CN109541077B - 一种利用hplc测定玫瑰花中维生素c含量的方法 - Google Patents

一种利用hplc测定玫瑰花中维生素c含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及玫瑰产品性能检测技术领域，特别涉及一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法，该方法能够方便、准确地对玫瑰花中的维生素C含量进行测定，同时，能够减少实验的偶然误差。其技术要点包括S1：配制维生素C标准液；S2：将维生素C标准液稀释至不同浓度，进液相色谱检测，绘制标准曲线；S3：样品处理；S4：处理后的样品进液相色谱检测，并根据维生素C的标准曲线计算样品中维生素C含量。

Description

一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法
技术领域
本发明属于玫瑰产品性能检测技术领域，特别涉及一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法。
背景技术
玫瑰(Rosa rugosa)为蔷薇科、蔷薇属植物，其花形美色鲜、芳香浓郁，具有食用、药用、保健、美容、观赏等多种用途，是我国十大名花之一，也是世界四大切花之一。
玫瑰花中含有维生素E及维生素C(简称VC)等营养素，特别是维生素C，维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它能增强人体抵抗力，预防坏血病，又称抗坏血酸。因此，测定玫瑰花中的维生素C的含量，对评定其营养价值有重要意义。
维生素C的测定方法有多种，包括容量法、比色法以及荧光光度法、电位法和紫外分光光度法等，但是，各种方法均存在操作繁琐，偶然误差大等缺陷。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法，能够方便、准确地对玫瑰花中的维生素C含量进行测定，同时，能够减少实验的偶然误差。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法，包括以下步骤：
S1：配制维生素C原液；
S2：将维生素C原液稀释至不同浓度的维生素C标准液，进液相色谱检测，绘制标准曲线；
S3：样品处理；
S4：处理后的样品经微孔过滤，进液相色谱检测，并根据维生素C的标准曲线计算样品中维生素C含量。
进一步的，步骤S2中，样品处理过程为，将样品放入粉碎机中，加入草酸，均匀粉碎后，滤纸过滤，滤液保留，待测。
进一步的，所使用草酸为质量浓度0.5％的草酸水溶液。
进一步的，步骤S2及S4中液相色谱条件为液相色谱柱：C18250mm×5mm，流速1ml/min；检测波长：265nm；流动相A为甲醇，B为0.02moL/L乙酸钠；进样量：5μL。
进一步的，流动性A与B的比值为A:B＝5:95。
进一步的，S3步骤中，进行样品处理时，向样品中加入氯化铝。
进一步的，氯化铝与样品的质量比为1:30。
进一步的，S3步骤中，进行样品处理时，向样品中加入硝酸铵钙。
进一步的，硝酸铵钙与样品的质量比为1:45。
本发明的有益效果是：
1.本发明提供的利用高效液相色谱对玫瑰花中的维生素C含量进行测定的方法，操作简单，且准确率高，重复性好。
2.本发明使用乙酸钠与甲醇配合做流动相，使最终维生素C的分离效果较好，单独出峰，无明显拖峰现象。
3.本发明中在对样品处理时，在样品中加入氯化铝，氯化铝能够破坏玫瑰花中的类黄酮类物质，类黄酮对维生素C具有保护作用，类黄酮被破坏，从而在对玫瑰花碾碎时，维生素C大量流出，进而能够对样品中的维生素C含量进行更精确地测定。
4.本发明中在对样品处理时，在样品中加入硝酸铵钙，硝酸铵钙能够降低抗坏血酸氧化酶的活性，从而在维生素C流出后，减少维生素C的氧化，避免检测过程中，因维生素C与空气接触被抗坏血酸氧化酶氧化导致实验结果不准确。
具体实施方式
下面将结合具体实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法，具体如下各实施例。
实施例1
S1：配制维生素C原液。准确称取0.2000g维生素C标准品，用超纯水定容至100mL容量瓶中，此时维生素C浓度为2000mg/L。
S2：吸取2000mg/L维生素C原液，稀释5倍、10倍、20倍、50倍，配制成400mg/L、200mg/L、100mg/L、50mg/L浓度标准液。将各浓度标准液进液相色谱进行检测，以标准液浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，建立回归方程。液相色谱条件为液相色谱柱：C18柱子，250mm×5mm，流速1ml/min；检测波长：265nm；流动相A为甲醇，B为0.02moL/L乙酸钠；流动性A与B的比值为A:B＝5:95；进样量：5μL。
S3：样品处理。取100g样品，放入粉碎机中，加入200mL质量浓度为0.5％草酸水溶液，均匀粉碎，滤纸过滤后，滤液保留，及时进行下一步检测。
S4：滤液经0.45μm微孔过滤，进液相色谱检测，并根据维生素C的标准曲线计算样品中维生素C含量。液相色谱条件为液相色谱柱：C18250mm×5mm，流速1ml/min；检测波长：265nm；流动相A为甲醇，B为0.02moL/L乙酸钠；流动性A与B的比值为A:B＝5:95；进样量：5μL。
实施例2
S1：配制维生素C原液。准确称取0.2000g维生素C标准品，用超纯水定容至100mL容量瓶中，此时维生素C浓度为2000mg/L。
S2：吸取2000mg/L维生素C原液，稀释5倍、10倍、20倍、50倍，配制成400mg/L、200mg/L、100mg/L、50mg/L浓度标准液。将各浓度标准液进液相色谱进行检测，以标准液浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，建立回归方程。液相色谱条件为液相色谱柱：C18柱子，250mm×5mm，流速1ml/min；检测波长：265nm；流动相A为甲醇，B为0.02moL/L乙酸钠；流动性A与B的比值为A:B＝5:95；进样量：5μL。
S3：样品处理。取100g样品，放入粉碎机中，加入200mL质量浓度为0.5％草酸水溶液，均匀粉碎，滤纸过滤后，滤液保留24h后进行检测。
S4：滤液经0.45μm微孔过滤，进液相色谱检测，并根据维生素C的标准曲线计算样品中维生素C含量。液相色谱条件为液相色谱柱：C18250mm×5mm，流速1ml/min；检测波长：265nm；流动相A为甲醇，B为0.02moL/L乙酸钠；流动性A与B的比值为A:B＝5:95；进样量：5μL。
实施例3
S1：配制维生素C原液。准确称取0.2000g维生素C标准品，用超纯水定容至100mL容量瓶中，此时维生素C浓度为2000mg/L。
S2：吸取2000mg/L维生素C原液，稀释5倍、10倍、20倍、50倍，配制成400mg/L、200mg/L、100mg/L、50mg/L浓度标准液。将各浓度标准液进液相色谱进行检测，以标准液浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，建立回归方程。液相色谱条件为液相色谱柱：C18柱子，250mm×5mm，流速1ml/min；检测波长：265nm；流动相A为甲醇，B为0.02moL/L乙酸钠；流动性A与B的比值为A:B＝5:95；进样量：5μL。
S3：样品处理。取100g样品，放入粉碎机中，加入200mL质量浓度为0.5％草酸水溶液，同时，加入氯化铝，氯化铝与样品的质量比为1:30，搅拌并均匀粉碎，滤纸过滤后，滤液保留，及时进行下一步检测。
S4：滤液经0.45μm微孔过滤，进液相色谱检测，并根据维生素C的标准曲线计算样品中维生素C含量。液相色谱条件为液相色谱柱：C18250mm×5mm，流速1ml/min；检测波长：265nm；流动相A为甲醇，B为0.02moL/L乙酸钠；流动性A与B的比值为A:B＝5:95；进样量：5μL。
实施例4
S1：配制维生素C原液。准确称取0.2000g维生素C标准品，用超纯水定容至100mL容量瓶中，此时维生素C浓度为2000mg/L。
S2：吸取2000mg/L维生素C原液，稀释5倍、10倍、20倍、50倍，配制成400mg/L、200mg/L、100mg/L、50mg/L浓度标准液。将各浓度标准液进液相色谱进行检测，以标准液浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，建立回归方程。液相色谱条件为液相色谱柱：C18柱子，250mm×5mm，流速1ml/min；检测波长：265nm；流动相A为甲醇，B为0.02moL/L乙酸钠；流动性A与B的比值为A:B＝5:95；进样量：5μL。
S3：样品处理。取100g样品，放入粉碎机中，加入200mL质量浓度为0.5％草酸水溶液，同时，加入硝酸铵钙，硝酸铵钙与样品的质量比为1:45，搅拌并均匀粉碎，滤纸过滤后，滤液保留24h后进行检测。
S4：滤液经0.45μm微孔过滤，进液相色谱检测，并根据维生素C的标准曲线计算样品中维生素C含量。液相色谱条件为液相色谱柱：C18250mm×5mm，流速1ml/min；检测波长：265nm；流动相A为甲醇，B为0.02moL/L乙酸钠；流动性A与B的比值为A:B＝5:95；进样量：5μL。
实施例5
S1：配制维生素C原液。准确称取0.2000g维生素C标准品，用超纯水定容至100mL容量瓶中，此时维生素C浓度为2000mg/L。
S2：吸取2000mg/L维生素C原液，稀释5倍、10倍、20倍、50倍，配制成400mg/L、200mg/L、100mg/L、50mg/L浓度标准液。将各浓度标准液进液相色谱进行检测，以标准液浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，建立回归方程。液相色谱条件为液相色谱柱：C18柱子，250mm×5mm，流速1ml/min；检测波长：265nm；流动相A为甲醇，B为0.02moL/L乙酸钠；流动性A与B的比值为A:B＝5:95；进样量：5μL。
S3：样品处理。取100g样品，放入粉碎机中，加入200mL质量浓度为0.5％草酸水溶液，同时，加入氯化铝和硝酸铵钙，氯化铝与样品的质量比为1:30，硝酸铵钙与样品的质量比为1:45，搅拌并均匀粉碎，滤纸过滤后，滤液保留，及时进行下一步检测。
S4：滤液经0.45μm微孔过滤，进液相色谱检测，并根据维生素C的标准曲线计算样品中维生素C含量。样品中维生素C含量(mg/g)的具体计算为根据维生素C的峰面积，通过回归方程计算出维生素C的浓度值，乘以样品体积200mL，再除以样品总质量100g。
液相色谱条件为液相色谱柱：C18250mm×5mm，流速1ml/min；检测波长：265nm；流动相A为甲醇，B为0.02moL/L乙酸钠；流动性A与B的比值为A:B＝5:95；进样量：5μL。
本发明各实施例所使用仪器设备为Agilent 1260系列液相色谱仪配有紫外检测器；Agilent 1260自动进样器；溶剂过滤器，一次性注射器，0.45um过滤头。
检测结果
编号 回归方程 相关系数R<sup>2</sup> 样品中V<sub>C</sub>的峰面积 样品中V<sub>C</sub>的含量(mg/g)
实施例1 Y＝10.93x+362.73 R<sup>2</sup>＝0.99933 2695.02 0.427
实施例2 Y＝10.38x+403.28 R<sup>2</sup>＝0.99832 1673.78 0.245
实施例3 Y＝11.01x+572.73 R<sup>2</sup>＝0.99912 3321.87 0.499
实施例4 Y＝10.88x+364.71 R<sup>2</sup>＝0.99741 2476.37 0.388
实施例5 Y＝10.97x+462.53 R<sup>2</sup>＝0.99739 3210.55 0.501
各实施例中所用样品均为同批次采摘玫瑰花。实验结果显示，在该色谱条件下，维生素C的保留时间为2.80min，该方法建立的回归方程，相关系数较高。实施例1与实施例3相比，实施例3中在样品处理时加入了氯化铝，使得检测时，维生素C的峰面积明显提升，即，检测到的维生素C含量有所提升，说明氯化铝的加入促进了样品中维生素C的流出。实施例1与实施例2相比，实施例2在对样品处理后，放置24h进行检测，发现维生素C含量显著下降，说明样品中的维生素C被氧化。实施例2与实施例4相比，实施例4在对样品处理后加入硝酸铵钙，然后放置24h进行检测，虽然检测结果还是低于实施例1中的含量，但是，与实施例2相比，有明显提升，说明硝酸铵钙能够减弱维生素C的氧化。

Claims (2)

1.一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：配制维生素C原液；
S2：将维生素C原液稀释至不同浓度的维生素C标准液，进液相色谱检测，绘制标准曲线；
S3：样品处理：样品处理过程为，将样品放入粉碎机中，加入草酸水溶液，同时加入氯化铝和硝酸铵钙，氯化铝与样品的质量比为1:30，硝酸铵钙与样品的质量比为1:45，均匀粉碎后，滤纸过滤，滤液保留，待测；
S4：处理后的样品经微孔过滤，进液相色谱检测，并根据维生素C的标准曲线计算样品中维生素C含量；
步骤S2及S4中液相色谱条件为液相色谱柱：C18 250mm×5mm，流速1ml/min；检测波长：265nm；流动相A为甲醇，B为0.02moL/L乙酸钠；进样量：5μL；流动性A与B的比值为A:B=5:95。
2.根据权利要求1所述的一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法，其特征在于：所使用草酸为质量浓度0.5%的草酸水溶液。
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