CN109464454A - 褐藻寡糖在制备治疗或预防肝损伤的药物中的用途 - Google Patents
褐藻寡糖在制备治疗或预防肝损伤的药物中的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109464454A CN109464454A CN201811442370.5A CN201811442370A CN109464454A CN 109464454 A CN109464454 A CN 109464454A CN 201811442370 A CN201811442370 A CN 201811442370A CN 109464454 A CN109464454 A CN 109464454A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- group
- brown alga
- hepatic injury
- flower root
- alga oligose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/70—Polygonaceae (Buckwheat family), e.g. spineflower or dock
- A61K36/704—Polygonum, e.g. knotweed
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明属于中医药领域，涉及褐藻寡糖在制备治疗或预防肝损伤的药物中的用途，具体地，涉及褐藻寡糖制备减轻制何首乌加重的免疫应激型的特异质肝损伤的药物中的用途。
Description
技术领域
本发明属于中医药领域，涉及褐藻寡糖在制备治疗或预防肝损伤的药物中的用途；具体地，涉及褐藻寡糖制备减轻制何首乌加重的免疫应激型的特异质肝损伤的药物中的用途。
背景技术
何首乌系蓼科植物何首乌(Polygonum multiflorum Thunb)的干燥块根。《中国药典》(2015版)中记载，制何首乌(Polygoni multiflori radix praeparata，简称为PM)为何首乌与黑豆经蒸制或炖制后的炮制加工品。何首乌炮制后可增强其补益作用，有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨等功效。制何首乌在临床被广泛应用，是常用的补益肝肾类中药，在中国应用已有一千多年的历史。
然而，上世纪九十年代以来，关于何首乌毒副作用的报道时有发生，最为关注的是何首乌所致肝损伤，人们通常认为何首乌经炮制后减毒，但临床上制何首乌也有致肝损伤的报道[1-3]。
药物的肝脏毒副反应可以分为固有肝损伤(intrinsic drug induced liverinjury)和特异质肝损伤(idiosyncratic drug induced liver injury，IDILI)两类[4]。固有肝损伤是指药物所致肝损伤的发生与服用剂量和时间呈正相关，用药个体间差异不明显，在正常动物水平即可复制出与临床症状类似的肝损伤模型，毒性可预测；而IDILI发生率较低(通常发生率1/1,000－1/10,000[5])，仅在小部分服药人群中发生，与药物的药理效应无关[6]，且与临床剂量无明显关系[7]，而与患者年龄、性别、身体状态及是否饮酒等因素相关[8]，老龄、女性、炎症和饮酒是常见的诱发因素，因此，IDILI是药物、用药者自身状况和环境综合作用的结果。由于IDILI的发病特点，目前它的发生机制尚不明确，研究人员仅从代谢、免疫等角度提出了一些假说，并基于假说建立了模拟人体状态的动物模型。
免疫应激特异质假说认为，人们常由于疾病或应激等原因，使体内处于炎症因子升高的状态，这种体质本身不会对肝脏造成严重的损伤作用，但具有特异质肝损伤特征的药物进入人体后，促进免疫应激体质中炎症因子表达的上调，使肝脏发生急性炎症，加重肝损伤。Roth.R.A最早提出免疫应激状态会使患者更容易出现药源性肝损伤的观点，并认为无毒剂量的LPS可以引起体内温和的、无损伤或者轻微损伤的免疫炎性反应，用来诱导动物处于相似的免疫应激状态，验证具有特异质肝损伤特征的药物在这种免疫应激体质中是否加重肝损伤[9]。Fan[10]等用无毒剂量的LPS激活免疫系统后，引起TNFα等炎症因子表达升高，灌胃临床常用剂量何首乌，大鼠肝脏形态学观察可见轻微肿胀及局部慢性炎性灶，且ALT、AST显著升高。在此基础上，贺兰芝[11]等认为何首乌加重免疫应激型的特异质肝损伤的发生与PPAR-γ通路异常抑制和相关炎症因子过表达有关。井潇等[12]发现LPS刺激后灌胃何首乌醇提液，大鼠出现胆汁淤积症状，多药耐药蛋白3(MRP3)表达上调，但胆汁盐输出泵转运蛋白(BSEP)、多药耐药蛋白2(MRP2)无明显变化；谢丽华等的研究[13]则认为毒性的发生与抑制CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1的活性和抑制CYP1A2蛋白表达有关。
近年来，肝损伤研究中免疫系统的作用越来越受到重视。肝脏内含有大量免疫细胞，如自然杀伤细胞、自然杀伤T细胞、库普弗细胞、中性粒细胞和树突状细胞等，这些细胞通过产生各种炎症因子，如TNFα、IL-6、IFN-γ、IL-1等，加速肝损伤进程。IL-1、IL-6和TNFα可以刺激肝细胞合成并释放补体和急性期蛋白等物质参与急性期反应；MIP-1α调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子被合成并释放入循环，促进大量中性粒细胞被激活并从贮备器官中释放进入循环。同时，肝脏表面存在大量细胞因子受体，如：IL-1α、IL-1β、TNF-α、IGF-Ⅰ、表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)和转化生长因子受体，因此，肝脏也是细胞因子的易敏器官。如在研究NK/NKT细胞在诱导APAP肝损伤中的作用时，发现IFN-γ是介导肝损伤的原因之一；TNFα是肝损伤的重要介质，它会引起细胞凋亡和坏死，在四氯化碳、刀豆蛋白A诱导的肝损伤中起着重要作用，阻断TNFα会减轻肝损伤。
褐藻寡糖由海带中提取的褐藻胶制得，是一种通过1,4-糖苷键连接而成的直链多糖类化合物，主要由1,4-α-L-古罗糖醛酸(guluronieaeid)及其差向异构体1,4-P-甘露糖醛酸(mannuronieaeid)两种糖醛酸单体聚合而成，分子量约为2000Da，其重复单元的结构式如下面的式A所示。已报道褐藻寡糖具有促生长、抗菌、免疫调节、抗氧化、清除自由基等多种药理功能。
目前，尚需要开发新的治疗或预防肝损伤特别是特异质肝损伤的药物。
发明内容
本发明人经过深入的研究和创造性的劳动，惊奇地发现，褐藻寡糖能够有效地减轻制何首乌导致的肝损伤，具有用于制备治疗或预防肝损伤特别是特异质肝损伤的药物的潜力。由此提供了下述发明：
本发明的一个方面涉及褐藻寡糖在制备治疗或预防肝损伤的药物中的用途。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述褐藻寡糖的平均分子量为1500－2500Da，例如，1500Da、1600Da、1700Da、1800Da、1900Da、2000Da、2100Da、2200Da、2300Da、2400Da或2500Da。优选地，所述褐藻寡糖的平均分子量为1500－2200Da，更优选为1800－2200Da，特别优选为1800－2000Da。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述肝损伤为选自如下的(1)－(3)项中的任一项所致的肝损伤：
(1)制何首乌；
(2)制何首乌提取物，例如制何首乌乙醇提取物特别是制何首乌的60％乙醇提取物；
(3)药物组合物，其含有上述的(1)或(2)；可选地，其还包含一种或多种药学上可接受的辅料。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述肝损伤为特异质肝损伤，优选地，为免疫应激型的特异质肝损伤。
褐藻寡糖的日剂量可由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的症状和该症状的严重程度；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与褐藻寡糖组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，褐藻寡糖的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。
本发明的另一方面涉及一种药物组合物，其包含褐藻寡糖；可选地，其还包含一种或多种药学上可接受的辅料。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合物，其中，所述褐藻寡糖的平均分子量为1500－2500Da，例如，1500Da、1600Da、1700Da、1800Da、1900Da、2000Da、2100Da、2200Da、2300Da、2400Da或2500Da。优选地，所述褐藻寡糖的平均分子量为1500－2200Da，更优选为1800－2200Da，特别优选为1800－2000Da。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合物，其还包含选自如下的(1)－(2)项中的任一项：
(1)制何首乌；
(2)制何首乌提取物，例如制何首乌乙醇提取物特别是制何首乌的60％乙醇提取物；
优选地，褐藻寡糖与所述(1)项或与所述(2)项的质量比为(0.05－10)：10，优选为(0.1－5)：10、(0.2－5)：10、(0.3－5)：10、(0.4－5)：10、(0.5－5)：10、(0.6－5)：10、(0.1－2)：10、(0.2－2)：10、(0.3－2)：10、(0.4－2)：10、(0.5－2)：10、(0.6－2)：10或(0.1－1)：10；特别优选为0.6：10。
在本发明的一个或多个实施方案中，所述的药物组合物，其中褐藻寡糖与所述(1)项或与所述(2)项的质量比为0.1：10、0.2：10、0.3：10、0.4：10、0.5：10、0.6：10、0.7：10、0.8：10、0.9：10或1：10。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合物，其还包含选自茯苓和六味五灵片中的一种或多种。
本领域技术人员可以使用已知的药物辅料或载体，将褐藻寡糖等制备成适合的药物组合物。所述药物组合物可特别专门配制成以固体或液体形式供口服给药、供胃肠外注射或供直肠给药。
所述的药物组合物可配制成许多剂型，便于给药，例如，口服制剂(如片剂、胶囊剂、溶液或混悬液)；可注射的制剂(如可注射的溶液或混悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射水可立即使用)。
本发明的再一方面涉及一种药物产品，其包含独立的制剂1；优选地，还包含制剂2和/或制剂3，其中：
所述制剂1包含褐藻寡糖以及一种或多种药学上可接受的辅料；
所述制剂2包含选自茯苓和六味五灵片中的一种或多种；
所述制剂3包含选自如下的(1)－(2)项中的任一项：
(1)制何首乌；
(2)制何首乌提取物，例如制何首乌乙醇提取物特别是制何首乌的60％乙醇提取物；
优选地，褐藻寡糖与所述(1)项或与所述(2)项的质量比为(0.05－10)：10，优选为(0.1－5)：10、(0.2－5)：10、(0.3－5)：10、(0.4－5)：10、(0.5－5)：10、(0.6－5)：10、(0.1－2)：10、(0.2－2)：10、(0.3－2)：10、(0.4－2)：10、(0.5－2)：10、(0.6－2)：10或(0.1－1)：10；特别优选为0.6：10。
在本发明的一个或多个实施方案中，所述的药物产品，其中褐藻寡糖与所述(1)项或与所述(2)项的质量比为0.1：10、0.2：10、0.3：10、0.4：10、0.5：10、0.6：10、0.7：10、0.8：10、0.9：10或1：10。
可选地，所述药物产品还包含说明书。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物产品，其中，所述褐藻寡糖的平均分子量为1500－2500Da，例如，1500Da、1600Da、1700Da、1800Da、1900Da、2000Da、2100Da、2200Da、2300Da、2400Da或2500Da。优选地，所述褐藻寡糖的平均分子量为1500－2200Da，更优选为1800－2200Da，特别优选为1800－2000Da。
关于上述的“制剂1”、“制剂2”或“制剂3”，其中数字1、2或3仅仅是为了描述清楚，或者用于区分，本身并不具有次序的含义。可选地，所述制剂1、制剂2和制剂3还包含一种或多种药学上可接受的辅料。
本发明的再一方面涉及褐藻寡糖在制备降低蛋白或其编码基因的水平的药物的用途，所述蛋白选自如下的一种或多种：
ALT、AST、TNFα、MIP-1α、IL-1α、caspase3、caspase8和caspase9。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述降低蛋白或其编码基因的水平能够治疗或预防肝损伤。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述肝损伤为选自如下的(1)－(3)项中的任一项所致的肝损伤：
(1)制何首乌；
(2)制何首乌提取物，例如制何首乌乙醇提取物特别是制何首乌的60％乙醇提取物；
(3)药物组合物，其含有上述的(1)或(2)；可选地，其还包含一种或多种药学上可接受的辅料。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述肝损伤为特异质肝损伤，优选地，为免疫应激型的特异质肝损伤。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述褐藻寡糖的平均分子量为1500－2500Da，例如，1500Da、1600Da、1700Da、1800Da、1900Da、2000Da、2100Da、2200Da、2300Da、2400Da或2500Da。优选地，所述褐藻寡糖的平均分子量为1500－2200Da，更优选为1800－2200Da，特别优选为1800－2000Da。
本发明中，所述制何首乌提取物例如制何首乌乙醇提取物可以通过本领域常规方法制备，例如：将100g何首乌粉碎，过20目筛，分别用1000mL、800mL、600mL体积分数为60％的乙醇水溶液回流提取三次，合并滤液，60℃减压浓缩，浓缩浸膏于60℃下真空干燥24h，得到制何首乌的60％乙醇提取物。
附图说明
图1A：PM对Ao干预的免疫应激大鼠血清ALT的影响，n＝6。注：#P＜0.05vs.正常饮食组的Control组；$P＜0.05vs.正常饮食组的PM组；*p＜0.05,vs.正常饮食组的LPS组；aP＜0.05vs.褐藻寡糖组的Control组；bP＜0.05vs.褐藻寡糖组的PM组；cp＜0.05vs.褐藻寡糖组的LPS组；&P＜0.05vs.正常饮食组的相同给药组。
图1B：PM对Ao干预的免疫应激大鼠血清AST的影响，n＝6。注：#P＜0.05vs.正常饮食组的Control组；$P＜0.05vs.正常饮食组的PM组；*p＜0.05,vs.正常饮食组的LPS组；aP＜0.05vs.褐藻寡糖组的Control组；bP＜0.05vs.褐藻寡糖组的PM组；cp＜0.05vs.褐藻寡糖组的LPS组；&P＜0.05vs.正常饮食组的相同给药组。
图2：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏组织形态的影响。
图3A：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏MIP-1αmRNA的影响，n＝5。注：#P＜0.05vs.正常饮食组的Control组；$P＜0.05vs.正常饮食组的PM组；*p＜0.05,vs.正常饮食组的LPS组；aP＜0.05vs.褐藻寡糖组的Control组；bP＜0.05vs.褐藻寡糖组的PM组；cp＜0.05vs.褐藻寡糖组的LPS组；&P＜0.05vs.正常饮食组的相同给药组。
图3B：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏TNFαmRNA的影响，n＝5。注：##p＜0.01vs本组的Control组；*p＜0.05vs本组其他三组；**p＜0.01vs本组其他三组；&P＜0.05vs正常饮食组的相同给药组。
图3C：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏IL-1αmRNA的影响，n＝5。注：#P＜0.05vs.正常饮食组的Control组；$P＜0.05vs.正常饮食组的PM组；*p＜0.05,vs.正常饮食组的LPS组；aP＜0.05vs.褐藻寡糖组的Control组；bP＜0.05vs.褐藻寡糖组的PM组；cp＜0.05vs.褐藻寡糖组的LPS组；&P＜0.05vs.正常饮食组的相同给药组。
图3D：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏caspase3mRNA表达的影响。n＝5或6。注：#P＜0.05vs.正常饮食组的Control组；$P＜0.05vs.正常饮食组的PM组；*p＜0.05,vs.正常饮食组的LPS组；aP＜0.05vs.褐藻寡糖组的Control组；bP＜0.05vs.褐藻寡糖组的PM组；cp＜0.05vs.褐藻寡糖组的LPS组；&P＜0.05vs.正常饮食组的相同给药组图3D：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏caspase3mRNA表达的影响。n＝5或6。注：##p＜0.01vs本组的Control组；*p＜0.05vs本组其他三组；**p＜0.01vs本组其他三组；&&P＜0.01vs正常饮食组的相同给药组。
图3E：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏caspase8mRNA表达的影响。n＝5或6。注：#P＜0.05vs.正常饮食组的Control组；$P＜0.05vs.正常饮食组的PM组；*p＜0.05,vs.正常饮食组的LPS组；aP＜0.05vs.褐藻寡糖组的Control组；bP＜0.05vs.褐藻寡糖组的PM组；cp＜0.05vs.褐藻寡糖组的LPS组；&P＜0.05vs.正常饮食组的相同给药组图3D：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏caspase3mRNA表达的影响。n＝5或6。注：##p＜0.01vs本组的Control组；*p＜0.05vs本组其他三组；**p＜0.01vs本组其他三组；&&P＜0.01vs正常饮食组的相同给药组。
图3F：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏caspase9mRNA表达的影响。n＝5或6。注：#P＜0.05vs.正常饮食组的Control组；$P＜0.05vs.正常饮食组的PM组；*p＜0.05,vs.正常饮食组的LPS组；aP＜0.05vs.褐藻寡糖组的Control组；bP＜0.05vs.褐藻寡糖组的PM组；cp＜0.05vs.褐藻寡糖组的LPS组；&P＜0.05vs.正常饮食组的相同给药组图3D：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏caspase3mRNA表达的影响。n＝5或6。注：##p＜0.01vs本组的Control组；*p＜0.05vs本组其他三组；**p＜0.01vs本组其他三组；&&P＜0.01vs正常饮食组的相同给药组。
图4A：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏MIP-1α蛋白表达的影响，n＝6。注：#P＜0.05vs.正常饮食组的Control组；$P＜0.05vs.正常饮食组的PM组；*p＜0.05,vs.正常饮食组的LPS组；aP＜0.05vs.褐藻寡糖组的Control组；bP＜0.05vs.褐藻寡糖组的PM组；cp＜0.05vs.褐藻寡糖组的LPS组；&P＜0.05vs.正常饮食组的相同给药组。
图4B：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏TNFα蛋白表达的影响，n＝6。注：#P＜0.05vs.正常饮食组的Control组；$P＜0.05vs.正常饮食组的PM组；*p＜0.05,vs.正常饮食组的LPS组；aP＜0.05vs.褐藻寡糖组的Control组；bP＜0.05vs.褐藻寡糖组的PM组；cp＜0.05vs.褐藻寡糖组的LPS组；&P＜0.05vs.正常饮食组的相同给药组。
图4C：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏IL-1α蛋白表达的影响，n＝6。注：#P＜0.05vs.正常饮食组的Control组；$P＜0.05vs.正常饮食组的PM组；*p＜0.05,vs.正常饮食组的LPS组；aP＜0.05vs.褐藻寡糖组的Control组；bP＜0.05vs.褐藻寡糖组的PM组；cp＜0.05vs.褐藻寡糖组的LPS组；&P＜0.05vs.正常饮食组的相同给药组。
图5：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏caspase3蛋白表达的影响。n＝3。
图6：PM对Ao干预的免疫应激大鼠肝脏caspase9蛋白表达的影响。n＝3。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
表1：本发明实施例涉及的部分试剂和商购公司
表2：本发明实施例涉及的部分仪器和商购公司
实施例1：药物或试剂的配制
制何首乌购自安国圣安药业有限公司。
制何首乌60％乙醇提取物的制备：将100g何首乌粉碎，过20目筛，分别用1000mL、800mL、600mL体积分数为60％的乙醇水溶液回流提取三次，合并滤液，60℃减压浓缩，浓缩浸膏于60℃下真空干燥24h，得提取物17g。
制何首乌60％乙醇提取物(本发明中简称为PM)溶液配制：称取20g参照前述步骤制得的提取物(制何首乌60％乙醇提取物)，溶于100ml双蒸水中，摇晃混匀，放于4℃冰箱中保存。
褐藻寡糖(本发明中简称为Ao)溶液配制：称取20g褐藻寡糖，溶于100mL双蒸水中，常温保存。褐藻寡糖购自青岛博智汇力科技有限公司(货号201801201AYF)。该褐藻寡糖的理化参数如下面的表3所示：
表3
M/G比是指聚甘露糖醛酸(PM)与聚古罗糖醛酸(PG)的摩尔比。
LPS溶液配制：用精密天平称取1mg LPS，溶于10ml生理盐水中，轻摇溶解，现用现配。
实施例2：动物分组及处理
SD大鼠，SPF级，体重180－250g，由北京维通利华实验动物有限公司提供，实验动物饲养在中国医学科学院放射医学研究所，实验动物房的温度和湿度分别为23±2℃和58％－65％，实验动物适应性饲养一周。
将48只SD大鼠随机分为2个大组，每组24只，分别为正常饮食组、褐藻寡糖组(简称为Ao组)。按照褐藻寡糖重量/大鼠体重，Ao组每天灌胃600mg/kg Ao溶液。正常饮食组每天灌胃相同体积的双蒸水。
随后，正常饮食组与Ao组均分别分为四个小组，即Control组、PM组、LPS组、LPS+PM组，每组6只，实验前禁食不禁水16h。
其中，正常饮食组的4个小组：
Control组：灌胃同等体积双蒸水，1次，2h后尾静脉注射生理盐水，1次；
PM组：灌胃PM 10g/kg生药量，1次；2h后尾静脉注射生理盐水，1次；
LPS组：灌胃同等体积双蒸水，1次；2h后尾静脉注射25μg/kg LPS，1次；
LPS+PM组：先灌胃PM 10g/kg生药量，1次；2h后尾静脉注射25μg/kg LPS，1次。
5h后水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，于室温中放置1－2小时，待血清充分析出后离心3000rpm，10min，取上清分装保存于-80冰箱；活取肝脏，取同一片肝叶放于福尔马林溶液中，剩余肝组织分装冻存于液氮中。
其中，Ao组的4个小组：
Control组：灌胃同等体积双蒸水，1次，2h后尾静脉注射生理盐水，1次；
PM组：灌胃PM 10g/kg生药量，1次；2h后尾静脉注射生理盐水，1次；
LPS组：灌胃同等体积双蒸水，1次；2h后尾静脉注射25μg/kg LPS，1次；
LPS+PM组：先灌胃PM 10g/kg生药量，1次；2h后尾静脉注射25μg/kg LPS，1次。
5h后水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，于室温中放置1－2小时，待血清充分析出后离心3000rpm，10min，取上清分装保存于-80冰箱；活取肝脏，取同一片肝叶放于福尔马林溶液中，剩余肝组织分装冻存于液氮中。
用于下面的各实施例。
实施例3：体重检测
对于正常饮食组中的Control组和Ao组中的Control组，分别于灌胃前、灌胃一周、灌胃两周后称大鼠体重。结果见下面的表4。
表4：正常饮食组与Ao组体重变化情况(`x±s)n＝6
实验结果显示，正常饮食组中的Control组与Ao组中的Control组体重增长均正常，灌胃Ao第一周与第二周称量大鼠体重与正常饮食组相比，均无显著性差异。
实施例4：肝功能指标检测：血清ALT、AST检测
本实验研究Ao干预后，PM对免疫应激大鼠肝损伤的作用。血清ALT、AST的检测参照试剂盒说明书。
结果如图1A和图1B所示。
结果显示：
(1)正常饮食组给药后结果发现，相对于本组的另外三个组，LPS+PM组的ALT、AST显著升高(P＜0.05)
(2)Ao干预两周后的结果显示，Ao组的LPS+PM组相对于本组另外三个组，LPS+PM组的ALT、AST未见升高。Ao组的LPS+PM组相较正常饮食组的LPS+PM组，ALT、AST显著降低(P＜0.05)。
实施例5：肝脏病理学观察
肝脏组织(8个小组合计48只鼠的肝组织)病理切片由天津中医药大学中医药研究院病理切片室制作，石蜡切片的制备步骤如下：
(1)脱水透明：由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精；
(2)浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。
(3)切片贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5－8微米厚。切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。
HE染色步骤如下：
1)脱蜡和水化：将石蜡切片放于烤箱60℃10min，浸泡于二甲苯溶液Ⅰ、Ⅱ各脱蜡10min，再于100％Ⅰ、100％Ⅱ，95％、75％梯度乙醇各5min，流水冲洗5min。
2)苏木素染核：石蜡切片浸泡于苏木素染液5-8min，流水冲洗切片多余的苏木素染液，后于1％盐酸乙醇分化3-10s，流水充分冲洗20-30min。
3)伊红染胞质及脱水透明：1％伊红溶液染色1-2min，流水冲洗15-30s；75％乙醇3-5s，95％乙醇3-5s，100％乙醇Ⅰ、Ⅱ各3-5min，上行梯度脱水；二甲苯溶液Ⅰ、Ⅱ透明各5min。
4)封片：中性树胶滴加玻片组织周围，后用盖玻片覆盖封片，切忌有气泡。
5)光镜显微镜下观察并拍照。
实验结果如图2所示。
结果显示，正常饮食组中，Control无显著病理学改变；PM组肝组织结构无显著病理学改变；LPS组可见少量炎细胞浸润，肝组织疏松化；LPS+PM组可见中度炎细胞浸润，中度纤维化，肝细胞坏死。Ao组中，Control组无显著病理学改变；PM组无显著病理学改变；LPS组可见少量炎细胞浸润；LPS+PM组可见轻度炎细胞浸润，散在肝细胞坏死。与正常饮食组的LPS+PM组相比，Ao组的LPS+PM组肝损伤明显减轻。
结果表明，正常饮食组中，PM能加重免疫应激大鼠的肝损伤，而Ao提前干预能减轻PM加重的免疫应激大鼠的肝损伤。
实施例6：RT-PCR方法检测分子标志物
1.肝组织总RNA提取
1)从-80℃冰箱中取出分装冻存的肝组织(8个小组合计48只鼠的肝组织)，重50mg左右，放于研钵中，加入液氮研磨至组织破碎，加入500μl Trizol试剂对组织进行裂解，继续反复研磨至破碎充分。
2)将组织的Trizol裂解液转入EP管中，在室温放置5min，使核蛋白充分解离。12000g，4℃，离心10min。
3)吸取上清液转移至新的EP管中，每管加入0.1ml三氯甲烷，剧烈震荡使其充分乳化，溶液无分相现象后，室温静置5min，12000g，4℃，离心15min。
4)此时，离心管中液体分为三层：上清液、中间蛋白层及下层有机相。吸取上清液至新的EP管中(切忌吸出白色中间层)。
5)向该离心管中加入所取上清液等体积的异丙醇，上下颠倒使离心管中的液体充分混匀，静置10min。12000g，4℃，离心10min，管底会出现白色沉淀。
6)弃上清，加入75％的乙醇1ml，温和的上下颠倒，洗涤离心管管壁，12000g，4℃，离心5min。弃去乙醇，尽量除净乙醇。
7)室温放置2－5min，不能过久，否则RNA会很难溶解，加入50-100μl的RNase-free水溶解沉淀，必要时可用移液枪轻轻吹打沉淀，待RNA沉淀完全溶解后备用或放置于-80℃冰箱保存。
2.总RNA浓度测定
取1μl RNA溶液，以DEPC水作为空白对照，在紫外分光光度计上分别读取260nm、280nm波长下的光密度值(OD值)。计算260/280的比值和样品浓度。纯净RNA OD260/280的比值应在1.8－2.0之间。
3.逆转录合成cDNA
按照HiFiScript cDNA Synthesis Kit说明书依次在200μl离心管中加入以下反应物，其中模板上样量为200ng。
表5：逆转录反应体系(20μl体系)
| 试剂 | 20μl反应体系 |
| dNTP Mix | 4μl |
| Primer Mix | 2μl |
| RNA Template | 4μl |
| 5XRT Buffer | 2μl |
| DTT | 4μl |
| HiFiScript | 1μl |
| RNase-Free Water | 3μl |
表6：引物序列
PCR反应条件：42℃孵育15min，85℃孵育5min。
得到的cDNA产物可于当天检测或放置于-80℃冰箱保存。
4.RT-PCR
将反转好的cDNA共20μl，加133.3μl RNase-Free Water稀释。
按照SYBR GREEN PCR Master Mix试剂盒说明书，在PCR管中依次加入以下反应物。
PCR反应体系(25μl体系)
表7
PCR反应条件：95℃：20sec；95℃：3sec；60℃：30sec；循环数：40。
溶解曲线步骤：每个循环在72℃时采集荧光，40个循环之后测定溶解曲线。
溶解参数如下：95℃：20sec；95℃：3sec；60℃：30sec。
5.数据分析
Ct值是每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数，与拷贝量呈负对数关系。每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。△Ct＝待测基因Ct值-内参照基因Ct值。应用Bio-Rad实时定量PCR仪分析软件调整阈值后，查看并分析数据，得到每个样品反应的Ct值，计算得到的△Ct，并与对照组比较，取2-△△Ct值进行数据分析。
6.实验结果
(1)制何首乌对褐藻寡糖干预的免疫应激大鼠MIP-1α、TNFα、IL-1α的影响。
如图3A－图3C所示。
结果显示，正常饮食组中，与Control组相比，LPS组MIP-1α、TNFα、IL-1αmRNA表达上调(p＜0.01)；与Control组、PM组、LPS组相比，LPS+PM组MIP-1α、TNFα、IL-1αmRNA表达上调(p＜0.05或p＜0.01)；Ao组中，与Control组相比，LPS组、LPS+PM组MIP-1α、TNFα、IL-1αmRNA表达上调(p＜0.01)；与LPS组相比，LPS+PM组MIP-1α、TNFα、IL-1αmRNA表达未上调。与正常饮食组的LPS组相比，Ao组的LPS组MIP-1α、TNFα、IL-1αmRNA表达未下降；与正常饮食组的LPS+PM组相比，Ao组的LPS+PM组TNFα、IL-1αmRNA表达下降，有统计学意义(p＜0.05)。
结果表明，Ao干预不能减轻大鼠尾静脉注射LPS后体内的免疫应激反应，但能抑制PM导致的免疫应激大鼠MIP-1α、TNFα、IL-1αmRNA表达上调，从而避免肝脏发生急性炎症。
(2)制何首乌对褐藻寡糖干预的免疫应激大鼠肝脏caspase3，caspase8，caspase9mRNA
结果如图3D－3F所示。
结果显示，正常饮食组中，与Control组相比，LPS组caspase3、caspase8mRNA表达显著升高(p＜0.01)；与Control组、LPS组、PM组相比，LPS+PM组caspase3、caspase8、caspase9mRNA表达显著升高(p＜0.01)；藻寡糖组中，与Control组相比，LPS组、LPS+PM组caspase3、caspase8mRNA表达均显著升高(p＜0.01)；与LPS组相比，LPS+PM组caspase3、caspase8、caspase9mRNA表达未见升高；与正常饮食组中的LPS组相比，Ao组中的LPS组caspase9mRNA显著降低(P＜0.01)；与正常饮食组中的LPS+PM组相比，Ao组中的LPS+PM组caspase3、caspase8、caspase9mRNA显著降低(P＜0.01)。
实施例7：ELISA检测蛋白标志物
分别取8个小组合计48只鼠的肝组织各50mg左右，加生理盐水研磨，然后12000g，4℃，10min离心，取上清检测。
检测参照相关试剂盒说明书进行操作。所用试剂盒如下面的表8所示。
| 试剂名称 | 公司 | 货号 |
| TNFαELISA kit | BIOtopPED | topEL00055 |
| IL-1αELISA kit | BIOtopPED | topEL02882 |
| MIP-1αELISA kit | BIOtopPED | topEL02903 |
实验结果如图4A－4C所示。
结果显示，正常饮食组中，与Control组相比，LPS组IL-1α蛋白表达上调(p＜0.01)；与Control组、PM组、LPS组相比，LPS+PM组MIP-1α、TNFα、IL-1α蛋白表达上调(p＜0.01或p＜0.05)；Ao组中，与Control组相比，LPS组IL-1α蛋白表达上调(p＜0.01)；与Control组相比，LPS+PM组MIP-1α、TNFα、IL-1α蛋白表达均未上调。与正常饮食组的LPS+PM组相比，Ao组的LPS+PM组MIP-1α、TNFα、IL-1α蛋白表达下降，有统计学意义(p＜0.05)。
结果表明，Ao干预不能减轻大鼠尾静脉注射LPS后体内的免疫应激反应，但能抑制PM导致的免疫应激大鼠MIP-1α、TNFα、IL-1α的蛋白表达上调，从而避免肝脏发生急性炎症。
实施例8：免疫组化实验检测caspase3及caspase9蛋白
免疫组织化学法采用S-P(Streptavidin-perosidase)法染色及DAB显色，进行肝组织(8个小组，每组随机取4只大鼠)石蜡切片染色。步骤如下：
1)切片置于烤箱63℃30min以使切片紧密粘附。
2)常规脱蜡脱水。步骤同HE。
3)切片置于3％H2O2溶液中室温10分钟以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗3次，每次2min。
4)抗原热修复：将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH 6.0)，高压锅(温度95℃－120℃)抗原修复5－10min，自然冷却后用PBS(pH 7.2－7.6)洗涤1－2次，每次2min。
5)滴加10％正常山羊血清，37℃封闭20分钟。甩去多余液体，不洗。
6)滴加一抗(兔抗大鼠IgG，1:100稀释)，4℃孵育24－72h。
7)平衡室温40min，PBS洗三次，每次10min。滴加二抗山羊抗兔IgG，37℃30min。PBS洗5min×3次。滴加三抗SABC，37℃30min。PBS洗涤5min×3次。
8)DAB显色：配制DAB显色液，混匀后加至切片。室温显色，镜下控制反应时间，待核质分界清晰，背景与阳性染色反差明显，蒸馏水终止显色，一般控制在1－5min。
9)苏木素轻度复染。分化，脱水，透明，封片。镜下观察。光镜(400×)下随机选取5个视野，在光学显微镜下进行评分，判定A:阳性细胞数分级(0％－1％为0，1％－10％为1，10％－50％为2，50％－80％为3，80％－100％为4),B:阳性细胞显色强度分级(0(阴性)、1(弱阳性)、2(阳性)、3(强阳性))，以此评价大鼠肝组织TNFα的蛋白表达情况。
实验结果如图5、图6所示。
结果显示，正常饮食组中，Control组与PM组未见棕黄色颗粒，LPS组caspase3及caspase9蛋白散在分布，表达升高，LPS+PM组caspase3及caspase9蛋白表达上调，表达量强，集中分布于中心静脉周围，与肝脏HE染色所见发生肝坏死区域一致。Ao组中，Control组与PM组未见棕黄色颗粒，LPS组caspase3及caspase9蛋白散在分布，表达上调，LPS+PM组也可见caspase3及caspase9蛋白散在分布，表达上调，但与正常对照组的LPS+PM组相比，表达明显减少。
以上各实施例的实验结果显示：
PM使免疫应激大鼠肝脏的MIP-1α、IL-1α、TNFα的蛋白表达上调，可能是加重免疫应激大鼠肝损伤的原因之一；
PM使免疫应激大鼠Caspase3、Caspase8、Caspase9表达上调，可与TNFα共同作用，诱导肝细胞凋亡；
灌胃大鼠褐藻寡糖两周后，抑制TNFα、MIP-1α、IL-1α的上调，抑制caspase3、caspase8、caspase9表达，减轻制何首乌60％乙醇提取物加重的免疫应激型的特异质肝损伤。
参考文献：
1.Park GJ,Mann SP,Ngu MC,et al.Acute hepatitis induced by ShouWu-Pian,a herbal product derived from Polygonum multiflorum.J Gastroenterol[J].Hepatol.2001,16:115-117.
2.Kyoung Ah Jung,Hyun Ju Min,Sang Goon Shim,et al.Drug-Induced LiverInjury:Twenty Five Cases of Acute Hepatitis Following Ingestion of Polygonummultiflorum Thunb[J].Gut and Liver,2011,6(11):493-499.
3.Cardenas A,Restrepo JC,Sierra F,CorreaG,et al.Acute hepatitis dueto shen-min:a herbal product derived from Polygonum multiflorum[J].J ClinGastroenterol.2006,40:629-632.
4.Steven BY,Umesh MH,Bryan LC,et al.Endothelial Cell injury andcoagulation system activation during synergistic hepatotoxicity frommonocrotaline and bacterial lipopolysaccaride coexposure[J].ToxicilogicalScience,2003,74:203-214.
5.Zhang SY,Zhu XG,Zhang GP,et al.Study on acute and chronictoxicities of polygonimultiflori radix praeparata extracts[J].J ToxicolAugust,2013,274(4):261-264.
6.Uetrecht J.Idiosyncratic drug reactions:current understanding[J].Annu Rev Pharmacol Toxicol,2007,47(7)：513-539.
7.Pasipanodya J G,Gumbo T.Clinical and toxicodynamic evidence thathigh-dose pyrazinamide is not more hepatotoxic than the low doses currentlyused[J].Antimicrob Agents Chemother,2010,54(7)：2847-2854.
8.Chalasani N,Bjornsson E.Risk factors for idiosyncratic drug-inducedliver injury[J].Gastroenterology,2010,138(7)：2246-2259.
9.李春雨.基于应激的何首乌特异质肝损伤的初步硏究[D].成都：成都中医药大学，2015.
10.Robert A.Roth,Patricia E.Ganey,Animal models of idiosyncraticdrug-induced liver injury-Current status[J].Critical Reviews in Toxicology，2011，3(24):1–17.
11.Xing Fan,Jiabo Wang,Quanjun Wang,et al.A new animal model forPolygonum multiflorumThunb-induced liver injury in rats and its potentialmechanisms[J].Toxicology Research 2015,4(10):85-98.
12.贺兰芝，尹萍，孟雅坤，等.PPAR-γ依赖的何首乌免疫性特异质肝损伤机制研究[J].药学学报,2017,52(7):1027-1032.
13.井潇，吴纯启，韩刚，等.何首乌肝损伤模型大鼠胆汁淤积现象及相关蛋白表达研究[J].药物评价研究，2017,40(5):612-615.
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。
SEQUENCE LISTING
<110> 天津中医药大学
<120> 褐藻寡糖在制备治疗或预防肝损伤的药物中的用途
<130> IDC180093
<160> 12
<170> PatentIn version 3.2
<210> 1
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物序列
<400> 1
gactgcctgc tgcttctcct atg 23
<210> 2
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物序列
<400> 2
agttccagct cagtgatgta ttcttgg 27
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物序列
<400> 3
tccagaactc caggcggtgt c 21
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物序列
<400> 4
gttcagtaga cagaagagcg tggtg 25
<210> 5
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物序列
<400> 5
aagcctgtgt tgctgaagga gattc 25
<210> 6
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物序列
<400> 6
gctgaggatg tgaagtagtt cttagag 27
<210> 7
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物序列
<400> 7
gcggtattga gacagacagt ggaac 25
<210> 8
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物序列
<400> 8
gcggtagagt aagcatacag gaagtc 26
<210> 9
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物序列
<400> 9
ggaaccaact atgatgaaga ggctctg 27
<210> 10
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物序列
<400> 10
tgtgatagga tgcagcagat gaagc 25
<210> 11
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物序列
<400> 11
ggtggacatt ggttctggca gag 23
<210> 12
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物序列
<400> 12
acgttgttga tgatgaggca gtgg 24
Claims (15)
1.褐藻寡糖在制备治疗或预防肝损伤的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述褐藻寡糖的平均分子量为1500－2500Da，优选为1500－2200Da，更优选为1800－2200Da，特别优选为1800－2000Da。
3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述肝损伤为选自如下的(1)－(3)项中的任一项所致的肝损伤：
(1)制何首乌；
(2)制何首乌提取物，例如制何首乌乙醇提取物特别是制何首乌的60％乙醇提取物；
(3)药物组合物，其含有上述的(1)或(2)。
4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的用途，其中，所述肝损伤为特异质肝损伤；优选地，为免疫应激型的特异质肝损伤。
5.一种药物组合物，其包含褐藻寡糖；可选地，其还包含一种或多种药学上可接受的辅料。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中，所述褐藻寡糖的平均分子量为1500－2500Da，优选为1500－2200Da，更优选为1800－2200Da，特别优选为1800－2000Da。
7.根据权利要求5或6所述的药物组合物，其还包含选自如下的(1)－(2)项中的任一项：
(1)制何首乌；
(2)制何首乌提取物，例如制何首乌乙醇提取物特别是制何首乌的60％乙醇提取物；
优选地，褐藻寡糖与所述(1)项或与所述(2)项的质量比为(0.05－10)：10，优选为(0.1－5)：10，更优选为(0.2－5)：10或(0.3－5)：10，特别优选为0.6：10。
8.根据权利要求5或6所述的药物组合物，其还包含选自茯苓和六味五灵片中的一种或多种。
9.一种药物产品，其包含独立的制剂1；优选地，还包含制剂2和/或制剂3，其中：
所述制剂1包含褐藻寡糖以及一种或多种药学上可接受的辅料；
所述制剂2包含选自茯苓和六味五灵片中的一种或多种；
所述制剂3包含选自如下的(1)－(2)项中的任一项：
(1)制何首乌；
(2)制何首乌提取物，例如制何首乌乙醇提取物特别是制何首乌的60％乙醇提取物；
优选地，褐藻寡糖与所述(1)项或与所述(2)项的质量比为(0.05－10)：10，优选为(0.1－5)：10，更优选为(0.2－5)：10或(0.3－5)：10，特别优选为0.6：10；
可选地，所述药物产品还包含说明书。
10.根据权利要求9所述的药物产品，其中，所述褐藻寡糖的平均分子量为1500－2500Da，优选为1500－2200Da，更优选为1800－2200Da，特别优选为1800－2000Da。
11.褐藻寡糖在制备降低蛋白或其编码基因的水平的药物中的用途，其中，所述蛋白选自如下的一种或多种：
ALT、AST、TNFα、MIP-1α、IL-1α、caspase3、caspase8和caspase9。
12.根据权利要求11所述的用途，其中，所述褐藻寡糖的平均分子量为1500－2500Da，优选为1500－2200Da，更优选为1800－2200Da，特别优选为1800－2000Da。
13.根据权利要求11所述的用途，其中，其中，所述降低蛋白或其编码基因的水平能够治疗或预防肝损伤。
14.根据权利要求13所述的用途，其中，所述肝损伤为选自如下的(1)－(3)项中的任一项所致的肝损伤：
(1)制何首乌；
(2)制何首乌提取物，例如制何首乌乙醇提取物特别是制何首乌的60％乙醇提取物；
(3)药物组合物，其含有上述的(1)或(2)。
15.根据权利要求13所述的用途，其中，所述肝损伤为特异质肝损伤；优选地，为免疫应激型的特异质肝损伤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811442370.5A CN109464454B (zh) | 2018-11-29 | 2018-11-29 | 褐藻寡糖在制备治疗或预防肝损伤的药物中的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811442370.5A CN109464454B (zh) | 2018-11-29 | 2018-11-29 | 褐藻寡糖在制备治疗或预防肝损伤的药物中的用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109464454A true CN109464454A (zh) | 2019-03-15 |
| CN109464454B CN109464454B (zh) | 2021-07-02 |
Family
ID=65673304
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811442370.5A Active CN109464454B (zh) | 2018-11-29 | 2018-11-29 | 褐藻寡糖在制备治疗或预防肝损伤的药物中的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109464454B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110152020A (zh) * | 2019-06-18 | 2019-08-23 | 中国人民解放军总医院第五医学中心 | 一种免疫特异质肝损伤的评价模型及其应用 |
| CN113380342A (zh) * | 2021-06-11 | 2021-09-10 | 中国食品药品检定研究院 | 基于mrp2/3的何首乌中肝毒性化合物的快速筛选方法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090110674A1 (en) * | 2007-10-24 | 2009-04-30 | Loizou Nicos C | Health supplement |
| WO2011097273A1 (en) * | 2010-02-02 | 2011-08-11 | Martek Biosciences Corporation | Methods and compositions for treating non-alcoholic fatty liver disease with docosahexaenoic acid and n-acetyl lcystenine |
| CN103446174A (zh) * | 2013-09-12 | 2013-12-18 | 中国海洋大学 | 低聚甘露糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用 |
| CN103977021A (zh) * | 2014-03-25 | 2014-08-13 | 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 | 低聚古罗糖醛酸盐在制备防治肝损伤和各种肝炎、肝纤维化或肝硬化药物中的应用 |
| CN106173057A (zh) * | 2016-07-08 | 2016-12-07 | 肇庆医学高等专科学校 | 一种减肥凉茶及其制备方法 |
| CN106902223A (zh) * | 2017-03-15 | 2017-06-30 | 王海燕 | 一种治疗乙型肝炎、肝纤维化的药物组合物及其制备方法 |
| CN107184966A (zh) * | 2017-06-19 | 2017-09-22 | 青岛金海宝生物科技发展有限公司 | 一种防治糖尿病及其并发症的药物组合物 |
| CN107400589A (zh) * | 2017-09-21 | 2017-11-28 | 青岛金海宝生物科技发展有限公司 | 一种富含褐藻寡糖的葡萄酒 |
-
2018
- 2018-11-29 CN CN201811442370.5A patent/CN109464454B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090110674A1 (en) * | 2007-10-24 | 2009-04-30 | Loizou Nicos C | Health supplement |
| WO2011097273A1 (en) * | 2010-02-02 | 2011-08-11 | Martek Biosciences Corporation | Methods and compositions for treating non-alcoholic fatty liver disease with docosahexaenoic acid and n-acetyl lcystenine |
| CN103446174A (zh) * | 2013-09-12 | 2013-12-18 | 中国海洋大学 | 低聚甘露糖醛酸在制备预防和治疗酒精性肝损伤的药物、保健品或饮食补充剂中的应用 |
| CN103977021A (zh) * | 2014-03-25 | 2014-08-13 | 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 | 低聚古罗糖醛酸盐在制备防治肝损伤和各种肝炎、肝纤维化或肝硬化药物中的应用 |
| CN106173057A (zh) * | 2016-07-08 | 2016-12-07 | 肇庆医学高等专科学校 | 一种减肥凉茶及其制备方法 |
| CN106902223A (zh) * | 2017-03-15 | 2017-06-30 | 王海燕 | 一种治疗乙型肝炎、肝纤维化的药物组合物及其制备方法 |
| CN107184966A (zh) * | 2017-06-19 | 2017-09-22 | 青岛金海宝生物科技发展有限公司 | 一种防治糖尿病及其并发症的药物组合物 |
| CN107400589A (zh) * | 2017-09-21 | 2017-11-28 | 青岛金海宝生物科技发展有限公司 | 一种富含褐藻寡糖的葡萄酒 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| LIM JD ET AL.: "Fucoidan from Fucus vesiculosus Protects against Alcohol-Induced Liver Damage by Modulating Inflammatory Mediators in Mice and HepG2 Cells", 《MARINE DRUGS》 * |
| TAKAHASHI M. ET AL.: "Ecklonia cava polyphenol protects the liver against ethanol-induced injury in rats", 《BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA》 * |
| 国家药典委员会: "《中华人民共和国药典临床用药须知 中药饮片卷 2015年版》", 30 September 2017, 中国医药科技出版社 * |
| 孙媛媛 等: "褐藻胶寡糖对刀豆蛋白Ａ诱导的急性肝损伤保护作用及机制初探", 《中国海洋药物》 * |
| 马剑茵 等: "海带褐藻多糖硫酸酯对小鼠急性肝损伤的保护作用", 《中国海洋药物》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110152020A (zh) * | 2019-06-18 | 2019-08-23 | 中国人民解放军总医院第五医学中心 | 一种免疫特异质肝损伤的评价模型及其应用 |
| CN113380342A (zh) * | 2021-06-11 | 2021-09-10 | 中国食品药品检定研究院 | 基于mrp2/3的何首乌中肝毒性化合物的快速筛选方法 |
| CN113380342B (zh) * | 2021-06-11 | 2023-10-27 | 中国食品药品检定研究院 | 基于mrp2/3的何首乌中肝毒性化合物的快速筛选方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109464454B (zh) | 2021-07-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zheng et al. | Anti-inflammatory mechanism of oxymatrine in dextran sulfate sodium-induced colitis of rats | |
| Mo et al. | Fucosterol Protects against Concanavalin A‐Induced Acute Liver Injury: Focus on P38 MAPK/NF‐κB Pathway Activity | |
| CN109464454A (zh) | 褐藻寡糖在制备治疗或预防肝损伤的药物中的用途 | |
| Xu et al. | Fucoidan mitigated diabetic nephropathy through the downregulation of PKC and modulation of NF‐κB signaling pathway: in vitro and in vivo investigations | |
| Qiao et al. | Schisandra chinensis acidic polysaccharide improves the insulin resistance in type 2 diabetic rats by inhibiting inflammation | |
| Xu et al. | Anti-rheumatoid arthritic effects of Saussurea involucrata on type II collagen-induced arthritis in rats | |
| Fang et al. | Germacrone mitigates cardiac remodeling by regulating PI3K/AKT-mediated oxidative stress, inflammation, and apoptosis | |
| Su et al. | Evaluation of the Chinese medicinal herb, Graptopetalum paraguayense, as a therapeutic treatment for liver damage in rat models | |
| CN107823286A (zh) | 粘委陵菜提取物及其应用 | |
| CN109745372B (zh) | 金芪降糖口服制剂在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用 | |
| Li et al. | Protective effect of the n-butanol Toona sinensis seed extract on diabetic nephropathy rat kidneys | |
| CN108210503A (zh) | 甘露糖在用于提高Treg细胞数量及其Foxp3因子表达水平的新用途 | |
| Jia et al. | KGF is delivered to inflammatory and induces the epithelial hyperplasia in trinitrobenzene sulfonic acid-induced ulcerative colitis rats | |
| CN113827624B (zh) | 一种榆黄蘑多糖及其应用 | |
| Zhou et al. | Zi Qi decoction alleviates liver fibrosis by inhibiting the toll-like receptor 4 (TLR4)-related nuclear factor kappa b (NF-κB) and mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathways | |
| Yuan et al. | Effects of self-made prescription compound rhodiola on the ultrastructure of podocytes in rats with type 2 diabetic nephropathy | |
| CN109985180B (zh) | 一种中药复方组合物在制备抗肝纤维化药物中的用途 | |
| CN108309999B (zh) | 一种防治动脉粥样硬化的药物组合物 | |
| Zeng et al. | Effects of Jiawei Shaoyao‐Gancao Decoction and its drug‐containing serum on proliferation, apoptosis, and ultrastructure of human adenomyosis foci cells | |
| Liu et al. | Exogenous biological renal support improves kidney function in mice with rhabdomyolysis-induced acute kidney injury | |
| CN105998118B (zh) | 竹节参总皂苷在制备预防及治疗肝脏衰老的药物上的应用 | |
| CN110193020A (zh) | 京尼平苷在制备防治心肌肥厚的药物中的应用 | |
| CN109771512A (zh) | 复方血栓通制剂在制备抗炎药物中的用途 | |
| Guoying et al. | Total Saponin of Dioscorea collettii Attenuates MSU Crystal‐Induced Inflammation by Inhibiting the Activation of the TLR4/NF‐κB Signaling Pathway | |
| Wang et al. | Zishen Yutai Pills Promote Angiogenesis at the Maternal-Fetal Interface in Recurrent Spontaneous Abortion Mice by Regulating miR-187/VEGF Axis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |