CN109566664A - 一种水产、畜禽用消毒剂及其制备和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种水产、畜禽用消毒剂及其制备和应用，组成按重量份计为：聚六亚甲基双胍或丙酸聚六亚甲基胍15‑20份，中草药制剂85‑95份，四羟甲基硫酸磷0.5‑8份，羟基乙酸1‑3份。对环境病毒有较好杀灭作用，减少对动物的消毒应激反应。

Description

一种水产、畜禽用消毒剂及其制备和应用

技术领域：

本发明涉及水产、畜禽养殖，特别涉及水产、畜禽养殖中的消毒剂。

背景技术：

目前水产养殖病毒病危害已经成为整个行业发展的一个重要因素，因为很多养殖动物在疾病感染期或潜伏期处于免疫低下状态，加上消毒和药物应激会加速动物发病或者死亡。故我们发明了一种安全无刺激的灭菌物质。尤其是对病毒的杀灭有较好的作用。

消毒、杀菌、防霉。此产品广谱抗菌，对革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌、真菌和酵母菌等均有杀灭作用。可广泛应用于日用化学工业、水处理、医疗卫生等领域。常用于妇女洗液、卫生湿巾杀菌防霉剂，果蔬、水产品消毒剂，污水处理絮凝消毒剂等产品。与聚六亚甲基单胍比较，聚六亚甲基双胍对谷草杆菌、啤酒酵母菌和黑曲霉菌的抑菌效果优于聚六亚甲基单胍。由于聚六亚甲基双胍是高分子聚合物结构，所以各类细菌对其不会产生抗药性，这已通过国外权威检测机构的实验证实。

聚六亚甲基双胍是一种国际新型安全无毒高分子聚合物抗微生物剂，国际通用名称为菌毒欣，化学性质为阳离子聚合物，聚六亚甲基双胍对革兰氏阴性、革兰氏阳性、病毒、真菌等多种微生物有杀灭作用。

四羟甲基硫酸磷是一种新型的季磷盐型杀菌剂，毒性低，对环境友好。一系列静态杀菌实验及动态实验说明，四羟甲基硫酸磷应用于循环冷却水系统，具有广谱、高效和快速杀生的特点；而且与常用缓蚀阻垢剂伍配性好。是一种具有良好应用前景的杀生剂。

发明内容

发明目的：发明一种在水产、畜禽养殖领域安全无刺激的消毒，对环境病毒有较好杀灭作用，减少对动物的消毒应激反应。

技术方案：一种水产、畜禽用消毒剂，组成按重量份计为：

所述的中草药制剂按重量份计组成为：萹蓄28～32份，黄芩55～70份和柴胡6～12份，水适量。

所述的中草药制剂是将个组份混合均匀后，煮沸2-3小时，冷却后得到。

所述的聚六亚甲基双胍或丙酸聚六亚甲基胍、四羟甲基硫酸磷、羟基乙酸的有效含量均大于98％质量百分比浓度。

制备所述的水产、畜禽用消毒剂的方法，按配方将各组份常温下混合均匀即得。

所述的水产、畜禽用消毒剂在水产、畜禽养殖中的应用。

有益效果：

1.本发明的消毒剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、淋球菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、李斯特菌、痢疾杆菌、黑曲霉菌、布鲁氏杆菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌及硫酸盐还原菌、铁细菌、腐生菌具有完全杀灭作用。本发明采用的聚六亚甲基双胍或丙酸聚六亚甲基胍杀灭微生物的机理是化学和物理共同作用，首先它能与通常呈负电荷的微生物的细胞膜作用，破坏微生物储存的能量和养分输送所必需的离子梯度，甚至造成胞浆渗漏。同时复配四羟甲基盐酸磷后的聚合物链接成正电性，很容易被通常呈负电性的细菌、病毒所吸附缠绕，从而抑制细菌的分裂功能，使细菌丧失生殖能力，加上复配中草药复合物堵塞了微生物的呼吸通道，使得微生物迅速窒息死亡。因而其具有广谱抗菌性，且微生物不易产生耐药性。

2.本发明的消毒剂对水生动物致病弧菌具有很强杀灭作用,对海产养殖动物的存活、生长和发育均无明显影响。

3.本发明应用于水体中，可以在很低的浓度即能够起到很好的杀菌消毒作用。通过中药试剂中的萹蓄、黄芩佐以柴胡可以很好的对水体中的养殖动物起到增强免疫力，止血杀菌的作用，并且特别配合羟基乙酸，在使用过程中可以使得中药试剂的成分更好的析出被养殖动物吸收。

具体实施方式

一种水产、畜禽用消毒剂，组成按重量份计为：

所述的中草药制剂按重量份计组成为：萹蓄28～32份，黄芩55～70份和柴胡6～12份，水适量。

所述的中草药制剂是将个组份混合均匀后，煮沸2-3小时，冷却后得到。

所述的聚六亚甲基双胍或丙酸聚六亚甲基胍、四羟甲基硫酸磷、羟基乙酸的有效含量均大于98％质量百分比浓度。

制备所述的水产、畜禽用消毒剂的方法，按配方将各组份常温下混合均匀即得。

所述的水产、畜禽用消毒剂在水产、畜禽养殖中的应用。

实施例1

一种水产、畜禽用消毒剂，组成按重量份计为：

所述的中草药制剂按重量份计组成为：萹蓄30份，黄芩60份和柴胡9份，水适量。

所述的中草药制剂是将个组份混合均匀后，煮沸2-3小时，冷却后得到。

所述的聚六亚甲基双胍或丙酸聚六亚甲基胍、四羟甲基硫酸磷、羟基乙酸的有效含量均大于98％质量百分比浓度。

制备所述的水产、畜禽用消毒剂的方法，按配方将各组份常温下混合均匀即得。

实施例2

一种水产、畜禽用消毒剂，组成按重量份计为：

所述的中草药制剂按重量份计组成为：萹蓄28份，黄芩60份和柴胡10份，水适量。

所述的中草药制剂是将个组份混合均匀后，煮沸2-3小时，冷却后得到。

所述的聚六亚甲基双胍或丙酸聚六亚甲基胍、四羟甲基硫酸磷、羟基乙酸的有效含量均大于98％质量百分比浓度。

制备所述的水产、畜禽用消毒剂的方法，按配方将各组份常温下混合均匀即得。

实施例3

目的:研究本发明的消毒剂杀灭致病弧菌效果观察其对水生动物常见致病弧菌(副溶血弧菌V.parahaemolyticus、溶藻弧菌V.alginolyticus、漂浮弧菌V.natriegens、哈维氏弧菌V.harveyi、鳗弧菌V.anguillarum、沙蚕弧菌V.nereis)的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)；同时观察其对主要养殖海产品种南美白对虾(PenaeusVannamei)、大菱鲆(Scophthatmusmaximus)、刺参(ApostichopusJaponicus)和杂色鲍(Haliotisdirensicolor)的毒性以及其对日本对虾的受精卵孵化率和无节幼体变态率的影响进行了试验。

将实施例1制备得到的本发明消毒剂,用蒸馏水将其配制成含量为500mg/L作为试验用浓度；同时与万福金安消毒液作对照,由江苏某消毒剂有限公司提供。所有消毒液稀释配制均采用无菌蒸馏水。

指标菌：试验菌种均为致病弧菌标准株,有副溶血弧菌(1614)、溶藻弧菌(1833),由中国科学院微生物研究所提供；漂浮弧菌(1594)、哈维氏弧菌(1593)、鳗弧菌(W-1)、沙蚕弧菌(1623),由中国海洋大学提供。

海产养殖动物：南美白对虾、大菱鲆、刺参和杂色鲍均由黄海水产研究所青岛试验基地提供。

试验方法：

试验菌悬液制备：分别将各菌经分离纯化,接种2216E液体培养基(含蛋白胨5.0g,酵母膏1.0g,磷酸高铁0.1g,溶解于1000ml海水中,调节pH为7.6,经压力蒸汽灭菌),置于28℃培养18h,用无菌生理盐水将菌液稀释至104cfu/ml。试验用海水是取海水经自然沉降48h,再经沙滤,要求溶解氧>5mg/L,pH7.8～8.6。

MIC与MBC检测检测方法按农业部2002版《渔药临床试验技术规范》〔1〕规定操作。本发明消毒剂稀释液配制方法是取灭菌试管9支置于试管架上,按表1显示的数据,分别加入消毒液原液和无菌蒸馏水配制而成。另取无菌试管9支置于试管架上,依次从上述各管分别取0.5ml稀释消毒液,加入4.0ml灭菌海水和0.5ml试验菌液立即混合均匀；从1～9号试管中本发明消毒剂含量依次为0、0.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0、7.5mg/L。将各试管置于28℃环境中作用24h,然后分别从各管移取0.5ml样液接种到液体培养基内,于28℃培养24h,观察结果。结果判定,以无菌生长(试管内培养液澄清透明)的最低浓度为最小抑菌浓度(MIC)。

表1配制不同浓度的本发明消毒剂溶液

最小杀菌浓度测定是在上述最小抑菌浓度试验基础上,往每个浓度的试管内加入适量中和剂,混合均匀后继续培养至48h,以无菌生长的最低浓度为最小杀菌浓度(MBC)。

海产品养殖动物的急性毒性试验：试验前将各种试验海生动物于室内环境海水中饲养10d。选用活泼、健康、无外伤、个体大小均匀,属于同一群体的同种养殖品种随机分组进行试验。南美白对虾和大菱鲆采用半净水法药浴方式,24h重新更换药浴液体；刺参和杂色鲍采用净水法药浴方式,48h重新更换药浴液体。实验中观察养殖动物状态、记录水温,记录试验水产养殖动物24h和48h累计死亡动物数。根据死亡数,采用平均角法计算半数致死浓度(LC50)；按照48hLC50×0.3/(24hLC50/48hLC50)2公式,计算安全浓度(Sc)。

对日本对虾的发育影响试验

(1)对日本对虾受精卵孵化率的影响试验:将日本对虾受精卵分别放入预先配制好的不同浓度菌毒欣溶液中,每个浓度各3份,分别浸泡不同时间,立即用100目筛绢过滤掉消毒剂溶液。然后用干净的海水充分冲洗,去除残留在受精卵表面的消毒剂；再将30粒受精卵放入盛有300ml孵化水中孵化,每组由60粒受精卵组成。试验过程中不充气,不换水；24h后对孵化出的无节幼体进行计数。采用X2检验比较试验组和对照组(不含消毒剂)受精卵孵化率的差异显著性。

(2)对日本对虾无节幼体变态率的影响试验:在500ml玻璃烧杯中进行,将日本对虾无节幼体分别放入盛有已配制好的400ml含不同浓度本发明消毒剂的溶液(孵化水pH8.0,盐度31,温度27～28℃)中,一式2份,每份50尾无节幼体,连续作用40h,观察并记录各组无节幼体变为蚤状幼体的个数。试验过程中不充气,不换水。

结果：

致病弧菌的MIC和MBC测定结果表明,本发明消毒剂溶液对副溶血弧菌与鳗弧菌的MIC和MBC分别为1.5、2.0mg/L；对漂浮弧菌、哈维弧菌及沙蚕弧菌的MIC和MBC分别为2.0、3.0、1.5mg/L；对溶藻弧菌的MIC和MBC为3.5mg/L(表2)。

对海产养殖动物的毒性试验结果：重复结果表明,试验海水溶液中本发明消毒剂含量≤2.25mg/L,24h以内南美白对虾无死亡；其含量≥2.25mg/L,作用48h累计死亡率明显升高,半数致死浓度(LC50)为50.25mg/L(表3)。

表2本发明消毒剂对6种致病弧菌抗菌效果检测结果

注:某知名厂家消毒剂对照对溶藻弧菌的MIC和MBC为有效氯0.7mg/ml。用本发明消毒剂含量≤120mg/L,作用48h内大菱鲆无死亡；使用浓度达240mg/L时,大菱鲆24h累计死亡率为27％,48h则高达96％；作用24h对大菱鲆LC50为420mg/L。本发明消毒剂对大菱鲆的96％可信限为206.31～405.43mg/L,表明本发明消毒剂对大菱鲆之存活无影响(表4)。用本发明消毒剂含量≤5.0mg/L,作用24h刺参无死亡48h累计死亡率为5％；浓度增加至10.0mg/L时,48h累计死亡率即升达100％。作用24h对刺参LC50为8.74mg/L,95％可信限为7.09～11.03mg/L(表5)。

表3本发明消毒剂对南美白对虾的急性毒性试验结果

药物浓度(mg/L)	0	0.75	2.25	6.75	20.25	60.75	182.25	546.75
									24h累计死亡率(％)	0	0	0	6.5	13	13	33	62.3
48h累计死亡率(％)	0	0	10	26.2	40.8	58	100	100

表4本发明消毒剂对大菱鲆的急性毒性试验结果

药物浓度(mg/L)	0	7.5	15	30	60	120	240	480
									24h累计死亡率(％)	0	0	0	0	0	0	27	80
48h累计死亡率(％)	0	0	0	0	0	0	96	100

表5本发明消毒剂对刺参的急性毒性试验结果

药物浓度(mg/L)	0	1.25	2.5	5	10	20	40
								24h累计死亡率(％)	0	0	0	0	72	100	100
48h累计死亡率(％)	0	0	0	6	100	100	100

用本发明消毒剂含量在1.25～20mg/L范围,作用48h各组杂色鲍无死亡；表明在试验浓度范围内的本发明消毒剂对杂色鲍无毒,用其消毒鲍鱼养殖池具有较好的安全性。

对日本对虾的发育影响试验结果

对日本对虾受精卵孵化率的试验结果证明,在设计8.62～125mg/L浓度范围内的本发明消毒剂,作用30min,各试验组与对照组间日本对虾受精卵孵化率均差异不明显(P>0.05),说明本发明消毒剂在试验浓度范围内对受精卵孵化率无明显影响。

表6本发明消毒剂对日本对虾受精卵孵化率的试验结果

注:对照组受精卵孵化率为81％。

对日本对虾无节幼体变态率影响试验结果本发明消毒剂含量≤0.5mg/L,连续作用40h,对日本对虾无节幼体变态率无明显影响；在此浓度下,本发明消毒剂对日本对虾的发育没有影响。本发明消毒剂含量为1.0mg/L时,对无节幼体的变态率为81％,显示出有显著影响；本发明消毒剂含量≥2.0mg/L时,则对无节幼体的变态率为0,显示出有非常显著的影响。对照组日本对虾无节幼体变态率为100％。

本发明消毒剂是一种应用广泛的新型化学消毒剂,性能稳定。报道本发明消毒剂溶液对细菌繁殖体及白色念珠菌具有良好的杀灭效果,对皮肤和黏膜无刺激性,无致微核和致精子畸形的作用,具有良好的使用安全性,但有关本发明消毒剂用于水产养殖环境的消毒尚未见报道。众所周知,水生动物致病菌可引起水产养殖动物各种严重疾病,导致水产养殖场鱼虾大批死亡,造成重大经济损失。对水产养殖环境实施消毒,可预防、控制和治疗养殖动物病虫害,保障养殖品种健康生长,提高水产养殖品的产量和质量,具有很好的实际应用价值,为化学消毒剂的应用开辟新的领域。本研究结果证明,本发明消毒剂在很低的浓度下对试验的6种水生动物致病弧菌具有很好的杀灭效果,且对水生动物毒性低,基本不影响虾类卵的孵化率和无节幼体的变态率。根据《渔药临床试验技术规范》效果评价标准判断,本发明消毒剂对南美白对虾、大菱鲆、刺参和杂色鲍的存活无明显影响,对日本对虾的发育亦无不良毒性副作用,可用于海产养殖环境消毒.

实施例4

单一甲基胍硫酸盐对不同细菌的杀灭实验结果

实施例1的消毒剂对不同细菌杀灭实验结果

实施例5应用于湖北潜江小龙虾塘口湖北省潜江县一组小龙虾塘口，放养密度100/亩，共计池塘6个。4月起将按实例1配方的用于养殖中防控小龙虾“五月瘟”的本发明消毒剂用池塘水稀释后泼洒于其中3个池塘，每亩每米水深用量为500mL，每1周使用1次，连续使用8次。养殖过程中，未使用本发明消毒剂的池塘中小龙虾“五月瘟”的发病率平均为42％，大虾开始发病，吃食减少，出水活力减弱，最终亩产量120斤，应用本发明的池塘中小龙虾的发病率大约为10％，亩产量260斤，发病率降低了76％，产量增加34.6％。

实施例6：泰州市兴化地区河蟹水狂爪病发病率

泰州市兴化地区一组河蟹塘口，密度为1000只/亩，共计池塘4个。5月起将按实例3配方的用于河蟹养殖中防控狂爪病的本发明消毒剂用池塘水稀释后泼洒于其中2个池塘，每亩每米水深用量为500mL，每1周使用1次，连续使用8次。养殖过程中，未使用本发明消毒剂的池塘中河蟹狂爪病发病率平均为52％，病蟹吃食减少，出水活力减弱，最终亩产量80斤，应用本发明的池塘中河蟹的发病率大约为8％，亩产量150斤，发病率降低了84.6％，产量增加52％。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (6)

1.一种水产、畜禽用消毒剂，其特征在于，组成按重量份计为：

2.如权利要求1所述的水产、畜禽用消毒剂，其特征在于，所述的中草药制剂按重量份计组成为：萹蓄28～32份，黄芩55～70份和柴胡6～12份，水适量。

3.如权利要求2所述的水产、畜禽用消毒剂，其特征在于，所述的中草药制剂是将个组份混合均匀后，煮沸2-3小时，冷却后得到。

4.如权利要求1所述的水产、畜禽用消毒剂，其特征在于，所述的聚六亚甲基双胍或丙酸聚六亚甲基胍、四羟甲基硫酸磷、羟基乙酸的有效含量均大于98％质量百分比浓度。

5.制备权利要求1-4任一所述的水产、畜禽用消毒剂的方法，其特征在于，按配方将各组份常温下混合均匀即得。

6.权利要求1-3任一所述的水产、畜禽用消毒剂在水产、畜禽养殖中的应用。