CN109456925A - 一种仔猪用复合益生菌制剂及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种仔猪用复合益生菌制剂,由如下质量百分比的原料组成:粪肠球菌制剂5‑30%,啤酒酵母制剂10‑40%,乳酸菌制剂20‑50%,枯草芽孢杆菌制剂10‑50%;本发明还公开了所述仔猪用复合益生菌制剂的制备方法;本发明的仔猪用复合益生菌制剂安全可靠,所采用的菌种均为允许使用的微生物饲料添加剂菌种,也是可用作直接饲喂的微生物;本发明的益生菌制剂的菌种培养方法操作简单,方便制备,活菌含量高,且杂菌含量低,稳定性较好,便于长途运输和长期保存。
Description
技术领域
本发明涉及微生物领域技术领域,更具体的涉及一种仔猪用复合益生菌制剂及制备方法。
背景技术
仔猪黄白痢是仔猪黄痢和仔猪白痢的合称,是由大肠埃希氏菌引起的仔猪哺乳期常见的肠道传染性疾病。无论是大型养猪场,还是传统式家庭养殖,仔猪黄白痢都有发生,其发病率和死亡率均较高,是造成仔猪育成活率低,影响养殖业效益的主要疾病之一。
当前不少养殖场预防仔猪黄白痢采取一出生就注射含抗生素的保健针,或在仔猪哺乳期给母猪添加多种抗生素以及给断奶前后仔猪定期大量应用抗生素。这样容易导致耐药菌株的形成和二重感染的出现,从而导致药效降低,用药量增加,仔猪后期生长缓慢,养殖成本不断增加,形成恶性循环。对仔猪过早地大量使用抗生素是导致免疫机能下降甚至引起免疫抑制的重要因素。
益生菌制剂是近年来国内外迅速崛起的一类微生物制剂,它作为一种新型饲料添加剂,无毒副作用且具有调节肠道菌群平衡、促进动物生长,提高饲料转化率和增强动物机体免疫功能等优点,已被广泛应用于畜禽养殖业和饲料业,成为了饲用抗生素的理想替代品。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的缺陷,提供一种仔猪用复合益生菌制剂及制备方法。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:
本发明的仔猪用复合益生菌制剂,由如下质量百分比的原料组成:粪肠球菌制剂5-30%,啤酒酵母制剂10-40%,乳酸菌制剂20-50%,枯草芽孢杆菌制剂10-50%;
所述仔猪用复合益生菌制剂的制备方法包括如下步骤:
(1)取粪肠球菌菌落,在无菌条件下接种于摇床培养基上,摇床培养10-25h,得到粪肠球菌菌种;将粪肠球菌菌种接种于扩大培养基上培养10-25h,得到粪肠球菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述的粪肠球菌发酵菌种,培养发酵20-60h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到粪肠球菌发酵液;
(2)取酵母菌菌落,在无菌条件下接种于摇床培养基上,摇床培养8-28h,得到酵母菌菌种;将酵母菌菌种接种于扩大培养基上培养15-25h,得到酵母菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述酵母菌发酵菌种,培养发酵20-60h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到啤酒酵母菌发酵液;
(3)取乳酸菌菌落,在无菌条件下接种于摇床培养基上,摇床培养15-35h,得到乳酸菌菌种;将乳酸菌菌种接种于扩大培养基上培养15-25h,得到乳酸菌发酵菌种;将经将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述乳酸菌发酵菌种,培养发酵20-60h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到乳酸菌发酵液;
(4)取枯草芽孢杆菌菌落,在无菌条件下接种于摇床培养基上,摇床培养15-35h,得到枯草芽孢杆菌菌种;将枯草芽孢杆菌菌种接种于扩大培养基上培养15-25h,得到枯草芽孢杆菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述枯草芽孢杆菌发酵菌种,培养发酵20-60h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到枯草芽孢杆菌发酵液;
(5)将上述步骤(1)-(4)的粪肠球菌发酵液、啤酒酵母菌发酵液、乳酸菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液分别低温冷冻干燥,按质量百分比混合均匀,即得所述猪用复合益生菌制剂。
优选地,步骤(1)-(4)所述的扩大培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉3-8%,酵母膏0.1-0.9%,尿素0.1-1%,磷酸氢二钾0.3-1.5%,无水乙酸钠0.5-3%,硫酸镁0.01-0.05%,硫酸锰0.004-0.05%,氯化铁0.005-0.06%,麦芽汁3-6%,玉米浆6-9%,麦麸20-30%,棉籽粕4-10%,其余为无菌水。
优选地,步骤(1)所述的粪肠球菌菌落、步骤(2)所述的酵母菌菌落、步骤(3)所述的乳酸菌菌落、步骤(4)所述的枯草芽孢杆菌菌落分别接种于培养基上时,控制培养温度为30-35℃,摇床的转速为80-300rpm。
优选地,步骤(1)-(4)所述的摇床培养基为PDA-葡萄糖培养基或牛肉膏蛋白胨培养基。
优选地,步骤(1)所述的粪肠球菌发酵菌种、步骤(2)所述的酵母菌发酵菌种、步骤(3)所述的乳酸菌发酵菌种、步骤(4)所述的枯草芽孢杆菌发酵菌种分别在发酵罐中发酵时,控制发酵罐内的发酵温度为30-35℃,培养发酵时先厌氧发酵5-16h,再好氧发酵至培养发酵结束。
优选地,步骤(1)所述的粪肠球菌发酵菌种、步骤(2)所述的酵母菌发酵菌种、步骤(3)所述的乳酸菌发酵菌种、步骤(4)所述的枯草芽孢杆菌发酵菌种分别在发酵罐中厌氧发酵时,搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为120-200rpm。
优选地,步骤(1)-(4)所述的发酵罐培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉3-8%,磷酸氢二钾0.3-1.5%,无水乙酸钠0.5-3%,硫酸镁0.01-0.05%,硫酸锰0.004-0.05%,氯化铁0.005-0.06%,麦芽汁3-6%,玉米浆6-9%,麦麸20-30%,棉籽粕4-10%,其余为无菌水。
优选地,步骤(1)所述的粪肠球菌发酵液、步骤(2)所述的酵母菌发酵液、步骤(3)所述的乳酸菌发酵液、步骤(4)所述的枯草芽孢杆菌发酵液中的活菌数均为5.0-9.5x109cfu/mL。
优选地,步骤(1)所述的粪肠球菌发酵菌种、步骤(2)所述的酵母菌发酵菌种、步骤(3)所述的乳酸菌发酵菌种、步骤(4)所述的枯草芽孢杆菌发酵菌种分别在发酵罐中发酵时,菌种的质量为发酵罐培养基质量的0.05-1.5%。
本发明由于采用了上述技术方案,具有以下有益效果:
1、本发明的仔猪用复合益生菌制剂安全可靠,所采用的菌种均为允许使用的微生物饲料添加剂菌种,也是可用作直接饲喂的微生物;本发明的益生菌制剂的菌种培养方法操作简单,方便制备,最后分别得到的发酵液中的活菌数可达到9.5x109cfu/mL,活菌含量高,且杂菌含量低,稳定性较好,便于长途运输和长期保存。
2、本发明的制剂产物浓度高,代谢产物、活性物质多,微量元素和未知生长因子含量丰富,可以提高仔猪集体的免疫力,调节内分泌,促进食欲,助长消化,改善睡眠,增强抗病能力等,对仔猪黄白痢有很好的治疗效果。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下举出优选实施例,对本发明进一步详细说明。然而,需要说明的是,说明书中列出的许多细节仅仅是为了使读者对本发明的一个或多个方面有一个透彻的理解,即便没有这些特定的细节也可以实现本发明的这些方面。
实施例1
本发明的仔猪用复合益生菌制剂,由如下质量百分比的原料组成:粪肠球菌制剂5%,啤酒酵母制剂10%,乳酸菌制剂50%,枯草芽孢杆菌制剂35%;
所述仔猪用复合益生菌制剂的制备方法包括如下步骤:
(1)取粪肠球菌菌落,在无菌条件下接种于PDA-葡萄糖培养基上,摇床培养10h,培养温度为30℃,摇床转速为80rpm,得到粪肠球菌菌种;将粪肠球菌菌种接种于扩大培养基上培养10h,得到粪肠球菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述的粪肠球菌发酵菌种,培养发酵20h,控制发酵罐内的发酵温度为30℃,培养发酵时先厌氧发酵5h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为120rpm,再静置物料好氧发酵15h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到粪肠球菌活菌数为5.0x109cfu/mL的粪肠球菌发酵液;
(2)取酵母菌菌落,在无菌条件下接种于PDA-葡萄糖培养基上,摇床培养8h,培养温度为30℃,摇床转速为80rpm,得到酵母菌菌种;将酵母菌菌种接种于扩大培养基上培养15h,得到酵母菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述酵母菌发酵菌种,培养发酵20h,控制发酵罐内的发酵温度为30℃,培养发酵时先厌氧发酵5h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为120rpm,再静置物料好氧发酵15h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到酵母菌活菌数为6.0x109cfu/mL的啤酒酵母菌发酵液;
(3)取乳酸菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养15h,培养温度为30℃,摇床转速为80rpm,得到乳酸菌菌种;将乳酸菌菌种接种于扩大培养基上培养15h,得到乳酸菌发酵菌种;将经将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述乳酸菌发酵菌种,培养发酵20h,控制发酵罐内的发酵温度为30℃,培养发酵时先厌氧发酵5h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为120rpm,再静置物料好氧发酵15h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到乳酸菌活菌数为7.0x109cfu/mL的乳酸菌发酵液;
(4)取枯草芽孢杆菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养15h,培养温度为30℃,摇床转速为80rpm,得到枯草芽孢杆菌菌种;将枯草芽孢杆菌菌种接种于扩大培养基上培养15h,得到枯草芽孢杆菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述枯草芽孢杆菌发酵菌种,培养发酵20h,控制发酵罐内的发酵温度为30℃,培养发酵时先厌氧发酵5h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为120rpm,再静置物料好氧发酵15h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到枯草芽孢杆菌活菌数为5.0x109cfu/mL的枯草芽孢杆菌发酵液;
(5)将上述步骤(1)-(4)的粪肠球菌发酵液、啤酒酵母菌发酵液、乳酸菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液分别低温冷冻干燥,按质量百分比混合均匀,即得所述猪用复合益生菌制剂。
步骤(1)-(4)所述的扩大培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉3%,酵母膏0.1%,尿素0.1%,磷酸氢二钾0.3%,无水乙酸钠0.5%,硫酸镁0.01%,硫酸锰0.004%,氯化铁0.005%,麦芽汁3%,玉米浆6%,麦麸20%,棉籽粕4%,其余为无菌水。
步骤(1)-(4)所述的发酵罐培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉3%,磷酸氢二钾0.3%,无水乙酸钠0.5%,硫酸镁0.01%,硫酸锰0.004%,氯化铁0.005%,麦芽汁3%,玉米浆6%,麦麸20%,棉籽粕4%,其余为无菌水,发酵时,菌种的质量为发酵罐培养基质量的0.05%。
实施例2
本发明的仔猪用复合益生菌制剂,由如下质量百分比的原料组成:粪肠球菌制剂30%,啤酒酵母制剂40%,乳酸菌制剂20%,枯草芽孢杆菌制剂10%;
所述仔猪用复合益生菌制剂的制备方法包括如下步骤:
(1)取粪肠球菌菌落,在无菌条件下接种于PDA-葡萄糖培养基上,摇床培养13h,培养温度为31℃,摇床转速为125rpm,得到粪肠球菌菌种;将粪肠球菌菌种接种于扩大培养基上培养17h,得到粪肠球菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述的粪肠球菌发酵菌种,培养发酵32h,控制发酵罐内的发酵温度为31℃,培养发酵时先厌氧发酵7h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为136rpm,再静置物料好氧发酵25h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到粪肠球菌活菌数为9.5x109cfu/mL的粪肠球菌发酵液;
(2)取酵母菌菌落,在无菌条件下接种于PDA-葡萄糖培养基上,摇床培养12h,培养温度为31℃,摇床转速为125rpm,得到酵母菌菌种;将酵母菌菌种接种于扩大培养基上培养17h,得到酵母菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述酵母菌发酵菌种,培养发酵32h,控制发酵罐内的发酵温度为31℃,培养发酵时先厌氧发酵7h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为136rpm,再静置物料好氧发酵25h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到酵母菌活菌数为5.9x109cfu/mL的啤酒酵母菌发酵液;
(3)取乳酸菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养19h,培养温度为35℃,摇床转速为125rpm,得到乳酸菌菌种;将乳酸菌菌种接种于扩大培养基上培养19h,得到乳酸菌发酵菌种;将经将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述乳酸菌发酵菌种,培养发酵32h,控制发酵罐内的发酵温度为35℃,培养发酵时先厌氧发酵7h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为140rpm,再静置物料好氧发酵25h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到乳酸菌活菌数为8.2x109cfu/mL的乳酸菌发酵液;
(4)取枯草芽孢杆菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养19h,培养温度为31℃,摇床转速为120rpm,得到枯草芽孢杆菌菌种;将枯草芽孢杆菌菌种接种于扩大培养基上培养13h,得到枯草芽孢杆菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述枯草芽孢杆菌发酵菌种,培养发酵20h,控制发酵罐内的发酵温度为31℃,培养发酵时先厌氧发酵8h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为145rpm,再静置物料好氧发酵12h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到枯草芽孢杆菌活菌数为5.6x109cfu/mL的枯草芽孢杆菌发酵液;
(5)将上述步骤(1)-(4)的粪肠球菌发酵液、啤酒酵母菌发酵液、乳酸菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液分别低温冷冻干燥,按质量百分比混合均匀,即得所述猪用复合益生菌制剂。
步骤(1)-(4)所述的扩大培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉4%,酵母膏0.2%,尿素0.2%,磷酸氢二钾0.5%,无水乙酸钠1%,硫酸镁0.02%,硫酸锰0.008%,氯化铁0.009%,麦芽汁3.5%,玉米浆6.5%,麦麸22%,棉籽粕5%,其余为无菌水。
步骤(1)-(4)所述的发酵罐培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉4%,磷酸氢二钾0.5%,无水乙酸钠1%,硫酸镁0.02%,硫酸锰0.008%,氯化铁0.01%,麦芽汁3.8%,玉米浆6.6%,麦麸22%,棉籽粕5%,其余为无菌水,发酵时,菌种的质量为发酵罐培养基质量的0.1%。
实施例3
本发明的仔猪用复合益生菌制剂,由如下质量百分比的原料组成:粪肠球菌制剂10%,啤酒酵母制剂14%,乳酸菌制剂26%,枯草芽孢杆菌制剂50%;
所述仔猪用复合益生菌制剂的制备方法包括如下步骤:
(1)取粪肠球菌菌落,在无菌条件下接种于PDA-葡萄糖培养基上,摇床培养16h,培养温度为32℃,摇床转速为170rpm,得到粪肠球菌菌种;将粪肠球菌菌种接种于扩大培养基上培养16h,得到粪肠球菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述的粪肠球菌发酵菌种,培养发酵45h,控制发酵罐内的发酵温度为32℃,培养发酵时先厌氧发酵9h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为150rpm,再静置物料好氧发酵36h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到粪肠球菌活菌数为7.2x109cfu/mL的粪肠球菌发酵液;
(2)取酵母菌菌落,在无菌条件下接种于PDA-葡萄糖培养基上,摇床培养16h,培养温度为32℃,摇床转速为170rpm,得到酵母菌菌种;将酵母菌菌种接种于扩大培养基上培养19h,得到酵母菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述酵母菌发酵菌种,培养发酵45h,控制发酵罐内的发酵温度为32℃,培养发酵时先厌氧发酵10h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为160rpm,再静置物料好氧发酵35h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到酵母菌活菌数为9.5x109cfu/mL的啤酒酵母菌发酵液;
(3)取乳酸菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养23h,培养温度为34℃,摇床转速为170rpm,得到乳酸菌菌种;将乳酸菌菌种接种于扩大培养基上培养20h,得到乳酸菌发酵菌种;将经将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述乳酸菌发酵菌种,培养发酵46h,控制发酵罐内的发酵温度为34℃,培养发酵时先厌氧发酵16h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为170rpm,再静置物料好氧发酵30h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到乳酸菌活菌数为8.8x109cfu/mL的乳酸菌发酵液;
(4)取枯草芽孢杆菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养23h,培养温度为32℃,摇床转速为160rpm,得到枯草芽孢杆菌菌种;将枯草芽孢杆菌菌种接种于扩大培养基上培养19h,得到枯草芽孢杆菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述枯草芽孢杆菌发酵菌种,培养发酵45h,控制发酵罐内的发酵温度为32℃,培养发酵时先厌氧发酵16h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为180rpm,再静置物料好氧发酵29h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到枯草芽孢杆菌活菌数为8.4x109cfu/mL的枯草芽孢杆菌发酵液;
(5)将上述步骤(1)-(4)的粪肠球菌发酵液、啤酒酵母菌发酵液、乳酸菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液分别低温冷冻干燥,按质量百分比混合均匀,即得所述猪用复合益生菌制剂。
步骤(1)-(4)所述的扩大培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉5%,酵母膏0.3%,尿素0.4%,磷酸氢二钾0.8%,无水乙酸钠1.5%,硫酸镁0.03%,硫酸锰0.01%,氯化铁0.01%,麦芽汁4%,玉米浆7%,麦麸24%,棉籽粕6%,其余为无菌水。
步骤(1)-(4)所述的发酵罐培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉5%,磷酸氢二钾0.8%,无水乙酸钠1.5%,硫酸镁0.03%,硫酸锰0.01%,氯化铁0.02%,麦芽汁4.5%,玉米浆7.2%,麦麸24%,棉籽粕6%,其余为无菌水,发酵时,菌种的质量为发酵罐培养基质量的0.5%。
实施例4
本发明的仔猪用复合益生菌制剂,由如下质量百分比的原料组成:粪肠球菌制剂27%,啤酒酵母制剂23%,乳酸菌制剂35%,枯草芽孢杆菌制剂15%;
所述仔猪用复合益生菌制剂的制备方法包括如下步骤:
(1)取粪肠球菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养19h,培养温度为33℃,摇床转速为215rpm,得到粪肠球菌菌种;将粪肠球菌菌种接种于扩大培养基上培养22h,得到粪肠球菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述的粪肠球菌发酵菌种,培养发酵50h,控制发酵罐内的发酵温度为33℃,培养发酵时先厌氧发酵11h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为165rpm,再静置物料好氧发酵39h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到粪肠球菌活菌数为6.3x109cfu/mL的粪肠球菌发酵液;
(2)取酵母菌菌落,在无菌条件下接种于PDA-葡萄糖培养基上,摇床培养20h,培养温度为33℃,摇床转速为210rpm,得到酵母菌菌种;将酵母菌菌种接种于扩大培养基上培养21h,得到酵母菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述酵母菌发酵菌种,培养发酵52h,控制发酵罐内的发酵温度为33℃,培养发酵时先厌氧发酵12h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为160rpm,再静置物料好氧发酵40h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到酵母菌活菌数为6.4x109cfu/mL的啤酒酵母菌发酵液;
(3)取乳酸菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养27h,培养温度为33℃,摇床转速为220rpm,得到乳酸菌菌种;将乳酸菌菌种接种于扩大培养基上培养21h,得到乳酸菌发酵菌种;将经将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述乳酸菌发酵菌种,培养发酵55h,控制发酵罐内的发酵温度为33℃,培养发酵时先厌氧发酵12h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为180rpm,再静置物料好氧发酵33h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到乳酸菌活菌数为5.0x109cfu/mL的乳酸菌发酵液;
(4)取枯草芽孢杆菌菌落,在无菌条件下接种于PDA-葡萄糖培养基上,摇床培养27h,培养温度为33℃,摇床转速为200rpm,得到枯草芽孢杆菌菌种;将枯草芽孢杆菌菌种接种于扩大培养基上培养20h,得到枯草芽孢杆菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述枯草芽孢杆菌发酵菌种,培养发酵54h,控制发酵罐内的发酵温度为33℃,培养发酵时先厌氧发酵14h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为200rpm,再静置物料好氧发酵40h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到枯草芽孢杆菌活菌数为6.6x109cfu/mL的枯草芽孢杆菌发酵液;
(5)将上述步骤(1)-(4)的粪肠球菌发酵液、啤酒酵母菌发酵液、乳酸菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液分别低温冷冻干燥,按质量百分比混合均匀,即得所述猪用复合益生菌制剂。
步骤(1)-(4)所述的扩大培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉6%,酵母膏0.5%,尿素0.6%,磷酸氢二钾1%,无水乙酸钠2%,硫酸镁0.04%,硫酸锰0.02%,氯化铁0.03%,麦芽汁4.5%,玉米浆7.5%,麦麸26%,棉籽粕8%,其余为无菌水。
步骤(1)-(4)所述的发酵罐培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉6%,磷酸氢二钾1%,无水乙酸钠2%,硫酸镁0.04%,硫酸锰0.02%,氯化铁0.03%,麦芽汁5%,玉米浆8%,麦麸26%,棉籽粕8%,其余为无菌水,发酵时,菌种的质量为发酵罐培养基质量的0.9%。
实施例5
本发明的仔猪用复合益生菌制剂,由如下质量百分比的原料组成:粪肠球菌制剂27%,啤酒酵母制剂23%,乳酸菌制剂35%,枯草芽孢杆菌制剂15%;
所述仔猪用复合益生菌制剂的制备方法包括如下步骤:
(1)取粪肠球菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养22h,培养温度为34℃,摇床转速为250rpm,得到粪肠球菌菌种;将粪肠球菌菌种接种于扩大培养基上培养22h,得到粪肠球菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述的粪肠球菌发酵菌种,培养发酵55h,控制发酵罐内的发酵温度为34℃,培养发酵时先厌氧发酵14h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为180rpm,再静置物料好氧发酵41h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到粪肠球菌活菌数为7.8x109cfu/mL的粪肠球菌发酵液;
(2)取酵母菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养24h,培养温度为34℃,摇床转速为240rpm,得到酵母菌菌种;将酵母菌菌种接种于扩大培养基上培养23h,得到酵母菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述酵母菌发酵菌种,培养发酵56h,控制发酵罐内的发酵温度为34℃,培养发酵时先厌氧发酵16h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为185rpm,再静置物料好氧发酵40h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到酵母菌活菌数为8.0x109cfu/mL的啤酒酵母菌发酵液;
(3)取乳酸菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养31h,培养温度为32℃,摇床转速为240rpm,得到乳酸菌菌种;将乳酸菌菌种接种于扩大培养基上培养23h,得到乳酸菌发酵菌种;将经将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述乳酸菌发酵菌种,培养发酵59h,控制发酵罐内的发酵温度为32℃,培养发酵时先厌氧发酵10h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为190rpm,再静置物料好氧发酵49h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到乳酸菌活菌数为6.5x109cfu/mL的乳酸菌发酵液;
(4)取枯草芽孢杆菌菌落,在无菌条件下接种于PDA-葡萄糖培养基上,摇床培养31h,培养温度为34℃,摇床转速为230rpm,得到枯草芽孢杆菌菌种;将枯草芽孢杆菌菌种接种于扩大培养基上培养23h,得到枯草芽孢杆菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述枯草芽孢杆菌发酵菌种,培养发酵60h,控制发酵罐内的发酵温度为34℃,培养发酵时先厌氧发酵15h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为165rpm,再静置物料好氧发酵45h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到枯草芽孢杆菌活菌数为7.1x109cfu/mL的枯草芽孢杆菌发酵液;
(5)将上述步骤(1)-(4)的粪肠球菌发酵液、啤酒酵母菌发酵液、乳酸菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液分别低温冷冻干燥,按质量百分比混合均匀,即得所述猪用复合益生菌制剂。
步骤(1)-(4)所述的扩大培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉7%,酵母膏0.7%,尿素0.8%,磷酸氢二钾1.2%,无水乙酸钠2.5%,硫酸镁0.05%,硫酸锰0.04%,氯化铁0.05%,麦芽汁5%,玉米浆8.2%,麦麸28%,棉籽粕9%,其余为无菌水。
步骤(1)-(4)所述的发酵罐培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉7%,磷酸氢二钾1.2%,无水乙酸钠2.5%,硫酸镁0.04%,硫酸锰0.04%,氯化铁0.04%,麦芽汁5.5%,玉米浆8.4%,麦麸28%,棉籽粕9%,其余为无菌水,发酵时,菌种的质量为发酵罐培养基质量的1.2%。
实施例6
本发明的仔猪用复合益生菌制剂,由如下质量百分比的原料组成:粪肠球菌制剂9%,啤酒酵母制剂32%,乳酸菌制剂24%,枯草芽孢杆菌制剂35%;
所述仔猪用复合益生菌制剂的制备方法包括如下步骤:
(1)取粪肠球菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养25h,培养温度为35℃,摇床转速为300rpm,得到粪肠球菌菌种;将粪肠球菌菌种接种于扩大培养基上培养25h,得到粪肠球菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述的粪肠球菌发酵菌种,培养发酵60h,控制发酵罐内的发酵温度为35℃,培养发酵时先厌氧发酵16h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为200rpm,再静置物料好氧发酵44h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到粪肠球菌活菌数为8.1x109cfu/mL的粪肠球菌发酵液;
(2)取酵母菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养28h,培养温度为35℃,摇床转速为300rpm,得到酵母菌菌种;将酵母菌菌种接种于扩大培养基上培养25h,得到酵母菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述酵母菌发酵菌种,培养发酵60h,控制发酵罐内的发酵温度为35℃,培养发酵时先厌氧发酵10h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为200rpm,再静置物料好氧发酵50h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到酵母菌活菌数为7.8x109cfu/mL的啤酒酵母菌发酵液;
(3)取乳酸菌菌落,在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,摇床培养35h,培养温度为31℃,摇床转速为300rpm,得到乳酸菌菌种;将乳酸菌菌种接种于扩大培养基上培养25h,得到乳酸菌发酵菌种;将经将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述乳酸菌发酵菌种,培养发酵60h,控制发酵罐内的发酵温度为31℃,培养发酵时先厌氧发酵14h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为200rpm,再静置物料好氧发酵42h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到乳酸菌活菌数为9.5x109cfu/mL的乳酸菌发酵液;
(4)取枯草芽孢杆菌菌落,在无菌条件下接种于PDA-葡萄糖培养基上,摇床培养35h,培养温度为35℃,摇床转速为300rpm,得到枯草芽孢杆菌菌种;将枯草芽孢杆菌菌种接种于扩大培养基上培养25h,得到枯草芽孢杆菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述枯草芽孢杆菌发酵菌种,培养发酵43h,控制发酵罐内的发酵温度为35℃,培养发酵时先厌氧发酵11h,同时搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为200rpm,再静置物料好氧发酵32h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到枯草芽孢杆菌活菌数为9.3x109cfu/mL的枯草芽孢杆菌发酵液;
(5)将上述步骤(1)-(4)的粪肠球菌发酵液、啤酒酵母菌发酵液、乳酸菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液分别低温冷冻干燥,按质量百分比混合均匀,即得所述猪用复合益生菌制剂。
步骤(1)-(4)所述的扩大培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉8%,酵母膏0.9%,尿素1%,磷酸氢二钾1.5%,无水乙酸钠3%,硫酸镁0.05%,硫酸锰0.05%,氯化铁0.06%,麦芽汁6%,玉米浆9%,麦麸30%,棉籽粕10%,其余为无菌水。
步骤(1)-(4)所述的发酵罐培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉8%,磷酸氢二钾1.5%,无水乙酸钠3%,硫酸镁0.05%,硫酸锰0.05%,氯化铁0.06%,麦芽汁6%,玉米浆9%,麦麸30%,棉籽粕10%,其余为无菌水,发酵时,菌种的质量为发酵罐培养基质量的1.5%。
2018年8月-10月,在广西南宁市某养殖场开展仔猪黄白痢防治临床试验,选择200头患黄白痢的仔猪,分实验组和对照组,每组100头,试验组在仔猪的饲料中添加实施例1的复合益生菌制剂,添加量为饲料质量的0.3%,对照组向仔猪注射痢菌净注射液(济南创和美生物技术有限公司),肌肉注射,每头仔猪一次5mg。让猪只自由采食。经过3个月的试验,试验结果显示,试验组和对照组相比较,治疗效果差异显著(P<0.05),试验组的治愈率和总有效率分别为93.5%和98.8%,分别比对照组高出17.9%和15.2%。试验组的仔猪经治愈后,发育情况良好,无复发现象,对照组的仔猪用痢菌净治愈后,个别仔猪仍出现下痢。
Claims (8)
1.一种仔猪用复合益生菌制剂,其特征在于,由如下质量百分比的原料组成:粪肠球菌制剂5-30%,啤酒酵母制剂10-40%,乳酸菌制剂20-50%,枯草芽孢杆菌制剂10-50%;
所述仔猪用复合益生菌制剂的制备方法包括如下步骤:
(1)取粪肠球菌菌落,在无菌条件下接种于摇床培养基上,摇床培养10-25h,得到粪肠球菌菌种;将粪肠球菌菌种接种于扩大培养基上培养10-25h,得到粪肠球菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述的粪肠球菌发酵菌种,培养发酵20-60h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到粪肠球菌发酵液;
(2)取酵母菌菌落,在无菌条件下接种于摇床培养基上,摇床培养8-28h,得到酵母菌菌种;将酵母菌菌种接种于扩大培养基上培养15-25h,得到酵母菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述酵母菌发酵菌种,培养发酵20-60h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到啤酒酵母菌发酵液;
(3)取乳酸菌菌落,在无菌条件下接种于摇床培养基上,摇床培养15-35h,得到乳酸菌菌种;将乳酸菌菌种接种于扩大培养基上培养15-25h,得到乳酸菌发酵菌种;将经将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述乳酸菌发酵菌种,培养发酵20-60h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到乳酸菌发酵液;
(4)取枯草芽孢杆菌菌落,在无菌条件下接种于摇床培养基上,摇床培养15-35h,得到枯草芽孢杆菌菌种;将枯草芽孢杆菌菌种接种于扩大培养基上培养15-25h,得到枯草芽孢杆菌发酵菌种;将经过灭菌处理的发酵罐培养基放置于经灭菌的发酵罐中,再接种上述枯草芽孢杆菌发酵菌种,培养发酵20-60h,发酵结束后离心处理,取上清液,得到枯草芽孢杆菌发酵液;
(5)将上述步骤(1)-(4)的粪肠球菌发酵液、啤酒酵母菌发酵液、乳酸菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液分别低温冷冻干燥,按质量百分比混合均匀,即得所述猪用复合益生菌制剂。
2.根据权利要求1所述的仔猪用复合益生菌制剂,其特征在于,步骤(1)-(4)所述的扩大培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉3-8%,酵母膏0.1-0.9%,尿素0.1-1%,磷酸氢二钾0.3-1.5%,无水乙酸钠0.5-3%,硫酸镁0.01-0.05%,硫酸锰0.004-0.05%,氯化铁0.005-0.06%,麦芽汁3-6%,玉米浆6-9%,麦麸20-30%,棉籽粕4-10%,其余为无菌水。
3.根据权利要求1所述的仔猪用复合益生菌制剂,其特征在于,步骤(1)所述的粪肠球菌菌落、步骤(2)所述的酵母菌菌落、步骤(3)所述的乳酸菌菌落、步骤(4)所述的枯草芽孢杆菌菌落分别接种于培养基上时,控制培养温度为30-35℃,摇床的转速为80-300rpm。
4.根据权利要求1所述的仔猪用复合益生菌制剂,其特征在于,步骤(1)-(4)所述的摇床培养基为PDA-葡萄糖培养基或牛肉膏蛋白胨培养基。
5.根据权利要求1所述的仔猪用复合益生菌制剂,其特征在于,步骤(1)所述的粪肠球菌发酵菌种、步骤(2)所述的酵母菌发酵菌种、步骤(3)所述的乳酸菌发酵菌种、步骤(4)所述的枯草芽孢杆菌发酵菌种分别在发酵罐中发酵时,控制发酵罐内的发酵温度为30-35℃,培养发酵时先厌氧发酵5-16h,再好氧发酵至培养发酵结束。
6.根据权利要求5所述的仔猪用复合益生菌制剂,其特征在于,步骤(1)所述的粪肠球菌发酵菌种、步骤(2)所述的酵母菌发酵菌种、步骤(3)所述的乳酸菌发酵菌种、步骤(4)所述的枯草芽孢杆菌发酵菌种分别在发酵罐中厌氧发酵时,搅拌发酵罐内的发酵物料,搅拌转速为120-200rpm。
7.根据权利要求1所述的仔猪用复合益生菌制剂,其特征在于,步骤(1)-(4)所述的发酵罐培养基由以下重量百分比的原料组成:豆粕粉3-8%,磷酸氢二钾0.3-1.5%,无水乙酸钠0.5-3%,硫酸镁0.01-0.05%,硫酸锰0.004-0.05%,氯化铁0.005-0.06%,麦芽汁3-6%,玉米浆6-9%,麦麸20-30%,棉籽粕4-10%,其余为无菌水。
8.根据权利要求1所述的仔猪用复合益生菌制剂,其特征在于,步骤(1)所述的粪肠球菌发酵液、步骤(2)所述的酵母菌发酵液、步骤(3)所述的乳酸菌发酵液、步骤(4)所述的枯草芽孢杆菌发酵液中的活菌数均为5.0-9.5x109cfu/mL。
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CN110923161A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-03-27 | 浙江理工大学 | 一种除臭益生菌制剂及其制备方法和应用 |
Citations (2)
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CN102217713A (zh) * | 2011-06-29 | 2011-10-19 | 北京康华远景科技有限公司 | 新型高效天然诱食剂 |
CN106260547A (zh) * | 2016-08-05 | 2017-01-04 | 湖北凌卓生物工程有限公司 | 一种发酵生物饲料及其制备方法 |
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CN102217713A (zh) * | 2011-06-29 | 2011-10-19 | 北京康华远景科技有限公司 | 新型高效天然诱食剂 |
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---|---|---|---|---|
CN110923161A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-03-27 | 浙江理工大学 | 一种除臭益生菌制剂及其制备方法和应用 |
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