CN109475535A - 癌症的联合治疗 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及癌症的治疗,具体来说涉及通过施用有效量的体积调节性阴离子通道调节剂(即VRAC调节剂)使癌细胞对抗癌疗法敏感的方法。
Description
技术领域
本发明涉及癌症的治疗,具体来说涉及通过施用有效量的VRAC调节剂使癌细胞对抗癌治疗敏感的方法。
背景
癌症对我们的社会来说是一个压倒性的负担,2014年诊断出大约1400万新的癌症病例。尽管引入了许多新的治疗方式/选择,但是对施加的治疗的先天性(de novo)或获得性耐受仍然代表了癌症死亡的主要原因。
体积调节性阴离子通道(VRAC)存在于大多数哺乳动物细胞中。VRAC的一个重要功能是细胞体积调节。当细胞在低渗溶液中膨胀时,这些通道被激活,并且氯离子与钾离子(经由钾通道)和水并行地流出细胞,从而恢复原始细胞体积。
能够阻断VRAC活性的化合物在Helix等人,J.Membrane Biol.196(2003)中表征。例如,NS3728(Endovion;SCO-101)是强效口服活性VRAC阻断剂。
WO 98/47879和WO 00/24707公开了VRAC调节剂,包括NS3728,以及它们在治疗镰状细胞性贫血中的用途。
WO 2004/012733公开了VRAC调节剂,包括NS3728,以及它们在治疗对抗血管生成疗法特别是抗转移治疗有响应的疾病中的用途。
先前的研究已经表明VRAC在癌细胞经历细胞凋亡的能力中的作用,并且已经显示NS3728在体外抑制顺铂介导的细胞凋亡(Poulsen等人,Am J Physiol Cell Physiol,2010;等人,Am J Physiol Cell Physiol,2016;Planells_Cases,R.等人,EMBOJ.,2015)。
转移性结肠直肠癌(mCRC)的化疗治疗通常基于抗代谢物药物5-氟尿嘧啶(5FU)联合DNA结合剂奥沙利铂(例如FOLFOX方案)或拓扑异构酶I抑制剂伊立替康(例如FOLFIRI方案)并且通常与生物治疗(例如,EGFR靶向药物或抗血管生成药物)联合施用。尽管这些联合方案具有功效,其已经显著增加了mCRC患者的响应率和存活率(Cunningham等人,2010;Gallagher和Kemeny,2010),但只有30-50%的经过治疗的患者对这两种联合疗法之一表现出客观响应,并且尽管经过化疗治疗,癌症进展仍然是一种常见的结果(Gallagher和Kemeny,2010;Goldberg等人,2004)。更糟糕的是,在先FOLFIRI治疗的患者对二线化疗治疗mCRC FOLFOX的客观响应率降低至10-20%,反之亦然,并且几乎不存在对三线治疗的客观响应。因此很明显,先天性(先已存在)或获得性耐药性构成了mCRC管理中的主要问题。在讨论原发性CRC时可以得出类似的结论,其中大部分(30-40%)的接受辅助化疗(最常见的是FOLFOX或XELOX)的III期患者将在化疗后出现疾病复发。
乳腺癌(BC)是一种异质性疾病,其也反映在对各种类型的化疗的异质性响应模式。在BC的辅助治疗中,最常用的药物是细胞毒性药物,包括蒽环类药物(拓扑异构酶2抑制剂)和紫杉烷类。这些药物最常与环磷酰胺一起施用。对于具有雌激素受体阳性BC的患者,辅助治疗最通常包括抗雌激素类,如芳香化酶抑制剂、雌激素受体拮抗剂(他莫昔芬和氟维司群)。然而,接受辅助或新辅助全身性抗癌治疗的患者中大约18-20%将经历疾病复发。在患有转移性BC(mBC)的患者中,对全身性疗法的响应率范围从一线治疗的60%在达到3线至4线治疗时迅速降低至20-25%。这些数字清楚地表明,高度的先天性耐受和获得性耐受导致疾病进展和每年数千名妇女死亡。
因此,用于治疗癌症特别是耐药性癌症的新药物和药物组合的鉴定、表征和临床前和临床验证构成了高度得不到满足的医学需求。
发明内容
本发明提供了一种新的癌症治疗方案,并且特别适合用于治疗化疗耐受的癌症。本发明的治疗方案包括用能够调节体积调节性阴离子通道(VRAC)活性的化合物(即VRAC调节剂,如Endovion(NS3728))治疗。与VRAC调节剂共同治疗已经令人惊讶地显示增强了抗癌治疗的效果。此外,与VRAC调节剂共同治疗显示能够使化疗耐受的癌细胞对某些化疗剂的治疗再敏感。
在第一方面,本发明涉及使癌细胞对抗癌治疗敏感的方法,该方法包括向有此需要的受试者施用有效量的VRAC调节剂。可以在施用抗癌治疗之前、期间和/或之后施用VRAC调节剂。
在第二方面,本发明涉及增强抗癌治疗的治疗效果的方法,该方法包括向有此需要的受试者施用有效量的VRAC调节剂。可以在施用抗癌治疗之前、期间和/或之后施用VRAC调节剂。
在第三方面,本发明涉及治疗癌症的方法,该方法包括向有此需要的受试者施用有效量的VRAC调节剂和有效量的抗癌治疗,如化疗剂。
在第四方面,本发明涉及一种组合物,其包含有效量的VRAC调节剂和化疗剂。
在第五方面,本发明涉及包含有效量的VRAC调节剂和有效量的化疗剂的组合物,其用作药物。
在第六方面,本发明涉及包含有效量的VRAC调节剂和有效量的化疗剂的组合物,其用于治疗癌症。
在第七方面,本发明涉及用于使癌细胞对抗癌治疗敏感的VRAC调节剂。
在第八方面,本发明涉及用于增强抗癌治疗的治疗效果的VRAC调节剂。
在第九方面,本发明涉及一种试剂盒,其包含VRAC调节剂和化疗剂,以及任选的使用说明,其中VRAC调节剂和化疗剂被配制用于同时、顺序或分开施用。
在第十方面,本发明涉及VRAC调节剂在制备用于使癌细胞对抗癌治疗敏感或用于增强抗癌治疗的治疗效果的药物中的用途。
在第十一方面,本发明涉及VRAC调节剂和抗癌疗法如化疗剂用于治疗患者的用途,其中所述患者先前已被确定为对采用所述抗癌剂的治疗具有耐受性。
附图说明
图1.每日剂量的NS3728(40mg/kg PO)、替莫唑胺(泰道)(25mg/kg IP)及其组合在体内对C9成胶质细胞瘤异种移植物生长的影响。
图2.每日剂量的NS3728(40mg/kg)、替莫唑胺(泰道)(5mg/kg IP)及其组合在体内对皮下气囊(SAS)模型中C9成胶质细胞瘤细胞的生长的影响。
图3.与用溶媒处理的小鼠相比,NS3728(80mg/kg,PO)、5-氟尿嘧啶(30mg/kg,IP)及其组合在体内对HT29结肠肿瘤异种移植物的生长的影响。
图4.与用溶媒处理的小鼠相比,NS3728(80mg/kg,PO)、紫杉醇(5mg/kg,IP)及其组合在体内对HT29结肠肿瘤异种移植物的生长的影响。
图5.NS3728、多西他赛及其组合在体外对多西他赛耐受的MCF7乳腺癌细胞的细胞活力的影响。误差线是标准偏差。
图6.NS3728、多西他赛及其组合在体外对多西他赛耐受的MDA-MB-231乳腺癌细胞的细胞活力的影响。误差线是标准偏差。
图7.NS3728、奥沙利铂及其组合在体外对亲代HCT116CRC癌细胞的细胞活力的影响。误差线是标准偏差。
图8.NS3728、SN-38及其组合在体外对亲代HCT116CRC癌细胞的细胞活力的影响。误差线是标准偏差。
图9.NS3728、SN-38及其组合在体外对亲代HT29CRC癌细胞的细胞活力的影响。误差线是标准偏差。
图10.NS3728、SN-38及其组合在体外对亲代LoVo CRC癌细胞的细胞活力的影响。误差线是标准偏差。
图11.NS3728、SN-38及其组合在体外对SN-38耐受的HCT116CRC癌细胞的细胞活力的影响。误差线是标准偏差。
图12.NS3728、SN-38及其组合在体外对SN-38耐受的HT29CRC癌细胞的细胞活力的影响。误差线是标准偏差。
图13.NS3728、SN-38及其组合在体外对SN-38耐受的LoVo CRC癌细胞的细胞活力的影响。误差线是标准偏差。
图14.NS3728、SN-38及其组合在体外对奥沙利铂耐受的HT29CRC癌细胞的细胞活力的影响。误差线是标准偏差。
图15.NS3728、SN-38及其组合在体外对奥沙利铂耐受的LoVo CRC癌细胞的细胞活力的影响。误差线是标准偏差。
图16.NS3728、他莫昔芬及其组合在体外对他莫昔芬耐受的MCF7/LCC2乳腺癌细胞的细胞活力的影响。误差线是标准偏差。
图17.NS3728、ICI182,780(氟维司群/Faslodex)及其组合在体外对ICI182,780耐受的MCF7/LCC9乳腺癌细胞的细胞活力的影响。误差线是标准偏差。
发明详述
本发明人惊奇地发现,与单一疗法相比,用VRAC调节剂和抗癌疗法(如化疗剂)共同治疗癌症具有增加的功效,并且进一步使化学耐受的癌细胞对治疗再敏感,因此提出了一种新的癌症治疗方案,其中施用VRAC调节剂以增强抗癌治疗的治疗效果和/或使癌细胞对抗癌治疗敏感。
VRAC
体积调节性阴离子通道(VRAC)存在于大多数哺乳动物细胞中。VRAC的一个重要功能是细胞体积调节:当细胞在低渗溶液中膨胀时,这些通道被激活,氯离子与钾离子(经由钾通道)和水并行地流出细胞,从而恢复原始细胞体积。
编码VRAC的基因家族在2014年由两个独立小组基本上同时鉴定为LRRC8家族(Voss等人,2014,Science 344(6184):634-8和Qui等人,2014,Cell 157(2):447-58)。VRAC在历史上在文献中也被称为体积敏感性有机渗透物阴离子通道(VSOAC)、体积敏感性外向整流器(VSOR)、电压依赖性阴离子通道(VDAC)、人体积敏感性外向整流器(HSVOR)、体积调节性氯离子通道(VRClC)和ICl,膨胀。这些表型表现目前被假定为是在不同细胞类型中表达的功能性VRAC中LRRC8亚基的不同组成的结果。
VRAC是几乎无处不在的分布的阴离子通道,其通过细胞膨胀和/或细胞内离子强度的降低被激活。它是在调节体积减少(RVD)期间介导增加的阴离子传导的通道。在电生理学记录中,VRAC表现出向外整流,并且在大多数细胞中表现出在正膜电位下显著的电压依赖性失活。VRAC是高度阴离子选择性的,对小的无机离子具有独特的选择性顺序:SCN-<I-=NO3 -<Br-<Cl-<HCO3 -<F-(Eisenman I型卤离子选择性顺序)并且-取决于特定的亚基组成-具有宽的孔,该孔也允许大量带负电荷的或中性的有机分子如顺铂的渗透。
VRAC的激活是强制性的,取决于细胞内ATP的存在,并且涉及蛋白激酶的复杂细胞内信号传导级联支持该激活过程。
VRAC阻断剂
在一个实施方案中,VRAC调节剂是VRAC阻断剂。术语“VRAC阻断剂”在本文中与术语“VRAC抑制剂”可互换使用。VRAC阻断剂是响应于细胞膨胀或细胞内离子强度降低而抑制氯离子或任何其他阴离子或中性分子的跨膜转运的化合物。
作为VRAC抑制剂的化合物与通道蛋白结合,并经由如本文所述的一种或多种测量VRAC功能的方法发挥其可辨别的抑制作用。抑制化合物可以经由一种或多种理论作用模式(MOA)起作用,所述MOA的主要是:
1)获得抑制的一种方式是通过结合通道的跨膜孔区域中的某处直接阻塞(阻断)通过开放通道的电流。此类分子有时在本领域中称为“阻断剂”。
2)获得抑制的另一种-更加异质的方式-是通过阻止或延迟通道的自然激活过程和/或通过刺激/加速其天然失活或失活过程。总体上预期此类分子导致发现处于其开放构型的个体通道蛋白的概率降低(降低的开放状态概率,Po)。此类分子可以统称为“负门控调节剂(negative gating modulator)”,无论它们影响哪种微观过程。负门控调节剂有时也称为“负别构调节剂”或“NAM”。
阐明特定化合物的详细MOA是一项非常具有挑战性的任务,可能需要结合高灵敏度功能测量(例如如本文所述的单通道记录)和高分辨率结构信息(例如结晶学、序列分析、突变形成分析等)。在目前的情况下,没有明确确定哪些MOA负责本文所述的VRAC调节剂的VRAC抑制作用。因此,将它们统称为VRAC阻断剂。
给定物质用作VRAC阻断剂的潜力可以使用标准实验室测试方法来确定,如
a)全细胞或单通道膜片钳技术,或其自动HTC版本
b)微电极电生理学(穿透、尖锐电极),
c)通量测定(例如放射性同位素和非放射性同位素),
d)荧光染料(例如膜电位指示剂或氯化物浓度指示剂),
e)细胞体积测量(例如光散射、库尔特计数器测量或光学方法,如图像分析)。
为了测量VRAC活性,有必要通过使细胞膨胀(例如通过暴露于低渗细胞外林格氏溶液)或通过使细胞内溶液高渗或离子强度低(仅有少数技术允许这样,即全细胞膜片钳描述在1.a项下)来激活通道蛋白。
VRAC活性最直接的记录方法是通过电生理学方法,该方法允许在固定的膜电位(电压钳)下直接测量膨胀激活的跨膜阴离子电流。可能性为:
手工技术
a)手动全细胞膜片钳(测量整个细胞膜的阴离子电流)。这是用于药物筛选的最现实的配置。在文献中,细胞附着配置(测量通过在一小块细胞膜中表达的相对较少的离子通道的电流)已在少数情况下使用,并且其用于切除的配置,其中膜片段已经被隔离在膜片移液管的尖端上(内面向外和外面向外配置)。这些方法主要与特定化合物(低通量)的生物物理研究或作用模式的阐明相关。
b)穿孔膜片记录(与1a项下描述的全细胞配置基本上相同,不同之处在于在膜中没有建立孔,但是通过使用透化剂(通常是细菌成孔肽,如两性霉素B)与细胞内部形成低电阻连接)。通量大幅低于全细胞方法,但具有在记录期间保持细胞环境更接近生理组成的优点。(在取决于细胞内ATP的VRAC的背景下,该分子不需要像在其在全细胞配置中那样应用于移液管溶液)。
c)使用膜穿透“尖锐”电极的手动“经典”电生理学。不容易应用于药物筛选,因为该方法很难与典型的小型实验室细胞系(HEK、CHO等)一起使用。
自动技术
d)各种形式的HTS电生理学,其现在通过来自Sophion Bioscience的QPatch或QUBE(Korsgaard,MP等人,Comb Chem High Troughput Screen,2009;Chambers,C等人,Assay Drug Dev Technol.,2016)或Nanion系统来例示。所有方法基本上都是使用安装在芯片上的平板玻璃或硅基板进行全细胞测量(参见a)或穿孔膜片测量(参见b),这允许在平行设置中进行高度或自动化测量和化合物/流体处理。
VRAC激活的更多间接作用可以通过以下方式测量:
a)讨论中的细胞(即HEK293)中卤化物敏感性荧光蛋白或肽的表达(稳定、瞬时或可诱导的)。最常用的是黄色荧光蛋白(YFP),其光发射对培养基中卤化物的类型和浓度极其敏感。在这种情况下,利用了碘离子的作用比氯离子明显得多。通过将碘离子(其比Cl离子更易渗透通过VRAC)施加到细胞外溶液,实现了当VRAC开放时这些离子通过膜进入到细胞内部(在氯离子离开细胞的相反方向上)。因此,通过增加的来自YFP的光发射来报告VRAC激活。预期VRAC的抑制剂会抑制这种发射(较少的碘离子流入),因此该方法可用于定量效力和抑制程度。
b)表达VRAC的细胞的膨胀程度可以直接通过测量细胞尺寸来跟踪,例如通过库尔特计数器、光散射技术、显微技术或阻抗测量。VRAC抑制不影响膨胀过程,但会阻止或延迟由VRAC激活驱动的称为RVD(调节体积减少)的体积恢复过程。重要的是认识到,通过测量YFP和细胞尺寸,越来越依赖于VRAC激活的间接“下游”效应,这显著增加了记录假阳性和假阴性信号的风险。因此,此类结果常通过使用电生理学测量来验证。
c)许多其他方法可以与VRAC激活联合,但这些方法更加间接。对于特殊细胞系的迁移、增殖、细胞毒性、细胞凋亡测定的影响就其在预测体内癌症效应的方面而言可能都是重要的,但是没有一个仅依赖于VRAC。
VRAC表达可以例如通过qPCR、原位杂交或抗体来测量。
在一个实施方案中,VRAC阻断剂是二苯基脲衍生物,如WO 98/47879和/或WO 00/24707中描述的那些。
在一个实施方案中,根据标准测试方法,VRAC阻断剂显示体外抑制的IC50值小于10μM,如小于1000nM,例如小于100nM,如小于50nM,例如小于10nM。
在一个实施方案中,VRAC阻断剂的IC50为5μM或更低,如3μM或更低,例如1μM或更低,如0.5μM或更低,例如0.1μM或更低,例如10nM或更低,例如5nM或更低。
在一个实施方案中,VRAC阻断剂的IC50为2μM或更低,如1μM或更低,如0.5μM或更低,例如0.1μM或更低,如10nM或更低,例如5nM或更低。在一个优选的实施方案中,VRAC阻断剂的IC50为0.5μM或更低。
VRAC阻断剂的一个实例是通式I的化合物或其药学上可接受的盐:
其中R2表示四唑基;并且
R3、R4、R5、R6、R12、R13、R14、R15和R16彼此独立地表示氢、卤素、三氟甲基、硝基、烷基、烷基羰基、-NRaRb、-NRa-CO-Rb、苯基或杂芳基;
该苯基任选地被卤素、三氟甲基、硝基、-CO-NHRc、-CO-O-Rc或-CO-NR’R”取代;
其中Rc是氢、烷基或苯基;
R’和R”彼此独立地是氢或烷基;或者
R’和R”与它们所连接的氮一起形成5至7元杂环,该环可以任选地包含一个氧原子和/或一个另外的氮原子、和/或一个碳碳双键和/或一个碳氮双键作为环成员;
并且该杂环可以任选地被烷基取代;
Ra和Rb彼此独立地是氢或烷基;或者
R15和R16或R14和R15与它们所连接的苯环一起形成萘环或茚满环;并且R3、R4、R5、R6、R12和R13以及R14、R15和R16中剩余的一个如上文所定义。
在一个实施方案中,VRAC阻断剂是通式I的化合物或其药学上可接受的盐:
其中R2表示四唑基;
R3、R4、R5、R6、R12、R13、R14、R15和R16彼此独立地表示氢、卤素、三氟甲基、硝基或苯基;
该苯基任选地被卤素、三氟甲基、硝基或-CO-NHRc取代;
其中Rc是氢、烷基或苯基。
在通式I的化合物的一个实施方案中,R2表示四唑基;R3、R4、R5、R6、R12、R13、R14、R15和R16彼此独立地表示氢、卤素、三氟甲基或硝基。
在通式I的化合物的一个实施方案中,R3、R5和R6表示氢;并且R4表示卤素,如溴。
在通式I的化合物的一个实施方案中,R3、R4、R5和R6表示氢。
在通式I的化合物的又一个实施方案中,R3、R5和R6表示氢;并且R4表示-NRaRb,如氨基。
在通式I的化合物的再一个实施方案中,R3、R5和R6表示氢;并且R4表示-NRa-CO-Rb,如乙酰氨基。
在通式I的化合物的又一个的实施方案中,R3、R5和R6表示氢;并且R4表示被三氟甲基、硝基或-CO-NHRc取代的苯基;其中Rc是苯基。在一个具体实施方案中,R4表示被三氟甲基取代的苯基,如4-三氟甲基苯基。在又一个实施方案中,R4表示被硝基取代的苯基,如3-硝基苯基。在又一个实施方案中,R4表示被-CO-NHRc取代的苯基,如苯胺基羰基苯基,特别是4-苯胺基羰基苯基。
在通式I的化合物的又一个实施方案中,R3、R5和R6表示氢;并且R4表示被-CO-O-Rc或-CO-NR’R”取代的苯基。在一个具体实施方案中,R4表示被-CO-O-Rc取代的苯基,其中Rc是氢。在一个具体实施方案中,R4表示被-CO-NR’R”取代的苯基,如4-二甲基氨基甲酰基苯基或4-(4-甲基-1-哌嗪-羰基)-苯基。
在再一个实施方案中,R15表示三氟甲基。在一个具体实施方案中,R15表示三氟甲基,并且R12、R13、R14和R16表示氢。在又一个实施方案中,R13表示三氟甲基。在一个具体实施方案中,R13和R15表示三氟甲基,并且R12、R14和R16表示氢。
在又一个实施方案中,R16表示三氟甲基。在一个具体实施方案中,R16表示三氟甲基,并且R12、R13、R14和R15表示氢。
在再一个实施方案中,R15表示卤素,如氯或溴。在一个具体实施方案中,R15表示卤素,如氯或溴,并且R12、R13、R14和R16表示氢。在又一个实施方案中,R13和R15表示卤素,如氯,并且R12、R14和R16表示氢。在再一个实施方案中,R14和R15表示卤素,如氯,并且R12、R13和R16表示氢。
在又一个实施方案中,R16表示卤素,如氟。在一个具体实施方案中,R16表示卤素,如氟,并且R12、R13、R14和R15表示氢。
在再一个实施方案中,R16表示烷基,如甲基或乙基。在一个具体实施方案中,R16表示烷基,如甲基或乙基,并且R12、R13、R14和R15表示氢。
在又一个实施方案中,R14表示硝基。在一个具体实施方案中,R14表示硝基,并且R12、R13、R15和R16表示氢。
在再一个实施方案中,R14表示烷基羰基,如乙酰基。在一个具体实施方案中,R14表示烷基羰基,如乙酰基,并且R12、R13、R15和R16表示氢。
在又一个实施方案中,R15表示苯基。在又一个实施方案中,R14表示苯基。在一个具体实施方案中,R14或R15中的一个表示苯基,并且R12、R13、R14、R15和R16中的其余表示氢。
在再一个实施方案中,R15表示吡啶基,如吡啶-3-基。在一个具体实施方案中,R15表示吡啶基,如吡啶-3-基,并且R12、R13、R14和R16表示氢。
在又一个实施方案中,R15和R16与它们所连接的苯环一起形成萘环。
在再一个实施方案中,R14和R15与它们所连接的苯环一起形成茚满环。
在又一个实施方案中,通式I的化合物选自:
N-4-硝基苯基-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;
N-3,5-二(三氟甲基)苯基-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;
N-3-三氟甲基苯基-N’-[4-(3-硝基苯基)-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;
N-3-三氟甲基苯基-N’-[4-(4-苯胺基羰基苯基)-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;
N-3-三氟甲基苯基-N’-[4-(4-三氟甲基苯基)-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[4-苯基-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(3-氯-苯基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[4-氨基-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[4-乙酰基氨基-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[4-氨基甲酰基-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[4-(N″,N″-二甲基氨基甲酰基)-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
3′-(1-H-四唑-5-基)-4′-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-联苯-4-羧酸;
N-(茚满-5-基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(联苯-4-基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(联苯-3-基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(3-乙酰基-苯基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(联苯-3-基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-[3-(吡啶-3-基)-苯基]-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(3-溴-苯基)-N′-[4′-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-3-(1-H-四唑-5-基)-联苯-4-基]脲;
N-(3,5-二氯-苯基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(3,4-二氯-苯基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(萘-1-基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(2-三氟甲基-苯基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(2-氟-苯基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
N-(2-乙基-苯基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;
或其药学上可接受的盐。
在本发明的一个具体实施方案中,化合物是:
N-4-硝基苯基-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;
N-3,5-二(三氟甲基)苯基-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;
N-3-三氟甲基苯基-N’-[4-(3-硝基苯基)-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;
N-3-三氟甲基苯基-N’-[4-(4-苯胺基羰基苯基)-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;
N-3-三氟甲基苯基-N’-[4-(4-三氟甲基苯基)-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中,VRAC阻断剂是NS3728:
或其药学上可接受的盐。NS3728也被称为Endovion和SCO-101。NS3728是强效的口服活性VRAC阻断剂,IC50为0.40μM(Helix等人,J Membrane Biol.196,2003)。
在一个实施方案中,VRAC阻断剂是NS3623:
或其药学上可接受的盐。NS3623是VRAC阻断剂,IC50为1.8μM(Helix等人,JMembrane Biol.196,2003)。
在一个实施方案中,VRAC阻断剂是NS3749:
或其药学上可接受的盐。NS3749是VRAC阻断剂,IC50为1.4μM(Helix等人,JMembrane Biol.196,2003)。
在一个实施方案中,VRAC阻断剂是他莫昔芬(TMX):
或其药学上可接受的盐。他莫昔芬是用于预防女性乳腺癌以及治疗女性和男性的乳腺癌的药物。其也被研究用于其他类型的癌症。他莫昔芬是电压依赖性VRAC阻断剂,IC50=2.2μM(Helix等人,J Membrane Biol.196,2003)。
在一个实施方案中,VRAC阻断剂不是他莫昔芬。具体地说,当抗癌治疗是抗雌激素时,更具体地为他莫昔芬时,VRAC阻断剂不是他莫昔芬。
VRAC阻断剂的其他实例包括DIDS(IC50=26μM)和NPPB(IC50=21μM)(Helix等人,JMembrane Biol.196,2003)。
在一个实施方案中,如EP 2 919 009中所述鉴定VRAC调节剂,其教导通过引用的方式以其整体并入。
取代基的定义
在本发明的上下文中,卤素表示氟、氯、溴或碘。
在本发明的上下文中,烷基表示一价饱和的直链或支链烃链。烃链优选含有1-6个碳原子(C1-6-烷基),包括戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、己基和异己基。在一个实施方案中,烷基表示C1-4-烷基,包括丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。在本发明的另一个实施方案中,烷基表示C1-3-烷基,其可以特别是甲基、乙基、丙基或异丙基。
在本发明的上下文中,杂芳基表示芳族单、双或多杂环基团,其在其环结构中拥有一个或多个杂原子。优选的杂原子包括氮(N)、氧(O)和硫(S)。本发明优选的单环杂芳基包括芳族5元和6元杂环单环基团,包括呋喃基,特别是2-或3-呋喃基;噻吩基,特别是2或3-噻吩基;吡咯基(唑基),特别是1、2或3-吡咯基;唑基,特别是唑-2、4或5-基;噻唑基,特别是噻唑-2、4或5-基;咪唑基,特别是1、2或4-咪唑基;吡唑基,特别是1、3或4-吡唑基;异唑基,特别是异唑-3、4或5-基;异噻唑基,特别是异噻唑-3、4或5-基;二唑基,特别是1,2,3-、1,2,4-、1,2,5-或1,3,4-二唑-3、4或5-基;三唑基,特别是1,2,3-、1,2,4-、2,1,3-或4,1,2-三唑基;噻二唑基,特别是噻二唑-3、4或5-基;吡啶基,特别是2、3或4-吡啶基;哒嗪基,特别是3或4-哒嗪基;嘧啶基,特别是2、4或5-嘧啶基;吡嗪基,特别是2或3-吡嗪基;和三嗪基,特别是1,2,3-、1,2,4-或1,3,5-三嗪基。
包含一个氮原子的5-7元杂环包括例如但不限于吡咯烷、哌啶、高哌啶、吡咯啉、四氢吡啶、吡唑烷、咪唑烷、哌嗪、高哌嗪和吗啉。
药学上可接受的盐
如本文所述的VRAC阻断剂可以以适合于预期施用的任何形式提供。合适的形式包括药学上(即生理学上)可接受的盐和前药形式。
药学上可接受的加成盐的实例包括但不限于无毒的无机和有机酸加成盐,如衍生自盐酸的盐酸盐、衍生自氢溴酸的氢溴酸盐、衍生自硝酸的硝酸盐、衍生自高氯酸的高氯酸盐、衍生自磷酸的磷酸盐、衍生自硫酸的硫酸盐、衍生自甲酸的甲酸盐、衍生自乙酸的乙酸盐、衍生自乌头酸的阿康酸盐、衍生自抗坏血酸的抗坏血酸盐、衍生自苯磺酸的苯磺酸盐、衍生自苯甲酸的苯甲酸盐、衍生自肉桂酸的肉桂酸盐、衍生自柠檬酸的柠檬酸盐、衍生自扑酸的扑酸盐、衍生自庚酸的庚酸盐、衍生自富马酸的富马酸盐、衍生自谷氨酸的谷氨酸盐、衍生自乙醇酸的乙醇酸盐、衍生自乳酸的乳酸盐、衍生自马来酸的马来酸盐、衍生自丙二酸的丙二酸盐、衍生自扁桃酸的扁桃酸盐、衍生自甲烷磺酸的甲磺酸盐、衍生自萘-2-磺酸的萘-2-磺酸盐、衍生自邻苯二甲酸的邻苯二甲酸盐、衍生自水杨酸的水杨酸盐、衍生自山梨酸的山梨酸盐、衍生自硬脂酸的硬脂酸盐、衍生自琥珀酸的琥珀酸盐、衍生自酒石酸的酒石酸盐、衍生自对甲苯磺酸的甲苯对磺酸盐等。此类盐可以通过本领域熟知和描述的程序形成。
可能不被认为是药学上可接受的其他酸如草酸,可以用于制备可用作中间体的盐,以获得用于根据本发明使用的化合物及其药学上可接受的酸加成盐。
本发明的化合物的药学上可接受的阳离子盐的实例包括但不限于含有阴离子基团的本发明的化合物的钠、钾、钙、镁、锌、铝、锂、胆碱、赖氨酸和铵盐等。此类阳离子盐可以通过本领域熟知和描述的程序形成。
在本发明的上下文中,含N化合物的“盐”也被认为是药学上可接受的盐(氮杂-盐)。优选的氮杂盐包括烷基-盐,特别是甲基-和乙基-盐;环烷基-盐,特别是环丙基-盐;和环烷基烷基-盐,特别是环丙基-甲基-盐。
药物组合物
在一个实施方案中,本发明涉及一种药物组合物,其包含有效量的VRAC调节剂和化疗剂。
虽然本文公开的VRAC阻断剂和/或化疗剂可以以原料化合物的形式使用,但优选将活性成分(任选地以生理学上可接受的盐的形式)与一种或多种佐剂、赋形剂、载体、缓冲剂、稀释剂和/或其他常规药物助剂一起引入在药物组合物中。
在一个实施方案中,本发明提供药物组合物,其包含根据本发明的VRAC阻断剂,或其药学上可接受的盐或衍生物,以及一种或多种药学上可接受的载体,以及任选的本领域中已知并使用的其他治疗和/或预防成分。载体在与制剂的其他成分相容并且对其接受者无害的意义上必须是“可接受的”。在又一个实施方案中,本发明提供药物组合物,其包含多于一种的用于根据本发明用途的化合物或前药,如用于根据本发明用途的两种不同的化合物或前药。
本发明的药物组合物可以是适合于口服、直肠、支气管、鼻、肺、局部(包括颊和舌下)、透皮、阴道或肠胃外(包括皮肤、皮下、肌肉内、腹膜内、静脉内、动脉内、脑内、眼内注射或输注)施用的那些,或为适合于通过吸入或吹入施用的形式的那些,包括粉末和液体气溶胶施用,或通过持续释放系统施用的那些。持续释放系统的合适实例包括含有本发明化合物的固体疏水聚合物的半透性基质,该基质可以是成型制品的形式,例如,薄膜或微胶囊。
因此,本发明的VRAC阻断剂与常规佐剂、载体或稀释剂一起可以放置到药物组合物和其单位剂量的形式中。此类形式包括固体,并且特别是片剂、填充胶囊、粉末和丸粒形式;和液体,特别是水性或非水性溶液、悬浮液、乳剂、酏剂和填充有它们的胶囊,全都用于口服使用,栓剂用于直肠施用和无菌可注射溶液用于肠胃外使用。此类药物组合物及其单位剂型可以包含常规比例的常规成分,含或不含其他活性化合物或原理,并且此类单位剂型可以含有任何合适的有效量的活性成分,其与待应用的预期的日剂量范围相当。
如本文所公开的VRAC阻断剂可以多种口服和肠胃外剂型施用。
为了由本发明的化学化合物制备药物组合物,药学上可接受的载体可以是固体或液体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和可分散的颗粒剂。固体载体可以是也可以作为稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料的一种或多种物质。
在粉剂中,载体是细碎的固体,其与细碎的活性组分混合。
在片剂中,将活性组分与具有必要结合能力的载体以合适的比例混合,并压制成所需的形状和大小。
粉末和片剂优选含有5%或10%至约70%的活性化合物。合适的载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制剂”旨在包括用包封材料作为载体配制活性化合物,以提供胶囊,其中活性组分(有或没有载体)被载体包围,因此与载体结合。类似地,包括扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊剂、丸剂、扁囊剂和锭剂可用作适合于口服施用的固体形式。
为了制备栓剂,首先熔化低熔点蜡,如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物,并通过搅拌使活性组分均匀地分散在其中。然后将熔融的均匀混合物倒入到方便大小的模具中,使其冷却,从而固化。
适合于阴道施用的组合物可以作为阴道栓剂、卫生棉条、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂存在,除活性成分外其还含有本领域已知是适当的那些载体。
液体制剂包括溶液、悬浮液和乳剂,例如水或水-丙二醇溶液。例如,肠胃外注射液体制剂可配制为在聚乙二醇水溶液中的溶液。
因此,根据本发明的VRAC阻断剂可以配制用于肠胃外施用(例如通过注射,例如推注或连续输注),并且可以以安瓿、预填充注射器、小容量输注的单位计量形式存在或存在于具有添加的防腐剂的多剂量容器中。组合物可以采取诸如在油性或水性溶媒中的悬浮液、溶液或乳剂的形式,并且可以含有配制剂,如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者,VRAC阻断剂可以为粉末形式,通过无菌分离无菌固体或通过由溶液冻干获得,用于在使用前用合适的溶媒(例如,无菌、无热原的水)重构。
适合于口服使用的水性溶液可通过将活性组分溶解在水中并根据需要加入合适的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。
适合于口服使用的水性悬浮液可以通过将细碎的活性组分分散在具有粘性材料如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或其他熟知的悬浮剂的水中来制成。
还包括固体形式的制剂,旨在用于在使用前不久转化为用于口服施用的液体形式制剂。此类液体形式包括溶液、悬浮液和乳剂。除活性组分外,这些制剂还可以包含着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人造和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
对于施用于表皮的局部施用,VRAC阻断剂可以配制为软膏剂、乳膏剂或洗剂,或为透皮贴剂。软膏剂和乳膏剂可以例如用水性或油性基质配制,并加入合适的增稠剂和/或胶凝剂。洗剂可以用水性或油性基质配制,并且通常还含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。
适合于在口腔中局部施用的组合物包括在调味基质(常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中包含活性剂的锭剂;在惰性基质如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中包含活性成分的糖果锭剂;和在合适的液体载体中包含活性成分的漱口剂。
溶液或悬浮液可以通过常规手段直接施加至鼻腔,例如用滴管、移液管或喷雾器。组合物可以以单剂量或多剂量形式提供。
施用于呼吸道也可以借助于气溶胶制剂来实现,其中活性成分以加压包装提供,所述加压包装具有合适的推进剂,如氯氟烃(CFC),例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体。气溶胶可以方便地还含有表面活性剂,如卵磷脂。可以通过提供计量阀来控制药物的剂量。
或者,活性成分可以以干粉的形式提供,例如化合物在合适的粉末基质(如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP))中的粉末混合物。方便地,粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂量形式例如存在于例如明胶或泡罩包装的胶囊或药筒中,可以借助于吸入器从该包装中施用粉末。
在旨在施用于呼吸道的组合物中,包括鼻内组合物,该化合物通常具有小的粒径,例如约5微米或更小。这样的粒径可以通过本领域已知的手段获得,例如通过微粉化。
需要时,可以应用适于持续释放VRAC活性成分的组合物。
药物制剂优选为单位剂型。在这种形式中,制剂细分为含有适量活性组分的单位剂量。单位剂型可以是经过包装的制剂,该包装含有离散量的制剂,如经过包装的片剂、胶囊剂和在小瓶或安瓿中的粉剂。此外,单位剂型可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身,或者它可以是适当数量的包装形式的这些中的任何一种。
用于口服施用的片剂或胶囊和用于静脉内施用和连续输注的液体是优选的组合物。
在其他实施方案中,VRAC抑制剂配制用于局部施用。
关于配制和施用技术的更多细节可以在最新版的Remington’s PharmaceuticalSciences(Maack Publishing Co,Easton,PA)中找到。
治疗有效剂量是指改善症状或状况的活性成分的量。治疗功效和毒性,例如ED50和LD50,可以通过在细胞培养物或实验动物中的标准药理学程序测定。治疗效果和毒性作用之间的剂量比是治疗指数,并且可以用比率LD50/ED50表示。显示出大治疗指数的药物组合物是优选的。
当然,所施用的剂量必须根据被治疗个体的年龄、体重和状况以及施用途径、剂型和方案以及所期望的结果仔细调整,当然,确切剂量应当由从业人员决定。
VRAC调节剂和/或抗癌剂的实际剂量取决于被治疗疾病的性质和严重程度,并且由医师决定,并且可以通过根据具体情况滴定剂量而改变,以产生所需的治疗效果。
例如,VRAC阻断剂可以以每天一剂或几剂施用。示例性范围为10-200mg/天p.o.(口服),以一剂或两剂施用,例如25-50mg p.o.,一天两次。
待根据本发明治疗的受试者可以是任何人或动物受试者,优选患有癌症的人。
癌症
本发明涉及使癌细胞对抗癌治疗敏感或增强抗癌治疗的治疗效果。
在一个实施方案中,癌症对用化疗剂治疗具有耐受性。如果癌症具有耐受性,则与VRAC阻断剂共同治疗能够使癌症对讨论中的化疗剂再敏感。癌症的耐受性可以是先天性耐受或获得性耐受。一般而言,如果用临床上接受的抗癌剂剂量治疗的患者不像预期那样对抗癌剂有响应,即在癌症(进行性疾病)恶化、生长或传播的情况下,癌症被认为对特定的抗癌疗法具有耐受性。本领域技术人员可以确定癌症是药物敏感的还是耐受的。
在一个实施方案中,待根据本发明治疗的癌症可以选自肺癌(非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、成胶质细胞瘤、头颈癌、恶性黑素瘤、基底细胞皮肤癌、鳞状细胞皮肤癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠直肠癌、肛门癌、子宫颈癌、膀胱癌、子宫体癌、卵巢癌、胆囊癌、肉瘤、白血病(骨髓性和淋巴性)、淋巴瘤、骨髓瘤。
在一个实施方案中,癌症是转移性的。
在一个实施方案中,癌症是结肠直肠癌。
在一个实施方案中,癌症是转移性结肠直肠癌。
在一个实施方案中,癌症是乳腺癌。
在一个实施方案中,癌症是转移性乳腺癌。
在一个实施方案中,癌症是成胶质细胞瘤。
在一个实施方案中,癌症是实体瘤,如选自肉瘤、癌和淋巴瘤的实体瘤。
在一个实施方案中,癌症不是实体瘤。例如,癌症可以是血液恶性肿瘤,包括但不限于白血病。
在一个实施方案中,癌症是前列腺癌,如转移性前列腺癌。
在一个实施方案中,癌症是类固醇激素受体阳性癌症,例如,雌激素受体阳性癌症、孕激素受体阳性癌症或雄激素受体阳性癌症。
抗癌治疗
根据本发明的抗癌治疗可以是用一种或多种化疗剂和/或放射疗法治疗。在一个优选的实施方案中,抗癌治疗包括用化疗剂治疗。
化疗药物可根据诸如其如何工作、其化学结构以及其与其他药物的关系等因素分成几组。一些药物以多于一种的方式起作用,并且可能属于多于一个的组。在一个实施方案中,本发明的抗癌治疗包括用多于一种化疗剂治疗。
在一个实施方案中,抗癌治疗是选自细胞毒性剂、细胞抑制剂、抗激素剂、抗血管生成剂和具有明确定义的靶标的抗癌生物剂的化疗剂。
在一个实施方案中,化疗剂是细胞毒性剂或细胞抑制剂。
在一个优选的实施方案中,抗癌治疗是化疗剂,VRAC调节剂与化疗剂共同施用。
VRAC调节剂可以在施加抗癌治疗之前、同时和/或之后施用。在一个实施方案中,在施加抗癌治疗之前施用VRAC调节剂。在一个实施方案中,VRAC调节剂与抗癌治疗同时施用。
如本文所用的共同施用是指向受试者施用VRAC调节剂和抗癌治疗,其中VRAC调节剂可以在抗癌治疗之前、同时和/或之后施用。
施用VRAC调节剂增强了抗癌治疗的效果。因此,用VRAC阻断剂和抗癌治疗的治疗效果是相加的或协同的。在一个实施方案中,治疗效果是协同的。
在一个实施方案中,VRAC调节剂的施用允许以低于正常剂量的剂量(即通常被认为是亚治疗剂量的剂量)施用抗癌治疗。
在一个实施方案中,VRAC调节剂的施用增强了抗癌治疗的临床效果。临床效果可以由临床医生确定。
在一个实施方案中,抗癌治疗是选自拓扑异构酶抑制剂、抗激素剂、烷化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、有丝分裂抑制剂、皮质类固醇、靶向抗癌疗法、分化剂和免疫疗法的化疗剂。
烷化剂
在一个实施方案中,化疗剂是烷化剂。烷化剂直接损害DNA(每个细胞中的遗传物质)以防止细胞繁殖。这些药物在细胞周期的所有阶段均起作用,并用于治疗许多不同的癌症,包括成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、霍奇金病、多发性骨髓瘤和肉瘤,以及肺癌、乳腺癌和卵巢癌。
烷化剂分为不同的类别,包括:
·氮芥类:如氮芥(mechlorethamine,nitrogen mustard)、苯丁酸氮芥、环磷酰胺异环磷酰胺和美法仑
·亚硝基脲:如链脲霉素、卡莫司汀(BCNU)和洛莫司汀
·烷基磺酸盐:白消安
·三嗪:达卡巴嗪(DTIC)和替莫唑胺
·乙烯亚胺:塞替派和六甲蜜胺(altretamine,hexamethylmelamine)
在一个实施方案中,烷化剂选自氮芥、亚硝基脲、烷基磺酸盐、三嗪、乙烯亚胺。
在一个实施方案中,烷化剂是三嗪,如替莫唑胺。
铂类药物(如顺铂、卡铂和奥沙利铂)有时与烷化剂分成一组,因为它们以类似的方式杀死细胞。然而,在本文中,铂类药物不被认为是烷化剂。
在一个实施方案中,抗癌治疗不包括用基于金属的抗癌药物(如基于铂、钌、金或钛的抗癌药物)治疗或不由其组成。
在一个实施方案中,抗癌治疗不包括用基于铂的抗癌药物如顺铂、卡铂、奥沙利铂或奈达铂治疗或不由其组成。
在一个实施方案中,烷化剂与VRAC调节剂联合用于治疗成胶质细胞瘤,特别是对用烷化剂治疗具有耐受性的成胶质细胞瘤。
在一个具体实施方案中,烷化剂是三嗪,如替莫唑胺(泰道),VRAC调节剂是NS3728,并且待治疗的癌症是成胶质细胞瘤,特别是替莫唑胺耐受的成胶质细胞瘤。
抗代谢物
在一个实施方案中,化疗剂是抗代谢物。抗代谢物通过取代RNA和DNA的正常构建块来干扰DNA和RNA的生长。当细胞的染色体被复制时,这些药剂在S期损坏细胞。它们通常用于治疗白血病、乳腺癌、卵巢癌和肠道癌,例如,结肠直肠癌以及其他类型的癌症。
在一个实施方案中,抗代谢物选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨阿糖胞苷氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨羟基脲、甲氨蝶呤、培美曲塞
在一个实施方案中,抗代谢物是5-氟尿嘧啶(5-FU)。
在一个实施方案中,抗代谢物与VRAC调节剂联合用于治疗结肠直肠癌,特别是对抗代谢物治疗具有耐受性的结肠直肠癌。在一个实施方案中,结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。
在一个具体实施方案中,5-FU与VRAC调节剂如NS3728共同施用,用于治疗结肠直肠癌,特别是5-FU耐受的结肠直肠癌。在一个实施方案中,结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。
抗肿瘤抗生素
这些药物通过改变癌细胞内部的DNA防止它们生长和繁殖来起作用。
在一个实施方案中,化疗剂是抗肿瘤抗生素剂。在其他实施方案中,化疗剂不是抗肿瘤抗生素剂。
在一个实施方案中,抗肿瘤抗生素剂是蒽环类药物。蒽环类药物是抗癌抗生素,其干扰参与DNA复制的酶。这些药物在细胞周期的所有阶段都起作用。它们广泛用于各种癌症。蒽环类药物也能够抑制拓扑异构酶II。
蒽环类药物的实例包括:
·柔红霉素
·阿霉素
·表柔比星
·伊达比星
不是蒽环类药物的抗肿瘤抗生素包括:
·放线菌素-D
·博莱霉素
·丝裂霉素-C
·米托蒽醌(也可用作拓扑异构酶II抑制剂)
拓扑异构酶抑制剂
在一个实施方案中,化疗剂是拓扑异构酶抑制剂,其可以是拓扑异构酶I抑制剂或拓扑异构酶II抑制剂。这些药物干扰称为拓扑异构酶的酶,该酶帮助分离DNA链,所以它们可以在S期复制。拓扑异构酶抑制剂用于治疗结肠直肠癌、某些白血病,以及肺癌、卵巢癌、胃肠癌和其他癌症。
拓扑异构酶抑制剂根据它们影响的酶的类型进行分组。
拓扑异构酶I抑制剂包括:
·拓扑替康
·伊立替康(CPT-11)。伊立替康的活性代谢产物是SN-38。
拓扑异构酶II抑制剂包括:
·依托泊苷(VP-16)
·替尼泊苷
·米托蒽醌(也用作抗肿瘤抗生素)
·蒽环类药物
在一个实施方案中,拓扑异构酶抑制剂是拓扑异构酶I抑制剂,如伊立替康或其活性代谢物SN-38。
在一个实施方案中,拓扑异构酶抑制剂是拓扑异构酶II抑制剂,如蒽环类药物。
在一个实施方案中,拓扑异构酶抑制剂,如拓扑异构酶I抑制剂,与VRAC调节剂联合用于治疗结肠直肠癌,特别是对所述拓扑异构酶抑制剂治疗有耐受性的结肠直肠癌。在一个实施方案中,结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。
在一个具体实施方案中,伊立替康/SN-38与VRAC调节剂如NS3728共同施用,用于治疗结肠直肠癌,特别是伊立替康/SN-38耐受的结肠直肠癌。在一个实施方案中,结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。
有丝分裂抑制剂
在一个实施方案中,化疗剂是有丝分裂抑制剂。有丝分裂抑制剂常是植物生物碱和源自天然产物的其他化合物。它们通过在细胞周期的M期停止有丝分裂起作用,但是通过防止酶形成细胞繁殖所需的蛋白质可在所有阶段破坏细胞。
有丝分裂抑制剂的实例包括:
·紫杉烷类:紫杉醇和多西他赛
·埃博霉素:伊沙匹隆
·长春花生物碱:长春碱长春新碱和长春瑞滨
·雌氮芥
有丝分裂抑制剂用于治疗许多不同类型的癌症,包括乳腺癌、肺癌、骨髓瘤、淋巴瘤和白血病。
在一个实施方案中,有丝分裂抑制剂是紫杉烷,如紫杉醇或多西他赛。
在一个实施方案中,有丝分裂抑制剂与VRAC调节剂联合用于治疗乳腺癌,特别是对有丝分裂抑制剂治疗有耐受性的乳腺癌。在一个实施方案中,乳腺癌是转移性乳腺癌。
在一个具体实施方案中,紫杉烷如紫杉醇或多西他赛与VRAC调节剂如NS3728共同施用,用于治疗乳腺癌,特别是紫杉醇或多西他赛耐受的乳腺癌。在一个实施方案中,乳腺癌是转移性乳腺癌。
皮质类固醇
在一个实施方案中,化疗剂是皮质类固醇。皮质类固醇,常简称为类固醇,是天然激素和激素样药物,可用于治疗多种类型的癌症以及其他疾病。
当这些药物被用作癌症治疗的一部分时,它们被认为是化疗药物。
皮质类固醇的实例包括:
·泼尼松
·甲基泼尼松龙
·地塞米松
类固醇也常用于帮助预防化疗引起的恶心和呕吐。它们在化疗前使用,也有助于预防严重的过敏反应。
在一些实施方案中,化疗剂不是皮质类固醇。
其他化疗药物
一些化疗药物以略微不同的方式起作用,并且不太适合任何其他类别。实例包括诸如L-天冬酰胺酶(其为酶)和蛋白酶体抑制剂硼替佐米的药物。
靶向抗癌疗法
在一个实施方案中,化疗剂是靶向抗癌剂,如基于抗体的疗法,其作用于明确定义的靶标或生物途径。
靶向疗法的实例包括:
·伊马替尼
·吉非替尼
·舒尼替尼
·硼替佐米
在一个实施方案中,靶向抗癌疗法是抗血管生成剂,如抗VEGF剂。例如,抗血管生成剂可以是人源化抗VEGF单克隆抗体,如Avastin(贝伐单抗)。如果本发明的抗癌疗法是抗血管生成剂,则抗血管生成剂不是VRAC阻断剂,如NS3728。
在一些实施方案中,化疗剂不是靶向抗癌剂。
分化剂
这些药物作用于癌细胞,使其成熟为正常细胞。实例包括类维生素A、维甲酸(ATRA或)和贝沙罗汀以及三氧化二砷
在一个实施方案中,化疗剂是分化剂。在一些实施方案中,化疗剂不是分化剂。
抗激素剂
在一个实施方案中,化疗剂是用于抗激素疗法的药剂。此类药物是性激素或激素样药物,其改变雌性或雄性激素的作用或产生。它们用于减缓乳房癌、前列腺癌和子宫内膜(子宫)癌的生长,其在正常情况下响应于体内天然性激素而生长。这些癌症治疗激素不是以与标准化疗药物相同的方式起作用。它们通过使癌细胞不能使用它们生长所需的激素或通过阻止身体产生激素起作用。
抗激素疗法的实例包括:
·抗雌激素:氟维司群他莫昔芬和托瑞米芬克罗米芬和雷洛昔芬。
·抗孕激素:米非司酮、醋酸乌利司他、阿来司酮、利洛司酮和奥那司酮
·抗雄激素:比卡鲁胺氟他胺和尼鲁米特
·芳香酶抑制剂:阿那曲唑依西美坦和来曲唑
·孕激素:醋酸甲地孕酮
·雌激素
·促性腺激素释放激素(GnRH),也称为黄体生成素释放激素(LHRH)激动剂或类似物:亮丙瑞林和戈舍瑞林
在一个实施方案中,抗癌治疗包括抗雌激素治疗。抗雌激素,也称为雌激素受体拮抗剂或雌激素受体阻断剂,是一类防止雌激素如雌二醇介导它们在体内的生物学作用的药物。
在一个实施方案中,抗雌激素是氟维司群。
在一个实施方案中,抗雌激素是他莫昔芬。
在一个实施方案中,抗癌治疗包括抗孕激素治疗。抗孕激素(Anti-progestogens或anti-progestins),也称为孕酮受体拮抗剂或孕酮阻断剂,是一类防止孕激素如孕酮介导它们在体内的生物学作用的药物。
抗孕激素的实例包括米非司酮、醋酸乌利司他、阿来司酮、利洛司酮和奥那司酮。
在一个实施方案中,抗癌治疗包括抗雄激素治疗。抗雄激素,也称为雄激素受体拮抗剂或睾酮阻断剂,是一类防止雄激素如睾酮和二氢睾酮(DHT)介导它们在体内的生物学作用的药物。
在一些实施方案中,化疗剂不是抗激素剂。
抗激素疗法特别可用于治疗类固醇激素受体阳性癌症,例如抗雌激素用于治疗ER阳性乳腺癌或子宫癌。
在一个实施方案中,抗雌激素与VRAC调节剂如NS3728共同施用,用于治疗ER阳性癌症,如ER阳性乳腺癌。在一个实施方案中,乳腺癌是转移性乳腺癌。
在一个实施方案中,抗孕激素与VRAC调节剂如NS3728共同施用,用于治疗PR阳性癌症,如PR阳性乳腺癌。在一个实施方案中,乳腺癌是转移性乳腺癌。
在一个实施方案中,抗雄激素与VRAC调节剂如NS3728共同施用,用于治疗AR阳性癌症,如AR阳性前列腺癌。在一个实施方案中,前列腺癌是转移性前列腺癌。
免疫疗法
在一个实施方案中,化疗剂是免疫治疗剂。向患有癌症的人给予免疫疗法药物以帮助他们的免疫系统识别并攻击癌细胞。
有不同类型的免疫疗法。主动免疫疗法刺激身体自身的免疫系统来对抗疾病。被动免疫疗法不依赖于身体来攻击疾病;它们是在体外产生并用于对抗癌症的免疫系统成分(如抗体)。
主动免疫疗法的实例包括:
·单克隆抗体疗法,如利妥昔单抗和阿仑单抗
·非特异性免疫疗法和佐剂(其他增强免疫反应的物质或细胞),如BCG、白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-α
·免疫调节药物,如沙利度胺和来那度胺
在一个实施方案中,化疗剂是PD-1或PD-L1抑制剂,如能够抑制PD-1或PD-L1的抗体。
癌症疫苗是一种主动特异性免疫疗法。
在一些实施方案中,化疗剂不是免疫疗法剂。
放射疗法
在一个实施方案中,抗癌疗法是放射疗法。放射疗法是使用电离辐射的疗法,通常作为癌症治疗的一部分来控制或杀死恶性细胞。如果一些类型的癌症细胞被局限于身体的一个区域,则放射疗法在这些类型的癌症中可能是治愈性的。它还可以用作辅助治疗的一部分,以防止去除原发性恶性肿瘤(例如,乳腺癌的早期阶段)的手术后肿瘤复发。放射疗法与化疗具有协同作用,并且在易感癌症中在化疗之前、期间和之后使用。放射治疗的剂量和治疗方案根据被治疗的癌症的类型和阶段而变化,并且可由临床医生决定。
医学用途
在一个实施方案中,本发明涉及使癌细胞对抗癌治疗敏感的方法,包括向有此需要的受试者施用有效量的VRAC调节剂。
在一个实施方案中,本发明涉及增强抗癌治疗的治疗效果的方法,包括向有此需要的受试者施用有效量的VRAC调节剂。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗癌症的方法,包括向有此需要的受试者施用有效量的VRAC调节剂和有效量的抗癌治疗,如化疗剂。
在一个实施方案中,本发明涉及包含有效量的VRAC调节剂和有效量的化疗剂的组合物,其用作药物。
在一个实施方案中,本发明涉及包含有效量的VRAC调节剂和有效量的化疗剂的组合物,其用于治疗癌症。
在一个实施方案中,本发明涉及VRAC调节剂,其用于使癌细胞对抗癌治疗敏感。
在一个实施方案中,本发明涉及VRAC调节剂,其用于增强抗癌治疗的治疗效果。
在一个实施方案中,本发明涉及VRAC调节剂在制备用于使癌细胞对抗癌治疗敏感或用于增强抗癌治疗的治疗效果的药物中的用途。
在一个实施方案中,本发明涉及一种试剂盒,其包含VRAC调节剂和化疗剂以及任选的使用说明,其中VRAC调节剂和化疗剂配制用于同时、顺序或分开施用。
在一个特别令人感兴趣的实施方案中,本发明涉及VRAC调节剂和抗癌疗法如化疗剂,用于治疗受试者的癌症,其中所述癌症已被确定为对所述抗癌疗法的治疗具有耐受性。用VRAC调节剂治疗使耐受的癌细胞对该抗癌疗法再敏感。耐受性可以是先天性耐受或获得性耐受。
如本文所述的与VRAC调节剂的共同治疗可以被认为是抗癌治疗的辅助疗法,因为VRAC调节剂使抗癌疗法的有效性最大化。
在一个实施方案中,当在抗癌治疗之前施用时,用本文所述的VRAC调节剂治疗可以被认为是新辅助疗法。
实施例
实施例1.替莫唑胺和NS3728在成胶质细胞瘤中
使用异种移植物方法或皮下气囊模型(SAS;参见Lichtenberg,J.,P.J.Hjarnaa,P.E.Kristjansen,D.Hansen&L.Binderup:The rat subcutaneous air sac mode:Aquantitative assay of antiangiogenesis in induced vessels Pharmacology&Toxicology,1999,84,34-40),在两个单独的实验中测试NS3728作为单一疗法(40mg/kg/天)或与替莫唑胺(泰道,25或5mg/kg/天)联合给予对C6神经胶质瘤细胞的体内抗肿瘤作用。
在第一项研究中,将500万个C6大鼠神经胶质瘤细胞接种到Fisher大鼠的胁腹中。三天后,肿瘤直径生长至2-5mm,开始治疗。观察到C6细胞具有侵略性生长行为并且很快地就形成明显的实体瘤。口服施用NS3728(40mg/kg/天)联合替莫唑胺(25mg/kg/天)导致生长速率显著降低,而NS3728(40mg/kg/天)和替莫唑胺(25mg/kg/天)作为单一疗法给予时均未表现出任何显著的抗肿瘤作用(参见图1)。在用替莫唑胺治疗的所有动物中观察到明显的毒性体征,其包括屈服的行为、驼背外观和体重减轻。由于伦理原因,该研究在治疗的第4天终止。
在第二项研究中,通过仅接种一半数量的细胞(每只动物250万个C6细胞)并利用皮下气囊(SAS)技术减缓肿瘤生长。简而言之,用CO2/O2麻醉大鼠,并通过皮下注射在背部引入10-15ml空气,以产生位于头部后方约4-5cm处的气囊。随着时间的推移,气囊的壁变得越来越厚,并且在10-14天之后,已经建立了具有透明膜外观的足够细胞衬里。将C6神经胶质瘤细胞在大鼠中直接接种在该膜上。在接种当天开始治疗,并且在治疗的第10天终止研究。C6细胞表现出较少的侵略性生长,并且口服施用NS3728(40mg/kg/天),无论是作为单一疗法还是与替莫唑胺(5mg/kg/天)联合,均显著抑制肿瘤生长(图2),而单独地用替莫唑胺治疗不会导致显著的肿瘤生长抑制,如通过肿瘤重量所测量的。
此处所示的实验证明,NS3728与替莫唑胺(丹麦对成胶质细胞瘤的“一线”疗法)的联合口服给药使C6神经胶质瘤细胞的生长减缓50-55%,与接种部位无关。与使用任一化合物的单一疗法相比,效果明显是相加的或协同的。因此,结果显示用NS3728治疗使癌细胞对治疗敏感并且增强替莫唑胺在体内的作用。
实施例2.紫杉醇或5-氟尿嘧啶和NS3728在结肠癌中
在两个独立的实验系列中,测试NS3728作为单一疗法(80mg/kg)分别与紫杉醇(5mg/kg)或5-氟尿嘧啶(30mg/kg)联合对人HT29结肠癌细胞系的体内抗肿瘤作用。口服(PO)给予NS3728,而通过注射腹膜内(IP)给予紫杉醇和5-氟尿嘧啶。在t=0时皮下接种癌细胞(溶媒组中的一只动物未出现肿瘤,从5-氟尿嘧啶实验中排除),治疗在第4天开始并在第22天结束。实验包括以下给药组(n=9-10只/组):
1)溶媒,
2)NS3728,
3)紫杉醇或5-氟尿嘧啶,
4)NS3728+紫杉醇或NS3728+5-氟尿嘧啶。
按周期(第4-8天;第11-15天,第18-22天)进行给药,每天给药NS3728和细胞毒性药物,中间被给药假期中断。结果显示在图3(5-氟尿嘧啶)和图4(紫杉醇)中。在这两个实验中,溶媒组中的肿瘤体积以超线性方式增加,直至5-氟尿嘧啶实验中的最终肿瘤体积为166mm3以及紫杉醇实验中为122mm3。NS3728和细胞毒性药物都作为单一疗法给予时观察到轻微(非显著)抑制的生长曲线。相反,采用分别与这两种细胞毒性药物的联合疗法(NS3728和细胞毒性药物)时,生长曲线均进一步降低,两种组合相对于对照组均达到显著性(t检验)(对于NS3728+5-氟尿嘧啶,P=0.03;对于NS3728+紫杉醇,P=0.003)。
总之,我们已经证明,与用一种化学治疗药物的单一疗法相比,人异种移植的HT29肿瘤对于NS3728和5-氟尿嘧啶或紫杉醇的联合治疗表现出增加的敏感性。因此,NS3728能够增强5-氟尿嘧啶和紫杉醇在体内的作用。
实施例3.多西他赛和NS3728在多西他赛耐受的MCF-7和MDA-MB231人乳腺癌细胞系中。
乳腺癌是一种异质性疾病,Soerlie等人(PMID:11553815)先前已经描述了至少6种乳腺癌亚型。作为一个主要的区别,乳腺癌可分为激素(雌激素和孕酮)受体阳性和激素受体阴性乳腺癌。我们在我们的实验中包括这两种主要的亚型。如Hansen等人2015(PMID:25596703)所述,我们建立了对化疗多西他赛具有耐受性的人乳腺癌细胞系。这些细胞系是MCF-7和MDA-MB-231。
MCF-7:雌激素和孕酮受体阳性
MDA-MB-231:雌激素和孕酮受体阴性和HER2受体阴性(所谓的三阴性表型)
我们已经考查了NS3728作为单一药物或与多西他赛联合在多西他赛耐受的乳腺癌细胞系中的作用。
我们采用标准MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物)细胞活力测定法。将细胞接种在96孔板(10,000个细胞/孔)中并使其贴壁24小时。随后,加入NS3728、多西他赛或这两种药物的组合72小时,然后测定细胞活力。所有值均以未处理细胞(命名为“无处理”)的百分比表示。“DMSO”是指溶剂对照,因为NS3728和多西他赛均在DMSO中稀释。因此,包括DMSO(二甲基亚砜)对照以研究有机溶剂对细胞活力的任何潜在影响。每个数据点以重复三次进行。
DMSO不影响多西他赛耐受的MCF-7乳腺癌细胞的细胞活力。选择65nM多西他赛,因为这是多西他赛耐受的MCF-7乳腺癌细胞产生耐受性的浓度。作为单一疗法提供的65nM多西他赛和40μM NS3728不降低细胞活力。40μM NS3728和65nM多西他赛的组合对多西他赛耐受的MCF-7乳腺癌细胞的细胞活力产生联合效应。
NS3728、多西他赛及其组合对多西他赛耐受的MCF-7乳腺癌细胞的细胞活力的影响显示在图5中。
DMSO不影响多西他赛耐受的MDA-MB-231乳腺癌细胞的细胞活力。选择150nM的多西他赛,因为这是细胞产生耐受性的浓度。150nM多西他赛使活力降低至未处理对照的约50%。50μM NS3728不降低细胞活力。在50μM NS3728和150nM多西他赛下,观察到对多西他赛耐受的MDA-MB-231乳腺癌细胞的细胞活力的联合效应。
NS3728、多西他赛及其组合对多西他赛耐受的MDA-MB-231乳腺癌细胞的细胞活力的影响显示在图6中。
结论
这些临床前研究表明,VRAC抑制剂NS3728可增强多西他赛对多西他赛耐受的乳腺癌细胞系的作用。因此,数据表明NS3728能够使多西他赛耐受的癌细胞对多西他赛治疗再敏感。
实施例4.奥沙利铂或SN38和NS3728在亲代HCT116、HT29和LoVo人结肠直肠癌(CRC)细胞系中。
CRC细胞表现出因染色体不稳定性、微卫星不稳定性(MSI)和CpG岛甲基化表型(CIMP)引起的遗传不稳定性,其导致原癌基因如KRAS的活化和肿瘤抑制基因如TP53(p53)的失活。某些遗传改变的存在或不存在可以决定CRC患者对治疗的响应,因此研究具有上述遗传改变的不同组合的CRC细胞系是重要的。因此,我们选择了三种细胞系来代表CRC患者中观察到的主要遗传改变:
-HCT116:MSI、KRAS突变、TP53野生型、CIMP+、CIN-,来自原发性肿瘤(Dukes C)
-HT29:MSS、KRAS野生型、TP53突变、CIMP+、CIN+,来自原发性肿瘤(Dukes C)
-LoVo:MSI、KRAS突变、TP53野生型、CIMP-、CIN-,来自转移(Dukes C)
我们考查了NS3728作为单一药物或与OXP或SN-38联合在亲代(即药物敏感性)细胞系中的作用。我们采用标准MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物)细胞活力测定法。将细胞接种在96孔板(10,000个细胞/孔)中并使其贴壁24小时。随后,加入NS3728、OXP、SN-38或NS3728与细胞毒性药物之一的组合48小时,然后测定细胞活力。所有值均以未处理细胞(命名为“无处理”)的百分比表示。“DMSO”是指溶剂对照,因为NS3728和化疗药物均在DMSO中稀释。因此,包括DMSO(二甲基亚砜)对照以研究有机溶剂对细胞活力的任何潜在影响。每个数据点以重复三次进行。
在亲代细胞中,我们测试了NS3728作为单一药剂以及与OXP或SN-38联合的作用。
亲代CRC细胞系–NS3728和OXP
DMSO引起HCT116亲代细胞的细胞活力的微小降低。NS3728将细胞活力降低至未处理细胞的约50%,并且OXP剂量依赖性地降低HCT116亲代细胞的细胞活力。在HCT116亲代细胞中40或50μM NS3728和0.16/0.8/4/20μm奥沙利铂的组合并不比任一单一疗法更多地抑制细胞活力。
NS3728和OXA的组合对亲代HCT116CRC癌细胞的细胞活力的影响显示在图7中。
在HT29亲代和LoVo亲代细胞中,我们也未观察到对NS3728和OXP的细胞活力的任何联合抑制作用(数据未显示)。
因此,将NS3728和奥沙利铂联合在OXP敏感性结肠直肠癌中似乎没有任何效果。
HCT116亲代CRC细胞系–NS3728和SN-38
DMSO引起细胞活力的微小降低。NS3728在两种浓度(40和50μM)下使细胞活力降低至未处理细胞的约50%。SN-38(0.16μM)也使活力降低至未处理细胞的约50%。40或50μMNS3728与0.16μM SN-38的组合对细胞活力具有联合抑制作用,其中40μM NS3728+SN-38使细胞活力降低至未处理细胞的约30%,50μM NS3728+SN-38使细胞活力降低至未处理细胞的约23%。
NS3728和SN-38的组合对亲代HCT116CRC癌细胞的细胞活力的影响显示在图8中。
HT29亲代CRC细胞系–NS3728和SN-38
DMSO使该细胞系中的细胞活力降低至未处理细胞的约78%。NS3728在40μM下使细胞活力降低至未处理细胞的约90%,在50μM下使细胞活力降低至未处理细胞的约77%。SN-38(0.032μM)使活力降低至未处理细胞的约77%。40或50μM NS3728与0.032μM SN-38的组合引起对细胞活力的联合抑制作用,其中40μM NS3728+SN-38使细胞活力降低至未处理细胞的约50%,50μM NS3728+SN-38使细胞活力降低至未处理细胞的约38%。
NS3728和SN-38的组合对亲代HT29CRC癌细胞的细胞活力的影响显示在图9中。
LoVo亲代CRC细胞系–NS3728和SN-38
DMSO使该细胞系中的细胞活力降低至未处理细胞的约75%。NS3728在40μM下使细胞活力降低至未处理细胞的约45%,在50μM下使细胞活力降低至未处理细胞的约38%。SN-38(0.0064μM)使活力降低至未处理细胞的约53%。40或50μM NS3728和0.0064μM SN-38的组合引起对细胞活力的联合抑制作用,其中40μM NS3728+SN-38使细胞活力降低至未处理细胞的约35%,50μM NS3728+SN-38使细胞活力降低至未处理细胞的约22%。
NS3728和SN-38的组合对亲代LoVo CRC癌细胞的细胞活力的影响显示在图10中。
结论
这些临床前研究表明,VRAC抑制剂NS3728可以1)当作为单一疗法施用时抑制CRC细胞生长,和2)增强某些类型的化疗对人CRC细胞的效果。没有发现NS3728和奥沙利铂的联合效应。因此,结果表明用VRAC抑制剂治疗可以增强某些类型的化疗的效果。
实施例5.奥沙利铂或SN-38和NS3728在奥沙利铂(OXP)或SN-38耐受的HCT116、HT29和LoVo人结肠直肠癌(CRC)细胞系中。
如Jensen等人2015(PMID:25759163)所述,我们已经建立对化疗剂奥沙利铂(OXP)或SN-38(伊立替康的活性代谢物)具有耐受性的人CRC癌细胞系。这些细胞系是HCT116、HT29和LoVo。
我们考查了NS3728作为单一药物或与OXP或SN-38联合在OXP和SN-38耐受的细胞系中的作用。我们采用标准MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物)细胞活力测定法。将细胞接种在96孔板(10,000个细胞/孔)中并使其贴壁24小时。随后,加入NS3728、OXP、SN-38或药物组合48小时,然后测定细胞活力。所有值均以未处理细胞(命名为“无处理”)的百分比表示。“DMSO”是指溶剂对照,因为NS3728和化疗药物均在DMSO中稀释。因此,包括DMSO(二甲基亚砜)对照以研究有机溶剂对细胞活力的任何潜在影响。每个数据点以重复三次进行。
在OXP耐受的细胞中,我们测试了NS3728作为单一药剂和与SN-38或OXP联合的作用。
在SN-38耐受的细胞中,我们测试了NS3728作为单一药剂和与SN-38或OXP联合的作用。
SN-38耐受的CRC细胞系–NS3728和奥沙利铂
与用NS3728或奥沙利铂的单一疗法相比,在SN-38耐受的HCT116、HT29和LoVo CRC癌细胞系中未发现将NS3728和奥沙利铂联合的效果(数据未显示)。因此,NS3728似乎不能增强奥沙利铂在对SN-38有耐受性的奥沙利铂敏感CRC细胞的治疗效果。
HCT116SN-38耐受的CRC细胞系–NS3728和SN-38
在该细胞系中,DMSO对细胞活力没有影响。NS3728(30μM)使细胞活力降低至未处理细胞的约85%,SN-38(4μM)对细胞活力几乎没有影响。然而,4μM SN-38和30μM NS3728的组合引起细胞活力的联合降低,并因此使细胞活力显著降低至约60%。
NS3728和SN-38的组合对SN-38耐受的HCT116CRC癌细胞的细胞活力的影响显示在图11中。
HT29SN-38耐受的CRC细胞系–NS3728和SN-38
DMSO对细胞活力没有影响。NS3728(30μM)使细胞活力增加至未处理细胞的约120%。NS3728(40μM)对细胞活力没有影响,并且NS3728(50μM)使活力降低至未处理细胞的约85%。SN-38(0.8μM)使细胞活力降低至未处理细胞的约78%。0.8μM SN-38和30/40/50μMNS3728的组合引起细胞活力的显著联合降低,对于所有三种NS3728浓度均降低至小于未处理细胞的30%。
NS3728和SN-38的组合对SN-38耐受的HT29CRC癌细胞的细胞活力的影响显示在图12中。
LoVo SN-38耐受的CRC细胞系-NS3728和SN-38
DMSO使该细胞系中的细胞活力降低至未处理细胞的约80%。NS3728(30μM)使活力降低至未处理细胞的约80%,NS3728(40μM)使活力降低至未处理细胞的约57%,NS3728(50μM)使活力降低至未处理细胞的约50%。SN-38(0.16μM)使活力降低至未处理细胞的约78%。0.16μM SN-38和30/40/50μM NS3728的组合引起细胞活力的显著联合降低,对于所有三种NS3728浓度,均降低至小于未处理细胞的20%。
NS3728和SN-38的组合对SN-38耐受的LoVo CRC癌细胞的细胞活力的影响显示在图13中。
HT29奥沙利铂耐受的CRC癌细胞-NS3728和SN-38
DMSO基本上没有引起细胞活力的变化。NS3728(20μM)使活力降低至未处理细胞的约85%,SN-38(0.1μM)使活力降低至未处理细胞的约43%。20μM NS3728和0.1μM SN-38的组合引起对细胞活力的联合效应。
NS3728和SN-38的组合对奥沙利铂耐受的HT29CRC癌细胞的细胞活力的影响显示在图14中。
LoVo奥沙利铂耐受的CRC癌细胞-NS3728和SN-38
DMSO使活力降低至未处理细胞的约85%。20/30/40/50μM NS3728和SN-38(0.005μM)的组合全都对细胞活力具有显著的联合效应。
NS3728和SN-38的组合对奥沙利铂耐受的LoVo CRC癌细胞的细胞活力的影响显示在图15中。
HT116奥沙利铂耐受的CRC癌细胞-NS3728和N-38
在奥沙利铂耐受的HCT116CRC细胞中,当NS38728与SN-38组合时,观察到微小的抑制联合效应(数据未显示)。
奥沙利铂耐受的CRC癌细胞–NS3728和奥沙利铂
与使用NS3728或奥沙利铂的单一疗法相比,在奥沙利铂耐受的HCT116、HT29和LoVo CRC癌细胞系中未发现NS3728和奥沙利铂联合的效应(数据未显示)。因此,NS3728似乎不能使奥沙利铂耐受的CRC细胞对奥沙利铂治疗再敏感。
结论
这些临床前研究证明,VRAC抑制剂NS3728可增强某些类型的化疗对耐受的CRC细胞系的作用。特别感兴趣的是NS3728还增强SN-38在具有获得性SN-38耐受的或获得性奥沙利铂耐受的癌细胞中的作用。数据表明,NS3728能够使SN-38耐药癌细胞对SN-38治疗再敏感。
实施例6.他莫昔芬或氟维司群与NS3728联合在他莫昔芬耐受的MCF-7/LCC2或氟维司群MCF-7/LCC9人乳腺癌细胞系中。
如Brünner等人1993(PMID:8324732)所述,我们建立了对抗雌激素他莫昔芬具有耐受性的人乳腺癌细胞系。这些细胞系是MCF-7/LCC2。如Brünner等人1997(PMID:9270017)所述,我们还建立了对抗雌激素氟维司群具有耐受性的人乳腺癌细胞系。
MCF-7是雌激素和孕酮受体阳性细胞系。
我们分别考查了NS3728作为单一药物或与他莫昔芬或氟维司群联合在MCF-7/LCC2或MCF-7/LCC9)耐药乳腺癌细胞系中的作用。
我们采用标准MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物)细胞活力测定法。将细胞接种在96孔板(10,000个细胞/孔)中,并使其贴壁24小时。随后,加入NS3728、多西他赛或这两种药物的组合72小时,然后测定细胞活力。所有值均以未处理细胞(命名为“无处理”)的百分比表示。每个数据点以重复三次进行。
选择0.1μM他莫昔芬,因为这是在原始公布中显示的对MCF-7/LCC2细胞仅产生微小细胞生长作用而对他莫昔芬敏感细胞的生长显著更加抑制的浓度。40μM NS3728导致细胞活力微小降低至未处理对照的70%。0.1μM他莫昔芬对他莫昔芬耐受的MCF-7/LCC2细胞的细胞活力没有影响。40μM NS3728和0.1μM他莫昔芬的组合导致MCF-7/LCC2细胞活力的强且显著(P<0.05)的降低,降低至小于未处理细胞的40%(图16)。
选择1μM的氟维司群,因为这是在原始公布中作为最终浓度应用于建立MCF-7/LCC9细胞系的浓度,并且该浓度强烈抑制氟维司群敏感性MCF-7细胞的生长(Brünner等人,1997,PMID 9270017)。40μM NS3728导致细胞活力降低至未处理对照的60%。1μM氟维司群对氟维司群耐受的MCF-7/LCC9细胞的细胞活力没有影响。40μM NS3728和1μM氟维司群的组合导致MCF-7/LCC9细胞活力的强且显著(P<0.05)的降低,降低至未处理细胞的24%(图17)。
结论
这些临床前研究证明,VRAC抑制剂NS3728可增强两种类型的抗雌激素(即他莫昔芬和氟维司群)对MCF-7乳腺癌细胞的作用,所述细胞对这些类型的抗雌激素具有耐受性。因此,数据表明NS3728能够使抗雌激素耐受的乳腺癌细胞对抗雌激素治疗特别是对他莫昔芬和氟维司群的治疗再敏感。
实施例7.体内研究NS3728在多西他赛耐受的异种移植肿瘤(乳腺癌)中的再敏感作用
用一对敏感性和多西他赛耐受的三阴性人乳腺癌细胞系(MDA-MB-231)进行小鼠异种移植物实验。用于实验的小鼠严重免疫受损以防止人癌细胞的排斥。
实验设置包括三个阶段:
1.“生长”
2.“剂量-响应”
3.“药物治疗”
第1阶段:敏感性(亲代)和多西他赛耐受的MDA-MB-231细胞的生长
为了测定多西他赛敏感性和多西他赛耐受的MDA-MB-231细胞的异种移植肿瘤生长的最佳细胞数,用不同数量的敏感性或多西他赛耐受的MDA-MB-231细胞接种两组小鼠。该实验测定了癌细胞的最佳数量,其对于随后在第2和第3阶段中的剂量响应实验是重要的。
第2阶段:耐受性表型,多西他赛的剂量-响应
为了证实在异种移植的MDA-MB-231细胞中的多西他赛敏感性和耐受性表型,当肿瘤已经建立时,用多西他赛治疗小鼠。将敏感性或多西他赛耐受的MDA-MB-231细胞接种到小鼠中,细胞数如第1阶段所测定的。该实验对于证明癌细胞在体内环境中也分别具有敏感性或耐受性是重要的。
第3阶段:多西他赛使NS3728治疗再敏感
为了测定NS3728与多西他赛联合在多西他赛耐受的异种移植肿瘤中的再敏感作用,将亲代和多西他赛耐受的MDA-MB-231细胞接种到小鼠中并用溶媒(对照组)、单独的多西他赛、单独的NS3728或NS3728和多西他赛的组合治疗。
在所有步骤中,通过触诊监测肿瘤形成并通过卡尺进行测量。计算肿瘤体积并针对时间绘制生长曲线。当肿瘤接近最大尺寸(12mm)时或者如果小鼠表现出任何不适或疾病的体征时,对小鼠实施安乐死。
结论
基于我们的体外实验(图6)和紫杉醇的异种移植物实验(图4),我们期望观察到多西他赛和NS3728的组合将在异种移植的多西他赛耐受的MDA-MB-231细胞中恢复多西他赛的敏感性,反映在与单独的NS3728或单独的多西他赛相比,肿瘤体积减小。
Claims (48)
1.一种使癌细胞对抗癌治疗剂敏感的方法,包括向有此需要的受试者施用有效量的VRAC调节剂。
2.一种增强抗癌治疗剂的治疗效果的方法,包括向有此需要的受试者施用有效量的VRAC调节剂。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述VRAC调节剂与抗癌治疗剂共同施用。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述抗癌治疗剂是化疗剂,所述化疗剂选自拓扑异构酶抑制剂、抗激素剂、烷化剂、有丝分裂抑制剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、皮质类固醇、靶向抗癌疗法、分化剂和免疫疗法。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述抗癌治疗剂是拓扑异构酶抑制剂,如拓扑异构酶I抑制剂,例如伊立替康或其活性代谢物SN-38。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中
a.所述抗癌治疗剂包括拓扑异构酶抑制剂,如拓扑异构酶I抑制剂,例如伊立替康,
b.所述VRAC抑制剂是NS3728,并且
c.所述癌症是结肠直肠癌,如伊立替康耐受的结肠直肠癌,任选地其中所述结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述抗癌治疗剂是抗激素剂,如抗雌激素、抗孕激素或抗雄激素,并且所述癌症是类固醇激素受体阳性癌症。
8.根据权利要求7所述的方法,其中所述抗激素剂是抗雌激素剂,如氟维司群或他莫昔芬。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中
a.所述抗癌治疗剂包括抗雌激素,例如氟维司群或他莫昔芬,
b.所述VRAC抑制剂是NS3728,并且
c.所述癌症是雌激素受体阳性癌症,如氟维司群或他莫昔芬耐受的癌症,优选地其中所述雌激素受体阳性癌症是乳腺癌,任选地其中所述乳腺癌是转移性乳腺癌。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述抗癌治疗剂是烷化剂,如替莫唑胺。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述抗癌治疗剂是有丝分裂抑制剂,如紫杉醇或多西他赛。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述抗癌治疗剂是抗代谢物,如5-氟尿嘧啶(5-FU)。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述治疗是协同治疗。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中施用所述VRAC调节剂允许以亚治疗剂量(低于正常剂量)施用化疗剂。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述VRAC调节剂与抗癌治疗剂共同施用,从而增强所述抗癌治疗剂的效果。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述VRAC调节剂在施加抗癌治疗剂之前和/或同时和/或之后施用。
17.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述VRAC调节剂在施加抗癌治疗剂之前施用。
18.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中施用VRAC调节剂增强所述抗癌治疗剂的临床效果。
19.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述VRAC调节剂是VRAC阻断剂,优选地其IC50为5μM或更低,如3μM或更低,例如1μM或更低,如0.5μM或更低,例如0.1μM或或更低,如10nM或更低,例如5nM或更低。
20.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述VRAC调节剂选自NS3728、NS3623、NS3749和他莫昔芬。
21.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述VRAC调节剂是通式I的化合物或其药学上可接受的盐:
其中R2表示四唑基;并且
R3、R4、R5、R6、R12、R13、R14、R15和R16彼此独立地表示氢、卤素、三氟甲基、硝基、烷基、烷基羰基、-NRaRb、-NRa-CO-Rb、苯基或杂芳基;
该苯基任选地被卤素、三氟甲基、硝基、-CO-NHRc、-CO-O-Rc或-CO-NR’R”取代;
其中Rc是氢、烷基或苯基;
R’和R”彼此独立地是氢或烷基;或
R’和R”与它们所连接的氮一起形成5至7元杂环,该环可以任选地包含一个氧原子和/或一个另外的氮原子和/或一个碳碳双键和/或一个碳氮双键作为环成员;
并且该杂环可以任选地被烷基取代;
Ra和Rb彼此独立地是氢或烷基;或者
R15和R16或R14和R15与它们所连接的苯环一起形成萘环或茚满环;并且R3、R4、R5、R6、R12和R13以及R14、R15和R16中剩余的一个如上文所定义。
22.根据权利要求21所述的方法,其中
R3、R5和R6表示氢;并且
R4表示卤素。
23.根据权利要求21所述的方法,其中
R3、R5和R6表示氢;并且
R4表示被三氟甲基、硝基或-CO-NHRc取代的苯基;
其中Rc是苯基。
24.根据权利要求21所述的方法,其中所述化合物是
N-4-硝基苯基-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;NS3749
N-3,5-二(三氟甲基)苯基-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;NS3728N-3-三氟甲基苯基-N’-[4-(3-硝基苯基)-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;NS3642
N-3-三氟甲基苯基-N’-[4-(4-苯胺基羰基苯基)-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;NS3656
N-3-三氟甲基苯基-N’-[4-(4-三氟甲基苯基)-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;NS3638
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS1082
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3623
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[4-苯基-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3625
N-(3-氯-苯基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3629
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[4-氨基-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3639
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[4-乙酰基氨基-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3643
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[4-氨基甲酰基-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3651
N-(3-三氟甲基-苯基)-N′-[4-(N″,N″-二甲基氨基甲酰基)-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3653
3′-(1-H-四唑-5-基)-4′-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-联苯-4-羧酸;NS3655
N-(茚满-5-基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3657
N-(联苯-4-基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3658
N-(联苯-3-基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3659
N-(3-乙酰基-苯基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3660
N-(联苯-3-基)-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3673
N-[3-(吡啶-3-基)-苯基]-N′-[2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3685
N-(3-溴-苯基)-N′-[4′-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-3-(1-H-四唑-5-基)-联苯-4-基]脲;NS3708
N-(3,5-二氯-苯基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3715
N-(3,4-二氯-苯基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3724
N-(萘-1-基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3725
N-(2-三氟甲基-苯基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3732
N-(2-氟-苯基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3735
N-(2-乙基-苯基)-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)-苯基]脲;NS3739
或其药学上可接受的盐。
25.根据权利要求21所述的方法,其中所述化合物是
N-4-硝基苯基-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;NS3749
N-3,5-二(三氟甲基)苯基-N′-[4-溴-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;NS3728N-3-三氟甲基苯基-N’-[4-(3-硝基苯基)-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;NS3642
N-3-三氟甲基苯基-N’-[4-(4-苯胺基羰基苯基)-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;NS3656
N-3-三氟甲基苯基-N’-[4-(4-三氟甲基苯基)-2-(1-H-四唑-5-基)苯基]脲;NS3638
或其药学上可接受的盐。
26.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述VRAC调节剂是NS3728。
27.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述VRAC调节剂是以用于口服施用的片剂或胶囊剂的形式。
28.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述VRAC调节剂是以用于静脉内施用或连续输注的液体的形式。
29.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述抗癌治疗剂不包括用基于金属如基于铂、钌、金或钛的抗癌药物治疗,或者不由其组成。
30.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述抗癌治疗剂不包括用基于铂的抗癌药物如顺铂、卡铂、奥沙利铂或奈达铂治疗,或者不由其组成。
31.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述癌症对抗癌治疗剂如化疗剂具有耐受性。
32.根据权利要求31所述的方法,其中耐受性是先天性耐受。
33.根据权利要求31所述的方法,其中耐受性是获得性耐受。
34.根据权利要求31至33中任一项所述的方法,其中用所述VRAC调节剂治疗使所述癌症对所述抗癌治疗剂再敏感。
35.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述癌症是实体瘤,如选自肉瘤、癌和淋巴瘤的实体瘤。
36.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述癌症选自结肠直肠癌、乳腺癌、肺癌(非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、成胶质细胞瘤、头颈癌、恶性黑素瘤、基底细胞皮肤癌、鳞状细胞皮肤癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、肛门癌、子宫颈癌、膀胱癌、子宫体癌、卵巢癌、胆囊癌、肉瘤、白血病(骨髓性和淋巴性)、淋巴瘤、骨髓瘤。
37.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述癌症是转移性癌症。
38.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述癌症是结肠直肠癌,如转移性结肠直肠癌。
39.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述癌症是乳腺癌,如转移性乳腺癌。
40.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述癌症是成胶质细胞瘤。
41.一种治疗癌症的方法,包括向有此需要的受试者施用有效量的VRAC调节剂和有效量的抗癌治疗剂,如化疗剂。
42.一种药物组合物,包含有效量的VRAC调节剂、化疗剂和一种或多种药学上可接受的佐剂、赋形剂、载体、缓冲剂和/或稀释剂。
43.一种组合物,其包含有效量的VRAC调节剂和有效量的化疗剂,其用作药物。
44.一种组合物,其包含有效量的VRAC调节剂和有效量的化疗剂,其用于治疗癌症。
45.一种VRAC调节剂,用于使癌细胞对抗癌治疗剂敏感。
46.一种VRAC调节剂,用于增强抗癌治疗剂的治疗效果。
47.一种试剂盒,包含VRAC调节剂和化疗剂以及任选的使用说明书,其中所述VRAC调节剂和所述化疗剂配制用于同时、顺序或分开施用。
48.VRAC调节剂在制备用于使癌细胞对抗癌治疗剂敏感或用于增强抗癌治疗剂的治疗效果的药物中的用途。
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