CN109490056B - 一种细胞三维培养基质胶腊包埋方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种细胞三维培养基质胶腊包埋方法，包括如下步骤：(1)包埋盒，设计并制作与包埋盒的内部容纳空间形态相契合的玻片；(2)将基质胶三维培养组织从Transwell上室切下置于质量百分比为4～6％多聚甲醛中固定6～24小时；(3)固定成功后，将基质胶三维培养组织从多聚甲醛中捞出，使基质胶三维培养组织胶原面吸附在玻片上；(4)将与包埋盒的内部容纳空间形态相契合并吸附有所述基质胶三维培养组织的玻片放入已铺有纱布的包埋盒内；(5)脱水、透明、浸蜡；(6)将粘附在玻片上的组织用组织切片刀从玻片上完整刮下来，进而将组织包埋。本发明方法包埋过程中组织不卷曲、不脱落、细胞也不掉落，适合推广使用。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，具体是一种细胞三维培养基质胶腊包埋方法。
背景技术
生物组织包埋法是生物技术领域常用的方法。传统的包埋方法有石腊包埋法和塑料包埋法。前者存在有制作过程长(达2天左右)。组织内脂质成份较不易保留、容易引起组织细胞收缩、对大多数酶的活性有不良影响、以及不能做源浮染色等不足；后者则存在有不能做免疫组织化学染色以及需要昂贵的配套器材等不足。七十年代开始应用的恒冷箱切片机虽然具有速度快和不仅能做酶组织化学染色、又能做免疫组织化学染色，但却存在有难以制作5μm以下的较薄切片和连续切片，以及因冷冻而造成细胞结构不清的缺陷。
现有的细胞三维培养基质胶腊包埋方法还存在以下不足：
1、基质胶由于构造疏松在脱水过程中容易卷曲。
2、组织在脱水、透明、浸腊过程中易脱落、丢失。
3、组织表层细胞易掉落，从而降低了观察，研究组织病变的速度和效率。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术的不足，适应现实发展，提供一种改进的细胞三维培养基质胶腊包埋方法。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种细胞三维培养基质胶腊包埋方法，包括如下步骤：
(1)取现有技术的常规包埋盒，设计并制作与所述包埋盒的内部容纳空间形态相契合的玻片；
(2)将基质胶三维培养组织从Transwell上室切下置于质量百分比为4～6％多聚甲醛中固定6～24小时；
(3)固定成功后，将所述基质胶三维培养组织从多聚甲醛中捞出，使所述基质胶三维培养组织胶原面吸附在所述玻片上；
(4)将与所述包埋盒的内部容纳空间形态相契合并吸附有所述基质胶三维培养组织的玻片放入已铺有纱布的包埋盒内；
(5)常规脱水、透明、浸蜡；
(6)将粘附在所述玻片上的组织用组织切片刀从所述玻片上完整刮下来，进而将组织常规包埋。
优选地，所述玻片是粘附玻片或者是普通盖玻片。
优选地，所述玻片的厚度为0.1mm。
优选地，所述多聚甲醛的质量百分比为5％。
优选地，所述基质胶三维培养组织在多聚甲醛中的固定时间为12小时。
优选地，所述包埋盒内已铺有的纱布的厚度为1～3mm。
与现有技术相比，本发明的优点和积极效果如下：
1、解决了基质胶三维培养组织蜡包埋过程中组织卷曲、脱落、细胞掉落的问题，使基质胶三维培养组织蜡包埋得以很好实现。
2、大大提高了基质胶三维培养组织切片的成功率，增加了实验检测方法的多样性。
附图说明
图1为本发明实施例中使用的包埋盒的总体结构示意图；
图2为本发明实施例中使用的粘附玻片的结构示意图；
图1～2中标记含义如下：
1、包埋盒，2、固定槽，3、固定扣，4、连接片，5、包埋盒盖板，6、卡扣，7、滤水口，8、卡槽，9、锁扣，10、粘附玻片。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施例做详细说明。
一种细胞三维培养基质胶腊包埋方法，包括如下步骤：
(1)取现有技术的常规包埋盒，对所述包埋盒进行开侧孔处理，结构如图1所示，有利于粘附玻片盖进包埋盒以后，各种试剂能够充分进入；设计并制作与所述包埋盒的内部容纳空间形态相契合的粘附玻片，其结构如图2所示；所述玻片的厚度为0.1mm，薄于市面上常规玻片的厚度0.2mm，作用在于防止所述玻片过重使三维培养组织变形；
(2)将基质胶三维培养组织从Transwell上室切下置于质量百分比为5％的多聚甲醛中固定12小时；
(3)固定成功后，将所述基质胶三维培养组织从多聚甲醛中捞出，使所述基质胶三维培养组织胶原面吸附在所述粘附玻片上；
(4)将与所述包埋盒的内部容纳空间形态相契合并吸附有所述基质胶三维培养组织的玻片放入已铺有2mm厚度纱布的包埋盒内；
(5)常规脱水、透明、浸蜡；
(6)将粘附在所述玻片上的组织用组织切片刀从所述玻片上完整刮下来，进而将组织常规包埋。
经是实验室研发人员观察记录，所述基质胶三维培养组织蜡包埋过程中组织不卷曲、不脱落、细胞也不掉落，基质胶三维培养组织蜡包埋得以很理想，大大提高了基质胶三维培养组织切片的成功率，增加了实验检测方法的多样性。
本发明方法操作步骤简单，适合在常规实验室推广使用。同时，所得包埋的生物组织样品能应用于块面成像结合连续薄切片的技术上，继而进行相关结构和功能研究。
上述实施例仅是本发明的较优实施方式，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修饰、修改及替代变化，均属于本发明技术方案的范围内。
Claims (4)
1.一种细胞三维培养基质胶蜡 包埋方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）取现有技术的常规包埋盒，设计并制作与所述包埋盒的内部容纳空间形态相契合的玻片，所述玻片的厚度为0.1mm，以防止所述玻片过重使三维培养组织变形；
（2）将基质胶三维培养组织从Transwell上室切下置于质量百分比为4~6%多聚甲醛中固定6~24小时；
（3）固定成功后，将所述基质胶三维培养组织从多聚甲醛中捞出，使所述基质胶三维培养组织胶原面吸附在所述玻片上；
（4）将与所述包埋盒的内部容纳空间形态相契合并吸附有所述基质胶三维培养组织的玻片放入已铺有纱布的包埋盒内；
（5）常规脱水、透明、浸蜡；
（6）将粘附在所述玻片上的组织用组织切片刀从所述玻片上完整刮下来，进而将组织常规包埋。
2.根据权利要求1所述的一种细胞三维培养基质胶蜡 包埋方法，其特征在于：所述多聚甲醛的质量百分比为5%。
3.根据权利要求1所述的一种细胞三维培养基质胶蜡 包埋方法，其特征在于：所述基质胶三维培养组织在多聚甲醛中的固定时间为12小时。
4.根据权利要求1所述的一种细胞三维培养基质胶蜡 包埋方法，其特征在于：所述包埋盒内已铺有的纱布的厚度为1~3mm。
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