CN109553648A - 一种壳寡糖的制备及纯化方法 - Google Patents

一种壳寡糖的制备及纯化方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种壳寡糖的制备及纯化方法，包括以下步骤：取干燥至恒重的壳聚糖，加入HCl溶液，调节PH值；加入壳聚糖酶液，保温2h～6h，然后沸水浴加热灭酶；在50℃以下旋转蒸发浓缩，然后放入冷冻干燥机中冷冻干燥，得壳寡糖粗提物；将壳寡糖粗提物溶于NH4HCO3溶液，待完全溶解后，用滤膜过滤得壳寡糖溶液；将树脂倒入层析柱中，用NH4HCO3冲洗树脂至树脂压实，将壳寡糖溶液缓慢倒入层析柱中洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发浓缩得壳寡糖。本发明优点：采用壳聚糖酶降解壳聚糖制备壳寡糖，并通过凝胶柱层析分离纯化制备单一聚合度的壳寡糖，纯度可达97％以上，所制备得到的壳寡糖具有良好的降血脂活性，保护肝脏的作用，还能够增强机体的抗氧化活性。

Description

一种壳寡糖的制备及纯化方法
技术领域
本发明涉及一种壳寡糖的制备及纯化方法。
背景技术
壳聚糖来源于虾、蟹壳，是由甲壳素在浓碱或脱乙酰酶的作用下，脱去N上的乙酰基获得的，由一定比例的氨基葡萄糖和N-乙酰氨基葡萄糖经β-(1,4)糖苷键连接而成，在食品工业中是一种天然、无毒的保鲜剂、絮凝剂，且可吸附水中镉、汞、铜等重金属离子，但壳聚糖分子量大，不溶于水，不易于被生物体吸收，因此，将壳聚糖降解，获得分子量小、水溶性好、易于人体吸收的壳寡糖就显得十分必要，但是，高纯度的壳寡糖单体难以制备，往往采用壳寡糖混合物进行生物活性评价，限制了壳寡糖生物活动机理的深入研究。
发明内容
发明目的：针对上述问题，本发明的目的是提供一种壳寡糖的制备及纯化方法，获得单一聚合度壳寡糖。
技术方案：一种壳寡糖的制备及纯化方法，包括以下步骤：
步骤一：取干燥至恒重的壳聚糖，配置成底物浓度为1％～10％的溶液，加入HCl溶液，调节PH值至4.1～6.5；
步骤二：加入壳聚糖酶液，在35℃～70℃下保温2h～6h，然后沸水浴加热10min～15min，灭酶；
步骤三：在50℃以下旋转蒸发浓缩，然后放入冷冻干燥机中冷冻干燥2h～18h，得壳寡糖粗提物；
步骤四：将壳寡糖粗提物溶于NH4HCO3溶液，待完全溶解后，用0.2μm～0.3μm的滤膜过滤得壳寡糖溶液；
步骤五：将树脂倒入层析柱中，用NH4HCO3冲洗树脂至树脂压实，将壳寡糖溶液缓慢倒入层析柱中，并用NH4HCO3溶液洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发浓缩得壳寡糖。
进一步的，在步骤一中，HCl溶液的物质的量浓度为0.1mol/L。
进一步的，在步骤二中，壳聚糖酶液的加酶量为40U/g～65U/g。
进一步的，在步骤三中，旋转蒸发浓缩后的体积为原体积的1/3。
进一步的，在步骤五中，NH4HCO3溶液的物质的量浓度为0.1mol/L。
有益效果：与现有技术相比，本发明的优点是：采用壳聚糖酶降解壳聚糖制备壳寡糖，并通过凝胶柱层析分离纯化制备单一聚合度的壳寡糖，纯度可达97％以上，所制备得到的壳寡糖具有良好的降血脂活性，同时能够改善脂肪肝症状，具有很好的保护肝脏的作用，此外，还能够增强机体的抗氧化活性。
具体实施方式
下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
一种壳寡糖的制备及纯化方法，包括以下步骤：
步骤一：取干燥至恒重的壳聚糖，配置成底物浓度为1％～10％的溶液，加入物质的量浓度为0.1mol/L的HCl溶液，调节PH值至4.1～6.5；
步骤二：加入壳聚糖酶液，加酶量为40U/g～65U/g，在35℃～70℃下保温2h～6h，然后沸水浴加热10min～15min，灭酶；
步骤三：在50℃以下旋转蒸发浓缩，旋转蒸发浓缩后的体积为原体积的1/3，然后放入冷冻干燥机中冷冻干燥2h～18h，得壳寡糖粗提物；
步骤四：将壳寡糖粗提物溶于NH4HCO3溶液，待完全溶解后，用0.2μm～0.3μm的滤膜过滤得壳寡糖溶液；
步骤五：将树脂倒入层析柱中，用NH4HCO3冲洗树脂至树脂压实，将壳寡糖溶液缓慢倒入层析柱中，并用物质的量浓度为0.1mol/L的NH4HCO3溶液洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发浓缩得壳寡糖。
在温度为50℃，PH值为5.6，加酶量为58U/g，底物浓度为3.5％，反应时间为4h时，壳寡糖粗提物中氨基葡萄糖、壳2糖、壳3糖、壳4糖、壳5糖的含量分别为1.23％、12.88％、41.92％、31.02％以及13.01％。
通过提纯后，四个壳寡糖单体：壳2糖、壳3糖、壳4糖、壳5糖的纯度分别为96.1％、97.1％、97.5％以及98.7％。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (5)

1.一种壳寡糖的制备及纯化方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤一：取干燥至恒重的壳聚糖，配置成底物浓度为1％～10％的溶液，加入HCl溶液，调节PH值至4.1～6.5；
步骤二：加入壳聚糖酶液，在35℃～70℃下保温2h～6h，然后沸水浴加热10min～15min，灭酶；
步骤三：在50℃以下旋转蒸发浓缩，然后放入冷冻干燥机中冷冻干燥2h～18h，得壳寡糖粗提物；
步骤四：将壳寡糖粗提物溶于NH4HCO3溶液，待完全溶解后，用0.2μm～0.3μm的滤膜过滤得壳寡糖溶液；
步骤五：将树脂倒入层析柱中，用NH4HCO3冲洗树脂至树脂压实，将壳寡糖溶液缓慢倒入层析柱中，并用NH4HCO3溶液洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发浓缩得壳寡糖。
2.根据权利要求1所述的一种壳寡糖的制备及纯化方法，其特征在于：在步骤一中，HCl溶液的物质的量浓度为0.1mol/L。
3.根据权利要求1所述的一种壳寡糖的制备及纯化方法，其特征在于：在步骤二中，壳聚糖酶液的加酶量为40U/g～65U/g。
4.根据权利要求1所述的一种壳寡糖的制备及纯化方法，其特征在于：在步骤三中，旋转蒸发浓缩后的体积为原体积的1/3。
5.根据权利要求1所述的一种壳寡糖的制备及纯化方法，其特征在于：在步骤五中，NH4HCO3溶液的物质的量浓度为0.1mol/L。
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CN112646849A (zh) * 2020-12-10 2021-04-13 上海应用技术大学 一种微生物源壳寡糖的制备方法
CN113293185A (zh) * 2021-04-02 2021-08-24 上海应用技术大学 一种壳寡糖的制备方法

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CN112646849B (zh) * 2020-12-10 2024-01-16 上海应用技术大学 一种微生物源壳寡糖的制备方法
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