CN109468300A - 一种酯化红曲的培养基的制备方法 - Google Patents

一种酯化红曲的培养基的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明的一种酯化红曲的培养基的制备方法，属于生物工程技术领域。本发明以菜籽皮、菜籽粕和玉米粉为主要原料，通过试管斜面菌种的制备、三角瓶菌种的制备、生产用菌种的制备、准备发酵基料、拌种、打堆发酵、摊堆发酵、低温烘干的工艺步骤得到得酯化酶粗酶制剂，即为酯化红曲的培养基。本发明的一种酯化红曲的培养基的制备方法，可以提高红曲酯化力，工艺简单，成本低。

Description

一种酯化红曲的培养基的制备方法
技术领域
本发明涉及一种酯化红曲的培养基的制备方法，属于生物工程技术领域。
背景技术
酯化酶是脂肪酶和酯酶的统称，可以催化多种酸和醇的反应生成酯类。酯化酶技术就是利用酯化酶将酸与醇酶促生成酯，作为增香、调香剂，可以避免因使用化学香精类物质对人体的危害。酯化酶在白酒生产中的应用主要是合成各种酯类，为方便工业化生产，多制成粗酶制剂应用于生产中。酯化红曲是高酯化力曲霉为主的生物酶和活菌体的生态复合菌制剂，可以加速白酒发酵过程中酯的形成，缩短发酵周期，成为提高白酒中酯的含量成为关键。
菜籽皮是菜籽加工中的主要副产品之一，经试验表明，菜籽皮干基蛋白质含量为12.9％，粗纤维含量为48.7％，脂肪含量为8.4％，灰分4％，总糖2％，其中主要含木糖和树胶酵糖。菜籽皮中含有大量多酚类物质，具有抗氧化作用，同时影响其氨基酸含量，酶活性等，是菜籽皮很重要的营养物质。菜籽粕是菜籽榨油后的主要副产物，是一种重要的饲料蛋白来源，其粗蛋白含量在35％-40％，氨基酸组成均衡；碳水化合物含量大于20％，大部分为粗纤维和戊聚糖；矿物质含量丰富。菜籽种皮一般占整籽比例为16％，菜籽榨油后菜籽粕的得率约为30％，将菜耔皮和菜籽粕收集起来其数量是巨大的，对其进行综合利用具有十分重要的意义。
但是现有的酯化红曲的培养基，红曲酯化力低，工艺复杂，成本高。
发明内容
本发明提供的一种酯化红曲的培养基的制备方法，可以提高红曲酯化力，工艺简单，成本低。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种酯化红曲的培养基的制备方法，为下述步骤：
(1)试管斜面菌种的制备，将分装有改良察氏琼脂的试管在高温高压下灭菌，在无菌条件下，将实验室筛选诱变获得的烟灰色红曲霉HN215-6接种于试管中，在30～32℃培养48～52h，得到第一试管斜面菌种；
(2)三角瓶菌种的制备，在500mL的三角瓶中加入大米培养基，在无菌条件下，接入1～5环步骤(1)中的第一试管斜面菌种，于30～32℃、200rpm条件下摇瓶培养48h～52h，得到第一三角瓶菌种；
(3)生产用菌种的制备，向灭菌后的500L种子罐中加入大米培养基，在120～125℃温度下灭菌30min，待种子罐冷却至35～40℃时，按种子罐中物料体积总量的0.10～0.15％接入步骤(2)中的第一三角瓶菌种，在转速240rpm、温度32～34℃、灌压0.05～0.07Mpa、无菌空气流量8～10m3/h的条件下，培养48～72h得第一生产用菌种；
(4)发酵用基料的准备，将菜籽皮、菜籽粕和玉米粉投入蒸料罐内，旋转混合时间10～15min，向蒸料罐内加水，料水质量比为1：0.4，然后在115-130℃温度下蒸料30min，在常压和温度为90℃环境下凉料，得基料，将基料从蒸料罐内放出，转入发酵池，基料温度冷却至35～40℃，得冷却后基料，将冷却后基料中加入步骤(3)中的第一生产用菌种，按照每克基料的20～21mL第一生产用菌种来进行接种，混合拌种，按照每克基料加入0.1～0.12mL的乳酸来添加乳酸，然后温度维持32～35℃，得拌种基料；
(5)发酵，将步骤(4)中的拌种基料堆厚40～50cm，表面覆以灭菌的麻袋，在室温下发酵培养10～15h，得发酵基料，当发酵基料的温度达到48～50℃时，摊薄发酵基料，摊薄至堆厚为15～20cm，在20～25℃下，通风维持内部温度为32～35℃，发酵培养3～5d，每天翻料一次，得发酵好的基料，将发酵好的基料在≤65℃温度下烘干至水分≤12％，得低温烘干基料；
(6)烘干破碎，将低温烘干基料粉碎，细度为100％过40目，得酯化酶粗酶制剂，即为酯化红曲的培养基。
所述步骤(1)的察氏斜面培养基中各组分及含量分别为：NaNO30.3～0.35％、KH2PO40.10～0.12％、MgSO40.05～0.07％、KCl0.05～0.07％、FeSO40.001～0.0015％、蔗糖3～3.2％、琼脂2～2.5％和水100ml，灭菌温度为115-130℃，压力为2-4个大气压下灭菌10-20min。
所述步骤(2)中灭菌温度为115-130℃，压力为2-4个大气压下灭菌15-30min，所述大米培养基中各组分及含量为大米粉0.5-1.5％和水100ml。
所述步骤(3)中大米培养基中各组分及含量为大米粉15～15.3Kg和水200L。
所述步骤(4)冷却后基料中各组分的含量为菜籽皮55～65％、菜籽粕10％～20％，玉米粉20～30％。
菜籽皮和菜籽粕是菜籽加工中的主要副产品，菜籽种皮一般占整籽的16％，菜籽榨油后菜籽粕的得率约为30％，将菜耔皮和菜籽粕收集起来其数量是巨大的。传统的酯化红曲发酵培养基中麸皮的粗蛋白含量较低且质量较差，含有大量的限制性氨基酸和抗营养因子；菜籽皮和菜籽粕复配后蛋白质含量较高，氨基酸组成均衡，并含有丰富的不溶性膳食纤维、矿物质和酚类物质，与麸皮相比，是一种优质的氮源，更有利于酯化红曲的生长。本发明利用菜籽皮和菜籽粕替代麸皮制备酯化用去培养基，可以减少成本，提高红曲的酯化力，具有很强的生物技术价值和实际应用价值。
本发明的有益效果为：可以提高红曲酯化力，工艺简单，成本低。
附图说明
图1是本发明工艺流程图。
具体实施方式
现在结合具体对本发明作进一步详细的说明。
下面结合图1和实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
一种酯化红曲的培养基的制备方法，为下述步骤：
(1)试管斜面菌种的制备，将分装有改良察氏琼脂的试管在高温高压下灭菌，在无菌条件下，将实验室筛选诱变获得的烟灰色红曲霉HN215-6接种于试管中，在30～32℃培养48～52h，得到第一试管斜面菌种；
(2)三角瓶菌种的制备，在500mL的三角瓶中加入大米培养基，在无菌条件下，接入1～5环步骤(1)中的第一试管斜面菌种，于30～32℃、200rpm条件下摇瓶培养48h～52h，得到第一三角瓶菌种；
(3)生产用菌种的制备，向灭菌后的500L种子罐中加入大米培养基，在120～125℃温度下灭菌30min，待种子罐冷却至35～40℃时，按种子罐中物料体积总量的0.10～0.15％接入步骤(2)中的第一三角瓶菌种，在转速240rpm、温度32～34℃、灌压0.05～0.07Mpa、无菌空气流量8～10m3/h的条件下，培养48～72h得第一生产用菌种；
(4)发酵用基料的准备，将菜籽皮、菜籽粕和玉米粉投入蒸料罐内，旋转混合时间10～15min，向蒸料罐内加水，料水质量比为1：0.4，然后在115-130℃温度下蒸料30min，在常压和温度为90℃环境下凉料，得基料，将基料从蒸料罐内放出，转入发酵池，基料温度冷却至35～40℃，得冷却后基料，将冷却后基料中加入步骤(3)中的第一生产用菌种，按照每克基料的20～21mL第一生产用菌种来进行接种，混合拌种，按照每克基料加入0.1～0.12mL的乳酸来添加乳酸，然后温度维持32～35℃，得拌种基料；
(5)发酵，将步骤(4)中的拌种基料堆厚40～50cm，表面覆以灭菌的麻袋，在室温下发酵培养10～15h，得发酵基料，当发酵基料的温度达到48～50℃时，摊薄发酵基料，摊薄至堆厚为15～20cm，在20～25℃下，通风维持内部温度为32～35℃，发酵培养3～5d，每天翻料一次，得发酵好的基料，将发酵好的基料在≤65℃温度下烘干至水分≤12％，得低温烘干基料；
(6)烘干破碎，将低温烘干基料粉碎，细度为100％过40目，得酯化酶粗酶制剂，即为酯化红曲的培养基。
所述步骤(1)的察氏斜面培养基中各组分及含量分别为：NaNO30.3～0.35％、KH2PO40.10～0.12％、MgSO40.05～0.07％、KCl0.05～0.07％、FeSO40.001～0.0015％、蔗糖3～3.2％、琼脂2～2.5％和水100ml，灭菌温度为115-130℃，压力为2-4个大气压下灭菌10-20min。
所述步骤(2)中灭菌温度为115-130℃，压力为2-4个大气压下灭菌15-30min，所述大米培养基中各组分及含量为大米粉0.5-1.5％和水100ml。
所述步骤(3)中大米培养基中各组分及含量为大米粉15～15.3Kg和水200L。
所述步骤(4)冷却后基料中各组分的含量为菜籽皮55～65％、菜籽粕10％～20％，玉米粉20～30％。
对比实施例：
(1)试管斜面菌种的制备，将分装有改良察氏琼脂的试管在高温高压下灭菌，在无菌条件下，将实验室筛选诱变获得的烟灰色红曲霉HN215-6接种于试管中，在30～32℃培养48～52h，得到第一试管斜面菌种；
(2)三角瓶菌种的制备，在500mL的三角瓶中加入大米培养基，在无菌条件下，接入1～5环步骤(1)中的第一试管斜面菌种，于30～32℃、200rpm条件下摇瓶培养48h～52h，得到第一三角瓶菌种；
(3)生产用菌种的制备，向灭菌后的500L种子罐中加入大米培养基，在120～125℃温度下灭菌30min，待种子罐冷却至35～40℃时，按种子罐中物料体积总量的0.10～0.15％接入步骤(2)中的第一三角瓶菌种，在转速240rpm、温度32～34℃、灌压0.05～0.07Mpa、无菌空气流量8～10m3/h的条件下，培养48～72h得第一生产用菌种；
(4)发酵用基料的准备，将麸皮和玉米粉投入蒸料罐内，旋转混合时间10～15min，向蒸料罐内加水，料水质量比为1：0.4，然后在115-130℃温度下蒸料30min，在常压和温度为90℃环境下凉料，得基料，将基料从蒸料罐内放出，转入发酵池，基料温度冷却至35～40℃，得冷却后基料，将冷却后基料中加入步骤(3)中的第一生产用菌种，按照每克基料的20～21mL第一生产用菌种来进行接种，混合拌种，按照每克基料加入0.1～0.12mL的乳酸来添加乳酸，然后温度维持32～35℃，得拌种基料；
(5)发酵，将步骤(4)中的拌种基料堆厚40～50cm，表面覆以灭菌的麻袋，在室温下发酵培养10～15h，得发酵基料，当发酵基料的温度达到48～50℃时，摊薄发酵基料，摊薄至堆厚为15～20cm，在20～25℃下，通风维持内部温度为32～35℃，发酵培养3～5d，每天翻料一次，得发酵好的基料，将发酵好的基料在≤65℃温度下烘干至水分≤12％，得低温烘干基料；
(6)烘干破碎，将低温烘干基料粉碎，细度为100％过40目，得酯化酶粗酶制剂，即为酯化红曲的培养基。
所述步骤(1)的察氏斜面培养基中各组分及含量分别为：NaNO30.32％、KH2PO40.112％、MgSO40.0565％、KCl0.0565％、FeSO40.00125％、蔗糖3.15％、琼脂2.25％和水100ml，灭菌温度为119℃，压力为3.5个大气压下灭菌18min。
所述步骤(2)中灭菌温度为117℃，压力为2.5个大气压下灭菌18min，所述大米培养基中各组分及含量为大米粉0.98％和水100ml。
所述步骤(3)中大米培养基中各组分及含量为大米粉15.25Kg和水200L。
所述步骤(4)冷却后基料中各组分的含量为麸皮70％、玉米粉30％。
实施例1
一种酯化红曲的培养基的制备方法，为下述步骤：
(1)试管斜面菌种的制备，将分装有改良察氏琼脂的试管在高温高压下灭菌，在无菌条件下，将实验室筛选诱变获得的烟灰色红曲霉HN215-6接种于试管中，在31℃培养50h，得到第一试管斜面菌种；
(2)三角瓶菌种的制备，在500mL的三角瓶中加入大米培养基，在无菌条件下，接入3环步骤(1)中的第一试管斜面菌种，于31.2℃、200rpm条件下摇瓶培养51h，得到第一三角瓶菌种；
(3)生产用菌种的制备，向灭菌后的500L种子罐中加入大米培养基，在122℃温度下灭菌30min，待种子罐冷却至39.5℃时，按种子罐中物料体积总量的0.13％接入步骤(2)中的第一三角瓶菌种，在转速240rpm、温度32.5℃、灌压0.065Mpa、无菌空气流量9.2m3/h的条件下，培养70h得第一生产用菌种；
(4)发酵用基料的准备，将菜籽皮、菜籽粕和玉米粉投入蒸料罐内，旋转混合时间12.3min，向蒸料罐内加水，料水质量比为1：0.4，然后在128℃温度下蒸料30min，在常压和温度为90℃环境下凉料，得基料，将基料从蒸料罐内放出，转入发酵池，基料温度冷却至37℃，得冷却后基料，将冷却后基料中加入步骤(3)中的第一生产用菌种，按照每克基料的20.5mL第一生产用菌种来进行接种，混合拌种，按照每克基料加入0.115mL的乳酸来添加乳酸，然后温度维持33.5℃，得拌种基料；
(5)发酵，将步骤(4)中的拌种基料堆厚45cm，表面覆以灭菌的麻袋，在室温下发酵培养13.5h，得发酵基料，当发酵基料的温度达到49℃时，摊薄发酵基料，摊薄至堆厚为18.7cm，在23℃下，通风维持内部温度为32.8℃，发酵培养3d，每天翻料一次，得发酵好的基料，将发酵好的基料在≤65℃温度下烘干至水分≤12％，得低温烘干基料；
(6)烘干破碎，将低温烘干基料粉碎，细度为100％过40目，得酯化酶粗酶制剂，即为酯化红曲的培养基。
所述步骤(1)的察氏斜面培养基中各组分及含量分别为：NaNO30.32％、KH2PO40.112％、MgSO40.0565％、KCl0.0565％、FeSO40.00125％、蔗糖3.15％、琼脂2.25％和水100ml，灭菌温度为119℃，压力为3.5个大气压下灭菌18min。
所述步骤(2)中灭菌温度为117℃，压力为2.5个大气压下灭菌18min，所述大米培养基中各组分及含量为大米粉0.98％和水100ml。
所述步骤(3)中大米培养基中各组分及含量为大米粉15.25Kg和水200L。
所述步骤(4)冷却后基料中各组分的含量为菜籽皮55％、菜籽粕15％、和玉米粉30％。
本发明获得的酯化红曲培养基酯化力的测定参考如下方法：
准确吸取1ml己酸于100ml容量瓶中，用20％乙醇溶液稀释至刻度。取100ml1％己酸乙醇溶液于250ml三角瓶中，加入相当于5g干曲的曲量，在35℃保温酯化100小时，然后加水50ml，加热蒸馏，接取馏出液100ml，测定馏出液中己酸乙酯含量。
式中：C1、C2：分别为NaOH和H2SO4的浓度，mol/l；
V1、V2：分别为NaOH和H2SO4标准溶液的耗用体积，ml；
m：曲品的质量(以干曲5g计)，g；
50/100：从溜出液100ml中取50.00ml测酯；
144：己酸已酯的换算系数。
表1对比实施例和实施例1的参数变化
由表1可知，与对比实施例相比，实施例1的酯化红曲培养基酯化力由65.6mg/g提升至76.9mg/g，这是由于菜籽皮、菜籽粕培养基与传统麸皮培养基相比，蛋白质含量较高且氨基酸组成更为均衡，矿物质和酚类物质含量丰富，是一种优质的氮源，更有利于酯化红曲的生长，可显著提升红曲的酯化力。
实施例2
(1)试管斜面菌种的制备
将分装有改良察氏琼脂的试管于121℃下高压灭菌15min，在无菌条件下，将实验室筛选诱变获得的烟灰色红曲霉HN215-6接种于试管中，在32℃培养48h，得到第一试管斜面菌种。所述察氏斜面培养基中各组分及含量分别为：NaNO30.3％，KH2PO40.10％，MgSO40.05％，KCl 0.05％，FeSO40.001％，蔗糖3％，琼脂2％，水100ml。
(2)三角瓶菌种的制备
在500mL的三角瓶中加入大米培养基，于121℃高压灭菌20min，在无菌条件下，接入2环第一试管斜面菌种，于30℃、200rpm条件下摇瓶培养48h，得到第一三角瓶菌种。所述大米培养基中各组分及含量分别为：大米粉1％，水100ml。
(3)生产用菌种的制备
向灭菌好的500L种子罐中加入大米培养基，在120-125℃温度下灭菌30min，待种子罐冷却至35℃时，按种子罐中物料体积总量的0.10～0.15％(v/v)接入培养好的第一三角瓶菌种，在转速240rpm、温度32℃、灌压0.05～0.07Mpa、无菌空气流量8m3/h的条件下，培养48h得第一生产用菌种。所述大米培养基中各组分及含量分别为：大米粉15Kg，水200L。
(4)发酵用基料的准备
将菜籽皮、菜籽粕和玉米粉投入蒸料罐内，旋转混合时间15min；向蒸料罐内加水，料水质量比为1：0.4；然后在121℃温度下蒸料30min；在内压位0，温度为90℃凉料，得基料；将基料从蒸料罐内放出，转入发酵池，基料温度冷却至40℃，得冷却好的基料。所述基料中各组分的含量分别为：菜籽皮为60％、菜粕20％和玉米粉20％。
(5)拌种
向冷却好的基料中加入第一生产用菌种，接种量为基料的20％(v/w，毫升/克)，混合拌种，加入基料总量0.1％(v/w，毫升/克)的乳酸，接种后温度维持32℃，得拌种基料。
(6)打堆发酵
将拌种基料堆厚40cm，表面覆以灭菌的麻袋，自然室温，发酵培养10h，得发酵基料。
(7)摊堆发酵
当发酵基料的温度达到48℃时，摊薄发酵基料至20cm，室温20℃，自动通风维持品温32℃，发酵培养3d，每天翻料一次，得发酵好的基料。
(8)低温烘干
将发酵好的基料低温(≤65℃)烘干至水分≤12％，得低温烘干基料。
(9)酯化酶制剂的制备
粉碎：将低温烘干基料粉碎，细度为100％过40目，得酯化酶粗酶制剂，即为酯化红曲的培养基。
实施例3
(1)试管斜面菌种的制备
将分装有改良察氏琼脂的试管于121℃下高压灭菌15min，在无菌条件下，将实验室筛选诱变获得的烟灰色红曲霉HN215-6接种于试管中，在30℃培养52h，得到第一试管斜面菌种。所述察氏斜面培养基中各组分及含量分别为：NaNO30.35％，KH2PO40.12％，MgSO40.07％，KCl 0.05％，FeSO40.001％，蔗糖3％，琼脂2.5％，水100ml。
(2)三角瓶菌种的制备
在500mL的三角瓶中加入大米培养基，于121℃高压灭菌20min，在无菌条件下，接入1～5环第一试管斜面菌种，于30℃、200rpm条件下摇瓶培养52h，得到第一三角瓶菌种。所述大米培养基中各组分及含量分别为：大米粉1.2％，水100ml。
(3)生产用菌种的制备
向灭菌好的500L种子罐中加入大米培养基，在120～125℃温度下灭菌30min，待种子罐冷却至40℃时，按种子罐中物料体积总量的0.10～0.15％(v/v)接入培养好的第一三角瓶菌种，在转速240rpm、温度34℃、灌压0.05～0.07Mpa、无菌空气流量10m3/h的条件下，培养72h得第一生产用菌种。所述大米培养基中各组分及含量分别为：大米粉15.3Kg，水200L。
(4)发酵用基料的准备
将菜籽皮、玉米粉投入蒸料罐内，旋转混合时间10min；向蒸料罐内加水，料水质量比为1：0.4；然后在121℃温度下蒸料30min；在内压位0，温度为90℃凉料，得基料；将基料从蒸料罐内放出，转入发酵池，基料温度冷却至40℃，得冷却好的基料。所述基料中各组分的含量分别为：菜籽皮为65％、菜籽粕10％、玉米粉25％。
(5)拌种
向冷却好的基料中加入第一生产用菌种，接种量为基料的21％(v/w，毫升/克)，混合拌种，加入基料总量0.12％(v/w，毫升/克)的乳酸，接种后温度维持35℃，得拌种基料。
(6)打堆发酵
将拌种基料堆厚50cm，表面覆以灭菌的麻袋，自然室温，发酵培养15h，得发酵基料。
(7)摊堆发酵
当发酵基料的温度达到50℃时，摊薄发酵基料至15cm，室温25℃，自动通风维持品温35℃，发酵培养5d，每天翻料一次，得发酵好的基料。
(8)低温烘干
将发酵好的基料低温(≤65℃)烘干至水分≤12％，得低温烘干基料。
(9)酯化酶制剂的制备
粉碎：将低温烘干基料粉碎，细度为100％过40目，得酯化酶粗酶制剂，即为酯化红曲的培养基。
实施例4
(1)试管斜面菌种的制备
将分装有改良察氏琼脂的试管于121℃下高压灭菌15min，在无菌条件下，将实验室筛选诱变获得的烟灰色红曲霉HN215-6接种于试管中，在32℃培养48h，得到第一试管斜面菌种。所述察氏斜面培养基中各组分及含量分别为：NaNO30.35％，KH2PO40.10％，MgSO40.07％，KCl 0.07％，FeSO40.0015％，蔗糖3％，琼脂2.5％，水100ml。
(2)三角瓶菌种的制备
在500mL的三角瓶中加入大米培养基，于121℃高压灭菌20min，在无菌条件下，接入1～5环第一试管斜面菌种，于30℃、200rpm条件下摇瓶培养52h，得到第一三角瓶菌种。所述大米培养基中各组分及含量分别为：大米粉1.0％，水100ml。
(3)生产用菌种的制备
向灭菌好的500L种子罐中加入大米培养基，在120～125℃温度下灭菌30min，待种子罐冷却至35℃时，按种子罐中物料体积总量的0.15％(v/v)接入培养好的第一三角瓶菌种，在转速240rpm、温度34℃、灌压0.05～0.07Mpa、无菌空气流量8m3/h的条件下，培养48h得第一生产用菌种。所述大米培养基中各组分及含量分别为：大米粉15Kg，水200L。
(4)发酵用基料的准备
将菜籽皮、玉米粉投入蒸料罐内，旋转混合时间15min；向蒸料罐内加水，料水质量比为1：0.4；然后在121℃温度下蒸料30min；在内压位0，温度为90℃凉料，得基料；将基料从蒸料罐内放出，转入发酵池，基料温度冷却至38℃，得冷却好的基料。所述基料中各组分的含量分别为：菜籽皮为55％、菜籽粕15％、玉米粉30％。
(5)拌种
向冷却好的基料中加入第一生产用菌种，接种量为基料的20％(v/w，毫升/克)，混合拌种，加入基料总量0.1～0.12％(v/w，毫升/克)的乳酸，接种后温度维持32～35℃，得拌种基料。
(6)打堆发酵
将拌种基料堆厚45cm，表面覆以灭菌的麻袋，自然室温，发酵培养15h，得发酵基料。
(7)摊堆发酵
当发酵基料的温度达到50℃时，摊薄发酵基料至15cm，室温20～25℃，自动通风维持品温35℃，发酵培养4d，每天翻料一次，得发酵好的基料。
(8)低温烘干
将发酵好的基料低温(≤65℃)烘干至水分≤12％，得低温烘干基料。
(9)酯化酶制剂的制备
粉碎：将低温烘干基料粉碎，细度为100％过40目，得酯化酶粗酶制剂。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (5)

1.一种酯化红曲的培养基的制备方法，其特征在于，为下述步骤：
(1)试管斜面菌种的制备，将分装有改良察氏琼脂的试管在高温高压下灭菌，在无菌条件下，将实验室筛选诱变获得的烟灰色红曲霉HN215-6接种于试管中，在30～32℃培养48～52h，得到第一试管斜面菌种；
(2)三角瓶菌种的制备，在500mL的三角瓶中加入大米培养基，在无菌条件下，接入1～5环步骤(1)中的第一试管斜面菌种，于30～32℃、200rpm条件下摇瓶培养48h～52h，得到第一三角瓶菌种；
(3)生产用菌种的制备，向灭菌后的500L种子罐中加入大米培养基，在120～125℃温度下灭菌30min，待种子罐冷却至35～40℃时，按种子罐中物料体积总量的0.10～0.15％接入步骤(2)中的第一三角瓶菌种，在转速240rpm、温度32～34℃、灌压0.05～0.07Mpa、无菌空气流量8～10m3/h的条件下，培养48～72h得第一生产用菌种；
(4)发酵用基料的准备，将菜籽皮、菜籽粕和玉米粉投入蒸料罐内，旋转混合时间10～15min，向蒸料罐内加水，料水质量比为1：0.4，然后在115-130℃温度下蒸料30min，在常压和温度为90℃环境下凉料，得基料，将基料从蒸料罐内放出，转入发酵池，基料温度冷却至35～40℃，得冷却后基料，将冷却后基料中加入步骤(3)中的第一生产用菌种，按照每克基料的20～21mL第一生产用菌种来进行接种，混合拌种，按照每克基料加入0.1～0.12mL的乳酸来添加乳酸，然后温度维持32～35℃，得拌种基料；
(5)发酵，将步骤(4)中的拌种基料堆厚40～50cm，表面覆以灭菌的麻袋，在室温下发酵培养10～15h，得发酵基料，当发酵基料的温度达到48～50℃时，摊薄发酵基料，摊薄至堆厚为15～20cm，在20～25℃下，通风维持内部温度为32～35℃，发酵培养3～5d，每天翻料一次，得发酵好的基料，将发酵好的基料在≤65℃温度下烘干至水分≤12％，得低温烘干基料；
(6)烘干破碎，将低温烘干基料粉碎，细度为100％过40目，得酯化酶粗酶制剂，即为酯化红曲的培养基。
2.如权利要求1所述的一种酯化红曲的培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)的察氏斜面培养基中各组分及含量分别为：NaNO30.3～0.35％、KH2PO40.10～0.12％、MgSO40.05～0.07％、KCl0.05～0.07％、FeSO40.001～0.0015％、蔗糖3～3.2％、琼脂2～2.5％和水100ml，灭菌温度为115-130℃，压力为2-4个大气压下灭菌10-20min。
3.根据权利要求1所述的一种酯化红曲的培养基的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中灭菌温度为115-130℃，压力为2-4个大气压下灭菌15-30min，所述大米培养基中各组分及含量为大米粉0.5-1.5％和水100ml。
4.根据权利要求1所述的一种酯化红曲的培养基的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中大米培养基中各组分及含量为大米粉15～15.3Kg和水200L。
5.根据权利要求1所述的一种酯化红曲的培养基的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)冷却后基料中各组分的含量为菜籽皮55～65％、菜籽粕10％～20％，玉米粉20～30％。
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