CN109618928A

CN109618928A - 一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法

Info

Publication number: CN109618928A
Application number: CN201811590534.9A
Authority: CN
Inventors: 邓桠; 王红梅; 刘春风
Original assignee: Jiangsu Polytechnic College of Agriculture and Forestry
Current assignee: Jiangsu Polytechnic College of Agriculture and Forestry
Priority date: 2018-12-25
Filing date: 2018-12-25
Publication date: 2019-04-16

Abstract

本发明公开了一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，包括：母株处理：外植体采集前7‑40天，向室内盆栽月季母株喷施杀菌剂和杀虫剂；从处理后的母株上取茎段为外植体；外植体消毒：将外植体清洗后分别用浓度为0.05～0.1％多菌灵、50‑150mg/L链霉素和酒精处理后，再用氯化汞进行消毒处理。本发明通过采用适当的杀菌剂、杀虫剂对室内盆栽月季母株进行消毒，再对外植体进行接种前消毒处理，通过双重处理可有效的提高发芽率，降低污染率，污染率可低至10％，发芽率可高达85％以上，污染率低，发芽效果明显且操作简便，苗木健壮，生长状况良好。

Description

一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法

技术领域

本发明涉及组织培养，尤其涉及一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法。

背景技术

月季(Rosa chinensis Jacq.)，别名月月红、斗春红等，多为蔷薇科蔷薇属常绿或半常绿直立灌木，每年可多次开花。月季是我国十大名花之一，被誉为“花中皇后”。月季类型多样，品种繁多，花型各异，色彩丰富，香气浓淡相宜，而且分布极其广泛，适应性强。

月季的常规繁殖途径是扦插或嫁接，月季组织培养技术的发展可以快速大量繁殖的新品种，加速品种更新换代，促进月季产业的发展。由于目前很多月季优良品种为温室内盆栽，而温室内由于温度高、湿度大、通风不良等原因，很容易发生菌类污染和病虫害的发生，月季栽培过程中尤其容易发生病菌感染和害虫危害，一旦感病，便全株受到侵染，传统的繁殖方法，如扦插、嫁接等，即使苗木成活也很难改变携带有病菌的现象，因此，成活苗的品质也受到一定影响。而组织培养最重要的一个环节之一就是对外植体的消毒灭菌，成活的组培苗均为无菌苗，再加上组织培养可以给苗木提供适宜的温度、湿度、光照和植物所需的激素及碳水化合物，并进行快速大量繁殖，在保证苗的品质的同时还有较高的繁殖速度。

对于月季的外植体组培：周庆华(2011)等用不同激素的情况下对外植体的发芽率影响进行了研究和报道；王正加等(2003)报道了月季组织培养过程中的影响因素，重点介绍了植物生长调节剂、外植体、培养基和培养条件等对月季试管苗生长的影响。刘会超等(2007)从月季腋芽萌发、器官发生、体细胞胚胎发生三个方面综述了品种、外植体、基本培养基成分、激素浓度及配比、培养条件及不同的外植体处理方法等影响因素对月季组培体系的影响进行报道。此外，还有一些月季组培的简单报道。

综上所述，目前对于月季的组织培养方法的研究报道较多，但专门开展降低室内盆栽月季污染率的研究较少。

发明内容

技术问题：为解决月季组培易污染的问题，本发明提供了一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法。

技术方案：

一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，包括：

(1)母株处理：外植体采集前7-40天，向室内盆栽月季母株喷施杀菌剂和杀虫剂；

(2)从处理后的母株上取茎段为外植体；

(3)外植体消毒：将外植体清洗后分别用浓度为0.05～0.1％多菌灵、50-150mg/L链霉素和酒精处理后，再用氯化汞进行消毒处理。

步骤(1)中，所述杀菌剂为多菌灵，所述杀虫剂为阿维菌素、吡虫啉中的至少一种。

具体的，步骤(1)中，于外植体采集前7-10天，喷施一次多菌灵；于外植体采集前30-40天，每隔7-10天喷施一次阿维菌素，于外植体采集前7-10天，喷施一次吡虫啉。进一步，喷施50％的多菌灵的1000-1500倍液，每株月季喷施100-150ml，喷施2％的阿维菌素的1500-2000倍液，每株月季喷施100-150ml，喷施10％的吡虫啉的4000-6000倍液，每株月季喷施100-150ml。

母株处理结束后，选择当年生健壮饱满的枝条上新萌出的的幼嫩茎段为外植体，进行消毒处理，消毒处理时，依次用多菌灵、链霉素、酒精和氯化汞进行消毒。

步骤(3)中，所述多菌灵的浓度优选为0.05-0.08％，所述链霉素的浓度优选为50-100mg/L。所述多菌灵的处理时间为10-15min，所述链霉素的处理时间为10-15min。

所述酒精的质量分数为70-75％，处理时间为30-60s。

所述氯化汞的质量分数为0.1-0.2％，消毒时间为2-8min，优选为3-5min。

有益效果：

本发明通过采用适当的杀菌剂、杀虫剂对室内盆栽月季母株进行消毒，再对外植体进行接种前消毒处理，通过双重处理可有效的提高发芽率，降低污染率，且发明人发现，仅采用单一的母株处理或者外植体消毒处理均无法有效控制污染率，单一的母株处理，由于处理母株生长环境无法做到无菌，所以处理后的材料不可以直接接种，单一的外植体消毒处理，由于外植体带菌严重，污染率高达60％-80％。除此之外，在对外植体进行接种前消毒处理时，通过常规的酒精和氯化汞消毒的效果较差，因此，发明人对其进行改进，采用多菌灵、链霉素、酒精和氯化汞进行消毒可提升消毒效果。

本发明的污染率可低至10％，发芽率可高达85％以上，污染率低，发芽效果明显且操作简便，苗木健壮，生长状况良好。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

本实施例所用部分药剂如下：

50％的多菌灵：50％多菌灵可湿性粉剂，活性成分多菌灵的质量分数为50％；

2％的阿维菌素：2％阿维菌素乳油，活性成分阿维菌素的质量分数为2％；

10％的吡虫啉：10％吡虫啉可湿性粉剂，活性成分吡虫啉的质量分数为10％；

文中如无特殊说明，配制各药剂时均采用水为溶剂。

实施例1

1、母株的处理

室内盆栽母株很容易感染黑斑病、灰霉病等，盆栽过程中一旦发现发病必须及时利用药剂和人工等方法处理；为了降低外植体的污染率，即使未见明显病症，仍需在外植体采集前一周喷洒50％的多菌灵的1000倍液(抑菌剂),每株月季母株每次喷洒100ml药液，并剪除病斑、萎蔫叶片及花蕾，同时放置在较强的光照条件(光照强度20000-100000lx)下晒苗。

危害月季的害虫种类较多，常见的主要有：蚜虫、蓟马、红蜘蛛等。温室内一年四季均可发生，尤其在春季发生严重，而春季又是组织培养最适宜的时期。害虫危害植物的同时，最重要的影响是传播病害，因为必须对害虫进行处理，再取组培外植体。处理方法为取材前一个月每隔10d喷洒一次2％的阿维菌素的1500倍液，每株喷洒100ml，取材前7d左右，喷洒1次10％的吡虫啉4000-6000倍液，每株喷洒100ml，能有效的预防红蜘蛛、蚜虫等害虫。

2、外植体的选取

于药剂处理月季室内盆栽植株后，选择当年生健壮饱满的枝条上新萌出的幼嫩茎段，放在清水中，防止失水干枯，并及时带回实验室，当天采集的材料必须当天处理。

3、外植体的预处理及清洗

将外植体的叶片和表皮上的刺去除，注意皮刺去除时不能伤及茎段表皮。然后将茎段剪成2-3cm小段，每段至少保留2个腋芽，用洗衣液清洗干净后，放置于烧杯中，用纱布封住烧杯杯口，放置于自来水下，用流水冲洗2h。

4、外植体消毒

将清洗好的茎段，用滤纸吸干，将其修剪成1-1.5cm左右的单芽茎段。在超净工作台上，将其转入无菌空瓶，放在50％多菌灵可湿性粉剂的800-1000倍液中15min，用无菌水冲洗2遍，放入50-150mg/L链霉素溶液中浸泡15min，取出后用无菌水冲洗3遍；多菌灵和链霉素的组合采用单因素试验设计并设置对照，试验设计见表1。然后将链霉素处理完的茎段放入75％(质量分数)的酒精中消毒30s，然后分成3组分别放入质量分数0.1％氯化汞中消毒3、5、8min，无菌水冲洗5遍。

表1多菌灵与链霉素的组合设计

序号	50％的多菌灵(倍液)	链霉素(mg/L)	接种数
				1	0	0	60
2	800	50	60
				3	800	100	60
4	800	150	60
				5	1000	50	60
6	1000	100	60
				7	1000	150	60

结果统计见表2。

表2外植体消毒结果统计

从表中数据分析得出，使用多菌灵和链霉素处理外植体能有效的降低污染率，对照中仅用酒精和氯化汞消毒，氯化汞的灭菌时间提高到8min时，污染率仍有60％；而使用多菌灵和链霉素后，再用酒精和氯化汞灭菌，灭菌效果与对照存在显著差异。多菌灵800倍液和链霉素50mg/L处理后，再用氯化汞灭菌3min，污染率已降低至40％，随着多菌灵和链霉素使用浓度的增加，及氯化汞灭菌时间的增加，灭菌效果不断提高。多菌灵800-1000倍液，链霉素50-100mg/L，氯化汞灭菌时间3-5min，污染率在20％以下，成活率达80％以上，而随着链霉素浓度的增加，氯化汞灭菌时间的延长，灭菌效果有所降低，主要原因是外植体受伤严重，导致死亡率提高。

因此，为了降低室内盆栽月季灭菌效果，可将多菌灵、链霉素、酒精及氯化汞配合使用作为消毒剂，使用50％的多菌灵的800-1000倍液，浸泡10-15min，接着链霉素50-100mg/L的溶液浸泡10-15min，无菌水冲洗3遍，再用75％酒精灭菌30s，用0.1％氯化汞灭菌3-5min，最后用无菌水冲洗3-5遍。

5、接种

在超净工作台上，将灭好菌的茎段用无菌滤纸上吸干水分，将茎段的两端稍微修剪，剪去两端被药剂杀死的部分组织，将其修剪成1cm左右的带有一个腋芽的茎段，然后接种于已配好的培养基上，培养基为MS+6-BA2.0mg/l+NAA0.5mg/l和MS+6-BA1.0mg/l+NAA0.2mg/l，蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH值为5.8。注意接种时，每个培养瓶接种一个外植体，接种过程避免直接在瓶口上方操作，需一只手将培养瓶瓶口倾斜拿住，另一只手用消毒好镊子夹住灭菌好的茎段，一次性的快速接种到培养基上，接种过程避免镊子碰触材料以外的任何地方。

6、培养

将接种好的培养瓶放置于温度25±1℃，光照强度800～1200 1x，光照时间12h/d的培养室中。

Claims

1.一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，包括：

(2)从处理后的母株上取茎段为外植体；

2.根据权利要求1所述的降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述杀菌剂为多菌灵，所述杀虫剂为阿维菌素、吡虫啉中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，步骤(1)中，于外植体采集前7-10天，喷施一次多菌灵；于外植体采集前30-40天，每隔7-10天喷施一次阿维菌素，于外植体采集前7-10天，喷施一次吡虫啉。

4.根据权利要求3所述的降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，步骤(1)中，喷施50％的多菌灵的1000-1500倍液，每株月季喷施100-150ml，喷施2％的阿维菌素的1500-2000倍液，每株月季喷施100-150ml，喷施10％的吡虫啉的4000-6000倍液，每株月季喷施100-150ml。

5.根据权利要求2所述的降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，步骤(3)中，依次用多菌灵、链霉素、酒精和氯化汞进行消毒。

6.根据权利要求1所述的降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述多菌灵的处理时间为10-15min，所述链霉素的处理时间为10-15min。

7.根据权利要求1所述的降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述多菌灵的浓度为0.05-0.08％，所述链霉素的浓度为50-100mg/L。

8.根据权利要求1所述的降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述酒精的质量分数为70-75％，处理时间为30-60s。

9.根据权利要求1所述的降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述氯化汞的质量分数为0.1-0.2％，消毒时间为2-8min。