CN109528841A - 截叶铁扫帚水提物作为制备治疗2型糖尿病睾丸组织病变药物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及截叶铁扫帚水提物作为制备治疗2型糖尿病睾丸组织病变药物的应用，属于药物应用的技术领域，截叶铁扫帚水提物对2型糖尿病睾丸组织病变是否具备改善的作用，目前国内研究尚未见报道。本发明提供了截叶铁扫帚水提物作为制备治疗2型糖尿病睾丸组织病变药物的应用，其能够提升睾丸组织中乳酸脱氢酶(LHD)、酸性磷酸酶(ACP)以及谷氨酰转肽酶(γ‑GT)的含量，提升睾丸指数，降低血糖含量以作为治疗2型糖尿病睾丸组织病变的药物。

Description

截叶铁扫帚水提物作为制备治疗2型糖尿病睾丸组织病变药 物的应用

技术领域

本发明属于药物应用的技术领域，具体而言，涉及一种截叶铁扫帚水提物作为制备治疗2型糖尿病睾丸组织病变药物的应用。

背景技术

目前，糖尿病在医学领域已经逐渐成为了严重的危害人体健康的疾病之一，其作为三大慢性非传染性疾病，对于患者的身体以及精神上都造成了严重的损害。长期的糖尿病患者往往会引发身体多器官的器质性病变，而造成患者死亡的主要原因也是由于组织器官损伤。近几年高血糖导致患者睾丸组织等生殖结构出现病理性损伤的概率显著上升。通过研究分析表明，睾丸组织结构病变是糖尿病并发症的重要病理，睾丸组织病变是糖尿病的一大并发症，将会引起勃起功能障碍、生精能力下降等一系列病理变化，其对于患者来说造成生理上和精神上的极大痛苦。

睾丸组织病变包括但不限于以下症状：睾丸以及附睾组织萎缩、精子数量减少、每日精子生成量减少、精子活力降低、非正常精子数量增多、精曲小管变薄，生精细胞层减少、稀疏，睾丸生精小管脱落，睾丸细胞膜破坏等，其主要危害主要包括以下：

(1)导致男性丧失生育能力：附睾炎如果长期得不到治疗或者是久治不愈的话，会造成无精症或者是死精症，从而引发不育症，使男性朋友失去生育能力；

(2)导致男性丧失性功能：附睾炎会引起男性性功能下降，导致性功能丧失；

(3)导致无精症的发生：发生病变的附睾会变肿大，形成附睾硬结，如果严重的话还会形成脓肿，给阴囊的皮肤造成影响，此外还会造成睾丸分界不清楚，输精管出现增粗的现象，两侧附睾都结核的话，还会引起无精症，从而导致不育症。

据研究发现，睾丸组织病变作为糖尿病的一大并发症，其对于患者来说一方面会造成生理上的痛苦；另一方面会造成精神上的痛苦。糖尿病患者的睾丸病变发病率是普通人的15倍以上，其对于患者的正常生活产生了严重的影响。

在《本草通玄》等相关的古籍当中记载到：截叶铁扫帚又名胡枝条、扫皮，属于蔷薇科，截叶铁扫帚水提物主要是通过截叶铁扫帚提取而来，截叶铁扫帚水提物具有调节脂肪代谢、清热解毒、增强肠道功能、降低血脂等一系列效果；在百科文书中也有相关记载：截叶铁扫帚的性甘、微苦、平。其具有清热利湿，消食除积，祛痰止咳的功用。主治小儿疳积、消化不良、胃肠炎、细菌性痢疾、胃痛、黄疽型肝炎、肾炎水肿、白带、口腔炎、咳嗽、支气管炎等。

在专利号为CN201110098516.0，专利名称为“一种治疗糖尿病的中药液”中提供了治疗糖尿病的中药液，该中药液的组份当中含有截叶铁扫帚，且公开了截叶铁扫帚的功效为：清热明目、益肝解毒、祛痰利湿、破瘀生肌、消炎防暑。

但截叶铁扫帚对2型糖尿病睾丸组织病变是否具备改善的作用，目前国内研究尚未见报道。

发明内容

鉴于此，为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种截叶铁扫帚水提物作为制备治疗2型糖尿病睾丸组织病变药物的应用以达到能够通过截叶铁扫帚水提物显著的改善2型糖尿病睾丸组织病变，保护并改善病变睾丸组织的功能的目的。

本发明所采用的技术方案为：一种截叶铁扫帚水提物作为制备治疗2型糖尿病睾丸组织病变药物的应用。

进一步地，所述截叶铁扫帚水提物的具体提取方法如下：将截叶铁扫帚进行干燥后、用水浸泡，然后加热煮沸，收集馏出成分，即为截叶铁扫帚水提物。

进一步地，所述截叶铁扫帚水提物通过提升睾丸组织中乳酸脱氢酶(LHD)、酸性磷酸酶(ACP)以及谷氨酰转肽酶(γ-GT)的含量，提升睾丸指数，降低血糖含量以作为治疗2型糖尿病睾丸组织病变的药物。

本发明的有益效果为：

1.本发明探究截叶铁扫帚水提物对链脲佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病大鼠睾丸组织病变的改善作用与效果，通过在实验中发现2型糖尿病大鼠的睾丸组织结构出现了严重的曲细精管萎缩，生精细胞排列不规则、数量大大降低、细胞体积缩小、细胞核萎缩、内质网扩张等现象。而通过截叶铁扫帚水提物的作用，能显著的改善2型糖尿病大鼠的病变睾丸组织，提升睾丸组织中乳酸脱氢酶(LHD)、酸性磷酸酶(ACP)以及谷氨酰转肽酶(γ-GT)的含量，降低2型糖尿病大鼠的血糖含量水平，提升大鼠的睾丸指数以及血清睾酮水平，改善并保护大鼠的睾丸组织结构，改善大鼠的睾丸细胞超显微结构病变状况。

附图说明

图1正常组大鼠睾丸组织结构(HE)；

图2模型组大鼠睾丸组织结构(HE)；

图3截叶铁扫帚水提物低剂量组大鼠睾丸组织结构(HE)；

图4截叶铁扫帚水提物中剂量组大鼠睾丸组织结构(HE)；

图5截叶铁扫帚水提物高剂量组大鼠睾丸组织结构(HE)；

图6正常组大鼠睾丸组织细胞超微结构；

图7模型组大鼠睾丸组织细胞超微结构；

图8截叶铁扫帚水提物低剂量组大鼠睾丸组织细胞超微结构；

图9截叶铁扫帚水提物中剂量组大鼠睾丸组织细胞超微结构；

图10截叶铁扫帚水提物高剂量组大鼠睾丸组织细胞超微结构。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。

需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

本发明涉及截叶铁扫帚水提物作为制备治疗2型糖尿病睾丸组织病变药物的应用，所述截叶铁扫帚水提物的用量为60mg/kg～180mg/kg。截叶铁扫帚水提物能够提升睾丸组织中乳酸脱氢酶(LHD)、酸性磷酸酶(ACP)以及谷氨酰转肽酶(γ-GT)的含量，提升睾丸指数和血清睾酮的水平，降低血糖含量以作为治疗2型糖尿病睾丸组织病变的药物。所述药物中有效成分为截叶铁扫帚水提物，或者药物中的制备原料中包含截叶铁扫帚。

在本实施例中，所述截叶铁扫帚水提物的具体提取方法采用常规的提取方法即可，具体如下：将截叶铁扫帚进行干燥后、用水浸泡，然后加热煮沸，收集馏出成分，即为截叶铁扫帚水提物。其中，干燥方法可采用自然晒干或者烘干均可；在用水浸泡的过程中还可进行搅拌以加速，通常浸泡时间为3-5小时，浸泡的温度为常温或者50℃～60℃；

其具体的提取过程如下：

(1)将截叶铁扫帚进行干燥，放入带有冷凝器的加热容器中，压实，加入水浸泡，水位没过截叶铁扫帚，浸泡温度为常温或50℃～60℃，浸泡时间为3-5小时；

(2)浸泡后加热煮沸，同时收集馏出成分，当水位降至接近截叶铁扫帚的位置时向加热容器中重新加水至初始位置，继续加热煮沸，收集馏出成分，以此重复多次，所得馏出成分即为截叶铁扫帚水提物。

以截叶铁扫帚水提物改善2型糖尿病睾丸组织病变的实验具体如下：

1、实验材料准备

选取100只健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(出生后5-6周，体重质量在200～240g区间内)，由北京实验动物中心提供，实验前让大鼠适应我们的实验室环境中至少一个星期以上，所有大鼠均饲养在稳定环境条件下(21±2℃，30-70％相对湿度，12h黑暗/光照周期)，充足的饮用水和鼠粮。

2、实验对象分组

将实验对象分为五组，分别为：正常组(作为数据对比标准组)、模型组、截叶铁扫帚水提物低剂量组、截叶铁扫帚水提物中剂量组、截叶铁扫帚水提物高剂量组。正常组、模型组、截叶铁扫帚水提物低剂量组、截叶铁扫帚水提物中剂量组、截叶铁扫帚水提物高剂量组中各组分别配置大鼠20只。

3、动物模型制备

分别对模型组、截叶铁扫帚水提物低剂量组、截叶铁扫帚水提物中剂量组和截叶铁扫帚水提物高剂量组中的大鼠采用高脂肪、高糖含量的饲料连续饲喂10周，并在10周之后采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)方式制备大鼠2型糖尿病模型；

对正常组和模型组的大鼠胃部灌输生理盐水，在截叶铁扫帚水提物低剂量组、截叶铁扫帚水提物中剂量组以及截叶铁扫帚水提物高剂量组的大鼠胃部分别给予截叶铁扫帚水提物含量为60mg/kg、120mg/kg和180mg/kg的药物，用药频率为每天1次，时间为连续8周且中途不可中断。

4、实验结果检测

(1)分别对五个组别大鼠的空腹血糖水平进行测量，在前期预处理以及干预工作完成之后，通过大鼠的尾部静脉抽取血液，测定大鼠空腹血糖含量。

(2)测量大鼠的体质量，并计算大鼠的睾丸指数。

(3)测量血清睾酮含量，采用北京秦德制药股份有限公司所生产的睾酮检测试剂盒；将大鼠麻醉之后经腹主动脉抽取血清，按照相应的试验标准以及流程测定大鼠血清当中的睾酮含量。

(4)测量大鼠睾丸组织中乳酸脱氢酶(LHD)、酸性磷酸酶(ACP)以及谷氨酰转肽酶(γ-GT)的含量；按照随机抽样的方式在每一组大鼠当中抽取10只大鼠的睾丸组织，按照标准流程以及准则处理，测定5组大鼠睾丸组织中LHD、ACP、γ-GT含量。

(5)HE染色法测定睾丸组织结构的改变：分别对五组大鼠体内进行苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态结构，通过透射电镜观察睾丸组织超微结构的改变，同样，采用北京秦德制药股份有限公司所生产的HE检测试剂盒。

具体如下：

按照随机抽样抽取每组10只大鼠，采用5％多聚甲醛溶液固定、切片处理之后，修成1×1×1的小块，经过溶液固定、PBS漂洗以及梯度脱水、染色处理后，在电镜下观察并将图像保存。

5、统计结果分析

研究期间所收集的有关数据指标均采用SPSS17.0进行统计学分析，计量资料以表示。计数资料采用t检验。P<0.05表示具有统计学意义。

6、实验结果如下：

(1)各组大鼠空腹血糖含量、体质量、睾丸指数、睾酮指标的分析对比

将五组大鼠的空腹血糖含量、体质量、睾丸指数、睾酮指标进行汇总分析比较。相比于正常组，模型组中大鼠的空腹血糖含量有所上升，体质量、睾丸指数等指标显著降低。而截叶铁扫帚水提物低剂量组、截叶铁扫帚水提物中剂量组、截叶铁扫帚水提物高剂量组三组中除空腹血糖含量降低外，其他指标均上升(P<0.05)。具体数据见下表：

表1 各组大鼠空腹血糖含量、体质量、睾丸指数、睾酮指标

(*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001,与正常组比较；#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001与模型组比较)

(2)各组大鼠的睾丸组织中LDH、ACP、γ-GT含量水平比较

与正常组相比，模型组大鼠当中的LDH、ACP以及γ-GT的含量水平较低(P<0.05)，而截叶铁扫帚水提物低剂量组、截叶铁扫帚水提物中剂量组、截叶铁扫帚水提物高剂量组三个组别均高于模型组。同时，截叶铁扫帚水提物中剂量组、截叶铁扫帚水提物高剂量组两组之间的差距更加显著。具体结果见下表所示：

表2 各组大鼠LDH、ACP、γ-GT含量水平(IU/gpro)

(^*p<0.05,^**p<0.01,^***p<0.001,与正常组比较；#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001与模型组比较)

7、实验结论如下：

a、截叶铁扫帚水提物低剂量组、截叶铁扫帚水提物中剂量组、截叶铁扫帚水提物高剂量组分别与模型组或正常组相比较，截叶铁扫帚水提物低剂量组、截叶铁扫帚水提物中剂量组、截叶铁扫帚水提物高剂量组三组中大鼠空腹血糖水平均显著降低，体质量、睾丸指数、睾酮水平均显著上升。

b、截叶铁扫帚水提物低剂量组、截叶铁扫帚水提物中剂量组、截叶铁扫帚水提物高剂量组三组中大鼠体内的睾丸组织中乳酸脱氢酶(LHD)、酸性磷酸酶(ACP)以及谷氨酰转肽酶(γ-GT)的含量均有所上升，差异具有统计学意义(P<0.05)。

c、通过对大鼠睾丸组织结构HE染色之后的观察分析能够得出模型组中大鼠出现了一系列的病理情况，例如：生精细胞脱落，生精细胞数量下降等等。而截叶铁扫帚水提物低剂量组、截叶铁扫帚水提物中剂量组、截叶铁扫帚水提物高剂量组三组中大鼠的睾丸组织病变具有临床效果，即三组中大鼠的睾丸组织结构均有所恢复。在电镜下观察大鼠的睾丸组织细胞超微结构，这一结果更加显著，截叶铁扫帚水提物低剂量组、截叶铁扫帚水提物中剂量组、截叶铁扫帚水提物高剂量组三组中大鼠睾丸细胞核正常、一系列病变结构均有所恢复。

如图1、图2、图3、图4、以及图5所示，正常组大鼠睾丸组织结构没有发生严重的病变情况，管腔内能够观察到分布正常以及活跃的精子，同时生精细胞数量正常；模型组大鼠睾丸组织当中生精细胞排列不完整并且出现数量降低、活性下降的现象，管腔内精子的数量以及质量显著的降低；而通过截叶铁扫帚水提物组的观察发现，各个不同剂量的截叶铁扫帚水提物大鼠睾丸组织的病变结构有显著的改善，高剂量改善效果最为显著。

如图6、图7、图8、图9、以及图10所示，正常组大鼠睾丸组织细胞结构在显微镜观察下没有发生显著的改变，睾丸组织饱满，染色质、细胞核等结构排列较为鲜明；模型组细胞则呈现出细胞核体积缩小，细胞器数量减少、内质网扩张；相比于模型组，不同剂量的截叶铁扫帚水提物药物对于大鼠的病变睾丸组织细胞结构都具有明显的治疗效果，显微镜观察下高剂量截叶铁扫帚水提物的治疗情况最为显著。

本发明不局限于上述可选实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是落入本发明权利要求界定范围内的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.截叶铁扫帚水提物作为制备治疗2型糖尿病睾丸组织病变药物的应用。

2.根据权利要求1所述的截叶铁扫帚水提物作为制备治疗2型糖尿病睾丸组织病变药物的应用，其特征在于，所述截叶铁扫帚水提物的具体提取方法如下：将截叶铁扫帚进行干燥后、用水浸泡，然后加热煮沸，收集馏出成分，即为截叶铁扫帚水提物。

3.根据权利要求1所述的截叶铁扫帚水提物作为制备治疗2型糖尿病睾丸组织病变药物的应用，其特征在于，所述截叶铁扫帚水提物通过提升睾丸组织中乳酸脱氢酶(LHD)、酸性磷酸酶(ACP)以及谷氨酰转肽酶(γ-GT)的含量，提升睾丸指数，降低血糖含量以作为治疗2型糖尿病睾丸组织病变的药物。