CN109468398B - 一种鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列、引物及方法 - Google Patents

一种鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列、引物及方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109468398B
CN109468398B CN201811378992.6A CN201811378992A CN109468398B CN 109468398 B CN109468398 B CN 109468398B CN 201811378992 A CN201811378992 A CN 201811378992A CN 109468398 B CN109468398 B CN 109468398B
Authority
CN
China
Prior art keywords
polygonatum
primer
dna
sample
cyrtonema
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811378992.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109468398A (zh
Inventor
陈友吾
李海波
宋其岩
胡传久
叶碧欢
杜国坚
余水生
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Jiulongshan National Nature Reserve Management Center
Zhejiang Academy of Forestry
Original Assignee
Zhejiang Jiulongshan National Nature Reserve Management Center
Zhejiang Academy of Forestry
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Jiulongshan National Nature Reserve Management Center, Zhejiang Academy of Forestry filed Critical Zhejiang Jiulongshan National Nature Reserve Management Center
Priority to CN201811378992.6A priority Critical patent/CN109468398B/zh
Publication of CN109468398A publication Critical patent/CN109468398A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109468398B publication Critical patent/CN109468398B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6858—Allele-specific amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及鉴别长梗黄精(Polygonatum filipe)和多花黄精(Polygonatum cyrtonema)的特征序列、特异性标记引物，以及快速鉴定的方法。所述特征序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物序列如下：上游引物826F1：5′‑ACACACACCACTAATGAAA‑3′，下游引物826R1：5′‑AAACTACTAAGAGAGCGTGAG‑3′。本发明特征序列和分子特异性标记引物可对长梗黄精和多花黄精进行快速的鉴别，方法简单、快捷、准确，是表观特征辨别长梗黄精和多花黄精所不能替代的分子手段。

Description

一种鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列、引物及方法
技术领域
本发明涉及一种鉴别长梗黄精（Polygonatum filipe）和多花黄精（Polygonatum cyrtonema）的特征序列、特异性标记引物，以及一种利用该引物对两者进行准确辨别的方法。。
背景技术
黄精，始载于《名医别录》，性味甘，平，归脾、肺、肾经。在临床上对治疗体倦乏力、脾胃气虚、肾虚亏损、肺虚燥咳、内热消渴、精血不足、须发早白、口干食少等有一定功效，有“血气双补之王”的美称，同时也可用于治疗肺结核、糖尿病、慢性肝炎等疾病，具有抗肿瘤、抗辐射等作用。黄精地下块茎富含多糖、皂苷、氨基酸、生物碱、微量元素等，具有很高的药用价值和食用价值。此外，黄精还可作为观赏植物开发利用。由此可见，黄精具有巨大的开发潜力和广阔的市场前景。
长梗黄精（P. filipe）和多花黄精（P. cyrtonema）均属于百合科黄精属的多年生草本植物，在形态上具有相似性，通常人们依据黄精叶片的长宽比，叶背有无短毛，花梗长度以及花丝上端是否膨大等形态学特征作为判别依据。由于生长环境、气候条件、土壤养分及生长年限等因素的影响，即使同一种黄精生长在不同地区其形态特征也会存在一定差异，因此形态鉴别往往缺乏准确性。此外，黄精块茎作为其药食同源的主要材料，均为结节状或连珠状膨大，其显微特征也极为相似，更不易直接被鉴别。与此同时，多花黄精被纳入《中国药典》，作为黄精药用的其中一种基源植物，而长梗黄精则未被列入其中，市场上易发生将长梗黄精混淆为多花黄精的现象，给黄精的市场秩序和药用安全性等带来了一定的隐患。因此，为区别两种不同来源的黄精药材，有必要对其鉴别方法进行研究。
目前，RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA，随机扩增多态性DNA）和ISSR（Inter-Simple Sequence Repeat，简单序列重复区间扩增多态性）分子标记技术已被用于黄精属植物的亲缘关系研究、种质资源鉴别和遗传多样性分析。这些分子标记技术均采用通用型引物，需要大量的引物筛选，且PCR扩增图谱的条带多，重复性较差，特异性不高。因此，只有发掘出可靠稳定的种特异性DNA指纹才能更有效地用于不同黄精种间的准确、快速鉴定。
发明内容
本发明目的提供可鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列及分子特异性标记引物，以及一种利用该引物对这两种不同的黄精进行快速辨别的方法。
本发明采用的技术方案是：
鉴别长梗黄精（Polygonatum filipe）和多花黄精（Polygonatum cyrtonema）的特征序列，其序列如下：
5′-ACACACACCACTAATGAAAAAAAGAGTCGTATGGAATTTAATATCATGTTTT GCTTGTTATTGGATGGAAACGAATAGATGGAACTGAAAGAAAGAGGGAACTGCACTTTGTTTCCTTTGGTTTCACACTCACGCTCTCTTAGTAGTTT-3′。
鉴别长梗黄精和多花黄精的分子特异性标记引物，所述引物序列如下：
上游引物826F1：5′-ACACACACCACTAATGAAA-3′，
下游引物826R1：5′-AAACTACTAAGAGAGCGTGAG-3′。
该引物对是采用ISSR分子标记技术，经过PCR扩增，大量筛选获得长梗黄精的特异性DNA片段（SEQ ID No.1）之后，后将该片段克隆测序，并以DNA序列为基础设计其特异性引物，以该引物对长梗黄精和多花黄精进行PCR扩增，仅长梗黄精可稳定获得149bp大小的特异性片段，而多花黄精不能获得该特异性片段。需要说明的是，本发明分子特异性标记引物仅限于长梗黄精和多花黄精的鉴定，即待测样品仅限于长梗黄精和多花黄精，本领域普通技术人员可根据黄精植株或块茎形态特征先进行初步的判断，再将判断可能为长梗黄精或多花黄精的样本用本发明方法进行鉴别。
本发明还涉及一种利用所述的分子特异性标记引物对长梗黄精和多花黄精进行快速鉴定的方法，所述方法为：提取待测黄精样本的基因组DNA作为模板，以所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，若电泳结果出现约149bp的DNA条带，则待测黄精样品为长梗黄精，若电泳结果未出现约149bp的DNA条带，则待测黄精样品为多花黄精；所述分子特异性标记引物序列为：
上游引物826F1：5′-ACACACACCACTAATGAAA-3′，
下游引物826R1：5′-AAACTACTAAGAGAGCGTGAG-3′。
所述PCR扩增条件如下：94℃预变性6 min后；94℃变性40 s，53.5℃退火40 s，72℃延伸2 min，共35个循环；最后于72℃补平7 min，终止温度为4℃。
具体的，所述方法如下：
（1）取待测黄精样品块茎洗净，切片，硅胶干燥（≥7 d），取适量加液氮磨碎，提取待测黄精样本块茎的基因组DNA；
（2）对步骤（1）获得的样品基因组DNA进行核酸纯度及浓度的检测，OD260/OD280>1.8的DNA样品用于后续PCR扩增，并稀释至基因组DNA浓度为20 ng/uL左右用于后续检测；DNA提取物于-20℃冰箱贮藏备用。
（3）以步骤（2）稀释的基因组DNA为模板，以所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增：
PCR反应体系每20μL组成如下：
2×Power Taq PCR Master Mix 10 μL，
10 μM上、下游引物 各1.5 μL，
20 ng/μL模板DNA 3 μL，
ddH2O补足至20 μL；
PCR反应条件如下：
94℃预变性6 min后；94℃变性40 s，53.5℃退火40 s，72℃延伸2 min，共35个循环；最后于72℃补平7 min，终止温度为4℃；
（4）取步骤（3）扩增产物4 μL，点样于1.5%的琼脂糖凝胶上，于1×TAE缓冲液中电泳20 min，后于自动凝胶图像分析仪上照相；若电泳结果出现约149bp的DNA条带，则待测样品为长梗黄精；若电泳结果未出现约149bp的DNA条带，则待测样品为多花黄精。
本发明有益效果主要体现在：本发明特征序列和分子特异性标记引物可用于长梗黄精和多花黄精块茎的鉴别，方法简单、快捷、准确。虽然长梗黄精和多花黄精在植物叶片的形态特征上存在一定差异，但是块茎的形态差异并不显著，而黄精又以块茎为重要的药食材料，因而易将长梗黄精块茎错误认定为多花黄精的情况时有发生。采用本发明方法，可对长梗黄精和多花黄精的块茎进行快速的分子鉴定，方法简单、快捷、准确，是形态特征辨别的有效辅助。
附图说明
图1为对长梗黄精（P. filipe）和多花黄精（P. cyrtonema）进行PCR扩增的结果；M为DNA分子量标准；编号1~10为长梗黄精，扩增出了片段大小为149bp的特异DNA~条带；编号11~20为多花黄精，未见有149bp大小的特异DNA条带产生。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1：
（1）两种黄精的基因组DNA的提取：
取待测黄精样品块茎洗净，切片，硅胶干燥（≥7 d），取0.03 g，加液氮彻底磨碎，基因组DNA的提取采用新型快速植物基因组DNA试剂盒（DP3112，BioTeke，北京百泰克生物技术有限公司），依据说明书操作来提取获得标本的基因组DNA。
（2）对所获得的基因组DNA通过1.5%的琼脂糖凝胶电泳和DNA/RNA紫外分光光度计（Nanodrop Technologies，USA）来检测完整性、纯度及浓度。OD260/OD280>1.8的DNA样品用于后续PCR扩增，并根据核酸浓度值进行适量的稀释，使得基因组DNA浓度约为20 ng/μL。DNA提取物于-20℃冰箱贮藏备用。
（3）设计特异PCR扩增引物，引物对的序列为：
上游引物826F1：5′-ACACACACCACTAATGAAA-3′
下游引物826R1：5′-AAACTACTAAGAGAGCGTGAG-3′
引物由上海生物工程技术有限公司合成。
（4）以步骤（2）经稀释为20 ng/μL的基因组DNA为模板，以826F1/R1作为扩增引物对，进行PCR扩增，目标片段大小为149bp。
所述PCR扩增反应体系组成如下（总体积20 μL）：
2×Power Taq PCR Master Mix 10 μL，
10 uM上游引物 1.5 uL，
10 μM下游引物 1.5 uL，
模板DNA 3 uL，
ddH2O 4 μL，
PCR反应条件如下：
94℃预变性5 min后；94℃变性40 s，53.5℃退火40 s，72℃延伸2 min，共35个循环；最后于72℃补平7 min，终止温度为4℃。
（5）取步骤（4）扩增产物4 μL，点样于1.5%的琼脂糖凝胶上，于1×TAE缓冲液中电泳20 min（200 mA，150 V），后于Bio-Rad凝胶成像系统上照相。若电泳结果出现149bp的DNA条带，则待测样品为长梗黄精；若电泳结果未出现149bp的DNA条带，则待测样品为多花黄精。
上述引物由杭州擎科梓熙生物技术有限公司合成，扩增反应在杭州博日公司的LifeECO 基因扩增仪上进行。
按照上述方法，对来自浙江省衢州市和丽水市地区的各10份长梗黄精和多花黄精样品进行PCR扩增及电泳检测，样品明细如表1所示，结果如图1所示。其中1~10为长梗黄精样品，其PCR扩增产物可见149bp的特异性条带；11~20为多花黄精样品，其PCR扩增产物未见149bp的条带。
表1：样品明细表
Figure 656140DEST_PATH_IMAGE001
由图可见，所有长梗黄精（P. filipe）样本中扩增出了一条清晰明亮、稳定的分子量约为149bp的特异DNA条带，而多花黄精（P. cyrtonema）样本，未见有149bp大小的特殊DNA条带产生，也未有其它非目的条带产生，可见本发明开发出的分子特异性标记引物用于多花黄精（P. cyrtonema）的鉴定，其稳定性、特异性非常高。
序列表
<110> 浙江省林业科学研究院
浙江九龙山国家级自然保护区管理局
<120> 一种鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列、引物及方法
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 149
<212> DNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 1
acacacacca ctaatgaaaa aaagagtcgt atggaattta atatcatgtt ttgcttgtta 60
ttggatggaa acgaatagat ggaactgaaa gaaagaggga actgcacttt gtttcctttg 120
gtttcacact cacgctctct tagtagttt 149
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 2
acacacacca ctaatgaaa 19
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 3
aaactactaa gagagcgtga g 21

Claims (3)

1.鉴别长梗黄精和多花黄精的分子特异性标记引物，所述引物序列如下：
上游引物826F1：5′-ACACACACCACTAATGAAA-3′，
下游引物826R1：5′-AAACTACTAAGAGAGCGTGAG-3′。
2.一种利用权利要求1所述的分子特异性标记引物对长梗黄精和多花黄精进行快速区分的方法，所述方法为：提取待测黄精样本的基因组DNA作为模板，以所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，若电泳结果出现149bp的DNA条带，则待测黄精样品为长梗黄精，若电泳结果未出现149bp的DNA条带，则待测黄精样品为多花黄精；所述分子特异性标记引物序列为：
上游引物826F1：5′-ACACACACCACTAATGAAA-3′，
下游引物826R1：5′-AAACTACTAAGAGAGCGTGAG-3′；
所述PCR扩增条件如下：94℃预变性6 min后；94℃变性40 s，53.5℃退火40 s，72℃延伸2 min，共35个循环；最后于72℃补平7 min，终止温度为4℃。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述方法如下：
（1）取待测黄精样品块茎洗净，切片，硅胶干燥，取适量加液氮磨碎，提取待测黄精样本块茎的基因组DNA；
（2）对步骤（1）获得的样品基因组DNA进行核酸纯度及浓度的检测，OD260/OD280>1.8的DNA样品用于后续PCR扩增，并稀释基因组DNA浓度为20 ng/uL用于后续检测；
（3）以步骤（2）稀释的基因组DNA为模板，以所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增：
PCR反应体系每20 μL组成如下：
2×Power Taq PCR Master Mix 10 μL，
10 μM上、下游引物 各1.5 μL，
20 ng/μL模板DNA 3 μL，
ddH2O补足至20 μL；
PCR反应条件如下：
94℃预变性6 min后；94℃变性40 s，53.5℃退火40 s，72℃延伸2 min，共35个循环；最后于72℃补平7 min，终止温度为4℃；
（4）取步骤（3）扩增产物4 μL，点样于1.5%的琼脂糖凝胶上，于1×TAE缓冲液中电泳20min，后于自动凝胶图像分析仪上照相；若电泳结果出现149bp的DNA条带，则待测样品为长梗黄精，若电泳结果未出现149bp的DNA条带，则待测黄精样品为多花黄精。
CN201811378992.6A 2018-11-19 2018-11-19 一种鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列、引物及方法 Active CN109468398B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811378992.6A CN109468398B (zh) 2018-11-19 2018-11-19 一种鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列、引物及方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811378992.6A CN109468398B (zh) 2018-11-19 2018-11-19 一种鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列、引物及方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109468398A CN109468398A (zh) 2019-03-15
CN109468398B true CN109468398B (zh) 2021-05-14

Family

ID=65673023

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811378992.6A Active CN109468398B (zh) 2018-11-19 2018-11-19 一种鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列、引物及方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109468398B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101654708A (zh) * 2009-09-21 2010-02-24 安徽师范大学 长梗黄精微卫星标记
CN104894124A (zh) * 2015-06-19 2015-09-09 苏州市种子管理站 能够鉴定吴江香青菜的issr-scar标记及其鉴定方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012133127A1 (ja) * 2011-03-31 2012-10-04 株式会社グライエンス ブドウ球菌属内の菌種を判別する方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101654708A (zh) * 2009-09-21 2010-02-24 安徽师范大学 长梗黄精微卫星标记
CN104894124A (zh) * 2015-06-19 2015-09-09 苏州市种子管理站 能够鉴定吴江香青菜的issr-scar标记及其鉴定方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
基于ISSR标记的福建省多花黄精与长梗黄精种质鉴别及遗传多样性分析;徐惠龙等;《福建农业学报》;20170630;第32卷(第6期);第621页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109468398A (zh) 2019-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108660136A (zh) 薄壳山核桃品种Davis的特征序列、标记引物及鉴定方法
CN106834467A (zh) 一种地龙的dna条形码分子鉴定方法
KR20130075986A (ko) 고구마의 품종판별을 위한 ｓｓｒ 프라이머 및 이를 이용한 고구마의 품종 판별 방법
CN104073550B (zh) 一种鉴别罗汉果性别的scar分子标记
CN106916897A (zh) 一种用于鉴定印度南瓜‘银辉三号’杂交种子纯度的分子标记及其应用
CN111826460A (zh) 用于鉴别平贝母的特异性pcr鉴别引物及其应用
CN105002272A (zh) 一种rapd标记竹节参及其近缘植物的品种鉴别的方法
CN109371154B (zh) 鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列、引物及方法
CN114196787A (zh) 一种中国南瓜曲叶病毒rpa-lfd快速可视化检测试剂盒及其应用
CN109762918B (zh) 鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列、引物及方法
CN104673790B (zh) 油茶良种长林18号的分子特异性标记引物及鉴定方法
KR102382106B1 (ko) 한 세트의 자영지와 적영지 균종 감별용 특이적 분자 마커 및 감별 방법과 응용
CN109468398B (zh) 一种鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列、引物及方法
CN109652589B (zh) 薄壳山核桃品种Gloria Grande的特征序列、标记引物及鉴定方法
CN107586866A (zh) 薄壳山核桃品种Moore的特征序列、标记引物及鉴定方法
CN108517373B (zh) 一个用于区分五个辣椒栽培种的InDel标记引物对及其应用
CN109609679A (zh) 鉴别灵芝菌株gims1524的特征性核苷酸序列、核酸分子探针、试剂盒和方法
CN112359135B (zh) 太白贝母的Indel标记引物及其应用
CN108754015A (zh) 用于青杨雌性幼苗快速鉴定的特异性分子标记pcmi-f001
CN109694922B (zh) 薄壳山核桃品种Dependable的特征序列、标记引物及鉴定方法
CN114438246A (zh) 用于鉴别重楼品种及其混伪品的引物组、试剂盒和方法
CN109536627B (zh) 鉴别丝状支原体山羊亚种和山羊支原体山羊肺炎亚种的hrm引物及方法
CN109022610B (zh) 一种金线莲的分子特异性标记引物及其鉴别方法
CN116287424B (zh) 一种用于姜状三七检测的引物、探针及其检测方法
CN111304358B (zh) 基于冬瓜转录组序列开发的est-ssr引物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information

Address after: 310023 No. 399, reserved Road, little and high mountain teaching area, Hangzhou, Zhejiang

Applicant after: Zhejiang Academy of Forestry

Applicant after: Zhejiang Jiulongshan National Nature Reserve Management Center

Address before: 310023 No. 399, reserved Road, little and high mountain teaching area, Hangzhou, Zhejiang

Applicant before: Zhejiang Academy of Forestry

Applicant before: ZHEJIANG JIULONGSHAN NATIONAL-LEVEL NATURAL RESERVE MANAGEMENT BUREAU

CB02 Change of applicant information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant