CN109628615A - 一种快速的基于Ct值的从多种近似种中鉴别褐飞虱的引物、试剂盒及方法 - Google Patents

一种快速的基于Ct值的从多种近似种中鉴别褐飞虱的引物、试剂盒及方法 Download PDF

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CN109628615A CN201910104550.0A CN201910104550A CN109628615A CN 109628615 A CN109628615 A CN 109628615A CN 201910104550 A CN201910104550 A CN 201910104550A CN 109628615 A CN109628615 A CN 109628615A
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刘淑华
唐健
周明好
杨保军
王爱英
罗举
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms

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Abstract

一种用于鉴定褐飞虱的特异性引物对、质控重组质粒、试剂盒及其检测方法，属于害虫预测预报技术领域。本发明公开了一种用于鉴别褐飞虱的引物对Nl‑Its1‑F1/Nl‑Its1‑R1；还公开了用于鉴定褐飞虱的试剂盒及其检测方法，试剂盒包括2×Reaction Buffer Mix，上述引物对和一个质控重组质粒P；该方法是以粗组织液为定量扩增模板，通过比较样本与质控质粒Ct值的大小，即可判断是否为褐飞虱。上述一种用于鉴定褐飞虱的特异性引物对、质控重组质粒、试剂盒及其检测方法，可直接用于基层植保站对褐飞虱的快速鉴定，对节省人力物力和提高水稻重大害虫褐飞虱的预测预报准确度具有极为重要的意义。

Description

一种快速的基于Ct值的从多种近似种中鉴别褐飞虱的引物、 试剂盒及方法
技术领域
本发明属于害虫预测预报技术领域，具体为一种快速的基于Ct值的从多种近似种中鉴别褐飞虱的引物、试剂盒及方法。
背景技术
水稻（Oryza sativa L.）是中国乃至全球最重要的粮食作物之一，其产量和品质直接关系到世界人民的温饱问题和幸福满意度。在中国，水稻的产量则直接关系到我国的粮食安全。但水稻受病虫草为害严重，虽经防治仍然造成可观的经济损失。褐飞虱[Nilaparvata lugens (Stål)]是亚洲稻区最严重的水稻害虫之一，具远距离迁飞习性。准确的虫情预测预报是害虫防治的关键，目前主要采用灯诱监测。测报灯下褐飞虱的始见日、迁入量、迁入峰是褐飞虱预测预报的重要依据，也是褐飞虱防治策略制定的关键信息依据。
拟褐飞虱[Nilaparvata bakeri (Muir)]和伪褐飞虱[Nilaparvata muiriChina]是褐飞虱的同属近似种，并不以水稻为适宜寄主。但它们与褐飞虱具有广泛的共同分布区域，发生季节也有交叉，且都具有趋光性，对预测预报的准确性造成了严重影响。褐飞虱、拟褐飞虱和伪褐飞虱形态非常相似，肉眼难以区分。传统的形态学鉴定方法，耗时费力，需专业人员借助于显微镜才能区分。然而，即使是专业人员，有时对有损标本和若虫也无能为力。崔亚丽等（2012年）以纯DNA为模板，初步建立了褐飞虱、拟褐飞虱和伪褐飞虱的多重PCR检测技术，但具有耗时长，费用高等缺点；刘淑华等（2018年）以粗组织液为模板，建立了三种飞虱的直接多重PCR检测技术，但需要凝胶电泳检测环节，也具有耗时长、人为出错率高的不足。因此，植保人员急需一种简便，快速，易操作的鉴定方法。
荧光定量PCR(real-time PCR，RT-PCR)是1996年由美国Applied Biosystems公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程。Ct值(Cycle threshold，循环阈值)是指每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。Ct值与初始模板量存在一定负相关性，可用于初始模板量的计算。目前，荧光定量技术已被广泛用于医学与检疫领域的物种鉴定，但对于褐飞虱及其近似种的鉴别，还没有相关人员尝试。另外，目前结合荧光定量PCR技术进行微生物和检疫物种鉴定的方法或是以纯DNA为模板，或是以探针法进行的，亦具有耗时长，耗费高的缺点。
发明内容
针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于设计提供一种快速的基于Ct值的从多种近似种中鉴别褐飞虱的引物、试剂盒及方法的技术方案，该方法通过比较样本与质控质粒Ct值的大小，即可判断是否为褐飞虱。本发明不需DNA提取，用水研磨的粗组织液即可作为模板；本发明由于包含了质控质粒，是用定量的思路方法进行定性，对试剂及耗材的质量要求不高；本发明只需两个温度，30循环即可，1小时内便可得到结果。该特异性引物和试剂盒及建立的检测方法具有灵敏、快速、高通量和简单易操作等优点，可直接用于基层植保站对褐飞虱的快速鉴定，对节省人力物力和提高水稻重大害虫褐飞虱的预测预报准确度具有极为重要的意义。
所述的一种用于鉴定褐飞虱的特异性引物对，其特征在于包括上游引物Nl-Its1-F1和下游引物Nl-Its1-R1，上游引物Nl-Its1-F1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物Nl-Its1-R1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
所述的一种用于鉴定褐飞虱的质控重组质粒，其特征在于其DNA序列如SEQ IDNo.3所示。
所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒，其特征在于包括：1）特异性引物对，上游引物Nl-Its1-F1和下游引物Nl-Its1-R1，上游引物Nl-Its1-F1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物Nl-Its1-R1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；2）质控重组质粒，其DNA序列如SEQ ID No.3所示；3）PCR反应液，所述的PCR反应液包含2×Reaction Buffer Mix，ddH2O。
所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒，其特征在于反应体系包括2×ReactionBuffer Mix，ddH2O，上游引物Nl-Its1-F1和下游引物Nl-Its1-R1，浓度为20×10-6ng/μL的质控重组质粒。
所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒，其特征在于质控重组质粒的使用浓度为4×10-6ng/μL。
所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
1）取待测飞虱单头个体，用蒸馏水制备样本粗组织液；
2）制备含上述2条特异引物的荧光定量PCR扩增体系，以质控重组质粒P作为临界模板；
3）将上述PCR反应液上机进行扩增；
4）结果分析。
所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于步骤1）中样本粗组织液的具体制备方法为：取单头待测样本放入1.5ml离心管中，再加入500μL ddH2O研磨，手动研磨或自动研磨机研磨，自动研磨机的参数为5HZ，90s。
所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于步骤2）扩增体系中，各组分的具体比例为：2×Reaction Buffer Mix 5μL，ddH2O 2.8μL，浓度为10pmol/μL的上游引物Nl-Its1-F1和下游引物Nl-Its1-R1各0.1μL，浓度为20×10-6ng/L的质控重组质粒2μL或样本粗组织液2μL，用ddH2O补足10μL。
所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于步骤3）扩增条件中：具体为95℃、50s，60℃、25s，共30个循环。
所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于步骤4）结果分析中：根据Ct值的大小判断，当样本的CtS小于质控质粒P的CtP值时，则为褐飞虱，反之则不是褐飞虱。
本发明根据褐飞虱、拟褐飞虱和伪褐飞虱这几个近似种的ITS1（internaltranscribed spacer 1, 核糖体内转录间隔区1）的序列设计特异性引物。昆虫ITS具有进化速率快，物种间差异较大而物种内比较保守，拷贝数多的特点，被广泛应用于物种鉴别。
本发明所采取的技术方案是筛选了褐飞虱ITS基因的特异性引物、构建了质控重组质粒，建立了该虫的快速分子鉴定方法。
上述一种快速的基于Ct值的从多种近似种中鉴别褐飞虱的引物、试剂盒及方法，具有以下有益效果：
1.根据褐飞虱及其近似种拟褐飞虱、伪褐飞虱的ITS1序列，筛选了褐飞虱特异性引物，建立了基于荧光定量PCR技术的从近似种中鉴别目标害虫褐飞虱的快速检测方法，克服了传统形态学检测的局限，实现了对褐飞虱的快速、准确检测。
2.本方法中是以粗组织液作为定量模板，此法为国内首创，为相关快速检测技术的创新开拓了思路；本方法是以定量的方法和思维进行定性，因此不需对结果进行复杂分析，只需比较Ct值的大小就可以判别是否为目标物种，因此对试剂和耗材的质量要求不高，成本较普通定量低；本方法只需2个不同温度的循环，为后期可便携式褐飞虱检测装置的研制奠定了基础；本方法只需10μL反应体系，大大节省了经济成本。
3.综上所述，本发明的褐飞虱快速检测和鉴定方法具有准确、操作简便、高通量、快速，对操作人员要求不高等优点，较传统的形态学鉴定方法具有更高的可重复性，可行性和时效性。
附图说明
图1为本发明所述用于鉴定褐飞虱的特异性引物设计位置；
图2为本发明所述用于鉴定褐飞虱的特异性引物对的扩增曲线；
图3为本发明所述用于鉴定褐飞虱的特异性引物对的熔解曲线。
具体实施方式
以下结合说明书附图对本发明的具体实施方式进行详细说明。
实施例1 褐飞虱的特异性检测
材料与方法
1. 供试昆虫
1.1 本实验以广西昭平、江西万安、浙江龙游和浙江富阳夜间监测点灯诱的褐飞虱、拟褐飞和伪褐飞虱为研究对象。所有供试昆虫均已经形态鉴定。
2. 方法
2.1 粗组织液获取
a. 取单头待测飞虱，放入1.5ml离心管中；
b. 加入500ml蒸馏水和一个研磨球，用自动研磨机研磨，5HZ×90s；
c. 研磨液无需离心即为飞虱粗组织液。
2.2 PCR扩增反应
上述的上游引物Nl-Its1-F1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物Nl-Its1-R1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
3. 结果
注： Undetermined表示在30个循环内，该样本的荧光信号还未到达阈值，其Ct值大于30；P 表示质控重组质粒，质控重组质粒其DNA序列如SEQ ID No.3所示；BL 表示空白对照，模板为ddH2O。
本实施例中，以质控质粒P和ddH2O分别作为阳性和空白对照，对1-48号样品进行了检测。从表5可以看出，褐飞虱样本的Ct值为16.18-20.91；伪褐飞虱样本的Ct值都未被检测出，证明其Ct值都大于30；拟褐飞虱只有1号和14号样本的Ct值小于30，分别为29.71和29.84，其他的样本的Ct值都大于30。质控质粒的Ct值为25.84，大于褐飞虱样本，低于伪褐飞虱和拟褐飞虱样本。本检测结果表明，以质控质粒P为临界模板，通过比较Ct值的大小可以准确的从近似种中鉴别褐飞虱，准确率可达100%。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 中国水稻研究所
<120> 一种快速的基于Ct值的从多种近似种中鉴别褐飞虱的引物、试剂盒及方法
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 26
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 1
caactaggta agtaaaggtg ctacag 26
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 2
catcctggtc tggtctgact aac 23
<210> 3
<211> 4551
<212> DNA
<213> 质粒(plasmid)
<400> 3
agcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc 60
acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtgagttagc 120
tcactcatta ggcaccccag gctttacact ttatgcttcc ggctcgtatg ttgtgtggaa 180
ttgtgagcgg ataacaattt cacacaggaa acagctatga ccatgattac gccaagctca 240
gaattaaccc tcactaaagg gactagtcct gcaggtttaa acgaattggc ccttacgagc 300
caagtgatcc accactcagg gtaattaaac attttggtgg ctagtcatta caatgtatgg 360
tggctatttt gtcattaagt tattcacact aggcaaatat gagggtctcg cctagccgac 420
aagacgaatc cctcgagtgt ggcaacaatt tgcagtcaac ttgccaatgg tgaacctgtc 480
atacaatgat tatgatacac actaaacatt gaaatgactc tagactcgaa ccacaggctt 540
gcttcactac tgctgccttt ttgtcatgat tgcgagctac acattcattt acaactaggt 600
aagtaaaggt gctacagcta caagcgagat caagacaagc agtttgtggc cgatgttagt 660
cagaccagac caggatgtga caacaatttg ttagtgaaac caccaatagt gaatctgtca 720
cacaatgatg atgatacaca ctcaacattg gtatgactct agactcgaac caaaggcttg 780
tttgaccact gctgtcacta tcaatagtct tgtgacttaa cagcaagcac acaggatttc 840
acattctatt gaaatgcgtt aatgatcctt ccgcaggttc acctacggaa agggccaatt 900
cgcggccgct aaattcaatt cgccctatag tgagtcgtat tacaattcac tggccgtcgt 960
tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg cgttacccaa cttaatcgcc ttgcagcaca 1020
tccccctttc gccagctggc gtaatagcga agaggcccgc accgatcgcc cttcccaaca 1080
gttgcgcagc ctatacgtac ggcagtttaa ggtttacacc tataaaagag agagccgtta 1140
tcgtctgttt gtggatgtac agagtgatat tattgacacg ccggggcgac ggatggtgat 1200
ccccctggcc agtgcacgtc tgctgtcaga taaagtctcc cgtgaacttt acccggtggt 1260
gcatatcggg gatgaaagct ggcgcatgat gaccaccgat atggccagtg tgccggtctc 1320
cgttatcggg gaagaagtgg ctgatctcag ccaccgcgaa aatgacatca aaaacgccat 1380
taacctgatg ttctggggaa tataaatgtc aggcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac 1440
ctagatcctt ttcacgtaga aagccagtcc gcagaaacgg tgctgacccc ggatgaatgt 1500
cagctactgg gctatctgga caagggaaaa cgcaagcgca aagagaaagc aggtagcttg 1560
cagtgggctt acatggcgat agctagactg ggcggtttta tggacagcaa gcgaaccgga 1620
attgccagct ggggcgccct ctggtaaggt tgggaagccc tgcaaagtaa actggatggc 1680
tttcttgccg ccaaggatct gatggcgcag gggatcaagc tctgatcaag agacaggatg 1740
aggatcgttt cgcatgattg aacaagatgg attgcacgca ggttctccgg ccgcttgggt 1800
ggagaggcta ttcggctatg actgggcaca acagacaatc ggctgctctg atgccgccgt 1860
gttccggctg tcagcgcagg ggcgcccggt tctttttgtc aagaccgacc tgtccggtgc 1920
cctgaatgaa ctgcaagacg aggcagcgcg gctatcgtgg ctggccacga cgggcgttcc 1980
ttgcgcagct gtgctcgacg ttgtcactga agcgggaagg gactggctgc tattgggcga 2040
agtgccgggg caggatctcc tgtcatctca ccttgctcct gccgagaaag tatccatcat 2100
ggctgatgca atgcggcggc tgcatacgct tgatccggct acctgcccat tcgaccacca 2160
agcgaaacat cgcatcgagc gagcacgtac tcggatggaa gccggtcttg tcgatcagga 2220
tgatctggac gaagagcatc aggggctcgc gccagccgaa ctgttcgcca ggctcaaggc 2280
gagcatgccc gacggcgagg atctcgtcgt gacccatggc gatgcctgct tgccgaatat 2340
catggtggaa aatggccgct tttctggatt catcgactgt ggccggctgg gtgtggcgga 2400
ccgctatcag gacatagcgt tggctacccg tgatattgct gaagagcttg gcggcgaatg 2460
ggctgaccgc ttcctcgtgc tttacggtat cgccgctccc gattcgcagc gcatcgcctt 2520
ctatcgcctt cttgacgagt tcttctgaat tattaacgct tacaatttcc tgatgcggta 2580
ttttctcctt acgcatctgt gcggtatttc acaccgcatc aggtggcact tttcggggaa 2640
atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca 2700
tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat 2760
caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg 2820
cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt 2880
agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag 2940
acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc 3000
gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag 3060
ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca 3120
tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa 3180
ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga 3240
tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata 3300
attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca 3360
agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg 3420
ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg 3480
ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg 3540
cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag 3600
gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac 3660
tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg accaaaatcc 3720
cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt 3780
cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac 3840
cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct 3900
tcagcagagc gcagatacca aatactgttc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact 3960
tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg 4020
ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata 4080
aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga 4140
cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag 4200
ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg 4260
agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac 4320
ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca 4380
acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg 4440
cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc 4500
gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt cagtgagcga ggaagcggaa g 4551

Claims (10)

1. 一种用于鉴定褐飞虱的特异性引物对，其特征在于包括上游引物Nl-Its1-F1和下游引物Nl-Its1-R1，上游引物Nl-Its1-F1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物Nl-Its1-R1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
2. 一种用于鉴定褐飞虱的质控重组质粒，其特征在于其DNA序列如SEQ ID No.3所示。
3. 一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒，其特征在于包括：1）特异性引物对，上游引物Nl-Its1-F1和下游引物Nl-Its1-R1，上游引物Nl-Its1-F1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物Nl-Its1-R1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；2）质控重组质粒，其DNA序列如SEQID No.3所示；3）PCR反应液，所述的PCR反应液包含2×Reaction Buffer Mix、ddH2O。
4. 如权利要求3所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒，其特征在于反应体系包括2×Reaction Buffer Mix 5μL，ddH2O 2.8μL，浓度为10pmol/μL的上游引物Nl-Its1-F1和下游引物Nl-Its1-R1各0.1μL，浓度为20×10-6ng/μL的质控重组质粒2μL或样本粗组织液2μL。
5.如权利要求3所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒，其特征在于质控重组质粒的使用浓度为4×10-6ng/μL。
6.采用权利要求3所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
1）取待测飞虱单头个体，用蒸馏水制备样本粗组织液；
2）制备含上述2条特异引物的荧光定量PCR扩增体系，以质控重组质粒P作为临界模板；
3）将上述PCR反应液上机进行扩增；
4）结果分析。
7. 如权利要求6所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于步骤1）中样本粗组织液的具体制备方法为：取单头待测样本放入1.5ml离心管中，再加入500μLddH2O研磨，手动研磨或自动研磨机研磨，自动研磨机的参数为5HZ，90s。
8. 如权利要求6所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于步骤2）扩增体系中，各组分的具体比例为：2×Reaction Buffer Mix 5μL，ddH2O 2.8μL，浓度为10pmol/μL的上游引物Nl-Its1-F1和下游引物Nl-Its1-R1各0.1μL，浓度为20×10-6ng/L的质控重组质粒2μL或样本粗组织液2μL，用ddH2O补足10μL。
9. 如权利要求6所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于步骤3）扩增条件中：具体为95℃、50 s，60℃、25s，共30个循环。
10.如权利要求6所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于步骤4）结果分析中：根据Ct值的大小判断，当样本的CtS小于质控质粒P的CtP值时，则为褐飞虱，反之则不是褐飞虱。
CN201910104550.0A 2019-02-01 2019-02-01 一种快速的基于Ct值的从多种近似种中鉴别褐飞虱的引物、试剂盒及方法 Pending CN109628615A (zh)

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WO2008119562A1 (en) * 2007-04-03 2008-10-09 Bergen Teknologioverforing As Method and kits for detection of egfrviii
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Title
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