CN109563151B - 用于治疗癌症的方法和组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及多肽，其包含其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的多肽或由其组成，或者包含其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的所述多肽的功能等同变体或由其组成，以及其在医药中，特别是在预防和/或治疗癌症中的用途。

Description

用于治疗癌症的方法和组合物

技术领域

本发明涉及癌症领域，且更具体地，涉及多肽、组合物及其在医药中，特别是在预防和/或治疗癌症中的用途。

背景技术

理想的癌症药物应靶向对于肿瘤维持持续所需的非冗余功能，但其对于任何正常组织的维持和功能都是可有可无的。因此，最常见的逻辑是靶向在癌症中特异性突变的基因产物，基于这些突变分子可能是癌症的“驱动因子”，并且对正常组织可能不太重要。由于这些原因，很多注意力都集中在对特定癌症类型的复发性病变进行分类。不幸的是，这种方法存在一些问题。首先，大多数人实体癌症经历了基因组不稳定性事件并且表现出突变噪声，其可以掩盖“驱动因子”突变及其伴随的效应物途径。其次，癌症是涉及跨越多个演化瓶颈转变的过程的最终结果。每个瓶颈可能需要特定类型的突变，此后其功能对于肿瘤维持可有可无，因此，在肿瘤演化的那一点之后不是良好的治疗靶标。

Myc是参与生长控制和癌症的碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链(b-HLH-LZ)蛋白，其在结构相关蛋白Max、Mad和Mnt的网络中起作用。Myc/Max二聚体激活基因转录并诱导细胞增殖或凋亡。Mad/Max和Mnt/Max复合物充当阻遏物并导致细胞生长停滞和分化。所有二聚体识别相同的DNA共有位点，即CACGTG E-盒。

Myc在正常细胞中受到严格调节，其在正常细胞中增殖水平较高且在非增殖细胞中水平较低。异常高和/或失调的Myc活性与大多数癌症有因果关系，并且通常与侵袭性的低分化的和血管生成的肿瘤相关。Myc表达的失调是由于通过基因扩增的过表达、转录控制的丧失、降解受损或稳定性提高。这导致异常增殖、存活提高、代谢变化、血管生成和炎症，所有这些都代表了癌症的主要标志。多项研究证实了Myc在控制肿瘤发生的细胞内和细胞外方面的关键作用，表明靶向其功能将具有治疗价值。

已知BET溴结构域抑制剂对Myc的下调导致多种肿瘤类型的消退。虽然这种方法显示出良好的潜力，但它存在一些限制，例如毒性和许多脱靶效应。许多破坏Myc/Max相互作用的小分子表现出细胞(in cellulo)低特异性。

然而，Myc抑制剂尚未在临床上可用，且其设计展现出了多种警示：首先，Myc是核转录因子，因此比膜或细胞质分子更难以到达；第二，Myc没有可以被靶向的酶促“活性位点”；第三，Myc家族包含3种不同的蛋白质，c-、N和L-Myc，其在某些条件下在功能上是冗余的，因此需要同时抑制它们全部。此外，有人担心Myc抑制会通过抑制正常组织的增殖而引起严重的副作用。由于所有这些原因，制备Myc抑制剂药物具有挑战性。

Omomyc是显性阴性MYC突变体，其包含Myc的b-HLH-LZ结构域并且在Myc的亮氨酸拉链中具有四个氨基酸替换(Soucek，L.等，1998，Oncogene 17，2463-2472；Soucek，L.等(2002)，Cancer Res 62：3507-3510)。氨基酸替换E61T、E68I、R74Q和R75N赋予蛋白质改变的二聚化特异性，其保留结合其天然配偶体Max并与其自身形成同源二聚体的能力以及与野生型c-、N-和L-Myc形成异源二聚体的能力。

由于这些特性，Omomyc能够通过使Myc与其DNA识别结合位点E盒结合的能力无效，在体外和体内均阻止Myc依赖性基因反式激活功能。同时，Omomyc以依赖于Myc表达水平的方式强烈地增强Myc诱导的凋亡，从而增强Myc反式阻抑活性。因此，Omomyc阻止Myc与启动子E-盒的结合以及靶基因的反式激活，同时保持与启动子的Miz-1依赖性结合和反式阻抑。在存在Omomyc的情况下，Myc相互作用物组(interactome)被引导用于阻抑，且其活性从原癌基因转变为肿瘤抑制基因。

在EP2801370A1中，证明了Omomyc肽自身能够有效地转导穿过细胞膜并易位至细胞核，在那里它发挥其抑制肿瘤的作用。

然而，在现有技术中仍然需要开发用于治疗癌症的新的改进的治疗方法。

发明内容

在第一方面，本发明涉及多肽，其包含其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的多肽，或其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的所述多肽的功能等同变体。

在第二方面，本发明涉及缀合物，其包含：

a.根据本发明的所述多肽或所述多肽的功能等同变体，和

b.促进细胞摄取所述多肽或所述多肽的功能等同变体的化学部分。

在第三方面，本发明涉及编码根据本发明的多肽的多核苷酸，或根据本发明的缀合物。

在第四方面，本发明涉及载体，其包含根据本发明的多核苷酸。

在第五方面，本发明涉及宿主细胞，其包含本发明的多肽、本发明的缀合物、本发明的多核苷酸或本发明的载体。

在第六方面，本发明涉及药物组合物，其包含药学有效量的根据本发明的多肽或所述多肽的功能等同变体、根据本发明的缀合物、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体或根据本发明的宿主细胞，以及可药用赋形剂。

在第七方面，本发明涉及根据本发明的多肽或所述多肽的功能等同变体、根据本发明的缀合物、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体、根据本发明的宿主细胞或根据本发明的药物组合物，其用于医药。

在第八方面，本发明涉及根据本发明的多肽或所述多肽的功能等同变体、根据本发明的缀合物、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体、根据本发明的宿主细胞或根据本发明的药物组合物，其用于预防和/或治疗癌症。

附图简述

图1.细胞生存力测定示出了OmoCS(具有C89S改变)比Omomyc更有效地抑制U87恶性神经胶质瘤细胞(A图)和A549肺腺癌细胞(B图)的生长(在较低浓度下)。Lipofectamine(Lipo)没有任何作用。T检验用于计算统计学显著性。**＝P<0.01，***＝P<0.001。

图2.细胞密度测定示出OmoCA(具有C98A改变)在较低浓度下与OmoCS(具有C98S改变)一样有效地抑制A549肺腺癌细胞的生长。Lipofectamine(Lipo)没有任何作用。

发明详述

本发明的作者已发现其中第89位的半胱氨酸被丝氨酸替换的SEQ ID NO：1的多肽(命名为OmoCS)能够比Omomyc更有效地发挥其肿瘤抑制作用(实施例1)。当SEQ ID NO：1的第89位的半胱氨酸被其他氨基酸替换时，维持这种肿瘤抑制作用。实施例2示出了其中第89位的半胱氨酸被丙氨酸替换的SEQ ID NO：1的多肽(命名为OmoCA)，其具有与OmoCS相同的肿瘤抑制作用。

本发明的多肽

因此，在第一方面，本发明涉及多肽，其包含其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的多肽，或其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的所述多肽的功能等同变体。

SEQ ID NO：1对应于

序列SEQ ID NO：1的多肽对应于Omomyc蛋白质序列，但第89位残基X不是半胱氨酸。如本文中使用的术语“Omomyc”是指由携带E61T、E68I、R74Q和R75N突变的突变形式的Myc蛋白的bHLHZip结构域组成的多肽(其中相对于Myc区的序列给出突变位置的编号，Myc区对应于NCBI数据库中登录号NP_002458(2015年3月15日发布)中限定的多肽的第365至454位氨基酸)。NCBI数据库中提供的登录号为NP_002458的c-Myc序列如下所示(SEQ IDNO：5)，其中衍生Omomyc的区域用下划线表示：

本文中使用的术语“Myc”是指转录因子家族，其包括c-Myc、N-Myc和L-Myc。Myc蛋白通过结合共有序列CACGTG(增强子盒序列或E-盒)并募集组蛋白乙酰转移酶或HAT来激活许多基因的表达。然而，Myc也可以充当转录阻遏物。通过结合Miz-1转录因子并置换p300共激活因子，它抑制Miz-1靶基因的表达。Myc还在DNA复制的控制中起直接作用。

Myc b-HLH-LZ或Myc碱性区螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链结构域是指确定与Max蛋白的Myc二聚化并与Myc-靶基因结合的区域。该区域对应于人Myc的第365至454位氨基酸，其特征在于通过环连接的两个α螺旋(Nair，S.K.，&Burley，S.K.，2003，Cell，112：193-205)。

在一个优选的实施方案中，包含SEQ ID NO：1的多肽的多肽包含下文所示的SEQID NO：3、由其组成或基本上由其组成。

在本文中，“基本上由......组成”意指指定分子不含任何会改变SEQ ID NO：3活性的另外的序列。

本发明涉及包含其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1、由其组成或基本上由其组成的多肽。所述多肽可来自本领域已知的任何Myc蛋白的bHLHZip结构域，条件是保留导致肿瘤抑制效应的突变。因此，可用于本发明的多肽可来自任何哺乳动物物种，包括但不限于家养动物和农场动物(牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫或啮齿动物)、灵长类动物和人。优选地，本发明的多肽来自人Myc蛋白(登录号NP_002458，2015年3月15日发布)。

在一个优选的实施方案中，本发明涉及由其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的多肽组成的多肽，或由所述多肽的功能等同变体组成的多肽。

根据本发明，SEQ ID NO：1的第89位残基可以是除半胱氨酸外的任何氨基酸。

本文中使用的“半胱氨酸”涉及具有式HO2CCH(NH2)CH2SH的氨基酸。它由密码子UGU和UGC编码。该术语还包括非天然半胱氨酸。

半胱氨酸可以以Omomyc的同源二聚体形式形成二硫键，因此其对任何其他氨基酸的突变将导致不能形成二硫键，并且应当导致与OmoCS获得的相同的效力特性。因此，SEQID NO：1的第89位残基可以是除半胱氨酸外的任何天然、非天然或合成氨基酸，且特别是不能与本发明多肽的其他单体交联形成同源二聚体的任何氨基酸。

术语“氨基酸”或“残基”是指天然存在的和合成的氨基酸，以及以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。本文氨基酸可以通过它们通常已知的三字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号表示。

术语氨基酸包括天然存在的氨基酸(Ala、Arg、Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Iys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、Val)、不常见天然氨基酸和非天然(合成的)氨基酸。氨基酸优选为L构型，但也考虑D构型，或D和L构型的氨基酸混合物。

术语“天然氨基酸”包括脂族氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸)、羟基化氨基酸(丝氨酸和苏氨酸)、硫化氨基酸(甲硫氨酸)、二羧基氨基酸及其酰胺(天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸和谷氨酰胺)，具有两个碱性基团的氨基酸(赖氨酸、精氨酸和组氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸)和环状氨基酸(脯氨酸)。在一个实施方案中，SEQ ID NO：1的第89位残基X是脂族氨基酸。在另一个实施方案中，SEQ ID NO：1的第89位残基X是硫化氨基酸。在另一个实施方案中，SEQ ID NO：1的第89位残基X是二羧基氨基酸或其酰胺。在另一个实施方案中，SEQ ID NO：1的第89位残基X是具有两个碱性基团的氨基酸。在另一个实施方案中，SEQ ID NO：1的第89位残基X是芳族氨基酸。在另一个实施方案中，SEQ ID NO：1的第89位残基X是环状氨基酸。在一个优选的实施方案中，SEQ ID NO：1的第89位残基X是羟基化的氨基酸，优选丝氨酸。在一个优选的实施方案中，SEQ ID NO：1的第89位残基X是选自丝氨酸、苏氨酸和丙氨酸的氨基酸，优选地选自丝氨酸和丙氨酸。

本文中使用的术语“非天然氨基酸”是指被胺基取代并且在结构上与天然氨基酸相关的羧酸或其衍生物。经修饰或非常见氨基酸的说明性非限制性实例包括2-氨基己二酸、3-氨基己二酸、β-丙氨酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基异丁酸、3-氨基异丁酸、2-氨基庚二酸、2，4-二氨基丁酸、锁链素(desmosine)、2，2′-二氨基庚二酸、2，3-二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、羟基赖氨酸、别羟基赖氨酸(aliohydroxy lysine)、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸、异锁链素(isodesmosine)、别异亮氨酸(alloisoleucine)、N-甲基甘氨酸、N-甲基异亮氨酸、6-N-甲基-赖氨酸、N-甲基缬氨酸、正缬氨酸、正亮氨酸、鸟氨酸等。

非常见氨基酸的说明性非限制性实例是羟基赖氨酸和羟脯氨酸、甲状腺素、N-甲基精氨酸和n-乙酰基赖氨酸。

在一个优选的实施方案中，第89位残基X是不能与本发明多肽的其他单体交联以形成同源二聚体对的任何其他氨基酸。

在本发明多肽的一个更优选的实施方案中，SEQ ID NO：1的第89位残基是氨基酸丝氨酸。

本文中使用的“丝氨酸”涉及由密码子UCU、UCC、UCA、UCG、AGU和AGC在人中编码的2-氨基-3-羟基丙酸。该术语还包括经修饰的丝氨酸，例如磷酸化或磺化的丝氨酸，作为说明性的非限制性实例的N-苯甲酰基-(2R，3S)-3-苯基异丝氨酸、D-环丝氨酸、L-异丝氨酸、苯基丝氨酸。

在一个优选的实施方案中，本发明的多肽包含SEQ ID NO：2中所示的序列。

在另一个优选的实施方案中，本发明的多肽由SEQ ID NO：4组成或基本上由其组成。

在本发明多肽的一个更优选的实施方案中，SEQ ID NO：1的第89位残基是氨基酸丙氨酸。

本文中使用的“丙氨酸”涉及由密码子GCU、GCC、GCA和GCG在人中编码的2-氨基丙酸。该术语还包括经修饰的丙氨酸，例如N-乙酰基-L-丙氨酸。

在一个优选的实施方案中，本发明的多肽包含SEQ ID NO：63中所示的序列。

在另一个优选的实施方案中，本发明的多肽由SEQ ID NO：64组成或基本上由其组成。

当提及其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1时，术语“功能等同变体”是指任何这样的多肽：其由相对于SEQ ID NO：1的多肽缺失、插入或添加一个或更多个氨基酸产生或由SEQ ID NO：1的多肽的化学修饰产生，并且其基本上保留其中SEQID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的肿瘤抑制活性(优选地其基本上保留OmoCS的肿瘤抑制活性)。技术人员将理解，保留肿瘤抑制活性需要变体可以与Myc和/或其专属配偶体p21/p22Max二聚化并且一旦在细胞核中存在就抑制Myc活性，其能够易位穿过细胞膜，并且它能够易位穿过核被膜。在一些实施方案中，与Omomyc相比，本发明多肽的功能等同变体较少同源二聚化，或者不通过形成二硫桥而被迫形成同源二聚体。特别地，本发明多肽的同源二聚体形式的二硫桥形成少于多肽OmoMyc中。

本文中使用的“较少同源二聚化”涉及即使在还原条件下形成本发明多肽的专属同源二聚体的能力较低。在一个优选的实施方案中，该能力与形成Omomyc的同源二聚体的能力相比低至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％。本文中使用的还原条件涉及还原剂的存在，还原剂是在氧化还原化学反应中向另一种化学物质提供电子的化合物。还原剂的说明性非限制性实例是DTT(二硫苏糖醇)、b-巯基乙醇或TCEP(三(2-羧乙基)膦)。同源二聚体的量在体外可能相同，并且本发明的多肽与Omomyc之间的差异仅存在于存在异源二聚化配偶体的细胞中，在那里不存在二硫化物使得可能更多的形成异源二聚体。

可以使用几种测定来确定肽的同源二聚化，作为说明性的非限制性实施例通过圆二色性监测的热变性，因此可以通过折叠和热稳定性定量来检测二聚化。

合适的功能等同变体包括基本上由其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的多肽组成的多肽。

在本文中，“基本上由......组成”意指特定分子将不含任何将改变其中SEQ IDNO：1第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的活性的另外的序列。

靶向肽的合适的功能变体是显示与SEQ ID NO：1(优选OmoCS，SEQ ID NO：4)的肽具有约大于25％氨基酸序列同一性，例如25％、30％、40％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性程度的那些。使用本领域技术人员公知的计算机算法和方法确定两个多肽之间的同一性程度。两个氨基酸序列之间的同一性优选通过使用如前所述的BLASTP算法确定[BLAST Manual，Altschul，S.，等，NCBI NLM NIH Bethesda，Md.20894，Altschul，S.，等，J.Mol.Biol.1990；215：403-410]。在一个优选的实施方案中，序列同一性在SEQ ID NO：1的多肽的整个长度上或在变体的整个长度上或两者上确定。

本发明多肽的功能等同变体还可包括翻译后修饰，例如糖基化、乙酰化、异戊二烯化、豆蔻酰化、蛋白水解加工等。

或者，靶向肽的合适的功能变体是其中本发明的多肽内的一个或更多个位置含有以下氨基酸的那些：所述氨基酸为上述蛋白质中存在的保守氨基酸替换。“保守氨基酸替换”是由于一个氨基酸被另一个具有相似结构和/或化学性质的氨基酸替换而产生的。例如，以下六组各自含有彼此保守替换的氨基酸：1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；以及6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。这样的保守氨基酸替换的选择在本领域普通技术人员的技能范围内，并且例如由Dordo等(J.Mol.Biol，1999，217；721-739)和Taylor等(J.Theor.Biol.，1986，119：205-218)描述。

在一个优选的实施方案中，SEQ ID NO：1的功能等同变体的完整序列不含半胱氨酸氨基酸。应理解，其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的功能等同变体在对应于来自人c-Myc的Omomyc中存在的突变E61T、E68I、R74Q和R75N的位置处含有突变。其中在功能等同变体中所述突变必须发生的位置可以通过不同Myc序列的多序列比对来确定，并通过对应于来自人c-Myc的Omomyc序列内的第61、68、74和75位的那些位置的比对来鉴定。

多序列比对是成对比对的延伸以一次并入多于两个序列。多比对方法比对给定查询集中的所有序列。优选的多序列比对程序(及其算法)是ClustalW、Clustal2W或ClustalWXXL(参见Thompson等(1994)Nucleic Acids Res 22：4673-4680)。一旦如本文中所述比较(比对)来自不同生物体的c-Myc和变体的序列，技术人员可以容易地鉴定对应于见于Omomyc中的第E61T、E68I、R74Q和R75N位的每个序列内的位置并引入其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的变体内，突变对应于见于来自人c-Myc的Omomyc中的E61T、E68I、R74Q和R75N突变。

用于确定多肽是否可被认为是其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的功能等同变体的合适测定法包括但不限于：

-测量多肽与Max和Myc形成二聚体复合物的能力的测定，例如基于Soucek等中所述的报告基因的表达的测定(Oncogene，1998，17：2463-2472)以及PLA(蛋白质连接测定)或免疫共沉淀。

-测量多肽与DNA内的Myc/Max识别位点(CACGTG位点)结合的能力的测定，例如Soucek等中(同上)描述的电泳迁移率变动测定(EMSA)。

-测量阻抑Myc诱导的反式激活的能力的测定，例如基于Soucek等(同上)描述的对Myc/Max特异的DNA结合位点控制下的报告基因表达的测定。

-如Soucek等(同上)所述，基于基因产物或多肽来抑制表达myc癌基因的细胞生长的能力的测定。

-测量多肽增强myc诱导的凋亡的能力的测定，例如Soucek等(Oncogene，1998：17，2463-2472)描述的测定。此外，可以使用本领域公知的用于评估细胞中凋亡的任何测定，例如Hoechst染色、碘化丙啶(PI)或膜联蛋白V染色、台盼蓝、DNA梯/片段化和TUNEL。

在一个优选的实施方案中，其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQID NO：1的功能等同变体包括具有一个或更多个，优选所有以下特征的那些序列：与Omomyc相比，与Myc二聚化并抑制其活性的能力、易位穿过细胞膜、易位至细胞核、不能形成同源二聚体或形成同源二聚体的能力降低，在编码本发明多肽的12.5nM mRNA的量的情况下，如实施例1中所进行的体外测定中的细胞生存力低于Omomyc。在一个优选的实施方案中，在编码本发明多肽的12.5nM mRNA的量下，对应于介导如在实施例1中进行的体外测定中细胞生存力的序列的本发明的功能等同变体低于Omomyc。

在一个优选的实施方案中，如果其在一种或更多种上述测定中显示出活性为其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的活性(优选OmoCS的活性)的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，则该多肽被认为是其中SEQID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的功能等同变体。

另外，其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的功能等同变体其在变体与所述细胞接触后也能够转导细胞。

在一个优选的实施方案中，如果多肽能够与其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1(优选为OmoCS，SEQ ID NO：4)至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％一样有效地转导靶细胞，则该多肽被认为是其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的功能等同变体。

另外，其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的功能等同变体也能够易位至靶肿瘤细胞的细胞核。

在一个优选的实施方案中，如果多肽能够与其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1(优选为OmoCS，SEQ ID NO：4)至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％一样有效地易位到靶肿瘤的细胞核，则该多肽被认为是其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的功能等同变体。

在易位穿过细胞膜和到细胞核的能力方面，用于确定多肽是否是其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的功能等同变体的合适测定包括用对该多肽特异的试剂和特异性标记细胞核的染料(例如DAPI或Hoechst染料)双重标记细胞。在一个优选的实施方案中，通过共聚焦显微术或通过荧光显微术进行本发明多肽的检测。

SEQ ID NO：1的本发明多肽还含有c-Myc的M2结构域，其具有序列RQRRNELKRSF(SEQ ID NO：55)(参见Dang和Lee，Mol.Cell.Biol.，1988，8：4048-4054)，且其对应于核定位信号。

在另一个优选的实施方案中，其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的功能等同变体包含序列SEQ ID NO：55。

本文中使用的术语“核定位信号”是指长度为约4至20个氨基酸残基的氨基酸序列，其用于将蛋白质引导至细胞核。通常，核定位序列富含碱性氨基酸，并且示例性序列是本领域公知的(Gorlich D.(1998)EMBO 5.17：2721-7)。

在一些实施方案中，NLS选自SV40大T抗原NLS(PKKKRKV，SEQ ID NO：6)；核质蛋白NLS(KRPAATKKAGQAKKKK，SEQ ID NO：7)；CBP80 NLS(RRRHSDENDGGQPHKRRK，SEQ ID NO：8)；HIV-1Rev蛋白NLS(RQARRNRRRWE，SEQ ID NO：9)；HTLV-I Rex(MPKTRRRPRRSQRKRPPT，SEQ IDNO：10)；hnRNP A NLS(NQSSNFGPMKGGNFGGRSSGPYGGGGQYFKPRNQGGY，SEQ ID NO：11)；rpL23aNLS(VHSHKKKKIRTSPTFTTPKTLRLRRQPKYPRKSAPRRNKLDHY，SEQ ID NO：12)。在本发明的一个实施方案中，核定位信号包含基序K(K/R)X(K/R)(SEQ ID NO：13)。

另外，其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的功能等同变体在变体与所述细胞接触后也能够到达经转导细胞的细胞核。应理解，其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的功能等同变体含有在其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1中存在的NLS，或其他功能性NLS。在另一个实施方案中，本发明的多肽不含有SEQ ID NO：1中存在的天然NLS，并含有另一种功能性NLS替代SEQ ID NO：1中存在的所述NLS或本发明多肽的任何其他部分。

本发明的缀合物

另一方面，本发明涉及缀合物，其包含：

a)根据本发明的多肽或所述多肽的功能等同变体，和

b)促进细胞摄取所述多肽或所述多肽的功能等同变体的化学部分。

本文中使用的术语“缀合物”是指共价连接在一起的两个或更多个化合物使得每个化合物的功能保留在缀合物中。

在一些优选的实施方案中，根据本发明的缀合物包含至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10或更多个促进细胞摄取多肽或所述多肽的功能等同变体的化学部分。

在一个实施方案中，促进细胞摄取多肽的化学部分是脂质或脂肪酸。

脂肪酸通常是包含碳链的分子，酸性部分(例如，羧酸)在链的末端。脂肪酸的碳链可具有任何长度，但是，优选碳链的长度为至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个碳原子，以及其中可推出的任何范围。在某些实施方案中，在脂肪酸的链部分中碳链的长度为4至18个碳原子。在某些实施方案中，脂肪酸碳链可包含奇数个碳原子，然而，在某些实施方案中，可能优选链中有偶数个碳原子。在其碳链中仅包含单键的脂肪酸称为饱和的，而在其链中包含至少一个双键的脂肪酸称为不饱和的。脂肪酸可以是支链的，但在本发明的一些优选实施方案中，它是非支链的。特定脂肪酸包括但不限于亚油酸、油酸、棕榈酸、亚麻酸、硬脂酸、月桂酸、肉豆蔻酸、花生酸、棕榈油酸、花生四烯酸。

在一个优选的实施方案中，促进细胞摄取多肽的化学部分是细胞穿透肽序列，在这种情况下，缀合物是包含本发明的多肽或所述多肽的功能等同变体与细胞穿透肽序列的融合蛋白。

术语“融合蛋白”涉及通过基因技术产生的蛋白质，其由来自不同蛋白质的两个或更多个功能结构域组成。融合蛋白可以通过常规方法获得，例如通过在合适的细胞中基因表达编码所述融合蛋白的核苷酸序列。应理解，细胞穿透肽是指这样的细胞穿透肽，其不同于形成SEQ ID NO：1的多肽或所述多肽的功能等同变体的一部分的细胞穿透肽。

术语“细胞穿透肽序列”在本说明书中与“CPP”、“蛋白质转导结构域”或“PTD”可互换使用。它指的是可变长度的肽链，其指导蛋白质在细胞内的运输。向细胞内的递送过程通常通过胞吞作用发生，但肽也可以通过直接膜易位而内化到细胞中。CPP通常具有这样氨基酸的组成，其含有高相对丰度的带正电荷的氨基酸，例如赖氨酸或精氨酸，或者具有含有交替模式的极性/带电荷氨基酸与非极性疏水氨基酸的序列。可用于本发明的CPP的实例包括但不限于在果蝇触角足(Drosophila antennapedia)蛋白中存在的CPP(RQIKIWFQNRRMKWKK；SEQ ID NO：14)，单纯疱疹病毒1(HSV-1)VP22DNA结合蛋白中存在的CPP(DAATATRGRSAASRPTERPRAPARSASRPRRPVE；SEQ ID NO：15)，Bac-7的CPP(RRIRPRPPRLPRPRPRPLPFPRPG；SEQ ID NO：16)，由第49至57位氨基酸组成的HIV-1TAT蛋白的CPP(RKKRRQRRR；SEQ ID NO：17)，由第48至60位氨基酸组成的HIV-1 TAT蛋白的CPP(GRKKRRQRRRTPQ；SEQ ID NO：18)，由第47至57位氨基酸组成的HIV-1 TAT蛋白的CPP(YGRKKRRQRRR；SEQ ID NO：19)，S413-PV肽的CPP(ALWKTLLKKVLKAPKKKRKV；SEQ ID NO：20)，穿透素(penetratin)的CPP(RQIKWFQNRRMKWKK；SEQ ID NO：21)，SynB1的CPP(RGGRLSYSRRRFSTSTGR；SEQ ID NO：22)，SynB3的CPP(RRLSYSRRRF；SEQ ID NO：23)，PTD-4的CPP(PIRRRKKLRRLK；SEQ ID NO：24)，PTD-5的CPP(RRQRRTSKLMKR；SEQ ID NO：25)，FHVCoat-(35-49)的CPP(RRRRNRTRRNRRRVR；SEQ ID NO：26)，BMV Gag-(7-25)的CPP(KMTRAQRRAAARRNRWTAR；SEQ ID NO：27)，HTLV-II Rex-(4-16)的CPP(TRRQRTRRARRNR；SEQID NO：28)，D-Tat的CPP(GRKKRRQRRRPPQ；SEQ ID NO：29)，CPP R9-Tat(GRRRRRRRRRPPQ；SEQID NO：30)，MAP的CPP(KLALKLALKLALALKLA；SEQ ID NO：31)，SBP的CPP(MGLGLHLLVLAAALQGAWSQPKKKRKV；SEQ ID NO：32)，FBP的CPP(GALFLGWLGAAGSTMGAWSQPKKKRKV；SEQ ID NO：33)，MPG的CPP(ac-GALFLGFLGAAGSTMGAWSQPKKKRKV-cya；SEQ ID NO：34)，MPG(ENLS)的CPP(ac-GALFLGFLGAAGSTMGAWSQPKSKRKV-cya；SEQ ID NO：35)，Pep-1的CPP(ac-KETWWETWWTEWSQPKKKRKV-cya；SEQ ID NO：36)，Pep-2的CPP(ac-KETWFETWFTEWSQPKKKRKV-cya；SEQ ID NO：37)，具有结构R_N(其中N为4至17)的多精氨酸序列，GRKKRRQRRR序列(SEQID NO：38)，RRRRRRLR序列(SEQ ID NO：39)，RRQRRTSKLMKR序列(SEQ ID NO：40)；运输蛋白(Transportan)GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKIL(SEQ ID NO：41)；KALAWEAKLAKALAKALAKHLAKALAKALKCEA(SEQ ID NO：42)；RQIKIWFQNRRMKWKK(SEQ ID NO：43)，YGRKKRRQRRR序列(SEQID NO：44)；RKKRRQRR序列(SEQ ID NO：45)；YARAAARQARA序列(SEQ ID NO：46)；THRLPRRRRRR序列(SEQ ID NO：47)；GGRRARRRRRR序列(SEQ ID NO：48)。

在一个优选的实施方案中，所述细胞穿透肽不是SEQ ID NO：1中包含的内源肽。

在一个优选的实施方案中，CPP是由第49至57位氨基酸组成的HIV-1TAT蛋白的CPP(RKKRRQRRR，SEQ ID NO：49)。在另一个优选的实施方案中，CPP是GRKKRRQRRR序列(SEQ IDNO：50)或RRRRRRRR(SEQ ID NO：51)。

在一个实施方案中，细胞穿透肽序列在本发明多肽或所述多肽的功能等同变体的N端处融合。在另一个实施方案中，细胞穿透肽在本发明多肽或所述多肽的功能等同变体的C端处融合。

在一些优选的实施方案中，除了在SEQ ID NO：1的多肽或所述多肽的功能等同变体中存在的自身细胞穿透肽之外，根据本发明的缀合物或融合蛋白还包含至少1种、至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种、至少7种、至少8种、至少9种、至少10种或更多种另外的细胞穿透肽。

本发明的合适的融合蛋白包括如下定义的多肽OmoCS*TAT和OmoCS*LZArg：

在另一个优选的实施方案中，本发明的缀合物或融合蛋白包含本发明的多肽或其功能等同变体，并且还包含N端或C端核定位信号。

技术人员将理解，可能期望融合蛋白还包含一个或更多个柔性肽，其连接本发明的多肽或所述多肽的功能等同变体、细胞穿透肽序列和/或NLS。因此，在一个特定的实施方案中，本发明的多肽与细胞穿透肽序列直接连接。在另一个特定的实施方案中，本发明的多肽通过柔性肽与细胞穿透肽序列连接。在一个实施方案中，本发明的多肽与NLS直接连接。在另一个实施方案中，本发明的多肽通过柔性肽与NLS连接。

在一个特定的实施方案中，本发明的多肽与细胞穿透肽序列和NLS直接连接。

在一个实施方案中，NLS是在Myc序列中内源性出现的NLS之一，例如M1肽(PAAKRVKLD，SEQ ID NO：54)或M2肽(RQRRNELKRSF，SEQ ID NO：55)。

在另一个实施方案中，另外的NLS是指与在SEQ ID NO：1的多肽或所述多肽的功能等同变体中存在的内源NLS不同的NLS。

在一些优选的实施方案中，除了在本发明的多肽或其功能等同变体中存在的内源NLS之外，根据本发明的缀合物或融合蛋白还包含至少1种、至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种、至少7种、至少8种、至少9种、至少10种NLS。

在另一个特定的实施方案中，本发明的多肽通过第一柔性肽接头与细胞穿透肽序列连接，并通过第二柔性肽接头与NLS连接。

本文中使用的术语“柔性肽”、“间隔肽”或“接头肽”是指共价结合两个蛋白质或部分但其不是任一多肽的一部分的肽，这允许一个相对于另一个的移动，不会对蛋白质或部分的功能产生实质性的不利影响。因此，柔性接头不影响多肽序列的肿瘤抑制活性、细胞穿透肽的细胞穿透活性或NLS的核定位能力。

柔性肽包含至少一个氨基酸、至少两个氨基酸、至少三个氨基酸、至少四个氨基酸、至少五个氨基酸、至少六个氨基酸、至少七个氨基酸、至少八个氨基酸酸、至少九个氨基酸、至少10个氨基酸、至少12个氨基酸、至少14个氨基酸、至少16个氨基酸、至少18个氨基酸、至少20个氨基酸、至少25个氨基酸、至少30个氨基酸、至少35个氨基酸、至少40个氨基酸、至少45个氨基酸、至少50个氨基酸、至少60个氨基酸、至少70个氨基酸、至少80个氨基酸、至少90个氨基酸或约100个氨基酸。在一些实施方案中，柔性肽将允许一种蛋白质相对于另一种蛋白质运动以提高蛋白质的溶解性和/或改善其活性。合适的接头区包括多甘氨酸区，甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸残基组合的GPRRRR序列(SEQ ID NO：56)。

在一些实施方案中，本发明的融合蛋白可包含另外的化学部分，尤其包括荧光基团、生物素、聚乙二醇(PEG)、氨基酸类似物、非天然氨基酸、磷酸基团、糖基、放射性同位素标记和药物分子。在另一些实施方案中，异源多肽可包含一个或更多个化学反应性基团，尤其包括酮、醛、Cys残基和Lys残基。

在一个特定的实施方案中，本发明的缀合物或融合蛋白包含与所述缀合物或所述融合蛋白或所述多肽的变体的C端或N端结构域结合的标签。所述标签通常是肽或氨基酸序列，其可用于分离或纯化所述融合蛋白。因此，所述标签能够以高亲和力结合一种或更多种配体，例如亲和基质(例如色谱支持物或珠)的一种或更多种配体。所述标签的一个实例是组氨酸标签(His标签或HT)，例如包含6个组氨酸残基(His6或H6)的标签，其可以以高亲和力与镍(Ni2+)或钴(Co2+)的柱结合。His标签具有期望的特征，即它可以在使大多数蛋白质变性和破坏大多数蛋白质-蛋白质相互作用的条件下与其配体结合。因此，在诱饵(bait)参与的蛋白质-蛋白质相互作用的破坏之后，它可以用于去除用H6标记的诱饵蛋白质。

可用于分离或纯化融合蛋白的标签的另外的说明性非限制性实例包括Arg-标签，FLAG-标签(DYKDDDDK；SEQ ID NO：57)，Strep-标签(WSHPQFEK；SEQ ID NO：58)，能够被抗体识别的表位，例如c-myc-标签(被抗c-myc抗体识别)，HA标签(YPYDVPDYA；SEQ ID NO：59)，V5标签(GKPIPNPLLGLDST；SEQ ID NO：60)，SBP-标签，S-标签，钙调蛋白结合肽，纤维素结合域，几丁质结合域，谷胱甘肽S-转移酶-标签，麦芽糖结合蛋白，NusA，TrxA，DsbA，Avi-标签等(Terpe K.，Appl.Microbiol.Biotechnol.2003，60：523-525)，氨基酸序列例如AHGHRP(SEQ ID NO：61)或PIHDHDHPHLVIHSGMTCXXC(SEQ ID NO：62)，β-半乳糖苷酶等。

如果需要的话，可以使用标签分离或纯化所述融合蛋白。

本发明的多核苷酸、载体和宿主细胞

在另一方面，本发明涉及编码根据本发明的多肽或根据本发明的缀合物的多核苷酸。

术语“多核苷酸”、“核酸”和“核酸分子”可互换使用，指任何长度的聚合形式的核苷酸。多核苷酸可含有脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸和/或其类似物。核苷酸可以具有任何三维结构，并且可以执行已知或未知的任何功能。术语“多核苷酸”包括例如单链、双链和三螺旋分子，基因或基因片段、外显子、内含子、mRNA、tRNA、rRNA、核酶、cDNA、重组多核苷酸、分支多核苷酸、质粒、载体、任何序列的分离的DNA、任何序列的分离的RNA、核酸探针和引物。除天然核酸分子外，本发明的核酸分子还可包含经修饰的核酸分子。本文中使用的mRNA是指可在细胞中翻译的RNA。

在一些优选的实施方案中，本发明的多核苷酸是mRNA。mRNA可以经化学合成，可以通过体外转录获得，或者可以在靶细胞中体内合成。形成编码本发明的缀合物或融合蛋白的多核苷酸的核苷酸序列在用于其表达的相同的正确阅读框中。

另一方面，本发明涉及包含本发明多核苷酸的载体。

本文中使用的术语“载体”是指包含必需序列的核酸序列，以使得在细胞中转录和翻译所述序列后，产生由本发明的多核苷酸编码的多肽。所述序列与在目的宿主细胞中提供其自主复制的另外的区段有效连接。优选地，载体是表达载体，其被定义为除了宿主细胞中自主复制的区域之外还含有与本发明的核酸有效连接的区域并且能够增强根据本发明的核酸产物的表达的载体。本发明的载体可以通过本领域广泛已知的技术获得。

载体的实例包括但不限于病毒载体、裸DNA或RNA表达载体、质粒、黏粒或噬菌体载体、与阳离子缩合剂缔合的DNA或RNA表达载体、包封在脂质体中的DNA或RNA表达载体以及某些真核细胞，例如生产者细胞。包含本发明多核苷酸的合适载体是衍生自原核生物中表达载体的载体，例如pUC18、pUC19、pBluescript及其衍生物、mp18、mp19、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体和“穿梭”载体如pSA3和pAT28，酵母中的表达载体，例如2微米质粒类型的载体、整合质粒、YEP载体、着丝粒质粒及类似物，昆虫细胞中的表达载体例如pAC系列和pVL系列的载体，植物中的表达载体例如系列pIBI、pEarleyGate、pAVA、pCAMBIA、pGSA、pGWB、pMDC、pMY、pORE系列及类似物的载体，以及在基于病毒载体(腺病毒、与腺病毒相关的病毒以及逆转录病毒和特别是慢病毒)的高等真核细胞中的表达载体以及非病毒载体例如pSilencer 4.1-CMV(Ambion)、pcDNA3、pcDNA3.1/hyg、pHCMV/Zeo、pCR3.1、pEFl/His、pIND/GS、pRc/HCMV2、pSV40/Zeo2、pTRACER-HCMV、pUB6/V5-His、pVAXl、pZeoSV2、pCI、pSVL、pKSV-10、pBPV-1、pML2d和pTDT1。在一个优选的实施方案中，本发明的多核苷酸包含在选自由pEGFP或pBabe逆转录病毒载体和pTRIPZ或pSLIK慢病毒载体组成的载体中。

本发明的载体可用于转化、转染或感染可被所述载体转化、转染或感染的细胞。所述细胞可以是原核的或真核的。

载体优选地包含本发明的多核苷酸，其可操作地与调节本发明多核苷酸的表达的序列结合。用于本发明的调节序列可以是核启动子，或者，可替选地增强子序列和/或提高异源核酸序列表达的其他调节序列。原则上，任何启动子都可用于本发明，只要所述启动子与其中待表达多核苷酸的细胞相容即可。因此，适合于实现本发明的启动子包括但不必限于：组成型启动子，例如真核病毒基因组的衍生物，例如多瘤病毒、腺病毒、SV40、CMV、禽类肉瘤病毒、乙型肝炎病毒、金属硫蛋白基因启动子、单纯疱疹病毒胸苷激酶基因启动子、逆转录病毒的LTR区、免疫球蛋白基因启动子、肌动蛋白基因启动子、EF-1α基因启动子；以及其中蛋白质表达取决于添加分子或外源信号的诱导型启动子，例如四环素系统、NFκB/UV光系统、Cre/Lox系统和热休克基因启动子、WO/2006/135436中描述的可调节RNA聚合酶II启动子和组织特异性启动子。

在另一方面，本发明涉及宿主细胞，其包含本发明的多肽、本发明的缀合物、本发明的多核苷酸或本发明的载体。

适用于本发明的细胞包括但不限于哺乳动物、植物、昆虫、真菌和细菌的细胞。细菌细胞包括但不限于来自革兰氏阳性细菌例如来自芽孢杆菌属(Bacillus)、链霉菌属(Streptomyces)和葡萄球菌属(Staphylococcus)的物种的细胞，以及来自革兰氏阴性细菌的细胞，例如来自埃希氏菌属(Escherichia)和假单胞菌属(Pseudomonas)的细胞。真菌细胞优选地包括酵母细胞，例如酵母属(Saccharomyces)、巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)和多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)。昆虫细胞包括但不限于果蝇(Drosophila)细胞和Sf9细胞。植物细胞尤其包括作物植物细胞、例如谷类、药用植物或观赏植物或来自球茎。适用于本发明的哺乳动物细胞包括上皮细胞系(猪等)、骨肉瘤细胞系(人等)、神经母细胞瘤细胞系(人等)、上皮癌(人等)、胶质细胞(鼠等)、肝细胞系(来自猴等)、CHO(中国仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary))细胞、COS细胞、BHK细胞、HeLa、911、AT1080、A549、293或PER.C6细胞、人NTERA-2 ECC细胞、来自mESC系的D3细胞、非人胚胎干细胞、NIH3T3、293T、REH和MCF-7细胞以及hMSC细胞。

之前描述的所有术语和实施方案同样适用于本发明的该方面。

本发明的药物组合物

在另一方面，本发明涉及药物组合物，其包含药学有效量的根据本发明的多肽或所述多肽的功能等同变体、根据本发明的缀合物、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体或根据本发明的宿主细胞，和可药用赋形剂。

当在本发明中使用时，表述“药物组合物”涉及适于将预定剂量的一种或数种治疗有用药剂施用于其中细胞分裂不受控制的细胞、细胞组、器官、组织或动物、例如癌症的制剂。

如本文所用的，表述“药学有效量”被理解为能够提供治疗效果的量，并且可由本领域技术人员通过常用手段确定。可在根据本发明的药物组合物中组合的本发明多肽或其功能等同变体、本发明缀合物、多核苷酸、载体或宿主细胞或抗肿瘤化合物的量将根据对象和具体施用模式而变化。本领域技术人员将理解，剂量也可在来自Goodman和Goldman的ThePharmacological Basis of Therapeutics，第9版(1996)，附录II，第1707-1711页和来自Goodman和Goldman的The Pharmacological Basis of Therapeutics，第10版(2001)，附录II，第475-493页的指导下确定。

药物组合物中活性成分的合适剂量将取决于待治疗的癌症类型、疾病的严重程度和进程、组合物是否施用用于预防或治疗目的、先前的治疗、患者的临床病史和针对肽或多肽的应答，以及主治医师的判断。本发明多肽或其功能等同变体、本发明缀合物、多核苷酸、载体或宿主细胞的量适合一次或在一系列治疗中施用于患者。根据疾病的类型和严重程度，合适的剂量水平一般为每天每kg患者体重约0.01至500mg，其可以以单剂量或多个剂量施用。优选地，剂量水平为每天约0.1至约250mg/kg，更优选地每天约0.5至约100mg/kg。合适的剂量水平可以是每天约0.01至250mg/kg、每天约0.05至100mg/kg、或每天约0.1至50mg/kg。在该范围内，剂量可以是每天0.05至0.5、0.5至5、或5至50mg/kg。对于经口施用，组合物优选地以含有1.0至1000毫克活性成分、特别是1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克活性成分的片剂形式提供，以用于对待治疗患者的剂量进行对症调整。化合物可以以每天1至4次、优选每天一次或两次的方案施用。

本发明的药物组合物还含有一种或数种另外的可药用赋形剂。“可药用赋形剂”应被理解为治疗上无活性的物质，其被认为用于并入活性成分并且从药理学/毒理学观点来看对于患者是可接受的且从物理/化学观点来看在组成、制剂、稳定性、患者接受和生物利用度方面对于制造其的药物化学家是可接受的。赋形剂或载体还包括用于改善药物组合物中活性成分的递送和有效性的任何物质。可药用载体的一些实例包括以下一种或更多种：水、盐水、磷酸缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等，及其组合。在许多情况下，优选地在组合物中包含等张剂，例如糖，多元醇如甘露醇、山梨醇，或氯化钠。可药用载体还可包含少量辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其增强融合蛋白或形成药物组合物一部分的组合物的货架期或有效性。合适载体的一些实例在文献中是公知的(参见例如Remington′sPharmaceutical Sciences，第19版，Mack Publishing Company，Easton，PA，1995)。载体的实例不受限制地是一系列糖，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓醇和麦芽糖醇；一系列淀粉，例如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉和马铃薯淀粉；一系列纤维素，例如纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和羟丙基甲基纤维素；以及一系列填充剂，例如明胶和聚乙烯吡咯烷酮。在一些情况下，可以添加崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、藻酸或藻酸钠。

可药用赋形剂的数量和性质取决于期望的剂型。可药用赋形剂是本领域技术人员已知的(Faulǐ y Trillo C.(1993)“Tratado de Farmacia Galénica”，Luzán 5，S.A.Ediciones，Madrid)。所述组合物可通过现有技术中已知的常规方法制备(“Remington：The Science and Practice of Pharmacy”，第20版(2003)Genaro A.R.，编辑，Lippincott Williams&Wilkins，Philadelphia，US)。

对于包含作为核酸分子的药剂的药物组合物，核酸分子可存在于本领域普通技术人员已知的多种递送系统中的任一种内，包括核酸，以及细菌、病毒和哺乳动物表达系统，例如如本文提供的重组表达构建体。用于将DNA并入这样的表达系统的技术是本领域普通技术人员公知的。DNA也可以是“裸露的”，如例如Ulmer等，Science 259：1745-49，1993中所述和Cohen，Science 259：1691-1692，1993综述的。裸DNA的摄取可通过将DNA包被到被有效地转运到细胞中的生物可降解珠上来提高。

可根据本领域描述的数种方法中的任一种将核酸分子递送到细胞中(参见例如Akhtar等，Trends Cell Bio.2：139(1992)；Delivery Strategies for AntisenseOligonucleotide Therapeutics，编辑Akhtar，1995；Maurer等，Mol.Membr.Biol.16：129-40(1999)；Hofland和Huang，Handb.Exp.Pharmacol.137：165-92(1999)；Lee等，ACSSymp.Ser.752：184-92(2000)；美国专利No.6,395,713；国际专利申请公开No.WO 94/02595)；Selbo等，Int.J.Cancer 87：853-59(2000)；Selbo等，Tumour Biol.23：103-12(2002)；美国专利申请公开No.2001/0007666和2003/077829)。本领域技术人员已知的这样的递送方法包括但不限于包封在脂质体中，通过离子导入疗法，或通过并入其他载剂中例如生物可降解聚合物、水凝胶、环糊精(参见例如Gonzalez等，Bioconjug.Chem.10：1068-74(1999)；Wang等，国际申请公开No.WO 03/47518和WO 03/46185)、聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)和PLCA微球(也可用于递送肽和多肽以及其他物质)(参见例如美国专利No.6,447,796；美国专利申请公开No.2002/130430)、生物可降解纳米胶囊和生物黏附性微球，或通过蛋白质载体(国际申请公开No.WO 00/53722)。在另一个实施方案中，用于改变(抑制或增强)免疫细胞中免疫应答和用于治疗免疫疾病或病症的核酸分子也可用聚乙烯亚胺及其衍生物配制或与之复合，所述衍生物例如聚乙烯亚胺-聚乙二醇-N-乙酰半乳糖胺(PEI-PEG-GAL)或聚乙烯亚胺-聚乙二醇-三-N-乙酰半乳糖胺(PEI-PEG-triGAL)衍生物(还参见例如美国专利申请公开No.2003/0077829)。

在一个优选的实施方案中，根据本发明的药物组合物或药物组合还一起或单独地包含抗肿瘤剂。

如本文所用的，“抗肿瘤剂”被理解为治疗肿瘤或防止其形成的所述生物或化学化合物。在一个优选的实施方案中，所述抗肿瘤剂选自细胞毒性剂、抗血管生成剂、抗转移剂和抗增殖剂。

如在本发明中所使用的，术语“细胞毒性剂”是指这样的药剂：其能够促进细胞死亡并且具有降低生长、停止生长或破坏细胞且特别是迅速增殖细胞且更特别地肿瘤细胞的能力。细胞死亡可由任何机制例如凋亡引起，但不限于此原因，通过代谢抑制、对细胞骨架组织的干扰或DNA的化学修饰。术语细胞毒性剂包含任何化学治疗剂，包括小有机分子、肽、寡核苷酸等；毒素；酶；细胞因子；放射性同位素或放射治疗剂。

“抗血管生成剂”被理解为抑制或降低新血管形成、即血管生成的化学或生物物质。

可与根据本发明第一方面的多肽或根据本发明第二方面的融合蛋白一起使用的抗血管生成剂包括但不限于选自以下的抗血管生成剂：紫杉醇、2-甲氧基雌二醇、普啉司他、巴马司他、BAY 12-9566、羧酰胺基三唑、CC-1088、右美沙芬乙酸、二甲基咕吨酮乙酸(dimethylxanthenone acetic acid)、内皮抑素、IM-862、马马司他、青霉胺、PTK787/ZK222584、RPI.4610、乳酸角鲨胺、SU5416、沙利度胺、考布他汀、他莫昔芬、COL-3、新伐司他、BMS-275291、SU6668、抗VEGF抗体、Medi-522(Vitaxin II)、CAI、白介素12、IM862、阿米洛利、血管抑素、Kl-3血管抑素、Kl-5血管抑素、卡托普利、DL-α-二氟甲基鸟氨酸、DL-α-二氟甲基鸟氨酸HCl、内皮抑素、烟曲霉素、除莠霉素A、4-羟基苯基视黄酰胺、胡桃醌、层粘连蛋白、层粘连蛋白六肽、层粘连蛋白五肽、薰草菌素A、甲羟孕酮、米诺环素、胎盘核糖核酸酶抑制剂、苏拉明、血小板应答蛋白、针对促血管生成因子的抗体(例如，阿瓦斯汀(Avastin)、爱必妥(Erbitux)、维克替比(Vectibix)、赫赛汀(Herceptin))；促血管生成因子的低分子量酪氨酸激酶抑制剂(例如Tarceva、多吉美(Nexavar)、索坦(Sutent)、易瑞沙(Iressa))；mTOR抑制剂(例如驮瑞塞尔(Torisel))；干扰素α、β和γ，IL-12、基质金属蛋白酶抑制剂(例如，COL3、马马司他、巴马司他)；ZD6474、SU11248、vitaxin；PDGFR抑制剂(例如格列卫(Gleevec))；NM3和2-ME2；环肽，例如西仑吉肽。

“抗转移剂”被理解为抑制或降低转移的化学或生物物质，转移即致癌细胞的距离传播，基本上通过淋巴或血流进行距离传播，并且新肿瘤在所述转移的目的部位生长。

“抗增殖剂”被理解为能够防止或抑制肿瘤形成或生长的化学或生物物质。抗增殖剂包括但不限于：(i)抗代谢物，例如叶酸抗代谢物(氨基蝶呤、二甲叶酸、甲氨蝶呤、依达曲沙、曲麦克特、洛拉曲塞、洛美曲索、培美曲塞、雷替曲塞、吡曲克辛、蝶罗呤、甲酰四氢叶酸、10-炔丙基-5，8-双去氮杂叶酸酯(PDDF，CB3717))、嘌呤类似物(克拉屈滨、氯法拉滨、氟达拉滨、巯嘌呤、喷司他丁、硫鸟嘌呤)和嘧啶类似物(卡培他滨、阿糖胞苷或ara-C、地西他滨、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、去氧氟尿苷、氟尿嘧啶和吉西他滨)；(ii)天然产物，例如抗肿瘤抗生素和有丝分裂抑制剂，例如长春花生物碱，例如长春地辛、长春新碱、长春花碱、长春瑞滨；紫杉烷类，例如紫杉醇(Taxol^TM)、多西他赛(Taxotere^TM)；秋水仙碱(NSC 757)、硫代秋水仙碱(NSC 361792)、秋水仙碱衍生物(例如NSC 33410)和别秋水仙碱(NSC406042)；软海绵素B(NSC 609395)；多拉司他汀10(NSC 376128)；美登素(NSC 153858)；根霉素(NSC332598)；埃博霉素A、埃博霉素B；圆皮海绵内酯；雌莫司汀；诺考达唑；(iii)激素及其拮抗剂，例如他莫昔芬、托瑞米芬、阿那曲唑、阿佐昔芬、拉索昔芬、雷洛昔芬、萘福昔定、氟维司群、氨鲁米特、睾内酯、阿那西坦、依西美坦、法倔唑、福美坦、来曲唑、戈舍瑞林、亮丙瑞林或亮脯利特、布舍瑞林、组氨瑞林、甲地孕酮和氟甲睾酮；(iv)生物剂，例如病毒载体、干扰素α和白介素；(v)基于铂的化合物，例如卡铂、顺铂[顺式-二氨二氯铂，(CDDP)]、奥沙利铂、异丙铂、奈达铂、四硝酸三铂、四铂、沙铂(JM216)、JM118[顺式氨合二氯(II)]、JM149[顺式氨合二氯(环己胺)反式二羟基铂(IV)]、JM335[反式氨合二氯二羟基铂(IV)]、反铂、ZD0473、顺式，反式，顺式-Pt(NH3)(C6H11NH2)(OOCC3H7)2Cl、malanate-1，2-二氨基环己烷铂(II)、5-磺基水杨酸酯-反式-(1，2-二氨基环己烷)铂(II)(SSP)、聚-[(反式-1，2-二氨基环己烷)铂]-羧基amilose(POLY-PLAT)和4-羟基-磺酰基苯基乙酸酯(反式-1，2-二氨基环己烷)铂(II)(SAP)等；和(vi)DNA烷基化药物，例如氮芥、亚硝基脲、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸盐和三氮烯类，包括但不限于环磷酰胺(Cytoxan^TM)、白消安、英丙舒凡、哌泊舒凡、哌泊溴烷、美法仑(L-溶肉瘤素)、苯丁酸氮芥、甲基二氯乙基胺或莫司汀(mustine)、乌拉莫司汀或尿嘧啶氮芥、新恩比兴、苯芥胆甾醇、曲洛磷胺、异环磷酰胺、卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、氯脲菌素、福莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀(ranimnustine)、司莫司汀(甲基-CCNU)、链佐星、噻替派、三亚乙基密胺、三亚乙基硫代磷酰胺、丙卡巴肼、六甲蜜胺、达卡巴嗪、米托唑胺和替莫唑胺。

在含有抗肿瘤剂的根据本发明的药物组合物或组合的情况下，该组合物可以作为单一制剂提供(例如，作为包含固定量的每一种组分的片剂或胶囊剂)；或者在另一方面，可以作为单独的制剂提供以随后组合用于联合、依次或分开施用。本发明的组合物或组合还包括作为成套药盒的制剂，其中组分分开配制但包装在同一容器中。本领域技术人员将理解，在根据本发明的第二药物组合物的情况下，不同组分的配制可以是类似的，换句话说，类似地配制(在片剂或丸剂中)，这允许其通过相同途径施用。在本发明的不同组分分开配制的情况下，两种组分可在泡罩(blister)中提供。每个泡罩都含有白天必须服用的药物。如果药物必须每天施用数次，则对应于每次施用的药物可放置在泡罩的不同部分中，优选地在泡罩的每个部分中记录其应当施用的那天的时间。或者，本发明组合物的组分可以不同地配制，以使得不同组分不同地施用。因此，可以的是，第一组分被配制成片剂或胶囊剂用于其经口施用，并且第二组分被配制成用于其静脉内施用，反之亦然。作为在根据本发明的第二药物组合物中使用的组合物的一部分的组分之间的比可由技术人员根据在每种特定情况下使用的抗肿瘤剂以及期望适应证来调节。因此，本发明设想了这样的组合物，其中两种组分的量之间的比可以为50∶1至1∶50，特别是20∶1至1∶20、1∶10至10∶1、或5∶1至1∶5。

本发明的药物组合物或组合可通过任何类型的合适途径施用，例如通过经口途径、表面途径、通过吸入或肠胃外途径，以使得包含配制期望剂型所需的可药用赋形剂。所述药物组合物的优选施用途径是静脉内途径。

“经口途径”被理解为药物组合物在吞咽之后并入生物体中。在一个具体实施方案中，本发明的药物组合物可以是适于通过经口途径施用其的剂型，无论其是固体还是液体。适于通过经口途径施用其的剂型可以是片剂、胶囊剂、糖浆剂或溶液，并且可含有本领域已知的任何常规赋形剂，例如黏合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸；用于压制的润滑剂，例如硬脂酸镁；崩解剂，例如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉的乙醇酸钠或微晶纤维素；或可药用润湿剂，例如十二烷基硫酸钠。固体经口组合物可通过常规的混合、填充或压制方法制备。可使用重复混合操作来将活性剂完全分布在使用大量填充剂的这些组合物中。所述操作在本领域中是常规的。片剂可例如通过湿法或干法制粒来制备，并且任选地根据常规药学实践中已知的方法对其进行包衣，特别是用肠溶包衣对其进行包衣。

在另一方面，“表面途径”被理解为通过非全身途径施用，并且包括将本发明的药物组合物外部施加于表皮上、口腔中和将所述组合物滴入耳、眼和鼻中，并且其中其不会显著进入血流。“全身途径”被理解为通过经口途径、静脉内途径、腹膜内途径和肌内途径施用。“吸入”被理解为通过鼻内途径和通过经口吸入施用。适于所述施用的剂型，例如气雾剂或计量吸入器中的制剂可通过常规技术制备。在一个实施方案中，施用途径是鼻内途径。

如本文所使用的，术语“肠胃外”包括通过静脉内途径、腹膜内途径、肌内途径或皮下途径施用。通常优选肠胃外施用的皮下、肌内和静脉内剂型。

在一个实施方案中，本发明的药物组合物可适于其肠胃外施用，例如合适剂量单位形式的无菌溶液、混悬剂或冻干产品。适于其可注射用途的药物组合物包括无菌水溶液(当其可溶于水时)或分散体，和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。对于其通过静脉内途径施用，一些合适的载体包括用磷酸盐缓冲的盐水溶液(PBS)。在所有情况下，组合物必须是无菌的，并且必须是流体，以至于能够容易注射。其必须在制备和储存条件下稳定，并且必须被保护免受微生物例如细菌和真菌的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、可药用多元醇如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇、及其合适的混合物。可维持适当的流动性，例如通过使用包衣如卵磷脂、在分散体的情况下通过维持所需的颗粒尺寸和通过使用表面活性剂。微生物作用的防止可通过多种抗菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、酚、抗坏血酸、硫柳汞等来实现。在大多数情况下，可优选地在组合物中包含等张剂，例如糖；多元醇，例如甘露醇、山梨醇；或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可通过包含延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来实现。

可注射无菌溶液可如下制备：将所需量的活性化合物与前述成分中之一或组合(如果需要的话)并入合适的溶剂中，然后通过经由无菌膜过滤来进行灭菌。一般来说，分散体通过将活性化合物并入无菌载剂中来制备，所述无菌载剂含有基础分散介质和来自前面列出的那些的其余所需成分。在用于制备可注射无菌溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冻干，其由预先过滤的无菌溶液产生具有活性成分加上任何期望另外成分的粉末。

本发明的药物组合物可适当地通过脉冲输注来施用，例如，用递减剂量的组合物来进行。优选地，剂量通过注射、更优选静脉内或皮下注射来施用，这部分取决于施用是急性还是慢性的。

在一个实施方案中，本发明的第一或第二药物组合物用载体制备，所述载体将保护所述多肽免于从体内迅速消除，例如控制释放制剂，包括植入物和微囊化施用系统。可使用生物可降解的生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备所述制剂的方法对于本领域技术人员是清楚的。这些材料也可在Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals，Inc.商购获得。

持续释放组合物还包括抗体晶体悬浮于合适配制物中的制剂，所述配制物可使晶体维持悬浮。这些制剂当其通过皮下或腹膜内途径注射时可产生持续释放作用。另一些组合物还包括捕获在脂质体中的抗体。含有这样的抗体的脂质体通过已知方法制备，例如Epstein等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，(1985)82：3688-3692；Hwang等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，(1980)77：4030-4034；EP 52,322；EP 36,676；EP 88,046；EP143,949。

尽管本发明多肽以及含有本发明多肽的缀合物和融合蛋白能够跨越生物膜易位的事实，技术人员将理解，将包含本发明多肽的缀合物或融合蛋白配制在纳米颗粒中也可以是常规的。

如本文所使用的，术语“纳米颗粒”是指尺寸在1至1,000nm范围内的任何材料。在一些实施方案中，纳米颗粒的尺寸在2至200nm范围内，优选在2至150nm范围内，并且甚至更优选在2至100nm范围内。

纳米颗粒可有助于保留多肽在生物流体中的完整性，直到其到达靶器官。此外，在包含抗肿瘤剂的组合物的情况下，组合物的包封可降低由抗肿瘤剂引起的继发效应。最后，还可对纳米颗粒进行修饰以包含允许将纳米颗粒靶向目标器官的部分。

因此，在另一个实施方案中，本发明的药物组合物包含形成纳米颗粒的一部分的根据本发明的缀合物、融合蛋白和组合物。

可在本发明的背景下使用的合适纳米颗粒包括以下纳米级材料，例如基于脂质的纳米颗粒、超顺磁性纳米颗粒、纳米壳、半导体纳米晶体、量子点、基于聚合物的纳米颗粒、基于硅的纳米颗粒、基于二氧化硅的纳米颗粒、基于金属的纳米颗粒、富勒烯和纳米管。

靶向递送可通过添加配体来实现，而不损害纳米颗粒递送其多肽有效载荷的能力。预期，这将使得能够递送至特定细胞、组织和器官。基于配体的递送系统的靶向特异性基于配体受体在不同细胞类型上的分布。靶向配体可与纳米颗粒非共价或共价缔合，并且可通过本文讨论的多种方法与纳米颗粒缀合。

可用于靶向纳米颗粒的蛋白质或肽的一些实例包括转铁蛋白、乳铁蛋白、TGF-β、神经生长因子、白蛋白、HIV Tat肽、RGD肽和胰岛素，等。

应理解，将本发明产品配制在纳米颗粒中不旨在或不仅仅旨在促进产品进入细胞内部，而且为了保护产品免于降解和/或用于促进纳米颗粒靶向目标器官。

本发明的药物组合物适于施用到任何类型的哺乳动物、优选人中。

之前描述的所有术语和实施方案同样适用于本发明的该方面。

医疗用途

在另一方面，本发明涉及根据本发明的多肽或所述多肽的功能等同变体、根据本发明的缀合物、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体、根据本发明的宿主细胞或根据本发明的药物组合物，其用于医药。

在另一方面，本发明涉及根据本发明的多肽或所述多肽的功能等同变体、根据本发明的缀合物、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体、根据本发明的宿主细胞或根据本发明的药物组合物，其用于预防和/或治疗癌症。

或者，本发明涉及用于预防和/或治疗癌症的方法，其包括向有此需要的对象施用治疗有效量的根据本发明的多肽或所述多肽的功能等同变体、根据本发明的缀合物、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体、根据本发明的宿主细胞或根据本发明的药物组合物。

或者，本发明涉及根据本发明的多肽或所述多肽的功能等同变体、根据本发明的缀合物、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体、根据本发明的宿主细胞或根据本发明的药物组合物用于制备用于预防和/或治疗癌症的药物的用途。

“预防”被理解为在疾病的初始或早期阶段施用化合物，或者也防止其发生。

术语“治疗”用于表示在临床体征出现之前或之后施用化合物以控制疾病的进展。控制疾病的进展被理解为有益或期望的临床结果，其包括但不限于减轻症状、缩短疾病持续时间、稳定病理状况(特别是避免附加的损伤)、延迟疾病进展、改善病理状况和缓解(部分和完全)。与如果不应用治疗的预期存活相比，疾病进展的控制还涉及延长存活。

如本文所使用的，“对象”包括患有癌症或表现出癌症或症状，或者处于患有癌症或表现出癌症症状风险之中的任何动物。合适的对象(患者)包括实验室动物(例如小鼠、大鼠、兔或豚鼠)、农场动物、和家养动物或宠物(例如猫或狗)。包括非人灵长类动物，并且优选人患者。

术语“癌症”是指以以下为特征的疾病：不受控制的细胞分裂(或存活或凋亡抗性提高)、所述细胞能够侵入其他邻近组织(侵袭)或扩散到其他其中细胞在正常情况下不通过淋巴管和血管定位(转移)的身体区域。根据肿瘤是否可通过侵袭和转移扩散，将其分类为良性或恶性的：良性肿瘤是不能通过侵袭或转移扩散的肿瘤，即其仅局部生长；而恶性肿瘤是能够通过侵袭和转移扩散的肿瘤。根据本发明的方法可用于治疗局部和恶性肿瘤。如本文所使用的，术语癌症包括但不限于以下类型的癌症：乳腺癌；胆管癌；膀胱癌；脑癌，包括胶质母细胞瘤和髓母细胞瘤；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠癌；子宫内膜癌；食管癌；胃癌；血液赘生物，包括急性淋巴细胞和髓细胞性白血病；T细胞急性淋巴细胞白血病/淋巴瘤；毛细胞白血病；慢性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤；AIDS相关白血病和成体T细胞白血病/淋巴瘤；上皮内赘生物，包括鲍恩病(Bowen’s disease)和佩吉特病(Paget’s disease)；肝癌；肺癌；淋巴瘤，包括霍奇金病(Hodgkin’s disease)和淋巴细胞淋巴瘤；神经母细胞瘤；口腔癌，包括鳞状细胞癌；卵巢癌，包括由上皮细胞、基质细胞、生殖细胞和间充质细胞产生的那些；胰腺癌；前列腺癌；直肠癌；肉瘤，包括平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤；皮肤癌，包括黑素瘤、梅克尔细胞癌(Merkel cell carcinoma)、卡波西肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、基底细胞癌和鳞状细胞癌；睾丸癌，包括生殖细胞瘤，例如精原细胞瘤、非精原细胞瘤(畸胎瘤、绒毛膜癌)、间质瘤和生殖细胞肿瘤；甲状腺癌，包括甲状腺腺癌和髓样癌；和肾癌，包括腺癌和威尔姆斯瘤(Wilms tumor)。其他癌症将是本领域普通技术人员已知的。在一个优选的实施方案中，治疗的癌症是肺癌，优选肺腺癌，更优选KRas驱动的肺腺癌。

在一个优选的实施方案中，癌症是实体瘤。

本发明化合物和癌症类型的所有组合都包括在本发明中。

在一个优选的实施方案中，癌症选自胶质母细胞瘤和非小细胞肺癌。

“胶质母细胞瘤”，也称为成胶质细胞瘤和IV级星形细胞瘤，是开始于脑中的最常见且最具侵袭性的癌症。

如本文使用的，术语“NSCLC”或“非小细胞肺癌”是指由于其预后和管理大致相同而根据世界卫生组织(World Health Organization)/国际肺癌研究协会(InternationalAssociation for the Study of Lung Cancer)的组织学分类分组在一起的一组异质性疾病(Travis WD等，Histological typing of lung and pleural tumours.第3版Berlin：Springer-Verlag，1999)：

1.鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)，占NSCLC的30％至40％，开始于较大的呼吸管，但生长较慢，这意味着这些肿瘤的尺寸在诊断时不同。

2.腺癌是NSCLC的最常见亚型，占NSCLC的50％至60％，其开始于肺的气体交换表面附近并且包括亚型支气管肺泡癌，其可能对治疗具有不同响应。

3.大细胞癌是一种快速生长的形式，其生长在肺表面附近。其主要是排除性诊断，并且当进行更多研究时，通常将其重新分类为鳞状细胞癌或腺癌。

4.腺鳞癌是一种含有以下两种类型细胞的癌症类型：鳞状细胞(衬于某些器官的细扁平细胞)和腺体样细胞。

5.具有多形性、肉瘤样或肉瘤性成分的癌。这是一组罕见的肿瘤，反映了组织学异质性以及上皮和间充质分化的连续体。

6.类癌肿瘤是一种生长缓慢的神经内分泌肺肿瘤，并且开始于能够响应于由神经系统提供的刺激而释放激素的细胞中。

7.唾液腺类型的癌症开始于位于肺大气道内的唾液腺细胞中。

8.未分类的癌包括不符合上述任何肺癌类别的癌症。

本发明还涉及：

[1].多肽，其包含其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的多肽，或所述多肽的功能等同变体。

[2].根据[1]所述的多肽，其中所述多肽由其中SEQ ID NO：1的第89位残基X不是半胱氨酸的SEQ ID NO：1的多肽组成，或由所述多肽的功能等同变体组成。

[3].根据[1]或[2]所述的多肽，其中SEQ ID NO：1的第89位残基X是丝氨酸。

[4].根据[3]所述的多肽，其由SEQ ID NO：4组成。

[5].缀合物，其包含：

a.根据[1]至[4]中任一项所述的多肽或所述多肽的功能等同变体；和

b.促进细胞摄取所述多肽或所述多肽的功能等同变体的化学部分。

[6].根据[5]所述的缀合物，其中促进细胞摄取所述多肽或所述多肽的功能等同变体的所述化学部分是细胞穿透肽序列，并且其中所述细胞穿透肽序列与所述多肽或所述多肽的功能等同变体形成融合蛋白。

[7].根据[6]所述的缀合物，其中所述细胞穿透肽序列选自GRKKRRQRRR(SEQ IDNO：38)和RRRRRRLR(SEQ ID NO：39)。

[8].根据[5]至[7]中任一项所述的缀合物，其还进一步包含核定位信号，特别地所述核定位信号选自PKKKRKV(SEQ ID NO：6)、PAAKRVKLD(SEQ ID NO：54)和KRPAATKKAGQAKKKK(SEQ ID NO：7)。

[9].多核苷酸，其编码根据[1]至[4]中任一项所述的多肽或根据[5]至[8]中任一项所述的缀合物。

[10].载体，其包含根据[9]所述的多核苷酸。

[11].宿主细胞，其包含根据[1]至[4]中任一项所述的多肽、根据[5]至[8]中任一项所述的缀合物、根据[9]所述的多核苷酸或根据[10]所述的载体。

[12].药物组合物，其包含药学有效量的根据[1]至[4]中任一项所述的多肽或所述多肽的功能等同变体、根据[5]至[8]中任一项所述的缀合物、根据[9]所述的多核苷酸、根据[10]所述的载体或根据[11]所述的宿主细胞，以及可药用赋形剂。

[13].根据[1]至[4]中任一项所述的多肽或所述多肽的功能等同变体、根据[5]至[8]中任一项所述的缀合物、根据[9]所述的多核苷酸、根据[10]所述的载体、根据[11]所述的宿主细胞或根据[12]所述的药物组合物，其用于医药。

[14].根据[1]至[4]中任一项所述的多肽或其功能等同变体、根据[5]至[8]中任一项所述的缀合物、根据[9]所述的多核苷酸、根据[10]所述的载体、根据[11]所述的宿主细胞或根据[12]所述的药物组合物，其用于预防和/或治疗癌症。

[15].根据[14]应用的所述多肽或其功能等同变体、所述缀合物、所述多核苷酸、所述载体、所述宿主细胞或所述药物组合物，其中所述癌症选自胶质母细胞瘤和非小细胞肺癌。

之前描述的所有术语和实施方案同样适用于本发明的该方面。

***

下面通过以下实施例详述本发明，这些实施例仅是举例说明性的，并且决不是对本发明范围进行限制。

实施例

材料和方法

Omomyc和OmoCS mRNA的细胞转染

Omomyc和OmoCS突变体的mRNA分别以0.782mg/mL和0.876mg/mL的浓度购自Trilink Biotechnologies(ARCA加帽并用5-甲基-C和假-U修饰完全替换)。将Omomyc或OmoCS DNA序列引入载体中的T7RNA聚合酶启动子下游，并且poly(T)尾位于3p末端处。使用T7RNA聚合酶通过体外转录产生5-甲基胞嘧啶-5’-三磷酸和假尿苷-5’-三磷酸修饰的RNA。还使用[3’-0-Me-m7G(5’)ppp(5′)G]RNA帽结构类似物对RNA进行加帽。使用DNA酶降解模板DNA载体，并通过磷酸酶处理除去残留的三磷酸。然后，纯化RNA产物，并分别通过琼脂糖凝胶电泳和Nanodrop评估完整性和量。将RNA储存在-80℃。

lipofectamine MessengerMAX转染试剂购自Thermo Fisher Scientific。将A549和U87细胞系分别以每孔500和1000个细胞接种在96孔板中。将细胞在补充有10％胎牛血清(FBS)和1％L-谷氨酰胺的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)(完全培养基)中进行培养。24小时后，将细胞用lipofectamine-mRNA复合物转染。将每2μL Lipofectamine的3μg mRNA在无血清培养基中单独稀释并孵育10分钟。然后，将mRNA和Lipofectamine稀释液混合并孵育5分钟以使复合物形成。用无血清培养基洗涤孔两次。在100μL总无血清培养基中从每孔1μgmRNA开始至0.0625μg连续稀释细胞。对于每种浓度，将对照细胞仅用lipofectamine处理，并对每种条件使用三次重复。在转染4小时之后，从孔中除去无血清培养基和mRNA-lipofectamine复合物，并用完全培养基替换。将细胞孵育3天。然后，使用来自Promega的CellTiter-Blue评估生存力。计算每种条件下相对于未经处理孔的吸光度。通过t检验计算统计学显著性。

OmoCS和OmoCA mRNA的细胞转染

OmoCS和OmoCA突变体的mRNA购自Trilink Biotechnologies(ARCA加帽并用5-甲基-C和假-U修饰完全替换)。使用Nanodrop确定OmoCS和OmoCA的mRNA浓度分别为0.845mg/mL和0.832mg/mL。lipofectamine MessengerMAX转染试剂购自Thermo FisherScientific。将A549细胞以每孔500个细胞接种于96孔板中。将细胞在补充有10％胎牛血清(FBS)和1％L-谷氨酰胺的Roswell Park Memorial Institute(RPMI)培养基(完全培养基)中进行培养。24小时后，将细胞用lipofectamine-mRNA复合物转染。将每1.5μLlipofectamine的2μg mRNA在无血清培养基中单独稀释并孵育10分钟。然后，将mRNNA和lipofectamine稀释液混合并孵育5分钟以使复合物形成。用无血清培养基洗涤孔两次。在50μL总无血清培养基中以每孔1μg mRNA(200nM)开始用连续1∶2稀释液处理细胞。对于每种浓度，细胞不进行处理(未经处理)或仅用lipofectamine进行处理(仅Lipo)作为对照孔。对每种条件进行三次重复。在转染4小时之后，从孔中除去无血清培养基和mRNA-lipofectamine复合物，并用完全RPMI培养基替换。将细胞孵育3天。此时，使用结晶紫染色评估细胞密度。计算每种浓度下相对于未经处理孔的吸光度。

实施例1

令人惊讶的是，在低浓度下，与原始Omomyc序列相比，OmoCS突变体显示出更高的细胞生长抑制(图1)。与原始Omomyc序列相比的这种提高的效力可至少部分地通过以下假设来解释：Omomyc同源二聚体的氧化界面半胱氨酸将阻止Omomyc与Myc或与Max的异源二聚化，从而将Omomyc的活性限于仅对E-盒结合进行竞争。相反，OmoCS突变体通过促进异源二聚体群的形成而有利于Omomyc的其他生物学活性。

实施例2

令人惊讶的是，OmoCA突变体在相同的增殖测定中表现与OmoCS完全相同(图2)。

序列表

<110> Fundació Privada Institut d'Investigació Oncolóica de Vall

Hebron

FUNDACIó PRIVADA INSTITUCIó CATALANA DE RECERCA I ESTUDIS

AVANCATS

<120> 用于治疗癌症的方法和组合物

<130> P13088PC00

<150> EP 16382339

<151> 2016-07-15

<160> 64

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 90

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 多肽

<220>

<221> 变体

<222> (89)..(89)

<223> Xaa可以是除半胱氨酸之外的任意氨基酸

<400> 1

Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg Gln

1 5 10 15

Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln Ile

20 25 30

Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys Leu

50 55 60

Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys His

65 70 75 80

Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Xaa Ala

85 90

<210> 2

<211> 90

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 多肽

<400> 2

Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg Gln

1 5 10 15

Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln Ile

20 25 30

Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys Leu

50 55 60

Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys His

65 70 75 80

Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Ser Ala

85 90

<210> 3

<211> 91

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 多肽

<220>

<221> 变体

<222> (90)..(90)

<223> X可以是除半胱氨酸之外的任意氨基酸

<400> 3

Met Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg

1 5 10 15

Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln

20 25 30

Ile Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu

35 40 45

Lys Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys

50 55 60

Leu Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys

65 70 75 80

His Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Xaa Ala

85 90

<210> 4

<211> 91

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 多肽

<400> 4

Met Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg

1 5 10 15

Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln

20 25 30

Ile Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu

35 40 45

Lys Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys

50 55 60

Leu Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys

65 70 75 80

His Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Ser Ala

85 90

<210> 5

<211> 454

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 5

Met Asp Phe Phe Arg Val Val Glu Asn Gln Gln Pro Pro Ala Thr Met

1 5 10 15

Pro Leu Asn Val Ser Phe Thr Asn Arg Asn Tyr Asp Leu Asp Tyr Asp

20 25 30

Ser Val Gln Pro Tyr Phe Tyr Cys Asp Glu Glu Glu Asn Phe Tyr Gln

35 40 45

Gln Gln Gln Gln Ser Glu Leu Gln Pro Pro Ala Pro Ser Glu Asp Ile

50 55 60

Trp Lys Lys Phe Glu Leu Leu Pro Thr Pro Pro Leu Ser Pro Ser Arg

65 70 75 80

Arg Ser Gly Leu Cys Ser Pro Ser Tyr Val Ala Val Thr Pro Phe Ser

85 90 95

Leu Arg Gly Asp Asn Asp Gly Gly Gly Gly Ser Phe Ser Thr Ala Asp

100 105 110

Gln Leu Glu Met Val Thr Glu Leu Leu Gly Gly Asp Met Val Asn Gln

115 120 125

Ser Phe Ile Cys Asp Pro Asp Asp Glu Thr Phe Ile Lys Asn Ile Ile

130 135 140

Ile Gln Asp Cys Met Trp Ser Gly Phe Ser Ala Ala Ala Lys Leu Val

145 150 155 160

Ser Glu Lys Leu Ala Ser Tyr Gln Ala Ala Arg Lys Asp Ser Gly Ser

165 170 175

Pro Asn Pro Ala Arg Gly His Ser Val Cys Ser Thr Ser Ser Leu Tyr

180 185 190

Leu Gln Asp Leu Ser Ala Ala Ala Ser Glu Cys Ile Asp Pro Ser Val

195 200 205

Val Phe Pro Tyr Pro Leu Asn Asp Ser Ser Ser Pro Lys Ser Cys Ala

210 215 220

Ser Gln Asp Ser Ser Ala Phe Ser Pro Ser Ser Asp Ser Leu Leu Ser

225 230 235 240

Ser Thr Glu Ser Ser Pro Gln Gly Ser Pro Glu Pro Leu Val Leu His

245 250 255

Glu Glu Thr Pro Pro Thr Thr Ser Ser Asp Ser Glu Glu Glu Gln Glu

260 265 270

Asp Glu Glu Glu Ile Asp Val Val Ser Val Glu Lys Arg Gln Ala Pro

275 280 285

Gly Lys Arg Ser Glu Ser Gly Ser Pro Ser Ala Gly Gly His Ser Lys

290 295 300

Pro Pro His Ser Pro Leu Val Leu Lys Arg Cys His Val Ser Thr His

305 310 315 320

Gln His Asn Tyr Ala Ala Pro Pro Ser Thr Arg Lys Asp Tyr Pro Ala

325 330 335

Ala Lys Arg Val Lys Leu Asp Ser Val Arg Val Leu Arg Gln Ile Ser

340 345 350

Asn Asn Arg Lys Cys Thr Ser Pro Arg Ser Ser Asp Thr Glu Glu Asn

355 360 365

Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg Gln Arg Arg Asn Glu

370 375 380

Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln Ile Pro Glu Leu Glu

385 390 395 400

Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu Lys Lys Ala Thr Ala

405 410 415

Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu

420 425 430

Asp Leu Leu Arg Lys Arg Arg Glu Gln Leu Lys His Lys Leu Glu Gln

435 440 445

Leu Arg Asn Ser Cys Ala

450

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SV40大T抗原NLS

<400> 6

Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

1 5

<210> 7

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 核质蛋白NLS

<400> 7

Lys Arg Pro Ala Ala Thr Lys Lys Ala Gly Gln Ala Lys Lys Lys Lys

1 5 10 15

<210> 8

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CBP80 NLS

<400> 8

Arg Arg Arg His Ser Asp Glu Asn Asp Gly Gly Gln Pro His Lys Arg

1 5 10 15

Arg Lys

<210> 9

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HIV-I Rev蛋白NLS

<400> 9

Arg Gln Ala Arg Arg Asn Arg Arg Arg Trp Glu

1 5 10

<210> 10

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HTLV-I Rex

<400> 10

Met Pro Lys Thr Arg Arg Arg Pro Arg Arg Ser Gln Arg Lys Arg Pro

1 5 10 15

Pro Thr

<210> 11

<211> 37

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> hnRNP A NLS

<400> 11

Asn Gln Ser Ser Asn Phe Gly Pro Met Lys Gly Gly Asn Phe Gly Gly

1 5 10 15

Arg Ser Ser Gly Pro Tyr Gly Gly Gly Gly Gln Tyr Phe Lys Pro Arg

20 25 30

Asn Gln Gly Gly Tyr

35

<210> 12

<211> 43

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> rpL23a NLS

<400> 12

Val His Ser His Lys Lys Lys Lys Ile Arg Thr Ser Pro Thr Phe Thr

1 5 10 15

Thr Pro Lys Thr Leu Arg Leu Arg Arg Gln Pro Lys Tyr Pro Arg Lys

20 25 30

Ser Ala Pro Arg Arg Asn Lys Leu Asp His Tyr

35 40

<210> 13

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> NLS序列

<220>

<221> 变体

<222> (2)..(2)

<223> 替换="R或K"

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可以是任意天然存在的氨基酸

<220>

<221> 变体

<222> (4)..(4)

<223> 替换="R或K"

<400> 13

Leu Xaa Xaa Xaa

1

<210> 14

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 见于果蝇触角足蛋白（Drosophila antennapedia protein）中的CPP

<400> 14

Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys

1 5 10 15

<210> 15

<400> 15

000

<210> 16

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Bac-7的CPP

<400> 16

Arg Arg Ile Arg Pro Arg Pro Pro Arg Leu Pro Arg Pro Arg Pro Arg

1 5 10 15

Pro Leu Pro Phe Pro Arg Pro Gly

20

<210> 17

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HIV-1 TAT蛋白的CPP

<400> 17

Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5

<210> 18

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HIV-1 TAT蛋白的CPP

<400> 18

Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Thr Pro Gln

1 5 10

<210> 19

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HIV-1 TAT蛋白的CPP

<400> 19

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 20

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> S413-PV肽的CPP

<400> 20

Ala Leu Trp Lys Thr Leu Leu Lys Lys Val Leu Lys Ala Pro Lys Lys

1 5 10 15

Lys Arg Lys Val

20

<210> 21

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 穿透素的CPP

<400> 21

Arg Gln Ile Lys Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys

1 5 10 15

<210> 22

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SynB1的CPP

<400> 22

Arg Gly Gly Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe Ser Thr Ser Thr

1 5 10 15

Gly Arg

<210> 23

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SynB3的CPP

<400> 23

Arg Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe

1 5 10

<210> 24

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PTD-4的CPP

<400> 24

Pro Ile Arg Arg Arg Lys Lys Leu Arg Arg Leu Lys

1 5 10

<210> 25

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PTD-5的CPP

<400> 25

Arg Arg Gln Arg Arg Thr Ser Lys Leu Met Lys Arg

1 5 10

<210> 26

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FHV Coat-(35-49)的CPP

<400> 26

Arg Arg Arg Arg Asn Arg Thr Arg Arg Asn Arg Arg Arg Val Arg

1 5 10 15

<210> 27

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> BMV Gag-(7-25)的CPP

<400> 27

Lys Met Thr Arg Ala Gln Arg Arg Ala Ala Ala Arg Arg Asn Arg Trp

1 5 10 15

Thr Ala Arg

<210> 28

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HTLV-II Rex-(4-16)的CPP

<400> 28

Thr Arg Arg Gln Arg Thr Arg Arg Ala Arg Arg Asn Arg

1 5 10

<210> 29

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> D-Tat的CPP

<400> 29

Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Pro Pro Gln

1 5 10

<210> 30

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP R9-Tat

<400> 30

Gly Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Pro Gln

1 5 10

<210> 31

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> MAP的CPP

<400> 31

Lys Leu Ala Leu Lys Leu Ala Leu Lys Leu Ala Leu Ala Leu Lys Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 32

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SBP的CPP

<400> 32

Met Gly Leu Gly Leu His Leu Leu Val Leu Ala Ala Ala Leu Gln Gly

1 5 10 15

Ala Trp Ser Gln Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

20 25

<210> 33

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FBP的CPP

<400> 33

Gly Ala Leu Phe Leu Gly Trp Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly

1 5 10 15

Ala Trp Ser Gln Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

20 25

<210> 34

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> MPG的CPP

<400> 34

Gly Ala Leu Phe Leu Gly Phe Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly

1 5 10 15

Ala Trp Ser Gln Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

20 25

<210> 35

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> MPG(ENLS)的CPP

<400> 35

Gly Ala Leu Phe Leu Gly Phe Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly

1 5 10 15

Ala Trp Ser Gln Pro Lys Ser Lys Arg Lys Val

20 25

<210> 36

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Pep-1的CPP

<400> 36

Lys Glu Thr Trp Trp Glu Thr Trp Trp Thr Glu Trp Ser Gln Pro Lys

1 5 10 15

Lys Lys Arg Lys Val

20

<210> 37

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Pep-2的CPP

<400> 37

Lys Glu Thr Trp Phe Glu Thr Trp Phe Thr Glu Trp Ser Gln Pro Lys

1 5 10 15

Lys Lys Arg Lys Val

20

<210> 38

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP

<400> 38

Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 39

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP

<400> 39

Arg Arg Arg Arg Arg Arg Leu Arg

1 5

<210> 40

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP

<400> 40

Arg Arg Gln Arg Arg Thr Ser Lys Leu Met Lys Arg

1 5 10

<210> 41

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP

<400> 41

Gly Trp Thr Leu Asn Ser Ala Gly Tyr Leu Leu Gly Lys Ile Asn Leu

1 5 10 15

Lys Ala Leu Ala Ala Leu Ala Lys Lys Ile Leu

20 25

<210> 42

<211> 33

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP

<400> 42

Lys Ala Leu Ala Trp Glu Ala Lys Leu Ala Lys Ala Leu Ala Lys Ala

1 5 10 15

Leu Ala Lys His Leu Ala Lys Ala Leu Ala Lys Ala Leu Lys Cys Glu

20 25 30

Ala

<210> 43

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP

<400> 43

Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys

1 5 10 15

<210> 44

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP

<400> 44

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 45

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP

<400> 45

Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg

1 5

<210> 46

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP

<400> 46

Tyr Ala Arg Ala Ala Ala Arg Gln Ala Arg Ala

1 5 10

<210> 47

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP

<400> 47

Thr His Arg Leu Pro Arg Arg Arg Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 48

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP

<400> 48

Gly Gly Arg Arg Ala Arg Arg Arg Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 49

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HIV-1 TAT蛋白

<400> 49

Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5

<210> 50

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP

<400> 50

Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 51

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPP

<400> 51

Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg

1 5

<210> 52

<211> 101

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> OmoCS*TAT

<400> 52

Met Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg

1 5 10 15

Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln

20 25 30

Ile Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu

35 40 45

Lys Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys

50 55 60

Leu Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys

65 70 75 80

His Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Ser Ala Gly Arg Lys Lys Arg

85 90 95

Arg Gln Arg Arg Arg

100

<210> 53

<211> 99

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> OmoCS*LZArg

<400> 53

Met Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg

1 5 10 15

Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln

20 25 30

Ile Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu

35 40 45

Lys Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys

50 55 60

Leu Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys

65 70 75 80

His Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Ser Ala Arg Arg Arg Arg Arg

85 90 95

Arg Arg Arg

<210> 54

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1肽

<400> 54

Pro Ala Ala Lys Arg Val Lys Leu Asp

1 5

<210> 55

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M2肽

<400> 55

Arg Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe

1 5 10

<210> 56

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 多甘氨酸区域

<400> 56

Gly Pro Arg Arg Arg Arg

1 5

<210> 57

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FLAG-标签

<400> 57

Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys

1 5

<210> 58

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Strep-标签

<400> 58

Trp Ser His Pro Gln Phe Glu Lys

1 5

<210> 59

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HA标签

<400> 59

Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala

1 5

<210> 60

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> V5标签

<400> 60

Gly Lys Pro Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr

1 5 10

<210> 61

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 标签序列

<400> 61

Ala His Gly His Arg Pro

1 5

<210> 62

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 标签序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (19)..(20)

<223> Xaa可以是任意天然存在的氨基酸

<400> 62

Pro Ile His Asp His Asp His Pro His Leu Val Ile His Ser Gly Met

1 5 10 15

Thr Cys Xaa Xaa Cys

20

<210> 63

<211> 90

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 多肽

<400> 63

Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg Gln

1 5 10 15

Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln Ile

20 25 30

Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys Leu

50 55 60

Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys His

65 70 75 80

Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Ala Ala

85 90

<210> 64

<211> 91

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> OmoCA

<400> 64

Met Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg

1 5 10 15

Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln

20 25 30

Ile Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu

35 40 45

Lys Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys

50 55 60

Leu Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys

65 70 75 80

His Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Ala Ala

85 90

Claims (14)

1.多肽，其由其中SEQ ID NO：3的第90位残基X是丝氨酸或丙氨酸的SEQ ID NO：3的多肽组成。

2.根据权利要求1所述的多肽，其由SEQ ID NO：4组成。

3.根据权利要求1所述的多肽，其由SEQ ID NO：64组成。

4.缀合物，其包含：

a.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，和

b.促进细胞摄取所述多肽的化学部分。

5.根据权利要求4所述的缀合物，其中促进细胞摄取所述多肽的所述化学部分是细胞穿透肽序列，并且其中所述细胞穿透肽序列与所述多肽形成融合蛋白。

6.根据权利要求5所述的缀合物，其中所述细胞穿透肽序列选自GRKKRRQRRR(SEQ IDNO：38)和RRRRRRLR(SEQ ID NO：39)。

7.根据权利要求4至6中任一项所述的缀合物，其还包含另外的核定位信号。

8.根据权利要求7所述的缀合物，其中所述核定位信号选自PKKKRKV(SEQ ID NO：6)、PAAKRVKLD(SEQ ID NO：54)和KRPAATKKAGQAKKKK(SEQ ID NO：7)。

9.多核苷酸，其编码根据权利要求1至3中任一项所述的多肽或根据权利要求4至8中任一项所述的缀合物。

10.载体，其包含根据权利要求9所述的多核苷酸。

11.宿主细胞，其包含根据权利要求1至3中任一项所述的多肽、根据权利要求4至8中任一项所述的缀合物、根据权利要求9所述的多核苷酸或根据权利要求10所述的载体。

12.药物组合物，其包含药学有效量的根据权利要求1至3中任一项所述的多肽、根据权利要求4至8中任一项所述的缀合物、根据权利要求9所述的多核苷酸、根据权利要求10所述的载体或根据权利要求11所述的宿主细胞，以及可药用赋形剂。

13.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽、根据权利要求4至8中任一项所述的缀合物、根据权利要求9所述的多核苷酸、根据权利要求10所述的载体、根据权利要求11所述的宿主细胞或根据权利要求12所述的药物组合物用于制备用于治疗癌症的药物的用途。

14.根据权利要求13的所述多肽、所述缀合物、所述多核苷酸、所述载体、所述宿主细胞或所述药物组合物的用途，其中所述癌症选自胶质母细胞瘤和非小细胞肺癌。

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