CN109468245A - 一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法 - Google Patents

一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种饲料中微生物添加剂的制备，具体涉及一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，包括如下步骤：菌种培养，种子培养基经过灭菌消毒后放置在无菌环境中，冷却备用，将芽孢杆菌菌种接种在种子培养基上，将种子培养基放置在震荡温度为37℃‑40℃，140r‑220r/min的摇床上振荡培养16‑20小时，与现有技术相比，本发明的有益效果是：通过菌种培养、菌种转接、菌体培养及收集这四个步骤制备饲料用芽孢杆菌微生物，制备后可将粉末状菌剂添加到饲料中，对动植物的生长均有良好的功效。

Description

一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法
技术领域
本发明涉及一种饲料中微生物添加剂的制备，具体涉及一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法。
背景技术
芽孢杆菌制剂在动物生产中应用广泛，对于提高动物的生产性能、降低饲养成本、提高经济效益与社会效益具有重要的作用。随着国内外科研技术的发展，更多品种的芽孢杆菌制剂将会应用于动物的生产，芽孢杆菌的应用将更加广泛。
芽孢杆菌是在动物肠道微生物群落中仅零星存在的一类好氧性生长菌，芽孢杆菌由于其抗逆性强、耐高温高压、易贮存等优良特性，且具有调节肠道菌群平衡、增强动物免疫力、提高生产性能等诸多营养功能，能促进动物对营养物质的消化吸收；产生多肽类抗菌物质，抑制病原菌；形成芽孢，在生产特别是干燥过程中不易死亡，有利于产品的运输和保藏.主要包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌以及东洋芽孢杆菌等有益的种类. 它们的特点是可以产生大量的胞外酶(蛋白酶、淀粉酶和半纤维素水解酶等)，这些酶类可以促进饲料的消化和吸收，提高饲料的利用率，从而促进动物生长。
但现有的技术中没有很好的制备方法可用于饲料添加中的芽孢杆菌的制备，因此，在实际使用中无法添加。
因此，开发一种新饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，不但具有迫切的研究价值，也具有良好的经济效益和工业应用潜力，这正是本发明得以完成的动力所在和基础。
发明内容
为了克服上述所指出的现有技术的缺陷，本发明人对此进行了深入研究，在付出了大量创造性劳动后，从而完成了本发明。
具体而言，本发明所要解决的技术问题是：提供一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，以解决现有饲料微生物添加剂无法制备的技术问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，包括如下步骤：
(1)菌种培养
种子培养基经过灭菌消毒后放置在无菌环境中，冷却备用，将芽孢杆菌菌种接种在种子培养基上，将种子培养基放置在震荡温度为37℃-40℃， 140r-220r/min的摇床上振荡培养16-20小时；
(2)菌种转接
以3％-6％的接种量转接于生长培养基中，将生长培养基放置在震荡温度为 37℃-40℃，140r-220r/min的摇床上振荡培养2小时；
(3)菌体培养
将培养罐消毒杀菌并冷却后放置备用，将发酵液倒入发酵罐中，将培养基放入发酵罐中，发酵罐内温度23℃-25℃；
(4)收集
将发酵后的微生物菌剂与液体发酵物分离，所述微生物菌剂经过脱水、干燥后形成微生物菌剂粉末，所述液体发酵物经过冻干、脱水后制成饲料添加剂。
在本发明中，作为一种改进，所述种子培养基组成成分百分比质量为牛肉膏：10％-15％，蛋白胨：45％-50％，氯化钠：35％-45％。
在本发明中，作为一种改进，所述生长培养基组成成分百分比质量为牛肉膏：5％-10％，蛋白胨：20％-30％，氯化钠：10％-15％，琼脂：50％-60％。
在本发明中，作为一种改进，所述种子培养基初始在PH7.0-7.2的环境中，于120℃-125℃高温灭菌15min-20min。
在本发明中，作为一种改进，所述生长培养基初始在PH7.0-7.2的环境中，于120℃-125℃高温灭菌15min-20min，灭菌后置于无菌台上。
在本发明中，作为一种改进，所述发酵罐装罐前将发酵罐在压力 0.13-0.15MPa，温度121℃的条件下灭菌2小时。
在本发明中，作为一种改进，根据以下配方制作发酵液：
将40％-50％的玉米粉、25％-30％的豆粕、1％-2％的磷酸二氢钾、0.5％-1％的硫酸镁、3％-5％的蛋白胨、7％-10％的葡萄糖、3％-5％的CMC-Na放入不锈钢锅中，加水搅拌溶解，煮沸持续20min后过滤，将滤液加水后用增压泵加入发酵罐中。
在本发明中，作为一种改进，所述发酵罐为密封发酵。
在本发明中，作为一种改进，所述发酵罐灭菌后将内部温度冷却至28℃，并经紫外线照射28min进行消毒杀菌。
在本发明中，作为一种改进，所述步骤(4)中的脱水及冻干通过干燥箱及冻干机完成。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)通过菌种培养、菌种转接、菌体培养及收集这四个步骤制备饲料用芽孢杆菌微生物，制备后可将粉末状菌剂添加到饲料中，对动植物的生长均有良好的功效，通过对照试验可发现，菌剂可保持动物体内的微生物菌群平衡，回复肠道菌群正常化，产生乳酸和过氧化氢等抗菌物质。
具体实施方式
以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。
实施例一：一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)菌种培养
种子培养基经过灭菌消毒后放置在无菌环境中，冷却备用，将芽孢杆菌菌种接种在种子培养基上，将种子培养基放置在震荡温度为37℃-40℃， 140r-220r/min的摇床上振荡培养16-20小时，所述种子培养基组成成分百分比质量为牛肉膏：10％，蛋白胨：45％，氯化钠：45％。
(2)菌种转接
以3％的接种量转接于生长培养基中，将生长培养基放置在震荡温度为 37℃，140r/min的摇床上振荡培养2小时，所述生长培养基组成成分百分比质量为牛肉膏：5％，蛋白胨：30％，氯化钠：15％，琼脂：50％。
(3)菌体培养
将培养罐消毒杀菌并冷却后放置备用，将发酵液倒入发酵罐中，将培养基放入发酵罐中，发酵罐内温度23℃；
(4)收集
将发酵后的微生物菌剂与液体发酵物分离，所述微生物菌剂经过脱水、干燥后形成微生物菌剂粉末，所述液体发酵物经过冻干、脱水后制成饲料添加剂。
所述种子培养基初始在PH7.0-7.2的环境中，于120℃高温灭菌15min。
所述生长培养基初始在PH7.0-7.2的环境中，于120℃高温灭菌15min，灭菌后置于无菌台上。
所述发酵罐装罐前将发酵罐在压力0.13MPa，温度121℃的条件下灭菌2 小时。
根据以下配方制作发酵液：
将50％的玉米粉、30％的豆粕、2％的磷酸二氢钾、0.5％的硫酸镁、5％的蛋白胨、9.5％的葡萄糖、3％的CMC-Na放入不锈钢锅中，加水搅拌溶解，煮沸持续20min后过滤，将滤液加水后用增压泵加入发酵罐中。
所述发酵罐为密封发酵。
所述发酵罐灭菌后将内部温度冷却至28℃，并经紫外线照射28min进行消毒杀菌。
所述步骤(4)中的脱水及冻干通过干燥箱及冻干机完成。
实施例二：一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)菌种培养
种子培养基经过灭菌消毒后放置在无菌环境中，冷却备用，将芽孢杆菌菌种接种在种子培养基上，将种子培养基放置在震荡温度为40℃，220r/min的摇床上振荡培养20小时，所述种子培养基组成成分百分比质量为牛肉膏：15％，蛋白胨：50％，氯化钠：35％。
(2)菌种转接
以6％的接种量转接于生长培养基中，将生长培养基放置在震荡温度为 40℃，220r/min的摇床上振荡培养2小时，所述生长培养基组成成分百分比质量为牛肉膏：10％，蛋白胨：30％，氯化钠：10％，琼脂：50％。
(3)菌体培养
将培养罐消毒杀菌并冷却后放置备用，将发酵液倒入发酵罐中，将培养基放入发酵罐中，发酵罐内温度25℃；
(4)收集
将发酵后的微生物菌剂与液体发酵物分离，所述微生物菌剂经过脱水、干燥后形成微生物菌剂粉末，所述液体发酵物经过冻干、脱水后制成饲料添加剂。
所述种子培养基初始在PH7.0-7.2的环境中，于125℃高温灭菌20min。
所述生长培养基初始在PH7.0-7.2的环境中，于125℃高温灭菌20min，灭菌后置于无菌台上。
所述发酵罐装罐前将发酵罐在压力0.13-0.15MPa，温度121℃的条件下灭菌2小时。
根据以下配方制作发酵液：
将47％的玉米粉、30％的豆粕、2％的磷酸二氢钾、1％的硫酸镁、5％的蛋白胨、10％的葡萄糖、5％的CMC-Na放入不锈钢锅中，加水搅拌溶解，煮沸持续 20min后过滤，将滤液加水后用增压泵加入发酵罐中。
所述发酵罐为密封发酵。
所述发酵罐灭菌后将内部温度冷却至28℃，并经紫外线照射28min进行消毒杀菌。
所述步骤(4)中的脱水及冻干通过干燥箱及冻干机完成。
实施例三：一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，包括如下步骤：
(1)菌种培养
种子培养基经过灭菌消毒后放置在无菌环境中，冷却备用，将芽孢杆菌菌种接种在种子培养基上，将种子培养基放置在震荡温度为40℃，220r/min的摇床上振荡培养20小时，所述种子培养基组成成分百分比质量为牛肉膏：13％，蛋白胨：47％，氯化钠：40％。
(2)菌种转接
以6％的接种量转接于生长培养基中，将生长培养基放置在震荡温度为 40℃，220r/min的摇床上振荡培养2小时，所述生长培养基组成成分百分比质量为牛肉膏：10％，蛋白胨：20％，氯化钠：10％，琼脂：60％。
(3)菌体培养
将培养罐消毒杀菌并冷却后放置备用，将发酵液倒入发酵罐中，将培养基放入发酵罐中，发酵罐内温度25℃；
(4)收集
将发酵后的微生物菌剂与液体发酵物分离，所述微生物菌剂经过脱水、干燥后形成微生物菌剂粉末，所述液体发酵物经过冻干、脱水后制成饲料添加剂。
所述种子培养基初始在PH7.0-7.2的环境中，于125℃高温灭菌20min。
所述生长培养基初始在PH7.0-7.2的环境中，于125℃高温灭菌20min，灭菌后置于无菌台上。
所述发酵罐装罐前将发酵罐在压力0.13-0.15MPa，温度121℃的条件下灭菌2小时。
根据以下配方制作发酵液：
将46％的玉米粉、37％的豆粕、1.3％的磷酸二氢钾、0.7％的硫酸镁、4％的蛋白胨、9％的葡萄糖、4％的CMC-Na放入不锈钢锅中，加水搅拌溶解，煮沸持续20min后过滤，将滤液加水后用增压泵加入发酵罐中。
所述发酵罐为密封发酵。
所述发酵罐灭菌后将内部温度冷却至28℃，并经紫外线照射28min进行消毒杀菌。
所述步骤(4)中的脱水及冻干通过干燥箱及冻干机完成。
实施例四：一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，包括如下步骤：
(1)菌种培养
种子培养基经过灭菌消毒后放置在无菌环境中，冷却备用，将芽孢杆菌菌种接种在种子培养基上，将种子培养基放置在震荡温度为40℃，220r/min的摇床上振荡培养20小时，所述种子培养基组成成分百分比质量为牛肉膏：13％，蛋白胨：47％，氯化钠：40％。
(2)菌种转接
以6％的接种量转接于生长培养基中，将生长培养基放置在震荡温度为 40℃，220r/min的摇床上振荡培养2小时，所述生长培养基组成成分百分比质量为牛肉膏：8％，蛋白胨：25％，氯化钠：12％，琼脂：55％。
(3)菌体培养
将培养罐消毒杀菌并冷却后放置备用，将发酵液倒入发酵罐中，将培养基放入发酵罐中，发酵罐内温度25℃；
(4)收集
将发酵后的微生物菌剂与液体发酵物分离，所述微生物菌剂经过脱水、干燥后形成微生物菌剂粉末，所述液体发酵物经过冻干、脱水后制成饲料添加剂。
所述种子培养基初始在PH7.0-7.2的环境中，于125℃高温灭菌20min。
所述生长培养基初始在PH7.0-7.2的环境中，于125℃高温灭菌20min，灭菌后置于无菌台上。
所述发酵罐装罐前将发酵罐在压力0.13-0.15MPa，温度121℃的条件下灭菌2小时。
根据以下配方制作发酵液：
将40％的玉米粉、25％的豆粕、1％的磷酸二氢钾、0.5％的硫酸镁、3％的蛋白胨、7％的葡萄糖、3％的CMC-Na及20.5％的水放入不锈钢锅中，加水搅拌溶解，煮沸持续20min后过滤，将滤液加水后用增压泵加入发酵罐中。
所述发酵罐为密封发酵。
所述发酵罐灭菌后将内部温度冷却至28℃，并经紫外线照射28min进行消毒杀菌。
所述步骤(4)中的脱水及冻干通过干燥箱及冻干机完成。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。

Claims (10)

1.一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)菌种培养
种子培养基经过灭菌消毒后放置在无菌环境中，冷却备用，将芽孢杆菌菌种接种在种子培养基上，将种子培养基放置在震荡温度为37℃-40℃，140r-220r/min的摇床上振荡培养16-20小时；
(2)菌种转接
以3％-6％的接种量转接于生长培养基中，将生长培养基放置在震荡温度为37℃-40℃，140r-220r/min的摇床上振荡培养2小时；
(3)菌体培养
将培养罐消毒杀菌并冷却后放置备用，将发酵液倒入发酵罐中，将培养基放入发酵罐中，发酵罐内温度23℃-25℃；
(4)收集
将发酵后的微生物菌剂与液体发酵物分离，所述微生物菌剂经过脱水、干燥后形成微生物菌剂粉末，所述液体发酵物经过冻干、脱水后制成饲料添加剂。
2.根据权利要求1所述的一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，其特征在于：所述种子培养基组成成分百分比质量为牛肉膏：10％-15％，蛋白胨：45％-50％，氯化钠：35％-45％。
3.根据权利要求1所述的一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，其特征在于：所述生长培养基组成成分百分比质量为牛肉膏：5％-10％，蛋白胨：20％-30％，氯化钠：10％-15％，琼脂：50％-60％。
4.根据权利要求2所述的一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，其特征在于：所述种子培养基初始在PH7.0-7.2的环境中，于120℃-125℃高温灭菌15min-20min。
5.根据权利要求1所述的一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，其特征在于：所述生长培养基初始在PH7.0-7.2的环境中，于120℃-125℃高温灭菌15min-20min，灭菌后置于无菌台上。
6.根据权利要求1所述的一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，其特征在于：所述发酵罐装罐前将发酵罐在压力0.13-0.15MPa，温度121℃的条件下灭菌2小时。
7.根据权利要求1所述的一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，其特征在于，根据以下配方制作发酵液：
将40％-50％的玉米粉、25％-30％的豆粕、1％-2％的磷酸二氢钾、0.5％-1％的硫酸镁、3％-5％的蛋白胨、7％-10％的葡萄糖、3％-5％的CMC-Na放入不锈钢锅中，加水搅拌溶解，煮沸持续20min后过滤，将滤液加水后用增压泵加入发酵罐中。
8.根据权利要求7所述的一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，其特征在于：所述发酵罐为密封发酵。
9.根据权利要求6所述的一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，其特征在于：所述发酵罐灭菌后将内部温度冷却至28℃，并经紫外线照射28min进行消毒杀菌。
10.根据权利要求1所述的一种饲料用芽孢杆菌微生物的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中的脱水及冻干通过干燥箱及冻干机完成。
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PB01 Publication
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TA01 Transfer of patent application right
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Effective date of registration: 20201016

Address after: 421500 68 Bridge Road, Shuikou Town, Changning City, Hengyang, Hunan

Applicant after: CHANGNING DEBANG BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.

Address before: 421000 Room 402, 26 Building, Phase III Pioneering Base of Songmujingkai Songfeng Road, Shigu District, Hengyang City, Hunan Province

Applicant before: HENGYANG DEBANG XINJIN BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.

RJ01 Rejection of invention patent application after publication
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Application publication date: 20190315