CN109444404A - 一种抗双链dna抗体快速检测方法 - Google Patents
一种抗双链dna抗体快速检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109444404A CN109444404A CN201811143858.8A CN201811143858A CN109444404A CN 109444404 A CN109444404 A CN 109444404A CN 201811143858 A CN201811143858 A CN 201811143858A CN 109444404 A CN109444404 A CN 109444404A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- added
- test strips
- double
- minutes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明专利公布了一种抗双链DNA抗体快速检测方法，DNA提取步骤包括：生物素标记双链DNA抗原、荧光标记鼠抗人免疫球蛋白G、制备试纸条和样本稀释液、测定，利用离心管、离心机、水浴箱、电子pH计、荧光免疫分析仪、连续点膜喷金一体机，再加上相应的试剂和材料进行快速而准确的检测。本发明试纸条进行检测，时间很短，利用生物素标记质粒双链DNA对链霉亲和素蛋白进行固定，以提高灵敏度，试纸条和样本稀释液可提前制备且便于存储，使用时取用方便，提供一种操作简便、节约时间、检测准确性高的抗双链DNA抗体快速检测方法。
Description
技术领域
本发明涉及快速检测领域，尤其涉及抗双链DNA抗体快速检测方法。
背景技术
现在社会生活中，人们对身体健康格外看重，而疾病对健康的威胁却一直没有减少，尤其是自身免疫性疾病，许多疾病陆续被定义为自身免疫性疾病，为了遏制自身免疫性疾病继续危害人们的健康，提高医疗水平，改善人们的健康水平，对自身免疫性疾病的提前诊断进行了大量的研究，以求遭到准确快捷的诊断方法。
自身免疫性疾病是由于对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织受到损害而形成的疾病，具体临床表现为器官特异性自身免疫病和系统性自身免疫病，而系统性自身免疫病又包括：系统性血管炎、甲状腺自身免疫疾病、天疱疮、系统性红斑狼疮等，这些疾病的病因有自身抗原的出现、免疫调节异常、交叉抗原以及遗传因素，通过进行抗双链DNA抗体检测可提前发现自身免疫性疾病的存在，已采取相应措施。
对于系统性红斑狼疮的诊断而言，抗双链DNA抗体是一项重要指标，其具有相当高的特异性，容易被检测，同时与系统性红斑狼疮又有一定联系，会随该疾病的活动程度而发生变化，因此，对双链DNA抗体进行检测，可快速准确的判断系统性红斑狼疮。
目前进行诊断检测的方法主要有化学发光分析法、酶联免疫吸附测定、胶体金免疫层析法、免疫荧光分析法、间接免疫荧光法等，其中在临床上应用最为广泛的是间接免疫荧光法，该方法灵敏度高，但其过程包括手工操作和荧光显微镜观察，同时需要丰富的经验，收到多种因素的影响，存在操作时间长的缺陷，酶联免疫吸附测定法也是一种较为常见的临床方法，但与间接免疫荧光法一样，存在耗时较长、影响就医，导致病情恶化，其他方法虽然较为快捷，但在实际应用当中存在较多限制，有些方法并不成熟，需要进一步研究探索，诊断的准确性有待进一步提高，因此，目前对于系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的诊断检测，准确性高的方法耗时较长，而方便快捷的方法有不成熟，需要进一步的对其准确性进行提高，缺乏一种准确性高且方便快捷，耗时较少的诊断方法。
发明内容
本发明的目的是解决系统性红斑狼疮在检测中存在的检测准确性低、操作繁琐、耗费时间长的问题，提供一种操作简便、节约时间、检测准确性高的抗双链DNA抗体快速检测方法。
本发明所采用的技术方案：一种抗双链DNA抗体快速检测方法，所需试剂和材料包括：质粒、重蒸水、缓冲液、限制性内切酶、乙二胺四乙酸、无水乙醇、乙醇溶液、生物素酰水溶撤肼、戊二醛、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液、F1-Y030微球溶液、N-羟基琥珀酰亚胺溶液、NaOH溶液、NH4Cl溶液、待标记抗体、PBS缓冲液、牛血清白蛋白溶液、链霉亲和素、羊抗鼠免疫球蛋白G、NC膜、样本垫、吸水纸、NaN3、PVC底板，所需设备包括：离心管、离心机、水浴箱、电子pH计、荧光免疫分析仪、连续点膜喷金一体机。
本发明一种抗双链DNA抗体快速检测方法如下：
(一)生物素标记双链DNA抗原：将质粒与重蒸水加入离心管并将二者融合，再加入缓冲液以及限制性内切酶，混合均匀后利用离心机进行轻微离心使得溶液集中，并在37℃下静置3小时，然后加入乙二胺四乙酸溶液并混合均匀，再加入无水乙醇混合均匀后放入水浴箱内冰浴3分钟，之后用离心机在11000r/min下离心处理6分钟，再用75％的乙醇溶液洗涤处理后的双链DNA沉淀，再用离心机在11000r/min下离心处理3分钟，去除上清液后晾干双链DNA沉淀；将生物素酰肼水溶液：戊二醛：双链DNA按照5：6：10的比例进行混合均匀，并放入水浴箱中在37℃下10min，最后将混合溶液进行1×PBS透析，以得到被生物素标记的双链DNA抗原。
(二)荧光标记鼠抗人免疫球蛋白G：将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液、F1-Y030微球溶液、N-羟基琥珀酰亚胺溶液混合均匀并在35℃下反应20分钟，然后加入NaOH溶液，在pH计的检测下将混合溶液的pH值调整到7.2-7.4之间，按照所需标记比例将向混合溶液中加入待标记的抗体，在30℃下反应30分钟，反应后加入NH4Cl溶液，同样在30℃下静置15分钟，以终止反应，然后进行PBS缓冲液透析并回收混合溶液，然后加入牛血清白蛋白溶液，将混合溶液保持与4℃的环境下。
(三)制备试纸条和样本稀释液：利用连续点膜喷金一体机将链霉亲和素与羊抗鼠免疫球蛋白G划线在NC膜的指定位置上，然后37℃下烘干5小时，按照样品垫、NC膜及吸水纸的顺序将三者从左到右排列在PVC底板上，且三者交界处有1mm的重叠宽度，将其裁剪成4mm宽制成试纸条，并装入塑料卡壳再用铝箔袋每个单独密封，存储于4℃的温度下；将牛血清白蛋白、步骤(一)制备的生物素标记双链DNA抗原与步骤(二)制备的荧光标记鼠抗人免疫球蛋白G混合并加入NaN3防腐剂制成样本稀释液，并保存在4℃的温度下。
(四)测定：从4℃的保存条件下取出步骤(三)试纸条和样本稀释液并使其温度恢复至室温，将待测样本加入到样本稀释液中，混合均匀，并在混合后将其滴在试纸条的样本孔上，15分钟后将试纸条放入荧光免疫分析仪中进行检测。
所述步骤(四)中，待测样本与样本稀释液混合稀释比例经过研究确定为1：49。
本发明的有益效果：(1)本发明中样本吸收液和试纸条可提前制备，且便于保存，取用方便，简化了检测时的步骤；(2)本发明利用试纸条进行检测，时间很短；(3)利用生物素标记质粒双链DNA对链霉亲和素蛋白进行固定，确保了检测准确度满足临床需求。
附图说明
图1是本发明的流程示意图。
具体实施方式：
下面结合附图与具体实例对本发明进行详细说明。
本发明结合实例进行说明，所需试剂和材料包括：质粒、重蒸水、缓冲液、限制性内切酶、乙二胺四乙酸、无水乙醇、乙醇溶液、生物素酰水溶撤肼、戊二醛、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液、F1-Y030微球溶液、N-羟基琥珀酰亚胺溶液、NaOH溶液、NH4Cl溶液、待标记抗体、PBS缓冲液、牛血清白蛋白溶液、链霉亲和素、羊抗鼠免疫球蛋白G、NC膜、样本垫、吸水纸、NaN3、PVC底板，所需设备包括：离心管、离心机、水浴箱、电子pH计、荧光免疫分析仪、连续点膜喷金一体机。
本发明一种抗双链DNA抗体快速检测方法步骤如下：
(一)生物素标记双链DNA抗原：将质粒与重蒸水加入离心管并将二者融合，再加入缓冲液以及限制性内切酶，混合均匀后利用离心机进行轻微离心使得溶液集中，并在37℃下静置3小时，然后加入乙二胺四乙酸溶液并混合均匀，再加入无水乙醇混合均匀后放入水浴箱内冰浴3分钟，之后用离心机在11000r/min下离心处理6分钟，再用75％的乙醇溶液洗涤处理后的双链DNA沉淀，再用离心机在11000r/min下离心处理3分钟，去除上清液后晾干双链DNA沉淀；将生物素酰肼水溶液：戊二醛：双链DNA按照5：6：10的比例进行混合均匀，并放入水浴箱中在37℃下10min，最后将混合溶液进行1×PBS透析，以得到被生物素标记的双链DNA抗原。
(二)荧光标记鼠抗人免疫球蛋白G：将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液、F1-Y030微球溶液、N-羟基琥珀酰亚胺溶液混合均匀并在35℃下反应20分钟，然后加入NaOH溶液，在pH计的检测下将混合溶液的pH值调整到7.2-7.4之间，按照所需标记比例将向混合溶液中加入待标记的抗体，在30℃下反应30分钟，反应后加入NH4Cl溶液，同样在30℃下静置15分钟，以终止反应，然后进行PBS缓冲液透析并回收混合溶液，然后加入牛血清白蛋白溶液，将混合溶液保持与4℃的环境下。
(三)制备试纸条和样本稀释液：利用连续点膜喷金一体机将链霉亲和素与羊抗鼠免疫球蛋白G划线在NC膜的指定位置上，然后37℃下烘干5小时，按照样品垫、NC膜及吸水纸的顺序将三者从左到右排列在PVC底板上，且三者交界处有1mm的重叠宽度，将其裁剪成4mm宽制成试纸条，并装入塑料卡壳再用铝箔袋每个单独密封，存储于4℃的温度下；将牛血清白蛋白、步骤(一)制备的生物素标记双链DNA抗原与步骤(二)制备的荧光标记鼠抗人免疫球蛋白G混合并加入NaN3防腐剂制成样本稀释液，并保存在4℃的温度下。
(四)测定：从4℃的保存条件下取出步骤(三)试纸条和样本稀释液并使其温度恢复至室温，将待测样本加入到样本稀释液中，混合均匀，并在混合后将其滴在试纸条的样本孔上，15分钟后将试纸条放入荧光免疫分析仪中进行检测。
所述步骤(四)中，待测样本与样本稀释液混合稀释比例经过研究确定为1：49。
Claims (3)
1.一种抗双链DNA抗体快速检测方法，其特征在于：所需试剂和材料包括：质粒、重蒸水、缓冲液、限制性内切酶、乙二胺四乙酸、无水乙醇、乙醇溶液、生物素酰水溶撤肼、戊二醛、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液、F1-Y030微球溶液、N-羟基琥珀酰亚胺溶液、NaOH溶液、NH4Cl溶液、待标记抗体、PBS缓冲液、牛血清白蛋白溶液、链霉亲和素、羊抗鼠免疫球蛋白G、NC膜、样本垫、吸水纸、NaN3、PVC底板，所需设备包括：离心管、离心机、水浴箱、电子pH计、荧光免疫分析仪、连续点膜喷金一体机。
2.根据权利要求1所述的一种抗双链DNA抗体快速检测方法，其特征在于：所述方法如下：
(一)生物素标记双链DNA抗原：将质粒与重蒸水加入离心管并将二者融合，再加入缓冲液以及限制性内切酶，混合均匀后利用离心机进行轻微离心使得溶液集中，并在37℃下静置3小时，然后加入乙二胺四乙酸溶液并混合均匀，再加入无水乙醇混合均匀后放入水浴箱内冰浴3分钟，之后用离心机在11000r/min下离心处理6分钟，再用75％的乙醇溶液洗涤处理后的双链DNA沉淀，再用离心机在11000r/min下离心处理3分钟，去除上清液后晾干双链DNA沉淀；将生物素酰肼水溶液：戊二醛：双链DNA按照5：6：10的比例进行混合均匀，并放入水浴箱中在37℃下10min，最后将混合溶液进行1×PBS透析，以得到被生物素标记的双链DNA抗原；
(二)荧光标记鼠抗人免疫球蛋白G：将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液、F1-Y030微球溶液、N-羟基琥珀酰亚胺溶液混合均匀并在35℃下反应20分钟，然后加入NaOH溶液，在pH计的检测下将混合溶液的pH值调整到7.2-7.4之间，按照所需标记比例将向混合溶液中加入待标记的抗体，在30℃下反应30分钟，反应后加入NH4Cl溶液，同样在30℃下静置15分钟，以终止反应，然后进行PBS缓冲液透析并回收混合溶液，然后加入牛血清白蛋白溶液，将混合溶液保持与4℃的环境下；
(三)制备试纸条和样本稀释液：利用连续点膜喷金一体机将链霉亲和素与羊抗鼠免疫球蛋白G划线在NC膜的指定位置上，然后37℃下烘干5小时，按照样品垫、NC膜及吸水纸的顺序将三者从左到右排列在PVC底板上，且三者交界处有1mm的重叠宽度，将其裁剪成4mm宽制成试纸条，并装入塑料卡壳再用铝箔袋每个单独密封，存储于4℃的温度下；将牛血清白蛋白、步骤(一)制备的生物素标记双链DNA抗原与步骤(二)制备的荧光标记鼠抗人免疫球蛋白G混合并加入NaN3防腐剂制成样本稀释液，并保存在4℃的温度下；
(四)测定：从4℃的保存条件下取出步骤(三)试纸条和样本稀释液并使其温度恢复至室温，将待测样本加入到样本稀释液中，混合均匀，并在混合后将其滴在试纸条的样本孔上，15分钟后将试纸条放入荧光免疫分析仪中进行检测。
3.根据权利要求1、2所述的一种抗双链DNA抗体快速检测方法，其特征在于：所述步骤(四)中，待测样本与样本稀释液混合稀释比例经过研究确定为1：49。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811143858.8A CN109444404A (zh) | 2018-09-29 | 2018-09-29 | 一种抗双链dna抗体快速检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811143858.8A CN109444404A (zh) | 2018-09-29 | 2018-09-29 | 一种抗双链dna抗体快速检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109444404A true CN109444404A (zh) | 2019-03-08 |
Family
ID=65544849
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811143858.8A Withdrawn CN109444404A (zh) | 2018-09-29 | 2018-09-29 | 一种抗双链dna抗体快速检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109444404A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110632290A (zh) * | 2019-09-27 | 2019-12-31 | 昆山迪安医学检验实验室有限公司 | 一种抗双链dna抗体检测试剂 |
| CN113917136A (zh) * | 2021-10-18 | 2022-01-11 | 北京和杰创新生物医学科技有限公司 | 抗双链脱氧核糖核酸抗体免疫球蛋白g的检测方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105067584A (zh) * | 2015-08-11 | 2015-11-18 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 量子点定量检测RV病毒IgG抗体的免疫层析试剂盒 |
| US20160129079A1 (en) * | 2013-06-13 | 2016-05-12 | Medical Research & Development Fund for Health Ser vices Bnai Zion Medical Center | Semaphorin 3a for treatment and prognosis of systemic lupus erythematosus |
-
2018
- 2018-09-29 CN CN201811143858.8A patent/CN109444404A/zh not_active Withdrawn
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20160129079A1 (en) * | 2013-06-13 | 2016-05-12 | Medical Research & Development Fund for Health Ser vices Bnai Zion Medical Center | Semaphorin 3a for treatment and prognosis of systemic lupus erythematosus |
| CN105067584A (zh) * | 2015-08-11 | 2015-11-18 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 量子点定量检测RV病毒IgG抗体的免疫层析试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 吴淡娟: "抗核抗体及抗双链DNA抗体荧光免疫层析法快速筛查试剂盒的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110632290A (zh) * | 2019-09-27 | 2019-12-31 | 昆山迪安医学检验实验室有限公司 | 一种抗双链dna抗体检测试剂 |
| CN113917136A (zh) * | 2021-10-18 | 2022-01-11 | 北京和杰创新生物医学科技有限公司 | 抗双链脱氧核糖核酸抗体免疫球蛋白g的检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102662061B (zh) | 胶乳增强免疫比浊法测定人甲胎蛋白含量的试剂盒 | |
| CN106370867B (zh) | 一种联合检测评估肝癌肝移植术后转移复发风险的试剂盒 | |
| EP2631649A1 (en) | Method and device for the rapid diagnosis of diseases in faecal samples | |
| JP4690928B2 (ja) | イムノクロマト法によるアレルゲンの検出方法 | |
| JP5789520B2 (ja) | ヒトｓＣＤ１４−ＳＴの分析方法 | |
| CN115060888A (zh) | 一种新型冠状病毒核衣壳蛋白抗原检测试纸的制备方法 | |
| CN105388297A (zh) | 结核分支杆菌蛋白Rv1984c在制备诊断潜伏性肺结核感染的产品中的用途 | |
| CN109444404A (zh) | 一种抗双链dna抗体快速检测方法 | |
| EP2541247B1 (en) | Method for detecting raw pork and detection kit therefor | |
| CN110196330A (zh) | 一种检测骆驼乳中掺伪牛乳的免疫胶体金试纸条及其应用 | |
| JPH01121755A (ja) | 免疫検定キット及び免疫検定方法 | |
| CN106324251A (zh) | 小片段BMG抗体的制备方法及β2‑微球蛋白检测试剂盒 | |
| CN109917138A (zh) | 一种肌红蛋白时间分辨荧光免疫层析测定试剂盒 | |
| CN107533050A (zh) | 凝血酶‑抗凝血酶复合体的测定试剂及测定方法 | |
| JP2016211967A (ja) | イムノクロマト法によるアレルゲンの検出方法 | |
| CN107462729A (zh) | 一种载脂蛋白a1检测试剂盒及检测方法 | |
| CN107271674A (zh) | 一种用于脂肪性肝炎检测的靶标志物gp73及检测应用方法 | |
| CN105301244B (zh) | 检测酸性橙的酶联免疫试剂盒及其应用 | |
| CN107490675B (zh) | 一种免疫比浊试剂盒及检测方法 | |
| CN108548816A (zh) | 一种用于检测触珠蛋白含量的试剂盒 | |
| US9863943B2 (en) | Method of detecting pork in processed food and detection kit therefor | |
| CN107478853A (zh) | 一种载脂蛋白b检测试剂盒及检测方法 | |
| CN103675293B (zh) | Rv3872、Rv0164和/或Rv1926c蛋白在制备诊断活动性肺结核的产品中的用途 | |
| CN103698530B (zh) | 结核分支杆菌蛋白在制备诊断活动性肺结核的产品中的用途 | |
| CN209102725U (zh) | 心肾两项荧光免疫层析试纸条、测试板及试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication | ||
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |
Application publication date: 20190308 |