CN109438563A - 一种烟草kup7蛋白及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及基因工程领域，具体公开了一种烟草KUP7蛋白及其编码基因与应用。本发明首次提供了分离自烟草的KUP7基因，所述KUP7基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，其编码的蛋白KUP7的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，经功能验证，本发明提供的KUP7基因转入钾吸收缺陷型酵母突变株R5421后，表达所述KUP7基因的重组酵母具有钾离子吸收，转运功能。说明本发明提供的KUP7基因具有促进钾离子吸收和转运的功能。

Description

一种烟草KUP7蛋白及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地说，涉及一种来自烟草的钾转运蛋白KUP7及其编码基因与应用。

背景技术

钾转运体是能在外界钾离子浓度极低时将钾离子转运至细胞内的载体蛋白。钾转运体通常是一些跨膜蛋白，通过构象变化完成钾离子的跨膜转运，是一种需要ATP提供能量的主动运输过程，通常是K⁺/H⁺或K⁺/Na⁺协同运输。

现有技术对于钾转运体基因的研究在模式植物拟南芥中比较广泛，例如，研究表明拟南芥突变体kup6较野生型植株在干旱胁迫下的存活率降低，而35S::KUP6过表达转基因植株的耐旱能力却得到了明显的增强(Shabala et al.,2007)；而KUP7基因的突变体幼苗在低钾胁迫下表现出叶片黄化的低钾敏感表型，其根部的钾离子含量显著下降，KUP7基因功能的缺失使拟南芥幼苗在低钾条件下对钾的吸收能力降低、木质部汁液中钾离子浓度降低(Min et al.,2016)。

烟草是一种耗钾量很大的作物，烟叶钾含量是衡量烟叶品质的的重要指标，目前，对于烟草中钾转运体基因的研究较少，烟草KUP的功能未知。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种烟草KUP7蛋白及其编码基因与应用。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

本发明首先提供一种钾转运蛋白，获自烟草，命名为KUP7蛋白，是如下(a)或(b)

(a)其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

(b)SEQ ID NO.1所示序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有与(a)同等功能的由(a)衍生的蛋白质。

本发明提供了编码所述烟草KUP7蛋白的基因，所述基因为如下1)或2)或3)的DNA分子：

1)编码区如SEQ ID NO.2所示的DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码与植物钾离子吸收和转运调控相关蛋白的DNA分子；

3)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码与植物钾离子吸收和转运调控相关蛋白的DNA分子。

经研究发现，所述KUP7基因在促进钾离子吸收和转运方面发挥明显作用。

进一步地，本发明所述KUP7基因由以下步骤制备得到：

设计PCR扩增引物，所述PCR扩增引物包括正向引物和反向引物：正向引物的核苷酸序列为：5’-ATGGTGAATGTGGGATTGGA-3’，所述的反向引物的核苷酸序列为5’-TCACACCATATATGTCATGC-3’；(2)提取烟草细胞总RNA，合成烟草细胞cDNA，以烟草细胞cDNA为模板进行KUP7基因的PCR扩增，得到目的片段，测序。

优选的，所述的PCR扩增的体系为20μL体系，包括Premix ExTaq 10μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，烟草细胞cDNA 1μL，ddH₂O 8μL。

优选的，所述的PCR扩增的反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s；55℃退火30s；72℃延伸2min；35个循环。

优选的，所述的目的片段在测序之前还包括，将所述目的片段导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中进行菌落PCR验证，验证为阳性克隆后进行测序。

优选的，所述菌落PCR验证使用的正向引物核苷酸序列为：正向引物的核苷酸序列为：5’-ATGGTGAATGTGGGATTGGA-3’，菌落PCR验证使用的反向引物的核苷酸序列为5’-TCACACCATATATGTCATGC-3’。

优选的，所述菌落PCR验证的体系为10μL，包括Premix ExTaq 5μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，ddH₂O 4μL。

本发明提供了含有上述编码烟草KUP7蛋白的基因的生物材料，所述生物材料为重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

所述重组表达载体可用现有的植物表达载体进行构建。所述重组表达载体例如可以是双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。使用KUP7基因构建重组表达载体时，可在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用KUP7基因构建重组表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。

携带有所述KUP7基因的重组表达载体可通过Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化到植物细胞或组织中。

本发明提供了上述烟草KUP7蛋白或其编码基因或含有该基因的生物材料在促进植物或微生物钾离子吸收和转运中的应用。

所述植物包括烟草、拟南芥。

所述微生物包括酵母。

例如，在本发明的具体实施方式中，将所述KUP7基因转入钾吸收缺陷型酵母突变株R5421后，表达所述KUP7基因的重组酵母重新具有了钾离子吸收和转运的功能；将烟草植株中所述KUP7基因进行超量表达后，可显著提高烟草植株的烟叶中钾离子的含量。

所述应用可选为，将前述烟草KUP7基因转入到烟草植株中，使KUP7基因超量表达以提高烟草植株的烟叶中钾离子的含量。

本发明提供了上述烟草KUP7蛋白或其编码基因或含有该基因的生物材料在制备转基因植物中的应用。

本发明提供了上述烟草KUP7蛋白或其编码基因或含有该基因的生物材料在植物育种中的应用。

所述育种的目的为促进或调节植物钾离子吸收和转运。

所述植物为烟草。

本发明的有益效果在于：本发明首次提供了分离自烟草的KUP7基因，所述KUP7基因核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示，其编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。经功能验证，本发明提供的KUP7基因转入钾吸收缺陷型酵母突变株R5421(记载于Maathuis F J Mand Sanders D 1996Mechanisms of potassium absorption by higher plantroots.Physiol.Plant.96,158–168.)KUP7基因的重组酵母重新具有了钾离子吸收和转运的功能。说明本发明提供的KUP7基因具有促进钾离子吸收和转运的功能。

附图说明

图1为本发明实施例2中酵母功能互补实验结果。其中，A为钾离子浓度为20uM的培养基上的生长情况，B为钾离子浓度为2mM的培养基上的生长情况；图中，1为转入KUP7基因的重组酵母，2为阴性对照(转入空载体)，3为阳性对照转入拟南芥KUP基因的酵母；从左到右依次为原液、10倍稀释液、100倍稀释液在培养基上的生长结果。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1KUP7基因的获得

取0.5g烟草新鲜叶片，采用Trizol法提取烟草细胞的总RNA，然后采用TaKaRa公司的cDNA合成试剂盒合成cDNA，进一步采用Primer5.0软件设计并经过人工优化得到引物，所述引物包括正向引物和反向引物，正向引物的核苷酸序列为：5’-ATGGTGAATGTGGGATTGGA-3’，反向引物的核苷酸序列为5’-TCACACCATATATGTCATGC-3’。以合成的cDNA为模板，进行PCR扩增。

PCR扩增体系为20μL体系，包括：Premix ExTaq 10μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，烟草细胞cDNA 1μL，ddH₂O 8μL。

PCR扩增反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸2min，35个循环。

PCR扩增完成后，使用DNA纯化试剂盒进行目的片段的纯化，将纯化后的目的片段与pMD19-T载体16℃连接12h得到连接产物，将所述得到的连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞得到转化后的大肠杆菌DH5α，将所述的转化后的大肠杆菌DH5α接种于涂有氨苄青霉素的LB平板上进行筛选培养得到阳性克隆。在得到阳性克隆后，采用菌落PCR的方法来验证阳性克隆，所述菌落PCR的正向引物为：5’-ATGGTGAATGTGGGATTGGA-3’，反向引物为5’-TCACACCATATATGTCATGC-3’；所述菌落PCR的体系为10μL，包括Premix ExTaq 5μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，ddH2O 4μL。然后从已验证的阳性克隆中随机选取3个独立的阳性克隆送到生物技术公司进行测序，本发明在测序后得到所述的KUP7基因的序列，如SEQ ID NO.2所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

实施例2KUP7基因在促进钾离子吸收和转运方面的作用

将连接有实施例1中所述的KUP7基因的T-载体与表达载体P416(p416酵母游离型穿梭表达载体,TEF组成型启动子，CYC1终止子，CEN6ARSH4复制起点,酵母中筛选标记为URA3，大肠杆菌中筛选标记为Amp。摘自Functional Expression of aω-3Fatty AcidDesaturase Gene from Glycine max in Saccharomyces cerevisiae)

分别进行双酶切(酶切位点为：Sma Ⅰ和Xho Ⅰ)，回收目的基因和表达载体P416，然后用连接酶连接，将连接后的重组酵母表达载体转入大肠杆菌DH5α的感受态细胞，对转化后的大肠杆菌单菌落进行PCR扩增、酶切来验证是否构建成功，将构建成功的重组酵母表达载体转入到R5421中。

具体步骤如下：用接菌环取保存的R5421酵母菌划线于固体培养基YPDA上，28℃培养12h；挑取R5421酵母单菌落于Ep管中，加1mL YPDA培养液涡旋；将上述菌液全部转入装有YPDA培养液的三角瓶中，于30℃，250rpm摇菌至OD600＝1.2；按1:10转接，摇至OD600＝1.0～1.2；于28℃，1000rpm离心5min集菌，用1/2体积的灭菌超纯水重悬；于28℃，1000rpm离心5min集菌，吸干上清；依次加入下列成分(每5mL原始菌液)：

涡旋1min，使转化体系完全混匀；放于30℃的水浴中温育30min；再放入42℃的水浴中热击28min，冰上冷却10min；7000rpm离心15s，弃上清；用1mL的无菌水轻轻重悬沉淀；取200μL转化混合物铺于营养缺陷型平板上；30℃培养3天。提取酵母质粒并鉴定结果。

挑取鉴定过的酵母单菌落在营养缺陷平板上划线，30℃培养3天；用牙签在营养缺陷平板上蘸取少量菌体于2mL营养缺陷液中培养12h；8000rpm离心1min收集菌体；弃上清，用1mL双蒸水悬浮菌体，8000rpm离心1min；

弃上清，用1mL双蒸水重悬浮，调OD600为0.8；将未稀释菌液及分别稀释10倍、100倍后的菌液，分别取5uL在钾离子浓度为20uM，2mM的培养基上，30℃培养3天观察结果。

实验结果如图1所示，在钾离子浓度为20uM、2mM培养基(AP培养基(1L)：磷酸546μL，L-精氨酸1.742g，1000×维生素溶液1mL，1000×微量元素溶液1mL，尿嘧啶0.77g，100×Ura 10mL，葡萄糖20g，琼脂粉15g)上，阴性对照组酵母菌(转入P416空载体)几乎不生长，转入烟草KUP7基因的重组酵母和阳性对照组(转入拟南芥KUP基因)的重组酵母菌均可以生长。随着稀释倍数的增加，转入烟草KUP7基因的重组酵母和阳性对照组的重组酵母菌仍然可以生长。

上述结果证明，本发明所述的KUP7基因具有钾吸收和转运功能。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 贵州省烟草科学研究院

<120> 一种烟草KUP7蛋白及其编码基因与应用

<130> KHP171117855.6

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 854

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Met Val Asn Val Gly Leu Glu Lys Asp Arg Glu Asn Asn Gly Gly Leu

1 5 10 15

Ala Ser Met Asp Ser Ile Glu Ser Arg Trp Val Phe Gln Asp Glu Tyr

20 25 30

Asp Ser Asp Ile Asn Ser Val Asp His Asp Thr Val Asn Gly Asp Asp

35 40 45

Gly Ser Thr Pro Arg Asn Val Leu Asp Leu Asp Ser Glu Asp Glu Asp

50 55 60

Asp Asn Ala Val Arg Lys Leu Ile Arg Thr Gly Pro Arg Ile Asp Ser

65 70 75 80

Phe Asp Val Glu Ala Leu Glu Val Pro Gly Ala Gln Lys Asn Asp Phe

85 90 95

Asp Asp Val Ser Ala Gly Arg Lys Ile Leu Leu Thr Phe Gln Thr Leu

100 105 110

Gly Val Val Phe Gly Asp Val Gly Thr Ser Pro Leu Tyr Thr Phe Ser

115 120 125

Val Met Phe Ser Lys Ala Pro Val Asn Gly Asn Glu Asp Val Leu Gly

130 135 140

Ala Leu Ser Leu Val Leu Tyr Thr Leu Ile Leu Ile Pro Leu Val Lys

145 150 155 160

Tyr Val Leu Ile Val Leu Trp Ala Asn Asp Asp Gly Glu Gly Gly Thr

165 170 175

Phe Ala Leu Tyr Ser Leu Leu Cys Arg His Ala Lys Val Asn Leu Leu

180 185 190

Pro Asn Gln Leu Pro Ser Asp Ala Arg Ile Ser Gly Phe Arg Leu Lys

195 200 205

Val Pro Ser Pro Glu Leu Glu Arg Ser Leu Arg Ile Lys Glu Arg Leu

210 215 220

Glu Ala Ser Leu Thr Leu Lys Lys Leu Leu Leu Met Leu Val Leu Ala

225 230 235 240

Gly Thr Ala Met Val Ile Ala Asp Gly Val Val Thr Pro Ala Met Ser

245 250 255

Val Met Ser Ala Val Gly Gly Leu Arg Val Gly Val Ser Gly Ile Lys

260 265 270

Gln Asp Gln Val Val Met Ile Ser Val Ala Phe Leu Val Ile Leu Phe

275 280 285

Ser Val Gln Lys Tyr Gly Thr Ser Lys Val Gly Leu Phe Val Gly Pro

290 295 300

Ala Leu Phe Ile Trp Phe Cys Ser Leu Gly Gly Ile Gly Ile Tyr Asn

305 310 315 320

Leu Ile Asn Tyr Asp Ser Arg Val Trp Arg Ala Phe Asn Pro Val His

325 330 335

Ile Tyr Tyr Tyr Phe Lys Arg Asn Pro Thr Lys Ala Trp Tyr Ser Leu

340 345 350

Gly Gly Cys Leu Leu Cys Ala Thr Gly Ser Glu Ala Met Phe Ala Asp

355 360 365

Leu Cys Tyr Phe Ser Val Arg Ser Val Gln Leu Thr Phe Val Phe Leu

370 375 380

Val Leu Pro Cys Leu Leu Leu Gly Tyr Leu Gly Gln Ala Ala Tyr Leu

385 390 395 400

Met Glu Asn His Ala Asp Thr Thr Gln Ala Phe Phe Ser Ser Val Pro

405 410 415

Ser Gly Ala Phe Trp Pro Ile Phe Leu Ile Ala Asn Val Ala Ala Leu

420 425 430

Ile Ala Ser Arg Ala Met Thr Thr Ala Thr Phe Ser Cys Ile Lys Gln

435 440 445

Ser Thr Ala Leu Gly Cys Phe Pro Arg Leu Lys Ile Ile His Thr Ser

450 455 460

Arg Lys Phe Met Gly Gln Ile Tyr Ile Pro Val Met Asn Trp Phe Leu

465 470 475 480

Leu Ala Leu Ser Leu Val Met Val Cys Ser Ile Ser Ser Ile Tyr Glu

485 490 495

Ile Gly Asn Ala Tyr Gly Ile Ala Glu Leu Gly Val Met Met Met Thr

500 505 510

Thr Ile Leu Val Thr Ile Val Met Leu Leu Ile Trp Gln Ile Asn Ile

515 520 525

Ile Val Val Leu Ser Phe Val Val Ile Phe Leu Gly Leu Glu Leu Met

530 535 540

Phe Phe Ser Ser Val Leu Trp Ser Val Gly Asp Gly Ser Trp Ile Ile

545 550 555 560

Leu Val Phe Ala Val Val Leu Phe Phe Val Met Tyr Ile Trp Asn Tyr

565 570 575

Gly Ser Lys Leu Lys Tyr Glu Thr Glu Val Lys Gln Lys Met Ser Met

580 585 590

Asp Val Leu Arg Glu Leu Gly Pro Asn Leu Gly Thr Ile Arg Ala Pro

595 600 605

Gly Ile Gly Leu Leu Tyr Asn Glu Leu Ala Lys Gly Ile Pro Ala Ile

610 615 620

Phe Gly His Phe Leu Thr Thr Leu Pro Ala Val His Ser Met Ile Ile

625 630 635 640

Phe Val Cys Ile Lys Tyr Ile Pro Val Pro Val Val Pro Gln Asn Glu

645 650 655

Arg Phe Leu Phe Arg Arg Val Cys Pro Arg Ser Tyr His Ile Phe Arg

660 665 670

Cys Val Ala Arg Tyr Gly Tyr Lys Asp Val Arg Lys Glu Asn His Gln

675 680 685

Met Phe Glu Gln Leu Leu Ile Glu Ser Leu Glu Lys Phe Ile Arg Arg

690 695 700

Asp Ala Gln Glu Arg Ser Leu Glu Ser Asp Gly Asn Gly Glu Ser Asp

705 710 715 720

Ser Glu Glu Glu His Ala Phe Ser Arg Val Leu Val Ala Pro Asn Gly

725 730 735

Ser Val Tyr Ser Leu Gly Val Pro Leu Leu Ala Asp Phe Arg Asp Thr

740 745 750

Gly Lys Ala Val Met Glu Glu Ser Thr Ser Glu Glu Met Lys Pro Gly

755 760 765

Pro Ser Ser Glu Ser Leu Leu Ser Asp Ala Asp Gln Ser Phe Glu Lys

770 775 780

Glu Leu Ser Phe Leu Arg Lys Ala Lys Glu Ser Gly Val Val Tyr Leu

785 790 795 800

Leu Gly His Gly Asn Ile Arg Ala Arg Lys Ser Ser Trp Phe Ile Lys

805 810 815

Lys Leu Phe Ile Asn Tyr Phe Tyr Ala Phe Leu Arg Lys Asn Cys Arg

820 825 830

Arg Glu Ile Ala Ser Leu Ser Val Pro His Ser His Leu Met Gln Val

835 840 845

Gly Met Thr Tyr Met Val

850

<210> 2

<211> 2565

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atggtgaatg tgggattgga gaaggatcgg gagaataatg gcggattagc ctctatggat 60

tcgattgaat cgcggtgggt gtttcaggat gagtatgatt cggatattaa tagtgttgac 120

catgatactg tcaatggaga tgatggttcg acgccgcgca atgtcttgga tttggactct 180

gaggatgagg acgataatgc cgtgcgtaag ctgatccgta ctggccctcg cattgattcc 240

tttgatgttg aagctcttga agtccctggt gctcagaaga acgactttga tgatgtctca 300

gcaggtagga aaatcctatt gacctttcag actcttggag ttgtgtttgg tgatgtgggg 360

acgagtccct tatatacatt cagtgtgatg ttcagcaagg cccctgtcaa tggcaacgaa 420

gatgttcttg gtgcattatc cttggttttg tataccttaa tcctcattcc tttggttaaa 480

tatgttctta ttgttctctg ggccaatgat gatggtgaag gtggtacatt tgctttgtac 540

tcattgcttt gtaggcatgc aaaggttaat cttcttccaa accaacttcc atcagatgct 600

cgaatatcag gcttcagact gaaggtgcca tctccagaac ttgagaggtc tttgagaata 660

aaagaaagac ttgaagcatc attgacattg aaaaagcttc ttctgatgtt agttcttgct 720

ggtactgcta tggtgatagc tgatggagtc gttacacctg ctatgtcagt aatgtctgct 780

gttggtggtt taagagttgg agtttctggg attaagcaag atcaagttgt gatgatctca 840

gtggcatttc ttgtaattct gttcagtgta cagaaatatg ggacaagtaa agtggggctt 900

ttcgtgggtc ctgctttgtt tatatggttc tgttccctgg gtggaattgg catctacaac 960

ctcattaatt atgattccag ggtttggagg gcatttaatc cagttcatat atactattac 1020

tttaagcgca atcctacgaa ggcctggtac tcgcttggag gctgtcttct ttgtgcaaca 1080

ggttccgagg caatgtttgc tgatctttgt tatttttctg tgagatcagt ccagcttacc 1140

tttgtgttcc ttgtgctgcc atgccttctc ttgggttacc ttggtcaagc agcttatctt 1200

atggagaacc atgctgacac aacacaggct ttcttctctt ctgtgccaag tggagctttc 1260

tggcccatct tcttgattgc taatgtagct gcactgattg ccagcagggc aatgactaca 1320

gcaactttct cttgcattaa acaatccaca gccctaggct gcttccctcg ccttaaaatt 1380

attcacacgt ctcgaaagtt catgggtcag atatatatcc cagtgatgaa ctggtttctt 1440

ctcgcattgt ccttggtgat ggtctgttct atctcaagca tatatgagat tggaaatgct 1500

tatggaatag cggagcttgg tgtgatgatg atgacaacaa tactagtcac tattgttatg 1560

cttctgatat ggcagatcaa catcattgtt gtgcttagtt ttgtcgttat cttcttgggg 1620

ttggaattaa tgtttttctc atcagtttta tggagtgtgg gagatggaag ctggattatt 1680

ctggtttttg cagtagtctt gttttttgtt atgtacatat ggaattatgg aagcaagctg 1740

aagtatgaaa ctgaagtcaa gcaaaagatg tctatggacg tgctacgtga acttggcccc 1800

aaccttggaa caatcagagc tcctggaatt ggcttgcttt ataatgaatt ggcaaagggc 1860

ataccggcta tatttggaca tttcctcacc actcttcctg ctgttcattc aatgattatt 1920

tttgtttgta taaaatacat tcctgttcct gtagtacctc agaatgaaag gttcctgttt 1980

cggcgagtct gcccgagaag ctaccacata tttcgttgtg ttgccagata tggttacaag 2040

gatgttcgca aagaaaacca ccagatgttc gagcagctac tgattgaaag tcttgagaag 2100

ttcattcgcc gagatgctca ggagcggtca cttgaaagtg atggcaatgg tgaatcagat 2160

tctgaagaag agcatgcctt ttcaagggtc cttgttgctc ccaatgggag tgtttactca 2220

cttggtgttc ctctcttagc tgattttagg gacactggaa aggcagttat ggaggaaagc 2280

acttcagaag agatgaagcc tggcccttcc tctgagtcgc tcttgtccga tgctgatcag 2340

tcctttgaga aggagctctc attcttacgc aaggccaaag aatccggtgt ggtttacctc 2400

ctcggtcatg gaaatattag ggcaaggaaa agttcctggt tcatcaagaa gcttttcata 2460

aattacttct atgctttcct tagaaagaat tgcaggaggg aaattgccag tctgagtgtc 2520

ccgcactcgc atttaatgca ggttggcatg acatatatgg tgtga 2565

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

atggtgaatg tgggattgga 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tcacaccata tatgtcatgc 20

Claims (10)

1.一种烟草KUP7蛋白，其特征在于，是如下(a)或(b)：

(a)其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

(b)SEQ ID NO.1所示序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有与(a)同等功能的由(a)衍生的蛋白质。

2.编码权利要求1所述烟草KUP7蛋白的基因，其特征在于：所述基因为如下1)或2)或3)的DNA分子：

1)编码区如SEQ ID NO.2所示的DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码与植物钾离子吸收和转运调控相关蛋白的DNA分子；

3)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码与植物钾离子吸收和转运调控相关蛋白的DNA分子。

3.含有权利要求2所述基因的生物材料，所述生物材料为重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

4.权利要求1所述烟草KUP7蛋白或其编码基因或权利要求3所述的生物材料在促进植物或微生物钾离子吸收和转运中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述植物包括烟草、拟南芥。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述微生物包括酵母。

7.权利要求1所述烟草KUP7蛋白或其编码基因或权利要求3所述的生物材料在制备转基因植物中的应用。

8.权利要求1所述烟草KUP7蛋白或其编码基因或权利要求3所述的生物材料在植物育种中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述育种的目的为促进或调节植物钾离子吸收和转运。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述植物为烟草。