。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.27(m,4H),7.23–7.17 (m,2H),7.14(m,4H),6.54(s,1H),6.30(s,1H),3.85(t,J＝9.8Hz,1H), 3.68(t,J＝9.7Hz,1H),3.60(t,J＝10.3Hz,1H),3.43(t,J＝10.4Hz, 1H),3.26(q,J＝10.6Hz,1H),3.11(q,J＝10.3Hz,1H),2.89(m,2H),2.05(ddt,J＝9.4,6.4,3.3Hz,2H),1.46(s,9H),1.31–1.21(m,2H), 1.14(dt,J＝10.1,5.5Hz,2H)。
Figure BDA0001927318020000732
S-14:(3R,4R)-N3,N4-双((1R,2S)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序：使用N-Boc吡咯烷18(46 mg,0.0940mmol)、无水THF(1mL)和4N HCl/二噁烷(3mL)。从Et2O (5×3mL)浓缩，产生40mg(99％)的S-14。
Figure BDA0001927318020000741
S-15:4-((3R,4R)-3,4-双(((1R,2S)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯甲酸甲酯
将吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-14(11.3mg,0.0265mmol)和对苯二甲酸单甲酯(4.8mg,0.0265mmol)在室温下溶解于无水DMF (150μL)。添加i-Pr2NEt(14μL,0.0796mmol)和PyBrOP(12.4mg, 0.0265mmol)，将混合物搅拌18小时。将反应混合物用EtOAc(20mL) 稀释，用0.5N HCl水溶液(2×10mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×5mL) 萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液(5mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。快速柱色谱(SiO2,75％EtOAc/己烷)产生8.9mg(61％)的S-15，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.07(d,J＝8.3Hz,2H),7.58(d,J＝8.3Hz, 2H),7.32–7.14(m,6H),7.10–7.08(m,4H),6.96(d,J＝3.4Hz,1H), 6.86(d,J＝3.4Hz,1H),4.19(dd,J＝12.2,8.8Hz,1H),3.94(s,3H), 3.87(t,J＝10.5Hz,1H),3.75–3.66(m,2H),3.35(q,J＝10.5Hz,1H),3.22(q,J＝9.8Hz,1H),2.92–2.88(m,1H),2.84–2.80(m,1H),2.06– 2.00(m,1H),1.97(ddd,J＝9.2,6.0,3.3Hz,1H),1.26–1.02(m,4H)。
Figure BDA0001927318020000742
S-16:4-((3R,4R)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯甲酸甲酯
将吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-12(3.0mg,0.00704mmol)和对苯二甲酸单甲酯(1.3mg,0.00704mmol)在室温下溶解于无水DMF (100μL)。添加i-Pr2NEt(4μL,0.0211mmol)和PyBrOP(3.3mg, 0.00704mmol)，将混合物搅拌18小时。将反应混合物用EtOAc(10mL) 稀释，用0.5N HCl水溶液(2×5mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×2mL) 萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(5mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。快速柱色谱(SiO2,75％EtOAc/己烷)产生2.3mg(59％)的S-16，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(d,J＝8.0Hz,2H),7.59(d,J＝8.1 Hz,2H),7.29–7.15(m,6H),7.13–7.04(m,4H),6.81(s,1H),6.55(s, 1H),4.18(dd,J＝15.5,11.0Hz,1H),3.95(s,3H),3.87(t,J＝10.4Hz, 1H),3.81–3.65(m,2H),3.32(q,J＝9.4Hz,1H),3.19(q,J＝9.8Hz, 1H),2.98–2.92(m,1H),2.91–2.84(m,1H),2.05–1.94(m,2H),1.25 –1.04(m,4H)。
Figure BDA0001927318020000751
S-17:4-((3R,4R)-3,4-双(((1R,2S)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酸
将苯甲酸甲酯S-15(8.9mg,0.0161mmol)溶解于 THF/MeOH/H2O(分别为80μL,20μL,20μL)。在剧烈搅拌下添加 LiOH·H2O(2.7mg,0.0645mmol)。3小时后，将溶液用1N HCl水溶液(0.1-0.2mL)酸化至pH 2，用H2O(5mL)稀释。将水相用EtOAc(4× 4mL)萃取。将有机相用Na2SO4干燥，浓缩以得到6.6mg(77％)的S-17。
Figure BDA0001927318020000761
S-18:4-((3R,4R)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酸
将苯甲酸甲酯S-16(2.3mg,0.00417mmol)溶解于 THF/MeOH/H2O(分别为80μL,20μL,20μL)。在剧烈搅拌下添加 LiOH·H2O(1.0mg,0.0208mmol)。3小时后，将溶液用1N HCl水溶液(0.1-0.2mL)酸化至pH 2，用H2O(5mL)稀释。将水相用EtOAc(4× 4mL)萃取。将有机相用Na2SO4干燥，浓缩以得到2.0mg(91％)的S-18。
Figure BDA0001927318020000762
S-19:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯甲酸甲酯
将吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2(100mg,0.235mmol)和对苯二甲酸单甲酯(42mg,0.235mmol)在室温下溶解于无水DMF(1.2 mL)。添加i-Pr2NEt(125μL,0.704mmol)和PyBrOP(109mg,0.235 mmol)，将混合物搅拌18小时。反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，用0.5N HCl水溶液(2×50mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×25mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(25mL)和饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。快速柱色谱 (SiO2,75％EtOAc/己烷)产生100mg(77％)的S-19，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.07(d,J＝8.3Hz,2H),7.58(d,J＝8.3Hz, 2H),7.31–7.14(m,6H),7.15–7.06(m,4H),6.96(d,J＝3.6Hz,1H), 6.86(d,J＝3.7Hz,1H),4.19(dd,J＝12.2,8.8Hz,1H),3.94(s,3H), 3.87(t,J＝10.4Hz,1H),3.75–3.67(m,2H),3.34(q,J＝9.9Hz,1H),3.28–3.16(m,1H),2.90(dt,J＝7.6,3.8Hz,1H),2.83(dt,J＝7.4,3.8 Hz,1H),2.03(dq,J＝6.4,3.4,3.0Hz,1H),1.97(ddd,J＝9.8,6.4,3.4 Hz,1H),1.25–1.03(m,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C33H34N3O5[M+H]+552.2493,实测值：552.2497。
Figure BDA0001927318020000771
S-20:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酸
将苯甲酸甲酯S-19(89mg,0.161mmol)溶解于THF/MeOH/H2O (分别为0.8mL,0.2mL,0.2mL)。在剧烈搅拌下添加LiOH·H2O(27mg, 0.645mmol)。3小时后，将溶液用1NHCl水溶液(1–2mL)酸化至pH 2，用H2O(20mL)稀释。将水相用EtOAc(4×25mL)萃取。将有机相用Na2SO4干燥，浓缩以得到81.7mg(94％)的S-20。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝4.3Hz,1H),8.26(d,J＝4.3Hz,1H), 7.98(d,J＝8.2Hz,2H),7.61(d,J＝8.3Hz,2H),7.25(dt,J＝14.3,7.4 Hz,4H),7.19–7.04(m,6H),3.81(dd,J＝12.0,8.6Hz,1H),3.62(dd,J ＝10.4,7.8Hz,1H),3.52(dd,J＝12.0,8.1Hz,1H),3.46(t,J＝9.4Hz, 1H),3.19(q,J＝8.3Hz,1H),3.10(q,J＝8.1Hz,1H),2.84(dq,J＝8.3, 4.3Hz,1H),2.77(dq,J＝8.2,4.3Hz,1H),2.00–1.94(m,1H),1.85 (ddd,J＝9.5,6.4,3.4Hz,1H),1.21–1.06(m,4H).HRMS(ESI-TOF) m/z计算值：C32H32N3O5[M+H]+538.2336,实测值：538.2339。
Figure BDA0001927318020000772
19:(3R,3'R,4R,4'R)-1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：使用吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐 S-12(22.2mg,0.0521mmol)、对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,3.9mg, 0.0236mmol)、i-Pr2NEt(15μL,0.0711mmol)、PyBrOP(22.0mg,0.0474 mmol)和无水DMF(150μL)。用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc研磨后，得到 17.0mg(79％)的19。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.62(d,J＝4.5 Hz,2H),8.48(d,J＝4.5Hz,2H),7.56(s,4H),7.24(q,J＝7.6Hz,8H), 7.14(q,J＝6.8Hz,4H),7.08(dd,J＝14.6,7.3Hz,8H),3.77(dd,J＝ 12.0,8.4Hz,2H),3.65(t,J＝9.0Hz,2H),3.58–3.47(m,4H),3.20(q,J ＝8.0Hz,2H),3.10(q,J＝7.7Hz,2H),2.87(td,J＝8.1,7.0,3.3Hz,2H),2.79(dd,J＝8.0,4.0Hz,2H),1.94(ddd,J＝9.7,6.3,3.5Hz,2H),1.89 (ddd,J＝9.4,7.9,3.7Hz,2H),1.15–1.06(m,8H).HRMS(ESI-TOF) m/z计算值：C56H57N6O6[M+H]+909.4334,实测值：909.4334。
Figure BDA0001927318020000781
20:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-对苯二甲酰基双-(N3,N4-双((1R,2S)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：使用吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐 S-13(22.0mg,0.0516mmol)、对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,3.9mg, 0.0236mmol)、i-Pr2NEt(15μL,0.0711mmol)、PyBrOP(22.0mg,0.0474 mmol)和无水DMF(150μL)。用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc研磨后，得到 13.7mg(64％)的20。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.45(d,J＝4.4 Hz,2H),8.32(d,J＝4.6Hz,2H),7.57(s,4H),7.24(q,J＝7.6Hz,8H), 7.17–7.04(m,12H),3.85–3.77(m,2H),3.72–3.63(m,2H),3.58– 3.45(m,4H),3.17(dd,J＝8.7,6.5Hz,2H),3.09(q,J＝8.2Hz,2H), 2.87(dt,J＝7.8,5.1Hz,2H),2.78(d,J＝5.8Hz,2H),1.94–1.89(m, 2H),1.87(dt,J＝10.5,6.1Hz,2H),1.21–1.06(m,8H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C56H57N6O6[M+H]+909.4334,实测值： 909.4340。
Figure BDA0001927318020000791
21:(3R,3'R,4R,4'R)-1,1'-对苯二甲酰基双-(N3,N4-双((1R,2S)-2- 苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：使用吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐 S-14(22.0mg,0.0516mmol)、对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,3.9mg, 0.0236mmol)、i-Pr2NEt(15μL,0.0711mmol)、PyBrOP(22.0mg,0.0474 mmol)和无水DMF(150μL)。用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc研磨后，得到 19.9mg(93％)的21。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.43(d,J＝4.3 Hz,2H),8.30(d,J＝4.3Hz,2H),7.56(s,4H),7.24(dt,J＝16.2,7.6Hz, 8H),7.19–7.09(m,8H),7.08–7.04(m,4H),3.80(dd,J＝12.0,8.5Hz, 2H),3.65(dd,J＝10.4,7.8Hz,2H),3.56–3.46(m,4H),3.24–3.15(m, 2H),3.11(q,J＝7.9Hz,2H),2.84(dd,J＝7.8,3.9Hz,2H),2.77(dd,J＝7.4,4.0Hz,2H),1.97(ddd,J＝9.6,6.4,3.4Hz,2H),1.86(ddd,J＝9.5, 6.8,3.4Hz,2H),1.22–1.06(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C56H57N6O6[M+H]+909.4334,实测值：909.4325。
Figure BDA0001927318020000792
22:(3S,4S)-1-(4-((3R,4R)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯甲酰基)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺
使用连接二酸偶联的一般程序，针对单酸偶联换算当量：使用吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-12(6.9mg,0.0162mmol)、苯甲酸S-20 (8.7mg,0.0162mmol)、i-Pr2NEt(8μL,0.0485mmol)、PyBrOP(8.0mg, 0.0170mmol)和无水DMF(150μL)。用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc研磨后，得到5.3mg(36％)的22。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.42(dd,J＝ 12.1,4.3Hz,2H),8.28(t,J＝5.6Hz,2H),7.56(s,4H),7.29–7.19(m, 8H),7.17–7.05(m,12H),3.84–3.78(m,2H),3.66(q,J＝8.9Hz,2H), 3.55–3.47(m,4H),3.22–3.14(m,2H),3.09(q,J＝8.2Hz,2H),2.89– 2.82(m,2H),2.80–2.76(m,2H),2.00–1.94(m,2H),1.88–1.85(m, 2H),1.20–1.04(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H57N6O6 [M+H]+909.4334,实测值：909.4326。
Figure BDA0001927318020000801
23:(3R,4R)-1-(4-((3S,4S)-3,4-双(((1R,2S)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)-苯甲酰基)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺
使用连接二酸偶联的一般程序，针对单酸偶联换算当量：使用吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-13(1.6mg,0.00372mmol)、苯甲酸S-18 (2.0mg,0.00372mmol)、i-Pr2NEt(2μL,0.0112mmol)、PyBrOP(1.8mg, 0.00390mmol)和无水DMF(50μL)。用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc研磨后，得到3.4mg(99％)的23。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.44(d,J＝ 4.4Hz,2H),8.29(d,J＝5.4Hz,2H),7.57(s,4H),7.27–7.22(m,8H), 7.17–7.14(m,4H),7.11–7.05(m,8H),3.85–3.76(m,2H),3.69– 3.63(m,2H),3.55–3.48(m,4H),3.20–3.13(m,2H),3.10–3.05(m,2H),2.88–2.83(m,2H),2.80–2.75(m,2H),1.94–1.85(m,4H),1.17 –1.07(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H57N6O6[M+H]+ 909.4334,实测值：909.4344。
Figure BDA0001927318020000811
24:(3S,4S)-1-(4-((3R,4R)-3,4-双(((1R,2S)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)-苯甲酰基)-N3,N4-双((1R,2S)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺
使用连接二酸偶联的一般程序，针对单酸偶联换算当量：使用吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-13(2.6mg,0.00645mmol)、苯甲酸S-17 (3.3mg,0.00614mmol)、i-Pr2NEt(3μL,0.0184mmol)、PyBrOP(3.0mg, 0.00645mmol)和无水DMF(100μL)。用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc研磨后，得到3.0mg(54％)的24。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.41(d, J＝4.4Hz,2H),8.28(t,J＝5.4Hz,2H),7.56(s,4H),7.29–7.20(m,8H), 7.19–7.02(m,12H),3.83–3.77(m,2H),3.69–3.62(m,2H),3.59– 3.45(m,4H),3.23–3.14(m,2H),3.12–3.07(m,2H),2.90–2.82(m,2H),2.81–2.74(m,2H),1.99–1.94(m,2H),1.88–1.85(m,2H),1.20 –1.06(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H57N6O6[M+H]+ 909.4334,实测值：909.4329。
Figure BDA0001927318020000812
25:(3S,4S)-1-(4-((3S,4S)-3,4-双(((1R,2S)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)-苯甲酰基)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺
使用连接二酸偶联的一般程序，针对单酸偶联换算当量：使用吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-13(5.3mg,0.0125mmol)、苯甲酸S-20 (6.7mg,0.0125mmol)、i-Pr2NEt(7μL,0.0347mmol)、PyBrOP(6.1mg, 0.0131mmol)和无水DMF(150μL)。用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc研磨后，得到11.3mg(99％)的25。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.42(dd, J＝11.8,4.3Hz,2H),8.29(dd,J＝6.5,4.4Hz,2H),7.56(s,4H),7.24 (ddt,J＝12.0,7.3,3.6Hz,8H),7.19–7.03(m,12H),3.80(ddd,J＝9.3, 8.7,4.9Hz,2H),3.66(dd,J＝11.6,5.5Hz,2H),3.57–3.44(m,4H), 3.24–3.14(m,2H),3.18(dd,J＝16.5,8.5Hz,2H),2.85(td,J＝8.4, 4.0Hz,2H),2.78(dt,J＝8.4,4.0Hz,2H),2.00–1.91(m,2H),1.87(dq, J＝10.0,3.1Hz,2H),1.19–1.06(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H57N6O6[M+H]+909.4334,实测值：909.4320。
Figure BDA0001927318020000821
26:(3R,4R)-1-(4-((3R,4R)-3,4-双(((1R,2S)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)-苯甲酰基)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺
使用连接二酸偶联的一般程序，针对单酸偶联换算当量：使用吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-12(2.6mg,0.00614mmol)、苯甲酸S-17 (3.3mg,0.00614mmol)、i-Pr2NEt(3μL,0.0184mmol)、PyBrOP(3.0 mg,0.00645mmol)和无水DMF(100μL)。用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc研磨后，得到5.3mg(95％)的26。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.42(dd,J＝11.7,4.4Hz,2H),8.28(t,J＝5.4Hz,2H),7.56(s,4H),7.30 –7.20(m,8H),7.19–7.01(m,12H),3.83–3.78(m,2H),3.69–3.63(m, 2H),3.58–3.44(m,4H),3.23–3.14(m,2H),3.10(q,J＝8.8Hz,2H),2.90–2.81(m,2H),2.80–2.75(m,2H),1.99–1.93(m,2H),1.88– 1.84(m,2H),1.19–1.06(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C56H57N6O6[M+H]+909.4334,实测值：909.4338。
Figure BDA0001927318020000831
27:(3S,4S)-1-(4-((3R,4R)-3,4-双(((1R,2S)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)-苯甲酰基)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺
使用连接二酸偶联的一般程序，针对单酸偶联换算当量：使用吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-14(5.5mg,0.0130mmol)、苯甲酸S-20 (7.0mg,0.0130mmol)、i-Pr2NEt(7μL,0.0390mmol)、PyBrOP(6.4mg, 0.0137mmol)和无水DMF(150μL)。用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc研磨后，得到2.7mg(23％)的27。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝ 4.2Hz,2H),8.27(d,J＝4.2Hz,2H),7.56(s,4H),7.25(dt,J＝15.4,7.9 Hz,8H),7.19–7.03(m,12H),3.82–3.78(m,2H),3.68–3.63(m,2H), 3.54–3.45(m,4H),3.18(q,J＝8.0Hz,2H),3.11(q,J＝7.5Hz,2H), 2.86–2.81(m,2H),2.79–2.75(m,2H),1.99–1.93(m,2H),1.87– 1.84(m,2H),1.20–1.05(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C56H57N6O6[M+H]+909.4334,实测值：909.4334。
Figure BDA0001927318020000832
S-21:(S)-N-Boc-β-脯氨酸[Fuentes等人,Chem.Sci.2011, 2:1997–2005.]
将(S)-β-脯氨酸(152mg,1.32mmol)和Boc2O(350mg,1.58mmol) 悬浮于去离子H2O(1mL)和丙酮(3mL)。将混合物冷却至0℃，添加固体Na2CO3(72mg,0.660mmol)。3小时后，真空除去丙酮，滴加柠檬酸水溶液(20％w/v)，直至观察到pH 4。将混合物用H2O(15mL) 和EtOAc(15mL)稀释。将水相用EtOAc(2×10mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，浓缩，之后产物沉淀为白色固体，得到284mg (99％)的S-21。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.45(s,1H),3.49–3.15(m,4H),3.09–2.95(m,1H),2.12–1.87(m,2H),1.39(s,9H)。
Figure BDA0001927318020000841
28:(S)-3-(((1S,2R)-2-苯基环丙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将(S)-N-Boc-β-脯氨酸(S-21,164mg,0.762mmol)、(1S,2R)-反式 -2-苯基环丙基胺((1S,2R)-13,107mg,0.800mmol)和HOAt(114mg, 0.838mmol)在室温下溶解于无水DMF(4mL)。添加2,6-二甲基吡啶 (450μL,3.81mmol)和EDCI·HCl(219mg,1.14mmol)。24小时后，将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，用0.5N HCl水溶液(2×50mL) 洗涤。将有机相用饱和NaHCO3水溶液(30mL)和饱和NaCl水溶液(30 mL)洗涤，用Na2SO4干燥。快速柱色谱(SiO2,50％EtOAc/己烷)提供 150mg(60％)的28。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.32–7.23(m,2H),7.22–7.11(m,3H),6.05(br s,1H),3.69–3.52(m,2H),3.48(dd,J＝ 11.0,8.0Hz,1H),3.32(dt,J＝10.5,7.9Hz,1H),2.94–2.86(m,1H), 2.85–2.77(m,1H),2.24–2.10(m,1H),2.10–2.02(m,2H),1.46(s, 9H),1.29–1.22(m,1H),1.15(ddd,J＝10.1,5.9,4.4Hz,1H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C19H27N2O3[M+H]+331.2016,实测值： 331.2017。
Figure BDA0001927318020000842
S-22:(S)-N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐
将化合物28(127mg,0.384mmol)在室温下溶解于无水二噁烷(1 mL)。将4N HCl(4.0mL,16.0mmol,4M二噁烷溶液)沿着反应容器的侧壁滴加。4小时后，在N2流下除去二噁烷。将残留物从THF(4× 4mL)和Et2O(5×4mL)真空再浓缩，得到102mg(99％)的S-22。
Figure BDA0001927318020000851
29:(3S,4S)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基-环丙基)-1-(4-((S)-3-(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)-氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)-苯甲酰基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺
将苯甲酸S-20(13.0mg,0.0242mmol)和盐酸盐S-22(6.5mg, 0.0242mmol)在室温下溶解于无水DMF(120μL)。添加i-Pr2NEt(13.0 μL,0.0725mmol)和PyBrOP(12.0mg,0.0254mmol)，将混合物搅拌18 小时。将混合物用EtOAc(3mL)稀释，分别用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(1mL)洗涤。将有机相过滤通过Na2SO4塞，浓缩得到16.2mg(90％)的29。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝4.3Hz,1H),8.29(4.3Hz,1H),8.28(t,J ＝4.2Hz,1H),7.55(s,4H),7.28–7.21(m,5H),7.19–7.04(m,10H),3.80(dd,J＝11.9,8.5Hz,1H),3.65(q,J＝9.2Hz,2H),3.61–3.42(m, 4H),3.19(q,J＝8.3Hz,1H),3.11(q,J＝8.1Hz,1H),2.87–2.82(m, 2H),2.80–2.75(m,2H),2.15–2.07(m,1H),2.05–1.99(m,1H),1.96 (dq,J＝10.2,3.8Hz,2H),1.89–1.83(m,2H),1.21–1.05(m,6H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C46H48N5O5[M+H]+750.3650,实测值： 750.6347。
Figure BDA0001927318020000852
30:(3S,4S)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基-环丙基)-1-(4-(吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺
将苯甲酸S-20(7.7mg,0.0143mmol)和吡咯烷(1.2μL,0.0143 mmol)在室温下溶解于无水DMF(100μL)。添加i-Pr2NEt(7.5μL, 0.0430mmol)和PyBrOP(7.0mg,0.0150mmol)，将混合物搅拌18小时。将混合物用EtOAc(3mL)稀释，分别用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(1mL)洗涤。将有机相过滤通过Na2SO4塞，浓缩得到8.1mg(95％)的30。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝4.4Hz,1H),8.36(d,J＝4.3Hz,1H),7.55(s,4H),7.25(dt,J＝13.2,7.5Hz,4H),7.18–7.04(m,6H),3.79(dd, J＝12.0,8.5Hz,1H),3.68–3.61(m,1H),3.55–3.43(m,4H),3.36(t,J ＝6.5Hz,2H),3.18(dt,J＝6.6,3.4Hz,4H),3.10(q,J＝7.8Hz,1H), 2.85(dt,J＝7.7,4.1Hz,1H),2.77(q,J＝5.3Hz,1H),1.88–1.83(m,4H), 1.22–1.06(m,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C36H39N4O4 [M+H]+591.2966,实测值：591.2968。
Figure BDA0001927318020000861
31:(3S,3'S)-1,1'-对苯二甲酰基双(N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3-甲酰胺)
将盐酸盐S-22(17.7mg,0.0663mmol)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,5.0mg,0.0302mmol)在室温下溶解于无水DMF(330μL)。添加 i-Pr2NEt(16.0μL,1.60mmol)，接着在5分钟后添加PyBrOP(28.0mg, 0.0603mmol)。18小时后，将反应混合物用EtOAc(2mL)稀释，用 0.5N HCl水溶液(2×2mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×1mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(1 mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将剩余的残留物用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc(3×0.5mL)研磨，倾析液相得到11.9mg (67％)的31。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.35(d,J＝4.3Hz,1H), 8.26(s,1H),7.54(s,4H),7.30–7.19(m,4H),7.18–7.03(m,6H),3.67 (dd,J＝12.2,8.1Hz,1H),3.63–3.41(m,7H),2.96(t,J＝7.7Hz,1H), 2.89(t,J＝7.6Hz,1H),2.87–2.83(m,1H),2.79–2.75(m,1H),2.16– 2.06(m,1H),2.05–1.99(m,2H),1.99–1.91(m,2H),1.89–1.84(m, 1H),1.21–1.06(m,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C36H39N4O4 [M+H]+591.2966,实测值：591.2963。
Figure BDA0001927318020000871
S-23:4-(吡咯烷-1-羰基)苯甲酸甲酯
将吡咯烷(100μL,1.11mmol)和对苯二甲酸单甲酯(200mg,1.11 mmol)在室温下溶解于无水DMF(5.5mL)。添加i-Pr2NEt(0.58mL, 3.33mmol)和PyBrOP(518mg,1.11mmol)。18小时后，将反应混合物用EtOAc(75mL)稀释，用1N HCl水溶液(2×50mL)、饱和NaCl 水溶液(25mL)、饱和NaHCO3水溶液(50mL)和饱和NaCl水溶液(25 mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。快速柱色谱(50–75％ EtOAc/己烷梯度)产生205mg(80％)的S-23。1H NMR(500MHz,丙酮-d6)δ8.04(d,J＝8.3Hz,2H),7.63(d,J＝8.4Hz,2H),3.90(s,3H), 3.54(t,J＝6.9Hz,2H),3.41(t,J＝6.5Hz,2H),1.98–1.83(m,4H)。
Figure BDA0001927318020000872
S-24:4-(吡咯烷-1-羰基)苯甲酸
将甲酯S-23(113mg,0.486mmol)溶解于THF/MeOH/H2O(分别为2mL,0.5mL,0.5mL)。添加LiOH·H2O(82mg,1.94mmol)，将反应混合物搅拌3.5小时。添加1N HCl水溶液直至得到pH 2，将混合物用EtOAc(50mL)稀释。将水相用EtOAc(3×20mL)萃取，将合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到102mg(86％)的S-24。
Figure BDA0001927318020000881
32(MM-2-434):(S)-N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)-1-(4-(吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)吡咯烷-3-甲酰胺
将化合物S-24(10.8mg,0.0493mmol)和S-22(13.1mg,0.0493 mmol)在室温下溶解于无水DMF(300μL)。添加i-Pr2NEt(26μL,0.148 mmol)和PyBrOP(24.0mg,0.0567mmol)，将反应混合物搅拌18小时。将反应混合物用EtOAc(2mL)稀释，用0.5N HCl水溶液(2×2mL) 洗涤。将水相用EtOAc(1×1mL)萃取。将合并的有机相用饱和 NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(1mL)洗涤。将有机相用 Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将剩余的残留物用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc (3×0.5mL)研磨，倾析液相得到11.6mg(55％)的32。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ8.34(d,J＝4.3Hz,1H),7.54(s,4H),7.28–7.21(m, 2H),7.20–7.05(m,3H),3.71–3.64(m,1H),3.63–3.41(m,4H),3.37 (t,J＝6.5Hz,2H),2.99–2.94(m,1H),2.89(t,J＝7.7Hz,1H),2.87– 2.82(m,1H),2.78(m,1H),2.06–1.91(m,2H),1.90–1.83(m,2H), 1.83–1.78(m,2H),1.20–1.08(m,2H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C26H30N3O3[M+H]+432.2282,实测值：432.2278。
Figure BDA0001927318020000882
33:1,4-亚苯基双(吡咯烷-1-基甲酮)
将吡咯烷(22μL,0.265mmol)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,20 mg,0.120mmol)在室温下溶解于无水DMF(600μL)。添加i-Pr2NEt (63.0μL,0.361mmol)，接着在5分钟后添加PyBrOP(112mg,0.241 mmol)。18小时后，将反应混合物用EtOAc(10mL)稀释，用0.5N HCl 水溶液(2×10mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×5mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液(5mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩得到30mg(92％)的33，其光谱数据符合之前报道的那些。[Jones等人,Zeitschrift für Naturforschung,B2002,57:914–921.]
Figure BDA0001927318020000891
S-25:双(3-氧代-3-(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯
按照胺与二酸偶联的一般程序：使用可商购获得的N-Boc-亚氨基二丙酸(250mg,0.957mmol)、(1S,2R)-反式-2-苯基环丙基胺 ((1S,2R)-13,261mg,1.96mmol)、2,6-二甲基吡啶(560μL,4.78mmol)、 EDCI·HCl(460mg,2.39mmol)、HOAt(287mg,2.11mmol)和DMF(5mL)。快速柱色谱(SiO2,75％EtOAc/己烷)提供307mg(65％)的S-25。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.29–7.23(m,4H),7.20–7.10(m,6H), 3.53(t,J＝6.9Hz,4H),2.94–2.85(m,2H),2.52–2.36(m,4H),2.03 (ddd,J＝13.1,6.0,3.0Hz,2H),1.73(br s,2H),1.47(s,9H),1.22(dt,J＝ 7.4,6.0Hz,2H),1.13(dt,J＝10.0,5.1Hz,2H)。
Figure BDA0001927318020000892
S-26:3,3'-氮烷二基双(N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)丙酰胺)盐酸盐
使用Boc去保护的一般程序：使用N-Boc胺S-25(136mg,0.277 mmol)、无水THF(1mL)和4N HCl/二噁烷(5mL)。从THF(3×5mL) 和Et2O(3×3mL)再浓缩，产生119mg(99％)的S-26。
Figure BDA0001927318020000893
34:N1,N1,N4,N4-四(3-氧代-3-(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基)丙基) 对苯二甲酰胺
使用连接二酸偶联的一般程序：S-26(21.6mg,0.0505mmol)、对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,3.8mg,0.0229mmol)、PyBrOP(21.4mg, 0.0459mmol)、i-Pr2NEt(12μL,0.0688mmol)和DMF(350μL)产生 20.0mg(95％)的34。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,2H), 8.22(s,2H),7.37(s,4H),7.23(t,J＝7.2Hz,8H),7.17–7.04(m,12H), 3.62–3.55(m,4H),3.44–3.37(m,4H),2.81(br s,2H),2.72(br s,2H), 2.46–2.39(m,4H),2.32–2.25(m,4H),1.92(br s,2H),1.87(br s,2H), 1.18–1.05(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H61N6O6 [M+H]+913.4647,实测值：913.4643。
Figure BDA0001927318020000901
35:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(丁-2-炔二酰基)-双(N3,N4-双((1S,2R)-2- 苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (10.8mg,0.0254mmol)、乙炔-二甲酸(1.3mg,0.0115mmol)、PyBrOP (10.7mg,0.0231mmol)、i-Pr2NEt(6μL,0.0346mmol)和DMF(150μL) 产生9.4mg(95％)的35。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝ 4.1Hz,4H),7.28–7.21(m,8H),7.19–7.04(m,12H),3.93(dd,J＝10.7, 7.5Hz,2H),3.85–3.61(m,4H),3.39(dd,J＝12.3,7.1Hz,2H),3.21– 3.09(m,4H),2.86–2.79(m,4H),1.99–1.89(m,4H),1.21–1.09(m, 8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H53N6O6[M+H]+857.4021,实测值：857.4020。
Figure BDA0001927318020000911
36:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-富马酰基-双(N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (10.1mg,0.0237mmol)、富马酸(1.2mg,0.0108mmol)、PyBrOP(10.0 mg,0.0216mmol)、i-Pr2NEt(6μL,0.0346mmol)和DMF(150μL)产生 7.1mg(70％)的36。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.64(dd,J＝8.8, 4.4Hz,4H),7.24(td,J＝7.7,2.4Hz,8H),7.19–7.06(m,12H),7.03(s, 2H),3.88(dd,J＝10.3,7.7Hz,2H),3.67(dd,J＝12.3,8.2Hz,2H),3.62 (dd,J＝10.1,7.3Hz,2H),3.40(dd,J＝12.3,7.2Hz,2H),3.21(q,J＝7.5 Hz,2H),3.17–3.10(m,2H),2.82(dq,J＝7.9,3.7Hz,4H),1.96(ddt,J ＝9.7,6.6,3.7Hz,4H),1.23–1.08(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H55N6O6[M+H]+859.4178,实测值：859.4173。
Figure BDA0001927318020000912
37:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-((E)-己-3-烯二酰基)双-(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (9.6mg,0.0225mmol)、(E)-3-己烯二酸(1.5mg,0.0102mmol)、 PyBrOP(9.6mg,0.0205mmol)、i-Pr2NEt(6μL,0.0346mmol)和DMF (150μL)产生8.8mg(96％)的37。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.36(dd,J＝10.3,4.3Hz,4H),7.25(t,J＝7.5Hz,8H),7.19–7.07(m, 12H),5.56(dd,J＝4.4,2.8Hz,2H),3.76(dd,J＝10.1,8.2Hz,2H),3.66 (dd,J＝11.6,8.3Hz,2H),3.44(t,J＝9.2Hz,2H),3.22(dd,J＝11.6,8.5 Hz,2H),3.19–3.12(m,2H),3.09–3.02(m,6H),2.82(dq,J＝7.8,4.2 Hz,4H),1.93(ddt,J＝10.1,7.0,3.6Hz,4H),1.14(ddd,J＝8.7,5.8,2.9 Hz,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C54H59N6O6[M+H]+887.4491, 实测值：887.4490。
Figure BDA0001927318020000921
38:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-间苯二甲酰基-双-(N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (10.2mg,0.0239mmol)、间苯二甲酸(1.8mg,0.0109mmol)、PyBrOP (10.1mg,0.0218mmol)、i-Pr2NEt(6μL,0.0346mmol)和DMF(150μL) 产生9.4mg(95％)的38。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝ 4.3Hz,2H),8.27(d,J＝4.2Hz,2H),7.61(s,1H),7.59(s,2H),7.51(dd, J＝8.6,6.6Hz,1H),7.30–7.19(m,8H),7.19–7.02(m,12H),3.79(dd, J＝11.9,8.5Hz,2H),3.67–3.61(m,2H),3.51(ddd,J＝10.3,9.1,3.7 Hz,4H),3.22–3.14(m,2H),3.12–3.07(m,2H),2.84(dt,J＝8.6,4.3 Hz,2H),2.77(dd,J＝7.8,4.0Hz,2H),1.96(ddd,J＝9.6,6.4,3.5Hz,2H),1.86(ddd,J＝9.6,6.4,3.4Hz,2H),1.22–1.04(m,8H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C56H57N6O6[M+H]+909.4334,实测值： 909.4339。
Figure BDA0001927318020000931
3:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-对苯二甲酰基-双-(N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (10.9mg,0.0256mmol)、对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,1.9mg,0.0116 mmol)、PyBrOP(10.8mg,0.0233mmol)、i-Pr2NEt(6μL,0.0346mmol) 和DMF(150μL)产生10.0mg(94％)的3。1H NMR(500MHz, DMSO-d6)δ8.51(d,J＝4.2Hz,2H),8.38(s,2H),7.55(s,4H),7.31– 7.19(m,8H),7.19–7.03(m,12H),3.78(dd,J＝12.0,8.4Hz,2H),3.67 –3.60(m,2H),3.55–3.48(m,4H),3.20(q,J＝8.0Hz,2H),3.11(q,J＝ 7.7Hz,2H),2.86–2.82(m,2H),2.80–2.75(m,2H),1.97(td,J＝6.2,3.1 Hz,2H),1.87(td,J＝6.5,6.1,3.2Hz,2H),1.21–1.07(m,8H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C56H57N6O6[M+H]+909.4334,实测值： 909.4334。
Figure BDA0001927318020000932
39:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(4,4'-联苯基二甲酰基)-双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (10.0mg,0.0235mmol)、4,4'-联苯基二甲酸(2.6mg,0.0107mmol)、 PyBrOP(10.0mg,0.0213mmol)、i-Pr2NEt(6μL,0.0346mmol)和DMF (150μL)产生10.1mg(96％)的39。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.53(s,2H),8.40(s,2H),7.77(d,J＝8.4Hz,4H),7.62(d,J＝8.1Hz, 4H),7.24(dt,J＝18.3,7.5Hz,8H),7.19–7.03(m,12H),3.80(dd,J＝ 12.0,8.5Hz,2H),3.70(dd,J＝10.4,7.6Hz,2H),3.59–3.50(m,4H), 3.22(q,J＝8.1Hz,2H),3.13(q,J＝7.8Hz,2H),2.88–2.83(m,2H), 2.81–2.76(m,2H),1.98(ddd,J＝6.7,3.7,3.2Hz,2H),1.87(ddd,J＝9.5, 7.1,3.5Hz,2H),1.23–1.07(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C62H61N6O6[M+H]+985.4647,实测值：985.4648。
Figure BDA0001927318020000941
40:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2,2'-氧基双-(乙酰基))双-(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (10.1mg,0.0237mmol)、二甘醇酸(1.4mg,0.0108mmol)、PyBrOP (10.1mg,0.0216mmol)、i-Pr2NEt(6μL,0.0346mmol)和DMF(150μL) 产生8.9mg(94％)的40。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.37(t,J＝ 4.4Hz,4H),7.25(t,J＝7.6Hz,8H),7.19–7.05(m,12H),4.13(s,4H), 3.70(dt,J＝11.3,8.3Hz,4H),3.39(t,J＝9.3Hz,2H),3.26(dd,J＝11.7, 8.2Hz,2H),3.15(q,J＝8.0Hz,2H),3.03(m,2H),2.86–2.78(m,4H), 1.93(ddt,J＝8.9,6.5,3.1Hz,4H),1.18–1.10(m,8H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C52H57N6O7[M+H]+877.4283,实测值： 877.4285。
Figure BDA0001927318020000942
41:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(顺式-1,3-环己烷-二羰基)双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基-环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (10.5mg,0.0247mmol)、顺式-1,3-环己烷二甲酸(1.9mg,0.0112 mmol)、PyBrOP(10.4mg,0.0224mmol)、i-Pr2NEt(6μL,0.0346mmol) 和DMF(150μL)产生9.8mg(96％)的41。1H NMR(500MHz, DMSO-d6)δ8.40–8.29(m,4H),7.29–7.20(m,8H),7.19–7.05(m, 12H),3.81(dt,J＝17.3,9.4Hz,2H),3.64(ddd,J＝11.8,8.3,5.3Hz,2H), 3.47(ddd,J＝10.0,9.2,8.7Hz,2H),3.25–3.10(m,4H),3.08–3.02(m, 2H),2.85–2.79(m,4H),2.02–1.86(m,6H),1.71–1.57(m,4H),1.28– 1.09(m,12H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H63N6O6[M+H]+ 915.4804,实测值：915.4809。
Figure BDA0001927318020000951
42:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(反式-1,4-环己烷-二羰基)双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基-环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (9.5mg,0.0223mmol)、反式-1,4-环己烷二甲酸(1.7mg,0.0101mmol)、 PyBrOP(9.5mg,0.0203mmol)、i-Pr2NEt(6μL,0.0346mmol)和DMF (150μL)产生8.7mg(93％)的42。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.34(dd,J＝9.8,4.3Hz,4H),7.25(td,J＝7.5,2.0Hz,8H),7.19–7.08(m,12H),3.82(t,J＝10.5Hz,2H),3.66–3.59(m,2H),3.47(t,J＝9.0 Hz,2H),3.21(dd,J＝11.7,8.2Hz,2H),3.18–3.11(m,2H),3.04(m, 2H),2.86–2.79(m,4H),2.42–2.33(m,2H),1.92(dq,J＝9.1,3.4Hz, 4H),1.71(m,4H),1.43–1.33(m,3H),1.15(q,J＝7.5,6.6Hz,10H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H63N6O6[M+H]+915.4804,实测值： 915.4800。
Figure BDA0001927318020000961
43:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(顺式-1,4-环己烷-二羰基)双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (9.8mg,0.0230mmol)、顺式-1,4-环己烷二甲酸(1.8mg,0.0105mmol)、 PyBrOP(9.8mg,0.0209mmol)、i-Pr2NEt(6μL,0.0346mmol)和DMF (150μL)产生9.0mg(94％)的43。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.34(t,J＝4.7Hz,4H),7.25(td,J＝7.5,1.6Hz,8H),7.20–7.06(m,12H),3.78(dd,J＝10.3,8.1Hz,2H),3.64(dd,J＝11.7,8.5Hz,2H), 3.45(t,J＝9.2Hz,2H),3.27–3.19(m,2H),3.19–3.12(m,2H),3.07– 3.02(m,2H),2.85–2.79(m,4H),1.93(ddd,J＝11.2,6.8,3.3Hz,4H), 1.87–1.75(m,4H),1.52–1.42(m,4H),1.15(ddd,J＝8.9,5.9,3.1Hz, 10H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H63N6O6[M+H]+915.4804, 实测值：915.4803。
Figure BDA0001927318020000962
44:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(萘-2,6-二羰基)双(N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (15.3mg,0.0359mmol)、萘-2,6-二甲酸(3.5mg,0.0163mmol)、 PyBrOP(15.2mg,0.0327mmol)、i-Pr2NEt(9μL,0.0522mmol)和DMF (150μL)产生16.7mg(97％)的44。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.46(d,J＝4.3Hz,2H),8.28(d,J＝4.3Hz,2H),8.15(d,J＝1.7Hz,2H), 8.07(d,J＝8.4Hz,2H),7.69–7.63(m,2H),7.27(t,J＝7.5Hz,4H), 7.21(t,J＝7.5Hz,4H),7.19–7.08(m,8H),7.04(d,J＝7.6Hz,4H), 3.86(dd,J＝12.0,8.6Hz,2H),3.70(t,J＝8.8Hz,2H),3.57(dd,J＝11.2, 8.2Hz,4H),3.23(q,J＝8.2Hz,2H),3.12(q,J＝8.0Hz,2H),2.87–2.84(m,2H),2.78–2.74(m,2H),2.00–1.97(m,2H),1.86–1.79(m,2H), 1.20–1.15(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C60H59N6O6[M+H]+ 959.4491,实测值：959.4488。
Figure BDA0001927318020000971
45:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(萘-1,4-二羰基)双(N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (16.3mg,0.0383mmol)、萘-1,4-二甲酸(3.8mg,0.0174mmol)、 PyBrOP(16.2mg,0.0348mmol)、i-Pr2NEt(9μL,0.0522mmol)和DMF (150μL)产生14.3mg(86％)的45。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.42(d,J＝4.2Hz,2H),8.19(d,J＝4.3Hz,2H),7.85(dd,J＝6.4,3.4 Hz,2H),7.59(dd,J＝6.5,3.4Hz,2H),7.52(s,2H),7.27(t,J＝7.6Hz, 4H),7.21(t,J＝7.6Hz,4H),7.19–7.08(m,8H),7.06–7.00(m,4H), 3.93(dd,J＝11.5,9.0Hz,2H),3.68(dd,J＝12.0,7.5Hz,2H),3.39–3.35 (m,2H),3.25(q,J＝7.6Hz,2H),3.22–3.15(m,2H),3.08(q,J＝7.6Hz, 2H),2.87–2.84(m,2H),2.76–2.68(m,2H),2.02–1.96(m,2H),1.79 –1.74(m,2H),1.21–0.98(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C60H59N6O6[M+H]+959.4491,实测值：959.4484。
Figure BDA0001927318020000981
46:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-((1,3-亚苯基)二乙酰基)-双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (15.7mg,0.0369mmol)、1,3-亚苯基-二乙酸(3.3mg,0.0168mmol)、 PyBrOP(15.6mg,0.0335mmol)、i-Pr2NEt(9μL,0.0522mmol)和DMF (150μL)产生1.8mg(11％)的46。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.38(d,J＝4.3Hz,2H),8.35(d,J＝4.3Hz,2H),7.25(td,J＝7.7,1.5Hz, 8H),7.15(t,J＝7.4Hz,4H),7.10–7.06(m,12H),3.81(dd,J＝9.5,8.0 Hz,2H),3.69(dd,J＝12.0,8.0Hz,2H),3.58(s,4H),3.50(t,J＝9.2Hz, 2H),3.29–3.22(m,2H),3.17(q,J＝8.2Hz,2H),3.06(q,J＝8.3Hz, 2H),2.84–2.80(m,4H),1.96–1.89(m,4H),1.18–1.10(m,8H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C58H61N6O6[M+H]+937.4647,实测值： 937.4650。
Figure BDA0001927318020000982
47:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(萘-1,5-二羰基)双(N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (12.8mg,0.0300mmol)、萘-1,5-二甲酸(2.9mg,0.0137mmol)、 PyBrOP(12.7mg,0.0273mmol)、i-Pr2NEt(9μL,0.0522mmol)和DMF (150μL)产生13.0mg(99％)的47。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.42(d,J＝4.2Hz,2H),8.18(d,J＝4.2Hz,2H),7.85(d,J＝8.3Hz,2H), 7.59(dd,J＝8.4,7.0Hz,2H),7.55–7.50(m,2H),7.31–7.07(m,16H), 7.05–6.99(m,4H),3.94(t,J＝10.4Hz,2H),3.67(dd,J＝11.8,7.3Hz, 2H),3.37–3.33(m,4H),3.29–3.14(m,4H),3.07(q,J＝7.6Hz,2H), 2.90–2.81(m,2H),2.75–2.68(m,2H),2.02–1.95(m,2H),1.79– 1.75(m,2H),1.22–0.99(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C60H59N6O6[M+H]+959.4491,实测值：959.4494。
Figure BDA0001927318020000991
48:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-((1,4-亚苯基)二乙酰基)-双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (11.2mg,0.0263mmol)、1,4-亚苯基-二乙酸(2.3mg,0.0120mmol)、 PyBrOP(11.1mg,0.0239mmol)、i-Pr2NEt(9μL,0.0522mmol)和DMF (150μL)产生9.9mg(89％)的48。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.39(d,J＝4.4Hz,2H),8.34(d,J＝4.3Hz,2H),7.25(td,J＝7.6,2.8Hz, 10H),7.17–7.07(m,14H),3.82(t,J＝9.0Hz,2H),3.69(dd,J＝12.0, 8.5Hz,2H),3.56(s,4H),3.51(dd,J＝10.5,8.5Hz,2H),3.26(dd,J＝ 11.0,8.0Hz,2H),3.21–3.13(m,2H),3.06(t,J＝8.4Hz,2H),2.84–2.80 (m,4H),1.92(dt,J＝8.0,4.0Hz,4H),1.20–1.11(m,8H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C58H61N6O6[M+H]+937.4647,实测值： 937.4649。
Figure BDA0001927318020001001
49:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(噻吩-2,5-二羰基)-双(N3,N4-双((1S,2R)-2- 苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (17.8mg,0.0418mmol)、噻吩-2,5-二甲酸(3.3mg,0.0190mmol)、 PyBrOP(17.7mg,0.0380mmol)、i-Pr2NEt(10μL,0.0570mmol)和 DMF(300μL)产生9.5mg(55％)的49。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝4.2Hz,2H),8.37(d,J＝4.2Hz,2H),7.56(s,2H),7.29– 7.20(m,8H),7.20–7.06(m,12H),4.09–4.01(m,3H),3.86–3.74(m, 3H),3.57–3.46(m,2H),3.21(q,J＝7.9Hz,2H),3.15(q,J＝8.0Hz, 2H),2.84(m,4H),1.95(m,4H),1.21–1.11(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C54H55N6O6S[M+H]+915.3898,实测值：915.3901。
Figure BDA0001927318020001002
50:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(吡嗪-2,5-二羰基)-双(N3,N4-双((1S,2R)-2- 苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (20.3mg,0.0477mmol)、吡嗪-2,5-二甲酸(3.6mg,0.0217mmol)、 PyBrOP(20.2mg,0.0433mmol)、i-Pr2NEt(11μL,0.0650mmol)和DMF (300μL)产生14.3mg(73％)的50。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.96(s,2H),8.46(d,J＝4.3Hz,2H),8.38(d,J＝4.3Hz,2H),7.30–7.20(m,8H),7.19–7.04(m,12H),4.01–3.95(m,2H),3.94–3.85(m, 2H),3.75–3.66(m,2H),3.62–3.54(m,2H),3.20–3.12(m,4H),2.85 (dd,J＝7.8,3.9Hz,2H),2.80(dq,J＝6.7,3.2,2.5Hz,2H),1.98–1.95 (m,2H),1.89(td,J＝7.9,3.4Hz,2H),1.22–1.09(m,8H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C54H55N8O6[M+H]+911.4239,实测值： 911.4239。
Figure BDA0001927318020001011
51:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(吡啶-2,5-二羰基)-双(N3,N4-双((1S,2R)-2- 苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (20.1mg,0.0472mmol)、吡啶-2,5-二甲酸(3.6mg,0.0214mmol)、 PyBrOP(20.0mg,0.0429mmol)、i-Pr2NEt(10μL,0.0643mmol)和 DMF(300μL)产生19.4mg(99％)的51。1H NMR(500MHz,DMSO-d6) δ8.72(dd,J＝2.1,0.9Hz,1H),8.42(d,J＝4.3Hz,2H),8.34(d,J＝4.2 Hz,1H),8.28(d,J＝4.3Hz,1H),8.07(dd,J＝8.1,2.2Hz,1H),7.81(dd, J＝8.1,0.8Hz,1H),7.29–7.20(m,8H),7.18–7.04(m,12H), 3.99–3.95(m,1H),3.91–3.80(m,2H),3.69(dd,J＝10.4,7.5Hz,2H), 3.54(dd,J＝11.0,8.1Hz,3H),3.16(dq,J＝21.2,8.4Hz,4H),2.85(dq, J＝8.2,4.2Hz,2H),2.78(ddd,J＝11.5,6.5,3.1Hz,2H),1.97(ddd,J＝ 10.0,7.0,3.6Hz,2H),1.92–1.83(m,2H),1.21–1.06(m,8H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C55H56N7O6[M+H]+910.4287,实测值： 910.4287。
Figure BDA0001927318020001021
52:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-((2E,4E)-己-2,4-二烯二酰基)-双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (19.0mg,0.0446mmol)、反式,反式-粘康酸(2.9mg,0.0203mmol)、 PyBrOP(18.9mg,0.0406mmol)、i-Pr2NEt(9μL,0.0522mmol)和DMF (300μL)产生17.5mg(98％)的52。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.45(dd,J＝13.2,4.1Hz,2H),7.25(t,J＝7.6Hz,8H),7.21(dd,J＝11.0, 3.0Hz,2H),7.17–7.07(m,12H),6.81–6.72(m,2H),3.93–3.84(m, 2H),3.73(dd,J＝12.1,8.2Hz,2H),3.57(dd,J＝10.3,7.8Hz,2H),3.38 –3.34(m,4H),3.19(q,J＝8.0Hz,2H),3.08(q,J＝8.0Hz,2H),2.83 (dq,J＝8.1,4.4Hz,4H),1.96–1.92(m,4H),1.22–1.11(m,8H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C54H57N6O6[M+H]+885.4334,实测值： 885.4333。
Figure BDA0001927318020001022
53:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-羟基对苯二甲酰基)-双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (18.5mg,0.0434mmol)、2-羟基对苯二甲酸(3.6mg,0.0197mmol)、 PyBrOP(18.4mg,0.0395mmol)、i-Pr2NEt(9μL,0.0522mmol)和DMF (300μL)产生18.0mg(98％)的53。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.21(s,1H),8.39(d,J＝5.2Hz,2H),8.28(d,J＝5.2Hz,2H),7.30– 7.18(m,10H),7.18–7.04(m,12H),6.99–6.94(m,1H),3.85–3.62(m, 4H),3.54–3.40(m,4H),3.22–3.14(m,2H),3.10(q,J＝8.7Hz,2H), 2.87–2.80(m,2H),2.79–2.75(m,2H),2.00–1.93(m,2H),1.89–1.82(m,2H),1.20–1.12(m,4H),1.12–1.05(m,4H).HRMS(ESI-TOF) m/z计算值：C56H57N6O7[M+H]+925.4283,实测值：925.4286。
Figure BDA0001927318020001031
54:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-硝基对苯二甲酰基)-双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (20.1mg,0.0472mmol)、2-硝基对苯二甲酸(4.5mg,0.0214mmol)、PyBrOP(20.0mg,0.0429mmol)、i-Pr2NEt(10μL,0.0643mmol)和 DMF(300μL)产生20.2mg(98％)的54。1H NMR(500MHz, DMSO-d6)δ8.43(t,J＝4.8Hz,2H),8.30(t,J＝4.2Hz,2H),8.26(d,J＝ 1.5Hz,1H),7.97(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),7.67(d,J＝7.8Hz,1H),7.30 –7.18(m,8H),7.18–7.03(m,12H),3.89–3.80(m,2H),3.69(t,J＝9.0 Hz,1H),3.60–3.45(m,4H),3.29–3.08(m,5H),2.85(dq,J＝8.3,4.3 Hz,2H),2.81–2.73(m,2H),2.01–1.94(m,2H),1.85(dddd,J＝12.9, 9.4,6.6,3.3Hz,2H),1.22–1.05(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H56N7O8[M+H]+954.4185,实测值：954.4187。
Figure BDA0001927318020001041
55:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-氨基-对苯二甲酰基)-双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
将化合物54(6.2mg,0.0065mmol)在室温下溶解于无水丙酮 (300μL)，添加锌纳米粉末(6.4mg,0.0975mmol,15当量)，形成灰色悬浮液。滴加NH4Cl饱和水溶液(200μL)，之后反应溶液变为清澈，盐沉淀。15分钟后，将混合物用EtOAc(5mL)和0.1N HCl水溶液(5 mL)稀释。将水相用EtOAc(3mL)萃取，将合并的萃取物用饱和 NaHCO3水溶液(3mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用 Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到5.0mg(83％)的55。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.39(d,J＝4.7Hz,2H),8.29(d,J＝4.2Hz,2H), 7.24(dt,J＝15.5,7.5Hz,10H),7.19–7.03(m,13H),5.53(s,2H),3.74 (t,J＝10.2Hz,2H),3.68–3.63(m,2H),3.52–3.39(m,4H),3.17(q,J＝ 8.4Hz,2H),3.12–3.05(m,2H),2.87–2.81(m,2H),2.80–2.75(m,2H),1.98–1.93(m,2H),1.89–1.84(m,2H),1.20–1.06(m,8H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H58N7O6[M+H]+924.4443,实测值： 924.4444。
Figure BDA0001927318020001042
56:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)-对苯二甲酰基)双 (N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (20.5mg,0.0481mmol)、2-(丙-2-炔-1-基氧基)对苯二甲酸(4.8mg, 0.0219mmol)、PyBrOP(20.4mg,0.0438mmol)、i-Pr2NEt(11μL,0.0656 mmol)和DMF(300μL)产生18.6mg(89％)的56。1H NMR(500MHz, DMSO-d6)δ8.40(dd,J＝10.1,4.3Hz,2H),8.30–8.23(m,2H),7.32– 7.19(m,10H),7.19–7.02(m,13H),4.94–4.91(m,2H),3.82–3.77(m, 2H),3.69–3.62(m,1H),3.57–3.39(m,3H),3.28–3.18(m,4H),3.17 (s,1H),3.11(t,J＝7.8Hz,2H),2.84(dq,J＝8.5,4.3Hz,2H),2.77(dq,J ＝8.4,4.1Hz,2H),2.00–1.94(m,2H),1.90–1.81(m,2H),1.21–1.05(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C59H59N6O7[M+H]+963.4440, 实测值：963.4442。
Figure BDA0001927318020001051
57:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-甲氧基-对苯二甲酰基)-双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (23.3mg,0.0545mmol)、2-甲氧基-对苯二甲酸(4.9mg,0.0248mmol)、 PyBrOP(20.4mg,0.0438mmol)、i-Pr2NEt(11μL,0.0656mmol)和DMF (300μL)产生23.0mg(98％)的57。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.40(dd,J＝11.9,4.3Hz,2H),8.27(d,J＝4.2Hz,2H),7.31–7.19(m, 10H),7.19–7.02(m,13H),3.81(s,3H),3.83–3.77(m,2H),3.66(t,J＝ 2.5Hz,1H),3.51(td,J＝10.5,9.2,3.7Hz,2H),3.42(t,J＝9.8Hz,2H), 3.24–3.14(m,3H),3.10(t,J＝8.1Hz,2H),2.88–2.81(m,2H),2.77 (dt,J＝8.1,4.2Hz,2H),1.96(dq,J＝9.4,3.4Hz,2H),1.89–1.82(m,2H),1.20–1.06(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C57H59N6O7 [M+H]+939.4440,实测值：939.4440。
Figure BDA0001927318020001061
58:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-溴对苯二甲酰基)-双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (16.7mg,0.0392mmol)、2-溴对苯二甲酸(4.4mg,0.0178mmol)、 PyBrOP(16.6mg,0.0356mmol)、i-Pr2NEt(10μL,0.0535mmol)和 DMF(250μL)产生13.7mg(78％)的58。1H NMR(500MHz, DMSO-d6)δ8.41(dd,J＝3.5Hz,2H),8.29(dd,J＝13.8,4.2Hz,2H), 7.78(d,J＝1.5Hz,1H),7.57(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.43(d,J＝7.8 Hz,1H),7.30–7.19(m,8H),7.19–7.02(m,12H),3.85(dd,J＝12.0, 8.5Hz,1H),3.78(dd,J＝11.9,8.5Hz,1H),3.65(dd,J＝10.3,7.8Hz,1H),3.55–3.39(m,4H),3.25–3.06(m,6H),2.84(dq,J＝8.4,4.2Hz, 2H),2.77(q,J＝5.4Hz,2H),1.96(dq,J＝9.2,3.3Hz,2H),1.86(td,J＝ 7.5,3.4Hz,2H),1.22–1.06(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C56H56BrN6O6[M+H]+987.3439,实测值：987.3441。
Figure BDA0001927318020001062
59:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2,5-二羟基-对苯二甲酰基)双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (21.2mg,0.0498mmol)、2,5-二羟基对苯二甲酸(4.5mg,0.0226mmol)、 PyBrOP(21.1mg,0.0452mmol)、i-Pr2NEt(12μL,0.0679mmol)和 DMF(250μL)产生19.0mg(89％)的59。1H NMR(600MHz,DMSO-d6) δ9.47(s,1H),8.86(s,1H),8.39(d,J＝4.2Hz,2H),8.30(d,J＝4.2Hz,2H),7.31–7.19(m,8H),7.19–7.02(m,12H),6.66(s,1H),6.36(s,1H), 3.84–3.73(m,2H),3.54(q,J＝9.0Hz,2H),3.45–3.34(m,3H),3.23– 3.13(m,3H),3.09(q,J＝8.9Hz,2H),2.83(dt,J＝7.7,3.9Hz,2H),2.80 –2.73(m,2H),1.96(dq,J＝8.5,4.9,4.0Hz,2H),1.86(td,J＝8.2,7.6, 3.2Hz,2H),1.21–1.05(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C56H57N6O8[M+H]+941.4232,941.4231。
Figure BDA0001927318020001071
60:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(全氟对苯二甲酰基)-双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (17.4mg,0.0408mmol)、四氟对苯二甲酸(4.4mg,0.0186mmol)、 PyBrOP(17.3mg,0.0371mmol)、i-Pr2NEt(10μL,0.0557mmol)和 DMF(250μL)产生13.7mg(75％)的60。1H NMR(600MHz,DMSO-d6) δ8.44(d,J＝4.2Hz,2H),8.38(d,J＝4.5Hz,2H),7.30–7.20(m,8H), 7.19–7.04(m,12H),3.85(dd,J＝12.2,8.5Hz,2H),3.72(d,J＝7.3Hz, 2H),3.55(d,J＝10.2Hz,2H),3.45–3.36(m,2H),3.25–3.10(m,4H), 2.84(ddt,J＝7.5,6.1,3.7Hz,2H),2.82–2.77(m,2H),1.97(dt,J＝8.4, 3.8Hz,2H),1.91–1.85(m,2H),1.22–1.09(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H53F4N6O6[M+H]+981.3957,实测值：981.3957。
Figure BDA0001927318020001081
61:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2,5-二氯对苯二甲酰基)-双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (15.4mg,0.0362mmol)、2,5-二氯对苯二甲酸(3.9mg,0.0164mmol)、 PyBrOP(15.3mg,0.0329mmol)、i-Pr2NEt(10μL,0.0493mmol)和 DMF(250μL)产生14.0mg(87％)的61。1H NMR(500MHz,DMSO-d6) δ8.42(d,J＝4.2Hz,2H),8.35–8.27(m,2H),7.68(s,2H),7.27–7.20 (m,8H),7.19–7.03(m,12H),3.83(dd,J＝12.0,8.4Hz,2H),3.47(dd,J ＝11.9,8.0Hz,4H),3.28–3.12(m,6H),2.84(dd,J＝7.7,3.9Hz,2H), 2.79–2.74(m,2H),1.98–1.93(m,2H),1.88(td,J＝8.0,3.4Hz,2H), 1.22–1.05(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H55Cl2N6O6 [M+H]+977.3555,实测值：977.3557。
Figure BDA0001927318020001082
62:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2,5-二溴对苯二甲酰基)-双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (18.0mg,0.0423mmol)、2,5-二溴对苯二甲酸(6.2mg,0.0192mmol)、 PyBrOP(18.0mg,0.0384mmol)、i-Pr2NEt(10μL,0.0576mmol)和 DMF(250μL)产生17.4mg(85％)的62。1H NMR(500MHz,DMSO-d6) δ8.41(d,J＝4.2Hz,2H),8.32(d,J＝4.2Hz,2H),7.76(s,2H),7.27– 7.20(m,8H),7.19–7.03(m,12H),3.83(dd,J＝11.9,8.3Hz,2H),3.46 (t,J＝10.1Hz,4H),3.24–3.13(m,6H),2.84(dd,J＝7.6,4.1Hz,2H), 2.76(t,J＝5.5Hz,2H),1.96(td,J＝6.5,3.4Hz,2H),1.89(td,J＝7.7, 3.2Hz,2H),1.14(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C56H55Br2N6O6[M+H]+1065.2544,实测值：1065.2545。
Figure BDA0001927318020001091
63:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2,5-二甲基对苯二甲酰基)-双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺).
使用连接二酸偶联的一般程序：吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐S-2 (20.1mg,0.0472mmol)、2,5-二甲基对苯二甲酸(4.2mg,0.0214)、 PyBrOP(20.0mg,0.0429mmol)、i-Pr2NEt(11μL,0.0643mmol)和DMF (250μL)产生11.0mg(55％)的63。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ 8.40(d,J＝4.3Hz,2H),8.27(d,J＝4.3Hz,2H),7.27–7.21(m,8H), 7.18–7.03(m,14H),3.79(dd,J＝11.8,8.4Hz,2H),3.50(dd,J＝11.9, 7.1Hz,2H),3.38(dd,J＝10.5,7.5Hz,2H),3.20–3.16(m,4H),3.09(q, J＝7.5Hz,2H),2.83(dq,J＝8.6,4.4Hz,2H),2.79–2.73(m,2H),2.17 (s,6H),1.95(ddd,J＝9.7,6.5,3.3Hz,2H),1.85(ddd,J＝9.5,6.6,3.4Hz,2H),1.23–1.04(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C58H61N6O6[M+H]+937.4647,实测值：937.4650。
Diprovocim-2:侧链替代类似物
Figure BDA0001927318020001092
S-27:反式-1-苄基吡咯烷-3,4-二甲酸二甲酯
将富马酸二甲酯(2.4g,16.7mmol,1当量)和N-苄基-1-甲氧基 -N-((三甲基甲硅烷基)甲基)甲胺(4.8g,16.7mmol,1当量)在40mL MeCN中的溶液用一份LiF(640mg,25mmol,1.25当量)处理。将反应溶液超声处理18小时。将反应悬浮液倒入EtOAc(100mL)和H2O(150mL)，将水层用EtOAc(2×100mL)萃取，用饱和NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥。将粗产物通过快速柱色谱(SiO2,10–20％EtOAc/ 己烷)纯化以得到S-27，为黄色油状物(4.3g,83％)。1H NMR(400MHz, CDCl3)δ7.40–7.27(m,5H),3.70(s,6H),3.61(s,2H),3.51–3.40(m,2H),2.96–2.85(m,2H),2.84–2.72(m,2H)。
Figure BDA0001927318020001101
S-28:反式-吡咯烷-1,3,4-三甲酸1-(叔丁酯)3,4-二甲酯
将S-27在MeOH(175mL)中的溶液用Pd(OH)2/C(20％重量,450 mg)和Boc2O(6.65g,30.5mmol,1.75当量)和抹刀尖端量的4-二甲基氨基-吡啶(DMAP)处理。将反应溶液用H2吹扫，在1大气压的H2下搅拌16小时。将反应混合物过滤通过
Figure BDA0001927318020001102
垫，用Et2O洗脱。粗产物通过快速柱色谱(SiO2,10–25％EtOAc/己烷)纯化以得到S-28，为透明油状物(4.0g,80％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.79(m,2H), 3.73(s,6H),3.52(m,2H),3.41(m,2H)。
Figure BDA0001927318020001103
S-29:反式-1-(叔丁氧基羰基)-吡咯烷-3,4-二甲酸.
将S-28在THF/MeOH/H2O(4:1:1,150mL)中的溶液用固体 LiOH·H2O处理。将反应混合物在23℃搅拌3小时，然后倒入EtOAc (100mL)，用0.5M HCl水溶液(100mL)洗涤，用EtOAc(2×100mL) 萃取，用饱和NH4Cl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥。将粗产物分离为白色固体(S-29,3.58g,99％)，不经另外的纯化即使用。1H NMR(400 MHz,甲醇-d4)δ3.70–3.63(m,2H),3.57–3.51(m,2H),3.37(m,2H), 1.47(s,9H)。
Figure BDA0001927318020001104
S-30:富马酸苄酯甲酯
将富马酸甲酯(4.0g,30.75mmol)在80mL的DMF中的溶液在 23℃用固体K2CO3(5.1g,36.9mmol,1.2当量)，接着用BnBr(3.68mL, 30.75,1当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌4小时，然后倒入 EtOAc(200mL)，用0.5M HCl水溶液(200mL)洗涤。将产物在EtOAc(3×200mL)中萃取，用饱和NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥。将粗产物通过快速柱色谱(SiO2,10％EtOAc/己烷)纯化以得到S-30，为白色固体(6.02g,89％产率)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.41– 7.28(m,5H),6.84(s,2H),5.22(s,2H),3.77(s,3H)。
Figure BDA0001927318020001111
S-31:反式-1-苄基吡咯烷-3,4-二甲酸3-苄酯4-甲酯
将S-30(4.4g,20mmol,1当量)和N-苄基-1-甲氧基-N-((三甲基甲硅烷基)-甲基)-甲胺(4.8g,20mmol,1当量)在40mL MeCN中的溶液用一份LiF(640mg,25mmol,1.25当量)处理。将反应混合物超声处理16小时。将反应悬浮液倒入EtOAc(100mL)和H2O(150mL)，水层用EtOAc(2×100mL)萃取，用饱和NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥。将粗产物通过快速柱色谱(SiO2,10–20％EtOAc/己烷)纯化以得到S-31，为黄色油状物(16.6g,83％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.26(m,10H),5.12(s,2H),3.66(s,3H),3.58(s,2H),3.47(t,J＝5.7Hz, 2H),2.95–2.71(m,4H)。
Figure BDA0001927318020001112
S-32:反式-4-(甲氧基羰基)-吡咯烷-3-甲酸
将S-31在120mL的MeOH中的溶液用Pd(OH)2/C(425mg)处理。将反应容器用H2吹扫，将反应悬浮液在H2(1大气压)下搅拌16小时。将反应混合物过滤通过
Figure BDA0001927318020001113
垫，浓缩以得到S-32，为粘性的油状物(2.07g,99％)，其不经进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ3.78(s,3H),3.66–3.57(m,4H),3.57–3.47(m,2H)。
Figure BDA0001927318020001121
S-33:反式-1-(叔丁氧基羰基)-4-(甲氧基羰基)吡咯烷-3-甲酸
将S-32(50mg,0.27mmol)在二噁烷(0.6mL)中的悬浮液用Boc2O (87mg,0.40mmol,1.5当量)和NEt3(0.74mL,0.53mmol,2当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌40小时，然后用EtOAc(5mL)稀释，用15％柠檬酸水溶液(5mL)洗涤。将水层用EtOAc(3×5mL)萃取，用饱和NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥。将粗产物通过快速柱色谱 (SiO2,10％MeOH/CH2Cl2)纯化以得到S-33，为白色固体(50mg, 68％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.72(s,3H),3.68(m,2H),3.54(m, 2H),3.39(m,2H),1.43(s,9H)。
Figure BDA0001927318020001122
65:反式-3,4-双((4-氟苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将S-29(260mg,1mmol,1当量)、EDCI·HCl(671mg,3.5mmol, 3.5当量)和2-(4-氟苯基)乙烷-1-胺盐酸盐(386mg,2.2mmol,2.2当量) 在10mL DMF中的溶液用i-Pr2NEt(1.22mL,7mmol,7当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌24小时，然后倒入EtOAc(20mL)，用1M HCl水溶液(50mL)洗涤，用EtOAc(2×30mL)萃取，用饱和NaCl 水溶液洗涤，用Na2SO4干燥。将粗产物通过快速柱色谱(SiO2,75％ EtOAc/己烷)纯化以得到65，为白色固体(80mg,16％)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ7.10(d,J＝6.5Hz,4H),6.98(t,J＝8.5Hz,4H),6.23(s,1H),6.00(s,1H),3.83–3.67(m,1H),3.60(t,J＝9.9Hz,1H),3.55– 3.44(m,2H),3.45–3.26(m,4H),3.17(dd,J＝17.7,7.8Hz,1H),3.01(t, J＝9.9Hz,1H),2.75(t,J＝7.0Hz,4H),1.44(s,9H)。
Figure BDA0001927318020001131
S-34:反式-N3,N4-双(4-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
将反式-3,4-双((4-氟苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯 (65；80mg,0.16mmol)在4M HCl/二噁烷(2mL)中的溶液在23℃搅拌 3小时，在此期间白色固体从反应混合物沉淀出来。在N2流下除去溶剂，将粗产物溶于THF(3mL)并浓缩。重复该过程(3×3mLTHF 和3×3mL Et2O)以得到S-34，为白色固体(78mg,98％)，其不经另外的纯化即使用。1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.24(b,1H),7.22(dd,J ＝8.5,5.4Hz,4H),7.01(t,J＝8.7Hz,4H),3.51(dd,J＝11.6,7.0Hz, 2H),3.48–3.35(m,6H),3.20(t,J＝5.4Hz,2H),2.79(td,J＝7.2,2.8 Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001132
69:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(4-氟-苯乙基)-吡咯烷-反式 -3,4-二甲酰胺)
将反式-N3,N4-双(4-氟苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-34； 78mg,0.16mmol,2.5当量)在DMF(1.6mL)中的溶液用对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,10.5mg,0.064mmol,1当量)、PyBrOP(75mg,0.16 mmol,2.5当量)和i-Pr2NEt(56μL,0.32mmol,5当量)处理。将反应混合物置于机械振摇器上72小时，随后混合物用EtOAc(3mL)稀释，用0.5NHCl水溶液(2×3mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×3mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液 (10mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将产物通过用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc(3×5mL)研磨纯化，倾析掉液相以得到113 mg(75％)的69，为白色固体。1H NMR(600MHz,HFIP-d2)δ7.63– 7.57(m,4H),7.19(h,J＝5.2,4.7Hz,4H),7.11(qd,J＝8.2,5.3,4.8Hz, 4H),7.08–7.01(m,4H),6.95(dq,J＝8.9,4.7Hz,4H),4.06(dd,J＝ 12.5,8.4Hz,2H),3.69(t,J＝11.0Hz,4H),3.64–3.53(m,4H),3.53– 3.39(m,6H),3.23(ddt,J＝31.9,17.9,7.3Hz,4H),2.82(dt,J＝10.6,6.8 Hz,4H),2.74(dq,J＝10.2,6.3Hz,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C52H52F4N6O6[M+H]+933.3957,实测值：933.3960。
Figure BDA0001927318020001141
S-35:反式-4-((4-氟苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1,3-二甲酸1-(叔丁酯)3-甲酯
将2-(4-氟苯基)乙烷-1-胺盐酸盐(263mg,1.5mmol,1.5当量)和 PyBOP(780mg,1.5mmol,1.5当量)在DMF(9.5mL)中的溶液用反式 -1-(叔丁氧基羰基)-4-(甲氧基羰基)吡咯烷-3-甲酸(S-33；0.55mL的0.5 M的DMF溶液,1mmol,1当量)，接着用i-Pr2NEt(0.525mL,3mmol, 3当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌48小时。将反应混合物用 EtOAc(20mL)稀释，用1M HCl水溶液(50mL)洗涤。将水层用EtOAc (2×50mL)萃取，用饱和NaHCO3水溶液(150mL)洗涤，用饱和NaCl 水溶液洗涤，用Na2SO4干燥。将粗产物通过快速柱色谱(SiO2,75％ EtOAc/己烷)纯化以得到S-35，为褐色固体(161mg,41％)。1H NMR (400MHz,CDCl3)δ7.12(t,J＝6.8Hz,2H),6.97(t,J＝8.4Hz,2H), 6.10(d,J＝43.0Hz,1H),3.82(m,2H),3.68(s,3H),3.57–3.42(m,2H), 3.35(m,2H),3.31–3.22(m,1H),3.13–3.02(m,1H),2.78(t,J＝7.0 Hz,2H),1.50–1.36(m,9H)。
Figure BDA0001927318020001151
S-36:反式-1-(叔丁氧基羰基)-4-((4-氟-苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-甲酸
将固体LiOH·H2O(222mg,5.3mmol,5当量)在23℃添加至反式 -4-((4-氟苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1,3-二甲酸1-(叔丁酯)3-甲酯 (S-35；419mg,1.06mmol)在THF:MeOH:H2O(11mL,4:1:1)中的溶液中。将反应混合物在23℃搅拌2.5小时。将反应混合物倒入50mLEtOAc，添加1M HCl水溶液(50mL)猝灭。将水层用EtOAc(2×50mL) 萃取，用饱和NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥。将粗产物分离为白色固体(S-36；400mg,99％)，不经另外的纯化即用于下一步。1H NMR (400MHz,甲醇-d4)δ6.99–6.86(m,2H),6.70(t,J＝9.9Hz,2H),3.43 (dd,J＝10.8,8.5Hz,1H),3.31(t,J＝6.9Hz,2H),3.28–3.05(m,4H), 2.90(t,J＝8.3Hz,1H),2.57–2.40(m,2H),1.17(s,9H)。
Figure BDA0001927318020001152
64:反式-3-((4-氟-苯乙基)-氨基甲酰基)-4-(苯乙基氨基甲酰基) 吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将反式-1-(叔丁氧基-羰基)-4-((4-氟苯乙基)氨基甲酰基)-吡咯烷 -3-甲酸(S-36；400mg,1.05mmol,1当量)、2-苯基乙烷-1-胺(0.20mL, 1.58mmol,1.5当量)和i-Pr2NEt(0.55mL,3.15mmol,3当量)在DMF (11mL)中的溶液用PyBOP(822mg,1.58mmol,1.5当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌16小时。将反应混合物倒入EtOAc(25mL)，用1M HCl水溶液(25mL)洗涤。将水层用EtOAc(2×25mL)萃取，用饱和NaHCO3水溶液(75mL)、饱和NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥。将粗混合物通过快速柱色谱(SiO2,60–80％EtOAc/己烷)纯化以得到64，为白色固体(318mg,63％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.24(b,2H),7.41(t,J＝7.6Hz,2H),7.38–7.27(m,5H),7.13(t,J＝8.6 Hz,2H),3.78(q,J＝9.7,9.2Hz,2H),3.69–3.48(m,2H),3.44–3.32 (m,4H),3.29(dd,J＝15.0,8.3Hz,2H),2.99–2.84(m,4H),1.60(s,9H)。
Figure BDA0001927318020001161
S-37:反式-N3-(4-氟苯乙基)-N4-苯乙基-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
将反式-3-((4-氟苯乙基)-氨基甲酰基)-4-(苯乙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(64；104mg,0.215mmol)在4M HCl/二噁烷(2mL) 的溶液中在23℃搅拌3小时，在此期间白色固体从反应混合物沉淀出来。在N2流下除去溶剂，将粗产物溶于THF(3mL)，浓缩(重复3 次)以得到S-37，为白色固体(80mg,98％)，其不经另外的纯化即使用。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.27(t,J＝6.6Hz,2H),7.24–7.14(m, 5H),6.99(t,J＝8.4Hz,2H),3.72–3.57(m,2H),3.52–3.10(m,8H), 2.86–2.67(m,4H),1.46(s,9H)。
Figure BDA0001927318020001171
67:1,1'-对苯二甲酰基双(N3-(4-氟苯乙基)-N4-苯乙基吡咯烷-反式-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：反式-N3-(4-氟苯乙基)-N4-苯乙基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-37；20mg,0.052mmol,2.2当量)、对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,4.0mg,0.024mmol,1当量)、PyBrOP(27mg, 0.058mmol,2.4当量)和i-Pr2NEt(21μL,0.12mmol,5当量)/DMF(1 mL)产生67(17mg,82％)。1H NMR(600MHz,HFIP-d2)δ7.60(d,J＝ 1.3Hz,4H),7.40(t,J＝7.4Hz,2H),7.31(t,J＝7.6Hz,3H),7.26(d,J＝ 7.8Hz,3H),7.19(tt,J＝6.4,3.7Hz,4H),7.15–7.09(m,2H),7.05(t,J ＝8.7Hz,2H),6.96(t,J＝8.7Hz,2H),4.06(dd,J＝12.6,8.3Hz,2H), 3.69(s,6H),3.66–3.40(m,8H),3.28–3.14(m,4H),2.86(t,J＝6.9Hz,2H),2.82(t,J＝7.0Hz,2H),2.80–2.76(m,2H),2.73(t,J＝7.3Hz,2H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H54F2N6O6[M+H]+897.4145,实测值：897.4118。
Figure BDA0001927318020001181
66:1-(4-(-3,4-双(苯乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3-(4-氟-苯乙基)-N4-苯乙基吡咯烷-反式-3,4-二甲酰胺
将4-(反式-3,4-双(苯乙基-氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸 (S-8；16mg,0.031mmol,1当量)、反式-N3-(4-氟-苯乙基)-N4-苯乙基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-37；12mg,0.031mmol,1当量)和 PyBrOP(16mg,0.034mmol,1.1当量)在DMF(500μL)中的溶液用 i-Pr2NEt(16μL,0.093mmol,3当量)处理。将反应在23℃搅拌36小时，随后混合物用EtOAc(3mL)稀释，用0.5N HCl水溶液(2×3mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×3mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将产物通过用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc(3×5mL)研磨纯化，倾析掉液相以得到14mg(51％)的66，为白色固体。1H NMR (600MHz,HFIP-d2)δ7.59(s,4H),7.48–7.37(m,4H),7.37–7.29(m, 4H),7.26(d,J＝7.4Hz,4H),7.22–7.16(m,4H),7.15–7.10(m,1H),7.09–7.03(m,1H),7.01–6.93(m,1H),4.11–4.00(m,2H),3.75– 3.64(m,4H),3.64–3.58(m,2H),3.52–3.40(m,8H),3.21–3.11(m, 4H),2.89–2.80(m,4H),2.80–2.71(m,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H55FN6O6[M+H]+879.424,实测值：879.4222。
Figure BDA0001927318020001191
S-38:4-(反式-3,4-双((4-氟苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酸甲酯
将4-(甲氧基羰基)苯甲酸(26mg,0.14mmol,1当量)、反式 -N3,N4-双(4-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-34；62mg,0.14 mmol,1.0当量)和PyBrOP(78mg,0.17mmol,1.2当量)在DMF(1.5 mL)中的溶液用i-Pr2NEt(73μL,0.42mmol,3当量)处理。将反应在23℃搅拌48小时，然后倒入EtOAc(3mL)，用0.5N HCl水溶液(2×3mL) 洗涤。将水相用EtOAc(1×3mL)萃取。将合并的有机相用饱和 NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤。将有机相用 Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将粗产物(S-38；79mg,99％)不经另外的纯化即使用。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ8.08(d,J＝8.4Hz,2H), 7.55(d,J＝8.3Hz,2H),7.12(d,J＝6.2Hz,2H),7.07(td,J＝5.6,1.6Hz, 2H),7.01(t,J＝8.3Hz,2H),6.93(t,J＝8.6Hz,2H),6.23(s,1H),5.86(s, 1H),4.05(t,J＝10.7Hz,1H),3.94(s,3H),3.75(t,J＝10.5Hz,1H),3.68 (t,J＝11.2Hz,1H),3.65–3.58(m,1H),3.58–3.50(m,1H),3.42(m, 3H),3.21(dd,J＝20.0,10.5Hz,1H),3.08(q,J＝9.9Hz,1H),2.76(d,J ＝6.8Hz,2H),2.72(t,J＝7.1Hz,2H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C31H31F2N3O5[M+H]+564.2304,实测值：564.2304。
Figure BDA0001927318020001201
S-39:4-(反式-3,4-双((4-氟苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酸
将4-(反式-3,4-双((4-氟苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯甲酸甲酯(S-38；79mg,0.14mmol)在THF/MeOH/H2O(1.5mL,4:1:1比例)中的溶液用LiOH·H2O(17mg,0.42mmol,3当量)处理。将悬浮液在23℃搅拌5小时。反应混合物然后被倒入EtOAc(3mL)，添加1M HCl水溶液(5mL)猝灭，用EtOAc(2×5mL)萃取，用饱和NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥。将粗产物(S-39；73mg,95％)不经另外的纯化即使用。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.14(d,J＝8.0Hz,2H),7.62 (d,J＝7.9Hz,2H),7.23(s,2H),7.13(s,2H),7.02(t,J＝8.5Hz,2H),6.91(t,J＝8.6Hz,2H),4.03–3.90(m,1H),3.63(dt,J＝19.8,10.2Hz, 2H),3.53–3.38(m,4H),3.18(d,J＝9.4Hz,3H),2.80(s,2H),2.72(d,J ＝7.5Hz,2H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C30H29F2N3O5[M+H]+ 550.2148,实测值：550.2148。
Figure BDA0001927318020001202
68:1-(4-(反式-3,4-双((4-氟-苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基) 苯甲酰基)-N3-(4-氟苯乙基)-N4-苯乙基吡咯烷-反式-3,4-二甲酰胺
将4-(反式-3,4-双((4-氟-苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(S-39；60mg,0.109mmol,1当量)、反式-N3-(4-氟苯乙基)-N4-苯乙基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-37；42mg,0.109mmol,1当量)和 PyBrOP(56mg,0.120mmol,1.1当量)在DMF(1mL)中的溶液用 i-Pr2NEt(57μL,0.327mmol,3当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌 36小时，随后混合物用EtOAc(3mL)稀释，用0.5N HCl水溶液(2×3 mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×3mL)萃取。将合并的有机相用饱和 NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。产物通过用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc(3× 5mL)研磨纯化，倾析掉液相以得到81mg(81％)的68，为白色固体。1H NMR(600MHz,HFIP-d2)δ7.60(d,J＝4.2Hz,4H),7.40(t,J＝7.1 Hz,2H),7.31(t,J＝7.6Hz,2H),7.26(d,J＝7.6Hz,2H),7.24–7.16(m,4H),7.16–7.08(m,3H),7.05(tt,J＝8.7,2.1Hz,3H),7.01–6.91(m, 3H),4.06(ddd,J＝13.0,7.9,4.6Hz,2H),3.76–3.64(m,4H),3.58(dq, J＝13.1,7.8,6.6Hz,4H),3.54–3.39(m,6H),3.34–3.15(m,4H),2.90 –2.81(m,4H),2.75(q,J＝11.5,7.4Hz,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H53F3N6O6[M+H]+915.4051,实测值：915.4059。
Diprovocim-2的芳基取代类似物
Figure BDA0001927318020001211
70:反式-3,4-双((3-氟苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序：反式-1-(叔丁氧基羰基) 吡咯烷-3,4-二甲酸(S-29；50mg)和2-(3-氟苯基)乙烷-1-胺盐酸盐(55 μL)在不经纯化的情况下提供87mg(91％)的70。
Figure BDA0001927318020001221
S-40:反式-N3,N4-双(3-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:反式-3,4-双((3-氟苯乙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(70；87mg)提供78mg(99％)的S-40。1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ8.28(s,1H),7.31(td,J＝7.9,6.0Hz, 2H),7.08–7.03(m,2H),6.99(dt,J＝10.0,2.1Hz,2H),6.98–6.93(m, 2H),3.57–3.37(m,8H),3.25–3.19(m,2H),2.84(td,J＝7.1,3.5Hz, 4H)。
Figure BDA0001927318020001222
84:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(3-氟-苯乙基)吡咯烷-反式-3,4- 二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：反式-N3,N4-双(3-氟-苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-40；44mg)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,7.5 mg)提供40mg(97％)的84。1HNMR(400MHz,HFIP-d2)δ7.60(s,4H), 7.39–7.30(m,2H),7.26(d,J＝7.3Hz,2H),7.02(d,J＝7.7Hz,2H), 7.00–6.87(m,8H),6.82(d,J＝10.2Hz,2H),6.55(bs,2H),4.12–4.00 (m,2H),3.69(t,J＝10.2Hz,4H),3.57(q,J＝11.2,10.7Hz,6H),3.46 (m,4H),3.32–3.12(m,4H),2.85(m,4H),2.75(m,4H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C52H52F4N6O6[M+H]+933.3957,实测值： 933.3955。
Figure BDA0001927318020001231
71:反式-3,4-双((2-氟苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序:反式-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(S-29；50mg)和2-(2-氟苯基)乙烷-1-胺(55μL)在不经纯化的情况下提供84mg(88％)的71。
Figure BDA0001927318020001232
S-41:反式-N3,N4-双(2-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:反式-3,4-双((2-氟苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(71；84mg)提供75mg(99％)的S-41。1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ7.25(qd,J＝7.9,7.4,1.9Hz,4H),7.11 (td,J＝7.5,1.2Hz,2H),7.05(ddd,J＝10.3,8.4,1.2Hz,2H),3.54–3.44 (m,4H),3.44–3.34(m,4H),3.19(ddd,J＝5.3,4.1,1.8Hz,2H),2.86 (dq,J＝18.5,6.7Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001241
85:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(2-氟-苯乙基)吡咯烷-反式-3,4- 二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：反式-N3,N4-双(2-氟-苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-41；44mg)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,7.5 mg)提供40mg(97％)的85。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.61(s,4H), 7.32–7.18(m,6H),7.15(t,J＝6.6Hz,4H),7.07(d,J＝6.1Hz,4H),6.98 (t,J＝9.5Hz,2H),6.62(bs,2H),6.56(bs,2H),4.06(m,2H),3.69(m,4H),3.65–3.53(m,4H),3.47(m,6H),3.21(m,4H),2.93(m,4H),2.82 (m,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H52F4N6O6[M+H]+ 933.3957,实测值：933.3958。
Figure BDA0001927318020001242
72:反式-3,4-双((4-氯苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序:反式-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(S-29；50mg)和2-(4-氯苯基)乙烷-1-胺(59μL)在不经纯化的情况下提供107mg(99％)的72。
Figure BDA0001927318020001251
S-42:反式-N3,N4-双(4-氯苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:反式-3,4-双((4-氯苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(72；107mg)提供97mg(99％)的S-42。1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ7.35–7.25(m,4H),7.25–7.15(m,4H), 3.56–3.48(m,2H),3.48–3.34(m,6H),3.19(dd,J＝6.2,4.5Hz,2H), 2.79(td,J＝7.1,3.2Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001252
86(BJ-1-288):1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(4-氯苯乙基)吡咯烷-反式-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：反式-N3,N4-双(4-氯-苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-42；47mg)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,7.5 mg)提供24mg(53％)的86。1HNMR(400MHz,HFIP-d2)δ7.61(s,4H), 7.33(d,J＝7.7Hz,4H),7.24(d,J＝7.9Hz,4H),7.16(d,J＝7.9Hz,4H), 7.08(d,J＝7.9Hz,4H),6.54(bs,2H),4.06(dd,J＝12.5,8.1Hz,2H),3.69(m,4H),3.63–3.48(m,6H),3.44(m,4H),3.34–3.11(m,4H), 2.82(m,4H),2.73(m,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C52H52Cl4N6O6[M+H]+997.2775,实测值：997.2777。
Figure BDA0001927318020001261
73:反式-3,4-双((4-溴苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序:反式-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(S-29；50mg)和2-(4-溴苯基)乙烷-1-胺盐酸盐(99mg) 在不经纯化的情况下提供125mg(99％)的73。
Figure BDA0001927318020001262
S-43:反式-N3,N4-双(4-溴苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:反式-3,4-双((4-溴苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(73；125mg)提供119mg(99％)的S-43。1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ8.27(bs,1H),7.48–7.43(m,4H),7.19 –7.14(m,4H),3.52(dd,J＝11.6,7.0Hz,2H),3.49–3.40(m,4H),3.40 –3.35(m,2H),3.23–3.17(m,2H),2.80(td,J＝7.1,2.9Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001271
87:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(4-溴苯乙基)-吡咯烷-反式-3,4- 二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：反式-N3,N4-双(4-溴-苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-43；56mg)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,7.5 mg)提供36mg(68％)的87。1HNMR(400MHz,HFIP-d2)δ7.61(s,4H), 7.48(d,J＝7.9Hz,4H),7.39(d,J＝7.9Hz,4H),7.11(d,J＝7.9Hz,4H), 7.03(d,J＝8.0Hz,4H),6.61–6.44(m,2H),4.06(t,J＝10.4Hz,2H),3.68(m,4H),3.56(m,6H),3.44(m,4H),3.20(m,4H),2.80(m,4H), 2.71(m,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H52Br4N6O6[M+H]+ 1173.0754,实测值：1173.0766。
Figure BDA0001927318020001272
74:反式-3,4-双((4-羟基苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序:通过快速柱色谱(SiO2, 60–85％EtOAc/己烷)纯化后，反式-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(S-29；50mg)和4-(2-氨基乙基)苯酚(58mg)提供103mg(99％)的74。
Figure BDA0001927318020001281
S-44:反式-N3,N4-双(4-羟基苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:反式-3,4-双((4-羟基苯乙基) 氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(74；103mg)提供80mg(98％)的 S-44。1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ7.06–6.97(m,4H),6.76–6.61 (m,4H),3.49(dd,J＝11.7,7.1Hz,2H),3.44–3.33(m,6H),3.18(q,J＝ 5.2Hz,2H),2.70(td,J＝7.2,3.0Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001282
88:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(4-羟基-苯乙基)吡咯烷-反式 -3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：反式-N3,N4-双(4-羟基-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-44；43mg)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,7.5mg)提供42mg(99％)的88。1HNMR(600MHz,HFIP-d2)δ7.59 (s,4H),7.15(d,J＝8.1Hz,4H),7.01(d,J＝8.1Hz,4H),6.89(d,J＝8.4 Hz,4H),6.71(d,J＝8.1Hz,4H),4.06(dt,J＝12.0,9.0Hz,2H),3.68(tt, J＝12.4,6.4Hz,2H),3.63–3.50(m,4H),3.51–3.31(m,8H),3.22(m, 4H),2.80(q,J＝6.6Hz,4H),2.75(dt,J＝14.0,6.6Hz,2H),2.69(p,J＝ 7.7,7.0Hz,2H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H56N6O10[M+H]+ 925.413,实测值：925.4132。
Figure BDA0001927318020001291
75:反式-3,4-双((4-甲氧基苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序:反式-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(S-29；50mg)和2-(4-甲氧基苯基)乙烷-1-胺(63μL)在不经纯化的情况下提供108mg(99％)的75。
Figure BDA0001927318020001292
S-45:反式-N3,N4-双(4-甲氧基苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:反式-3,4-双((4-甲氧基苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(75；108mg)提供96mg(99％) 的S-45。1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ7.12(d,J＝8.6Hz,4H),6.84(d, J＝8.6Hz,4H),3.75(s,6H),3.54–3.45(m,2H),3.44–3.34(m,6H), 3.22–3.15(m,2H),2.73(td,J＝7.2,2.0Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001301
89:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(4-甲氧基-苯乙基)吡咯烷-反式-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：反式-N3,N4-双(4-甲氧基-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-45；46mg)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,7.5mg)提供18mg(41％)的89。1HNMR(400MHz,HFIP-d2)δ7.61 (s,4H),7.21(d,J＝8.1Hz,4H),7.15(d,J＝8.0Hz,4H),7.00(d,J＝7.9 Hz,4H),6.94(d,J＝8.0Hz,4H),6.62(d,J＝6.4Hz,4H),4.10(m,2H), 3.87(d,J＝9.2Hz,12H),3.71(m,6H),3.64–3.35(m,8H),3.34–3.16 (m,4H),2.81(m,4H),2.73(m,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C56H64N6O10[M+H]+981.4756,实测值：981.4754。
Figure BDA0001927318020001302
77:反式-3,4-双((4-硝基苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序:反式-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(S-29；50mg)和2-(4-硝基苯基)乙烷-1-胺盐酸盐(85 mg)在不经纯化的情况下提供100mg(95％)的77。
Figure BDA0001927318020001311
S-46:反式-N3,N4-双(4-硝基苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:反式-3,4-双((4-硝基苯乙基) 氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(77；100mg)提供92mg(98％)的 S-46。1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ8.32(b,1H),8.23–8.11(m,4H), 7.47(d,J＝8.6Hz,4H),3.56–3.43(m,6H),3.34(dd,J＝11.6,5.6Hz, 2H),3.24–3.16(m,2H),2.94(td,J＝7.1,1.9Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001312
91:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(4-硝基苯乙基)-吡咯烷-反式-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：反式-N3,N4-双(4-硝基-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-46；49mg)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,7.5mg)提供41mg(88％)的91。1HNMR(400MHz,HFIP-d2)δ8.25 (d,J＝8.3Hz,4H),8.19(d,J＝8.3Hz,2H),8.08(d,J＝8.3Hz,2H), 7.65(s,2H),7.60(s,2H),7.42(d,J＝8.3Hz,4H),7.34(dd,J＝14.4,8.4 Hz,4H),4.11(q,J＝9.6Hz,2H),3.88–3.71(m,4H),3.71–3.42(m, 10H),3.34(m,4H),3.02–2.95(m,4H),2.95–2.85(m,4H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C52H52N10O14[M+H]+1041.3737,实测值：1041.3741。
Figure BDA0001927318020001321
90:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(4-氨基苯乙基)-吡咯烷-反式 -3,4-二甲酰胺)
将1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(4-硝基苯乙基)吡咯烷-反式-3,4- 二甲酰胺)(91；11mg,0.01mmol)在50％EtOAc/MeOH溶液中的溶液用Pd(OH)2/C(3mg,20％重量)处理。将悬浮液用H2吹扫，在1大气压H2下搅拌18小时。将反应混合物过滤通过
Figure BDA0001927318020001322
用50％MeOH/CH2Cl2洗脱以得到90，为无定形白色固体(9mg,98％)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.08(t,J＝5.6Hz,2H),7.99–7.88(m, 2H),7.58(d,J＝1.4Hz,4H),6.84(d,J＝8.3Hz,4H),6.74(d,J＝7.9Hz, 4H),6.53–6.43(m,4H),6.39(d,J＝8.0Hz,4H),3.78(ddd,J＝12.4, 8.7,3.9Hz,2H),3.68–3.58(m,2H),3.52–3.45(m,2H),3.46–3.40(m, 2H),3.25–3.15(m,8H),3.15–3.04(m,4H),2.57–2.51(m,4H),2.44 (dq,J＝13.6,6.9Hz,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H60N10O6 [M+H]+921.477,实测值：921.4774。
Figure BDA0001927318020001331
78:反式-3,4-双((4-甲基苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序:反式-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(S-29；50mg)和2-(对甲苯基)乙烷-1-胺盐酸盐(72mg) 在不经纯化的情况下提供93mg(98％)的78。
Figure BDA0001927318020001332
S-47:反式-N3,N4-双(4-甲基苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:反式-3,4-双((4-甲基苯乙基) 氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(78；93mg)提供77mg(99％)的S-47。1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ7.09(d,J＝1.7Hz,8H),3.49(dd,J＝ 11.6,7.0Hz,2H),3.45–3.35(m,6H),3.23–3.13(m,2H),2.75(td,J＝ 7.3,1.6Hz,4H),2.28(s,6H)。
Figure BDA0001927318020001341
92:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(4-甲基-苯乙基)吡咯烷-反式 -3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：反式-N3,N4-双(4-甲基-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-47；43mg)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,7.5mg)提供29mg(70％)的92。1HNMR(400MHz,HFIP-d2)δ7.60 (s,4H),7.24(d,J＝7.6Hz,4H),7.20(m,8H),7.08(d,J＝7.8Hz,4H), 6.52(m,4H),4.05(dd,J＝12.6,7.8Hz,2H),3.74(m,6H),3.67–3.52 (m,5H),3.45(m,7H),2.89–2.77(m,4H),2.74(m,4H),2.32(d,J＝ 10.9Hz,12H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H64N6O6[M+H]+ 917.496,实测值：917.4965.
Figure BDA0001927318020001342
79:反式-3,4-双((4-(三氟甲基)-苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序:反式-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(S-29；50mg)和2-(4-(三氟甲基)-苯基)乙烷-1-胺(67 μL)在不经纯化的情况下提供121mg(99％)的79。
Figure BDA0001927318020001351
S-48:反式-N3,N4-双(4-(三氟甲基)苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:反式-3,4-双((4-(三氟甲基) 苯乙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(79；121mg)提供101mg (99％)的S-48。1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ7.59(d,J＝7.9Hz,4H), 7.41(d,J＝8.0Hz,4H),3.55–3.48(m,4H),3.48–3.40(m,2H),3.40– 3.34(m,2H),3.20(ddt,J＝6.8,3.2,1.6Hz,2H),2.90(dt,J＝12.3,6.8 Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001352
93:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(4-(三氟-甲基)苯乙基)吡咯烷- 反式-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：反式-N3,N4-双(4-(三氟-甲基)苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-48；54mg)和对苯二甲酸(苯-1,4- 二甲酸,7.5mg)提供50mg(97％)的93。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.63(d,J＝8.0Hz,4H),7.60(s,4H),7.56(d,J＝8.0Hz,4H),7.33(d,J ＝7.9Hz,4H),7.26(d,J＝7.9Hz,4H),6.62(bs,2H),4.16–4.00(m, 2H),3.77–3.66(m,4H),3.66–3.55(m,4H),3.55–3.41(m,6H), 3.35–3.14(m,4H),2.91(d,J＝7.2Hz,4H),2.83(d,J＝7.3Hz,4H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C56H52F12N6O6[M+H]+1133.3829,实测值：1133.3827。
Figure BDA0001927318020001361
80:4,4'-(((反式-1-(叔丁氧基羰基)-吡咯烷-3,4-二羰基)双(氮烷二基))-双(乙烷-2,1-二基))二苯甲酸二甲酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序:反式-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(S-29；50mg)和4-(2-氨基乙基)-苯甲酸甲酯盐酸盐(91 mg)在不经纯化的情况下提供121mg(99％)的80。1H NMR(400MHz, CDCl3)δ7.97(d,J＝8.0Hz,4H),7.23(d,J＝8.0Hz,4H),6.12(b,1H), 5.81(b,1H),3.89(s,6H),3.73(m,1H)3.67–3.40(m,6H),3.36(m,1H), 3.14(m,1H),3.00(m,1H),2.83(t,J＝7.1Hz,4H),1.44(s,9H)。
Figure BDA0001927318020001362
S-49:4,4'-(((反式-吡咯烷-3,4-二羰基)双(氮烷二基))双(乙烷-2,1- 二基))-二苯甲酸二甲酯盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:4,4'-(((反式-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二羰基)-双(氮烷二基))双(乙烷-2,1-二基))二苯甲酸二甲酯(80；121mg)提供98mg(99％)的S-49。1H NMR(600MHz,甲醇 -d4)δ7.95(d,J＝8.3Hz,4H),7.33(d,J＝8.3Hz,4H),3.88(s,6H),3.55 –3.39(m,6H),3.36–3.33(m,2H),3.21–3.16(m,2H),2.87(t,J＝7.3 Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001371
94:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(4-甲氧羰基-苯乙基)吡咯烷- 反式-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：4,4'-(((反式-吡咯烷-3,4-二羰基) 双(氮烷二基))双(乙烷-2,1-二基))二苯甲酸二甲酯盐酸盐(S-49；58mg) 和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,7.5mg)提供40mg(83％)的94。1H NMR (600MHz,HFIP-d2)δ8.02(d,J＝8.0Hz,4H),7.97(d,J＝7.9Hz,4H), 7.60(d,4H),7.33(d,J＝8.1Hz,4H),7.27(d,J＝8.0Hz,4H),4.16–4.04(m,2H),3.93(d,J＝5.6Hz,12H),3.79–3.68(m,4H),3.70–3.58(m, 2H),3.54(dt,J＝14.4,7.3Hz,4H),3.47–3.35(m,4H),3.35–3.19(m, 4H),2.91(t,J＝7.2Hz,4H),2.83(td,J＝13.37,13.27,6.53Hz,4H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C60H64N6O14[M+H]+1093.4553,实测值：1093.4559。
Figure BDA0001927318020001381
81:反式-3,4-双((4-氰基苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序:反式-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(S-29；50mg)和4-(2-氨基乙基)苄腈盐酸盐(77mg)在不经纯化的情况下提供106mg(99％)的81。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ7.75(d,J＝7.9Hz,4H),7.43(d,J＝8.1Hz,4H),6.17(b,2H),3.96– 3.65(m,5H),3.65–3.46(m,4H),3.11(s,1H),3.01(t,J＝7.1Hz,4H), 1.60(s,9H)。
Figure BDA0001927318020001382
S-50:反式-N3,N4-双(4-氰基苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:反式-3,4-双((4-氰基苯乙基) 氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(81；106mg)提供85mg(99％)的 S-50。1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ7.66(d,J＝6.6Hz,4H),7.41(d,J ＝8.3Hz,4H),3.54–3.47(m,4H),3.44(dt,J＝13.7,7.1Hz,2H),3.37– 3.33(m,2H),3.23–3.15(m,2H),2.89(td,J＝7.1,3.7Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001391
95:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(4-氰基苯乙基)-吡咯烷-反式 -3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：反式-N3,N4-双(4-氰基-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-50；52mg)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,7.5mg)提供38mg(89％)的95。HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C56H52N10O6[M+H]+961.4144,实测值：961.4159。
Figure BDA0001927318020001392
82:反式-3,4-双((2-([1,1'-联苯基]-4-基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷 -1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序:反式-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(S-29；50mg)和2-([1,1'-联苯基]-4-基)-乙烷-1-胺盐酸盐(83mg)提供124mg(99％)的82。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54 (dd,J＝16.3,7.7Hz,8H),7.43(t,J＝7.6Hz,4H),7.33(t,J＝7.4Hz, 2H),7.21(d,J＝7.6Hz,4H),6.12(b,1H),5.79(b,1H),3.85–3.71(m, 1H),3.68–3.29(m,7H),3.21–3.12(m,1H),3.07–2.94(m,1H),2.82(t, J＝7.1Hz,4H),1.43(s,9H)。
Figure BDA0001927318020001401
S-51:反式-N3,N4-双(2-([1,1'-联苯基]-4-基)乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:反式-3,4-双((2-([1,1'-联苯基]-4-基)乙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(82；124mg)提供 105mg(99％)的S-51。1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ7.59–7.55(m, 4H),7.54(d,J＝8.2Hz,4H),7.41(dd,J＝8.3,7.2Hz,4H),7.34–7.29 (m,2H),7.28(d,J＝8.2Hz,4H),3.52–3.44(m,6H),3.40–3.36(m, 2H),3.24–3.17(m,2H),2.84(t,J＝7.2Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001402
96:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(4-苯基-苯乙基)吡咯烷-反式 -3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：反式-N3,N4-双(2-([1,1'-联苯基]-4- 基)乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-51；62mg)和对苯二甲酸(苯 -1,4-二甲酸,7.5mg)提供22mg(42％)的96。1H NMR(600MHz, HFIP-d2)δ7.67(d,J＝7.6Hz,6H),7.65–7.61(m,8H),7.56–7.52(m, 6H),7.51–7.47(m,10H),7.39(t,J＝7.5Hz,4H),7.27(dd,J＝8.3,2.9 Hz,4H),7.21(d,J＝8.1Hz,4H),6.57(b,1H),6.52(b,1H),4.08(m, 2H),3.81–3.71(m,2H),3.71–3.38(m,12H),3.29–3.21(m,2H),3.21 –3.14(m,2H),2.91–2.72(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C76H72N6O6[M+H]+1165.5586,实测值：1165.5586。
Figure BDA0001927318020001411
83:反式-3,4-双((2-(萘-2-基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序:反式-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(S-29；50mg)和2-(萘-2-基)乙烷-1-胺盐酸盐(87mg) 在不经纯化的情况下提供107mg(99％)的83。
Figure BDA0001927318020001412
S-52:反式-N3,N4-双(2-(萘-2-基)乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:反式-3,4-双((2-(萘-2-基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(83；107mg)提供95mg(99％)的 S-52。1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ7.82–7.76(m,6H),7.65(d,J＝1.7Hz,2H),7.42(dddd,J＝17.4,8.1,6.9,1.4Hz,4H),7.35(dd,J＝8.4, 1.8Hz,2H),3.49(ddp,J＝20.6,13.6,7.1Hz,6H),3.40(ddd,J＝10.3, 7.9,4.5Hz,2H),3.15(td,J＝5.1,1.5Hz,2H),2.95(d,J＝7.2Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001421
97:1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双(2-(萘-2-基)乙基)吡咯烷-反式-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：反式-N3,N4-双(2-(萘-2-基)乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺(S-52；50mg)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,7.5 mg)提供38mg(80％)的97。1HNMR(400MHz,HFIP-d2)δ7.89–7.76 (m,12H),7.63(s,2H),7.55(m,6H),7.50(t,J＝7.7Hz,4H),7.46(m, 4H),7.35(d,J＝8.0Hz,2H),7.30–7.25(m,2H),6.32(b,2H),4.00(dd, J＝12.9,8.5Hz,2H),3.83–3.74(m,2H),3.71–3.61(m,4H),3.56(t,J＝ 10.4Hz,2H),3.53–3.45(m,2H),3.45–3.38(m,4H),3.37–3.28(m, 2H),3.28–3.17(m,2H),3.13–2.98(m,4H),2.92–2.82(m,4H), 2.83–2.71(m,2H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C68H64N6O6[M+H]+1061.496,实测值：1061.4963。
Diprovocim-2合成
Figure BDA0001927318020001431
65:(3S,4S)-3,4-双((4-氟苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将(3S,4S)-1-(叔丁氧基-羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(S,S-14；110mg, 0.43mmol)、HOAt(147mg,1.08mmol,2.5当量)和2,6-二甲基吡啶 (322μL,3mmol,7当量)在4mL的DMF中的溶液用2-(4-氟苯基)乙烷-1-胺盐酸盐(167mg,0.95mmol,2.2当量)和EDCI·HCl(207mg,1.08mmol,2.5当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌24小时。将反应混合物然后用50％EtOAc/己烷(25mL)稀释，用0.5M HCl水溶液 (25mL)洗涤，用EtOAc(3×25mL)萃取，用H2O(100mL)、饱和 NaHCO3水溶液(100mL)和饱和NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩以得到65，为白色固体(200mg,93％)，不经另外的纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.20–7.05(m,4H),7.02–6.92(m,4H), 6.09(b,2H),3.75(m,1H),3.60(m,1H),3.50(m,3H),3.40(m,3H), 3.16(m,1H),2.98(m,1H),2.75(t,J＝7.0Hz,4H),1.44(s,9H)。
Figure BDA0001927318020001432
S-53:(3S,4S)-N3,N4-双(4-氟苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
将(3S,4S)-3,4-双((4-氟苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯 (65；200mg,0.40mmol)的溶液在4M HCl/二噁烷的溶液中在23℃搅拌3小时。通过N2流除去溶剂，将粗产物溶于THF(5mL)并浓缩。重复该过程(3×5mL THF,3×5mL Et2O)以得到S-53，为白色固体 (170mg,99％)，不经纯化即使用。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.22 (dd,J＝8.2,5.3Hz,4H),7.01(t,J＝8.6Hz,4H),3.57–3.44(m,2H), 3.47–3.31(m,6H),3.25–3.14(m,2H),2.79(t,J＝7.7Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001441
4(Diprovocim-2):(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双 (4-氟苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
将(3S,4S)-N3,N4-双(4-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐 (S-53；44mg,0.10mmol,2.2当量)、对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,7.5 mg,0.045,1当量)和PyBrOP(47mg,0.10mmol,2.2当量)在500μL DMF中的溶液用i-Pr2NEt(40μL,0.23mmol,5当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌18小时，随后混合物用EtOAc(3mL)稀释，用0.5N HCl水溶液(2×3mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×3mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液(10mL) 洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将产物通过用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc(3×5mL)研磨纯化，倾析掉液相以得到35mg(84％) 的4，为白色固体。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.13(t,J＝5.7Hz, 2H),7.97(t,J＝5.7Hz,2H),7.56(s,4H),7.23(ddd,J＝9.3,5.7,2.9Hz, 4H),7.16–7.12(m,4H),7.09(td,J＝9.0,5.1Hz,4H),7.05–6.98(m, 4H),3.76(dd,J＝11.9,8.5Hz,2H),3.60(dd,J＝10.3,7.8Hz,2H),3.49 –3.37(m,4H),3.29–3.20(m,6H),3.21–3.14(m,4H),3.10(q,J＝8.2 Hz,2H),2.70(td,J＝7.1,2.6Hz,4H),2.66–2.59(m,4H).13C NMR (151MHz,DMSO-d6)δ170.6,169.9,167.4,161.60,161.55,160.01, 159.96,137.7,135.48,135.46,135.37,135.35,130.44,130.39,130.36,130.31,127.1,115.0,114.9,114.84,114.78,51.7,48.9,46.9,44.9,40.3, 40.2,34.1,34.0.HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H52F4N6O6[M+H]+ 933.3957,实测值：933.3986。
Diprovocim-2的立体异构体
Figure BDA0001927318020001451
65:(3R,4R)-3,4-双((4-氟苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(3R,4R)-1-(叔丁氧基-羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸(R,R-14；81mg, 0.31mmol)、HOAt(149mg,0.78mmol,2.5当量)和2,6-二甲基吡啶 (253μL,2.17mmol,7当量)在4mL DMF中的溶液用2-(4-氟苯基)乙烷-1-胺盐酸盐(167mg,0.95mmol,2.2当量)和EDCI·HCl(207mg, 1.08mmol,2.5当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌18小时。将反应混合物然后用50％EtOAc/己烷(25mL)稀释，用0.5M HCl水溶液 (25mL)洗涤，用EtOAc(3×25mL)萃取，用H2O(100mL)、饱和 NaHCO3水溶液(100mL)、饱和NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩以得到65，为白色固体(200mg,93％)，不经另外的纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.20–7.05(m,4H),7.02–6.92(m,4H), 6.09(b,2H),3.75(m,1H),3.60(m,1H),3.50(m,3H),3.40(m,3H), 3.16(m,1H),2.98(m,1H),2.75(t,J＝7.0Hz,4H),1.44(s,9H)。
Figure BDA0001927318020001461
S-54:(3R,4R)-N3,N4-双(4-氟苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐
将(3R,4R)-3,4-双((4-氟苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯 (65；152mg,0.30mmol)的溶液在4M HCl/二噁烷(2.5mL)的溶液中在 23℃搅拌3小时。通过N2流除去溶剂，将粗产物溶于THF(5mL)并浓缩。重复该过程(5×5mL)以得到S-54，为白色固体(130mg,99％)，不经纯化即使用。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.22(dd,J＝8.2,5.3 Hz,4H),7.01(t,J＝8.6Hz,4H),3.57–3.44(m,2H),3.47–3.31(m, 6H),3.25–3.14(m,2H),2.79(t,J＝7.7Hz,4H)。
Figure BDA0001927318020001462
98:(3R,3'R,4R,4'R)-1,1'-对苯二甲酰基-双(N3,N4-双-(4-氟苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
将(3R,4R)-N3,N4-双(4-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-54；44mg,0.10mmol,2.2当量)、对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,7.5mg, 0.045,1当量)和PyBrOP(47mg,0.10mmol,2.2当量)在500μL DMF 中的溶液用i-Pr2NEt(40μL,0.23mmol,5当量)处理。将反应在23℃搅拌24小时，随后混合物用EtOAc(3mL)稀释，用0.5N HCl水溶液(2×3mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×3mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤。有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将产物通过用冷(0℃)1:1 Et2O/EtOAc(3×5mL)研磨纯化，倾析掉液相以得到34mg(83％)的 98，为白色固体。1H NMR(600MHz,HFIP-d2)δ7.60(s,4H),7.20(td, J＝5.6,2.6Hz,4H),7.12(td,J＝5.5,2.5Hz,4H),7.04(td,J＝8.9,2.4 Hz,4H),6.95(td,J＝8.9,2.4Hz,4H),4.06(dd,J＝12.5,8.5Hz,2H), 3.74–3.62(m,4H),3.63–3.54(m,4H),3.54–3.39(m,6H),3.33– 3.15(m,4H),2.82(t,J＝7.1Hz,4H),2.74(t,J＝6.8Hz,4H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C52H52F4N6O6[M+H]+933.3957,实测值：933.3952。
Figure BDA0001927318020001471
S-55:4-((3S,4S)-3,4-双((4-氟苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基) 苯甲酸甲酯
将4-(甲氧基羰基)苯甲酸(20mg,0.11mmol,1.1当量)、 (3S,4S)-N3,N4-双(4-氟-苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(44mg,0.1 mmol,1.0当量)和PyBrOP(51mg,0.11mmol,1.1当量)在DMF(0.5 mL)中的溶液用i-Pr2NEt(53μL,0.3mmol,3当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌24小时，然后倒入EtOAc(3mL)，用0.5N HCl水溶液(2×3mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×3mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将粗产物(S-55；61mg,99％)不经另外的纯化即使用。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.08(d,J＝8.4Hz, 2H),7.55(d,J＝8.3Hz,2H),7.12(d,J＝6.2Hz,2H),7.07(td,J＝5.6, 1.6Hz,2H),7.01(t,J＝8.3Hz,2H),6.93(t,J＝8.6Hz,2H),6.23(s,1H), 5.86(s,1H),4.05(t,J＝10.7Hz,1H),3.94(s,3H),3.75(t,J＝10.5Hz, 1H),3.68(t,J＝11.2Hz,1H),3.65–3.58(m,1H),3.58–3.50(m,1H), 3.42(m,3H),3.25–3.18(m,1H),3.08(q,J＝9.9Hz,1H),2.76(d,J＝6.8 Hz,2H),2.72(t,J＝7.1Hz,2H)。
Figure BDA0001927318020001481
S-56:4-((3S,4S)-3,4-双((4-氟苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基) 苯甲酸
将4-((3S,4S)-3,4-双((4-氟苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯甲酸甲酯(S-55；61mg,0.1mmol)在THF/MeOH/H2O(2.5mL,4:1:1比例)中的溶液用LiOH·H2O处理。将悬浮液在23℃搅拌2小时。反应混合物然后被倒入EtOAc(3mL)，添加1M HCl水溶液(5mL)猝灭，用EtOAc(2×5mL)萃取，用饱和NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥。将粗产物(S-56；60mg,99％)不经另外的纯化即使用。1H NMR(400 MHz,甲醇-d4)δ8.14(d,J＝8.0Hz,2H),7.62(d,J＝7.9Hz,2H),7.23 (s,2H),7.13(s,2H),7.02(t,J＝8.5Hz,2H),6.91(t,J＝8.6Hz,2H),4.03–3.90(m,1H),3.63(dt,J＝19.8,10.2Hz,2H),3.53–3.38(m,4H), 3.18(d,J＝9.4Hz,3H),2.80(s,2H),2.72(d,J＝7.5Hz,2H)。
Figure BDA0001927318020001491
99:(3S,4S)-1-(4-((3R,4R)-3,4-双((4-氟苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3,N4-双(4-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺
将4-((3S,4S)-3,4-双((4-氟苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯甲酸(S-56；55mg,0.10mmol,1当量)、(3R,4R)-N3,N4-双(4-氟苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-54；44mg,0.1,1当量)和PyBrOP(52 mg,0.11mmol,1.1当量)在1mL DMF中的溶液用i-Pr2NEt(53μL, 0.3mmol,3当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌40小时，随后混合物用EtOAc(3mL)稀释，用0.5N HCl水溶液(2×3mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×3mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液 (10mL)和饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将产物通过用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc(3×5mL)研磨纯化，倾析掉液相以得到68mg(73％)的99，为白色固体。1H NMR (400MHz,HFIP-d2)δ7.60(s,4H),7.19(dd,J＝8.2,5.3Hz,4H),7.11 (dd,J＝8.3,5.4Hz,4H),7.04(t,J＝8.7Hz,4H),6.95(t,J＝8.7Hz,4H),4.06(dd,J＝12.5,8.1Hz,2H),3.84–3.65(m,8H),3.56(m,6H),3.44(t, J＝7.2Hz,4H),2.82(t,J＝7.0Hz,4H),2.74(t,J＝7.2Hz,4H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C52H52F4N6O6[M+H]+933.3957,实测值： 933.3950。
Diprovocim-2的连接基类似物
Figure BDA0001927318020001501
100:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(丁-2-炔二-酰基)双(N3,N4-双(4-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：(3S,4S)-N3,N4-双(4-氟-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-53,10mg)和丁-2-炔二酸(1.3mg)提供 9.1mg(73％)的100。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.17–8.06(m, 4H),7.23–7.16(m,8H),7.11–7.04(m,8H),3.87(dd,J＝10.6,7.7Hz, 1H),3.73–3.65(m,1H),3.63(dd,J＝12.2,8.0Hz,1H),3.55(dd,J＝ 10.6,7.2Hz,1H),3.31–3.20(m,14H),3.20–3.09(m,2H),2.72–2.63 (m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C48H48F4N6O6[M+H]+ 881.3644,实测值：881.3645。
Figure BDA0001927318020001502
101:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-富马酰基双-(N3,N4-双(4-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：(3S,4S)-N3,N4-双(4-氟-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-53；10mg)和富马酸(1.3mg)提供9.6 mg(99％)的101。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.17(t,J＝5.6Hz, 2H),8.13(t,J＝5.6Hz,2H),7.27–7.18(m,8H),7.13–7.05(m,8H), 7.01(s,2H),3.86(dd,J＝10.1,8.2Hz,2H),3.68(dd,J＝12.2,8.3Hz, 2H),3.50(dd,J＝10.1,7.7Hz,2H),3.31–3.27(m,6H),3.27–3.16(m, 6H),3.10(q,J＝7.9Hz,2H),2.69(td,J＝7.3,2.6Hz,8H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C48H50F4N6O6[M+H]+883.3801,实测值： 883.3802。
Figure BDA0001927318020001511
102:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-((E)-己-3-烯二酰基)双-(N3,N4-双(4-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：(3S,4S)-N3,N4-双(4-氟-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-53,10mg)和(E)-己-3-烯二酸(1.6mg) 提供9.9mg(99％)的102。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.10(t,J＝ 5.6Hz,4H),7.25–7.19(m,8H),7.12–7.05(m,8H),5.61–5.53(m, 1H),3.71(dd,J＝10.0,8.2Hz,2H),3.62(dd,J＝11.4,8.3Hz,2H),3.36 –3.21(m,10H),3.21–3.12(m,4H),3.08–3.04(m,2H),3.02(s,4H), 2.75–2.64(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C50H54F4N6O6 [M+H]+911.4114,实测值：911.4112。
Figure BDA0001927318020001521
103:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-间苯二甲酰基-双-(N3,N4-双(4-氟苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：(3S,4S)-N3,N4-双(4-氟-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-53,10mg)和间苯二甲酸(1.9mg)提供 7.3mg(71％)的103。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.12(t,J＝5.7 Hz,2H),7.96(t,J＝5.6Hz,2H),7.65–7.57(m,3H),7.54(dd,J＝8.2, 6.9Hz,1H),7.22(td,J＝9.8,9.2,5.7Hz,4H),7.17–7.11(m,4H),7.11 –7.05(m,4H),7.05–6.94(m,4H),3.76(dd,J＝11.9,8.6Hz,2H),3.59 (dd,J＝10.2,7.8Hz,2H),3.46–3.36(m,4H),3.35–3.14(m,10H), 3.14–3.06(m,2H),2.69(ddd,J＝10.9,8.0,5.8Hz,4H),2.61(td,J＝ 6.9,3.4Hz,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H52F4N6O6[M+H]+933.3957,实测值：933.3955。
Figure BDA0001927318020001522
104:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-([1,1'-联苯基]-4,4'-二羰基)双(N3,N4-双 (4-氟-苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：(3S,4S)-N3,N4-双(4-氟-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-53,10mg)和[1,1'-联苯基]-4,4'-二甲酸 (2.7mg)提供11.0mg(98％)的104。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ 8.16(b,2H),8.03–7.94(b,2H),7.80(d,J＝8.4Hz,4H),7.62(d,J＝8.2 Hz,4H),7.28–7.19(m,6H),7.14(dd,J＝8.3,5.6Hz,4H),7.13–7.04 (m,6H),6.99(t,J＝8.8Hz,4H),3.77(dd,J＝11.9,8.7Hz,2H),3.65(dd, J＝10.3,8.0Hz,2H),3.48–3.40(m,4H),3.31–3.19(m,8H),3.19– 3.14(m,2H),3.14–3.07(m,2H),2.75–2.58(m,8H).HRMS(ESI-TOF) m/z计算值：C58H56F4N6O6[M+H]+1009.427,实测值：1009.4275。
Figure BDA0001927318020001531
105:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2,2'-氧基双(乙酰基))双-(N3,N4-双(4-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：(3S,4S)-N3,N4-双(4-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-53,10mg)和2,2'-氧基二乙酸(1.5mg)提供6.8mg(69％)的105。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.10(td,J＝5.7,2.3Hz,4H),7.31–7.16(m,8H),7.16–6.99(m,8H),4.12(d,J＝ 2.8Hz,4H),3.31–3.21(m,8H),3.70–3.62(m,4H),3.21–3.12(m, 4H),3.08–2.97(m,4H),2.72–2.64(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C48H52F4N6O7[M+H]+901.3906,实测值：901.3906。
Figure BDA0001927318020001532
106:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-((1R,3R)-环己烷-1,3-二羰基)双(N3,N4- 双(4-氟苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：(3S,4S)-N3,N4-双(4-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-53,10mg)和顺式-环己烷-1,3-二甲酸 (1.9mg)提供9.1mg(88％)的106。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ 8.12–8.02(m,4H),7.26–7.17(m,8H),7.08(td,J＝8.8,1.6Hz,8H), 3.73(ddd,J＝17.7,9.9,8.1Hz,2H),3.60(dt,J＝11.6,8.5Hz,2H),3.41 –3.33(m,2H),3.31–3.20(m,8H),3.20–3.09(m,4H),3.06–3.02(m, 2H),2.75–2.62(m,8H),2.47–2.39(m,2H),1.83–1.75(m,2H),1.69 –1.56(m,4H),1.49–1.31(m,2H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C52H58F4N6O6[M+H]+939.4426,实测值：939.4425。
Figure BDA0001927318020001541
107:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-((1S,4S)-环己烷-1,4-二羰基)双(N3,N4-双(4-氟苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：(3S,4S)-N3,N4-双(4-氟-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-53,10mg)和反式-环己烷-1,4-二甲酸 (1.9mg)提供1.8mg(17％)的107。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ 3.39–3.34(m,2H),3.07–3.02(m,2H),2.75–2.65(m,8H),2.37–2.28(m,2H),1.71–1.67(m,4H),1.46–1.36(m,4H),3.30–3.19(m, 8H),8.18–8.03(m,4H),7.26–7.15(m,8H),7.15–7.02(m,8H),3.75 (dd,J＝10.2,8.3Hz,2H),3.58(dd,J＝11.6,8.3Hz,2H),3.19–3.10(m, 4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H58F4N6O6[M+H]+939.4426, 实测值：939.4427。
Figure BDA0001927318020001551
108:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-((1R,4R)-环己烷-1,4-二羰基)双(N3,N4- 双(4-氟苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：(3S,4S)-N3,N4-双(4-氟-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-53,10mg)和顺式-环己烷-1,4-二甲酸 (1.9mg)提供8.5mg(82％)的108。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.08–8.02(m,3H),7.93(t,J＝5.7Hz,1H),7.27–7.16(m,8H),7.13– 7.04(m,8H),3.71(dd,J＝10.0,8.0Hz,2H),3.60(dd,J＝11.6,8.5Hz, 2H),3.33–3.19(m,10H),3.19–3.08(m,4H),3.05–3.02(m,2H),2.73 –2.64(m,8H),2.48–2.44(m,2H),1.87–1.77(m,4H),1.52–1.41(m, 4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H58F4N6O6[M+H]+939.4426, 实测值：939.4427。
Figure BDA0001927318020001552
109:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(萘-2,6-二羰基)-双(N3,N4-双(4-氟苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：(3S,4S)-N3,N4-双(4-氟-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-53；10mg)和萘-2,6-二甲酸(2.4mg)提供10.7mg(99％)的109。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.22–8.17 (m,4H),8.12(d,J＝8.5Hz,2H),7.98(t,J＝5.7Hz,2H),7.68(dd,J＝ 8.4,1.5Hz,2H),7.27–7.20(m,8H),7.14–7.07(m,8H),6.92(t,J＝8.9 Hz,2H),3.83(dd,J＝11.9,8.6Hz,2H),3.67(dd,J＝10.4,7.9Hz,2H), 3.54–3.43(m,4H),3.31–3.19(m,8H),3.19–3.08(m,4H),2.77– 2.65(m,4H),2.65–2.56(m,4H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C56H54F4N6O6[M+H]+983.4114,实测值：983.4117。
Figure BDA0001927318020001561
110:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-羟基-对苯二甲酰基)-双(N3,N4-双(4- 氟苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：(3S,4S)-N3,N4-双(4-氟-苯乙基) 吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-53,10mg)和2-羟基对苯二甲酸(2.0 mg)提供9.1mg(87％)的110。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.25(s, 1H),8.18–8.07(m,3H),7.99(t,J＝5.7Hz,1H),7.25–7.18(m,8H), 7.16–7.11(m,2H),7.09(tt,J＝8.9,2.9Hz,6H),7.05–6.98(m,2H), 6.97–6.94(m,1H),3.82–3.68(m,2H),3.67–3.58(m,1H),3.58– 3.45(m,2H),3.45–3.34(m,3H),3.29–3.12(m,10H),3.12–3.03(m, 2H),2.76–2.65(m,6H),2.65–2.59(m,2H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H52F4N6O7[M+H]+949.3906,实测值：949.3908。
Diprovocim-1和2的杂合类似物
Figure BDA0001927318020001571
111:1-(4-(-3,4-双((4-氟苯乙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3,N4-二苯乙基吡咯烷-反式-3,4-二甲酰胺
将4-(反式-3,4-双(苯乙基-氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酸 (S-8；,7.3mg,0.014mmol,1当量)、反式-N3-(4-氟-苯乙基)-N4-苯乙基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-34；6.1mg,0.014mmol,1当量)和 PyBrOP(7.5mg,0.016mmol,1.1当量)在DMF(250μL)中的溶液用 i-Pr2NEt(8μL,0.042mmol,3当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌 36小时，随后将混合物用EtOAc(3mL)稀释，用0.5N HCl水溶液(2 ×3mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×3mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将产物通过用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc (3×5mL)研磨纯化，倾析掉液相以得到6.3mg(50％)的111，为白色固体。HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H54F2N6O6[M+H]+897.4145,实测值：897.4152。
Figure BDA0001927318020001581
112:反式-1-(4-(反式-3,4-双((反式-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯甲酰基)-N3,N4-二苯乙基吡咯烷-3,4-二甲酰胺
将4-(反式-3,4-双(苯乙基-氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酸 (S-8；7.3mg,0.014mmol,1当量)、反式-N3-(反式-2-苯基环丙基)-N4-(反式-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-6；6mg, 0.014mmol,1当量)和PyBrOP(7.5mg,0.016mmol,1.1当量)在DMF (250μL)中的溶液用i-Pr2NEt(8μL,0.042mmol,3当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌36小时，随后将混合物用EtOAc(3mL)稀释，用 0.5N HCl水溶液(2×3mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×3mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将产物通过用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc(3×5mL)研磨纯化，倾析掉液相以得到2.2 mg(18％)的112，为白色固体。HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C54H56N6O6[M+H]+885.4334,实测值：885.4330。
Figure BDA0001927318020001582
113:反式-1-(4-(反式-3,4-双((反式-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3,N4-双(4-氟苯乙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺
将4-(反式-3,4-双((4-氟-苯乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(S-39；39mg,0.066mmol,1当量)、反式-N3-(反式-2-苯基环丙基)-N4-(反式-2-苯基环丙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-6；,28mg, 0.066mmol,1当量)和PyBrOP(34mg,0.073mmol,1.1当量)在DMF (700μL)中的溶液用i-Pr2NEt(35μL,0.20mmol,3当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌36小时，随后将混合物用EtOAc(3mL)稀释，用 0.5N HCl水溶液(2×3mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×3mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液 (10mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将产物通过用冷(0℃)1:1Et2O/EtOAc(3×5mL)研磨纯化，倾析掉液相以得到 15.6mg(26％)的113，为白色固体。HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C54H54F2N6O6[M+H]+921.4145,实测值：921.4149。
Diprovocim-4和Diprovocim-5
Figure BDA0001927318020001591
114:(3S,4S)-1-(4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3,N4-双(4-氟苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺
将4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷 -1-羰基)苯甲酸(S-20,4.8mg,0.0089mmol,1当量)、(3S,4S)-N3,N4-双 (4-氟苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-53,4.8mg,0.011mmol, 1.2当量)和PyBrOP(5.1mg,0.011mmol,1.2当量)在DMF(250μL) 中的溶液用i-Pr2NEt(5.0μL,0.027mmol,3当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌36小时，随后将混合物用EtOAc(3mL)稀释，用0.5N HCl 水溶液(2×3mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×3mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将产物通过用冷(0℃)1:1 Et2O/EtOAc(3×5mL)研磨纯化，倾析掉液相以得到7.71mg(94％) 的114，为白色固体。1H NMR(600MHz,HFIP-d6)δ7.60(q,J＝8.1Hz, 4H),7.38(t,J＝7.5Hz,2H),7.34(t,J＝7.6Hz,2H),7.28(dt,J＝15.5, 7.4Hz,2H),7.18(t,J＝7.7Hz,4H),7.11(t,J＝7.4Hz,4H),7.04(t,J＝8.9Hz,2H),6.95(t,J＝8.7Hz,2H),4.14(dd,J＝12.5,8.4Hz,1H),4.07 (dd,J＝12.6,8.3Hz,1H),3.85–3.73(m,2H),3.73–3.64(m,2H),3.62 –3.52(m,2H),3.52–3.43(m,4H),3.43–3.37(m,1H),3.37–3.30(m, 1H),3.30–3.22(m,2H),2.90–2.77(m,4H),2.77–2.70(m,2H),2.16 –2.11(m,1H),2.03–1.96(m,1H),1.43–1.38(m,2H),1.37–1.27(m, 2H),1.22(dt,J＝10.6,5.5Hz,1H)。
Figure BDA0001927318020001601
115:(3R,4R)-1-(4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3,N4-双(4-氟苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺
将4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷 -1-羰基)苯甲酸(S-20,4.9mg,0.0091mmol,1当量)、(3R,4R)-N3,N4-双 (4-氟苯乙基)-吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-54,4.8mg,0.011mmol, 1.2当量)和PyBrOP(5.1mg,0.011mmol,1.2当量)在DMF(250μL) 中的溶液用i-Pr2NEt(5.0μL,0.027mmol,3当量)处理。将反应混合物在23℃搅拌36小时，随后将混合物用EtOAc(3mL)稀释，用0.5N HCl 水溶液(2×3mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×3mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。将产物通过用冷(0℃)1:1 Et2O/EtOAc(3×5mL)研磨纯化，倾析掉液相以得到8.05mg(96％) 的115，为白色固体。1H NMR(600MHz,HFIP-d6)δ7.61(q,J＝8.2Hz, 4H),7.38(t,J＝7.6Hz,2H),7.34(t,J＝7.5Hz,2H),7.28(dt,J＝18.5, 7.4Hz,2H),7.23–7.15(m,4H),7.14–7.07(m,4H),7.04(t,J＝8.9Hz, 2H),6.95(t,J＝8.8Hz,2H),4.13(dd,J＝12.5,8.4Hz,1H),4.06(dd,J＝ 12.6,8.4Hz,1H),3.87–3.74(m,3H),3.74–3.64(m,3H),3.62–3.54 (m,2H),3.52–3.38(m,4H),3.37–3.29(m,1H),3.29–3.22(m,1H), 2.91–2.80(m,4H),2.80–2.71(m,2H),2.16–2.10(m,1H),2.03–1.96(m,1H),1.42–1.36(m,2H),1.34–1.27(m,2H),1.22(dt,J＝10.5, 5.8Hz,1H)。
Diprovocim-3的合成
Figure BDA0001927318020001611
117:(3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-(4-氟苯基)环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
按照胺与吡咯烷二酸偶联的一般程序:(3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基) 吡咯烷-3,4-二甲酸(S,S-14,34.5mg)和(1S,2R)-2-(4-氟苯基)环丙烷-1- 胺盐酸盐(116；52mg)在快速柱色谱(SiO2,20％EtOAc/己烷)后提供29 mg(42％)的117。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.12(m,4H),6.95(t,J＝ 8.6Hz,4H),6.63(b,1H),6.45(b,1H),3.84(t,J＝9.9Hz,1H),3.67(t,J＝9.4Hz,1H),3.59(t,J＝10.5Hz,1H),3.46–3.33(m,1H),3.26(m,J＝ 9.6Hz,1H),3.12(t,J＝9.4Hz,1H),2.79(m,2H),2.01(m,2H),1.45(s, 9H),1.18(q,J＝6.6Hz,2H),1.11(dt,J＝10.2,5.3Hz,2H)。
Figure BDA0001927318020001621
S-57:(3S,4S)-N3,N4-双((1S,2R)-2-(4-氟苯基)-环丙基)吡咯烷-3,4- 二甲酰胺盐酸盐
使用Boc-吡咯烷去保护的一般程序:(3S,4S)-3,4-双 (((1S,2R)-2-(4-氟苯基)环丙基)-氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯 (117；29mg)提供26mg(99％)的S-57。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.18(b,4H),7.01(t,J＝8.7Hz,4H),3.69–3.47(m,4H),3.26(b,2H),2.86(s,2H),2.07(b,2H),1.23(m,4H)。
Figure BDA0001927318020001622
118:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-对苯二甲酰基-双(N3,N4-双-((1S,2R)-2-(4-氟苯基)环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)
使用连接二酸偶联的一般程序：(3S,4S)-N3,N4-双((1S,2R)-2-(4- 氟苯基)环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-57；26mg)和对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,4.2mg)提供16mg(65％)的118。1H NMR(600MHz, DMSO-d6)δ8.42(d,J＝4.2Hz,2H),8.29(d,J＝4.2Hz,2H),7.56(d,J ＝4.1Hz,4H),7.17(dd,J＝8.5,5.5Hz,4H),7.15–7.02(m,11H),3.80 (dd,J＝11.9,8.6Hz,2H),3.70–3.61(m,2H),3.55–3.44(m,4H),3.23– 3.15(m,2H),3.10(q,J＝8.0Hz,2H),2.79(tt,J＝8.2,4.1Hz,2H),2.72 (dq,J＝8.0,4.4,3.9Hz,2H),2.00–1.95(m,2H),1.89–1.82(m,2H), 1.19–1.11(m,5H),1.11–1.02(m,4H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6) δ171.7,171.0,167.5,161.4,159.7,137.7,137.4,137.3,130.3,127.78, 127.74,127.73,127.69,127.1,114.95,114.91,114.80,114.77,51.5,48.7, 46.9,45.1,39.5,32.4,32.3,23.3,23.2,15.1,15.0.HRMS(ESI-TOF)m/z 计算值：C56H52F4N6O6[M+H]+981.3957,实测值：981.3960。
胺与苯甲酸偶联的一般程序
将4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷 -1-羰基)苯甲酸(120,0.0034-0.015mmol)、伯胺或吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(0.0040-0.018mmol,1.2当量)、HOAt(0.0037-0.016mmol, 1.1当量)和2,6-二甲基吡啶(0.010-0.045mmol,3.0当量)溶解于无水 DMF/CH2Cl2(1/0–0/1,0.1-0.2mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(0.0050-0.022mmol,1.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌3-4小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液 (2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。使用制备型薄层色谱(SiO2,10％ MeOH/CH2Cl2)纯化产物。
Figure BDA0001927318020001631
121(3S,4S)-1-(4-(十六烷基氨基甲酰基)苯甲酰基)-N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,8.0mg)和十六烷基胺(4.3mg)提供9.4mg(83％)的121。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.75(d,J＝8.0Hz,2H),7.49(d,J＝8.0Hz,2H),7.29–7.23(m,4H), 7.20–7.15(m,2H),7.10(t,J＝8.0Hz,4H),7.04(d,J＝3.5Hz,1H), 7.00(d,J＝3.5Hz,1H),6.60,(t,J＝5.5Hz,1H),3.83(dd,J＝9.5,12.0 Hz,1H),3.68(t,J＝11.0Hz,2H),3.59(dd,J＝8.5,10.5Hz,1H),3.45– 3.28(m,2H),3.18(q,J＝10.0Hz,1H),2.95(q,J＝9.5Hz,1H),2.92– 2.87(m,1H),2.85–2.79(m,1H),2.07–2.01(m,1H),2.00-1.95(m,1H),1.61–1.54(m,2H),1.38–1.06(m,30H),0.88(t,J＝7.0Hz,3H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C48H65N4O4[M+H]+761.5000,实测值： 761.5001。
Figure BDA0001927318020001641
122:(3S,4S)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-1-(4-(十四烷基氨基甲酰基)-苯甲酰基)吡咯烷-3，4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,8.0mg)和十四烷基胺(3.8mg)提供8.7mg(80％)的122。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.75(d,J＝8.0Hz,2H),7.49(d,J＝8.0Hz,2H),7.29–7.22(m,4H), 7.21–7.14(m,2H),7.10(t,J＝8.5Hz,4H),7.05(d,J＝3.5Hz,1H), 7.01(d,J＝3.5Hz,1H),6.61(t,J＝5.5Hz,1H),3.83(dd,J＝12.0,9.5 Hz,1H),3.68(t,J＝11.0Hz,2H),3.59(dd,J＝10.0,9.0Hz,1H),3.45– 3.28(m,2H),3.18(q,J＝10.0Hz,1H),2.96(q,J＝10.0Hz,1H),2.92– 2.87(m,1H),2.85–2.80(m,1H),2.07–2.02(m,1H),2.00-1.95(m,1H),1.62–1.54(m,2H),1.37–1.06(m,26H),0.88(t,J＝7.0Hz,3H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C46H61N4O4[M+H]+733.4687,实测值： 733.4682。
Figure BDA0001927318020001651
123:(3S,4S)-1-(4-(十二烷基氨基甲酰基)苯甲酰基)-N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,8.0mg)和十二烷基胺(3.3mg)提供8.4mg(80％)的123。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.75(d,J＝8.0Hz,2H),7.49(d,J＝8.0Hz,2H),7.29–7.22(m,4H), 7.21–7.14(m,2H),7.10(t,J＝8.5Hz,4H),7.03(br,1H),6.98(br,1H), 6.59(t,J＝5.5Hz,1H),3.84(dd,J＝12.0,8.5Hz,1H),3.69(t,J＝10.5 Hz,2H),3.59(dd,J＝10.0,9.0Hz,1H),3.45–3.29(m,2H),3.18(q,J＝ 10.0Hz,1H),2.97(q,J＝10.0Hz,1H),2.92–2.87(m,1H),2.85–2.80 (m,1H),2.07–2.02(m,1H),2.00-1.95(m,1H),1.62–1.54(m,2H),1.38–1.07(m,22H),0.88(t,J＝7.0Hz,3H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C44H57N4O4[M+H]+705.4374,实测值：705.4372。
Figure BDA0001927318020001652
124:(3S,4S)-1-(4-(癸基氨基甲酰基)苯甲酰基)-N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,8.0mg)和癸基胺 (2.8mg)提供7.9mg(78％)的124。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.74(d, J＝8.0Hz,2H),7.49(d,J＝7.5Hz,2H),7.29–7.22(m,4H),7.21–7.14 (m,2H),7.12–7.06(m,5H),7.05(br,1H),6.64(t,J＝5.5Hz,1H),3.82(dd,J＝12.0,9.0Hz,1H),3.67(t,J＝11.0Hz,2H),3.59(dd,J＝10.0, 9.0Hz,1H),3.45–3.28(m,2H),3.18(q,J＝10.0Hz,1H),2.95(q,J＝ 9.5Hz,1H),2.93–2.87(m,1H),2.85–2.80(m,1H),2.08–2.01(m, 1H),2.00-1.94(m,1H),1.61–1.54(m,2H),1.38–1.07(m,18H),0.88 (t,J＝7.0Hz,3H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C42H54N4O4[M+H]+ 677.4061,实测值：607.4062。
Figure BDA0001927318020001661
S-55:(R)-N-Boc-β-脯氨酸.
将(R)-β-脯氨酸(115mg,0.999mmol)和Boc2O(262mg,1.20 mmol)悬浮于去离子H2O(1mL)和丙酮(3mL)。混合物冷却至0℃，添加固体Na2CO3(53mg,0.500mmol)。4小时后，将丙酮真空除去，滴加柠檬酸水溶液(20％w/v)直至观察到pH 4。将混合物用H2O(15 mL)和EtOAc(15mL)稀释。将水相用EtOAc(2×10mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩。将产物用己烷洗涤得到91mg (42％)的S-55。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.45(s,1H),3.49– 3.15(m,4H),3.09–2.95(m,1H),2.12–1.87(m,2H),1.39(s,9H)。
Figure BDA0001927318020001662
S-56:(R)-3-(十六烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(R)-N-Boc-β-脯氨酸(S-55,10mg,0.047mmol,1.0当量)、十六烷基胺(13.5mg,0.056mmol,1.2当量)、HOAt(7.0mg,0.051mmol,1.1 当量)和2,6-二甲基吡啶(15.0mg,0.140mmol,3.00当量)溶解于 CH2Cl2(0.2mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(13.4 mg,0.070mmol,1.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL) 萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)提供21.9mg (定量)的S-56。
Figure BDA0001927318020001671
S-57:(R)-N-十六烷基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐.
将(R)-3-(十六烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(S-56,17.5 mg,0.040mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1 小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到17.5mg(定量) 的S-57。
Figure BDA0001927318020001672
125:(3S,4S)-1-(4-((R)-3-(十六烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基) 苯甲酰基)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,2.2mg)和(R)-N- 十六烷基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐(S-57,1.8mg)提供2.9mg(83％)的 125。1H NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ7.57–7.51 (m,4H),7.30–7.22(m,4H),7.21–7.09(m,6H),7.00–6.67(m,2H), 5.64–5.57(m,1H),4.04–3.38(m,8H),3.28–3.12(m,4H),2.93– 2.76(m,3H),2.24–2.14(m,2H),2.10–1.96(m,2H),1.54–1.41(m, 2H),1.34–1.06(m,30H),0.88(t,J＝7.0Hz,3H).HRMS(ESI-TOF) m/z计算值：C53H72N5O5[M+H]+858.5528,实测值：858.5528。
Figure BDA0001927318020001673
S-58:(R)-3-(十四烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(R)-N-Boc-β-脯氨酸(S-55,10mg,0.047mmol,1.0当量)、十四烷基胺(11.9mg,0.056mmol,1.2当量)、HOAt(7.0mg,0.051mmol, 1.1当量)和2,6-二甲基吡啶(15.0mg,0.140mmol,3.00当量)溶解于 CH2Cl2(0.2mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(13.4 mg,0.070mmol,1.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL) 萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)提供18.6mg (97％)的S-58。
Figure BDA0001927318020001681
S-59:(R)-N-十四烷基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐.
(R)-3-(十四烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(S-58,18.2mg,0.044mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到15.9mg(定量)的S-59。
Figure BDA0001927318020001682
126:(3S,4S)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-1-(4-((R)-3-(十四烷基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,2.2mg)和(R)-N-十四烷基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐(S-59,1.7mg)提供2.8mg(82％)的126。1H NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ7.56–7.50(m, 4H),7.30–7.22(m,4H),7.21–7.08(m,6H),7.01–6.70(m,2H),5.65 –5.59(m,1H),4.04–3.38(m,8H),3.28–3.12(m,4H),2.93–2.75(m, 3H),2.25–2.14(m,2H),2.10–1.96(m,2H),1.53–1.41(m,2H),1.34 –1.06(m,26H),0.88(t,J＝7.0Hz,3H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C51H68N5O5[M+H]+830.5215,实测值：830.5216。
Figure BDA0001927318020001691
S-60:(R)-3-(十二烷基氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(R)-N-Boc-β-脯氨酸(S-55,10mg,0.047mmol,1.0当量)、十二烷基胺(10.3mg,0.056mmol,1.2当量)、HOAt(7.0mg,0.051mmol,1.1 当量)和2,6-二甲基吡啶(15.0mg,0.140mmol,3.00当量)溶解于DMF (0.2mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(13.4mg, 0.070mmol,1.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL) 萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)提供17.9mg (定量)的S-60。
Figure BDA0001927318020001692
S-61:(R)-N-十二烷基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐.
将(R)-3-(十二烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(S-60,14.2 mg,0.037mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1 小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到14.6mg(定量) 的S-61。
Figure BDA0001927318020001701
127:(3S,4S)-1-(4-((R)-3-(十二烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基) 苯甲酰基)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,2.2mg)和(R)-N-十二烷基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐(S-61,1.6mg)提供2.9mg(88％)的127。1H NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ7.57–7.50(m, 4H),7.30–7.22(m,4H),7.21–7.08(m,6H),7.01–6.69(m,2H),5.65 –5.59(m,1H),4.05–3.38(m,8H),3.28–3.12(m,4H),2.93–2.75(m, 3H),2.25–2.14(m,2H),2.10–1.96(m,2H),1.54–1.41(m,2H),1.34 –1.06(m,22H),0.88(t,J＝7.0Hz,3H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C49H64N5O5[M+H]+802.4902,实测值：802.4899。
Figure BDA0001927318020001702
S-62:(R)-3-(癸基氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(R)-N-Boc-β-脯氨酸(S-55,10mg,0.047mmol,1.0当量)、癸基胺(8.8mg,0.056mmol,1.2当量)、HOAt(7.0mg,0.051mmol,1.1当量)和2,6-二甲基吡啶(15.0mg,0.140mmol,3.00当量)溶解于DMF (0.2mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(13.4mg, 0.070mmol,1.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL) 萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)提供18.3mg (定量)的S-62。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.67(br,1H),3.63–3.48 (m,2H),3.44(dd,J＝13.5,10.0Hz,1H),3.34–3.20(m,3H),2.84– 2.75(m,1H),2.18–2.00(m,2H),1.54–1.40(m,11H),1.33–1.19(m,14H),0.86(t,J＝8.5Hz,3H)。
Figure BDA0001927318020001711
S-63:(R)-N-癸基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐.
将(R)-3-(癸基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(S-62,14.7mg, 0.042mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到14.5mg(定量)的S-63。
Figure BDA0001927318020001712
128:(3S,4S)-1-(4-((R)-3-(癸基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基-环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,2.2mg)和(R)-N-癸基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐(S-63,1.4mg)提供2.6mg(81％)的128。1H NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ7.57–7.51(m,4H), 7.30–7.22(m,4H),7.21–7.09(m,6H),7.01–6.69(m,2H),5.66– 5.59(m,1H),4.04–3.38(m,8H),3.28–3.12(m,4H),2.93–2.76(m, 3H),2.25–2.14(m,2H),2.10–1.97(m,2H),1.54–1.41(m,2H),1.34 –1.06(m,18H),0.91–0.85(m,3H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C47H60N5O5[M+H]+774.4589,实测值：774.4589。
Figure BDA0001927318020001721
S-64:(S)-3-(十六烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(S)-N-Boc-β-脯氨酸(S-18,10mg,0.047mmol,1.0当量)、十六烷基胺(13.5mg,0.056mmol,1.2当量)、HOAt(7.0mg,0.051mmol,1.1 当量)和2,6-二甲基吡啶(15.0mg,0.140mmol,3.00当量)溶解于 CH2Cl2(0.2mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(13.4 mg,0.070mmol,1.5当量)，反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL) 萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)提供17.5mg (86％)的S-64。
Figure BDA0001927318020001722
S-65:(S)-N-十六烷基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐.
将(S)-3-(十六烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(S-64,17.5 mg,0.040mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1 小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到17.0mg(定量) 的S-65。
Figure BDA0001927318020001723
129:(3S,4S)-1-(4-((S)-3-(十六烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基) 苯甲酰基)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,2.2mg)和(S)-N- 十六烷基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐(S-65,1.8mg)提供2.4mg(69％)的 129。1H NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ7.59–7.48 (m,4H),7.30–7.22(m,4H),7.21–7.08(m,6H),7.03(br,1H),6.76(br, 1H),5.88–5.78(m,1H),3.99–3.35(m,8H),3.29–3.11(m,3H),3.08 –2.95(m,1H),2.92–2.67(m,3H),2.26–1.95(m,4H),1.55–1.41(m, 2H),1.35–1.05(m,30H),0.88(t,J＝7.0Hz,3H).HRMS(ESI-TOF) m/z计算值：C53H72N5O5[M+H]+858.5528,实测值：858.5528。
Figure BDA0001927318020001731
S-66:(S)-3-(十四烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(S)-N-Boc-β-脯氨酸(S-18,10mg,0.047mmol,1.0当量)、十四烷基胺(11.9mg,0.056mmol,1.2当量)、HOAt(7.0mg,0.051mmol,1.1 当量)和2,6-二甲基吡啶(15.0mg,0.140mmol,3.00当量)溶解于 CH2Cl2(0.2mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(13.4 mg,0.070mmol,1.5当量)，反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL) 萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)提供18.2mg (95％)的S-66。
Figure BDA0001927318020001732
S-67:(S)-N-十四烷基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐.
将(S)-3-(十四烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(S-66,18.2 mg,0.044mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1 小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到16.2mg(定量) 的S-67。
Figure BDA0001927318020001741
130:(3S,4S)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)-1-(4-((S)-3-(十四烷基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,2.2mg)和(S)-N-十四烷基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐(S-67,1.7mg)提供2.8mg(76％)的130。1H NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ7.58–7.49(m, 4H),7.30–7.22(m,4H),7.21–7.08(m,6H),7.00(br,1H),6.74(br, 1H),5.87–5.76(m,1H),3.99–3.35(m,8H),3.30–3.11(m,3H),3.09 –2.96(m,1H),2.92–2.67(m,3H),2.28–1.96(m,4H),1.55–1.41(m, 2H),1.35–1.06(m,26H),0.88(t,J＝7.0Hz,3H).HRMS(ESI-TOF) m/z计算值：C51H68N5O5[M+H]+830.5215,实测值：830.5213。
Figure BDA0001927318020001742
S-68:(S)-3-(十二烷基氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(S)-N-Boc-β-脯氨酸(S-18,10mg,0.047mmol,1.0当量)、十二烷基胺(10.3mg,0.056mmol,1.2当量)、HOAt(7.0mg,0.051mmol,1.1 当量)和2,6-二甲基吡啶(15.0mg,0.140mmol,3.00当量)溶解于无水 DMF(0.2mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(13.4 mg,0.070mmol,1.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL) 萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)提供14.2mg (80％)的S-68。
Figure BDA0001927318020001751
S-69:(S)-N-十二烷基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐.
将(S)-3-(十二烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(S-69,14.2 mg,0.037mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1 小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到13.4mg(定量) 的S-69。
Figure BDA0001927318020001752
131:(3S,4S)-1-(4-((S)-3-(十二烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基) 苯甲酰基)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,2.2mg)和(S)-N-十二烷基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐(S-69,1.6mg)提供2.1mg(64％)的131。1H NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ7.59–7.49(m, 4H),7.30–7.22(m,4H),7.21–7.08(m,6H),7.04(br,1H),6.76(br, 1H),5.89–5.78(m,1H),3.99–3.35(m,8H),3.30–3.11(m,3H),3.08 –2.95(m,1H),2.92–2.67(m,3H),2.27–1.96(m,4H),1.55–1.41(m, 2H),1.35–1.06(m,22H),0.90–0.85(m,3H).HRMS(ESI-TOF)m/z 计算值：C49H64N5O5[M+H]+802.4902,实测值：802.4903。
Figure BDA0001927318020001761
S-70:(S)-3-(癸基氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(S)-N-Boc-β-脯氨酸(S-18,10mg,0.047mmol,1.0当量)、癸基胺(8.8mg,0.056mmol,1.2当量)、HOAt(7.0mg,0.051mmol,1.1当量)和2,6-二甲基吡啶(15.0mg,0.140mmol,3.00当量)溶解于无水 DMF(0.2mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(13.4 mg,0.070mmol,1.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL) 萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)提供14.7mg (89％)的S-70。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.61(br,1H),3.65–3.48 (m,2H),3.45(dd,J＝13.5,10.0Hz,1H),3.34–3.20(m,3H),2.85– 2.75(m,1H),2.18–2.00(m,2H),1.54–1.40(m,11H),1.33–1.19(m,14H),0.86(t,J＝8.5Hz,3H)。
Figure BDA0001927318020001762
S-71:(S)-N-癸基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐.
将(S)-3-(癸基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(S-70,14.7mg, 0.042mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到12.5mg(定量)的S-71。
Figure BDA0001927318020001763
132:(3S,4S)-1-(4-((S)-3-(癸基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3,N4-双((1S,2R)-2-苯基-环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,2.2mg)和(S)-N-癸基吡咯烷-3-甲酰胺盐酸盐(S-71,1.4mg)提供2.3mg(72％)的132。1H NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ7.59–7.48(m,4H), 7.30–7.22(m,4H),7.21–7.07(m,7H),6.80(br,1H),5.92–5.80(m, 1H),3.97–3.35(m,8H),3.30–3.11(m,3H),3.06–2.94(m,1H),2.91 –2.66(m,3H),2.28–1.96(m,4H),1.55–1.41(m,2H),1.35–1.06(m, 18H),0.90–0.85(m,3H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C47H60N5O5 [M+H]+774.4589,实测值：774.4588。
Figure BDA0001927318020001771
S-72:(3S,4S)-3,4-双(十六烷基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸((S,S)-14,8.0mg,0.031mmol,1.0当量)、十六烷基胺(16.4mg,0.068mmol,2.2当量)、 HOAt(9.3mg,0.068mmol,2.2当量)和2,6-二甲基吡啶(16.6mg,0.155 mmol,5.00当量)溶解于无水DMF/CH2Cl2(1/1,0.3mL)。试剂溶解后 (约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(17.8mg,0.093mmol,3.0当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL) 和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl 水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)提供19.8mg(91％)的S-72。
Figure BDA0001927318020001781
S-73:(3S,4S)-N3,N4-双十六烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐.
将(3S,4S)-3,4-双(十六烷基-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯 (S-72,19.8mg,0.028mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到18.9 mg(定量)的S-73。
Figure BDA0001927318020001782
133:(3S,4S)-1-(4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯甲酰基)-N3,N4-双十六烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,1.8mg)和 (3S,4S)-N3,N4-双十六烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-73,2.6mg) 提供2.5mg(66％)的133。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.56–7.51(m, 4H),7.30–7.22(m,4H),7.21–7.08(m,7H),6.99(br,1H),6.59(br, 1H),6.48(br,1H),3.86–3.63(m,8H),3.31–2.95(m,8H),2.93–2.82 (m,2H),2.08–1.96(m,2H),1.52–1.07(m,60H),0.88(t,J＝6.8Hz, 6H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C70H105N6O6[M+H]+1125.8090, 实测值：1125.8087。
Figure BDA0001927318020001791
S-74:(3S,4S)-3,4-双(十四烷基-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸((S,S)-14,8.0mg,0.031mmol,1.0当量)、十四烷基胺(14.5mg,0.068mmol,2.2当量)、 HOAt(9.3mg,0.068mmol,2.2当量)和2,6-二甲基吡啶(16.6mg,0.155 mmol,5.00当量)溶解于无水DMF/CH2Cl2(1/1,0.3mL)。试剂溶解后 (约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(17.8mg,0.093mmol,3.0当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL) 和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl 水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)提供20.1mg(定量)的S-74。
Figure BDA0001927318020001801
S-75:(3S,4S)-N3,N4-双十四烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐.
将(3S,4S)-3,4-双(十四烷基-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯 (S-74,20.1mg,0.031mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到20.7 mg(定量)的S-75。
Figure BDA0001927318020001802
134:(3S,4S)-1-(4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3,N4-双十四烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,1.8mg)和 (3S,4S)-N3,N4-双十四烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-75,2.4mg) 提供2.9mg(81％)的134。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.56–7.51(m, 4H),7.30–7.08(m,11H),7.05(br,1H),6.63(br,1H),6.53(br,1H), 3.86–3.62(m,8H),3.32–2.94(m,8H),2.93–2.82(m,2H),2.08– 1.96(m,2H),1.52–1.07(m,52H),0.88(t,J＝6.8Hz,6H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C66H97N6O6[M+H]+1069.7464,实测值：1069.7464。
Figure BDA0001927318020001811
S-76:(3S,4S)-3,4-双(十二烷基-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸((S,S)-14,8.0mg,0.031mmol,1.0当量)、十二烷基胺(12.6mg,0.068mmol,2.2当量)、 HOAt(9.3mg,0.068mmol,2.2当量)和2,6-二甲基吡啶(16.6mg,0.155 mmol,5.00当量)溶解于无水DMF(0.15mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(17.8mg,0.093mmol,3.0当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3 mL)。将水相用EtOAc(3mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl 水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL) 洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)提供17.6mg(96％)的S-76。
Figure BDA0001927318020001812
S-77:(3S,4S)-N3,N4-双十二烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐.
将(3S,4S)-3,4-双(十二烷基-氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(S-76,17.6mg,0.030mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到16.8 mg(定量)的S-77。
Figure BDA0001927318020001821
135:(3S,4S)-1-(4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3,N4-双十二烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,1.8mg)和 (3S,4S)-N3,N4-双十二烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-77,2.1mg) 提供2.6mg(76％)的135。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.56–7.51(m, 4H),7.30–7.08(m,11H),7.00(br,1H),6.60(br,1H),6.49(br,1H), 3.86–3.63(m,8H),3.31–2.95(m,8H),2.93–2.82(m,2H),2.08– 1.96(m,2H),1.52–1.07(m,44H),0.88(t,J＝6.8Hz,3H),0.87(t,J＝ 6.8Hz,3H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C62H89N6O6[M+H]+1013.6838,实测值：1013.6834。
Figure BDA0001927318020001831
S-78:(3S,4S)-3,4-双(癸基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸((S,S)-14,8.0mg,0.031mmol,1.0当量)、癸基胺(10.7mg,0.068mmol,2.2当量)、HOAt (9.3mg,0.068mmol,2.2当量)和2,6-二甲基吡啶(16.6mg,0.155mmol, 5.00当量)溶解于无水DMF(0.15mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(17.8mg,0.093mmol,3.0当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液 (2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％ MeOH/CH2Cl2)提供19.0mg(定量)的S-78。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ6.32(br,1H),6.15(br,1H),3.88–3.76(m,1H),3.70–3.50(m,2H), 3.44–3.33(m,1H),3.27–3.15(m,5H),3.12–3.01(m,1H),1.51–1.37(m,13H),1.34–1.19(m,28H),0.87(t,J＝7.6Hz,6H)。
Figure BDA0001927318020001832
S-79:(3S,4S)-N3,N4-二癸基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐.
将(3S,4S)-3,4-双(癸基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(S-78, 6.6mg,0.031mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到16.5mg (定量)的S-79。
Figure BDA0001927318020001841
136:(3S,4S)-1-(4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3,N4-二癸基吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,1.8mg)和 (3S,4S)-N3,N4-二癸基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-79,1.9mg)提供 2.5mg(78％)的136。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.57–7.51(m,4H), 7.30–7.08(m,11H),7.03(br,1H),6.62(br,1H),6.51(br,1H),3.85– 3.63(m,8H),3.32–2.95(m,8H),2.93–2.82(m,2H),2.08–1.96(m, 2H),1.52–1.07(m,36H),0.88(t,J＝6.4Hz,3H),0.87(t,J＝6.8Hz, 3H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C58H81N6O6[M+H]+957.6212,实测值：957.6216。
Figure BDA0001927318020001842
S-80:(3S,4S)-3,4-双(辛基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸((S,S)-14,8.0mg,0.031mmol,1.0当量)、辛基胺(8.8mg,0.068mmol,2.2当量)、HOAt (9.3mg,0.068mmol,2.2当量)和2,6-二甲基吡啶(16.6mg,0.155mmol, 5.00当量)溶解于CH2Cl2(0.15mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(17.8mg,0.093mmol,3.0当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5h，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2 mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％ MeOH/CH2Cl2)提供15.2mg(定量)的S-80。
Figure BDA0001927318020001851
S-81:(3S,4S)-N3,N4-二辛基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐.
将(3S,4S)-3,4-双(辛基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(S-80, 14.9mg,0.031mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到13.8mg (定量)的S-81。
Figure BDA0001927318020001852
137:(3S,4S)-1-(4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3,N4-二辛基吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,2.5mg)和 (3S,4S)-N3,N4-二辛基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-81,2.3mg)提供 3.9mg(93％)的137。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝4.0 Hz,1H),8.28(d,J＝4.5Hz,1H),8.01(d,J＝5.5Hz,1H),7.87(t,J＝5.5 Hz,1H),7.55(s,4H),7.29–7.21(m,4H),7.18–7.10(m,4H),7.09– 7.04(m,2H),3.79(dt,J＝7.0,7.5Hz,2H),3.64(q,J＝9.0Hz,2H),3.55 –3.43(m,4H),3.19(q,J＝8.5Hz,2H),3.14–2.97(m,5H),2.95–2.81 (m,2H),2.80–2.75(m,1H),1.99–1.94(m,1H),1.88–1.83(m,1H),1.42–1.06(m,28H),0.86(t,J＝6.5Hz,3H),0.84(t,J＝7.0Hz,3H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C54H73N6O6[M+H]+901.5586,实测值： 901.5586。
Figure BDA0001927318020001861
S-82:(3S,4S)-3,4-双(己基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸((S,S)-14,8.0mg,0.031mmol,1.0当量)、己基胺(6.9mg,0.068mmol,2.2当量)、HOAt (9.3mg,0.068mmol,2.2当量)和2,6-二甲基吡啶(16.6mg,0.155mmol, 5.00当量)溶解于CH2Cl2(0.15mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(17.8mg,0.093mmol,3.0当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液 (2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)提供12.4mg(94％)的S-82。
Figure BDA0001927318020001871
S-83:(3S,4S)-N3,N4-二己基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐.
将(3S,4S)-3,4-双(己基氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(S-82, 12.4mg,0.029mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到12.7mg (定量)的S-83。
Figure BDA0001927318020001872
138(Diprovocim-6):(3S,4S)-1-(4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3,N4-二己基吡咯烷 -3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,2.5mg)和 (3S,4S)-N3,N4-二己基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-83,2.0mg)提供 3.5mg(90％)的138。[α]23 D 23.13(c＝0.66,MeOH),IR(纯)νmax 3280, 2928,1645,1620,1550,1434,1395,697cm–1。1H NMR(500MHz, DMSO-d6)δ8.41(d,J＝4.5Hz,1H),8.28(d,J＝4.0Hz,1H),8.01(d,J ＝5.5Hz,1H),7.87(t,J＝5.5Hz,1H),7.55(s,4H),7.29–7.21(m,4H), 7.18–7.10(m,4H),7.09–7.04(m,2H),3.83–3.76(m,2H),3.68– 3.61(m,2H),3.55–3.43(m,4H),3.23–3.16(m,2H),3.14–2.97(m, 5H),2.96–2.90(m,1H),2.87–2.82(m,1H),2.80–2.75(m,1H),1.99 –1.94(m,1H),1.88–1.83(m,1H),1.42–1.06(m,20H),0.86(t,J＝7.0 Hz,3H),0.82(t,J＝7.0Hz,3H)。13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ 171.65,170.93,170.42,169.69,167.47,167.42,141.29,141.20,137.71, 128.18,128.14,127.08,125.84,125.79,125.61,125.59,51.81,51.49, 48.95,48.74,47.22,46.96,45.24,45.08,38.64,38.59,32.55,32.46, 30.98,30.90,28.99,28.87,25.98,25.93,23.91,23.81,22.05,22.00, 15.34,15.25,13.91,13.87.HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C50H65N6O6 [M+H]+845.4960,实测值：845.4959。
Figure BDA0001927318020001881
S-84:(3S,4S)-3,4-双(丁基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯.
将(3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3,4-二甲酸((S,S)-14,8.0mg,0.031mmol,1.0当量)、丁基胺(5.0mg,0.068mmol,2.2当量)、HOAt (9.3mg,0.068mmol,2.2当量)和2,6-二甲基吡啶(16.6mg,0.155mmol, 5.00当量)溶解于CH2Cl2(0.15mL)。试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(17.8mg,0.093mmol,3.0当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液 (2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。短路径柱色谱(SiO2,5％ MeOH/CH2Cl2)提供10.8mg(95％)的S-84。
Figure BDA0001927318020001882
S-85:(3S,4S)-N3,N4-二丁基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐.
将(3S,4S)-3,4-双(丁基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(S-84, 10.8mg,0.029mmol)在4M HCl/二噁烷(0.2mL)的溶液中在室温下搅拌1小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于THF并浓缩(重复两次)以确保完全除去二噁烷。该过程用Et2O重复以得到11.5mg (定量)的S-85。
Figure BDA0001927318020001891
139:(3S,4S)-1-(4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯甲酰基)-N3,N4-二丁基吡咯烷-3,4-二甲酰胺.
使用胺与苯甲酸偶联的一般程序:4-((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯甲酸(120,2.5mg)和 (3S,4S)-N3,N4-二丁基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-85,1.7mg)提供 2.0mg(54％)的139。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝4.5 Hz,1H),8.27(d,J＝4.5Hz,1H),8.01(d,J＝5.5Hz,1H),7.87(t,J＝5.5 Hz,1H),7.56(s,4H),7.29–7.21(m,4H),7.18–7.10(m,4H),7.09– 7.04(m,2H),3.83–3.74(m,2H),3.68–3.61(m,2H),3.55–3.43(m, 4H),3.23–3.16(m,2H),3.14–2.99(m,5H),2.97–2.91(m,1H),2.87 –2.82(m,1H),2.80–2.75(m,1H),1.99–1.94(m,1H),1.88–1.83(m, 1H),1.41–1.06(m,12H),0.87(t,J＝7.0Hz,3H),0.81(t,J＝7.0Hz, 3H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C46H57N6O6[M+H]+789.4334, 实测值：789.4334。
Figure BDA0001927318020001901
140):(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双十六烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺).
将对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,0.6mg,0.0037mmol,1.0当量)、 (3S,4S)-N3,N4-双十六烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-73,5.3mg, 0.0082mmol,2.2当量)、HOAt(1.1mg,0.0082mmol,2.2当量)和2,6- 二甲基吡啶(2.0mg,0.019mmol,5.0当量)溶解于无水DMF/CH2Cl2 (1/1,0.2mL)。在0℃试剂溶解后(约5分钟)，在0℃一次性添加 EDCI·HCl(1.8mg,0.0093mmol,2.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和CH2Cl2(3mL)。将水相用CH2Cl2(3mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％ MeOH/CH2Cl2)提供4.2mg(84％)的140。1H NMR(500MHz, CDCl3/CD3OD＝4/1)δ7.51(s,4H),3.97–3.93(m,2H),3.69–3.60(m, 6H),3.20–3.00(m,12H),1.48–1.34(m,8H),1.29–1.16(m,104H), 0.83(t,J＝7.0Hz,12H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C84H153N6O6 [M+H]+1342.1845,实测值：1342.1834。
Figure BDA0001927318020001911
141:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双十四烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺).
将对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,0.7mg,0.0041mmol,1.0当量)、 (3S,4S)-N3,N4-双十四烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-75,5.2mg, 0.0090mmol,2.2当量)、HOAt(1.2mg,0.0090mmol,2.2当量)和2,6- 二甲基吡啶(2.2mg,0.020mmol,5.0当量)溶解于无水DMF/CH2Cl2 (1/1,0.2mL)。在0℃试剂溶解后(约5分钟)，在0℃一次性添加 EDCI·HCl(2.0mg,0.010mmol,2.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和CH2Cl2(3mL)。将水相用CH2Cl2(3mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％ MeOH/CH2Cl2)提供4.5mg(90％)的141。1H NMR(500MHz, CDCl3/CD3OD＝4/1)δ7.52(s,4H),4.00–3.93(m,2H),3.72–3.60(m, 6H),3.22–3.01(m,12H),1.49–1.35(m,8H),1.30–1.17(m,88H), 0.84(t,J＝7.0Hz,12H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C76H137N6O6 [M+H]+1230.0594,实测值：1230.0590。
Figure BDA0001927318020001921
142:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-双十二烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺).
将对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,0.7mg,0.0045mmol,1.0当量)、 (3S,4S)-N3,N4-双十二烷基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-77,5.2mg, 0.0098mmol,2.2当量)、HOAt(1.3mg,0.0098mmol,2.2当量)和2,6- 二甲基吡啶(2.4mg,0.022mmol,5.0当量)溶解于无水DMF/CH2Cl2 (1/1,0.2mL)。在0℃试剂溶解后(约5分钟)，在0℃一次性添加 EDCI·HCl(2.1mg,0.011mmol,2.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和CH2Cl2(3mL)。将水相用CH2Cl2(3mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％ MeOH/CH2Cl2)提供3.9mg(78％)的142。1H NMR(500MHz, CDCl3/CD3OD＝4/1)δ7.51(s,4H),3.99–3.93(m,2H),3.70–3.60(m, 6H),3.20–3.01(m,12H),1.48–1.35(m,8H),1.29–1.16(m,72H), 0.832(t,J＝7.0Hz,6H),0.827(t,J＝7.0Hz,6H).HRMS(ESI-TOF) m/z计算值：C68H121N6O6[M+H]+1117.9342,实测值：1117.9342。
Figure BDA0001927318020001931
143:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-二癸基吡咯烷-3,4-二甲酰胺).
将对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,0.7mg,0.0040mmol,1.0当量)、 (3S,4S)-N3,N4-二癸基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-79,4.2mg, 0.0088mmol,2.2当量)、HOAt(1.2mg,0.0088mmol,2.2当量)和2,6- 二甲基吡啶(2.1mg,0.020mmol,5.0当量)溶解于无水DMF/CH2Cl2 (1/2,0.3mL)。在0℃试剂溶解后(约5分钟)，在0℃一次性添加 EDCI·HCl(1.9mg,0.010mmol,2.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌4.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2 mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％ MeOH/CH2Cl2)提供1.9mg(48％)的143。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.54(s,4H),6.44(br,2H),6.20(br,2H),3.93(dd,J＝12.0,8.5Hz,2H), 3.81–3.65(m,6H),3.28–3.10(m,12H),1.52–1.40(m,8H),1.34– 1.20(m,56H),0.88(t,J＝7.0Hz,6H),0.87(t,J＝7.0Hz,6H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C60H105N6O6[M+H]+1005.8090,实测值：1005.8107。
Figure BDA0001927318020001941
144:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-二辛基吡咯烷 -3,4-二甲酰胺).
将对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,0.8mg,0.0048mmol,1.0当量)、 (3S,4S)-N3,N4-二辛基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-81,4.4mg,0.011 mmol,2.2当量)、HOAt(1.4mg,0.011mmol,2.2当量)和2,6-二甲基吡啶(2.6mg,0.024mmol,5.0当量)溶解于无水DMF/CH2Cl2(1/2,0.3 mL)。在0℃试剂溶解后(约5分钟)，在0℃一次性添加EDCI·HCl(2.3 mg,0.012mmol,2.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌4.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL) 萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％MeOH/CH2Cl2)提供3.7 mg(93％)的144。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.54(s,4H),6.61(br, 2H),6.44(br,2H),3.85(dd,J＝12.5,9.0Hz,2H),3.77(t,J＝11.0,2H), 3.70(d,J＝9.0Hz,4H),3.28–3.04(m,12H),1.52–1.39(m,8H),1.34 –1.19(m,40H),0.88(t,J＝7.0Hz,6H),0.87(t,J＝7.0Hz,6H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C52H89N6O6[M+H]+893.6838,实测值： 893.6826。
Figure BDA0001927318020001951
145:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-二己基吡咯烷 -3,4-二甲酰胺).
将对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,0.9mg,0.0051mmol,1.0当量)、 (3S,4S)-N3,N4-二己基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-83,4.1mg,0.011 mmol,2.2当量)、HOAt(1.5mg,0.011mmol,2.2当量)和2,6-二甲基吡啶(2.7mg,0.026mmol,5.0当量)溶解于无水DMF/CH2Cl2(1/2,0.3 mL)。在0℃试剂溶解后(约5分钟)，在0℃一次性添加EDCI·HCl(2.5 mg,0.013mmol,2.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌4.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(3mL) 萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％MeOH/CH2Cl2)提供4.0 mg(定量)的145。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.56(br,2H),7.50(br, 2H),6.64(br,2H),6.49(br,2H),3.90–3.81(m,2H),3.80–3.63(m,6H),3.32–3.02(m,12H),1.53–1.38(m,8H),1.35–1.21(m,24H), 0.92–0.83(m,12H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C44H73N6O6 [M+H]+781.5586,实测值：781.5588。
Figure BDA0001927318020001961
146:(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-对苯二甲酰基双(N3,N4-二丁基吡咯烷 -3,4-二甲酰胺).
将对苯二甲酸(苯-1,4-二甲酸,1.2mg,0.0075mmol,1.0当量)、 (3S,4S)-N3,N4-二丁基吡咯烷-3,4-二甲酰胺盐酸盐(S-85,5.0mg,0.017 mmol,2.2当量)、HOAt(2.2mg,0.017mmol,2.2当量)和2,6-二甲基吡啶(4.0mg,0.037mmol,5.0当量)溶解于无水DMF/CH2Cl2(1/1,0.2 mL)。在0℃试剂溶解后(约5分钟)，在0℃一次性添加EDCI·HCl(3.6 mg,0.019mmol,2.5当量)，将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和CH2Cl2(3mL)。将水相用CH2Cl2(3 mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(2mL)、饱和 NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤。将有机相用 Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％MeOH/CH2Cl2) 提供2.6mg(52％)的146。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54(br,4H), 6.64(br,2H),6.49(br,2H),3.88–3.64(m,8H),3.33–3.01(m,12H),1.52–1.39(m,8H),1.38–1.23(m,16H),0.92(t,J＝7.6Hz,6H),0.89 (t,J＝7.2Hz,6H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C36H57N6O6 [M+H]+669.4334,实测值：669.4333。
Figure BDA0001927318020001971
147:2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酸叔丁酯.
将(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-羟基-对苯二甲酰基)双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)(53,140mg,0.151 mmol)和K2CO3(62.6mg,0.453mmol)在室温下溶解于无水DMF(1.5 mL)。滴加溴乙酸叔丁酯(3.7mg,0.0178mmol)在无水DMF(0.8mL) 中的溶液，将混合物搅拌3.5小时。在0℃将混合物倒入1N HCl水溶液(10mL)和EtOAc(30mL)。将水相用EtOAc(10mL)萃取两次，将合并的有机相用1N HCl水溶液(5mL)、饱和NaHCO3水溶液(5mL) 和饱和NaCl水溶液(5mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。快速柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)提供152mg(97％)的147。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝5.6Hz,1H),8.41(d,J＝ 5.6Hz,1H),8.30(d,J＝4.4Hz,2H),7.30–7.19(m,10H),7.19–7.00 (m,13H),4.82(d,J＝16.8Hz,1H),4.76(d,J＝16.4Hz,1H),3.88– 3.73(m,3H),3.64(t,J＝9.2Hz,1H),3.55–3.40(m,4H),3.23–3.14 (m,2H),3.13-3.04(m,2H),2.88–2.72(m,4H),2.00–1.92(m,2H), 1.90–1.79(m,2H),1.33(s,9H),1.20–1.05(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C63H67N8O12[M+H]+1039.4964,实测值： 1039.4964。
Figure BDA0001927318020001981
148:3-(2-(2-(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙氧基)乙氧基)-乙氧基)丙酸叔丁酯
将(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-羟基-对苯二甲酰基)双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基-环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)(53,8.0mg,0.00865 mmol)和K2CO3(3.6mg,0.0260mmol)在室温下溶解于无水DMF(100 μL)。添加溴-PEG3-叔丁基酯(Broadpharm,9380Waples St.,Suite 101, San Diego,CA 92121；3.5mg,0.0104mmol)在无水DMF(100μL)中的溶液。将混合物在60℃温热并搅拌4小时。冷却至室温后，将混合物倒入1N HCl水溶液(3mL)和EtOAc(5mL)。将水相用EtOAc(3mL) 萃取，将合并的有机相用1N HCl水溶液(3mL)、饱和NaHCO3水溶液(3mL)和饱和NaCl水溶液(3mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,8％MeOH/CH2Cl2)产生6.0mg (58％)的148。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝11.6Hz,2H), 8.26(d,J＝11.6Hz,2H),7.32–7.01(m,23H),4.17(br,2H),3.85–3.62 (m,6H),3.58–3.39(m,14H),3.24–3.04(m,4H),2.90–2.72(m,4H), 2.38(br,2H),2.01–1.92(m,2H),1.90–1.80(m,2H),1.38(s,9H),1.22 –1.04(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C69H81N6O12[M+H]+ 1185.5907,实测值：1185.5908。
Figure BDA0001927318020001991
149:1-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基) 吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十五烷-15-酸叔丁酯.
将(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-羟基-对苯二甲酰基)双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基-环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)(53,8.8mg,0.0095 mmol)和溴乙酰胺基-PEG3-叔丁基酯(Broadpharm,如上；4.5mg, 0.0114mmol)溶解于无水DMF(150μL)，将混合物在60℃温热。添加 K2CO3(4.0mg,0.0285mmol)，将混合物搅拌16小时。冷却至室温后，将混合物用EtOAc(5mL)稀释，用0.5N HCl水溶液(2×3.5mL)和饱和NaCl水溶液(4mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％MeOH/CH2Cl2)产生7.3mg(62％)的149。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝4.4Hz,2H),8.28(d,J＝3.6Hz,1H),8.25(d,J＝4.0Hz,1H),8.06(t,J＝5.2Hz,1H),7.35–7.02 (m,23H),4.66(s,2H),3.79(q,J＝10.0Hz,2H),3.68–3.40(m,16H), 3.39–3.28(m,2H),3.27–3.14(m,4H),3.13–3.04(m,2H),2.89– 2.73(m,4H),2.39(t,J＝6.0Hz,2H),2.00–1.93(m,2H),1.91–1.82 (m,2H),1.38(s,9H),1.21–1.05(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C71H84N7O13[M+H]+1242.6121,实测值：1242.6125。
Figure BDA0001927318020002001
150:2-(2-(2-(2-((2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基) 乙酸叔丁酯.
将(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-氨基-对苯二甲酰基)双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基-环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)(55,5.3mg,0.0057 mmol)和13,13-二甲基-11-氧代-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-酸(1.6mg, 0.0057mmol)在室温下溶解于无水DMF(100μL)。添加DEPBT(1.9 mg,0.0063mmol)和Et3N(1.6μL,0.0115mmol)，将混合物搅拌16小时。将混合物用EtOAc(10mL)稀释，用柠檬酸水溶液(5mL,10％w/v) 和饱和NaHCO3水溶液(3mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％MeOH/CH2Cl2)产生2.9mg(43％) 的150。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.43(d,J＝3.6Hz,1H),8.42 (d,J＝4.0Hz,1H),8.30(d,J＝4.8Hz,1H),8.29(d,J＝4.8Hz,1H), 8.22(s,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.31–7.20(m,9H),7.18–7.01(m, 12H),4.05(br,2H),3.94(s,2H),3.79(t,J＝10.4Hz,2H),3.70–3.44(m, 12H),3.27–3.14(m,4H),3.13–3.05(m,2H),2.87–2.81(m,2H),2.80 –2.72(m,2H),2.00–1.93(m,2H),1.89–1.82(m,2H),1.39(s,9H), 1.19–1.06(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C68H78N7O12 [M+H]+1184.5703,实测值：1184.5722。
Figure BDA0001927318020002011
S-86:2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酸.
将2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)- 吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酸叔丁酯(147,142mg,0.137mmol)在室温下溶解于CH2Cl2(0.4mL)。添加TFA(0.4mL)，将混合物搅拌2小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于MeCN并浓缩(重复两次)以确保完全除去TFA。该过程用CH2Cl2重复。快速柱色谱(SiO2,0.1％甲酸/10％MeOH/CH2Cl2)提供146mg(定量)的S-86。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ8.43(d,J＝4.5Hz,1H),8.41(d,J＝4.0Hz,1H), 8.30(d,J＝4.5Hz,1H),8.27(d,J＝4.0Hz,1H),7.31–7.02(m,23H),4.84(d,J＝17.0Hz,1H),4.80(d,J＝16.5Hz,1H),3.87–3.73(m,2H), 3.65(dd,J＝10.5,7.5Hz,1H),3.60–3.41(m,5H),3.24–3.16(m,2H), 3.14–3.07(m,2H),2.88–2.82(m,2H),2.81–2.73(m,2H),2.00– 1.94(m,2H),1.92–1.83(m,2H),1.21–1.06(m,8H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ171.69,171.53,170.91,169.86,167.30,165.41, 153.32,141.35,141.30,141.29,138.31,128.22,128.18,127.98,127.87, 125.87,125.84,125.65,125.62,119.74,111.07,64.67,51.43,50.02, 48.78,48.26,47.02,46.63,45.28,45.11,32.62,32.60,32.53,32.51, 23.96,23.95,23.86,15.41,15,39,15.30.HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C58H59N6O9[M+H]+983.4338,实测值：983.4339。
Figure BDA0001927318020002021
148:3-(2-(2-(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)-乙氧基)丙酸叔丁酯.
将3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-羟基-对苯二甲酰基)双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基-环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)(53,8.0mg,0.00865 mmol)和K2CO3(3.6mg,0.0260mmol)在室温下溶解于无水DMF(100 μL)。添加溴-PEG3-叔丁基酯(Broadpharm；3.5mg,0.0104mmol)在无水DMF(100μL)中的溶液。混合物在60℃温热并搅拌4小时。冷却至室温后，将混合物倒入1N HCl水溶液(3mL)和EtOAc(5mL)。将水相用EtOAc(3mL)萃取，将合并的有机相用1N HCl水溶液(3mL)、饱和NaHCO3水溶液(3mL)和饱和NaCl水溶液(3mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,8％ MeOH/CH2Cl2)产生6.0mg(58％)的148。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ8.40(d,J＝11.6Hz,2H),8.26(d,J＝11.6Hz,2H),7.32–7.01(m, 23H),4.17(br,2H),3.85–3.62(m,6H),3.58–3.39(m,14H),3.24– 3.04(m,4H),2.90–2.72(m,4H),2.38(br,2H),2.01–1.92(m,2H), 1.90–1.80(m,2H),1.38(s,9H),1.22–1.04(m,8H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C69H81N6O12[M+H]+1185.5907,实测值： 1185.5908。
Figure BDA0001927318020002031
149:1-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基) 吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十五烷-15-酸叔丁酯.
将(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-羟基-对苯二甲酰基)双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基-环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)(53,8.8mg,0.0095 mmol)和溴乙酰胺基-PEG3-叔丁基酯(Broadpharm；4.5mg,0.0114 mmol)溶解于无水DMF(150μL)，将混合物在60℃温热。添加K2CO3 (4.0mg,0.0285mmol)，将混合物搅拌16小时。冷却至室温后，将混合物用EtOAc(5mL)稀释，用0.5N HCl水溶液(2×3.5mL)和饱和 NaCl水溶液(4mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％MeOH/CH2Cl2)产生7.3mg(62％)的149。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝4.4Hz,2H),8.28(d,J＝3.6 Hz,1H),8.25(d,J＝4.0Hz,1H),8.06(t,J＝5.2Hz,1H),7.35–7.02(m, 23H),4.66(s,2H),3.79(q,J＝10.0Hz,2H),3.68–3.40(m,16H), 3.39–3.28(m,2H),3.27–3.14(m,4H),3.13–3.04(m,2H),2.89– 2.73(m,4H),2.39(t,J＝6.0Hz,2H),2.00–1.93(m,2H),1.91–1.82 (m,2H),1.38(s,9H),1.21–1.05(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C71H84N7O13[M+H]+1242.6121,实测值：1242.6125。
Figure BDA0001927318020002041
150:2-(2-(2-(2-((2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯基)氨基)-2-氧代乙氧基)-乙氧基)乙氧基) 乙酸叔丁酯.
将(3S,3'S,4S,4'S)-1,1'-(2-氨基-对苯二甲酰基)双(N3,N4-双 ((1S,2R)-2-苯基-环丙基)吡咯烷-3,4-二甲酰胺)(55,5.3mg,0.0057 mmol)和13,13-二甲基-11-氧代-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-酸(1.6mg, 0.0057mmol)在室温下溶解于无水DMF(100μL)。添加DEPBT(1.9 mg,0.0063mmol)和Et3N(1.6μL,0.0115mmol)，将混合物搅拌16小时。将混合物用EtOAc(10mL)稀释，用柠檬酸水溶液(5mL,10％w/v) 和饱和NaHCO3水溶液(3mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，倾析并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％MeOH/CH2Cl2)产生2.9mg(43％) 的150。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.43(d,J＝3.6Hz,1H),8.42 (d,J＝4.0Hz,1H),8.30(d,J＝4.8Hz,1H),8.29(d,J＝4.8Hz,1H), 8.22(s,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.31–7.20(m,9H),7.18–7.01(m, 12H),4.05(br,2H),3.94(s,2H),3.79(t,J＝10.4Hz,2H),3.70–3.44(m, 12H),3.27–3.14(m,4H),3.13–3.05(m,2H),2.87–2.81(m,2H),2.80 –2.72(m,2H),2.00–1.93(m,2H),1.89–1.82(m,2H),1.39(s,9H), 1.19–1.06(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C68H78N7O12 [M+H]+1184.5703,实测值：1184.5722。
Figure BDA0001927318020002051
S-86:2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酸.
将2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)- 吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酸叔丁酯(147,142mg,0.137mmol)在室温下溶解于CH2Cl2(0.4mL)。添加TFA(0.4mL)，将混合物搅拌2小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于MeCN并浓缩(重复两次)以确保完全除去TFA。该过程用CH2Cl2重复。快速柱色谱(SiO2,0.1％甲酸/10％MeOH/CH2Cl2)提供146mg(定量)的S-86。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ8.43(d,J＝4.5Hz,1H),8.41(d,J＝4.0Hz,1H), 8.30(d,J＝4.5Hz,1H),8.27(d,J＝4.0Hz,1H),7.31–7.02(m,23H),4.84(d,J＝17.0Hz,1H),4.80(d,J＝16.5Hz,1H),3.87–3.73(m,2H), 3.65(dd,J＝10.5,7.5Hz,1H),3.60–3.41(m,5H),3.24–3.16(m,2H), 3.14–3.07(m,2H),2.88–2.82(m,2H),2.81–2.73(m,2H),2.00– 1.94(m,2H),1.92–1.83(m,2H),1.21–1.06(m,8H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ171.69,171.53,170.91,169.86,167.30,165.41, 153.32,141.35,141.30,141.29,138.31,128.22,128.18,127.98,127.87, 125.87,125.84,125.65,125.62,119.74,111.07,64.67,51.43,50.02, 48.78,48.26,47.02,46.63,45.28,45.11,32.62,32.60,32.53,32.51, 23.96,23.95,23.86,15.41,15,39,15.30.HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C58H59N6O9[M+H]+983.4338,实测值：983.4339。
Figure BDA0001927318020002061
S-87:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酸叔丁酯.
将2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基) 吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酸(S-86,150mg,0.153mmol,1.00当量)、甘氨酸叔丁酯盐酸盐(51mg,0.306mmol,2.00当量)、HOAt(31mg, 0.320mmol,1.50当量)和2,6-二甲基吡啶(89μL,0.765mmol,5.00当量)溶解于无水DMF(0.8mL)。在0℃试剂溶解后(约5分钟)，在0℃一次性添加EDCI·HCl(88mg,0.459mmol,3.00当量)，将反应混合物在相同温度下搅拌30分钟。将反应混合物温热至室温，并搅拌4小时，然后在0℃倒入1N HCl水溶液(5mL)和EtOAc(20mL)。将水相用EtOAc(8mL)萃取两次，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(5 mL)、饱和NaHCO3水溶液(5mL)和饱和NaCl水溶液(5mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。快速柱色谱(SiO2,5％ MeOH/CH2Cl2)提供134mg(80％)的S-87。1H NMR(500MHz, DMSO-d6)δ8.41(d,J＝4.0Hz,2H),8.32(t,J＝6.0Hz,1H),8.29(d,J ＝4.5Hz,1H),8.26(d,J＝4.5Hz,1H),7.33(d,J＝7.5Hz,1H),7.29– 7.04(m,22H),4.73(d,J＝15.5Hz,1H),4.70(d,J＝15.0Hz,1H),3.85 –3.73(m,4H),3.66(dd,J＝10.5,7.5Hz,1H),3.60–3.47(m,5H),3.23 –3.15(m,2H),3.14–3.07(m,2H),2.88-2.82(m,2H),2.81–2.75(m, 2H),2.00–1.94(m,2H),1.92–1.84(m,2H),1.35(s,9H),1.21–1.07 (m,8H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ171.81,171.57,171.16,170.81,168.51,167.89,167.12,165.46,153.39,141.30,141.25,141.20, 138.58,128.19,128.14,128.00,127.82,125.83,125.78,125.63,125.62, 125.60,120.26,112.13,80.74,67.28,51.43,50.11,48.77,48.14,47.00, 46.57,45.20,45.09,41.14,32.56,32.51,32.46,27.66,23.91,23.88, 23.80,15.37,15.27.HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C64H70N7O10 [M+H]+1096.5178,实测值：1096.5183。
Figure BDA0001927318020002071
S-88:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酸.
将(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)- 吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酸叔丁酯(S-87,134mg,0.122 mmol)在室温下溶解于CH2Cl2(0.6mL)。在0℃添加TFA(0.6mL)，将混合物在室温下搅拌2小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于MeCN并浓缩(重复两次)以确保完全除去TFA。该过程用CH2Cl2重复。快速柱色谱(SiO2,0.1％甲酸/10％MeOH/CH2Cl2)提供125mg (98％)的S-88。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.42(br,2H),8.30(d,J ＝6.0Hz,1H),8.29(d,J＝5.0Hz,1H),8.26(t,J＝3.0Hz,1H),7.32(d,J ＝7.5Hz,1H),7.28–7.03(m,22H),4.72(d,J＝15.5Hz,1H),4.69(d,J＝15.0Hz,1H),3.88–3.75(m,4H),3.65(dd,J＝10.5,8.0Hz,1H),3.59 –3.46(m,4H),3.32(t,J＝9.5Hz,1H),3.23–3.15(m,2H),3.13–3.06 (m,2H),2.87–2.81(m,2H),2.80–2.74(m,2H),2.00–1.93(m,2H), 1.91–1.84(m,2H),1.21–1.06(m,8H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6) δ171.84,171.62,171.16,170.87,170.84,167.84,167.16,165.46,153.41, 141.33,141.30,141.25,138.60,128.21,128.17,128.00,127.85,125.84, 125.80,125.64,125.60,120.23,117.68,117.68,115.72,112.11,67.29, 51.45,50.11,48.76,48.12,47.03,46.64,45.22,45.11,40.48,32.59, 32.54,32.48,23.92,23.87,23.81,15.46,15.38,15.31.HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C60H62N7O10[M+H]+1040.4552实测值：1040.4550。
Figure BDA0001927318020002081
S-89(YM1-98-1):(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-丝氨酸叔丁酯.
将(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基) 吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酸(S-88,15.1mg,0.0145mmol, 1.00当量)、L-丝氨酸叔丁酯盐酸盐(3.4mg,0.0174mmol,1.20当量)、 HOAt(2.2mg,0.0160mmol,1.10当量)和2,6-二甲基吡啶(4.7mg, 0.0435mmol,3.00当量)溶解于无水DMF(0.1mL)。在室温下试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(4.2mg,0.0218mmol,1.50当量)，反应混合物经2.5小时，然后在0℃倒入1N HCl水溶液(2mL) 和EtOAc(5mL)。将水相用EtOAc(2mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(1mL)、饱和NaHCO3水溶液(1mL)和饱和NaCl 水溶液(1mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％MeOH/CH2Cl2)产生13.6mg(79％)的S-89。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(br,1H),8.37(br,1H),8.28(br,1H), 8.25(br,1H),8.18(br,1H),8.14(d,J＝8.0Hz,1H),7.34–7.01(m, 23H),4.99(br,1H),4.70(s,2H),4.25(br,1H),3.92–3.74(m,4H),3.70 –3.45(m,8H),3.23–3.14(m,2H),3.13–3.05(m,2H),2.88–2.74(m, 4H),2.00–1.92(m,2H),1.91–1.82(m,2H),1.38(s,9H),1.20–1.05 (m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C67H75N8O12[M+H]+ 1183.5499,实测值：1183.5478。
Figure BDA0001927318020002091
151:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-丝氨酸.
将(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)- 吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-丝氨酸叔丁酯(S-89,11.0 mg,0.00930mmol)在室温下溶解于CH2Cl2(0.1mL)。添加TFA(0.1 mL)，将混合物搅拌2小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于MeCN并浓缩(重复两次)以确保完全除去TFA。该过程用CH2Cl2重复。制备型薄层色谱(SiO2,10％MeOH/CH2Cl2)产生11.8mg(定量) 的151。[α]22 D 48.21(c＝0.92,MeOH).IR(纯)νmax 3282,1650,1551, 1442,1197,1137,696cm-1。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.44(d,J ＝4.5Hz,1H),8.41(d,J＝4.5Hz,1H),8.31(d,J＝4.5Hz,1H),8.29(d, J＝4.0Hz,1H),8.21–8.15(m,2H),8.09(d,J＝6.0Hz,1H),7.31(d,J＝7.5Hz,1H),7.28–7.03(m,22H),4.70(s,2H),4.28(dt,J＝7.5,5.0Hz, 1H),3.88–3.74(m,4H),3.73–3.26(m,8H),3.23–3.15(m,2H),3.14 –3.06(m,2H),2.88–2.81(m,2H),2.80–2.74(m,2H),2.00–1.94(m,2H),1.91–1.84(m,2H),1.21–1.06(m,8H)。13C NMR(125MHz, DMSO-d6)δ172.05 171.70,171.65,171.01,171.89,168.34,167.63, 167.20,165.47,153.50,141.35,141.28,138.60,128.22,128.18,127.99, 127.82,125.87,125.84,125.81,125.65,125.61,120.15,118.25,116.26, 112.07,67.32,61.45,54.68,51.45,50.16,48.75,48.17,47.05,46.69, 45.30,45.10,41.61,32.62,32.56,32.52,23.93,23.91,23.83,23.80, 15.44,15.39,15.33.HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C63H67N8O12 [M+H]+1127.4873,实测值：1127.4871。
Figure BDA0001927318020002101
152:1-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)-2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十五烷-15- 酸.
将1-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)- 吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十五烷-15-酸叔丁酯(149,13.3mg,0.0107mmol)在室温下溶解于CH2Cl2(0.2mL)。添加TFA(0.2mL)，将混合物在室温下搅拌1小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于MeCN并浓缩(重复两次)以确保完全除去 TFA。将该过程用CH2Cl2重复。快速柱色谱(SiO2,0.1％甲酸/10％ MeOH/CH2Cl2)提供12.5mg(98％)的152。1H NMR(500MHz, DMSO-d6)δ8.50(br,1H),8.46(br,1H),8.36(br,2H),8.09(t,J＝5.5Hz, 1H),7.31(d,J＝8.0Hz,1H),7.28–7.04(m,22H),4.66(s,2H),3.81–3.74(m,2H),3.64(dd,J＝10.5,8.0Hz,1H),3.60–3.55(m,3H),3.54– 3.40(m,10H),3.38–3.28(m,4H),3.26–3.16(m,4H),3.13–3.06(m, 2H),2.87–2.82(m,2H),2.81–2.75(m,2H),2.38(t,J＝6.5Hz,2H), 1.97(ddd,J＝9.5,6.0,3.5Hz,2H),1.90–1.85(m,2H),1.21–1.07(m, 8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C67H76N7O13[M+H]+1186.5495, 实测值：1186.5497。
Figure BDA0001927318020002111
153:1-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-2-氧代-6,9,12,15,18,21-六氧杂-3-氮杂二十四烷-24-酸叔丁酯.
将2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基) 吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酸(S-86,15mg,0.0153mmol,1.00当量)、 1-氨基-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷-21-酸叔丁酯(9.4mg,0.0230 mmol,1.50当量)、DMAP(痕量)和i-Pr3NEt(4.0mg,0.0306mmol,2.00 当量)溶解于无水DMF(0.1mL)。试剂溶解后(约5min)，在室温下一次性添加EDCI·HCl(5.9mg,0.0306mmol,2.00当量)，将反应混合物搅拌20小时。添加HOAt(2.3mg,0.0168mmol,1.10当量)、2,6-二甲基吡啶(1滴)和EDCI·HCl(5.9mg,0.0306mmol,2.00当量)。将反应混合物搅拌4小时，然后倒入1N HCl水溶液(1mL)和EtOAc(4mL)。将水相用EtOAc(2mL)萃取两次，将合并的有机相依次用1N HCl 水溶液(1mL)、饱和NaHCO3水溶液(1mL)和饱和NaCl水溶液(1mL) 洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。快速柱色谱(SiO2,6％ MeOH/CH2Cl2)提供9.3mg(44％)的153。1H NMR(500MHz,DMSO-d6) δ8.40(d,J＝4.5Hz,2H),8.28(d,J＝4.5Hz,1H),8.25(d,J＝4.5Hz, 1H),8.05(t,J＝5.5Hz,1H),7.32(d,J＝8.0Hz,1H),7.28–7.20(m, 9H),7.18–7.04(m,13H),4.66(s,2H),3.79(td,J＝12.0,9.0Hz,2H), 3.66–3.55(m,5H),3.54–3.41(m,23H),3.39–3.28(m,2H),3.27– 3.15(m,4H),3.13–3.05(m,2H),2.87–2.81(m,2H),2.80–2.74(m, 2H),2.40(t,J＝6.0Hz,2H),1.99–1.94(m,2H),1.90–1.84(m,2H), 1.38(s,9H),1.20–1.07(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C77H96N7O16[M+H]+1374.6908,实测值：1374.6936。
Figure BDA0001927318020002121
154:1-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)-2-氧代-6,9,12,15,18,21-六氧杂-3-氮杂二十四烷-24-酸.
将1-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)- 吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-2-氧代-6,9,12,15,18,21-六氧杂-3-氮杂二十四烷-24-酸叔丁基酯(153,7.5mg,0.00546mmol)在室温下溶解于CH2Cl2 (0.1mL)。添加TFA(0.1mL)，将混合物在室温下搅拌1小时。通过 N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于MeCN并浓缩(重复两次)以确保完全除去TFA。将该过程用CH2Cl2重复。制备型薄层色谱(SiO2,10％ MeOH/CH2Cl2)提供6.7mg(93％)的154。1H NMR(500MHz,DMSO-d6) δ8.47(br,1H),8.44(br,1H),8.32(br,2H),8.07(t,J＝6.0Hz,1H),7.31 (d,J＝8.0Hz,1H),7.28–7.04(m,22H),4.65(s,2H),3.81–3.74(m,2H),3.66–3.55(m,4H),3.54–3.41(m,24H),3.38–3.35(m,2H),3.26 –3.16(m,4H),3.13–3.06(m,2H),2.87–2.82(m,2H),2.80–2.75(m, 2H),2.41(t,J＝6.5Hz,2H),1.99–1.94(m,2H),1.90–1.85(m,2H), 1.20–1.07(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C73H88N7O16 [M+H]+1318.6282,实测值：1318.6287。
Figure BDA0001927318020002131
14,14-二甲基-12-氧代-3,6,9,13-四氧杂十五烷基N-(((9H-芴-9- 基)甲氧基)羰基)-O-(叔丁基)-L-丝氨酸酯.
将3-(2-(2-(2-羟基乙氧基)-乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯 [Broadpharm,9380Waples St.,Suite 101,San Diego,CA 92121](50mg, 0.180mmol,1.00当量)、N-(((9H-芴-9-基)甲氧基)-羰基)-O-(叔丁基)-L- 丝氨酸(69mg,0.180mmol,1.00当量)和DMAP(22mg,0.180mmol, 1.00当量)溶解于CH2Cl2(0.9mL)。试剂溶解后(约5分钟)，在室温下一次性添加EDCI·HCl(52mg,0.270mmol,1.50当量)，将反应混合物搅拌17.5小时，然后倒入1N HCl水溶液(3mL)和EtOAc(15mL)。将水相用EtOAc(5mL)萃取两次，将合并的有机相依次用1N HCl 水溶液(2mL)、饱和NaHCO3水溶液(2mL)和饱和NaCl水溶液(2mL) 洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。快速柱色谱(SiO2,5％ MeOH/CH2Cl2)提供95.7mg(83％)的标题化合物，为无色油状物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.76(d,J＝7.5Hz,2H),7.63(d,J＝7.5Hz,1H),7.62(d,J＝7.5Hz,1H),7.40(t,J＝7.5Hz,2H),7.32(t,J＝7.5 Hz,2H),5.68(d,J＝8.5Hz,1H),4.54–4.49(m,1H),4.43–4.21(m, 5H),3.85(br,1H),3.74–3.57(m,13H),2.49(t,J＝6.5Hz,2H),1.44(s, 9H),1.16(s,9H)。
Figure BDA0001927318020002132
14,14-二甲基-12-氧代-3,6,9,13-四氧杂十五烷基O-(叔丁基)-L- 丝氨酸酯.
将14,14-二甲基-12-氧代-3,6,9,13-四氧杂-十五烷基N-(((9H-芴 -9-基)甲氧基)-羰基)-O-(叔丁基)-L-丝氨酸酯(40.7mg,0.0632mmol)在室温下溶解于CH2Cl2(0.3mL)。添加Et2NH(0.3mL)，将混合物在室温下搅拌3小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于CH2Cl2并浓缩(重复两次)以确保完全除去Et2NH。快速柱色谱(SiO2,4％ MeOH/CH2Cl2)提供14.7mg(55％)的标题化合物，为无色无定形物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ4.31–4.23(m,2H),3.74–3.56(m, 15H),2.49(t,J＝6.5Hz,2H),1.43(s,9H),1.15(s,9H)。
Figure BDA0001927318020002141
155:14,14-二甲基-12-氧代-3,6,9,13-四氧杂十五烷基N-((2-(2,5- 双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酰基)-O-(叔丁基)-L-丝氨酸酯.
将(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基) 吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酸(S-88,8.0mg,0.00769mmol, 1.00当量)、14,14-二甲基-12-氧代-3,6,9,13-四氧杂-十五烷基O-(叔丁基)-L-丝氨酸酯(4.8mg,0.0115mmol,1.50当量)、HOAt(1.3mg, 0.00923mmol,1.20当量)和2,6-二甲基吡啶(2.5mg,0.0231mmol,3.00当量)溶解于无水DMF(0.1mL)。在0℃试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(3.0mg,0.0154mmol,2.00当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时,然后在0℃倒入1N HCl水溶液(1mL)和EtOAc (3mL)。将水相用EtOAc(2mL)萃取两次，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(1mL)、饱和NaHCO3水溶液(1mL)和饱和NaCl水溶液(1 mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱 (SiO2,10％MeOH/CH2Cl2)产生6.1mg(55％)的155，为无色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝4.5Hz,1H),8.37(d,J＝4.5 Hz,1H),8.24(d,J＝8.0Hz,1H),8.23(d,J＝4.5Hz,1H),8.18(t,J＝6.0 Hz,1H),7.32(d,J＝7.5Hz,1H),7.28–7.20(m,8H),7.19–7.10(m, 10H),7.08–7.04(m,4H),4.69(s,2H),4.47(dt,J＝8.0,4.5Hz,1H), 4.20–4.07(m,2H),3.88(d,J＝6.0Hz,2H),3.87–3.75(m,2H),3.68– 3.54(m,7H),3.53–3.45(m,12H),3.22–3.15(m,3H),3.13–3.06(m, 2H),2.87–2.81(m,2H),2.80–2.74(m,2H),2.40(t,J＝6.5Hz,2H), 1.96(ddd,J＝9.5,7.0,3.5Hz,2H),1.90–1.83(m,2H),1.38(s,9H), 1.19–1.13(m,4H),1.12–1.05(m,4H),1.08(s,9H).HRMS(ESI-TOF) m/z计算值：C80H99N8O17[M+H]+1443.7122,实测值：1443.7099。
Figure BDA0001927318020002151
156:(S)-1-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)-7-(羟基甲基)-2,5,8-三氧代-9,12,15,18- 四氧杂-3,6-二氮杂二十一烷-21-酸.
将14,14-二甲基-12-氧代-3,6,9,13-四氧杂十五烷基N-((2-(2,5-双 ((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基) 苯氧基)乙酰基)甘氨酰基)-O-(叔丁基)-L-丝氨酸酯(155,3.1mg, 0.00215mmol)在室温下溶解于CH2Cl2(0.1mL)。在0℃添加TFA(0.1 mL)，将混合物在室温下搅拌2小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于MeCN并浓缩(重复两次)以确保完全除去TFA。将该过程用CH2Cl2重复。制备型薄层色谱(SiO2,15％MeOH/CH2Cl2)产生2.4 mg(83％)的156，为无色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.42(d, J＝4.5Hz,1H),8.40(d,J＝4.0Hz,1H),8.38(br,1H),8.29(d,J＝4.5 Hz,1H),8.27(d,J＝4.0Hz,1H),8.26(br,1H),7.31(d,J＝7.5Hz,1H), 7.28–7.20(m,8H),7.18–7.10(m,10H),7.08–7.04(m,4H),4.70(s, 2H),4.37(dt,J＝7.0,5.0Hz,1H),4.18–4.10(m,2H),3.86(d,J＝5.5 Hz,2H),3.85–3.75(m,2H),3.72–3.45(m,19H),3.23–3.15(m,3H),3.13–3.06(q,J＝8.5Hz,2H),2.87–2.81(m,2H),2.80–2.74(m,2H), 2.40(t,J＝7.0Hz,2H),1.97(ddd,J＝9.5,6.5,3.5Hz,2H),1.90–1.84 (m,2H),1.20–1.06(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C72H83N8O17[M+H]+1331.5870,实测值：1331.5871。
Figure BDA0001927318020002161
157:(S)-1-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双-(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-7-(羟基甲基)-2,5,8-三氧代-12,15,18-三氧杂-3,6,9-三氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯.
将(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基) 吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-丝氨酸(151,8.0mg, 0.00710mmol,1.00当量)、3-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯[Broadpharm,9380Waples St.,Suite101,San Diego,CA92121] (2.4mg,0.00852mmol,1.20当量)、HOAt(1.1mg,0.00781mmol,1.10 当量)和2,6-二甲基吡啶(2.3mg,0.0213mmol,3.00当量)溶解于无水 DMF(0.1mL)。在0℃试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl (2.1mg,0.0107mmol,1.50当量)，将反应混合物在室温下搅拌4.5小时，然后在0℃倒入1N HCl水溶液(1mL)和CH2Cl2(3mL)。将水相用CH2Cl2(2mL)萃取两次，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(1 mL)、饱和NaHCO3水溶液(1mL)和饱和NaCl水溶液(1mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％ MeOH/CH2Cl2)产生4.4mg(45％)的157，为无色固体。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝4.4Hz,1H),8.37(d,J＝4.4Hz,1H), 8.28(d,J＝4.4Hz,1H),8.25(d,J＝4.4Hz,1H),8.17(t,J＝5.2Hz,1H), 8.04(d,J＝8.0Hz,1H),7.90(t,J＝6.0Hz,1H),7.32(d,J＝7.6Hz,1H), 7.29–7.03(m,22H),4.87(t,J＝5.6Hz,1H),4.70(s,2H),4.28(dt,J＝ 7.6,5.6Hz,1H),3.92–3.75(m,4H),3.68–3.44(m,17H),3.41–3.34 (m,3H),3.23–3.14(m,4H),3.13–3.05(m,2H),2.88–2.81(m,2H), 2.81–2.73(m,2H),2.40(t,J＝6.4Hz,2H),2.00–1.93(m,2H),1.91– 1.83(m,2H),1.38(s,9H),1.21–1.06(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z 计算值：C76H92N9O16[M+H]+1386.6656,实测值：1386.6654。
Figure BDA0001927318020002171
158:(S)-1-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)-7-(羟基甲基)-2,5,8-三氧代-12,15,18-三氧杂-3,6,9-三氮杂二十一烷-21-酸.
将(S)-1-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-7-(羟基甲基)-2,5,8-三氧代-12,15,18-三氧杂-3,6,9-三氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(157,2.2mg,0.00158mmol)在室温下溶解于CH2Cl2(0.1mL)。在0℃添加TFA(0.1mL)，将混合物在室温下搅拌2小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于MeCN 并浓缩(重复两次)以确保完全除去TFA。将该过程用CH2Cl2重复。制备型薄层色谱(SiO2,12％MeOH/CH2Cl2)产生1.7mg(81％)的158，为无色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.43(d,J＝4.0Hz,1H), 8.42(d,J＝5.0Hz,1H),8.34–8.27(m,4H),7.91(t,J＝6.0Hz,1H), 7.31(d,J＝7.5Hz,1H),7.28–7.03(m,22H),4.70(s,2H),4.26(dt,J＝ 7.5,5.5Hz,1H),3.91–3.75(m,4H),3.67–3.44(m,17H),3.41–3.36 (m,3H),3.24–3.15(m,4H),3.13–3.07(m,2H),2.87–2.82(m,2H), 2.80–2.74(m,2H),2.37(t,J＝6.5Hz,2H),2.00–1.94(m,2H),1.91–1.84(m,2H),1.21–1.07(m,8H)。
Figure BDA0001927318020002181
(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酰基甘氨酸叔丁酯.
将(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酸(S-88,23.0mg,0.0221mmol,1.00 当量)、甘氨酸叔丁酯盐酸盐(5.6mg,0.0332mmol,1.50当量)、HOAt (3.6mg,0.0265mmol,1.20当量)和2,6-二甲基吡啶(9.5mg,0.0884 mmol,4.00当量)溶解于无水DMF(0.11mL)。在0℃试剂溶解后(约5 分钟)，一次性添加EDCI·HCl(8.5mg,0.0442mmol,2.00当量)，将反应混合物在室温搅拌3小时，然后倒入1N HCl水溶液(2mL)和 CH2Cl2(5mL)。将水相用CH2Cl2(2mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(1mL)、饱和NaHCO3水溶液(1mL)和饱和NaCl 水溶液(1mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％MeOH/CH2Cl2)产生19.3mg(76％)的标题化合物，为无色固体。
Figure BDA0001927318020002191
159:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酰基甘氨酸.
将(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)- 吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酰基甘氨酸叔丁酯(19.3mg, 0.00167mmol)在室温下溶解于CH2Cl2(0.1mL)。在0℃添加TFA(0.1 mL)，将混合物在室温下搅拌2小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于MeCN并浓缩(重复两次)以确保完全除去TFA。将该过程用CH2Cl2重复。制备型薄层色谱(SiO2,0.05％甲酸/20％MeOH/CH2Cl2) 产生22.5mg(定量)的159，为无色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6) δ8.49(d,J＝4.5Hz,1H),8.47(d,J＝4.0Hz,1H),8.36(d,J＝4.5Hz, 1H),8.33(d,J＝4.0Hz,1H),8.28(t,J＝6.0Hz,1H),8.21(t,J＝6.0Hz, 1H),7.31(d,J＝7.5Hz,1H),7.28–7.20(m,8H),7.18–7.04(m,14H), 4.71(s,2H),3.83–3.74(m,6H),3.64(dd,J＝7.5,10.5Hz,1H),3.59– 3.47(m,4H),3.23–3.16(m,3H),3.10(q,J＝8.0Hz,2H),2.87–2.81 (m,2H),2.80–2.74(m,2H),1.97(ddd,J＝9.5,6.0,3.0Hz,2H),1.91– 1.85(m,2H),1.22–1.06(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值： C62H65N8O11[M+H]+1097.4767,实测值：1097.4765。
Figure BDA0001927318020002201
160:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-天冬氨酸二-叔丁酯.
将(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基) 吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酸(S-88,8.0mg,0.00769mmol, 1.00当量)、L-天冬氨酸二-叔丁酯盐酸盐(2.6mg,0.00923mmol,1.20 当量)、HOAt(1.2mg,0.00846mmol,1.10当量)和2,6-二甲基吡啶(2.5 mg,0.0231mmol,3.00当量)溶解于无水DMF(0.1mL)。在0℃试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(2.2mg,0.0115mmol,1.50当量)，将反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后在0℃倒入1N HCl 水溶液(1mL)和EtOAc(3mL)。将水相用EtOAc(2mL)萃取两次，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(1mL)、饱和NaHCO3水溶液(1 mL)和饱和NaCl水溶液(1mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。快速柱色谱(SiO2,5％MeOH/CH2Cl2)产生7.1mg(73％)的160，为无色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.40(br,1H),8.38(br, 1H),8.29–8.20(m,4H),7.32(d,J＝7.5Hz,1H),7.29–7.04(m,22H), 4.69(s,2H),4.51(dt,J＝7.5,6.5Hz,1H),3.87–3.75(m,4H),3.65(t,J ＝9.0Hz,1H),3.59–3.47(m,4H),3.22–3.15(m,3H),3.13–3.06(m, 2H),2.87–2.81(m,2H),2.80–2.74(m,2H),2.64(dd,J＝16.0,6.5Hz, 1H),2.53(dd,J＝16.0,6.5Hz,1H),2.00–1.94(m,2H),1.91–1.84(m,2H),1.37(s,9H),1.36(s,9H),1.20–1.07(m,8H).HRMS(ESI-TOF) m/z计算值：C72H83N8O13[M+H]+1267.6074,实测值：1267.6052。
Figure BDA0001927318020002211
161:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-天冬氨酸.
将(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)- 吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-天冬氨酸二-叔丁酯(160, 3.6mg,0.00284mmol)在室温下溶解于CH2Cl2(0.1mL)。在0℃添加 TFA(0.1mL)，将混合物在室温下搅拌2小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于MeCN并浓缩(重复两次)以确保完全除去TFA。该过程用CH2Cl2重复。制备型薄层色谱(SiO2,15％MeOH/CH2Cl2)产生 3.7mg(定量)的161，为无色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45(d,J＝4.8Hz,1H),8.43(d,J＝4.0Hz,1H),8.31(d,J＝4.4Hz,2H), 8.21(t,J＝5.2Hz,1H),7.88(br,1H),7.33–7.06(m,23H),4.69(s,2H), 4.21(br,1H),3.87–3.73(m,4H),3.66(t,J＝8.8Hz,1H),3.58–3.06 (m,9H),2.88–2.81(m,2H),2.81–2.74(m,2H),2.58–2.48(m,1H), 2.43–2.31(m,1H),2.01–1.94(m,2H),1.91–1.84(m,2H),1.22– 1.06(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C64H67N8O13[M+H]+ 1155.4822,实测值：1155.4824。
Figure BDA0001927318020002221
162:N2-((2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸叔丁酯.
将(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基) 吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酸(S-88,8.0mg,0.00769mmol, 1.00当量)、N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸叔丁酯盐酸盐(3.9mg, 0.0115mmol,1.50当量)、HOAt(1.3mg,0.00923mmol,1.20当量)和 2,6-二甲基吡啶(3.3mg,0.0308mmol,4.00当量)溶解于无水DMF(0.1 mL)。在0℃试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加EDCI·HCl(3.0mg, 0.0154mmol,2.00当量)，将反应混合物在室温下搅拌3小时，然后在0℃倒入1N HCl水溶液(1mL)和CH2Cl2(3mL)。将水相用CH2Cl2 (2mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(1mL)、饱和 NaHCO3水溶液(1mL)和饱和NaCl水溶液(1mL)洗涤。将有机相用 Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％MeOH/CH2Cl2) 产生7.8mg(76％)的162，为无色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ8.40(d,J＝4.0Hz,1H),8.37(d,J＝4.4Hz,1H),8.27(d,J＝4.4Hz, 1H),8.24(d,J＝4.4Hz,1H),8.18(br,1H),8.17(d,J＝6.8Hz,1H),7.32 (d,J＝7.6Hz,1H),7.29–7.19(m,8H),7.18–7.04(m,14H),7.74(t,J＝ 5.6Hz,1H),4.69(s,2H),4.14–4.06(m,1H),3.89–3.74(m,4H),3.69 –3.62(m,1H),3.59-3.46(m,4H),3.23–3.14(m,3H),3.13–3.15(m, 2H),2.91–2.81(m,4H),2.80–2.74(m,2H),1.96(ddd,J＝9.6,6.8,3.2 Hz,2H),1.91–1.83(m,2H),1.68–1.49(m,2H),1.37(s,9H),1.36(s, 9H),1.42–1.30(m,2H),1.29–1.21(m,2H),1.19–1.06(m,8H). HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C75H90N9O13[M+H]+1324.6652,实测值：1324.6657。
Figure BDA0001927318020002231
163:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-赖氨酸.
将N2-((2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L- 赖氨酸叔丁酯(162,3.8mg,0.00287mmol)在室温下溶解于CH2Cl2 (0.1mL)。在0℃添加TFA(0.1mL)，将混合物在室温下搅拌2小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于MeCN并浓缩(重复两次)以确保完全除去TFA。将该过程用CH2Cl2重复。制备型薄层色谱(SiO2, 0.05％甲酸/20％MeOH/CH2Cl2)产生5.2mg(定量)的163，为无色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.58(br,1H),8.55(br,1H),8.50(br, 1H),8.48(d,J＝4.5Hz,1H),8.31(t,J＝6.0Hz,1H),8.25(br,3H),7.79(br,1H),7.31(d,J＝8.0Hz,1H),7.28–7.03(m,22H),4.70(s,2H),4.01 (br,1H),3.85–3.74(m,4H),3.70(t,J＝9.0Hz,1H),3.56–3.45(m, 2H),3.32(t,J＝10.0Hz,1H),3.25–3.18(m,2H),3.16–3.09(m,2H), 2.88–2.82(m,2H),2.80–2.75(m,2H),2.72(t,J＝7.5Hz,2H),2.01– 1.94(m,2H),1.91–1.85(m,2H),1.74–1.64(m,1H),1.60–1.44(m, 3H),1.32–1.23(m,2H),1.22–1.05(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C66H74N9O11[M+H]+1168.5502,实测值：1168.5503。
Figure BDA0001927318020002241
164:N2-(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-丝氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸叔丁酯.
将(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基) 吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-丝氨酸(151,9.3mg, 0.00825mmol,1.00当量)、N6-(叔丁氧基-羰基)-L-赖氨酸叔丁酯盐酸盐(3.3mg,0.00990mmol,1.20当量)、HOAt(1.2mg,0.00908mmol, 1.10当量)和2,6-二甲基吡啶(2.7mg,0.0248mmol,3.00当量)溶解于无水DMF(0.1mL)。在室温下试剂溶解后(约5分钟)，一次性添加 EDCI·HCl(2.4mg,0.0124mmol,1.50当量)，将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后倒入1N HCl水溶液(1mL)和CH2Cl2(2mL)。将水相用CH2Cl2(1mL)萃取，将合并的有机相依次用1N HCl水溶液(1 mL)、饱和NaHCO3水溶液(1mL)和饱和NaCl水溶液(1mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。制备型薄层色谱(SiO2,10％ MeOH/CH2Cl2)产生8.6mg(74％)的164，为无色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝4.0Hz,1H),8.37(d,J＝4.0Hz,1H), 8.27(d,J＝4.0Hz,1H),8.24(d,J＝4.5Hz,1H),8.18(br,1H),8.07(d,J ＝7.5Hz,1H),8.04(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(d,J＝7.5Hz,1H),7.28– 7.04(m,22H),6.73(t,J＝6.0Hz,1H),4.83(t,J＝5.5Hz,1H),4.70(s, 2H),4.41(dt,J＝6.5,6.0Hz,1H),4.06(dt,J＝7.0,7.0Hz,1H),3.88– 3.75(m,4H),3.68–3.46(m,6H),3.22–3.15(m,2H),3.13–3.06(m, 2H),2.90–2.81(m,4H),2.80–2.74(m,2H),1.99–1.94(m,2H),1.90 –1.83(m,2H),1.68–1.51(m,2H),1.37(s,9H),1.35(s,9H),1.38– 1.31(m,1H),1.29–1.21(m,3H),1.20–1.06(m,8H).HRMS (ESI-TOF)m/z计算值：C78H95N10O15[M+H]+1411.6973,实测值： 1411.6969。
Figure BDA0001927318020002251
165:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-丝氨酰基-L-赖氨酸.
将N2-(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-丝氨酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸叔丁酯(164,4.8mg,0.00340mmol)在室温下溶解于 CH2Cl2(0.1mL)。添加TFA(0.1mL)，将混合物在室温下搅拌3小时。通过N2流除去溶剂。将残留固体悬浮于MeCN并浓缩(重复两次)以确保完全除去TFA。将该过程用CH2Cl2重复。制备型薄层色谱(SiO2, 15％MeOH/CH2Cl2)产生6.3mg(定量)的165，为无色固体。1H NMR (500MHz,DMSO-d6)δ8.58(br,1H),8.53(br,1H),8.40(d,J＝4.5Hz, 1H),8.36(d,J＝4.0Hz,1H),8.24(br,1H),7.99(d,J＝8.0Hz,1H),7.68 (br,1H),7.31(d,J＝7.5Hz,1H),7.28–7.03(m,22H),4.70(s,2H),4.32 (dt,J＝5.5,7.0Hz,1H),3.93(br,1H),3.87–3.75(m,4H),3.66–3.45 (m,6H),3.24–3.17(m,2H),3.15–3.08(m,2H),2.88–2.82(m,2H), 2.80–2.74(m,2H),2.73(t,J＝8.0Hz,2H),2.00–1.95(m,2H),1.91– 1.84(m,2H),1.77–1.68(m,1H),1.61–1.43(m,3H),1.37–1.27(m, 2H),1.22–1.05(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C69H79N10O13 [M+H]+1255.5822,实测值：1255.5820。
固相肽合成的一般程序
通过基于Fmoc的固相肽合成在Wang树脂(1.00当量)上合成肽。使用N2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸或 N-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-O-(叔丁基)-L-丝氨酸(5.00当量)、DCC (5.00当量)和DMAP(0.500当量)在DMF(1.0–1.5mL)中固定C-末端氨基酸1小时。使用苯甲酸酐(5.00当量)在吡啶/DMF(1/4,1.0–2.0 mL)中进行封端步骤1小时。使用哌啶/DMF(1/4,1.0–2.0mL)除去 Fmoc基团分别达1分钟和10分钟。使用N2-(((9H-芴-9-基)甲氧基) 羰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸或N-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-O-(叔丁基)-L-丝氨酸(3.00–5.00当量)、HBTU(3.00–5.00当量)、 HOBt(3.00–5.00当量)和DIEA(6.00–10.0当量)在DMF/NMP(1/1, 0.3–1.1mL)中进行氨基酸的偶联15分钟。通过标准Kaiser测试监测偶联。
Diprovocim-1片段与肽树脂的偶联和官能化衍生物的裂解的一般程序
Diprovocim-1片段的偶联使用(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双 (((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基) 甘氨酸(S-88,3.3–8.0mg,0.00315–0.00769mmol,1.00当量)、肽树脂(0.00378–0.00923mmol,1.20当量)、EDCI·HCl(1.8–4.4mg, 0.00945–0.0231mmol,3.00当量)、HOAt(0.6–6.3mg,0.00473– 0.0461mmol,1.50–6.00当量)和2,6-二甲基吡啶(1.4–4.9mg,0.0126 –0.0461mmol,4.00–6.00当量)在DMF(0.8–1.5mL)中进行2.5–5 小时。所有衍生物在室温下使用TFA/i-Pr3SiH/H2O(95/2.5/2.5,0.4mL) 从树脂裂解1.5小时，由Et2O沉淀，通过反相柱色谱(C18,0.05％ TFA/40–60％MeCN/H2O)纯化得到所需产物(12–74％)。
Figure BDA0001927318020002271
166:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-丝氨酰基-L-赖氨酰基 -L-赖氨酸.
使用用于固相肽合成的一般程序合成L-丝氨酰基-L-赖氨酰基-L- 赖氨酸固定树脂。使用Diprovocim-1片段与肽树脂的偶联和官能化衍生物的裂解的一般程序:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)-甘氨酸(S-88, 4.9mg,0.00467mmol)和L-丝氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酸固定树脂(0.00560mmol)提供5.2mg(74％)的166(TFA盐)，为无色固体。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.43(d,J＝4.8Hz,1H),8.41(d,J＝4.2 Hz,1H),8.30(d,J＝4.2Hz,1H),8.28(d,J＝4.2Hz,1H),8.22(t,J＝5.4 Hz,1H),8.08(d,J＝7.8Hz,1H),8.07(d,J＝7.8Hz,1H),8.04(d,J＝8.4Hz,1H),7.67(br,6H),7.33(d,J＝7.8Hz,1H),7.28–7.10(m,18H), 7.08–7.04(m,4H),5.07(t,J＝6.0Hz,1H),4.70(s,2H),4.36(dt,J＝ 7.8,6.0Hz,1H),4.28(td,J＝8.4,4.2Hz,1H),4.14(td,J＝8.4,4.8Hz, 1H),3.90–3.75(m,4H),3.65(dd,J＝10.8,7.8Hz,1H),3.60(q,J＝5.4 Hz,1H),3.57–3.48(m,5H),3.36–3.30(m,1H),3.21–3.15(m,2H),3.11–3.06(m,2H),2.87–2.82(m,2H),2.80–2.70(m,6H),1.99– 1.94(m,2H),1.90–1.84(m,2H),1.76–1.68(m,2H),1.61–1.45(m, 6H),1.38–1.28(m,4H),1.20–1.07(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z 计算值：C75H91N12O14[M+H]+1383.6772,实测值：1383.6786。
Figure BDA0001927318020002281
167:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-丝氨酰基-L-赖氨酰基 -L-赖氨酰基-L-赖氨酸.
使用用于固相肽合成的一般程序合成L-丝氨酰基-L-赖氨酰基-L- 赖氨酰基-L-赖氨酸固定树脂。使用Diprovocim-1片段与肽树脂的偶联和官能化衍生物的裂解的一般程序:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双 (((1S,2R)-2-苯基环丙基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)- 甘氨酸(S-88,4.2mg,0.00402mmol)和L-丝氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酸固定树脂(0.00482mmol)提供5.2mg(74％)的167 (TFA盐)，为无色固体。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.44(d,J＝4.2 Hz,1H),8.42(d,J＝4.2Hz,1H),8.31(d,J＝4.8Hz,1H),8.29(d,J＝ 4.8Hz,1H),8.24(t,J＝5.4Hz,1H),8.13(d,J＝7.8Hz,1H),8.10(d,J＝ 8.4Hz,1H),8.08(d,J＝8.4Hz,1H),7.89(d,J＝7.8Hz,1H),7.73(br, 9H),7.33(d,J＝7.8Hz,1H),7.28–7.10(m,18H),7.08–7.04(m,4H), 5.07(t,J＝6.0Hz,1H),4.70(s,2H),4.36(q,J＝6.6Hz,1H),4.27–4.20 (m,2H),4.13(td,J＝8.4,4.8Hz,1H),3.90–3.75(m,4H),3.65(dd,J＝ 10.2,7.8Hz,1H),3.60(q,J＝5.4Hz,1H),3.58–3.48(m,5H),3.36–3.30(m,1H),3.21–3.15(m,2H),3.11–3.06(m,2H),2.87–2.82(m, 2H),2.80–2.70(m,8H),1.99–1.94(m,2H),1.90–1.84(m,2H),1.76 –1.63(m,3H),1.62–1.45(m,9H),1.39–1.26(m,6H),1.20–1.07(m, 8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C81H103N14O15[M+H]+1511.7721, 实测值：1511.7708。
Figure BDA0001927318020002291
168:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-丝氨酰基-L-赖氨酰基 -L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酸.
使用用于固相肽合成的一般程序合成L-丝氨酰基-L-赖氨酰基-L- 赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酸固定树脂。使用diprovocim-1片段与肽树脂的偶联和官能化衍生物的裂解的一般程序:(2-(2,5-双 ((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-乙酰基)甘氨酸(S-88,8.0mg,0.00769mmol)和L-丝氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酸固定树脂(0.00923mmol)提供4.6mg(30％)的168(TFA盐)，为无色固体。1H NMR(600MHz, DMSO-d6)δ8.44(d,J＝4.2Hz,1H),8.42(d,J＝4.2Hz,1H),8.31(d,J ＝4.2Hz,1H),8.29(d,J＝4.2Hz,1H),8.25(br,1H),8.17–8.07(m,3H), 7.92–7.87(m,2H),7.75(br,12H),7.33(d,J＝7.8Hz,1H),7.28–7.04 (m,22H),5.18(br,1H),4.70(s,2H),4.36(q,J＝6.6Hz,1H),4.27–4.18 (m,3H),4.12(q,J＝7.2Hz,1H),3.90–3.75(m,4H),3.67–3.59(m, 2H),3.58–3.48(m,5H),3.36–3.30(m,1H),3.21–3.15(m,2H),3.11 –3.06(m,2H),2.87–2.82(m,2H),2.80–2.70(m,10H),1.99–1.94(m, 2H),1.90–1.84(m,2H),1.75–1.62(m,4H),1.61–1.45(m,12H),1.39 –1.26(m,8H),1.20–1.07(m,8H)。13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ 173.36,171.71,171.63,171.50,171.46,171.28,170.99,170.90,170.29, 168.55,167.97,167.12,165.52,153.59,141.27,141.26,141.19,141.18,138.63,128.20,128.16,127.86,125.83,125.80,125.78,125.64,125.61, 120.17,118.32,116.31,112.26,109.52,67.40,61.74,54.88,52.58,52.27, 52.03,51.76,51.43,50.23,48.75,48.13,47.06,46.76,45.32,45.17, 41.78,38.73,38.70,38.63,38.59,32.56,32.53,32.45,31.49,31.20, 30.75,30.37,26.67,26.59,26.57,26.55,23.88,23.85,23.80,23.77, 22.38,22.36,22.21,22.11,15.44,15.37,15.31.HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C43.5H58N8O8[M+2H]2+820.4372,实测值：820.4373。
Figure BDA0001927318020002301
169:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-丝氨酰基-L-赖氨酰基 -L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酸.
使用用于固相肽合成的一般程序合成L-丝氨酰基-L-赖氨酰基-L- 赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酸固定树脂。使用 diprovocim-1片段与肽树脂的偶联和官能化衍生物的裂解的一般程序:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯氧基)乙酰基)甘氨酸(S-88,3.3mg,0.00315mmol)和L-丝氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酸固定树脂(0.00378mmol)提供5.1mg(73％)的169(TFA盐)，为无色固体。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.44(d,J＝4.2Hz,1H),8.42(d,J ＝4.2Hz,1H),8.31(d,J＝4.2Hz,1H),8.29(d,J＝4.8Hz,1H),8.26(t,J ＝5.4Hz,1H),8.16(d,J＝7.2Hz,2H),8.10(d,J＝7.8Hz,1H),7.94(d, J＝7.8Hz,1H),7.90(d,J＝6.6Hz,1H),7.88(d,J＝7.2Hz,1H),7.78 (br,15H),7.33(d,J＝7.8Hz,1H),7.28–7.10(m,18H),7.08–7.04(m, 4H),5.20(br,1H),4.70(s,2H),4.36(q,J＝6.6Hz,1H),4.27–4.18(m, 4H),4.15–4.08(m,1H),3.90–3.75(m,4H),3.68–3.59(m,2H),3.58 –3.49(m,5H),3.36–3.30(m,1H),3.21–3.15(m,2H),3.11–3.06(m, 2H),2.87–2.82(m,2H),2.80–2.70(m,12H),1.99–1.94(m,2H),1.90 –1.84(m,2H),1.74–1.44(m,20H),1.38–1.23(m,10H),1.20–1.07 (m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C46.5H64N9O8.5[M+2H]2+ 884.4847,实测值：884.4847。
Figure BDA0001927318020002311
170:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酰基 -L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酸.
使用用于固相肽合成的一般程序合成L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L- 赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酸固定树脂。使用diprovocim-1片段与肽树脂的偶联和官能化衍生物的裂解的一般程序:(2-(2,5-双 ((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-乙酰基)甘氨酸(S-88,3.4mg,0.00328mmol)和L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酰基-L-赖氨酸固定树脂(0.00394mmol)提供3.8mg(54％)的170(TFA盐)，为无色固体。1H NMR(600MHz, DMSO-d6)δ8.47–8.42(m,2H),8.32(d,J＝4.2Hz,1H),8.30(d,J＝ 4.8Hz,1H),8.27(t,J＝6.0Hz,1H),8.16(d,J＝7.2Hz,1H),8.11(d,J＝8.4Hz,1H),8.02(d,J＝7.8Hz,1H),7.97(d,J＝7.8Hz,1H),7.92(d,J ＝8.4Hz,1H),7.78(br,15H),7.33(d,J＝7.2Hz,1H),7.28–7.10(m, 18H),7.08–7.04(m,4H),4.71(s,2H),4.30–4.19(m,4H),4.13(td,J＝ 8.4,4.8Hz,1H),3.84–3.75(m,4H),3.65(dd,J＝10.2,7.8Hz,1H), 3.56–3.49(m,4H),3.36–3.30(m,1H),3.21–3.15(m,2H),3.11– 3.05(m,2H),2.87–2.82(m,2H),2.80–2.70(m,12H),1.99–1.94(m, 2H),1.90–1.84(m,2H),1.74–1.45(m,20H),1.37–1.23(m,10H), 1.20–1.07(m,8H).HRMS(ESI-TOF)m/z计算值：C45H61.5N8.5O7.5[M+2H]2+840.9687,实测值：840.9687。
Figure BDA0001927318020002321
171:(2-(2,5-双((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基-环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-苯氧基)乙酰基)甘氨酰基-L-丝氨酰基-L-丝氨酰基 -L-丝氨酰基-L-丝氨酰基-L-丝氨酸.
使用用于固相肽合成的一般程序合成L-丝氨酰基-L-丝氨酰基-L- 丝氨酰基-L-丝氨酰基-L-丝氨酸固定树脂。使用diprovocim-1片段与肽树脂的偶联和官能化衍生物的裂解的一般程序:(2-(2,5-双 ((3S,4S)-3,4-双(((1S,2R)-2-苯基环丙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)苯氧基)-乙酰基)甘氨酸(S-88,8.0mg,0.00769mmol)和L-丝氨酰基-L-丝氨酰基-L-丝氨酰基-L-丝氨酰基-L-丝氨酸固定树脂(0.00923mmol)提供1.3mg(12％)的171，为无色固体。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝4.8Hz,1H),8.38(d,J＝4.2Hz,1H),8.28(d,J＝4.2Hz,1H), 8.25(d,J＝4.2Hz,1H),8.20(t,J＝6.0Hz,1H),8.08(d,J＝7.8Hz,2H),7.97(d,J＝7.8Hz,1H),7.95(d,J＝7.8Hz,1H),7.92(d,J＝8.4Hz,1H), 7.32(d,J＝7.8Hz,1H),7.28–7.10(m,18H),7.08–7.04(m,4H),5.06 –4.94(m,4H),4.86(br,1H),4.70(s,2H),4.44(dt,J＝7.2,6.0Hz,1H), 4.40–4.33(m,3H),4.26(dt,J＝7.8,4.8Hz,1H),3.88–3.75(m,4H), 3.71–3.47(m,13H),3.36–3.30(m,1H),3.22–3.15(m,2H),3.12– 3.06(m,2H),2.87–2.82(m,2H),2.80–2.74(m,2H),1.99–1.94(m, 2H),1.90–1.84(m,2H),1.20–1.07(m,8H)。
这里使用的冠词“一”和“一个”是指一个或多于一个(即至少一个) 该冠词的语法对象。本文引用的每篇专利、专利申请和文章均以引用的方式并入。
前面的描述和实施例旨在说明而不是限制性的。在本发明的精神和范围内的进一步的其他变化是可能的，并且容易将其自身呈现给本领域技术人员。
<110> 斯克里普斯研究学院和得克萨斯系统大学评议会
<120> DIPROVOCIMS：一类新的有效的TLR激动剂
<130> TSRI1761.1pct (9709-0203)
<160> 18
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=S-Ra 其中
Ra=CH3(CH2)14CH(OOCH2COO(CH2)14CH3)CH2SCH2CH(NHRb)CONHR 且
Rb=CO(CH2)14CH3
<400> 1
Xaa Lys Lys Lys Lys
1 5
<210> 2
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G-Ra 其中
Ra=CH3(CH2)14CH(OOCH2COO(CH2)14CH3)CH2SCH2CH(NHRb)CONHR 且 Rb=H
<400> 2
Xaa Asn Asn Asp Glu Ser Asn Ile Ser Phe Lys Glu Lys
1 5 10
<210> 3
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G-Z 其中
Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
<400> 3
Xaa Ser Lys Lys
1
<210> 4
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G-Z 其中
Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
<400> 4
Xaa Ser Lys Lys Lys
1 5
<210> 5
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G-Z 其中
Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
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Xaa Ser Lys Lys Lys Lys
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G-Z 其中
Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
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Xaa Ser Lys Lys Lys Lys Lys
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
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Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
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Xaa Ser Lys Lys Lys Lys Lys Lys
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
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Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
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Xaa Ser Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
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<222> (1)..(1)
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Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
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Xaa Lys Lys Lys
1
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
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<223> X=G-Z 其中
Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
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Xaa Lys Lys Lys Lys
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<210> 11
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G-Z 其中
Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
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Xaa Lys Lys Lys Lys Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G-Z 其中
Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
<400> 12
Xaa Lys Lys Lys Lys Lys Lys
1 5
<210> 13
<211> 8
<212> PRT
<213> ARTIFICIAL SEQUNCE
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G-Z 其中
Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
<400> 13
Xaa Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys
1 5
<210> 14
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G-Z 其中
Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
<400> 14
Xaa Ser Ser Ser
1
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G-Z 其中
Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
<400> 15
Xaa Ser Ser Ser Ser
1 5
<210> 16
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G-Z 其中
Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
<400> 16
Xaa Ser Ser Ser Ser Ser
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<210> 17
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G-Z 其中
Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
<400> 17
Xaa Ser Ser Ser Ser Ser Ser
1 5
<210> 18
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G-Z 其中
Z=OCCH2O-取代的苯基-二羰基-双取代的吡咯烷基-
取代的二甲酰胺
苯基取代是N或CH2; 吡咯烷基
<400> 18
Xaa Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser
1 5

Claims (19)

1.一种化合物，该化合物在结构上对应于结构式V，
Figure 997585DEST_PATH_IMAGE001
其中
-A是-H(氢)或-C(O)NH-R4；
R1、R2、R3和R4相同或不同，为2-(4-氟苯基)乙基、反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)环丙基或者C3-C18烃基，条件是：
1) R1、R2、R3和R4(R1-4)中的至少两个或R1、R2和R3(R1-3)中的至少两个是反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)环丙基或其组合，或R1-4各自为2-(4-氟苯基)-乙基，
2)至少一个描述的吡咯烷基二甲酰胺基具有(S,S)构型，并且当R1-4的每个都不是2-(4-氟苯基)乙基时，除了C3-C18烃基之外的每个描述的R1-4取代基是反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)环丙基或其组合，
3)当-A是-C(O)NH-R4时，R1-4中不多于两个是C8-C18烃基，和
4)当A是氢时，R1-3中的一个是C8-C18烃基且所描述的含R3的吡咯烷基甲酰胺基具有R或S构型，或两种构型的组合；
-Z是卤素、–H、-NH2、-OH、-OCH3、-NO2、-OCH2CO2H、-O(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONH(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-NHCOCH2O-(CH2CH2O)nCH2CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CHOH)CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCHCO2H(CH2CO2H)、-OCH2CONHCH2CONHCH(CHOH)(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH[(CH2)4NH2]CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CH2OH)CO{NHCH[(CH2)4NH2]CO}mNHCH-[(CH2)4NH2]CO2H (SEQ ID NO: 3-8)、-OCH2CONHCH2CO{NHCH[(CH2)4NH2]CO}pNHCH[(CH2)4NH2]CO2H (SEQ ID NO: 9-13)和-OCH2CONHCH2CO{NHCH(CH2OH)CO}qNHCH(CH2OH)CO2H(SEQ ID NO: 14-18)中的一种或多种；
W是氮(N)或CH；
“n”是平均值为1至8的数；
“m”是值为1至6的数；
“p”是值为1至6的数；和
“q”是值为1至6的数。
2.根据权利要求1的化合物，其中A是氢，并且所述化合物具有结构式Va：
Figure 914726DEST_PATH_IMAGE002
，
其中R1-3、W和Z部分如上所述。
3.根据权利要求2的化合物，其中R1-3中的一个是C8-C18烃基。
4.根据权利要求2的化合物，其中R1-3中每一个为反式-2-苯基-环丙基、反式-2-(4-氟苯基)-环丙基或其组合。
5.根据权利要求1的化合物，其中W是CH。
6.根据权利要求5的化合物，其中-A是-C(O)NH-R4且所述化合物具有结构式I，
Figure 694463DEST_PATH_IMAGE003
并且其中R1-4、W和Z部分如上所述。
7.根据权利要求5所述的化合物，其中每个所描述的吡咯烷基二甲酰胺基具有(S,S)构型。
8.根据权利要求7的化合物，其中W为CH，并且所述化合物具有结构式Ia，
Figure 89672DEST_PATH_IMAGE004
并且其中所述R1-4和Z部分如上所述。
9.根据权利要求8的化合物，其中-Z选自卤素、-H、-NH2、-OH、-OCH3和-NO2中的一种或多种。
10.根据权利要求8所述的化合物，其中-Z选自-OCH2CO2H, -O(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONH(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-NHCOCH2O-(CH2CH2O)nCH2CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CHOH)CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCHCO2H(CH2CO2H)、-OCH2CONHCH2CONHCH(CHOH)(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH[(CH2)4NH2]CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CH2OH)CO{NHCH[(CH2)4NH2]CO}mNHCH-[(CH2)4NH2]CO2H (SEQ ID NO: 3-8)、-OCH2CONHCH2CO{NHCH[(CH2)4NH2]CO}pNHCH[(CH2)4NH2]CO2H (SEQ ID NO: 9-13) 和-OCH2CONHCH2CO{NHCH(CH2OH)CO}qNHCH(CH2OH)CO2H (SEQ ID NO: 14-18)中的一种或多种；
“n”是平均值为1至8的数；
“m”是值为1至6的数；
“p”是值为1至6的数；和
“q”是值为1至6的数。
11.根据权利要求8的化合物，其中R1-4中的至少两个是具有(1S,2R)构型的反式-2-苯基-环丙基或反式-2-(4-氟苯基)-环丙基，并且在R1-4中剩余的两个中的至少一个是C3-C18烃基。
12.根据权利要求8的化合物，其中R1-4中的每一个都是具有(1S,2R)构型的反式-2-苯基环丙基或反式-2-(4-氟苯基)环丙基。
13.根据权利要求8的化合物，其是单一对映体。
14.根据权利要求8的化合物，其具有选自式A、B、C、D、E、F、G和H中的一种或多种的结构
Figure 717094DEST_PATH_IMAGE005
Figure 539556DEST_PATH_IMAGE006
Figure 806590DEST_PATH_IMAGE007
Figure 5490DEST_PATH_IMAGE008
Figure 674369DEST_PATH_IMAGE009
Figure 730049DEST_PATH_IMAGE010
Figure 484379DEST_PATH_IMAGE011
Figure 221390DEST_PATH_IMAGE012
。
15.一种药物组合物，其包含一定浓度的权利要求1的化合物，所述浓度有效诱导从体外培养的人PMA分化的THP-1细胞和/或小鼠巨噬细胞中的一种或两种释放TNF-α，所述化合物溶解或分散于生理学上可耐受的稀释剂中。
16.根据权利要求15的药物组合物，其中所述化合物是单一对映体。
17.佐剂有效量的权利要求1的化合物在制备用于增强免疫原特异性体液免疫应答的药物中的用途，所述增强包括使免疫细胞与所述化合物和待针对其增强所述应答的免疫原接触。
18.根据权利要求17的用途，其中所述细胞在体内接触。
19.根据权利要求17的用途，其中所述化合物是单一对映体。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112021001992A2 (pt) * 2018-08-02 2021-05-04 The Board Of Regents Of The University Of Texas System efeito adjuvante do agonista tlr1/2 diprovocim sinergiza com anticorpos inibidores de checkpoint para eliminar doença
AU2021280287A1 (en) * 2020-05-27 2023-01-05 Axial Therapeutics, Inc. TLR2 modulator compounds, pharmaceutical compositions and uses thereof
WO2023212650A1 (en) * 2022-04-29 2023-11-02 The Scripps Research Institute Next generation diprovocims that activate the innate and adaptive immune response
WO2024064661A2 (en) * 2022-09-20 2024-03-28 The Curators Of The University Of Missouri Amino acid-modified lipids for rna delivery

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60219926T2 (de) * 2001-08-08 2007-11-22 Pentraxin Therapeutics Ltd. Wirkstoff zur entfernung einer unerwünschten proteinpopulation aus dem plasma
WO2005016235A2 (en) * 2003-04-14 2005-02-24 The Regents Of The University Of California Combined use of impdh inhibitors with toll-like receptor agonists
PE20071079A1 (es) * 2005-11-15 2007-12-16 Cytokinetics Inc Compuestos de piperidina como inhibidores de la proliferacion celular
CA2792938C (en) * 2010-03-23 2018-07-31 Irm Llc Compounds (cystein based lipopeptides) and compositions as tlr2 agonists used for treating infections, inflammations, respiratory diseases etc.
WO2014131023A1 (en) * 2013-02-25 2014-08-28 The Scripps Research Institute Neoseptins: small molecule adjuvants
US9918959B2 (en) 2014-08-06 2018-03-20 The Board Of Regents Of The University Of Texas System TLR-independent small molecule adjuvants

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