CN109485692A - 一种提取鹿茸中活性蛋白的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种自鹿茸中提取蛋白的方法。本发明方法中，采用低浓度的乙醇水溶液作为提取溶剂，并使用真空冷冻干燥获得鹿茸蛋白提取物，在保持鹿茸蛋白生物活性的同时，提高了鹿茸蛋白的得率与纯度。

Description

一种提取鹿茸中活性蛋白的方法

技术领域

本发明涉及蛋白提取技术领域，特别涉及鹿茸蛋白提取物的制备方法。

背景技术

鹿茸为我国传统名贵药材，鹿茸性温而不燥，具有振奋和提高机体功能，对全身虚弱、久病之后患者，有较好的强身作用。《本草纲目》上称鹿茸“善于补肾壮阳、生精益血、补髓健骨”。现代药理学表明鹿茸具有抗衰老、抗氧化、抗肿瘤、提高机体免疫力等多种药理活性。经现代药物化学研究发现，鹿茸中含多种生理活性物质，包括磷脂、糖脂、胶脂、激素、脂肪酸、氨基酸、蛋白质及多种无机元素等成分，其中蛋白质、氨基酸类成分占鹿茸物质组成总成分的52%。其中蛋白质类成分是鹿茸具多种生物活性的主要物质基础。诸多实验研究表明，多肽、蛋白质是鹿茸中的主要有效成分，目前在该成分的提取工艺研究方面，多以水、乙醇、醋酸盐缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液和Tris－HCl缓冲溶液为提取溶剂，偏重酸性及中性环境；提取方式虽已由常见的静置提取、磁力搅拌提取发展到超声波辅助提取、高压及高压脉冲电场提取，但得到的蛋白质得率与纯度都不甚理想。鹿茸的提取工艺对鹿茸中鹿茸蛋白的保留有很大影响，虽然对鹿茸的研究历史悠久，但在鹿茸中蛋白质类成分提取工艺上仍存在得率少，纯度低等问题。随着现代研究的逐渐深入，发明一种得率多，纯度高的鹿茸蛋白提取方法成为了现阶段人们研究的重点。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种提取鹿茸中活性蛋白的方法，本发明先将鹿茸粉末进行脱脂处理，然后用低浓度乙醇进行提取，在低醇提取液中加入高浓度的乙醇使蛋白质沉淀析出，最后使用真空冷冻干燥获得鹿茸蛋白提取物，在保持鹿茸蛋白生物活性的情况下，获得了较高的提取效率和较高纯度的鹿茸蛋白；本发明提取的鹿茸蛋白得率达20.51%，蛋白纯度达92.06%。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种提取鹿茸中活性蛋白的方法，其方法包括如下步骤：

将鹿茸粉末，过80-100目筛；

将鹿茸粉末用乙醚作为提取剂（料液比为1：10）于30-35℃下索氏提取2-4 h，挥净乙醚后，再用95%乙醇作为提取剂（料液比为1：10）于70-80℃下索氏提取2-4h，挥净乙醇后得脱脂后鹿茸粉末；

将脱脂后鹿茸粉末用30-50%乙醇溶液作为提取剂（料液比为1：10）于70-80℃下进行索氏提取2-4h后，将提取液合并；

将合并提取液于4000-10000rpm下离心5-10 min，收集上清液，静置过夜，再将溶液乙醇浓度调高至75-85%，将溶液于4000-10000rpm下离心5-10 min得沉淀；

将沉淀于≤-40℃下进行真空冷冻干燥24-36 h，冷冻干燥至提取物呈棕色干硬状态，去除提取物中95-99%以上水分，即可得到淡黄色蓬松鹿茸蛋白提取物。

本发明所述的一种鹿茸蛋白提取物的制备方法与已有技术相比具蛋白提取得率大，蛋白纯度高等特点：本发明的方法溶剂无残留，在保持鹿茸蛋白生物活性的同时提高了鹿茸蛋白的提取效率和纯度。

具体实施方式：

为了更好地理解与实施，下面结合实施例详细说明本发明

实施例1：将鹿茸粉末过80目筛。首先将鹿茸粉末用乙醚作为提取剂（料液比为1：10）于35℃下索氏提取3 h，挥净乙醚后，用95%乙醇作为提取剂（料液比为1：10）于78℃下索氏提取3 h，挥净乙醇后得脱脂后鹿茸粉末。将脱脂后鹿茸粉末用40%乙醇溶液作为提取剂（料液比为1：10）于80℃下进行回流提取30 min，重复3次，将提取液合并。将合并提取液于4500rpm下离心5 min，收集上清液，静置过夜。再将溶液乙醇浓度调高至80%，将溶液于4500rpm下离心5 min得沉淀。将沉淀于-40℃下进行真空冷冻干燥24 h，冷冻干燥至提取物呈淡黄色蓬松状态，去除提取物中99%以上水分，即可得到鹿茸蛋白提取物。

Claims (6)

1.一种鹿茸蛋白提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将鹿茸粉末脱脂后，用低浓度乙醇溶液进行回流提取，并离心，收集上清液，静置过夜，再将溶液乙醇浓度调高直至蛋白析出，低温离心得沉淀，将沉淀进行真空冷冻干燥，即得到淡黄色蓬松鹿茸蛋白提取物；

其中所述低浓度乙醇溶液的醇浓度为30%-50%，调高乙醇浓度至75%-85%。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的鹿茸为梅花鹿茸或马鹿茸的各种干燥品；其中，所述鹿茸粉末粒度为80-100目。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的脱脂方法为鹿茸粉末用乙醚于30-35℃下索氏提取2-4 h后，挥净乙醚，再用95%乙醇于70-80℃下索氏提取2-4h，挥净乙醇后得脱脂鹿茸粉末；其中，所述鹿茸粉末的质量克数与溶剂的体积毫升数之比为1:10。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述回流提取的温度为70-80℃，回流提取的时间为30-60 min，回流提取的处理为重复回流3次。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离心的温度≤4℃，转速为4000-10000rpm，时间为5-20 min。

6.一种鹿茸蛋白提取物，其特征在于，所述提取物是由权利要求1-5中任一项所述方法提取得到的。