CN109475597B - 眼用药物组合物 - Google Patents

眼用药物组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN109475597B
CN109475597B CN201780033996.8A CN201780033996A CN109475597B CN 109475597 B CN109475597 B CN 109475597B CN 201780033996 A CN201780033996 A CN 201780033996A CN 109475597 B CN109475597 B CN 109475597B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pharmaceutical composition
aflibercept
formulations
ophthalmic pharmaceutical
polyoxyethylene
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201780033996.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109475597A (zh
Inventor
林光津
河秉缉
朴娜院
朴镕涉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shentiantang Pharmaceutical
Original Assignee
Shentiantang Pharmaceutical
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shentiantang Pharmaceutical filed Critical Shentiantang Pharmaceutical
Publication of CN109475597A publication Critical patent/CN109475597A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109475597B publication Critical patent/CN109475597B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/179—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents

Abstract

本发明提供一种具有一定pH值的眼用药物组合物，其包含作为有效成分的阿柏西普；和醋酸盐缓冲剂，其中该眼用药物组合物不包含离子张力剂。本发明的眼用药物组合物可明显减少二聚体杂质和多聚体杂质的形成，并可在加速条件和胁迫条件下以及在冷藏条件下长时间保持高水平的生物活性。

Description

眼用药物组合物
技术领域
本发明涉及一种包含阿柏西普作为有效成分的眼用药物组合物。更具体地，本发明涉及一种具有一定pH值的、含有阿柏西普的眼用药物组合物，其包含醋酸盐缓冲剂并且不含离子张力剂。
背景技术
已知血管生成涉及诸如实体瘤、增生性视网膜病、年龄相关性黄斑变性(AMD)和类风湿性关节炎的各种疾病的发病机理。血管内皮生长因子(VEGF)是血管生成所必需的因子之一，其在人类癌症中表达，并在肿瘤新生血管形成中起重要作用。此外，在眼液中高浓度VEGF的存在与糖尿病和其他缺血性视网膜病患者的血管形成活性高度相关(Aiello LP等，N Engl J Med 1994；331：1480-1487)，并且其使得生长因子定位在年龄相关性黄斑变性(AMD)患者的脉络膜新生血管膜中(Amin R1等，Invest Ophthalmol Vis Sci.1994年7月；35(8)：3178-88)。因此，抗VEGF抗体或VEGF抑制剂可能是治疗实体瘤和眼睛血管生成相关疾病的有希望的候选药物。
阿柏西普(VEGF抑制剂之一)是重组融合蛋白，其由与人IgG1免疫球蛋白的Fc部分融合的VEGF结合部分组成，所述VEGF结合部分来自人VEGF受体1和2的细胞外结构域。在美国和欧洲阿柏西普(商品名EyleaTM)已经被批准用于治疗湿性黄斑变性。
在非最佳条件下，在含蛋白质的药物组合物中会发生物理化学修饰。特别是，诸如蛋白质浓度、缓冲剂类型、稳定剂的类型和浓度、有机助溶剂的类型和浓度、盐的浓度、pH、温度和与空气接触等因素显著影响蛋白质的氧化、脱酰胺化、异构化和聚合。这些修饰引起蛋白质的聚集，并产生蛋白质的片段、异构体，使得可能降低其生物活性。特别是，蛋白质聚集是不溶性微粒形成的主要内部因素，可能会引起副作用，例如免疫反应。而且，由于眼用制剂的特性，应严格限制或控制不溶性颗粒。
韩国专利第10-1406811号(国际专利公开号WO 2007/149334)公开了pH值为5.8-7.0的眼用制剂和冻干制剂，其包含阿柏西普；有机助溶剂，例如聚山梨醇酯；选自氯化钠或氯化钾的离子张力剂；磷酸钠缓冲剂；和稳定剂，例如蔗糖，以上组分各自具有特定浓度。韩国专利第10-1406811号中公开的制剂可以应用于适于玻璃体内给药的预灌注式注射器。
已经描述了韩国专利第10-1406811号中公开的眼用制剂和冻干制剂具有抑制由阿柏西普的聚集、片段化和异构化所导致的杂质和副产物产生的作用。然而，所述制剂的问题在于，在胁迫条件下，例如在40℃或更高的高温条件下，稳定化阿柏西普的作用明显降低(韩国专利公开第10-2017-0000356号)。
发明内容
技术问题
本发明人进行了各种研究以开发稳定的眼用制剂，该制剂可以在加速条件和胁迫条件下以及在冷藏条件下使阿柏西普衍生的杂质(二聚体杂质或多聚体杂质)的形成最小化。特别地，本发明人进行了各种制剂研究，包括缓冲剂、等渗剂、pH范围等。结果，本发明人发现使用诸如NaCl的离子张力剂导致形成衍生自阿柏西普的二聚体杂质或多聚体杂质。此外，本发明人发现，当通过控制糖或糖醇的量来调节张力而不使用诸如NaCl的离子张力剂来调节张力时，通过使用特定的缓冲剂(醋酸盐缓冲剂)将pH调节为pH5.2-5.7，可以显著降低二聚体杂质和多聚体杂质的形成，生物活性可以长时间保持在高水平。
因此，本发明提供一种含有阿柏西普的pH值为5.2-5.7的眼用药物组合物，其包含醋酸盐缓冲剂并且不含离子张力剂。
技术方案
一方面，本发明提供了一种眼用药物组合物，其pH范围为pH5.2-5.7，其包含在水性介质中的(a)治疗有效量的阿柏西普；(b)5-50mM的醋酸盐缓冲剂；(c)6-12w/v％的糖或3-7w/v％的糖醇；和(d)0.01-0.1w/v％的表面活性剂，其中该眼用药物组合物不含离子张力剂。
阿柏西普的浓度可以为20-50mg/ml。
醋酸盐缓冲剂可以是醋酸钠缓冲剂。醋酸盐缓冲剂的浓度可以优选为约10-20mM，更优选为约10-15mM。
糖可以优选为蔗糖、海藻糖或其混合物，更优选为蔗糖或海藻糖，最优选为蔗糖。糖的浓度可以为约6-8w/v％。此外，糖醇可以是山梨糖醇。糖醇的浓度可以为约5w/v％。
表面活性剂可以是聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物或其混合物，优选聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯或聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯，更优选聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯。在一个实施方案中，表面活性剂的浓度可以为约0.03w/v％。
在本发明的一个实施方案中，提供了一种眼用药物组合物，其pH值约为5.5，其由40mg/ml的阿柏西普、10-15mM的醋酸钠缓冲剂、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯和水性介质组成。
在本发明的另一个实施方案中，提供了一种眼用药物组合物，其pH值约为5.5，其由40mg/ml的阿柏西普、10-15mM的醋酸钠缓冲剂、8w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯和水性介质组成。
有益效果
本发明已经发现，使用离子张力剂例如NaCl不仅会导致形成由阿柏西普衍生的二聚体杂质或多聚体杂质，还会影响阿柏西普的生物活性。在本发明的眼用药物组合物中，通过控制糖或糖醇的量来调节张力，而不使用诸如NaCl的离子张力剂；通过使用醋酸盐缓冲剂将pH调节为pH5.2-5.7，从而能够在加速条件和胁迫条件下以及在冷藏条件下减少二聚体杂质和多聚体杂质的形成，并长期保持高水平的生物活性。因此，本发明的眼用药物组合物改善了物理化学稳定性和生物稳定性，从而能够适当地应用于用于患有各种眼科疾病(例如湿性年龄相关性黄斑变性和糖尿病性黄斑水肿)的患者的玻璃体内给药和眼内给药的预灌注式注射器。
附图说明
图1显示了通过使用本发明的眼用药物组合物进行人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的血管形成实验而获得的结果。
具体实施方式
本发明提供一种眼用药物组合物，其pH值范围为5.2-5.7，其包含在水性介质中的(a)治疗有效量的阿柏西普；(b)5-50mM的醋酸盐缓冲剂；(c)6-12w/v％的糖或3-7w/v％的糖醇；和(d)0.01-0.1w/v％的表面活性剂，其中该眼用药物组合物不含离子张力剂。
在本发明药物组合物中用作有效成分的阿柏西普可以以治疗有效量包含在药物组合物中。例如，阿柏西普的浓度可以为10-50mg/ml，优选为20-50mg/ml，更优选浓度约为40mg/ml，但不限于此。
水性介质包括能够与醋酸盐缓冲剂一起提供缓冲液的任何水性介质。例如，水性介质包括注射用水、无菌蒸馏水等。
醋酸盐缓冲剂包括碱金属醋酸盐或碱土金属醋酸盐。例如，醋酸盐缓冲剂可以是醋酸钠缓冲剂。通过控制缓冲剂中的醋酸根与金属(例如钠)之间的比值，可以提供所需的pH值。醋酸盐缓冲剂的浓度可以为5-50mM，优选为5-30mM，更优选为约10-20mM，最优选为约10-15mM，但不限于此。
糖可以优选为蔗糖、海藻糖或其混合物，更优选为蔗糖或海藻糖，最优选为蔗糖。糖的浓度可以为6-12w/v％，优选为6-10w/v％。此外，本发明已经发现，当糖的浓度为约6-8w/v％时，该药物组合物显示出与生理盐水的重量渗透摩尔浓度(约290毫渗透摩尔/千克(即mOsmol/kg))相似的重量渗透摩尔浓度以及出色的稳定性。因此，最优选地，糖的浓度可以为约6-8w/v％。此外，糖醇可以是山梨糖醇。糖醇的浓度可以约为5w/v％。
表面活性剂可以是聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如，聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80等)、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(例如，泊洛沙姆188TM等)或其混合物，优选聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯(聚山梨醇酯20)或聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯(聚山梨醇酯80)，更优选聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯。表面活性剂的浓度为0.01-0.1w/v％。在一个实施方案中，聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯的浓度可以优选为0.01-0.03w/v％，更优选浓度为约0.03w/v％。在另一个实施方案中，聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物的浓度可以优选为0.03-0.1w/v％。
在本发明的一个实施方案中，提供了一种眼用药物组合物，其pH值约为5.5，其由40mg/ml的阿柏西普、10-15mM的醋酸钠缓冲剂、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯和水性介质组成。
在本发明的另一个实施方案中，提供了一种眼用药物组合物，其pH值约为5.5，其由40mg/ml的阿柏西普、10-15mM的醋酸钠缓冲剂、8w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯和水性介质组成。
可以将本发明的药物组合物填充到玻璃小瓶中。此外，本发明的药物组合物可以以预灌注式注射器的形式提供。
将参考以下实施例进一步详细描述本发明。这些实施例仅用于说明目的，并不旨在限制本发明的范围。
实施例：眼用组合物的制备和评估
(1)眼用组合物的制备
根据表1和表2中所示的组分和量制备眼用组合物。通过改变醋酸钠缓冲剂中钠和醋酸根之间的比值或通过改变柠檬酸钠缓冲剂中钠和柠檬酸根之间的比值来控制组合物的各个pH值。特别地，在制备具有各个pH值的醋酸钠缓冲液或柠檬酸钠缓冲液后，在搅拌条件下将阿柏西普、糖(蔗糖或海藻糖)或糖醇(山梨糖醇)和聚山梨醇酯20溶解于其中以制备各个制剂。通过使用磷酸钠作为缓冲剂并另外溶解氯化钠作为离子张力剂来制备制剂1-13。并且，通过另外溶解氯化钠作为离子张力剂来制备制剂1-14、2-13和2-14。每个所得制剂的重量渗透摩尔浓度如表1和表2中所示。
表1
Figure BDA0001887410470000061
Figure BDA0001887410470000071
表2
Figure BDA0001887410470000072
Figure BDA0001887410470000081
(2)在胁迫条件和加速条件下对衍生自阿柏西普的片段、二聚体和多聚体的形成进行评估
将上述制备的每个制剂在25℃或40℃下在3ml的玻璃小瓶中储存8周后，通过尺寸排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)和动态光散射(DLS)分析测量阿柏西普(单体)及其片段、二聚体或多聚体的含量。SEC-HPLC分析的条件如下：柱：TSK-GEL G3000SWXL，7.8×30(ID mm×L cm)(日本东曹，目录号#08541)，流动相：含有250mM KCl和0.05％NaN3的200mM磷酸钾缓冲液(pH 6.2)，流速：0.5ml/min，波长：280nm。通过用Zetasizer Nano系统(马尔文)测定Z-平均粒径(Z-Average)和PDI(多分散指数)来进行DLS分析。
SEC-HPLC分析结果如表3和表4所示。DLS分析结果如表5和表6所示。
表3
SEC-HPLC分析结果(在25℃下储存8周)
Figure BDA0001887410470000082
Figure BDA0001887410470000091
*N.D.：未检测到
表4
SEC-HPLC分析结果(在40℃下储存8周)
Figure BDA0001887410470000092
Figure BDA0001887410470000101
*N.D.：未检测到
表5
DLS分析结果(在25℃下储存8周)
Figure BDA0001887410470000111
Figure BDA0001887410470000121
表6
DLS分析结果(在40℃下储存8周)
Figure BDA0001887410470000122
Figure BDA0001887410470000131
如表3至表6的结果所示，可以看出，当WO 2007/149334中公开的制剂(即制剂1-13)在加速条件(25℃)下和胁迫条件(40℃)下储存8周时，以高水平形成衍生自阿柏西普的二聚体杂质和多聚体杂质。此外，在通过使用与已知制剂(即制剂1-13)中相同的离子张力剂和糖并使用如制剂1-3中所用的醋酸钠缓冲液调节pH值而制备的制剂1-14和2-13中，以与已知制剂(即制剂1-13)相似的水平形成衍生自阿柏西普的二聚体杂质和多聚体杂质。根据这些结果，可以证实通过使用离子张力剂(例如，NaCl)，衍生自阿柏西普的二聚体杂质和多聚体杂质的形成显著增加。此外，还可以证实，在含有柠檬酸盐缓冲剂而不是醋酸盐缓冲剂的制剂(即制剂2-11和2-12)的情况下，柠檬酸盐起离子盐的作用，从而显著增加了衍生自阿柏西普的二聚体杂质和多聚体杂质的形成。
将在不使用离子张力剂的情况下通过增加糖的量而制备的具有各种pH值的眼用制剂(即，制剂1-1至1-12和制剂2-1至2-10)在加速条件(25℃)下和胁迫条件(40℃)下储存8周，然后测量衍生自阿柏西普的二聚体杂质和多聚体杂质。结果，pH值为5.2-5.7并且不含离子张力剂的制剂，即制剂1-2、1-3、1-4、1-8、1-9、1-10以及2-1至2-10显示出明显减少的衍生自阿柏西普的二聚体杂质和多聚体杂质的形成。特别是，pH值为5.5且不含离子张力剂的制剂，即制剂1-3、1-9、2-2、2-3、2-4、2-7、2-8和2-9显示出显著减少的衍生自阿柏西普的二聚体杂质和多聚体杂质的形成。此外，除了使用糖醇(山梨糖醇)代替糖之外，使用与制剂1-3中相同的组分制备的制剂1-15，也显示出显著减少的衍生自阿柏西普的二聚体杂质和多聚体杂质的形成。其中，制剂1-15、2-2、2-3、2-4、2-7、2-8和2-9表现出在滴眼制剂中常规可接受的有效重量渗透摩尔浓度范围，即约230-320mOsmol/kg的重量渗透摩尔浓度。特别是，由于制剂2-3和2-8表现出约270-310mOsmol/kg的重量渗透摩尔浓度范围，该范围与生理盐水的重量渗透摩尔浓度(290mOsmol/kg)相容，可以看出所述制剂能够非常有效地用作眼用制剂。
(3)对在冷藏条件下(4℃条件下)衍生自阿柏西普的片段、二聚体和多聚体的形成进行评估
将制剂2-1至2-10、1-13、2-13和2-14在4℃下在3ml的玻璃小瓶中储存6个月和12个月后，根据与上述(2)中相同的方法测量阿柏西普(单体)及其片段、二聚体或多聚体的含量。SEC-HPLC分析结果如表7和表8所示。DLS分析结果如表9和表10所示。
表7
SEC-HPLC分析结果(在4℃下储存6个月)
Figure BDA0001887410470000141
Figure BDA0001887410470000151
*N.D.:未检测到
表8
SEC-HPLC分析结果(在4℃下储存12个月)
Figure BDA0001887410470000152
*N.D.:未检测到
表9
DLS分析结果(在4℃下储存6个月)
Figure BDA0001887410470000153
Figure BDA0001887410470000161
表10
DLS分析结果(在4℃下储存12个月)
Figure BDA0001887410470000162
如表7至表10的结果所示，可以看出，当制剂在4℃下储存6个月和12个月时，不含离子张力剂的制剂(即制剂2-1至2-10)和含有离子张力剂的制剂(即制剂1-13、2-13和2-14)都以较低的水平形成衍生自阿柏西普的二聚体杂质和多聚体杂质。然而，与含有离子张力剂的制剂相比，不含离子张力剂的制剂以明显更低的水平形成衍生自阿柏西普的二聚体杂质和多聚体杂质。
(4)天冬酰胺(Asn)脱酰胺分析
对在加速条件(25℃)和胁迫条件(40℃)下储存8周的制剂1-2、1-3、1-4、1-8、1-9、1-10、1-13、1-14、1-15、2-1至2-10、2-13和2-14进行天冬酰胺(Asn)脱酰胺分析，即用于定量天冬酰胺脱酰胺的异天冬氨酸定量分析，由此评估蛋白质修饰。此外，对在4℃条件下储存6个月和12个月的制剂2-1至2-10、1-13、2-13和2-14也进行异天冬氨酸定量分析，由此评估蛋白质修饰。
使用ISOQUANTTM异天冬氨酸检测试剂盒(普洛麦格，目录号#MA1010)，根据制造商的说明书进行天冬酰胺脱酰胺分析。其结果如表11至表14所示。
表11
Asn脱酰胺分析结果(在25℃下储存8周)
Figure BDA0001887410470000171
Figure BDA0001887410470000181
表12
Asn脱酰胺分析结果(在40℃下储存8周)
Figure BDA0001887410470000182
Figure BDA0001887410470000191
表13
Asn脱酰胺分析结果(在4℃下储存6个月)
Figure BDA0001887410470000192
表14
Asn脱酰胺分析结果(在4℃下储存12个月)
Figure BDA0001887410470000193
Figure BDA0001887410470000201
如表11至14的结果所示，可以看出在加速条件(25℃)和胁迫条件(40℃)下储存8周的本发明的组合物，即制剂1-2、1-3、1-4、1-8、1-9、1-10和2-1至2-10，显示出明显减少的脱酰胺产物的形成。特别是，pH值为5.5且不含离子张力剂的制剂，即制剂1-3、1-9、2-3和2-9，显示出显著减少的脱酰胺产物的形成。
此外，当制剂2-1至2-10、1-13、2-13和2-14在4℃下储存6个月和12个月时，不含离子张力剂的制剂(即制剂2-1至2-10)和含有离子张力剂的制剂(即制剂1-13、2-13和2-14)都显示以较低的水平形成脱酰胺产物。然而，与含有离子张力剂的制剂相比，不含离子张力剂的制剂显示以明显更低的水平形成脱酰胺产物。
(5)对细胞增殖抑制进行评估
对在加速条件(25℃)下储存8周和在4℃下储存12个月的制剂1-3、1-13、2-3、2-8和2-13进行生物活性评估。如果用血管内皮生长因子(VEGF)处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，则细胞增殖。在所述条件下，根据对其的阿柏西普处理，进行体外试验以评估对细胞增殖的抑制。
以50ng/ml的rhVEGF165(Promokine，目录号#C-64420)的终浓度和2.4-2500ng/ml的阿柏西普浓度梯度进行试验。在37℃下在加湿的5％CO2培养箱中进行3小时的中和反应。用反应产物处理细胞，然后将细胞培养3天。为了评估对细胞增殖的抑制，根据CellTiter96TM AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒(Promega，目录号#G3580，MTS溶液)方案测量590nm处的吸光度，以确定半(50％)抑制所需的浓度(IC50)。
从上述细胞增殖抑制试验获得的每个制剂的IC50值如表15中所示。
表15
Figure BDA0001887410470000211
如表15的结果所示，可以看出，当在加速条件下长时间储存时，根据本发明获得的眼用制剂不仅具有优异的稳定性，而且与常规制剂相比，其生物活性增加约20-25％。此外，还可以看出，当在4℃储存条件下储存时，不含离子张力剂的制剂与含有离子张力剂的制剂相比具有更优异的生物活性。
(6)对血管形成抑制作用进行评估
对在加速条件(25℃)下储存8周的制剂1-3、1-13、2-3、2-8和2-13进行人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的血管形成实验(tube formation assay)。人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在基质胶(Matrigel)包被的平板中形成血管。用血管内皮生长因子(VEGF)处理HUVEC增加了HUVEC的血管形成能力。在所述条件下，根据对其的阿柏西普处理，进行体外试验以评估对血管形成能力的抑制作用。
将10μl的基质胶(低生长因子BD Matrigel，目录号#356231)加入至ibiTreat(目录号81506)试剂盒的Ibidiμ-血管生成载玻片(μ-Slide Angiogenesis)的每个孔中，然后在37℃下聚合反应2小时。将rhVEGF165(Promokine，Cat.#C-64420)的终浓度设定为1.56nM(约60ng/ml)，并将阿柏西普的浓度设定为10nM(约1150ng/ml)。在37℃下，在加湿的5％CO2培养箱中孵育3小时。将细胞(1×104个细胞/50μl)与孵育产物混合，然后加入到用基质胶包被的μ-血管生成载玻片的每个孔中。在约16小时后，观察血管形成。
用显微镜拍摄HUVEC的血管形成，然后使用适合于由美国国立卫生研究院(NIH)分发的Image J程序的血管生成分析仪评估血管形成的程度。通过测量血管的数量和形成血管的分支点的数量来评估对血管形成的抑制作用。
从上述对HUVEC血管形成的抑制试验获得的每个制剂的结果如表16和图1所示。
表16
对HUVEC血管形成的抑制作用的评估(在25℃下储存8周)
Figure BDA0001887410470000221
此外，对在4℃下储存12个月的制剂进行与上述相同的试验。其结果如表17所示。
表17
对HUVEC血管形成的抑制作用的评估(在4℃储存12个月)
Figure BDA0001887410470000231
如表16和图1的结果所示，可以看出，当在加速条件下长时间储存时，根据本发明获得的眼用制剂不仅具有与常规制剂相比优异的稳定性，而且还表现出与对照组相似的血管形成能力水平，即与含有离子张力剂的制剂相比，表现出显著增加的血管形成抑制作用。此外，还可以看出，当在4℃储存条件下储存时，不含离子张力剂的制剂与含有离子张力剂的制剂相比对HUVEC的血管形成具有更优异的抑制活性。

Claims (7)

1.一种眼用药物组合物，其pH值范围为pH5.2-5.5，包含在水性介质中的(a)20-50mg/ml的阿柏西普；(b)10-20mM的醋酸钠缓冲剂；(c)6-8w/v％的糖或5w/v％的山梨糖醇；和(d)0.01-0.1w/v％的表面活性剂，其中所述眼用药物组合物不含离子张力剂，所述糖是蔗糖、海藻糖或它们的混合物，所述表面活性剂是聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物或它们的混合物，所述组合物的重量渗透摩尔浓度为230-320mOsmol/kg。
2.根据权利要求1所述的眼用药物组合物，其中所述糖是蔗糖。
3.根据权利要求1所述的眼用药物组合物，其中所述表面活性剂是聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯或聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯。
4.根据权利要求3所述的眼用药物组合物，其中所述表面活性剂是聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯。
5.根据权利要求4所述的眼用药物组合物，其中所述表面活性剂的浓度为0.03w/v％。
6.根据权利要求1所述的眼用药物组合物，其中所述组合物的pH值为5.5，由40mg/ml的阿柏西普、10-15mM的醋酸钠缓冲剂、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯和水性介质组成。
7.根据权利要求1所述的眼用药物组合物，其中所述组合物pH值为5.5，由40mg/ml的阿柏西普、10-15mM的醋酸钠缓冲剂、8w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯和水性介质组成。
CN201780033996.8A 2017-04-26 2017-10-13 眼用药物组合物 Active CN109475597B (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20170053782 2017-04-26
KR10-2017-0053782 2017-04-26
KR10-2017-0120262 2017-09-19
KR1020170120262A KR101861163B1 (ko) 2017-04-26 2017-09-19 안과용 약학 조성물
PCT/KR2017/011293 WO2018199408A1 (en) 2017-04-26 2017-10-13 Ophthalmic pharmaceutical composition

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109475597A CN109475597A (zh) 2019-03-15
CN109475597B true CN109475597B (zh) 2022-03-22

Family

ID=62299585

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780033996.8A Active CN109475597B (zh) 2017-04-26 2017-10-13 眼用药物组合物

Country Status (9)

Country Link
US (1) US10646546B2 (zh)
EP (1) EP3452075B1 (zh)
JP (1) JP6677827B2 (zh)
KR (1) KR101861163B1 (zh)
CN (1) CN109475597B (zh)
ES (1) ES2902325T3 (zh)
PL (1) PL3452075T3 (zh)
TW (1) TWI763802B (zh)
WO (1) WO2018199408A1 (zh)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116327963A (zh) 2016-11-21 2023-06-27 济世-伊沃泰克生物制品有限公司 一种眼科制剂及其用途
EP3709971A2 (en) * 2017-11-17 2020-09-23 Amgen Inc. Vegfr-fc fusion protein formulations
WO2019217927A1 (en) 2018-05-10 2019-11-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High concentration vegf receptor fusion protein containing formulations
US20220054586A1 (en) * 2018-09-10 2022-02-24 Samsung Bioepis Co., Ltd. Liquid composition comprising protein
KR102286892B1 (ko) * 2019-07-08 2021-08-06 삼천당제약주식회사 안과용 단백질 제제의 정제방법
CN114206924A (zh) 2019-12-06 2022-03-18 瑞泽恩制药公司 抗vegf蛋白组合物及其制备方法
KR20210077645A (ko) * 2019-12-17 2021-06-25 주식회사 프로젠 신규 주사제 제형
JP2023535933A (ja) * 2020-07-24 2023-08-22 パンジェン バイオテック インコーポレイテッド 眼科用液状組成物
KR20230131212A (ko) * 2021-01-14 2023-09-12 한올바이오파마주식회사 안정화제를 사용하지 않고도 안정한, 탄파너셉트를포함하는 안과용 조성물

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2029103A2 (en) 2006-06-16 2009-03-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Vegf antagonist formulations suitable for intravitreal administration
EP2248517B1 (en) * 2009-05-08 2014-03-26 PARI Pharma GmbH Concentrated mast cell stabilizing pharmaceutical formulations
US20130323242A1 (en) 2012-06-01 2013-12-05 Ophthotech Corp. Compositions comprising an anti-pdgf aptamer and a vegf antagonist
WO2013181495A2 (en) * 2012-06-01 2013-12-05 Ophthotech Corporation Compositions comprising an anti-pdgf aptamer and a vegf antagonist
TW201605468A (zh) * 2013-09-27 2016-02-16 韓美藥品股份有限公司 長效人類生長激素接合物之製劑
AR102494A1 (es) * 2014-11-07 2017-03-01 Novartis Ag Métodos para tratar enfermedades oculares
KR101808234B1 (ko) * 2015-06-23 2017-12-12 (주)알테오젠 IgG Fc 도메인을 가지는 융합 단백질의 안정한 액상 제제
CN105496955A (zh) * 2015-12-11 2016-04-20 北京蓝丹医药科技有限公司 一种二氟泼尼酯眼用乳剂及其制备方法
CN116327963A (zh) * 2016-11-21 2023-06-27 济世-伊沃泰克生物制品有限公司 一种眼科制剂及其用途
MA50174A (fr) * 2017-09-18 2020-07-29 Amgen Inc Formules de protéines de fusion vegfr-fc

Also Published As

Publication number Publication date
EP3452075B1 (en) 2021-11-24
EP3452075A4 (en) 2019-12-11
WO2018199408A1 (en) 2018-11-01
KR101861163B1 (ko) 2018-05-25
US20190160145A1 (en) 2019-05-30
JP2019517513A (ja) 2019-06-24
JP6677827B2 (ja) 2020-04-08
CN109475597A (zh) 2019-03-15
ES2902325T3 (es) 2022-03-28
TWI763802B (zh) 2022-05-11
EP3452075A1 (en) 2019-03-13
PL3452075T3 (pl) 2022-02-21
TW201838646A (zh) 2018-11-01
US10646546B2 (en) 2020-05-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109475597B (zh) 眼用药物组合物
US20210340248A1 (en) Stabilized antibody compositions
US20210030871A1 (en) Liquid pharmaceutical composition
CN106999581A (zh) 含有高浓度抗vegf抗体的稳定蛋白质溶液剂型
TWI727279B (zh) 治療眼部疾病之方法
JP6084987B2 (ja) セミフッ素化アルカンに基づく安定化タンパク質組成物
JP2013216659A (ja) ポリペプチドを含有する安定な緩衝化された製剤
CN107715104A (zh) Fgf‑18冷冻干燥制剂
CN109982685A (zh) 药物配制品及其制备方法
JP2022105056A (ja) 高濃度の抗ｖｅｇｆ抗体を含有するタンパク質溶液製剤
KR20210077645A (ko) 신규 주사제 제형
WO2023281367A1 (en) Stable liquid formulations of aflibercept
TW202310873A (zh) 含有抗人類ｔｓｌｐ受體抗體之醫藥組成物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant