CN109628319A - 一种草菇菌种的液体培养基及培养方法 - Google Patents

一种草菇菌种的液体培养基及培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种草菇液体菌种的培养基及培养方法，所述培养基包括：碳源15‑25g/L，氮源1‑4g/L，KH2PO4 1‑4g/L，MgSO4 0.5‑2g/L。培养方法为：装瓶量为80‑120mL/250mL，121℃下灭菌15min，冷却后接种，接种量为1％‑5％，培养温度为30‑34℃，转速为100‑150rpm/min，培养时间为3‑5d。本发明培养基制作方法简单，培养条件易稳定控制，能够为草菇菌丝生长提供良好的营养环境，与草菇生产中的传统固体制种方式相比，制种简便、生长迅速、周期短、并可降低生产成本，取得了较好的效果。

Description

一种草菇菌种的液体培养基及培养方法
技术领域
本发明属于草菇液体菌种培育领域，特别涉及一种草菇液体菌种的培养基及培养方法。
背景技术
草菇(Volvariella volvacea)，隶属于担子菌亚门(Basidiomycatina)，层菌纲(Hyoenomycetes)，无隔担子菌亚纲(Holobasidiomycetidae)，伞菌目(Agaricales)，鹅膏菌科(Pluteaceac)，草菇属(Volvariella)。中国是全球草菇的主要栽培国家，产量居世界之首。草菇因其味道鲜美、营养丰富，深受广大市民的喜爱。草菇消费量逐年增加，草菇产业发展潜力巨大，然而针对草菇生产的研究并不广泛。
多年来，草菇生产中仍采用固体制种方式，常规的固体菌种是采用棉籽壳菌种，要经过原种、栽培种等复杂的生产环节，装瓶、掏瓶、装袋、灭菌、接种等繁琐的程序，存在生产周期长，菌龄不一致，操作不便等缺点。液体菌种因其具有生长迅速、菌龄整齐、制种简便、使用方便、接种点多、萌发和现蕾快、周期短等优点，受到工厂化生产的青睐，同时可降低生产成本，提高产品质量。要实现草菇规模化、设施化生产，草菇液体菌种进行扩大繁殖是必然趋势，而草菇液体菌种的培养基及培养条件的确定是草菇液体菌种应用于设施化栽培生产的前提。
陈多扬等(陈多扬,张一帆,杨小兵,等.草菇工厂化液体菌种制作与出菇试验[J].中国食用菌,2012,31(1):13-14,23.)对草菇工厂化生产中液体菌种的制作和出菇进行研究，供试菌株为V203，根据文献资料和平时生产积累的5个配方进行筛选，最终得出以葡萄糖20.2g、蛋白胨2.0g、酵母膏2.0g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾1.0g、磷酸氢二钾1.0g，蒸馏水l 000mL，pH8.3为液体培养基配方，发酵时间为6d。王芳等(王芳，陶鸿，陈明，等.不同培养条件对草菇菌丝生物量的影响[J].农学学报，2011,15(4):40-43.)研究了不同培养基配方、培养温度、摇瓶装液量、接种量、pH及培养时间对草菇V37菌丝体生物量的影响。针对草菇液体菌种配方及培养条件的研究虽有报道，但研究不够系统和广泛。本研究针对工厂化主栽品种9715，分别开展碳、氮源的筛选，并通过正交试验分别对适合草菇9715菌丝生长的液体培养基配方及培养条件进行了优化。正交试验设计是一种研究多因素试验的重要数理方法，可对试验因素做合理、有效的安排，最大限度减少试验误差，使之达到高效、快速、经济的目的，将它应用于草菇液体菌种的配方及培养条件的确定，可全面准确地估计各试验因素的主效应大小及各级交互作用的效应大小，从而更准确有效地挑选适合草菇9715菌株生长的培养基及培养方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种草菇液体菌种的培养基及培养条件的筛选方法，克服仅凭经验进行试验设计、所得试验结果相对狭窄的缺陷，本研究针对工厂化主栽品种9715，分别开展碳、氮源的筛选，并通过正交试验分别对适合草菇9715菌丝生长的液体培养基配方及培养条件进行了优化，该配方制作方法简单，培养方法易稳定控制、易操作，该方法经济适用，易于推广。
本发明的一种草菇液体菌种V9715的培养基，其特征在于，所述培养基包括：碳源15-25g/L，氮源1-4g/L，KH2PO4 1-4g/L，MgSO4 0.5-2g/L，pH7.0-9.5。
所述碳源为葡萄糖、蔗糖、酒石酸、麦芽糖、果糖、甘露醇、山梨醇、海藻糖中的一种或几种。
优选，所述碳源为葡萄糖。
所述氮源为蛋白胨、酵母浸粉、牛肉浸膏、硫酸铵、硝酸钾中的一种或几种。
优选，所述氮源为酵母浸粉。
最优选所述培养基为：葡萄糖25g/L，酵母浸粉4g/L，KH2PO4 1g/L，MgSO4 1g/L，pH9.0。
本发明的一种草菇液体菌种V9715的培养方法，包括：
将所述培养基置于培养瓶中，先灭菌冷却，然后接种，培养。
所述培养基置于培养瓶中为：80-120mL的培养基置于250mL培养瓶中。
优选，所述为120mL的培养基置于250mL培养瓶中。
所述接种具体为：将保存的菌种活化，即转接至PDA平板，32℃恒温培养3d可得母种，将活化的母种用打孔器打孔，取菌块经均质仪打碎后，接入菌液，接种量为1-5％(以15mm2菌块计为1％的菌种接种量)。
优选，接种量为2％。
所述培养为：培养温度30-34℃，摇床转100-150rpm，培养时间为3-5d。
优选培养为培养温度32℃，摇床转125rpm。
有益效果
本方法通过单因子试验分别筛选出最佳碳源和最佳氮源，并通过正交试验，对适合草菇9715菌丝生长的液体培养基配方及培养条件进行了优化；
本发明方法培养基制作方法简单，培养条件易稳定控制，能够为草菇菌丝生长提供良好的营养环境，与草菇生产中的传统固体制种方式相比，制种简便、生长迅速、周期短、并可降低生产成本，与现有的草菇液体菌种的配方及培养条件相比，配方成分更简单，意味着成本更低。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
一种草菇液体菌种的培养基及培养方法，依次包括以下步骤：
草菇菌种：V9715，由上海市农业科学院食用菌研究所提供。
固体培养基：美国BD公司生产的PDA合成培养基，称取39g用水定容至1000mL,121℃灭菌15min，用于试管和平板培养菌丝。
1)碳源筛选
供试验碳源为葡萄糖、蔗糖、酒石酸、麦芽糖、果糖、甘露醇、山梨醇、海藻糖等8种，添加量各为2％,每配方另外添加蛋白胨0.1％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸镁0.05％，制成8种不同的液体培养基。
取250mL三角瓶，每瓶装取100mL相应液体培养基，121℃灭菌15min备用。首先将保存的菌种活化，即转接至PDA平板，32℃恒温培养3d可得母种。然后将活化的母种用打孔器打孔，取一定量的菌块经均质仪打碎后，每瓶接入2％(以15mm2菌块计为1％的菌种接种量)的菌液，置于32℃、转速150r/min摇床上振荡培养5d，用无纺布过滤培养结束的液体培养基中的菌丝，再用蒸馏水冲洗2-3次，收集菌丝在烘箱中(60℃)烘干至恒重，用电子分析天平称其干重，得到生物量的数据，每处理5个重复。结果如表1所示。
表1草菇液体菌种碳源筛选
葡萄糖价格相对较低，营养丰富适用于作为草菇大规模生产液体菌种的原料，因此选择葡萄糖作为草菇液体菌种的最适碳源。
2)氮源筛选
经单因素筛选，确定葡萄糖为最佳碳源，再经单因素筛选合适的氮源。供试验氮源为蛋白胨、酵母粉、牛肉浸膏、硫酸铵、硝酸钾等5种，添加量各为0.2％；每配方另外添加葡萄糖2％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸镁0.05％，制成5种不同的液体培养基。
取250mL三角瓶，每瓶装取100mL相应液体培养基，121℃灭菌15min备用。首先将保存的菌种活化，即转接至PDA平板，32℃恒温培养3d可得母种。然后将活化的母种用打孔器打孔，取一定量的菌块经均质仪打碎后，每瓶接入2％(以15mm2菌块计为1％的菌种接种量)的菌液，置于32℃、转速150r/min摇床上振荡培养5d，用无纺布过滤培养结束的液体培养基中的菌丝，再用蒸馏水冲洗2-3次，收集菌丝在烘箱中(60℃)烘干至恒重，用电子分析天平称其干重，得到生物量的数据，每处理5个重复。结果如表2所示。
表2草菇液体菌种氮源筛选
酵母浸粉作为氮源，菌丝生物量最大，显著优于蛋白胨、牛肉浸膏、KNO3和(NH4)2SO4，同时酵母浸粉作为生长因子有利于菌丝的生长。
3)液体菌种培养基组成
经过碳、氮源的单因素筛选试验后，分别选取葡萄糖(15g、20g、25g)、酵母浸粉(1g、2g、4g)为碳、氮源，另外添加KH2PO4(1g、2g、4g)和MgSO4(0.5g、1g、2g)，采用L9(34)正交表确定液体菌种的最佳配方组合，试验因素及水平如表3所示。培养条件及生物量的测定同上。
表3最佳配方L9(34)正交实验因素水平表
结果如表4所示，不同处理菌丝生物量有一定差异，4个因素中对菌丝生物量的影响大小依次为：葡萄糖(A)＞酵母粉(B)＞MgSO4(D)＞KH2PO4(C)，MgSO4和KH2PO4的影响较小，其中葡萄糖对菌丝生物量的影响最为显著。由极差分析结果可以看出，RA＞RB＞RD＞RC，极差越大起的作用越大，即葡萄糖的浓度对生物量的影响最大。在试验设计范围内，优化得到的最佳配方为A3B3C1D2，即葡萄糖25g/L，酵母浸粉4g/L，KH2PO4 1g/L，MgSO4 1g/L。
表4草菇液体菌种最佳配方L9(34)正交实验设计及结果
处理 A B C D 生物量(g/100mL干重)
1 1 1 1 1 0.2604±0.0182
2 1 2 2 2 0.3331±0.0370
3 1 3 3 3 0.3571±0.0477
4 2 1 2 3 0.3693±0.0436
5 2 2 3 1 0.3474±0.0515
6 2 3 1 2 0.4602±0.0307
7 3 1 3 2 0.4235±0.0207
8 3 2 1 3 0.4314±0.0476
9 3 3 2 1 0.4262±0.0236
K1 0.3162 0.3511 0.3840 0.3447
K2 0.3923 0.3706 0.3762 0.4056
K3 0.4270 0.4145 0.3760 0.3859
R 0.1108 0.0634 0.0080 0.0609
正交试验中Ki(如K1、K2等)表示任意列上水平号为i时所对应的试验结果之和。R就是每个因素下K的最大值减最小值。
4)液体菌种培养条件
经正交试验筛选出草菇液体菌种培养的最佳配方后，再对适宜配方的培养条件进行优化。分别选取接种量(1％、2％和5％，其中以15mm2菌块计为1％的菌种接种量单位)、液体装瓶量(80mL、100mL、120mL)、温度(30℃、32℃、34℃)和转速(100rpm、125rpm、150rpm)，采用L9(34)正交表确定液体菌种的最佳培养条件，试验因素及水平如表5所示。生物量的测定同上。
表5最佳培养条件L9(34)正交实验因素水平表
结果如表6所示。不同处理菌丝生物量有一定差异，由极差分析结果可以看出，RD＞RC＞RA＞RB，4个因素对草菇液体菌种菌丝生物量的影响大小依次为：转速(D)＞温度(C)＞接种量(A)＞装液量(B)。四因素中，转速和温度的影响较为显著，其中转速的作用最为显著。在试验设计范围内，优化得到的最佳培养条件为A2B3C1D2，即接种量2％，装瓶量120ml，温度32℃，转125rpm。
表6最佳培养条件L9(34)正交实验设计及结果
处理 A B C D 生物量(g/100mL干重)
1 1 1 1 1 0.1644±0.0210
2 1 2 2 2 0.3879±0.0422
3 1 3 3 3 0.3054±0.0421
4 2 1 2 3 0.3446±0.0171
5 2 2 3 1 0.1495±0.0107
6 2 3 1 2 0.6022±0.0847
7 3 1 3 2 0.4751±0.0710
8 3 2 1 3 0.4887±0.0170
9 3 3 2 1 0.1218±0.0202
K1 0.2859 0.3281 0.4184 0.1452
K2 0.3655 0.3420 0.2848 0.4884
K3 0.3618 0.3431 0.3100 0.3796
R 0.0796 0.0150 0.1336 0.3432
综上，经过正交试验优化的一种草菇液体菌种的培养基组成为：葡萄糖25g/L，酵母浸粉4g/L，KH2PO4 1g/L，MgSO4 1g/L，pH9.0；培养条件为：250mL的三角瓶装瓶量为120ml，培养温度32℃，摇床转125rpm，接种量为2％(以15mm2菌块计为1％的菌种接种量单位)，本方法仅针对草菇9715菌株。
对比例1
一种草菇液体菌种的常用培养基及培养条件，液体培养基的组成及含量为：葡萄糖20.2g、蛋白胨2.0g、酵母膏2.0g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾1.0g、磷酸氢二钾1.0g，蒸馏水l000mL，pH8.3，使用250mL三角瓶，每瓶装120mL液体培养基，在121℃下灭菌15min，冷却后待接种。在紫外灭菌30min后的超净工作台上进行与实施例1相同生长状态的草菇9715菌丝接种，接种量(2％)、培养温度(32℃)及转速(125rpm)。在液体培养过程中，在黑暗条件下培养5d时，用烘干至恒重(M1)的滤纸过滤草菇9715菌丝球，将菌丝球和滤纸一同烘干至恒重(M2)，计算草菇菌丝球干重M＝(M2-M1)，重复四次，测量的菌丝球干重平均结果如表7中对照组所示。
表7常用培养基培养菌丝生物量
本方法通过单因子试验分别筛选出最佳碳源和最佳氮源，并通过正交试验，对适合草菇9715菌丝生长的液体培养基配方及培养条件进行了优化。该方法培养基制作方法简单，培养条件易稳定控制，能够为草菇菌丝生长提供良好的营养环境。与草菇生产中的传统固体制种方式相比，制种简便、生长迅速、周期短、并可降低生产成本。与现有的草菇液体菌种的配方及培养条件相比，配方成分更简单，意味着成本更低。

Claims (8)

1.一种草菇液体菌种的培养基及培养方法，其特征在于，所述培养基包括：碳源15-25g/L，氮源1-4g/L，KH2PO4 1-4g/L，MgSO4 0.5-2g/L。
2.根据权利要求1所述培养基，其特征在于，所述碳源为葡萄糖、蔗糖、酒石酸、麦芽糖、果糖、甘露醇、山梨醇、海藻糖中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述培养基，其特征在于，所述氮源为蛋白胨、酵母浸粉、牛肉浸膏、硫酸铵、硝酸钾中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述培养基，其特征在于，所述培养基为：葡萄糖25g/L，酵母浸粉4g/L，KH2PO4 1g/L，MgSO4 1g/L。
5.一种草菇液体菌种的培养方法，包括：将权利要求1所述培养基置于培养瓶中，先灭菌冷却，然后接种，培养。
6.根据权利要求5所述培养方法，其特征在于，所述培养基置于培养瓶中为：80-120mL的培养基置于250mL培养瓶中。
7.根据权利要求5所述培养方法，其特征在于，所述接种具体为：将保存的菌种活化，即转接至PDA平板，32℃恒温培养3d可得母种，将活化的母种用打孔器打孔，取菌块经均质仪打碎后，接入菌液，接种量为1-5％。
8.根据权利要求5所述培养方法，其特征在于，所述培养为：培养温度30-34℃，摇床转速100-150rpm，培养时间为3-5d。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110846234A (zh) * 2019-12-23 2020-02-28 上海市农业科学院 一种姬菇培养基

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101699969A (zh) * 2009-11-05 2010-05-05 张纪明 草菇液体菌种的深层发酵培养方法及其培养基
CN102550294A (zh) * 2012-02-03 2012-07-11 连云港市农业科学院 一种姬菇菌种的液体发酵培养方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101699969A (zh) * 2009-11-05 2010-05-05 张纪明 草菇液体菌种的深层发酵培养方法及其培养基
CN102550294A (zh) * 2012-02-03 2012-07-11 连云港市农业科学院 一种姬菇菌种的液体发酵培养方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
任海霞等: ""草菇液体菌种培养条件优化研究"", 《山东农业科学》 *
张一帆等: ""草菇液体菌种培养过程的变化和培养终点的研究"", 《种子》 *
张萍等: ""不同营养条件对草菇液体培养的影响"", 《江苏农业科学》 *
曲玲等: ""天达V901草菇菌丝生长条件的筛选与优化"", 《山东农业科学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110846234A (zh) * 2019-12-23 2020-02-28 上海市农业科学院 一种姬菇培养基

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