CN109528773A - 水蛭唾液在制备镇痛药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及镇痛药物技术领域，具体涉及水蛭唾液在制备镇痛药物中的应用。本发明利用电刺激和刺激液刺激收集水蛭唾液，将处理后的水蛭唾液静脉注射进小鼠体内，通过醋酸引起的小鼠扭体实验、热板镇痛实验、皮肤创伤模型实验，证明了水蛭唾液具有良好的镇痛活性，其镇痛作用随剂量增强。本发明根据水蛭咬人不疼这一现象，发现水蛭唾液具有镇痛的作用，提供水蛭唾液在制备镇痛药物中的应用。

Description

水蛭唾液在制备镇痛药物中的应用

技术领域

本发明涉及镇痛药物技术领域，具体涉及水蛭唾液在制备镇痛药物中的应用。

背景技术

水蛭，俗名蚂蟥，在《神农本草经》中已有记载，具有很高的药用价值；在内陆淡水水域内生长繁殖，是中国传统的特种药用水生动物，其干制品泡制后中医入药，具有治疗中风、高血压、清瘀、闭经、跌打损伤等功效。近年新发现水蛭制剂在防治心脑血管疾病和抗癌方面具有特效。它在历史上以自然捕捞为主，因近年农药、化肥等滥用，及工农业“三废”对环境的污染，野生自然资源锐减，随着水蛭药用价值的深度开发，其市场需求潜力巨大。

作为体外吸血寄生虫，水蛭必须穿透宿主的体表并抑制宿主对损伤的反应，如肿胀，疼痛和炎症，才能确保不被发现并成功获得“血餐”。宿主被水蛭咬伤后是没有疼痛的感觉的，表明水蛭体内含有具有镇痛活性的物质并且在吸血过程中由口腔排出。从水蛭咬破宿主皮肤开始吸血到包餐后水蛭离开宿主皮肤，期间从水蛭分泌的镇痛物质可以使宿主毫无察觉，说明水蛭唾液具有较强的镇痛活性。

疼痛是机体的防御反应，它反应机体出现问题，及时治愈，远离疼痛，但是，现实生活中的疼痛反应严重影响了人们的生活。目前的止痛药种类有许多，人们购买也方便，但是止痛药的副作用也不可小觑，以中药为主要成分的止痛药可能具有较好的止痛效果而且副作用小。

目前对水蛭的研究主要集中于抗血栓活性，其镇痛的药用价值亟待开发。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供水蛭唾液在制备镇痛药物中的应用，水蛭唾液能有效抑制慢性疼痛、神经痛及热痛，是很好的天然来源的镇痛成分。

本发明的技术方案：

水蛭唾液在制备镇痛药物中的应用，所述水蛭唾液是水蛭口腔的分泌液；所述镇痛药物包括治疗神经病理性疼痛药物、治疗炎性疼痛药物、治疗癌症性疼痛药物、治疗糖尿病疼痛药物、治疗风湿病疼痛药物。

进一步，所述水蛭唾液的获得方法是：用6V，2.5～345Hz的多功能电磁按摩器紧贴于水蛭两侧嘴角进行5～10s刺激，可见无色粘稠液体从口腔中溢出，用唾液刺激液(150mMNaCl，1mM L-Arginine)反复冲洗，收集冲洗液，离心(4℃，12000g，1h)，真空冷冻干燥得到水蛭唾液冻干粉。

进一步，所述水蛭是菲牛蛭(Hirudinaria manillensis)。

进一步，所述镇痛药物是外涂药、内服药、注射药中的一种。

基于水蛭唾液在制备镇痛药物中的应用，本发明还提供一种镇痛药物，所述镇痛药物的主要成分是水蛭唾液或者水蛭唾液中的部分蛋白成分。

有益效果

本发明提供水蛭唾液在制备镇痛药物中的应用。目前对于水蛭的研究大多集中于其抗血栓的活性，但是介于水蛭咬人不疼这一现象，并没有明确结论。本发明为水蛭镇痛活性的研究奠定基础，初步确定水蛭唾液中含有具有镇痛作用的活性物质，对于动物模型中的热痛、神经痛、炎症痛都有良好的镇痛效果，水蛭唾液可以作为天然来源的镇痛新药进行开发。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一：获得水蛭唾液

用6V，2.5～345Hz的多功能电磁按摩器紧贴于菲牛蛭两侧嘴角进行5～10s刺激，可见无色粘稠液体从口腔中溢出，用唾液刺激液(150mM NaCl，1mM L-Arginine)反复冲洗，收集冲洗液，离心(4℃，12000g，1h)，真空冷冻干燥得到冻干粉。

将上述冻干粉用去离子水溶解，利用透析袋去除其中的NaCl和L-Arginine，将所得蛋白溶液再次真空冷冻干燥得到水蛭唾液冻干粉。用生理盐水溶解所得到的水蛭唾液冻干粉，得到浓度为10mg/mL的母液。

实施例二：醋酸引起的小鼠扭体阵痛实验

用生理盐水稀释实施例一所得到的母液，并用0.22μm滤器除菌。

取昆明小鼠50只，随机分成5组，即：生理盐水组、阿司匹林组20mg/Kg、水蛭唾液高剂量组(10mg/Kg)、中剂量组(2mg/Kg)、低剂量组(0.4mg/Kg)，每组10只。给药方式是尾静脉注射，给药15min后，各组小鼠腹腔注射0.5％乙酸溶液0.2ml/只。然后以腹部内陷、四肢伸展及臀部抬高为疼痛反应指标，观察30分钟内出现扭体反应的次数，比较组间差异，然后计算药物镇痛百分率。镇痛率％＝(生理盐水组扭体次数-给药组扭体次数)÷生理盐水组扭体次数×100％

实验结果如表1所示：

表1水蛭唾液扭体法镇痛结果

实施例一通过醋酸扭体实验证明了水蛭唾液对慢性疼痛有较好的镇痛效果。随着剂量升高，小鼠的扭体次数减少。

实施例三：热板阵痛实验

雌性小白鼠，放在(55±0.5)℃的金属热板上，挑选痛阈值在15～30s的小白鼠，根据痛阈值随机分生理盐水组、吗啡组2mg/Kg、水蛭唾液高剂量组(10mg/Kg)、中剂量组(2mg/Kg)、低剂量组(0.4mg/Kg)，每组10只。小鼠尾静脉注射给药，给药后于不同时间分别再测痛阈，以药后痛阈的提高值为指标，进行组间比较。结果见表2。

表2水蛭唾液热板法镇痛结果

实施例一通过热板镇痛实验证明了水蛭唾液对热痛有较好的镇痛效果，在检测时间内，镇痛效果先增强后减弱。

实施例四：皮肤创伤模拟实验

取昆明小鼠50只，随机分成5组，即：生理盐水组、吗啡组2mg/Kg、水蛭唾液高剂量组(10mg/Kg)、中剂量组(2mg/Kg)、低剂量组(0.4mg/Kg)，每组10只。给药方式是尾静脉注射，给药15min后，用刀片对小鼠的后足底部造成大小相同的创口，记录小鼠的舔足时间，共观察30min。

结果如表3所示：

表3水蛭唾液皮肤创口模拟实验结果

实施例四用刀片造成的创口，模拟了水蛭咬人的创面，通过记录小鼠舔创口的时间来观察水蛭唾液的镇痛效果。实验表明，随着剂量的增大，小鼠舔足时间减少，水蛭唾液注射进小鼠体内具有明显的镇痛效果。

本发明未详述之处，均为本技术领域技术人员的公知技术。最后说明的是，以上实施例仅用于说明解释本发明的技术方案而非限制，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (5)

1.水蛭唾液在制备镇痛药物中的应用，其特征在于：所述水蛭唾液是水蛭口腔的分泌液；所述镇痛药物包括治疗神经病理性疼痛药物、治疗炎性疼痛药物、治疗癌症性疼痛药物、治疗糖尿病疼痛药物、治疗风湿病疼痛药物。

2.根据权利要求1所述的水蛭唾液在制备镇痛药物中的应用，其特征在于：所述水蛭唾液的获得方法是：用6V，2.5～345Hz的多功能电磁按摩器紧贴于水蛭两侧嘴角进行5～10s刺激，可见无色粘稠液体从口腔中溢出，用唾液刺激液复冲洗，收集冲洗液，离心，真空冷冻干燥得到水蛭唾液冻干粉。

3.根据权利要求1所述的水蛭唾液在制备镇痛药物中的应用，其特征在于：所述水蛭是菲牛蛭。

4.根据权利要求1所述的水蛭唾液在制备镇痛药物中的应用，其特征在于：所述镇痛药物是外涂药、内服药、注射药中的一种。

5.一种镇痛药物，所述镇痛药物的主要成分是水蛭唾液或者水蛭唾液中的部分蛋白成分。