CN105411951A - 黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用。本发明人首次发现，黑柄炭角菌提取物具有较好的保湿功效，能有效抑制体外酪氨酸酶的活性，具有肌肤美白功效。黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用，拓宽了黑柄炭角菌的应用领域，提高了黑柄炭角菌的经济使用价值。

Description

黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用

技术领域

本发明属于化妆品领域，特别涉及一种黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用。

背景技术

黑柄炭角菌(Xylarianigripes(Kl.)Sacc.)系子囊菌纲球壳目炭棒菌科(又名炭角菌科)炭棒菌属(Xylariasp.)(又名炭角菌属)真菌。在温带、亚热带、热带地区皆有分布，故有许多别名如乌灵参、鸡茯苓、地炭棍等，在广东地方名鸡茯苓、吊金钟，云南地方名鸡土枞蛋、四川地方名雷震子等。其性味甘平，无毒，通常在死亡的或走向衰败的白蚁巢穴中生长而被发现。黑柄炭角菌菌丝体生长到一定时期，部分密集纽结形成菌索，突出地面形成子座，部分菌丝体密集形成菌核，并逐渐脱离菌丝体，悬于地下白蚁巢腔或菌圃上。菌丝体、菌索、菌核都具有补气固肾、镇静安神等功效，具有很高的食用价值和药用价值。菌丝体干燥粉十几年前已开发成药品乌灵胶囊(国药准字Z19990048)。

研究表明，黑柄炭角菌(乌灵参)不同组织营养和药用成分主要有(1)氨基酸类：含有约16种水解氨基酸，其中必需氨基酸7种，必需氨基酸占氨基酸总量(E/T)39.87％～57.60％；(2)多糖类：乌灵菌粉含多糖为10％左右，其多糖主要由甘露醇、葡萄糖、果糖、鼠李糖和乳糖等构成；(3)核苷类，如腺苷、尿苷等；(4)钙、镁、铁、锌、锰等十几种矿物质与微量元素；(5)其他：如龚庆芳等人从发酵乌灵菌粉分离得到的1-(2,6-二羟基苯)-3-羟基-丁酮等。

目前黑柄炭角菌研究已表明其具有抗自由基、抗氧化性、抗衰老作用，其应用也多集中在药品、食品、保健品等行业，而在化妆品中，其提取物具有保湿、美白的活性功效未见报道。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种美白保湿化妆品，是基于上述黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用设计得到，其含有黑柄炭角菌提取物。

本发明的目的通过下述技术方案实现：黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用。这是基于经本发明人研究发现，黑柄炭角菌提取物具有较好的保湿功效，能有效抑制体外酪氨酸酶的活性，具有肌肤美白功效，从而提出的发明创造。

所述的黑柄炭角菌提取物是指通过任何适当方式从黑柄炭角菌，包含黑柄炭角菌菌丝、菌索、菌核中的任何一种或几种中提取出的含有有效成分的提取物；优选为通过以下方法提取得到：通过黑柄炭角菌发酵或以溶剂浸泡黑柄炭角菌，提取，过滤，滤液任选经过纯化步骤，制成溶液或挥干溶剂制成干粉。

所述的发酵为液态发酵、半固态发酵和固态发酵中的一种或至少两种组合发酵。

所述的发酵中所用的培养基为适合黑柄炭角菌生长的培养基。

所述的液态发酵中所用的培养基的组成优选如下：葡萄糖90g/L、硫酸铵3g/L、三水磷酸氢二钾1g/L、谷氨酸4g/L、柠檬酸三铵2g/L、七水硫酸亚铁5mg/L、硫酸锌4mg/L，pH5～5.5。

所述的溶剂为水和有机溶剂中的一种或两种。

所述的水包括蒸馏水、去离子水和自来水等。

所述的有机溶剂为醇和酯中的一种或两种。

所述的醇包括乙醇和多元醇等。

所述的酯包括乙酸乙酯等。

所述的提取的方法选自以下一种或至少两种组合得到的步骤：浸提、煎煮、超声提取、膜过滤、离心过滤、回流和超临界。

所述的提取优选为如下的方式①或②：

①先超声提取，得到的提取液浓缩后，加入乙醇沉淀，过滤，滤液即是；

②先超声提取，过滤，得到滤液I和滤渣；再用水煎煮滤渣，过滤，得到滤液II，将滤液I和滤液II合并得到。

所述的超声提取的条件优选为于50～90℃、100～500W提取60～120min；更优选为80℃、120W提取90min。

所述的乙醇的用量按加入乙醇后乙醇的终浓度为体积百分比60～70计，优选为按65％计。

所述的沉淀的条件优选为密封静置12小时。

所述的纯化的方法选自以下一种或至少两种组合得到的步骤：萃取、离心过滤、膜分离和柱层析。

所述的纯化的步骤优选如下：将提取液过大孔吸附树脂，用体积百分比50％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，去除乙醇即可。

所述的大孔吸附树脂优选为D101大孔吸附树脂。

所述的美白保湿化妆品的形式为膏霜剂、乳剂(水包油型乳液、油包水型乳液)、溶液剂、膜剂、悬浮剂、凝胶、粉状、气雾或喷雾。这些剂型可以通过本领域所熟知的任何常用方法来制备。

所述的美白保湿化妆品可以包含其他能够提高所述组合物主要效果且不影响主要效果的成分。具体的，所述的美白保湿化妆品中还包括除黑柄炭角菌提取物之外的保湿剂、美白剂、抗氧化剂、维生素、多肽、氨基酸、润肤剂、表面活性剂、紫外吸收剂、防腐剂、消毒剂、pH调节剂、有机和/或无机颜料、调味剂、冷却剂、止汗剂等。

所述的黑柄炭角菌提取物占所述化妆品总质量的0～100％，不含端点值0和100％；优选0.01％～50％，更优选1％～20％。

一种美白保湿化妆品，是基于上述黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用设计得到，其含有黑柄炭角菌提取物和化妆品领域可接受的辅料。

所述化妆品领域可接受的辅料可以选自：溶剂、增溶剂、防腐剂、抗氧剂、pH调节剂、促渗剂、脂质体、保湿剂、增稠剂、螯合剂、肤感调节剂、表面活性剂、乳化剂、推进/抛射剂、香精、色素，以及其他功效添加剂。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

本发明人首次发现，黑柄炭角菌提取物具有较好的保湿功效，能有效抑制体外酪氨酸酶的活性，具有肌肤美白功效。这一研究发现，拓宽了黑柄炭角菌的应用领域，提高了黑柄炭角菌的经济使用价值。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1-4中所使用的黑柄炭角菌采自广东。

实施例1

黑柄炭角菌菌核用无菌水冲洗干净，再用体积百分比75％的酒精表面灭菌，超净台上切块成约2mm×2mm大小块状，接种到改良PDA斜面培养基(在PDA基础培养基中添加酵母浸膏0.45％，磷酸二氢钾0.5％，皆为质量比)上，于25℃～30℃常规培养扩大后进入发酵罐中进行发酵，接种量在体积百分比10％左右，发酵时间2-3天，发酵工艺参数为pH值为5.0～7.0，搅拌速度为120～250rpm，通气量为1～4VVM，发酵温度为25℃～30℃，罐压0.03～0.05MPa，发酵培养基组成为每升含葡萄糖90g、硫酸铵3g、三水磷酸氢二钾1g、谷氨酸4g、柠檬酸三铵2g、七水硫酸亚铁5mg、硫酸锌4mg，调pH5-5.5。发酵结束后，离心分离收集菌丝及发酵滤液。发酵滤液经超滤膜(安徽普朗膜技术有限公司，型号PL-G8-1000管式超滤膜)过滤后，收集的滤液为黑柄炭角菌提取物。

实施例2

适量黑柄炭角菌菌丝(实施例1制备得到)粉碎，过80目筛，加入相当于菌丝30倍质量的饮用水，加热至80℃，于此温度下用超声波(功率为120W)提取90分钟，过滤，得滤液，浓缩至密度为1.02，得到黑柄炭角菌提取物。

实施例3

适量黑柄炭角菌菌核粉碎，过80目筛，加入相当于菌核20倍质量的饮用水，加热至80℃，于此温度下用超声波(功率为120W)提取90分钟，过滤，得滤液，浓缩至适量，放置冷却，在搅拌状态下缓慢加入体积百分比95％的乙醇，使最终得到的混合液中乙醇浓度为体积百分比65％，密封12小时，使沉淀完全，取上清液，减压回收乙醇，浓缩，再用0.45μm微孔滤膜过滤，得到黑柄炭角菌提取物。

实验例4

适量黑柄炭角菌菌索粉碎，过80目筛，加入相当于菌索20倍质量的去离子水，加热至80℃，于此温度下用超声波(功率为120W)提取60分钟，过滤。滤渣加入20倍质量的去离子水加热煮沸，保持微沸1小时，过滤，得滤液。合并2次滤液浓缩至适量，放置冷却，离心后取上清液。加入到预处理好的D101大孔吸附树脂，用3倍树脂柱体积的浓度为体积百分比50％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收乙醇，收集残液得到黑柄炭角菌提取物。也可进一步真空干燥或冷冻干燥保存，使用前用去离子水稀释后配置待用。

效果实施例

(1)保湿效果的检测：皮肤角质层水合率试验：测试原理是以电容器为仪器探头，由于水是皮肤上介质常数最大的物质，当皮肤水分含量发生变化时，皮肤的电容值也发生变化，所以可以通过测定皮肤电容值，分析皮肤表面水分含量。常用的仪器是CorneometerCM825。通过测量使用产品前后皮肤角质层电容值的变化来衡量角质层含水量的变化，从而来评价化妆品的保湿功效此种方法对皮肤角质层的水分含量进行定量化，能够灵敏地反应皮肤水分含量的变化，且重现性好，是目前保湿化妆品功效评价常用的方法之一。

实验方法：在应试者左右前臂屈侧划出3×3cm²大小的正方形实验区域，以左臂作为保湿品的测试区域，右臂相应的对称区域为空白对照，然后用CorneometerCM825测试检测每个试验部位的水分含量，分别重复5次，得出平均值。

保湿效果的检测结果如表1所示：

表1

	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4
					0h	38.8±3.3d	37.3±5.3d	40.9±6.9d	40.9±5d
1h	65.4±5.2a	58.7±3.7a	58.3±6.3a	56.2±5.9a
					2h	60.6±6.3b	55.6±4.3ab	53.1±6.0b	50.5±5.9b
4h	58.4±3.6b	53.6±4.8bc	50.9±5.4b	48.1±3.3bc
					6h	52.4±8.1c	50.9±5.6bc	46.5±4.7c	47.0±5.2bc
8h	53.3±8.7c	49.9±5.5c	45.2±4.2c	45.1±7.2c

注：不同小写字母表示数值在P<0.05水平差异显著，a表示纵向对比。

结论：不同实施例得到的黑柄炭角菌提取物无论即时补水保湿(1h、2h)还是中长效补水保湿(4h、6h、8h)均高于对照组(0h)，证明黑柄炭角菌提取物具有保湿效果。

(2)美白效果的检测：酪氨酸酶活性抑制实验：测试原理：酪氨酸酶对多巴进行催化反应，可生成多巴醌，多巴醌最大吸收波长在475nm，通过测量475nm波长的吸光率，可以反应出生成多巴醌的浓度的大小。当酪氨酸酶与美白活性成分同时存在溶液中时，酪氨酸酶的催化活性会受到一定程度的抑制，从而减少多巴醌的生成。根据前后吸光度对比，可判定美白活性成分对酪氨酸酶活性的抑制程度，从而评估该种美白成分在体外的美白功效。

试剂：试剂1：PBS(磷酸盐标准缓冲溶液，分别称取先在110℃～130℃干燥2～3h的磷酸二氢钾(KH₂PO₄)3.388g和磷酸氢二钠(Na₂HPO₄)3.533g溶于水并在容量瓶中稀释至1L)，pH值6.86；试剂2：多巴溶液(用PBS配制，质量分数为0.03％)；试剂3：酪氨酸酶溶液(用PBS配制，浓度200μg/ml)；试剂4：黑柄炭角菌提取物样品溶液(实施例1、实施例2、实施例3、实施例4，相同稀释倍数)。

实验方法：A测试样：3mlPBS+0.5ml酪氨酸酶溶液；B测试样：PBS；C测试样：1ml样品溶液+2mlPBS+0.5ml酪氨酸酶溶液；D测试样：1ml黑柄炭角菌提取物样品溶液+2.5mlPBS。A、B、C、D测试样品液同时配制好后立即分别添加多巴溶液0.5ml，在25℃恒温反应5min，测量475nm处的吸光度值。每组试验平行重复3次，取平均值。

酪氨酸酶抑制率的计算方法：

酪氨酸酶抑制率％＝[(A-B)-(C-D)]/(A-B)×100；

酪氨酸酶活性抑制实验的测定结果，如表2所示：

表2

	抑制率
		实施例1	53.2％
实施例2	49.7％
		实施例3	51.8％
实施例4	50.4％

应用实施例

(1)面膜配方如表3所示(按质量百分比计)：

表3

面膜制作工艺如下：

①将A相中的卡波姆、透明质酸钠和甘油混合后加热到70℃搅拌溶解均匀；

②将B相中的丙二醇和对羟基苯甲酸乙酯混合后加热到70℃搅拌溶解均匀；

③将B相逐步加到A相中，均质3分钟，加入C相各成分，边加边搅拌；

④搅拌冷却到50℃加入D相各成分，搅拌冷却到35℃，得到面膜。

(2)洗面奶配方如表4所示(按质量百分比计)：

表4

洗面奶制作工艺如下：

①将A相中脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、十二烷基硫酸钠、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、椰油酰胺丙基甜菜碱、十二烷基二甲基氧化铵、丙三醇和甲基异噻唑啉酮溶于去离子水，边搅拌边加热至70℃；

②将B相中羊毛脂和硬脂酸混合后边搅拌边加热至70℃；

③将步骤②所得物缓慢加入步骤①所得物中，65℃搅拌均质降温到50℃，将C相中的黑柄炭角菌提取物加入，继续搅拌，

④待温度降至35℃后停止搅拌，出料，即得黑柄炭角菌提取物洗面奶。

(3)保湿美白霜的制备，配方如表5所示(按质量百分比计)：

表5

保湿美白霜的制作工艺如下：

①在油相锅中加入A相中的辛酸/癸酸甘油三酯、霍霍巴油、牛油果树果脂、环聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、甘油硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇、PEG-20甲基葡糖半硬脂酸酯和甲基葡糖半硬脂酸酯，边搅拌边加热至85℃；

②在水相锅中加入B相中各成分，边搅拌边加热至85℃；

③对乳化锅抽真空后分别抽油相和水相到乳化锅中搅拌均质；

④待温度降至65℃后加入C相三乙醇胺再均质，冷却至45℃后加入D相中的甲基异噻唑啉酮，在搅拌状态下加入E相黑柄炭角菌提取物；

⑤待温度降至35℃后停止搅拌，出料，得到黑柄炭角菌提取物美白保湿霜。

分别由实施例1～4的黑柄炭角菌提取物按上述方法制得保湿美白霜分别命名为保湿美白霜1、保湿美白霜2、保湿美白霜3、保湿美白霜4。

将上述制备得到的保湿美白霜进行临床试用观察。

1.志愿者条件:

(1)女性，年龄在18～40岁之间(妊娠期或哺乳期妇女除外)；面部不同程度的色素沉着、暗黄、干燥等问题皮肤30例。

(2)无严重系统疾病、无免疫缺陷或自身免疫性疾病者，受试部位没有接受过皮肤治疗、美容以及其他可能影响结果的测试；

(3)无活动性过敏性疾病者；

(4)无体质高度敏感者；

(5)近一个月内未曾使用激素类药物及免疫抑制剂者；

(6)现在或最近三个月受试部位未参加其他临床实验者。

观察方法：每天晚上睡觉前清洁皮肤后，涂上上述保湿美白霜。连续使用35天为一个疗程。疗效标准：(1)显效：色素暗黄消退达90％以上，皮肤有明显的美白润泽光滑感；(2)有效：色素暗黄消退50％以上，皮肤较美白润泽光滑；(3)无效：治疗前后无变化。结果如表6所示：

表6

	显效	有效	无效	总有效率
					美白保湿霜1	24	3	3	90.00％
美白保湿霜2	20	5	5	83.33％
					美白保湿霜3	25	3	2	93.33％
美白保湿霜4	22	4	4	86.67％

在观察中的30例(每组)连续使用35天中，无皮肤刺激症状，未引发红斑、脱屑、刺痛及灼热等不良反应。同时整体效果评估结果表明，黑柄炭角菌提取物能够显著改善面部细纹，肌肤更柔滑，显得更为年轻。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用。

2.根据权利要求1所述的黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用，其特征在于：所述的黑柄炭角菌提取物通过以下方法提取得到：通过黑柄炭角菌发酵或以溶剂浸泡黑柄炭角菌，提取，过滤，滤液任选经过纯化步骤，制成溶液或挥干溶剂制成干粉。

3.根据权利要求2所述的黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用，其特征在于：所述的发酵为液态发酵、半固态发酵和固态发酵中的一种或至少两种组合发酵。

4.根据权利要求3所述的黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用，其特征在于：所述的液态发酵中所用的培养基的组成如下：葡萄糖90g/L、硫酸铵3g/L、三水磷酸氢二钾1g/L、谷氨酸4g/L、柠檬酸三铵2g/L、七水硫酸亚铁5mg/L、硫酸锌4mg/L，pH5～5.5。

5.根据权利要求2所述的黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用，其特征在于：

所述的溶剂为水和有机溶剂中的一种或两种；

所述的提取的方法选自以下一种或至少两种组合得到的步骤：浸提、煎煮、超声提取、膜过滤、离心过滤、回流和超临界；

所述的纯化的方法选自以下一种或至少两种组合得到的步骤：萃取、离心过滤、膜分离和柱层析。

6.根据权利要求5所述的黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用，其特征在于：

所述的水为蒸馏水、去离子水或自来水；

所述的有机溶剂为醇和酯中的一种或两种；

所述的提取为如下的方式①或②：

①先超声提取，得到的提取液浓缩后，加入乙醇沉淀，过滤，滤液即是；

②先超声提取，过滤，得到滤液I和滤渣；再用水煎煮滤渣，过滤，得到滤液II，将滤液I和滤液II合并得到；

所述的纯化的步骤如下：将提取液过大孔吸附树脂，用体积百分比50％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，去除乙醇即可。

7.根据权利要求6所述的黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用，其特征在于：

所述的超声提取的条件为于50～90℃、100～500W提取60～120min；

所述的乙醇的用量按加入乙醇后乙醇的终浓度为体积百分比60～70％计；

所述的沉淀的条件为密封静置12小时。

8.根据权利要求1～7任一项所述的黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用，其特征在于：

所述的美白保湿化妆品的形式为膏霜剂、乳剂、溶液剂、膜剂、悬浮剂、凝胶、粉状、气雾或喷雾；

所述的黑柄炭角菌提取物占所述化妆品总质量的0～100％，不含端点值0和100％。

9.根据权利要求8所述的黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用，其特征在于：所述的美白保湿化妆品中还包括除黑柄炭角菌提取物之外的保湿剂、美白剂、抗氧化剂、维生素、多肽、氨基酸、润肤剂、表面活性剂、紫外吸收剂、防腐剂、消毒剂、pH调节剂、有机和/或无机颜料、调味剂、冷却剂和止汗剂中的一种或两种。

10.一种美白保湿化妆品，其特征在于：是基于权利要求1～9任一项所述的黑柄炭角菌提取物在美白保湿化妆品中的应用设计得到，其含有黑柄炭角菌提取物和化妆品领域可接受的辅料。