CN109432121B - 岩藻聚糖在制备抑制lox-1信号途径药物中的应用 - Google Patents

岩藻聚糖在制备抑制lox-1信号途径药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109432121B
CN109432121B CN201811398257.1A CN201811398257A CN109432121B CN 109432121 B CN109432121 B CN 109432121B CN 201811398257 A CN201811398257 A CN 201811398257A CN 109432121 B CN109432121 B CN 109432121B
Authority
CN
China
Prior art keywords
lox
product
fucoidan
use according
fucosan
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811398257.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109432121A (zh
Inventor
顾建新
汪澜
李�灿
许玲
李姝璇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fudan University
Original Assignee
Fudan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fudan University filed Critical Fudan University
Priority to CN201811398257.1A priority Critical patent/CN109432121B/zh
Publication of CN109432121A publication Critical patent/CN109432121A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109432121B publication Critical patent/CN109432121B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本申请提供了岩藻聚糖在抑制LOX‑1信号途径中的应用。具体而言，本申请涉及岩藻聚糖活性物质作为LOX‑1信号途径抑制剂或抑制LOX‑1信号途径的产品的应用，以及岩藻聚糖活性物质在制备LOX‑1信号途径抑制剂或用于预防、辅助治疗和/或治疗与LOX‑1过表达或功能异常相关的疾病、病症或体征的产品中的应用。本申请还涉及岩藻聚糖作为LOX‑1信号途径抑制剂的应用。

Description

岩藻聚糖在制备抑制LOX-1信号途径药物中的应用
技术领域
本发明属于生物技术和医学领域，尤其涉及与LOX-1信号途径相关的疾病和/ 或病症的预防及治疗的领域。具体涉及岩藻聚糖在抑制LOX-1信号途径中的作用，从而可应用于预防和/或治疗与LOX-1过表达或功能异常相关的疾病、病症或体征 (例如消化道肿瘤)中。
背景技术
消化道肿瘤
近年来，全球恶性肿瘤的发病率持续升高，其中消化道肿瘤发生率居高，例如食管癌在全球范围内是致死率居于第六的恶性肿瘤。约80％的食管癌发生在发展中国家，而在这些案例中，有60％发生在中国。根据中国国家癌症登记中心统计数据，我国2012年约有286700例新确诊的食管癌病人，并且有211000例死亡案例。据中国医学科学院肿瘤医院、国家癌症中心赫捷院士、全国肿瘤登记中心主任陈万青教授等，在国际顶级权威杂志《CA：ACancer Journal for Clinicians》上发表的2015年中国癌症统计数据显示，食管癌是发生率居于第三位，死亡率居于第四位的恶性肿瘤，严重危害我国人民大众的身体健康。
在过去一个多世纪里，经过医疗专家的不懈努力、手术技术和手术设备的不断进步以及各种辅助放化疗和生物免疫治疗等综合治疗方案的不断推陈出新，食管癌等各类消化道恶性肿瘤的治疗较过去得到了很大的提高，但其术后五年生存率依然不足30％。例如，由于食管癌早期症状不明显，病人就诊时病情往往已经发展到了晚期，这对于患者预后十分不利。化疗是食管癌治疗常用的方法，但是化疗药物对靶点的选择性差，在杀伤肿瘤细胞的同时对机体的正常细胞也会具有杀伤作用。而经过化疗放疗治疗以及手术切除的病人也常常在术后几年内表现出反流，吞咽和进食困难等症状，生活质量大幅度下降。而目前食管癌的治疗靶点只有HER2。
因此，本领域中亟待寻求新的治疗靶点，并基于此靶点寻找针对消化道癌(例如食管癌)疗效显著、副作用小的抗肿瘤药物和治疗方法。
LOX-1及LOX-1信号途径
LOX-1(凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1，Lectin-like oxidized low-density lipoprotein LDL receptor-1)最初由Sawamura等(Nature 386(6620):73-7)于1997年使用氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL)作为诱饵筛选单一牛主动脉内皮cDNA文库作为ox-LDL受体首次克隆到，在动脉粥样硬化中发挥重要作用。随后，研究者又发现其在巨噬细胞、平滑肌细胞和单核细胞中也有一定水平的表达。LOX-1在动脉粥样硬化、高血脂和糖尿病等疾病中表达上调。
研究表明，LOX-1是一种II型单次跨膜的糖蛋白，含有单个的C型凝集素样结构域，在其C端包含一个高度保守的凝集素样结构域，位于该区域的6个半胱氨酸残基具有配体结合、内化和吞噬功能；按结构来分类，它属于非经典的C型凝集素家族。然而，由于LOX-1能识别氧化低密度脂蛋白，从功能角度而言，它又被认为是一种清道夫受体(scavengerreceptor type E)，具有多配体，包括ox-LDL、晚期糖基化终末产物(AGEs)、激活的血小板、中性粒细胞、凋亡/老化细胞、C反应蛋白(CRP)和细菌等。
人的LOX-1含有273个氨基酸残基，含有四个潜在的糖基化位点，其相应的表达蛋白相对分子质量为42kDa左右。LOX-1的颈部含有一个半胱氨酸残基，在细胞表面以二聚化或多聚化形式发挥其生物功能。它在位于胞浆中的尾部有多个潜在的磷酸化位点，如Thr2，它们的磷酸化可能参与了LOX-1的所介导的细胞信号转导及其生物学功能。
尽管LOX-1胞内尾部缺失保守的信号基序，但它仍可以引发很多细胞效应，如配体内化、NF-κB激活、凋亡以及呼吸爆发、细胞因子的产生。在树突细胞中，在单核细胞中，ox-LDL能够激活MAPK(mitogen activated protein kinases)信号通路，从而增强其与血管内皮细胞的黏附功能。在单核细胞中，LOX-1通过PKC(Protein kinase C)活化抑制eNOS(Endothelial nitric oxide synthase)信号通路和eNOS依赖的 NO产生【Mechanismsunderlying adverse effects of HDL on eNOS-activating pathways in patientswith coronary artery disease.】。
LOX-1可以结合、内化、降解ox-LDL，但并不能识别天然的LDL或乙酰化的LDL。并且LOX-1与ox-LDL结合是特异性的，此过程可有效地被多聚肌苷酸 (polyinosinic acid)及卡拉胶(Carrageenan)所抑制。
因此，筛选LOX-1的新配体分子与抑制剂，可为以LOX-1为靶点的药物开发提供理论和药学基础。
岩藻聚糖
岩藻聚糖(Fucoidan，也称为褐藻多糖、岩藻聚糖、岩藻聚糖硫酸酯、褐藻多糖硫酸酯、褐藻糖胶等)，是从天然植物褐藻(如海带、裙带菜等，例如泡叶藻 (Ascophyllumnodosum)、海带(Laminaria japonica)、厚叶切氏海带(Kjellmaniella crassifolia)以及墨角藻(Fucus vesiculosus)等来源)中提取的复杂多糖，主要由L-岩藻糖和硫酸基团组成，其可包含来源不同比例不同的糖醛酸和其他单糖组分，相对分子量可为几万～几十万。
岩藻聚糖的化学组成和结构决定了其具有多种生物活性，例如：抗凝血、抗病毒、抗氧化、抗炎抗辐射活性，提高免疫力，抑制血管平滑肌细胞增生，以及抗肿瘤作用等。许多研究表明岩藻聚糖对多种肿瘤细胞的生长增殖及迁移侵袭都有抑制作用，包括乳腺癌细胞和肺癌细胞等。
然而，本领域中从未针对岩藻聚糖与LOX-1的相互关系进行过任何研究，也并未揭示过其在消化道肿瘤中的效果。因此，本领域中亟待寻求和开发出岩藻聚糖的新功能和新效果。
综上所述，本领域中对于LOX-1异常表达对消化道癌症(尤其是食管癌)发生发展的影响以及基于岩藻聚糖与LOX-1相关性防治消化道癌症的策略并无相关研究和报道。本领域亟待开发出针对癌症预防和治疗的新靶点和新产品。
发明内容
本申请的目的之一是提供预防及治疗消化道癌症(如食管癌)的新靶标、新方法和新药物。
在本公开的一个方面中，提供了岩藻聚糖活性物质作为LOX-1信号途径抑制剂或抑制LOX-1信号途径的产品的应用。
在本公开的一个方面中，提供了岩藻聚糖活性物质在制备LOX-1信号途径抑制剂或用于预防、辅助治疗和/或治疗与LOX-1过表达或功能异常相关的疾病、病症或体征的产品中的应用。
在本公开的一些实施方式中，所述岩藻聚糖活性物质来源于：海带、裙带菜等褐藻植物，如泡叶藻(Ascophyllum nodosum)、海带(Laminaria japonica)、厚叶切氏海带(Kjellmaniella crassifolia)以及墨角藻(Fucus vesiculosus)来源的岩藻聚糖，优选墨角藻(Fucus vesiculosus)来源的岩藻聚糖。
在一些实施方式中，所述岩藻聚糖活性物质是指褐藻多糖、岩藻聚糖、岩藻聚糖硫酸酯、褐藻多糖硫酸酯、褐藻糖胶。
在本公开的一些实施方式中，所述抑制剂用于预防、辅助治疗和/或治疗选自下组的疾病、病症或体征：消化道肿瘤，例如食管癌、胃癌、胆管癌、肠癌。
在本公开的一些实施方式中，所述抑制剂或产品适用对象为哺乳动物，包括灵长类动物、啮齿类动物、家畜、宠物等，例如人、大鼠、小鼠、犬、马、牛、羊、兔或猴。
在本公开的一些实施方式中，所述抑制剂或产品为固态(如颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片)或液态(如口服液、溶液剂或糖浆剂)形式。
在本公开的一些实施方式中，所述抑制剂或产品的形式适于口服、胃肠外(如静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、真皮内或皮下给药)、皮下、腹膜内、肺内、鼻内、瘤内、局部给药。
在本公开的一些实施方式中，所述产品选自：药物、保健品、试剂盒、医疗设备、或它们的组合。
在本公开的一些实施方式中，所述产品还包含抑制LOX-1途径的其他物质。
在本公开的一些实施方式中，所述其他物质为例如：与LOX-1直接结合的抑制剂、阻断LOX-1与其受体或配体结合的抑制剂、降低LOX-1mRNA表达水平的抑制剂、降低LOX-1蛋白水平的抑制剂、促进LOX-1蛋白降解的抑制剂、用于敲除或敲减LOX-1表达的物质，例如能够下调LOX-1基因mRNA和蛋白表达水平的相关启动子元件、重组质粒、表达载体和相关抗体；
在本公开的一些实施方式中，所述其他物质为例如：抗LOX-1抗体(优选单克隆抗体)、抗LOX-1受体的抗体(优选单克隆抗体)、针对LOX-1的小干扰RNA(例如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的小干扰RNA))、针对LOX-1的反义寡核苷酸、靶向LOX-1mRNA的微小RNA。
在本公开的一些实施方式中，所述产品还包含其他抗癌活性物质，例如DNA 损伤类化疗药、多靶向酪氨酸激酶抑制剂、细胞增殖抑制剂、血管增生抑制剂、烷化剂、抗代谢物质、抗肿瘤抗生素、植物类抗癌物质、激素或免疫抑制剂。
在本公开的另一方面中，提供了一种用于抗癌的药物组合物、保健品组合物或辅助剂，其包含：
(a)岩藻聚糖活性物质；
(b)药学上或保健品学可接受的载剂；
(c)可任选的，其他LOX-1信号途径抑制剂；
(d)可任选的，其他抗癌活性物质。
在一些实施方式中，所述岩藻聚糖活性物质来源于：海带、裙带菜等褐藻植物，如泡叶藻(Ascophyllum nodosum)、海带(Laminaria japonica)、厚叶切氏海带(Kjellmaniella crassifolia)以及墨角藻(Fucus vesiculosus)来源的岩藻聚糖，优选墨角藻(Fucus vesiculosus)来源的岩藻聚糖。
在一些实施方式中，所述岩藻聚糖活性物质是指褐藻多糖、岩藻聚糖、岩藻聚糖硫酸酯、褐藻多糖硫酸酯、褐藻糖胶。
在一些实施方式中，所述药物组合物、保健品组合物或辅助剂用于预防、辅助治疗和/或治疗选自下组的疾病、病症或体征：消化道肿瘤，例如食管癌、胃癌、胆管癌、肠癌。
在一些实施方式中，所述其他LOX-1信号途径抑制剂选自：与LOX-1直接结合的抑制剂、阻断LOX-1与其受体或配体结合的抑制剂、降低LOX-1mRNA表达水平的抑制剂、降低LOX-1蛋白水平的抑制剂、促进LOX-1蛋白降解的抑制剂、用于敲除或敲减LOX-1表达的物质，例如能够下调LOX-1基因mRNA和蛋白表达水平的相关启动子元件、重组质粒、表达载体和相关抗体
在一些实施方式中，所述其他LOX-1信号途径抑制剂选自：抗LOX-1抗体(优选单克隆抗体)、抗LOX-1受体的抗体(优选单克隆抗体)、针对LOX-1的小干扰 RNA(例如SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:2所示的小干扰RNA))、针对LOX-1的反义寡核苷酸、靶向LOX-1mRNA的微小RNA。
在一些实施方式中，所述其他抗癌活性物质选自：DNA损伤类化疗药、多靶向酪氨酸激酶抑制剂、细胞增殖抑制剂、血管增生抑制剂、烷化剂、抗代谢物质、抗肿瘤抗生素、植物类抗癌物质、激素或免疫抑制剂；和/或，
在本申请的另一方面中，还提供了一种预防、辅助治疗和/或治疗对象中与 LOX-1过表达或功能异常相关的疾病、病症或体征的方法，所述方法包括：给予所述对象如本文所述的岩藻聚糖活性物质以及可任选的其他LOX-1信号途径抑制剂和/或抗癌活性物质。
本领域的技术人员可对前述的技术方案和技术特征进行任意组合而不脱离本发明的发明构思和保护范围。本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
附图说明
下面结合附图对本发明作进一步说明。应理解，附图仅为了图示说明本发明的实施方案和/或效果，而不是为了局限本发明的范围。
图1：LOX-1在不同肿瘤中的差异表达。
图2：LOX-1的下调显著抑制食管癌细胞生长。
图3：岩藻聚糖与LOX-1的相关性。
A：表面等离子共振(SPR)结果显示岩藻聚糖可以与LOX-1直接结合；
B：LOX-1与配体ox-LDL的结合被岩藻聚糖抑制；
C：岩藻聚糖降低食管癌细胞中LOX-1蛋白含量；
D、E：岩藻聚糖不影响食管癌细胞中LOX-1mRNA的表达水平；
F、G：用CHX抑制食管癌细胞蛋白合成后，岩藻聚糖促进LOX-1蛋白的降解。
图4：岩藻聚糖通过LOX-1抑制食管癌细胞的增殖。
A：岩藻聚糖抑制食管癌细胞TE-1的增殖；
B：岩藻聚糖抑制食管癌细胞KYSE150的增殖；
C：过表达LOX-1部分降低岩藻聚糖对食管癌细胞增殖的抑制作用。
其中：“Vector”表示用空载体pcDNA3.1转染的KYSE150或TE-1细胞；“Vector+F”表示用空载体pcDNA3.1转染并用岩藻聚糖处理的KYSE150或TE-1细胞；“LOX-1”表示用pcDNA3.1-LOX-1质粒转染的KYSE150或TE-1细胞；“LOX-1+F”表示用pcDNA3.1-LOX-1质粒转染并用岩藻聚糖处理的KYSE150或 TE-1细胞；**表示p<0.01。
图5：岩藻聚糖对4-NQO诱导的小鼠食管癌的治疗作用。
A：小鼠不经4-NQO诱导、经4-NQO诱导且注射生理盐水(NS)或岩藻聚糖(F)治疗后的形态变化及食管部位肿瘤灶的形成情况；
B：小鼠经4-NQO诱导且注射生理盐水(NS)或岩藻聚糖(F)治疗后的体重变化情况；
C：小鼠经4-NQO诱导且注射生理盐水(NS)或岩藻聚糖(F)治疗后的存活情况。
图中：“NS”表示模型对照组；“Fu”表示模型岩藻聚糖组；*表示p<0.05， **表示p<0.01。
图6：岩藻聚糖对4-NQO诱导的小鼠食管癌的预防作用。小鼠在4-NQO诱导期间注射生理盐水或岩藻聚糖后的形态变化情况以及食管组织HE染色切片照片。
具体实施方式
本申请的发明人经过长期而深入的研究，发现岩藻聚糖可抑制、拮抗和/或阻断LOX-1信号通路，从而具有预防和/或治疗与LOX-1信号通路异常相关的疾病和/或病症的作用。例如，通过抑制LOX-1信号通路，岩藻聚糖在消化道癌症中可明显抑制癌细胞生长和增殖，改善或消除癌症症状，延长存活时间，从而达到预防和治疗癌症的效果。据此，发明人提出本申请。
本文中提供的所有数值范围旨在清楚地包括落在范围端点之间的所有数值及它们之间的数值范围。可对本发明提到的特征或实施例提到的特征进行组合。本说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
如本文所用，“含有“、“具有“或“包括“包括了“包含“、“主要由……构成“、“基本上由……构成“、和“由……构成“；“主要由……构成“、“基本上由……构成“和“由……构成“属于“含有“、“具有“或“包括“的下位概念。
LOX-1信号途径及其抑制剂
如本文所用，术语“LOX-1蛋白或多肽”、“LOX-1基因编码的蛋白质或多肽”或“凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1”可互换使用，均是指由LOX-1基因编码的蛋白质或多肽、它们的保守性变异多肽、或其同源蛋白或多肽、或其活性片段(例如LOX-1结合结构域)。LOX-1蛋白在本领域中是已知的一个蛋白家族，例如人 LOX-1是含有273个氨基酸残基的蛋白质(如SEQ ID NO:1所示)。
如本文所用，术语“LOX-1信号途径”或“LOX-1信号通路”是指ox-LDL 经由LOX-1受体向细胞内传递信号的途径。
如本文所用，术语LOX-1信号途径的“抑制剂”和/或“活性物质”以其最广义使用，其包括拮抗剂、阻断剂等，是对LOX-1信号途径起到负调节作用的物质。术语“拮抗剂”是指通过空间位阻、构型改变或其它生物化学机制以干扰一种分子与另一种分子的结合或干扰另一种细胞对一种细胞的刺激的特性的物质(如分子、化合物或药物)，例如通过不同受体产生相反效应的功能性拮抗或生理性拮抗、通过与激动剂竞争性结合、与受体相关的中间体结合等方式。术语“阻断剂”是指部分或全部阻止或抑制某一作用的物质。术语“拮抗剂”和“阻断剂”不局限于具体的作用机制，而是泛泛地指本文所述的功能特性。
本申请中LOX-1信号途径的抑制剂可包括，但不限于：天然提取物，例如岩藻聚糖；抗LOX-1、抗ox-LDL或抗LOX-1与ox-LDL的复合物的抗体；LOX-1 基因转录、翻译和/或表达的抑制剂(如siRNA、反义寡核苷酸)；LOX-1结合和/或功能抑制剂等(如与LOX-1竞争性结合ox-LDL的结合抑制剂)；其他对LOX-1信号途径成员具有抑制活性的化学物质。
在一些实施方式中，LOX-1信号途径的抑制剂可为如下文所述的岩藻聚糖。
在一些实施方式中，LOX-1信号途径的抑制剂可为抗体或其活性片段，例如单克隆抗体、多克隆抗体、人源化抗体、人抗体、嵌合抗体、抗体活性片段(如Fv、 Fab、Fab'、F(ab')2)。所述抗体可通过本领域中已知的方法获得，例如可参考Harlow 和Lane，《抗体：实验室手册》(Antibodies:A Laboratory Manual)，冷泉港实验室(Cold Spring HarborLaboratory)(1988))等。优选采用单克隆抗体，其制备可采用最先由 Kohler等(Nature，256：495(1975))描述的杂交瘤方法或重组DNA法完成。
本申请的抑制剂能明显发挥抑制消化道癌症细胞的生长和增殖、改善或消除癌症症状、延长给药对象存活时间，从而达到预防和治疗癌症的效果。
岩藻聚糖活性物质
岩藻聚糖是一种水溶性的多糖，本领域中主要采用水提法、酸提法、CaCl2、超声波提取法和超滤膜提取法等方法从褐藻等中提取。
在本公开中可采用各种来源的岩藻聚糖。在一些实施方式中，可从天然植物褐藻，如海带、裙带菜等中提取岩藻聚糖，例如提取自泡叶藻(Ascophyllum nodosum)、海带(Laminaria japonica)、厚叶切氏海带(Kjellmaniella crassifolia)以及墨角藻(Fucusvesiculosus)等。也可对岩藻聚糖进行进一步的加工和处理，以提高其效用。例如可将岩藻聚糖部分水解(例如通过酶法和化学法)，以使其转化成低分子质量岩藻聚糖 (LMWF)，从而增加其溶解性。如本文所用，除非另有说明，术语“岩藻聚糖”和“岩藻聚糖活性物质”通常可互换适用，其包含了如上所述的岩藻聚糖本身及其衍生物或前体。
可用于本申请中的岩藻聚糖包括但不限于：分子量为20,000～200,000的岩藻聚糖。例如，可采用Sigma公司市售供应的F5631系列产品，其提取自墨角藻(Fucusvesiculosus)。
研究表明岩藻聚糖可以食用，没有毒害作用。例如，多篇研究论文显示岩藻聚糖对于小鼠等试验动物甚至于人志愿者(例如每天口服3克75％的岩藻聚糖，持续12d)没有表现出任何副作用和毒性现象。这为将其用作保健品、药品活性成分提供更大的便利和优势。
因此，本文提供了通过岩藻聚糖抑制LOX-1的蛋白表达，抑制肿瘤细胞的增殖生长，并抑制食管肿瘤的发生和发展，在预防和/或治疗癌症(尤其是消化道癌症，如食管癌)中具有良好的应用前景。岩藻聚糖作为天然提取的高分子碳水化合物，与传统抗肿瘤药物相比来源更广、毒副更低，并且已证实具有良好的抗肿瘤的效果，这为临床肿瘤预防、治疗和辅助治疗提供一种更安全有效的新型活性物质。
包含岩藻聚糖的产品
本文中还提供了一种产品，其中含有有效量的LOX-1信号途径抑制剂岩藻聚糖作为活性物质或主要活性物质之一。根据本文产品的用途和形式的不同，产品可包括药物、保健品、试剂盒、医疗设备、或它们的组合等。
在一些实施方式中，产品可用于预防、辅助治疗和/或治疗与LOX-1过表达或功能异常相关的疾病、病症或体征。例如与LOX-1过表达或功能异常相关的癌症，尤其是消化道癌症，如食管癌、胃癌、肠癌。
如本文所用，术语“药学上/保健品学可接受的“成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即有合理的效益/风险比的物质。如本文所用，术语“有效量“是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体“指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在《雷明顿药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。
本申请的产品可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇等载剂。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、润湿剂或乳化剂、矫味剂、pH缓冲物质等。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地，pH约为 6-8。
如本文所用，术语“单位剂型“是指为了服用方便，将产品制备成单次服用所需的剂型，包括但不限于各种固体剂(如片剂)、液体剂、胶囊剂、缓释剂。
在一些实施方式中，产品为单位剂型或多剂型，且其中活性物质的含量为 0.01～1000mg/剂，例如0.1～500mg/剂，0.5～200mg/剂，1.0～100mg/剂。在一些实施方式中，每天施用1～6剂本文所述的产品，如施用1～3剂。
应理解，所用活性物质(岩藻聚糖)的有效剂量可随待施用或治疗的对象的情况而变化。具体情况根据对象的个体情况(例如对象体重、年龄、身体状况、所需达到的效果)来决定，这在熟练专业人员(如医师)可以判断的范围内。
本文所述的产品可以为固态(如颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片)或液态(如口服液)或其它合适的形状。给予途径可采用本领域常规的方式，例如口服、胃肠外(如静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、真皮内或皮下给药)、皮下、腹膜内、肺内、鼻内、瘤内、局部给予。
本文所述的产品除了岩藻聚糖活性物质，还可包含其他的LOX-1信号通路抑制剂，例如与LOX-1直接结合的抑制剂、阻断LOX-1与其受体或配体结合的抑制剂、降低LOX-1mRNA表达水平的抑制剂、降低LOX-1蛋白水平的抑制剂、促进 LOX-1蛋白降解的抑制剂、用于敲除或敲减LOX-1表达的物质，例如能够下调 LOX-1基因mRNA和蛋白表达水平的相关启动子元件、重组质粒、表达载体和相关抗体。
可用于本文的其他LOX-1信号通路抑制剂可为例如：抗LOX-1抗体(优选单克隆抗体)、抗LOX-1受体的抗体(优选单克隆抗体)、针对LOX-1的小干扰RNA(例如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的小干扰RNA))、针对LOX-1的反义寡核苷酸、靶向LOX-1mRNA的微小RNA。
例如，可先使用针对LOX-1的小干扰RNA(例如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO: 2所示的小干扰RNA)，再使用岩藻聚糖对LOX-1信号通路进行进一步抑制。或者，也可以先用岩藻聚糖对LOX-1通路进行抑制，以预防和/或减弱与LOX-1通路相关的疾病和/或病症，然后需要时，再采用其他LOX-1信号通路抑制剂进行进一步预防和/或治疗。
此外，本文所述的产品在作为药物或药物组合物时还可含有用于改善和治疗癌症的其他活性物质，例如DNA损伤类化疗药、多靶向酪氨酸激酶抑制剂、细胞增殖抑制剂、血管增生抑制剂、烷化剂、抗代谢物质、抗肿瘤抗生素、植物类抗癌物质、激素或免疫抑制剂等。
本文所述的LOX-1信号途径抑制剂相互间可以联合应用，还可以与其它药物和治疗手段联合，用于癌症的预防、辅助治疗和/或治疗。
实施例
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。本领域技术人员可对本发明做出适当的修改、变动，这些修改和变动都在本发明的范围之内。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，可采用本领域中的常规方法，例如参考《分子克隆实验指南》(第三版，纽约，冷泉港实验室出版社，New York：Cold SpringHarbor Laboratory Press，1989)或按照供应商所建议的条件。DNA的测序方法为本领域常规的方法，也可由商业公司提供测试。
除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1.LOX-1在不同肿瘤中的差异表达研究
为了探究LOX-1在不同肿瘤中的差异表达，我们通过Firebrowse (http://firebrowse.org/)分析了TCGA数据库中LOX-1mRNA在不同类型肿瘤中癌和癌旁的表达谱。总共分析了28种癌症类型的癌和癌旁组织中LOX-1表达变化，这些癌症类型包括：BLCA，膀胱尿管上皮癌；BRCA，乳腺浸润癌；CESC，宫颈鳞状细胞癌和子宫颈腺癌；CHOL，胆管癌；COAD，结肠腺癌；COADREAD，结直肠腺癌；ESCA，食管癌；GBM，多形性胶质母细胞瘤；GBMLGG，胶质瘤； HNSC，头颈部鳞状细胞癌；KICH，肾嗜铬细胞癌；KIPAN，泛肾队列(KICH+KIRC +KIRP)；KIRC，肾透明细胞癌；KIRP，肾乳头状细胞癌；LIHC，肝细胞癌；LUAD，肺腺癌；LUSC，肺鳞状细胞癌；PAAD，胰腺癌；PCPG，嗜铬细胞瘤和副神经节瘤；PRAD，前列腺腺癌；READ，直肠腺癌；SARC，肉瘤；SKCM，皮肤黑色素瘤；STAD，胃腺癌；STES，胃和食道癌；THCA，甲状腺癌；THYM，胸腺瘤； UCEC，子宫内膜癌。
结果
如图1所示，相比于癌旁组织，LOX-1mRNA在所有测试消化道肿瘤(包括 CHOL胆管癌、COAD结肠腺癌、COADREAD结直肠腺癌、ESCA食管癌、READ 直肠腺癌、STAD胃腺癌和STES胃和食道癌)中的表达均显著上调，其中在ESCA 食管癌中上调程度最大(癌/癌旁的变化倍数上调达9倍以上)。
以上结果提示：LOX-1在消化道肿瘤，尤其是食管癌发生发展中发挥着重要的作用，抑制LOX-1的表达及功能可能用于消化道肿瘤，尤其是食管癌的防治。
实施例2.抑制LOX-1表达在食管癌中可抑制食管癌细胞生长和增殖
为了检测下调LOX-1的表达是否会抑制食管癌细胞的生长，我们针对LOX-1 mRNA设计了两条siRNA，并通过CCK8检测siRNA处理后食管癌细胞的生长与增殖。
食管癌细胞的培养
食管癌细胞系TE-1和KYSE150均购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基在5％CO2、95％潮湿空气的CO2培养箱里培养，隔天换液，2～3天传代一次。
siRNA由上海吉玛制药技术有限公司合成，序列如下：
si1：5’-CUCGGAAGCUGAAUGAGAA-3’(SEQ ID NO:1)
si2:5’-GAAUUUGAAGGCUCUGGAA-3’(SEQ ID NO:2)
siNC：5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3’(SEQ ID NO:3)
其中，si1和si2为针对LOX-1的小干扰RNA，而siNC为对照siRNA。
细胞处理和检测
转染试剂Lipo3000购自Invitrogen公司，转染方法参照该公司提供的说明书操作，用lipo3000转染siNC或si1或si2至TE-1或KYSE150细胞48小时后作后续处理。
取对数生长期细胞接种于96孔培养板，1×103个细胞/孔，待细胞贴壁后，0 小时组换成含CCK8(购自碧云天生物技术)的培养基，37℃培养4小时，采用通用酶标仪(Universal Microplate Reader)读取波长为450nm波长的吸光度值。24小时组、48小时组、72小时后或96小时后，以同样的操作测量吸光度值。
实验结果与分析
如图2所示，针对LOX-1的si1和si2均显著抑制食管癌细胞TE-1、KYSE150 的增殖。
该结果提示LOX-1的抑制剂可抑制食管癌细胞增殖，从而可用于食管癌的防治。
实施例3.岩藻聚糖与LOX-1直接相互作用并促进LOX-1的降解
1.表面等离子共振
为了探究岩藻聚糖是否可以与LOX-1直接结合，我们利用ProteOnTMXPR36蛋白互作芯片系统(Bio-rad公司)进行检测。
人重组LOX-1蛋白购自Sino Biological公司(货号10585-H07H)，ox-LDL蛋白购自Invitrogen公司(货号L34357)，岩藻聚糖购自sigma公司(货号F5631-1G)。将人重组LOX-1蛋白通过氨基偶联的方法固定在ProteOnTM GLC芯片(Bio-rad公司) 上，对于相互作用检测，将岩藻聚糖以10nM、28.8nM、83.2nM、240.2nM、693.1nM、 2000nM的浓度梯度流经芯片表面。
对于竞争性抑制实验，500nM ox-LDL和不同浓度岩藻聚糖混合均匀后注射入上述固定了人重组LOX-1蛋白的芯片。所有的过程都在HBS-EP缓冲液中进行 (0.15M NaCl、0.01M HEPES、3mM EDTA和0.005％吐温20，pH 7.4)。
亲和力常数KD值由langmuir结合模型计算。
实验结果与分析
如图3A所示，岩藻聚糖可以与LOX-1直接结合，亲和力常数KD＝2.32×10-8M。并且如图3B所示，LOX-1与配体ox-LDL的结合可被岩藻聚糖抑制。
2.岩藻聚糖促进LOX-1蛋白含量的下降，但并不影响LOX-1mRNA含量
食管癌细胞的培养
食管癌细胞系TE-1和KYSE150均购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基在5％CO2、95％潮湿空气的CO2培养箱里培养，隔天换液，2～3天传代一次。
细胞处理及检测
岩藻聚糖以200μg/ml浓度处理细胞3小时或6小时后收获细胞。
细胞总蛋白提取
将细胞用1ml PBS(pH＝7.4)冲洗三次，再加入适量SDS细胞裂解液，用细胞刮刀刮下细胞，冰上裂解45分钟后收集细胞裂解液于1.5ml Eppendorf管中，加入适量5x还原型上样缓冲液，100℃煮沸10分钟，4℃12000rpm离心5分钟后取上清。蛋白定量，蛋白质印迹法(参考《分子克隆》)检测蛋白表达水平。
细胞RNA抽提、逆转录及实时PCR检测
使用Trizol试剂(Invitrogen公司)按照Invitrogen公司RNA抽提方法进行操作。
使用RNA PCR试剂盒(AMV)Ver.3.0(Takara Biotechnology，中国大连)，按照Takara公司该试剂盒说明书进行操作。
使用ABI Stepone Plus实时荧光定量PCR扩增仪，按Takara公司SYBR Premix ExTaqⅡ试剂盒说明书进行操作。
引物序列：
人GAPDH
正向引物：GTCAAGGCTGAGAACGGGAA(SEQ ID NO:4)
反向引物：AAATGAGCCCCAGCCTTCTC(SEQ ID NO:5)
人LOX-1
正向引物：CCGGCAACAAGCAGAAGAAG(SEQ ID NO:6)
反向引物：ATCCAGTCTTGCGGACAAGG(SEQ ID NO:7)
实验结果与分析
如图3C所示，岩藻聚糖处理食管癌细胞3小时或6小时后，LOX-1蛋白水平下降。而LOX-1mRNA水平并没有下降(图3的D和E)。
3.岩藻聚糖促进LOX-1蛋白的降解
既然岩藻聚糖并不引起LOX-1转录本水平的下调，我们推测岩藻聚糖可能通过影响蛋白稳定性，促进LOX-1蛋白的降解。
食管癌细胞的培养
食管癌细胞系TE-1和KYSE150均购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基在5％CO2、95％潮湿空气的CO2培养箱里培养，隔天换液，2～3天传代一次。
细胞处理及检测
我们利用放线菌酮(CHX，购自sigma公司)阻断细胞蛋白合成后观察LOX-1 蛋白降解情况。放线菌酮(50μg/ml)单独处理或者放线菌酮(50μg/ml)联合岩藻聚糖 (200μg/ml)处理细胞1h、2h、3h、4h、5h、6h后收获细胞。
细胞总蛋白提取
将细胞用1ml PBS(pH＝7.4)冲洗三次，再加入适量SDS细胞裂解液，用细胞刮刀刮下细胞，冰上裂解45分钟后收集细胞裂解液于1.5ml Eppendorf管中，加入适量5x还原型上样缓冲液，100℃煮沸10分钟，4℃12000rpm离心5分钟后取上清。蛋白定量，蛋白质印迹法(参考《分子克隆》)检测蛋白表达水平。
实验结果与分析
如图3中F和G显示，在CHX阻断细胞蛋白合成之后，岩藻聚糖促进LOX-1 蛋白的降解。
以上试验1-3的结果提示，岩藻聚糖(F)可以与LOX-1直接结合并竞争性抑制 LOX-1与其配体的结合，并且在蛋白质水平上促进LOX-1的降解。
实施例4.岩藻聚糖通过促进LOX-1的降解抑制食管癌细胞的增殖
为了检测岩藻聚糖是否具有抑制食管癌细胞生长增殖的作用及是否通过 LOX-1发挥作用，我们通过CCK8检测岩藻聚糖对食管癌细胞增殖的影响，并检测调控LOX-1的表达之后是否会影响岩藻聚糖对食管癌细胞的杀伤作用。
食管癌细胞的培养
食管癌细胞系TE-1和KYSE150均购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基在5％CO2、95％潮湿空气的CO2培养箱里培养，隔天换液，2～3天传代。
细胞处理和检测
取对数生长期细胞接种于96孔培养板，1×103个细胞/孔，待细胞贴壁后，加入不同剂量的岩藻聚糖(购自Sigma公司，货号：F5631-1G)(0、50、100、200、500 μg/ml)处理24小时、48小时或72小时后，换成含CCK8(购自碧云天生物技术)的培养基，37℃培养4小时，采用通用酶标仪(Universal Microplate Reader)读取波长为450nm波长的吸光度值。
实验结果与分析
如图4中A图和B图所示，岩藻聚糖呈浓度和时间依赖性抑制食管癌细胞 KYSE150、TE-1的增殖。
2.过表达LOX-1抑制岩藻聚糖引起的食管癌细胞的死亡
pcDNA3.1-LOX-1过表达质粒构建
pcDNA3.1/myc-His(-)A载体购自Invitrogen公司，通过PCR获取两端带EcoR I和BamH I酶切位点的人LOX-1的cDNA序列，将产物和pcDNA3.1/myc-His(-)A 载体都用EcoR I和BamH I双酶切后用T4连接酶连接，转化至大肠杆菌中，涂板后挑选单克隆测序。序列正确即为pcDNA3.1-LOX-1过表达质粒。
PCR引物
正向引物(SEQ ID NO:8)：
CCGGAATTCATGACTTTTGATGACCTAAAGATC
反向引物(SEQ ID NO:9)：
CGCGGATCCCTGTGCTCTTAGGTTTGC
人LOX-1cDNA序列(SEQ ID NO:10)：>NM_002543.3:115-936Homo sapiensoxidized low density lipoprotein receptor 1(OLR1),transcript variant 1,mRNA
ATGACTTTTGATGACCTAAAGATCCAGACTGTGAAGGACCAGCC TGATGAGAAGTCAAATGGAAAAAAAGCTAAAGGTCTTCAGTTTC TTTACTCTCCATGGTGGTGCCTGGCTGCTGCGACTCTAGGGGTCC TTTGCCTGGGATTAGTAGTGACCATTATGGTGCTGGGCATGCAAT TATCCCAGGTGTCTGACCTCCTAACACAAGAGCAAGCAAACCTA ACTCACCAGAAAAAGAAACTGGAGGGACAGATCTCAGCCCGGC AACAAGCAGAAGAAGCTTCACAGGAGTCAGAAAACGAACTCA AGGAAATGATAGAAACCCTTGCTCGGAAGCTGAATGAGAAATCC AAAGAGCAAATGGAACTTCACCACCAGAATCTGAATCTCCAAG AAACACTGAAGAGAGTAGCAAATTGTTCAGCTCCTTGTCCGCAAGACTGGATCTGGCATGGAGAAAACTGTTACCTATTTTCCTCGGG CTCATTTAACTGGGAAAAGAGCCAAGAGAAGTGCTTGTCTTTGG ATGCCAAGTTGCTGAAAATTAATAGCACAGCTGATCTGGACTTCA TCCAGCAAGCAATTTCCTATTCCAGTTTTCCATTCTGGATGGGGC TGTCTCGGAGGAACCCCAGCTACCCATGGCTCTGGGAGGACGGT TCTCCTTTGATGCCCCACTTATTTAGAGTCCGAGGCGCTGTCTCC CAGACATACCCTTCAGGTACCTGTGCATATATACAACGAGGAGCT GTTTATGCGGAAAACTGCATTTTAGCTGCCTTCAGTATATGTCAGAAGAAGGCAAACCTAAGAGCACAGTGA
细胞处理和检测
转染试剂Lipo3000购自Invitrogen公司，用lipo3000转染pcDNA3.1载体(Vector)或pcDNA3.1-LOX-1质粒(LOX-1)于TE-1或KYSE150细胞48小时后作后续处理。
取对数生长期细胞接种于96孔培养板，1×103个细胞/孔，待细胞贴壁后，加入200μg/ml岩藻聚糖(购自Sigma公司F5631-1G)处理48小时(换成含CCK8(购自碧云天生物技术)的培养基，37℃培养4小时，采用通用酶标仪(Universal Microplate Reader)读取波长为450nm波长的吸光度值。
实验结果与分析
如图4中A图和B图所示，岩藻聚糖呈浓度和时间依赖性抑制食管癌细胞 KYSE150、TE-1的增殖。如图4中C图所示，过表达LOX-1后抑制了岩藻聚糖引起的细胞增殖下降。
以上实验结果证明了：岩藻聚糖抑制食管癌细胞的生长与增殖，且该效果通过与LOX-1的相互作用后促进LOX-1蛋白的降解产生。
实施例5.岩藻聚糖治疗抑制4-NQO诱导的小鼠食管癌
为了检测岩藻聚糖是否对4-硝基喹啉-N-氧化物(4-NQO)(Sigma公司，货号为N8141-5G)诱导的食管癌具有治疗作用，发明人构建了4-NQO小鼠食管癌模型，并用岩藻聚糖进行腹腔注射治疗，以观察岩藻聚糖对4-NQO诱导的食管癌小鼠状态及生存率的影响。
1.4-NQO诱导的小鼠食管癌模型诱导
动物
SPF级6周龄雌性C57BL/6小鼠60只，购自上海斯莱克实验动物有限公司。动物饲养于清洁级环境中。
食管癌模型剂制备
将4-NQO溶解于1,2-丙二醇，配制成为5mg/ml的母液浓度，0.22μm有机滤器过滤除菌，置4℃冰箱避光保存。造模时用纯净水配制成浓度为100μg/ml的工作液。
造模及用药方式和剂量
动物适应性喂养1周后，模型组45只给予含4-NQO(100μg/ml)的饮用水处理 16周，对照组15只给予等体积但不含4-NQO的饮用水处理16周，然后随机取5 只进行脱颈椎处死后，打开腹腔及颈脖观察造模是否成功。
分组及干预方法
模型组小鼠随机分为生理盐水组(NS)以及岩藻聚糖治疗组(F)，按下表给予处理：
组别 药物 给药途径 给药剂量 给药频率
NS 生理盐水 腹腔注射 等体积F组 持续饮用16周
F 岩藻聚糖 腹腔注射 10mg/kg 3天用药1次
模型组小鼠16周后给予不含4-NQO的饮用水并且腹腔注射生理盐水(NS)或者岩藻聚糖(F)治疗。31周时(即给药15周后)，随机处死5只生理盐水组和岩藻聚糖治疗组小鼠。余下模型组小鼠继续腹腔注射岩藻聚糖或生理盐水，至其自然死亡，记录生存期。
观察一般情况
每天监测温度、湿度变化，各组小鼠毛色、精神状态、活动及粪便，每3天观察1次进食及饮水量，每周称体质量。
样品的采集处理：
小鼠脱颈椎处死后，打开腹腔及颈脖，取完整食管于4％多聚甲醛固定，用于病理标本制备。
实验结果与分析：
肉眼观察模型组皮毛灰暗无光，形体明显瘦小，活动明显减弱呈病态。岩藻聚糖治疗组皮毛较光泽，形体稍瘦小，小鼠活动度较正常。
如图5中A图所示：HE染色显示与生理盐水组相比，岩藻聚糖治疗组(F)小鼠食管中肿瘤病灶明显减少。另外岩藻聚糖治疗组(F)小鼠体重有明显或极明显增高 (图B)，且存活时间也显著增长(图C)。
以上结果证明了：岩藻聚糖可有效治疗食管癌。
实施例6.岩藻聚糖预防4-NQO诱导的小鼠食管癌
为了检测岩藻聚糖是否对4-硝基喹啉-N-氧化物(4-NQO)诱导的食管癌具有预防作用，发明人在建立4NQO食管癌诱癌小鼠模型时同时给予小鼠岩藻聚糖处理，以观察岩藻聚糖对食管癌的预防作用。
造模及用药方式和剂量
SPF级6周龄雌性C57BL/6小鼠40只，购自上海斯莱克实验动物有限公司。动物饲养于清洁级环境中。动物适应性喂养1周后，给予含4-NQO(100μg/ml)的饮用水处理16周，在给予4-NQO处理同时给予岩藻聚糖10mg/kg(F+4-NQO)或等体积F组生理盐水(NS+4-NQO)腹腔注射。
样品的采集处理：
小鼠脱颈椎处死后，打开腹腔及颈脖，取完整食管于4％多聚甲醛固定，用于病理标本(HE染色)制备。
实验结果与分析：
如图6所示：与模型对照组(NS+4-NQO)相比，模型对照组小鼠瘦弱，精神不佳，食管组织HE染色显示肿瘤灶，而模型岩藻聚糖组(F+4-NQO)小鼠保持良好状态，食管组织HE染色正常，食管癌的发生明显降低。
以上结果证明了：岩藻聚糖可有效预防食管癌。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 复旦大学
<120> 岩藻聚糖在抑制LOX-1信号途径中的应用
<130> 187905 1CNCN
<160> 10
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
cucggaagcu gaaugagaa 19
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gaauuugaag gcucuggaa 19
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
uucuccgaac gugucacgut t 21
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
gtcaaggctg agaacgggaa 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
aaatgagccc cagccttctc 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
ccggcaacaa gcagaagaag 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
atccagtctt gcggacaagg 20
<210> 8
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
ccggaattca tgacttttga tgacctaaag atc 33
<210> 9
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
cgcggatccc tgtgctctta ggtttgc 27
<210> 10
<211> 822
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 10
atgacttttg atgacctaaa gatccagact gtgaaggacc agcctgatga gaagtcaaat 60
ggaaaaaaag ctaaaggtct tcagtttctt tactctccat ggtggtgcct ggctgctgcg 120
actctagggg tcctttgcct gggattagta gtgaccatta tggtgctggg catgcaatta 180
tcccaggtgt ctgacctcct aacacaagag caagcaaacc taactcacca gaaaaagaaa 240
ctggagggac agatctcagc ccggcaacaa gcagaagaag cttcacagga gtcagaaaac 300
gaactcaagg aaatgataga aacccttgct cggaagctga atgagaaatc caaagagcaa 360
atggaacttc accaccagaa tctgaatctc caagaaacac tgaagagagt agcaaattgt 420
tcagctcctt gtccgcaaga ctggatctgg catggagaaa actgttacct attttcctcg 480
ggctcattta actgggaaaa gagccaagag aagtgcttgt ctttggatgc caagttgctg 540
aaaattaata gcacagctga tctggacttc atccagcaag caatttccta ttccagtttt 600
ccattctgga tggggctgtc tcggaggaac cccagctacc catggctctg ggaggacggt 660
tctcctttga tgccccactt atttagagtc cgaggcgctg tctcccagac atacccttca 720
ggtacctgtg catatataca acgaggagct gtttatgcgg aaaactgcat tttagctgcc 780
ttcagtatat gtcagaagaa ggcaaaccta agagcacagt ga 822

Claims (20)

1.岩藻聚糖在制备用于预防和/或治疗食管癌的产品中的应用，其中所述产品为药物。
2.如权利要求1所述的应用，其中，所述岩藻聚糖来源于褐藻植物。
3.如权利要求1所述的应用，其中，所述岩藻聚糖来源于海带或裙带菜。
4.如权利要求1所述的应用，其中，所述岩藻聚糖的来源选自：泡叶藻(Ascophyllum nodosum)、海带(Laminaria japonica)、厚叶切氏海带(Kjellmaniella crassifolia)以及墨角藻(Fucus vesiculosus)。
5.如权利要求1所述的应用，其中，所述岩藻聚糖的来源为墨角藻(Fucus vesiculosus)。
6.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品适用对象为哺乳动物。
7.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品适用对象选自：灵长类动物、啮齿类动物。
8.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品适用对象选自：家畜、宠物。
9.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品适用对象选自：人、大鼠、小鼠、犬、马、牛、羊、兔或猴。
10.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品适用于人。
11.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品为固态或液态形式。
12.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品的形式适于口服或胃肠外给药。
13.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品的形式适于腹膜内、肺内、鼻内、瘤内给药。
14.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品的形式适于局部给药。
15.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品的形式适于皮下给药。
16.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品的形式适于静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内或真皮内给药。
17.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品选自：颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊或口服液。
18.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品为舌下含片。
19.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品为溶液剂。
20.如权利要求1所述的应用，其中，所述产品为糖浆剂。
CN201811398257.1A 2018-11-22 2018-11-22 岩藻聚糖在制备抑制lox-1信号途径药物中的应用 Active CN109432121B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811398257.1A CN109432121B (zh) 2018-11-22 2018-11-22 岩藻聚糖在制备抑制lox-1信号途径药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811398257.1A CN109432121B (zh) 2018-11-22 2018-11-22 岩藻聚糖在制备抑制lox-1信号途径药物中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109432121A CN109432121A (zh) 2019-03-08
CN109432121B true CN109432121B (zh) 2021-06-22

Family

ID=65554217

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811398257.1A Active CN109432121B (zh) 2018-11-22 2018-11-22 岩藻聚糖在制备抑制lox-1信号途径药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109432121B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111228297B (zh) * 2020-01-21 2021-03-19 山东大学 岩藻聚糖硫酸酯在促进泡沫细胞自噬分解ox-LDL中的应用
CN111973749B (zh) * 2020-09-07 2023-03-21 威海人生药业集团股份有限公司 一种抗肿瘤免疫治疗的药物组合物
CN113413465B (zh) * 2021-06-15 2022-06-03 北京大学 岩藻糖基化抑制剂在抗癌导致炎症中的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
褐藻多糖药用生物活性研究进展;陈丹洁等;《医学理论与实践》;20111010;2311 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109432121A (zh) 2019-03-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zhang et al. Targeting the ROS/PI3K/AKT/HIF‐1α/HK2 axis of breast cancer cells: Combined administration of Polydatin and 2‐Deoxy‐d‐glucose
Li et al. Targeting the Hedgehog signaling pathway for cancer therapy
CN109432121B (zh) 岩藻聚糖在制备抑制lox-1信号途径药物中的应用
CN107106580B (zh) 治疗癌症干细胞的组合物
Hou et al. Inhibition of hedgehog signaling by GANT58 induces apoptosis and shows synergistic antitumor activity with AKT inhibitor in acute T cell leukemia cells
KR20170123665A (ko) Dpp-4 억제제를 포함하는 판막 석회화의 예방 또는 치료용 조성물
CN106573062B (zh) 细胞凋亡诱导剂
Ding et al. Oroxylin A reversed Fibronectin-induced glioma insensitivity to Temozolomide by suppressing IP3R1/AKT/β-catenin pathway
KR101701235B1 (ko) Ｈｒｐ-3 억제제를 포함하는 방사선 또는 약물내성 암의 치료용 약학 조성물
CN113573725B (zh) 含有if1作为活性成分的抗癌药物组合物
Chen et al. Regulation of epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor resistance via Ambra1-mediated autophagy in non-small cell lung cancer
KR102049812B1 (ko) 암의 복막 전이 진단을 위한 mct4의 용도
KR102307548B1 (ko) Htr2a 길항제를 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20220165628A (ko) Syk 저해제를 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 병용투여 조성물
US11191746B2 (en) Composition for inhibiting a growth of cancer stem cells comprising ciclesonide
JP2019501959A (ja) 腫瘍の診断および治療におけるＡｋｔ２の使用
JP7352248B1 (ja) 抗がん剤
KR102337860B1 (ko) 슈와크만-보디안-다이아몬드 증후군 유전자의 발현 억제제를 유효성분으로 포함하는 유방암 치료제 효율 증진용 조성물
KR102073559B1 (ko) Mct의 발현 억제제 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 암의 치료 또는 전이 억제용 조성물
KR102251864B1 (ko) miR-320c를 유효성분으로 포함하는 백금계 항암제에 대한 삼중음성유방암 환자의 약물 반응성 예측용 바이오마커 조성물
KR102351688B1 (ko) Taz 단백질 또는 이의 변이체를 포함하는 간 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
JP7303407B2 (ja) 腫瘍の診断および治療におけるＡｋｔ２の使用
KR102664454B1 (ko) 젬시타빈에 대한 민감성 향상을 위한 신규 표적 및 이의 활용
KR101950386B1 (ko) 15-케토 프로스타글란딘 e2를 유효성분으로 포함하는 암 치료용 약학 조성물
JP6841427B2 (ja) スクレロスチンを用いた悪性骨腫瘍の治療又は予防

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant