CN109414446A - 磷脂组合物 - Google Patents

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L·科布尔
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C·胡德森
L·蒙弗雷戈拉
P·伊尔科夫斯基
Z·米拉达
J·杜克斯
P·坎德萨米
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Abstract

描述了包括用作有效抗癌剂的改性蛋黄提取物的组合物。改性蛋黄提取物包括特定部分的磷脂酰胆碱和鞘磷脂，其由应用于提取物的化学合成修饰和产生，其对抑制癌细胞生长产生有益效果。还描述了施用这些组合物的方法。

Description

磷脂组合物
本申请在35U.S.C.§119(e)下要求2016年6月29日提交的美国临时专利申请序列号62/356,189和62/356,197的优先权，由此将其全部内容通过引用并入本文。
技术领域
公开了包含生物活性脂质的药物组合物和用生物活性脂质治疗哺乳动物的方法。生物活性脂质通常包括磷脂酰胆碱(PC)和/或鞘磷脂(SPH)化合物，并且据信可用于治疗包括癌症在内的增殖性疾病。
背景技术
已知来自天然来源的一些磷脂对哺乳动物中的各种病症产生有益效果。例如，已经研究了衍生自鸡蛋黄的磷脂潜在地具有治疗益处。天然鸡蛋黄提取物富含多种生物活性磷脂(BAP)。据报道当用N-酰基醚-磷脂酰乙醇胺(NAEPE)1-O-十八烷基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸-(N-棕榈酰基)乙醇胺富集至30％时，鸡蛋黄提取物具有抗癌特性，包括显著干扰体内雏鸡模型中的肿瘤进展。参见Karafiát V.,等,Folia Biologica(Praha)60,220-227(2014)。这与先前的报道一致，即从缺血鸡胚中分离的1-O-十八烷基/十六烷基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸-(N-棕榈酰基)乙醇胺和/或半合成限制了小鼠皮下移植肉瘤的生长。参见Kara,J.等,Neoplasma 33,187-205(1986)和Kara J.等,Neoplasma 40 213-217(1993)。
通常认为NAEPE中的烷基醚部分对于细胞毒活性是必需的，因为醚连接的脂质在肿瘤中不是分解代谢的并且能够积累并干扰细胞的重要途径。参见Kara,J.等,Neoplasma33,187-205(1986),Berdel,W.等,Cancer Res.43,541(1983)和Modolell,M.,等,CancerRes.,39 4681(1979)。
与经典的DNA靶向细胞毒性剂不同，烷基磷脂或BAP可靶向细胞和细胞内膜。参见Kuerschner,D.,等,PLOS One 7,e31342(2012)。当以治疗剂量施用时，烷基磷脂可抑制磷脂酰胆碱的生物合成，干扰脂质转导途径，阻断内质网状转运，并且干扰膜脂筏功能。参见例如Blitterswijk.W.,等,Biochim.Biophys.Acta.1831,663-674(2013)。脂筏是具有胆固醇和鞘磷脂浓度的专门的质膜微区，其在空间上组织信号传导途径并调节细胞增殖和凋亡。参见例如van der Luit,A.,等,Mol.Cancer Ther.6,2337-2345(2007)。相对于正常细胞，脂筏在癌细胞中更丰富，并且已被提议用作细胞毒性剂进入细胞的入口点。参见例如Li,Y.,等,Am.J.Pathol.168,1107-1118(2006)。
除了潜在的抗肿瘤特性外，还有报道称富集至30％的1-O-十八烷基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸-(N-棕榈酰基)乙醇胺的缺血性鸡胚组织提取物显示显著的抗炎和免疫调节作用。参见Vicenova,M.等,Complementary and Alternative Medicine 14 339(2014)。在细菌诱导的急性肺炎的体内研究中，证实富含NAEPE的BAP混合物通过降低血清中IL-1β、IL-8的水平和降低白细胞计数以及减少肺实质而对疾病进展具有积极作用。关于与炎症相关的细胞内信号传导途径的活化相关的促炎细胞因子基因的转录活性的体外研究显示某些BAP混合物影响巨噬细胞的免疫应答的能力。同上。此外，NAEPE富集的蛋黄提取物具有抑制蛋白激酶Cε的磷酸化的活性。同上。
本发明的一个目的是鉴定具有治疗特性、包括抗增殖或抗肿瘤特性的生物活性脂质，包括磷脂酰胆碱(PC)和/或鞘磷脂(SPH)和/或溶血磷脂酰胆碱(LPC)化合物及其混合物。此外，本发明的一个目的是提供组合物和使用这些组合物治疗包括癌症在内的增殖性疾病的方法。
发明内容
生物活性磷脂(BAP)能够用酒精从鸡蛋黄(例如，缺血性鸡胚)中提取，并且能够使用丙酮沉淀来纯化，如Gladkowski,W,等,J.Am.Oil Chem.89179-182(2012)中所公开的，由此将其全部内容通过引用并入本文。这种蛋黄提取物(在本文中称为“BAP(-)”)含有多种磷脂，但是如本文所证明的，在癌症的体外和体内研究中没有显示出显著的效果。已知用棕榈酰氯处理BAP(-)混合物以产生称为BAP(+)的物质。迄今为止认为，由于从相应的内源乙醇胺产生NAEPE(或“PNAE”)，需要BAP(-)提取物的棕榈酰化(产生BAP(+))以产生BAP混合物的治疗活性。如前所述，NAEPE被认为是BAP(+)中的活性成分。参见例如Karafiát V.,等,Folia Biologica(Praha)60,220-227(2014)和Kara,J.等,Neoplasma 33,187-205(1986)。
然而，已经令人惊讶地发现，经化学处理的鸡蛋黄的某些脂质组分提供抗癌作用，甚至在不存在或基本上不存在已知的活性NAEPE(例如，小于5％(w/w)，少于1％(w/w)，小于0.1％(w/w)，小于0.01％(w/w)等)的情况下。因此，本发明提供脂质的新型混合物及其药物组合物，其预期可用于治疗各种疾病和病症。在一些方面，本发明提供包含富含一种或多种脂质组分的蛋黄提取物(例如，鸡蛋黄提取物，通常来自鸡内金)的组合物，所述脂质组分例如磷脂酰胆碱(PC)和/或鞘磷脂(SPH)和/或溶血磷脂酰胆碱(LPC)化合物。本发明不限于鸡蛋黄提取物，而是包括来自任何动物来源的提取物或具有相同或基本相似成分的脂质的合成混合物。“基本相似”的成分是指至少最丰富的PC和/或SPH组分在本文定义的鸡蛋黄提取物中的丰度的25％(w/w)、优选15％和理想地10％内。在一些实施方案中，根据本发明的一种或多种脂质是激酶(包括蛋白激酶、特别是酪氨酸激酶、例如TTK)的抑制剂。这些组合物可用于治疗例如炎症或增生性疾病，例如癌症。
还提供治疗增生性疾病的方法。在一个方面，提供治疗患有癌症的哺乳动物(例如人)的方法，包括给予治疗有效量的本文所述的任何脂质混合物或其药物组合物。特别地，脂质混合物衍生自富含磷脂酰胆碱和/或鞘磷脂化合物和/或溶血磷脂酰胆碱化合物的蛋黄提取物(例如，鸡蛋黄提取物等)或与其基本相似的合成衍生的混合物。在各种实施方案中，组合物被施用(例如，口服)用于治疗癌症，包括但不限于膀胱癌、血液癌症(例如淋巴瘤、Jurkat癌细胞系等)、脑癌(例如T98G癌细胞系等)、乳腺癌(例如231癌细胞系等)、宫颈癌(例如HeLa癌细胞系等)、结肠直肠癌(例如HCT116癌细胞系等)、食道癌、肾癌、肝癌(例如HepG2癌细胞系等)、肺癌(例如H358癌细胞系、A549癌细胞系等)、卵巢癌(例如SK-OV-3癌细胞系等)、胰腺癌(例如Panc1癌细胞系、Capan-2癌细胞系等)、皮肤癌(例如M14癌细胞系等)、前列腺癌(例如DU-145癌细胞系等)、甲状腺癌或子宫癌。
附图说明
图1表示衍生自蛋提取物中的特定磷脂组的分离。最初的蛋黄混合物包含O-烷基PE、SPH、PC和其他成分。应理解，图1中任何化合物类别上的“R”基团可以是任何脂族基团，更通常是天然存在的脂肪酸的一价烃基。在所示的衍生中，使用丁醇从蛋黄中提取磷脂(步骤1)，并通过将丁醇提取物加入冷却的丙酮中进一步纯化，并收集从混合物中沉淀的脂质(步骤2)。然后使这些沉淀的脂质与CDI和酸反应(例如，使用包含一定量的约三乙醇胺的乙酸乙酯:三乙醇胺溶剂以完全溶剂化沉淀的脂质)。这种反应可产生所示的十种脂质类别。然后使用中压色谱(步骤4)进一步分离特定脂质类别(例如SPH、PC、LPC)，然后可以使用水/氯仿提取进一步纯化最终产物以除去色谱分离过程(步骤4)中产生的残余降解产物。
图2A显示了TLC板，用于将BAP(+)、BAP(-)的薄层色谱分开成从板的左侧到右侧的溶剂前沿的各种级分。可以看到来自BAP(+)的级分F1-F5和BAP(-)的相应级分F5(“F5(-)”)的染色。可以看出，产生BAP(+)的酰化BAP(-)将BAPBAP(-)的PE组分转化为BAP(+)中存在的NAEPE组分。还显示了SPH、LPC和PC对照，说明了那些磷脂类洗脱物的位置。可以看出，级分F5包含鞘磷脂组分和磷脂酰胆碱组分。图2B显示MP1000(顶部迹线)与LPC、SPH和BAP(+)对照的类似色谱分开。可以看出，MP1000由F5部分组成，但基本上不存在LPC成分。图2C显示MP1000与BAP(+)和BAP(-)对照的色谱比较。
图3A显示了级分MP1000的HPLC色谱图，并证明了其他亚级分P1、P2、P3、P4、P5、P6和P7的分离(isolation)和分开(separation)。另外，显示了每个亚级分的保留时间和曲线下面积。图3B显示了级分F5的HPLC色谱图，其中鉴定了亚级分P1-P7。
图4显示了使用分开脂质物质的正相HPLC方案的MP1000分离的色谱图。在6.0分钟洗脱的峰对应于磷脂酰胆碱组分，在12.2分钟洗脱的峰对应于鞘磷脂组分。在2.2分钟洗脱的峰对应于该色谱提取中的溶剂前沿，并且不对应于MP1000的任何部分。
图5显示了MP1000和MP1000(-)的脂肪酸甲酯分析的气相色谱图。给出了几种主要甲酯的RT。MP1000(-)偏离零线以比较两条迹线。
图6、7和8示出了由于施用各种BAP混合物而导致的各种癌细胞系的体内小鼠模型肿瘤生长测量。
具体实施方式
在此公开了本发明的详细实施方案；然而，应该理解，所公开的实施方案仅仅是对可以以各种形式实施的本发明的说明。另外，结合本发明的各种实施例给出的每个示例旨在是说明性的而非限制性的。
除非另有说明，否则本文使用的所有术语旨在具有其普通含义。如本文所用，术语“基本上由......组成”旨在将本发明限制于指定的材料或步骤，以及那些不会实质上影响所要求保护的发明的基本和新颖特征的那些，如从本说明书的阅读中理解的。
无论何时通过参考范围来识别术语，该范围将被理解为明确地公开端点和其范围内的每个元素或值。所有半积分数值的精确值也将被理解为在原始范围的任何范围和子集中具体公开。例如，约0.1％至约3％的范围具体地公开了0.1％、0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％和3％的百分比，以及由这些中间值形成的任何子范围。
当两个或更多个取代基被称为“独立地选自”一系列替代物时，意指每个取代基可以是该基团的任何元素，与其他取代基的身份无关。
除非另有说明，否则短语“基本上不含”是指组分的量足够低，使得该组分对本体(bulk)没有贡献显著的性质(例如，生物活性等)，并且在任何情况下，取决于上下文，基于组合物的总重量或基于给定组分的重量将小于约5.0％(重量)或小于约4.0％或低于约3.0％(重量)或小于约2.0％(重量)或小于约1.0％(重量)或小于约0.5％(重量)或小于约0.25％(重量)或小于约0.1％(重量)。
如本文所用，除非另有说明，否则“％(重量)”或“％wt.”或“w/w”是指相对于组合物的总重量，组分的重量百分比。除非另有说明，否则本文中对百分比或％的每次提及均基于％(重量)给出。应理解，组合物内或指定组分内各组分的所有％(重量)的总和不超过100％。
如本文所用，如本领域普通技术人员所理解的，术语“约”修饰量是指例如通过用于在现实世界中制备浓缩物或使用溶液的典型测量和液体处理程序；通过这些程序中的无意错误；通过制造组合物或实施方法所用成分的制造，来源或纯度的差异等等可能发生的数量的变化。无论是否由术语“约”修饰，权利要求包括数量的等同物。
如本文所用，“有此需要的患者”是指人类个体，男性或女性，其将受益于施用治疗有效剂量的脂质组合物。如本文所述，在一些实施方案中，有此需要的个体患有增殖性疾病，例如癌症。在一些实施方案中，有此需要的个体已经由具有需要治疗的增殖性疾病的医生诊断。有需要的患者或有需要的个体在本文中可互换使用。
如本文所用，短语“药学上可接受的”通常对于摄取或以所用水平与生物组织接触是安全的。药学上可接受的与生理学相容的可互换使用。应理解，除非另有说明，否则本发明的药物组合物包括营养药物组合物(例如膳食补充剂)。
本文所用的短语“治疗有效量”是指提供所示治疗益处所必需的量。例如，治疗有效量可以是每天一次(q.d.)或两次(b.i.d.)给药约1mg至约10g。
应理解，本文化合物的描述受到本领域技术人员已知的化学键合原理的限制。因此，当基团可以被许多取代基中的一个或多个取代时，选择这样的取代以符合关于化合价等的化学键合的原理，并给出非固有不稳定的化合物。例如，任何碳原子将与两个、三个或四个其他原子键合，与碳的四个价电子一致。
本公开的任何化合物可以是药学上可接受的盐的形式。如本文所用，“药学上可接受的盐”表示如本文所定义的生理学相容的盐，并且具有母体化合物的所需药理学活性。这样的盐包括：与无机酸如盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸等形成的酸加成盐；或与有机酸形成，所述有机酸如乙酸，苯磺酸，苯甲酸，樟脑磺酸，柠檬酸，乙磺酸，富马酸，葡庚糖酸，葡萄糖酸，谷氨酸，乙醇酸，羟基萘酸，2-羟基乙磺酸，乳酸，马来酸，苹果酸，丙二酸，扁桃酸，甲磺酸，粘康酸，2-萘磺酸，丙酸，水杨酸，琥珀酸，酒石酸，对甲苯磺酸，三甲基乙酸等；当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子取代时形成的盐；或与有机碱或无机碱配位。可接受的有机碱包括二乙醇胺，乙醇胺，N-甲基葡糖胺，三乙醇胺，氨丁三醇等。可接受的无机碱包括氢氧化铝，氢氧化钙，氢氧化钾，碳酸钠和氢氧化钠。
如本文所用，“富集的”提取物是指与相同的磷脂相对于提取物所来源于的母体组合物中相同的其他磷脂的相对丰度相比，该组合物中给定的磷脂相对于组合物中的任何其他磷脂的相对丰度增加。
如本文所用，“鸡蛋黄提取物”是指任何禽类物种的蛋黄提取物。在一些实施方案中，鸡蛋来自Gallus属的种。在一些实施方案中，鸡蛋来自Genus gallus的种。在其他实施方案中，鸡蛋来自Gallus gallus domesticus的种。
在鸡蛋黄中发现的大部分脂质是包含胆碱头基团的磷脂，其包括烷基磷脂和磷脂酰胆碱(PC)化合物。这些含有磷脂的胆碱通常具有式I(a)的结构：
其中R1和R2能够独立地是任何一价C1-C30基团，但通常独立地是基团R或R–C(O)–，其中R是脂族烃链，并且更通常对应于天然存在的脂肪酸(或其酰基部分)。酰基可以对应于天然存在的脂肪酸的酰基部分，例如ω-3和ω-6脂肪酸。如本文所用，除非另有说明，否则提及包含脂肪酸的脂质将被理解为是指所示脂肪酸的酰基(即，脂质被脂肪酸酯化的情况)。例如，包含二十二碳六烯酸脂肪酸(例如，(C22:6，全顺式-4,7,10,13,16,19)等)的式I(a)的磷脂酰胆碱在位置R1和/或R2上具有二十二碳六烯酰基。
一些天然存在的脂肪酸可以为细胞提供有益效果，但在许多哺乳动物体内不是天然存在的。脂肪酸(R-COOH形式)通常具有通常是饱和的、不饱和的或多不饱和的长脂族链(R)，其与羧酸(-COOH)头基连接。因此，相应的酰基团将具有R–(CO)–的形式。大多数天然存在的脂肪酸具有偶数碳原子的无支链烃链(通常为4至28个)。脂肪酸(或其酰基)可以用其脂质数表示，其表示脂肪酸的烃链长度和该链中的双键数。在一些实施方案中，任何双键可以是顺式或反式(或E或Z)构型。在一些实施方案中，给定脂肪酸(或其酰基片段)内的所有双键将为顺式构型。例如，(C22:5)脂肪酸具有长链22个碳原子和5个双键的无支链烃链，相应的C22酰基具有结构RC(O)–，其中R是烃链，具有长度为21个碳并具有5个双键。脂肪酸上的ω-n数表示与第一个双键所在的脂肪酸上的末端甲基碳(ω)的碳距离(n)。不饱和脂肪酸可以通过每个双键的位置和该键的异构构型(例如顺式或反式)来指定。双键的位置也可以指定，例如，通过双键所在的碳原子数并朝向末端甲基碳延伸。除非另有说明，否则碳数用于指定双键位置。例如，(C22:5，全顺式-7,10,13,16,19)脂肪酸酰基具有以下结构：
除非另有说明，否则假设连续的双键被单个亚甲基(–CH2-)单元隔开。表1显示了可能是合适的R1和/或R2取代基的一些脂肪酸(及其相应的酰基部分)的通用名称、系统名称和结构。
表1
应当理解，如果表1中的通用名称、系统名称和化学结构之间存在任何不一致，则所有这些化合物将被认为是本发明所包含的。例如，在系统名称和所提供的结构不一致的情况下，对应于系统名称编号的化合物和对应于该结构的化合物都将被认为是在本发明的范围内。
在一些实施方案中，式I(a)和/或II(a)的化合物包括独立地选自表1的脂质的基团R1、R2和R6。
本文描述了包含可从鸡蛋黄中提取的脂质混合物的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物衍生(例如提取、化学反应、分离、分开和/或其组合)自鸡蛋黄。然而，应该理解，除非另有说明，否则本发明不限于任何制备方法。因此，在一些实施方案中，脂质混合物可以“合成地”获得，例如，通过制备衍生自任何来源或合成制备的组分脂质的混合物。非限制性地，可以从AREKO Ltd.(Prague，CZ)获得本发明的脂质提取物可以衍生的BAP(+)和BAP(-)制剂。BAP(+)可以通过Kára等人的CZ专利No.282,139、Kára等人的CZ Pat No275,396、Kára等人的CZ Pat No 276,477中公开的方法从BAP(-)合成，这些文献各自通过引用整体并且特别是关于生物活性磷脂的合成制备。在一些实施方案中，制备方法将限定BAP混合物的组分。在一些实施方案中，脂质混合物可以合成获得或衍生自动物、植物或微生物(例如，细菌)来源，与由鸡蛋黄制备的组合物基本相同(例如，组合物将具有约80％或约90％或约95％或约99％或100％的相同组分)和/或主要组分的丰度(即构成>5％(重量)的提取物)将在本文所述的鸡蛋黄提取物中相同成分的丰度的约50％、或约25％、或约15％、或约10％(重量)以内。
如在Gladkowski,W,等,J.Am.Oil Chem,.89 179-182,(2012)(通过引用整体并入本文)中所公开的，可以分离和纯化BAP(-)提取物。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物通过有机溶剂(例如，甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、二氯甲烷、丙酮、己烷或其组合)提取衍生自鸡蛋黄(例如，可从Sigma Aldrich，MO获得)。溶剂可以是极性溶剂、极性质子溶剂和/或非极性溶剂。优选地，通过用乙醇和/或丁醇提取鸡蛋黄来获得提取物。在一些实施方案中，通过用丙酮脱油(沉淀)来纯化鸡蛋黄提取物。在一些实施方案中，蛋黄提取物用冷却(例如，低于10℃或低于5℃)的丙酮沉淀。在本发明的各种实施方案中，鸡蛋黄提取物与活化的羧酸物质(例如酸酐、酰氯等)反应。活化的酸物质是棕榈酸的活化衍生物(例如酰基氢化物、酰基卤等)。羧酸可以是，例如，具有脂族链的C2-C30酸，例如C1-29饱和的烷基链。在一些实施方案中，提取物与1,1’羰基二咪唑(CDI)和酸，例如C4-C26脂肪酸(例如，棕榈酸，硬脂酸，二十烷酸，十四烷酸，己酸等)反应。在一些实施方案中，然后可以通过色谱法分开反应的提取物以分离磷脂的特定混合物。可以使用例如色谱分离(例如，柱色谱，快速色谱，液相色谱，薄层色谱，中压色谱，液相色谱，半制备色谱，硅胶色谱，反相色谱法等)进行特定磷脂的分离。在一些实施方案中，分离可以包括两种或更多种色谱分离的组合以分离生物磷脂的特定部分。这种方法的示意图示于图1中。本文还提供了从磷脂(例如鸡蛋黄、化学处理的蛋黄等)的混合物中提取生物活性磷脂的方法，包括通过中压硅胶色谱法分离所述混合物的各种级分。通常，中压凝胶色谱比其他色谱技术使用更紧密的分离柱、更高的流速和更精确的梯度控制。中压色谱技术可以使磷脂混合物最小化与二氧化硅的接触时间，这又使磷脂混合物的降解量最小化(例如，通过将PC转化为LPC)。
通常，色谱实验中的流速可以通过确定每单位柱长度的最小方差来设定(例如，通过考虑物理动力学确定分开柱的每单位长度的最小方差与线性流动相速度，和分开的热力学性质)。通常，这最大化了色谱实验的效率。然而，令人惊讶地发现，使用低于最佳值的流速将导致级分分离的改善，同时生物磷脂的降解较少。在一些实施方案中，色谱法用二氧化硅柱进行，并且流速对于所述柱尺寸而言是次优的。流速可小于最佳流速的约80％(例如，小于约50％)。在一些实施方案中，用一种或多种包含氯仿的洗脱液进行色谱法。在一些实施方案中，用至少两种不同的洗脱液进行色谱法。这两种洗脱液中的一种可以是碱性的，而所述至少两种洗脱液中的另一种可以是含酒精的(即洗脱液可以包含酒精)。洗脱液可包括水，氢氧化铵，三乙胺，甲醇，乙醇，丙醇，二氯甲烷，异丙醇，氯仿，己烷，丁醇或其组合。在一些实施方案中，可以通过除去在分离过程中产生的任何降解产物来进一步纯化分离的生物磷脂的级分。例如，这种纯化可以通过用包含氯仿的溶剂萃取来实现。在一些实施方案中，生物活性磷脂的混合物可通过如实施例2中所述的中压色谱分离和纯化来制备。
在一些实施方案中，提取物包含一种或多种磷脂酰胆碱(PC)。PC可以在位置R1和R2处具有不同组的酰基官能团的其他PC产生有益效果。酰基官能团可包括饱和或不饱和的一价烃基。不饱和的是指烃含有一个或多个双键(例如，两个，三个，四个，五个，六个等)。烃可以是支链或非支链的。烃可以是C4-C35(例如C10-C30,C12-C28,C14-C24等)烷基，烯基，炔基，芳基或芳烷基一价基团。烃中的每个双键可以独立地为顺式或反式构型。烃的所有双键可具有顺式构型。本发明的一些实施方案涉及包含一种或多种具有式I(a)结构的磷脂酰胆碱的药物组合物：
其中R1和R2独立地为氢或包含烃链的酰基。在一些实施方案中，烃链是天然存在的脂肪酸的相应酰基。在一些实施方案中，磷脂酰胆碱是溶血磷脂酰胆碱(例如，R2是氢)。在一些实施方案中，R1是氢。在一些实施方案中，R1或R2中的至少一个是氢。在一些实施方案中，R1和R2均不是氢。烃链可以是饱和的或不饱和的。在一些实施方案中，R1和R2中的一个可以是饱和的，并且R1和R2中的另一个可以是不饱和的。在其他实施方案中，R1和R2二者都是饱和的。在其他实施方案中，R1和R2二者都是不饱和的。在一些实施方案中，R1和R2中的每一个独立地选自表1中列出的脂肪酸(或其酰基部分)。酰基可以衍生自具有任何ω数的脂肪酸(即，ω-3，ω-4，ω-5，ω-6，ω-8等)。
表2提供了磷脂酰胆碱的非限制性列表，其可以有益地单独使用或彼此组合使用以提供患者益处，例如癌症治疗。
表2
应当理解，在脂肪酸和化合物名称之间存在任何不一致的情况下，表2中公开了化合物和包含脂肪酸的鞘磷脂。
在各种实施方案中，表2中列出的任何磷脂酰胆碱可单独地包含约1-100％(w/w)(例如1-10％(w/w)或10-20％(w/w)或20-30％或30-40％(w/w)或40-50％(w/w)或50-60％(w/w)或60-70％(w/w)或70-80％(w/w)或80-90％(w/w)或90-100％(w/w)的药物组合物的磷脂组分(或磷脂酰胆碱组分)。在一些实施方案中，磷脂酰胆碱组分包含磷脂组分的约1-25％(重量)的PC7和/或磷脂组分的约1-25％(重量)的PC8和/或磷脂组分的约1-25％(重量)的PC14和/或磷脂组分的约1-25％(重量)的PC16和/或约1-25％(重量)。在一些实施方案中，本发明药物组合物的磷脂组分(或磷脂酰胆碱组分)可以不含表2中列出的任何磷脂酰胆碱化合物(PC1-PC186)，或者可以基本上不含这些化合物，这是指给定的磷脂酰胆碱含量很少，以至于在给定水平下治疗癌症没有益处，并且无论如何将基于磷脂组分(或磷脂酰胆碱组分)的总重量，小于2.5％(w/w)或小于1％(w/w)或小于0.5％(w/w)或小于0.1％(w/w)。
适用于本发明的化合物的混合物可包含PC中的高度不饱和脂肪酸组分。在一些实施方案中，包含至少五个或至少六个不饱和键的PC分子将构成约10-100％(w/w)的脂质组分。
在本发明的一些实施方案中，药物组合物可包含鸡蛋黄提取物，其包含磷脂酰胆碱组分；其中至少50％(w/w)的所述磷脂酰胆碱组分是具有式I(a)结构的化合物：
其中R1选自棕榈酰基(C16:0)、(C18:2)(例如，亚油酰基)、(C18:3)(例如，α-亚麻酰基)、(C16:1)(例如，棕榈油酰基)、(C18:1)(例如，油酰基)和硬脂酰基(C18:0)的基团；并且R2选自对应于天然存在的脂肪酸的酰基。在其他实施方案中，R1选自对应于天然存在的脂肪酸的酰基并且R2选自(C18:2)(例如，亚油酰基)、(C18:3)(例如，α-亚麻酰基)、(C20:4)(例如，花生四烯酰基)、(C18:2)(例如，亚油酰基)、(C22:6)(例如，二十二碳六烯酰基)、(C18:1)(例如，油酰基)、(C22:5)(例如，二十二碳五烯酰基)、(C22:5)(例如，鰶油酰基)或(C18:5)(例如，二十碳五烯酰基)的基团。
在本发明的其他实施方案中，药物组合物可包含鸡蛋黄提取物，其包含磷脂酰胆碱组分；其中至少50％的所述磷脂酰胆碱组分选自：
1-棕榈酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-α-亚麻酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈油酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈油酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈油酰基-2-二十碳三烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-鰶油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-硬脂酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱
1-硬脂酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-硬脂酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-奥斯邦德酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-硬脂酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
及其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，药物组合物可包含鸡蛋黄提取物，其包含磷脂酰胆碱组分；其中至少50％的所述磷脂酰胆碱组分选自：1-棕榈酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，1-棕榈油酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，1-硬脂酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，1,2-双油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，1-羟基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，及其药学上可接受的盐。
在本发明的一些实施方案中，混合物包含鞘磷脂(SPH)化合物。本发明的鞘磷脂可具有式II(a)的结构
其中R6能够是任何一价基团，但通常是包含脂族烃链的酰基，更通常是相应的天然存在的脂肪酸的酰基部分基团。酰基通常具有–(C＝O)-R的形式，其中R是C2-C30脂族烷基或烯基链。这些酰基对应于天然存在的脂肪酸的酰基部分，例如ω-3和ω-6脂肪酸，并在表1中给出。在本发明的一些实施方案中，生物活性脂质的混合物包含一种或多种PC化合物和/或一种或多种SPH化合物。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含一种或多种PC化合物和/或一种或多种SPH化合物。在其他实施方案中，鸡蛋黄提取物富含一种或多种SPH化合物。在其他实施方案中，鸡蛋黄提取物富含一种或多种PC化合物和一种或多种SPH化合物。
在各种实施方案中，药物组合物可包含蛋黄提取物，其中蛋黄提取物富含一种或多种选自具有式I(a)结构的化合物中的PC：
其中R1选自氢、棕榈酰基(C16:0)、亚油酰基(C18:2)、α-亚麻酰基(C18:3)、棕榈油酰基(C16:1)、油酰基(C18:1)和硬脂酰基(C18:0)的基团；并且R2选自氢、亚油酰基(C18:2)、α-亚麻酰基(C18:3)、花生四烯酰基(C20:4)、亚油酰基(C18:2)、二十二碳六烯酰基(C22:6)、油酰基(C18:1)、奥斯邦德酰基(C22:5)和二十碳五烯酰基(C18:5)的基团；和/或其中蛋黄提取物可以富含一种或多种鞘磷脂，所述鞘磷脂选自具有以下结构的化合物：
其中R6是棕榈酰基、硬脂酰基或油酰基，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，药物组合物可包含鸡蛋黄提取物，其中鸡蛋黄提取物可包含磷脂酰胆碱组分和鞘磷脂组分；其中至少50％的所述磷脂酰胆碱组分可选自：
1-棕榈酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-α-亚麻酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈油酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-奥斯邦德酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈油酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-鰶油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈油酰基-2-二十碳三烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-硬脂酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-硬脂酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-硬脂酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-硬脂酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，和
其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，鞘磷脂组分为磷脂组合物的约0.01至约50％(重量)(例如，约0.1至约30％或约1％至约20％或约1％至约10％等)。在一些实施方案中，至少50％(w/w)的鞘磷脂组分可包含一种或多种选自N-棕榈酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱、N-硬脂酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱和N-油酰基-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱的鞘磷脂。在一些实施方案中，鞘磷脂至少50％(w/w)的鞘磷脂组分包含N-棕榈酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱。在一些实施方案中，鞘磷脂组分由N-棕榈酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱组成或基本上由其组成。
表3提供了鞘磷脂(SPH)代表的化合物名称，其包含(C18:1)骨架和可存在于蛋黄提取物中的每种鞘磷脂的脂肪酸残基。在一些实施方案中，SPH具有不同的脂肪酸主链(例如表1中列出的那些脂肪酸)。这些SPH化合物可以单独存在或彼此组合存在，或与一种或多种PC化合物组合存在，例如，如表2中所述。
表3
应当理解，在脂肪酸和化合物名称之间存在任何不一致的情况下，表3中公开了化合物和包含脂肪酸的鞘磷脂。在一些实施方案中，选自SPH1、SPH2和SPH12-SPH21的鞘磷脂的任何组合可以存在于如Hsu,F.等,J.Am.Soc.Mass.Spectrom.11 2000(437-449)(其通过引用整体并入本文)中所公开的蛋黄提取物中，特别是关于蛋黄组分的公开内容。
在各种实施方案中，表3中列出的任何鞘磷脂可单独地包含约1-100％(w/w)(例如1-10％(w/w)或10-20％(w/w)或20-30％或30-40％(w/w)或40-50％(w/w)或50-60％(w/w)或60-70％(w/w)或70-80％(w/w)或80-90％(w/w)或90-100％(w/w)的药物组合物的磷脂组分(或鞘磷脂组分)。在一些实施方案中，鞘磷脂组分占磷脂组分重量的约0.01％至约50％或约0.1％至约10％(例如，磷脂组分重量的0.1至约30％、约1％至约5％)。在一些实施方案中，本发明药物组合物的磷脂组分(或鞘磷脂组分)可以不含任何鞘磷脂化合物(例如表3中列出的SPH1-SPH21)，或者可以基本上不含这些化合物，这是指给定的鞘磷脂含量很少，以至于在给定水平下治疗癌症没有益处，并且无论如何将基于磷脂组分(或鞘磷脂组分)的总重量，小于2.5％(w/w)或小于1％(w/w)或小于0.5％(w/w)或小于0.1％(w/w)。
在各种实施方案中，药物组合物可包含选自PC1-PC186(例如，PC1-PC131)的一种或多种(例如，两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种)磷脂酰胆碱和/或选自SPH1-SPH11的一种或多种鞘磷脂(例如，两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种等)。在其他实施方案中，药物组合物可包括一种或多种选自PC1-PC18和/或一种或多种选自SPH1-SPH3的鞘磷脂的磷脂酰胆碱。在其他实施方案中，药物组合物可包含两种或更多种(例如，三种或更多种、四种或更多种、五种或更多种)磷脂酰胆碱，其独立地选自PC1-PC18。在其他实施方案中，药物组合物可包含一种或多种磷脂酰胆碱(例如，两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种等)和一种或多种鞘磷脂(例如，两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种)等，其中一种或多种磷脂酰胆碱选自PC1-PC18，并且一种或多种鞘磷脂选自SPH1-SPH3。在一些实施方案中，磷脂酰胆碱组分包含PC7和/或PC8和/或PC14和/或PC16和/或PC17。在一些实施方案中，鞘磷脂组分包含SPH1。在一些实施方案中，鞘磷脂组分由SPH1组成或基本上由其组成。
在一些实施方案中，药物组合物可包含PC1和一种或多种选自PC2-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC2和一种或多种选自PC1和PC3-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC3和一种或多种选自PC1-PC2和PC4-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC4和一种或多种选自PC1-PC3和PC5-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC5和一种或多种选自PC1-PC4和PC6-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC6和一种或多种选自PC1-PC5和PC7-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC7和一种或多种选自PC1-PC6和PC8-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC8和一种或多种选自PC1-PC7和PC9-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC9和一种或多种选自PC1-PC8和PC10-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC10和一种或多种选自PC1-PC9和PC11-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC11和一种或多种选自PC1-PC10和PC12-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC12和一种或多种选自PC1-PC11和PC13-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC13和一种或多种选自PC1-PC12和PC14-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC14和一种或多种选自PC1-PC13和PC15-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC15和一种或多种选自PC1-PC14和PC16-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC16和一种或多种选自PC1-PC15和PC17-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC17和一种或多种选自PC1-PC16和PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含PC18和一种或多种选自PC1-PC17的磷脂酰胆碱。
在一些实施方案中，药物组合物可包含SPH1和一种或多种选自PC1-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含SPH2和一种或多种选自PC1-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，药物组合物可包含SPH3和一种或多种选自PC1-PC18的磷脂酰胆碱。
在本发明的一些实施方案中，磷脂混合物富含一种或多种磷脂(例如，磷脂酰胆碱、鞘磷脂、溶血磷脂酰胆碱等)。“富集的”是指与相同的磷脂相对于鸡蛋黄中(或BAP(-)中或BAP(+)或其任意级分中)相同的其他磷脂的相对丰度相比，该组合物中给定的磷脂相对于组合物中的任何其他磷脂的相对丰度增加。
在各种实施方案中，鸡蛋黄可以富含一种或多种选自PC1-PC186(例如，由PC1-PC131组成的组)和/或一种或多种选自SPH1-SPH11的鞘磷脂的磷脂酰胆碱。在其他实施方案中，鸡蛋黄富含一种或多种选自PC1-PC18和/或一种或多种选自SPH1-SPH3的鞘磷脂的磷脂酰胆碱。在其他实施方案中，鸡蛋黄富含两种或更多种独立地选自PC1-PC18的磷脂酰胆碱。在其他实施方案中，鸡蛋黄富含一种或多种磷脂酰胆碱和一种或多种鞘磷脂，其中一种或多种磷脂酰胆碱选自PC1-PC18，并且一种或多种鞘磷脂选自由以下组成的组：SPH1-SPH3。
在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC1和一种或多种选自PC2-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC2和一种或多种选自PC1和PC3-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC3和一种或多种选自PC1-PC2和PC4-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC4和一种或多种选自PC1-PC3和PC5-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC5和一种或多种选自PC1-PC4和PC6-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC6和一种或多种选自PC1-PC5和PC7-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC7和一种或多种选自PC1-PC6和PC8-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC8和一种或多种选自PC1-PC7和PC9-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC9和一种或多种选自PC1-PC8和PC10-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC10和一种或多种选自PC1-PC9和PC11-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC11和一种或多种选自PC1-PC10和PC12-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC12和一种或多种选自PC1-PC11和PC13-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC13和一种或多种选自PC1-PC12和PC14-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC14和一种或多种选自PC1-PC13和PC15-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC15和一种或多种选自PC1-PC14和PC16-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC16和一种或多种选自PC1-PC15和PC17-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC17和一种或多种选自PC1-PC16和PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含PC18和一种或多种选自PC1-PC17的磷脂酰胆碱。
在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含SPH1和一种或多种选自PC1-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含SPH2和一种或多种选自PC1-PC18的磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，鸡蛋黄提取物富含SPH3和一种或多种选自PC1-PC18的磷脂酰胆碱。
以下示出根据本发明的特定磷脂。
(R)-2-(((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酰基)氧基)-3-(棕榈酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC1”)
(R)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基)氧基)-3-((Z)-十六碳-9-烯酰基)氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC2”)
(R)-2((9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯酰基)氧基)-3-((Z)-十六碳-9-烯酰基)氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC3”)
(R)-2,3-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基)氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC4”)
(R)-2-(((9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯酰基)氧基)-3-(油酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC5”)
(R)-2((5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯酰基)氧基)-3-(棕榈酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC6”)
(R)-2((7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-7,10,13,16,19-五烯酰基)氧基)-3-(棕榈酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC7”)
(R)-2((5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯酰基)氧基)氧基)-3-(油酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC8”)
(R)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基)氧基)-3-(棕榈酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC9”)
(R)-2-((Z)-十八碳-9-烯酰基)氧基)-3-((Z)-十六碳-9-烯酰基)氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC10”)
(R)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基)氧基)-3-(油酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC11”)
(R)-2-(((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酰基)氧基)-3-(硬脂酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC12”)
(R)-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯酰基)氧基)-3-(硬脂酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC13”)
(R)-2-(油酰氧基)-3-(棕榈酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC14”)
(R)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基)氧基)-3-(硬脂酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC15”)
(R)-2,3-双(油酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC16”)
(R)-2-(油酰氧基)-3-(硬脂酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC17”)
(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)
在一个实施方案中，提供了包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC1和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC1和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC2和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC2和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC3和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC3和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC4和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC4和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC5和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC5和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC6和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC6和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC7和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC7和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC8和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC8和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供了包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC9和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC9和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC10和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC10和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC11和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC11和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC12和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC12和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC13和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC13和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC14和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC14和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC15和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC15和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC16和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC16和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
在一个实施方案中，提供包含磷脂酰胆碱的药物组合物，所述磷脂酰胆碱包含、基本上由或由有效量的MPC17和鞘磷脂组成，所述鞘磷脂包含、基本上由或由有效量的SPH1组成，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，MPC17和SPH1在由其个体活性组成的组合中表现出增强的活性。在一个实施方案中，药物组合物是口服剂型(例如胶囊)的形式，作为固定剂量组合。
天然鸡蛋黄提取物如BAP(-)也可含有溶血磷脂酰胆碱(LPC)，它是一类具有式III(a)结构的磷脂酰胆碱：
其中R13能够是任何一价基团，但更通常是脂族烃链，更通常是天然存在的脂肪酸的酰基官能团。还提供基本上不含这些化合物的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物可以基本上不含具有式III(a)结构的一些或每种溶血磷脂酰胆碱(LPC)。然而，在其他实施方案中，药物组合物可包含具有式III(a)的化合物。在一些实施方案中，药物组合物包含一种或多种富含一种或多种LPC的蛋黄提取物(例如，具有式III(a)结构的LPC)。在一些实施方案中，R13是氢或烷基。在一些实施方案中，R13是与烃基键合的酰基。在其他实施方案中，药物组合物可以基本上不含具有式III结构的化合物和化合物的组合，其中R13是氢或选自棕榈酰基、硬脂酰基、油酰基、亚油酰基或花生四烯酰基的酰基。在其他实施方案中，药物组合物还包含具有式III(a)结构的化合物和化合物的组合，其中R13是氢或选自棕榈酰基、硬脂酰基、油酰基、亚油酰基或花生四烯酰基的酰基。在其他实施方案中，组合物基本上不含甘油磷酸胆碱。
天然鸡蛋黄提取物如BAP(-)也可含有溶血磷脂酰胆碱(LPC)，它是一类具有式III(b)结构的磷脂酰胆碱：
其中R13可以是任何一价基团，但更通常是脂族烃链，更通常是天然存在的脂肪酸的酰基官能团。还提供了基本上不含这些化合物的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物可以基本上不含具有式III(a)结构的一些或每种溶血磷脂酰胆碱(LPC)。然而，在其他实施方案中，药物组合物可包含具有式III(a)的化合物。在一些实施方案中，药物组合物包含一种或多种富含一种或多种LPC的蛋黄提取物(例如，具有式III(a)结构的LPC)。在一些实施方案中，R13是氢或烷基。在一些实施方案中，R13是与烃基键合的酰基。在其他实施方案中，药物组合物可以基本上不含具有式III结构的化合物和化合物的组合，其中R13是氢或选自棕榈酰基、硬脂酰基、油酰基、亚油酰基或花生四烯酰基的酰基。在其他实施方案中，药物组合物还包含具有式III(b)结构的化合物和化合物的组合，其中R13是氢或选自棕榈酰基、硬脂酰基、油酰基、亚油酰基或花生四烯酰基的酰基。在其他实施方案中，组合物基本上不含甘油磷酸胆碱。
表4提供某些溶血磷脂酰胆碱(LPC)的化合物名称，其在一些实施方案中可以存在于鸡蛋黄提取物中，并且在其他实施方案中可以从组合物中排除(或大量排除)。这些LPC化合物(例如，表4中公开的那些)可以单独存在或彼此组合存在和/或与例如如表2中所述的一种或多种PC化合物组合存在，和/或与例如如表3中所述的一种或多种SPH化合物组合存在。在一些实施方案中，提取物可以富含表4中公开的一种或多种LPC(例如，LPC1，LPC2，LPC3，LPC4，LPC5，LPC6，LPC7，LPC8，LPC9，LPC10，LPC11，LPC12或其组合)。应当理解，因为LPC是一类PC，所以LPC可以用LPC号或PC号来表示。
表4
在各种实施方案中，表4中列出的任何LPC可单独地包含约1-100％(w/w)(例如1-10％(w/w)或10-20％(w/w)或20-30％或30-40％(w/w)或40-50％(w/w)或50-60％(w/w)或60-70％(w/w)或70-80％(w/w)或80-90％(w/w)或90-100％(w/w)的药物组合物的磷脂组分(或溶血磷脂酰胆碱组分)。在一些实施方案中，本发明药物组合物的磷脂组分(或溶血磷脂酰胆碱组分)可以不含表4中列出的任何溶血磷脂酰胆碱化合物(LPC1-LPC12)，或者可以基本上不含这些化合物，这是指给定的LPC含量很少，以至于在给定水平下治疗癌症没有益处，并且无论如何将基于磷脂组分(或LPC组分)的总重量，小于2.5％(w/w)或小于1％(w/w)或小于0.5％(w/w)或小于0.1％(w/w)。
在一个实施方案中，生物活性脂质组合物包含小于5重量％和/或摩尔质量的LPC。在其他实施方案中，生物活性脂质组合物包含小于4％、小于3％、小于2％、小于1％、小于0.5％、小于0.25％、或小于0.1％重量和/或摩尔质量的LPC。
BAP(+)可以通过母鸡蛋黄提取物中发现的各种磷脂酰乙醇胺(PE)的氮的酰化来产生。这些PE化合物具有式I的结构：
其中R1和R2如上定义，R3-R5可以是氢或任何一价烃基。在一些实施方案中，R3选自氢、甲基或C2-C18酰基，并且R4和R5独立地选自氢或烷基(例如甲基、乙基、丙基等)，并且当R3是酰基时，R4或R5不存在并且与R3基团键合的氮是不带电荷的。例如，R3可以是饱和的，或R3可以是脂肪酸的酰基。在一些实施方案中，任选N-酰化的PC脂质可具有选自肉豆蔻酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、二十碳烯酰基、山嵛酰基或木质酰基(lignoceroyl)的R3基团。在一些实施方案中，R3可以是棕榈酰基。在一些实施方案中，R3、R4和R5是甲基。
在其他实施方案中，药物组合物包含任选N-酰基化的溶血磷脂酰胆碱。任选N-酰基化的溶血磷脂酰胆碱是具有式III的结构的化合物：
其中R13如上定义，R10-R12可以是氢或任何一价烃基。在一些实施方案中，R10选自氢、甲基或C2-C18酰基，并且R11和R12独立地选自氢或甲基，并且当R10是酰基时，R11或R12不存在，与R10基团键合的氮是不带电荷的。例如，R10可以是饱和的，或R10可以是脂肪酸的酰基。在一些实施方案中，R10是棕榈酰基。在本发明的一些实施方案中，通过富集蛋黄提取物中任选N-酰基化的溶血磷酸胆碱发生有益的结果。在一些实施方案中，药物组合物还可包含任选N-酰基化的溶血磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，任选N-酰基化溶血磷脂酰胆碱可具有选自肉豆蔻酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、二十碳烯酰基、山嵛酰基或木质酰基(lignoceroyl)的R10基团。在一些实施方案中，R10可以是棕榈酰基。在一些实施方案中，R10、R11和R12是甲基。
药物组合物能够以多种方式中的任何一种给药，包括口服、肠胃外、静脉内、全身、局部、肿瘤内、肌肉内、皮下、腹膜内、吸入或任何这样的递送方法。药物组合物可通过注射静脉内施用。在一个实施方案中，通过运行的静脉内线，在例如约30分钟、约60分钟、约90分钟或更长时间内给患者静脉内输注含有PC和/或SPH的溶液。合适的制剂载体、稀释剂和赋形剂可以在Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Philadelphia，PA中找到，在此通过参考引入。此外，药物组合物可以与另一种癌症治疗组合，以在两种治疗方案之间产生有益效果。
可配制药物组合物用于口服给药。在一些实施方案中，药物组合物可以以合适的剂型口服或胃肠外给药。当口服给药时，本文所述的药物组合物可以以片剂、凝胶胶囊、液体胶囊、乳液或液体的形式给药。制剂可以方便地以单位剂型存在，并且可以通过常规制药技术制备。此类技术可包括混合活性成分和药物载体、赋形剂和/或稀释剂的步骤。通常，制剂可以通过将活性成分与液体载体或细碎的固体载体或两者均匀混合来制备，然后，如果需要，将产品成型为例如片剂形式或胶囊形式。此外，药物组合物可以掺入可生物降解的聚合物中，从而允许化合物的持续释放，将聚合物植入需要药物递送的位置附近，例如，在肿瘤部位或植入时，使得药物组合物全身释放。
在一些实施方案中，本文所述的组合物可以配制成用于口服给药的液体。液体组合物包括溶液、悬浮液和乳液。液体药物制剂的实例包括丙二醇溶液和含有用于口服溶液、悬浮液和乳液的甜味剂的溶液。
在一些实施方案中，单位剂型是胶囊，例如凝胶胶囊。在其他实施方案中，本文所述的组合物可以配制成胶囊(例如软明胶胶囊)的填充材料。例如，可以通过将上述组合物置于胶囊壳内来制备胶囊。在本发明的一些实施方案中，可将本文所述的组合物填充到软胶囊中。胶囊壳可以由甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇或变性明胶或淀粉或其他材料制成。在一些实施方案中，组合物可以填充在硬壳胶囊中。硬壳胶囊通常由相对高凝胶强度的骨和猪皮明胶的混合物制成。其他合适的胶囊壳材料包括聚乙烯、聚丙烯、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚氨酯、聚四氟乙烯、尼龙、聚甲醛、聚酯、乙酸纤维素和硝酸纤维素。胶囊壳本身可含有少量染料、避光剂(opaquing agent)、增塑剂和防腐剂。
单位剂型还可含有粘合剂，例如黄蓍胶、阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶；辅料，如磷酸二钙；崩解剂，如玉米淀粉、马铃薯淀粉或海藻酸；和/或润滑剂如硬脂酸镁。甜味剂，如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜；或者可以加入调味剂如薄荷、冬青油或樱桃调味剂。当单位剂型是胶囊时，除了上述类型的材料外，它还可以含有液体载体，例如植物油或聚乙二醇。各种其他材料可以作为包衣存在或以其他方式改变固体单位剂型的物理形式。例如，片剂、丸剂或胶囊可以包衣有明胶、蜡、虫胶或糖等。糖浆或酏剂可含有活性化合物、蔗糖或果糖作为甜味剂、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯作为防腐剂、染料和调味剂如樱桃或橙子调味剂。用于制备任何单位剂型的任何材料应是药学上可接受的并且在所用量下基本上无毒。此外，本发明的磷脂可以掺入缓释制剂和装置中。
在各种实施方案中，本发明的磷脂可以通过输注或注射静脉内或腹膜内施用。磷脂的分散体可以在水中制备，任选地与无毒表面活性剂混合。溶液可以在甘油、液体聚乙二醇、甘油三乙酸酯或其混合物中制备，或在药学上可接受的油中制备。在通常的储存和使用条件下，制剂可含有一种或多种抗氧化剂或防腐剂，例如，以防止微生物的生长。
在本发明的一些实施方案中，将有效(稳定)量的一种或多种药学上可接受的抗氧化剂加入到制剂中。术语“抗氧化剂”在本文中用于描述防止或阻止氧化的任何化合物或化合物的组合。可以使用任何已知的抗氧化剂，包括但不限于丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、没食子酸丙酯、卵磷脂、维生素E、生育酚、芝麻素、芝麻酚、芝麻酚林、α-生育酚、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯(acorbyl palmitate)、富马酸、苹果酸、抗坏血酸钠和偏亚硫酸氢钠，以及螯合剂如EDTA二钠也可用于稳定本发明的制剂。
每剂量施用的活性化合物的量选择为高于最小治疗剂量但低于毒性剂量。剂量的选择取决于许多因素，例如患者的病史，患者的年龄，患者的体重，其他疗法的使用以及疾病的性质。优选的剂量和给药方案可以是，例如，每千克受试者体重约1至约20,000mg或约10至约10,000mg。在某些实施方案中，将给予最初的低剂量，其可以基于患者对初始剂量的反应和/或耐受性而增加。例如，口服给药可以相等的间隔发生，即每24小时或者每12小时或每6小时等约1-10,000mg/kg或约10至约10,000mg/kg(例如，每6小时约2.5至约250mg/kg)。给药频率可以是每天一次、每天两次或更频繁。优选的单位剂量制剂是含有给药成分的日剂量或单位、每日亚剂量或其适当部分的那些。应当理解，除了上面特别提到的成分之外，本发明的制剂可以包括本领域中关于所讨论的制剂类型的常规的其他试剂。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物用于抑制肿瘤的增殖活性，特别是用于治疗肿瘤(例如，癌症、癌症前期、肿瘤等)。本发明的药物组合物可用于治疗肉瘤和/或黑素瘤和/或癌和/或淋巴瘤和/或白血病。
药物组合物可用于治疗癌症。在一些实施方案中，治疗哺乳动物(例如人)中的膀胱癌的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗血液癌症的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗脑癌(例如胶质母细胞瘤)的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗乳腺癌的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗宫颈癌的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗结直肠癌的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗食道癌的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗肾癌的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗肺癌的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗卵巢癌的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗胰腺癌的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗皮肤癌(例如黑素瘤或癌)的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗前列腺癌的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗甲状腺癌的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，治疗子宫癌的方法可包括施用包含有效量的根据本发明的多种生物活性磷脂的药物组合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在上述每种治疗方法中，给药可以是口服给药，包括给药含有本发明生物活性磷脂组合物(例如MP1000)的所述有效成分的胶囊。在上述每种治疗方法中，治疗进行的时间足以使肿瘤缩小、减缓癌症进展、影响癌症的缓解和/或抑制肿瘤细胞的增殖活性。
实施例
实施例1：BAP(+)混合物的分级分离和表征
从缺血鸡胚组织(鸡蛋黄)中提取的生物活性磷脂(BAP(+))与丁醇混合，经丙酮沉淀纯化，并用棕榈酸/CDI处理，得自AREKO Ltd.，(Prague,Czech Republic)。获得BAP(+)混合物为15％蒸馏水悬浮液，并在使用前保持在N2下。
为了开始分离复合BAP(+)混合物，通过在40℃减压下加热，从BAP(+)中除去溶剂。除去溶剂后，在填充有来自Sorbent Technologies(GA)的(孔径和40-63μm粒径)的高纯度级硅胶的柱上，使用由二氯甲烷、甲醇和水(8:2:0.1)洗脱液组成的脱气溶剂，通过快速色谱法分开3.0g干燥的BAP(+)混合物。通过薄层色谱(TLC)用磷钼酸染色监测BAP(+)通过柱的分开。图2A显示了使用氯仿:甲醇:水(体积比65:35:7)洗脱液和Meck KGA硅胶60F254板(通过PMA染色显现)获得的每种级分(F1-F5)的代表性分开。洗脱的前四个级分(F1-F4)的保留因子(Rf)分别为如通过TLC测定的0.97、0.90、0.52和0.28。在级分F4完全洗脱后，将洗脱液变为6:4:0.6二氯甲烷、甲醇和水的混合物，剩余的BAP(+)物质从柱中洗脱。该级分被识别为级分F5。表5说明了使用上述快速色谱分离技术的BAP(+)混合物中每种级分的分离量和每种级分的近似(％)丰度。级分的光谱分析表明级分F3包含NAEPE。BAP(-)的PE被转换成NAEPE也可以在图2A中看到。然而，级分的细胞毒性研究表明级分F5对肿瘤提供了最大的细胞毒活性(参见例如下面的实施例6和7)。
表5
实施例2：BAP混合物的中压色谱
还采用了BAP(+)的其他分级分离技术以除去NAEPE，同时最小化PC分解的可能性。确定使各种BAP混合物与二氧化硅接触可导致LPC形成并因此导致LPC丰度随时间增加(例如，可能通过PC的降解)。使用中压硅胶色谱法可以更有效地分开含有NAEPE的级分(例如，级分F3)与其他生物活性磷脂级分(例如F1、F2、F4和F5)。在RF Lumen(可从Teledyne Isco，NE获得)上进行中压硅胶色谱。使用两种洗脱液的分步梯度法进行分开，其中BAP(+)混合物用第一洗脱液分开第一段时间，然后立即用第二洗脱液分开第二段时间。为了说明的目的，使用120g Redisep Silica柱(cat#69-2203-320)以43ml/min的流速分开10g BAP(+)混合物。首先使用线性梯度分开混合物，该梯度在25分钟内改变一种溶剂(“溶剂A”或0％B)与另一种溶剂(“溶剂B”或100％B)的比例。25分钟后，进行20分钟的100％B的等度洗脱。溶剂A是氯仿:甲醇:氢氧化铵混合物(8:2:0.05的体积:体积:体积比)，溶剂B是氯仿:甲醇:水:氢氧化铵混合物(6:3.4:0.5:0.05的体积:体积:体积比)。由于纯度提高和使用该色谱方法产生的级分的更好分开，每种级分的分离量与快速色谱分开略有不同。表6说明了使用中压二氧化硅凝胶色谱分离技术的BAP(+)混合物中每种级分的分离量和每种级分的近似(％)丰度。
表6
用最终的氯仿萃取从L5中去除LPC
不希望受理论束缚，这种分开方法允许减少级分的洗脱时间，从而最小化在级分接近柱时可能产生的任何降解产物(例如LPC)。例如，使用中压色谱法，可以在约1小时内分离级分F5，而实施例1中描述的快速色谱条件可能需要大约8小时进行分开。通过使用约为所用柱的最佳流速的50％的流速(例如，每单位柱长度具有最小方差的最佳流速)，实现了级分的成功分离。例如，220g滤筒的最佳流速为约150mL/分钟。然而，成功的分离发生在约75mL/分钟的流速下。在120g和80g滤筒(其最佳流速分别为约85和60mL/分钟)中也发现了这种趋势，但是在这些柱上流速分别为约43和30mL/分钟发生了更成功的F5分离(例如，降解较少)。
通过用氯仿:甲醇:水(1:1:0.8的重量比)提取以除去残留的甘油磷酸胆碱和可能存在于级分中的其它降解产物来实现级分F5的进一步纯化。收集所得的含有F5并除去LPC的氯仿层(“MP1000”)并干燥。通常，使用该方法，可以将约12g至约15g的MP1000与30g BAP(+)分开。MP1000、BAP(+)、SPH和LPC的色谱比较示于图2B和2C。在F5部分中明显不存在与BAP(+)分开的NAEPE成分。而且，可以看出MP1000由级分F5组成，但包含显著的LPC组分。因此，MP1000是超过90％纯化的级分F5。
实施例3：级分F5和MP1000的分级分离和表征
在配备有分流器和Corona Veo Charged Aerosol Detector(可从DIONEX，CA获得)的ThermoFisher UltiMate 3000半制备HPLC系统上使用制备型反相色谱法将级分F5(和MP1000)进一步分级成较小的脂质组，用于样品检测。脂质混合物的制备分离在HYPERSIL GOLD硅胶柱(21×150mm)上进行，流速为5.0mL/min，洗脱液比例为30:70(洗脱液A:洗脱液B的体积)。洗脱液A是乙腈:异丙醇溶液(3:1的v/v比)和洗脱液B是甲醇:三乙胺(0.9:0.1的v/v比)。收集级分，合并并减压蒸发。将所得材料在真空下干燥至恒重，用于光谱、体外和/或体内实验。在级分F5上进行另外的半制备HPLC分析，以进一步分离级分。
使用C18 HYPERSIL GOLD硅胶柱(250×10mm，4.5mL/min)和由30:70的A:B组成的等度条件，对级分F5(和MP1000)进行HPLC色谱图，其中溶剂A为乙腈+0.1％三乙胺和溶剂B是甲醇+0.1％三乙胺。MP1000的HPLC色谱图显示在图3A中。根据实施例1制备的馏分F5在不施加额外压力的情况下(即，不使用中压色谱法)也可以分开成峰P1-P7。使用实施例1的方案分离的级分F5的HPLC色谱图示于图3B中。表7给出了在图3A的色谱图中测量的P1-P7的相对丰度。
表7
<u>亚级分</u> <u>大致相对丰度</u>
P1 4.0％
P2 3.2％
P3 21.7％
P4 3.5％
P5 5.0％
P6 49.3％
P7 13.4％
使用质谱法和核磁共振(NMR)技术进行亚级分P1至P7的成分的另外表征。对于质谱分析，将每个级分的样品溶解在5mM乙酸铵的甲醇溶液中至浓度为0.1mg/mL。使用电喷雾电离(ESI)源对每种溶液的组分进行电离，并使用四极质谱仪(AB SCIEX 5000，可从ABSCIEX，MA获得)进行质量过滤，以检测该级分中的每个母体分子的质量和样品中每个母体分子的相对丰度值。由于阳离子ESI(ESI+)，中性损失阐明了脂肪酸残基。母体分子在ESI+中产生脂肪酸的中性相应乙烯酮。相反，阴离子ESI(ESI-)导致相应核心的阴离子脂肪酸损失。ESI+和ESI-质谱结果的互相关用于确定每个核心中脂肪酸的位置，基于ESI+和ESI-之后的母体分子的断裂模式，如等,J.Chromatography A 1218(2011)5146-5156(全部内容通过引用并入本文)中所述。
另外，通过Jangle,R.D.等Ind.J.of Pharm.Sci.75 339-345(2013)和Zacek,P.等J Lipid Res.2016 Dec；57(12):2225-2234(各自通过引用整体并入本文)中公开的MS-MS技术(University of Colorado Denver，Mass Spectrometry Lipidomics CoreFacility)分析亚级分。简言之，将每个亚级分用1mM乙酸铵溶解在甲醇:乙腈:水(60:20:20的体积:体积:体积比)中，并对其进行进一步的质谱分析。通过将每个亚级分溶液以10μL/min的流速输注到AB Sciex三重四极杆线性离子阱质谱仪中来测定分子种类。在正离子模式中，孔口设定为+65V，碰撞能量为30V，以测量磷酸胆碱磷脂(磷酸胆碱离子，m/z＝184)的特征信号。负离子模式中每种分子种类的碰撞活化允许测定酯化成甘油骨架的脂肪酸。这些碰撞诱导实验使用-4800V的电喷雾电压和-120V的去聚集电位进行，允许检测[M-15]-离子(甲基阴离子的母体损失)。当相同质量的化合物存在于质谱中时，该方案允许在相同的检测m/z峰处对有助于m/z信号的主要脂质进行质谱检测。
使用1H NMR光谱，二维相关光谱([1H-1H]-2D-gCOSY)和异核单量子相关光谱([1H-13C]-gHSQC)技术进行每个级分内成分的进一步表征。在Varian Inova 500仪器上记录光谱。相对于CDCl3的残余溶剂峰分析信号(δH＝7.26，和δC＝77.4)。如质谱和NMR光谱所阐明的，级分P1至P7级分的分子种类的结构在表8中给出。
级分F5包含磷脂酰胆碱(PC)、鞘磷脂(SPH)和少量溶血磷脂酰胆碱(LPC)。F5的LPC组分可包含在F5的提取和分离过程中产生的降解产物。鉴定出单个部分(P4)包含鞘磷脂。表8总结了F5的每个其他级分中存在的主要PC和LPC分子种类。另外，表8显示了每个亚级分中分子种类的相对丰度(以摩尔百分比表示)。未显示包含小于5％(摩尔)的种类。如表8所示，级分F5中存在的PC种类的R1和R2官能团对应于–C(O)R形式的酰基，其中R是饱和或不饱和的烃链(例如，棕榈酰基是(C16:0))或氢。PC化合物具有如下式I(a)所示的结构：
表8
*产生指示的脂质数峰的PC可以是指示的PC或其组合。通常，标记为“主要”的脂质以每种指定脂质数的摩尔百分比存在超过50％摩尔。
级分P4可以不含PC化合物。然而，级分P4包含一种或多种具有式II(a)结构的SPH化合物：
表8中的级分P4的鞘磷脂化合物的m/z为703.8，并且确定在R6位置具有棕榈酰基酰基(C16:0)(在本文中称为“SPH1”)。
实施例4：使用硅胶色谱法将MP1000分开成脂类
使用配备有Corona Veo RS Charged气溶胶检测器和Hypersil GOLD Silica150x 4.6mm色谱柱的ThermoFisher Ultimate 3000 UPLC系统，使用正相HPLC将MP1000分开成每种脂质类别(例如，鞘磷脂组分，磷脂酰胆碱组分等)，流速11ml/min，使用等度条件，由30:70比例的洗脱液A＝CHCl3:MeOH:32％NH3/H2O溶液(按体积计80:19.5:0.5)和洗脱液B＝CHCl3:MeOH:TEA:H2O(按体积计69.53:25.58:0.49:4.40)组成。代表性的色谱图如图4所示。可以看出，MP1000主要包含磷脂酰胆碱和鞘磷脂(摩尔/摩尔比为17.4:1)。
实施例5：MP1000的脂肪酸甲酯(FAME)分析
使用与用于MP1000分离的方法(“MP1000(-)”)相同的方法分离的MP1000的磷脂的脂肪酸基团和来自(BAP(-))的级分的脂肪酸基团被转化为甲酯以鉴定脂肪酸每个级分中的酸含量。通过气相色谱技术鉴定甲酯混合物的脂肪酸含量以阐明(Matreya,LLC ofState College,PA的FAME分析)。
将1mL 2％硫酸的甲醇溶液(按体积计)加入10mg每种脂质混合物中。然后将反应混合物在80℃加热30分钟，然后冷却至室温。然后加入0.5mL去离子水和4mL己烷。剧烈摇动反应混合物并静置直至可见两相。收集己烷层。再进行该己烷萃取两次并合并。将少量硫酸钠:碳酸氢钠(4:1重量比)加入合并的己烷萃取液中，剧烈摇动，并用氮气流浓缩至0.5mL，得到甲酯混合物。
然后使用气相色谱-火焰离子化检测(GC-FID)分析甲酯的混合物，其允许鉴定特定烃的摩尔响应因子。GC-FID装置的注射和检测温度为250℃。GC-FID用包含非键合聚(80％双氰基丙基/20％氰丙基苯基硅氧烷相(SP-2330柱，可从Supelco获得)的柱进行，尺寸为30m×0.25mm×0.2μm。该柱初始设定为170℃，温度保持17分钟，然后以10℃/min改变至190℃，然后再将温度保持31分钟。GC-FID载气的线性速度为20厘米/秒。
通过比较脂肪酸甲酯的真实样品的保留时间与从MP1000和MP1000(-)甲酯混合物获得的FAME的保留时间，允许鉴定每个级分中的脂肪酸含量。图5显示了FAME分析的色谱图。鉴定的种类如表9所示。在每种情况下，甲基以外的烃基表示存在于SPH中的脂肪酸酰基片段和在F5部分中发现的PC。可以看出，MP1000和MP1000(-)似乎在生物磷脂混合物中具有相似的脂肪酸酰基含量。
表9
实施例6：BAP(+)和级分F1-F5的体外细胞毒性分析
如下使用XTT细胞活力测定法测量各种BAP混合物的细胞毒性潜力。样品BAP+、级分F5、级分F5的亚级分(例如，亚级分P1等)的储备溶液和来自未处理的蛋黄(BAP(-))的级分(其使用与用于级分F5分离(“F5(-)”)的分离使用的方法相同的方法分离)通过将相同量的每种物质溶解或悬浮在生理浓度和pH为7.2的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中来制备。对于不形成稳定悬浮液的样品，加入卵磷脂(BAP(-))(之前显示不具有显著的细胞毒活性)作为乳化剂，其量为0.5％(w/w)。通过在氮气氛下剧烈摇动小瓶中的组分在环境温度下1-2小时来制备溶液/悬浮液。在测试之前，立即通过摇动将溶液再次均化，然后在细胞生长培养基中稀释至合适的浓度以形成测试溶液。
使用标准XTT测定法测量每种测试材料对人胰腺导管腺癌细胞系(Capan-2)的半数最小抑制浓度(IC50)。
用在200μL细胞生长培养基中Capan-2细胞(6×103个细胞/孔)接种具有96个孔的平底微孔板(可从NUNC，Denmark获得)。将细胞在37℃、湿润的5％CO2/95％空气气氛中孵育24小时。24小时后，将50μL测试溶液加入孔中(一式三份)，以达到0.0125-0.4％(w/w)的浓度。然后将板再孵育72小时。孵育后，弃去150μL上清液，向每个孔中加入25μL的1.3mg/mL2,3-双-(2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基)-2H-三苯四氮唑-5-羧酰苯胺(XTT)的染料溶液和7.5μg/mL N-甲基二苯并吡嗪甲基硫酸盐(PMS)的混合物。在没有光的情况下将微孔板再孵育4小时。
通过用INFINITE F50软件(Tecan Austria GmbH，Austria)配备有Magellen的INFINITE F50吸光度读数器测量450nm处的吸光度来确定每个孔中腺癌细胞的数量。将在新鲜培养基中培养的细胞用作对照。所有报道的IC50值是四次独立实验的平均值。表10给出了所测试的各种BAP混合物的抑制活性。
表10
从表10中可以看出，BAP(+)和级分F5对癌细胞具有活性，然而，F5(-)和F5的一些亚级分对癌细胞不具有活性。F5的最具有活性的级分(按降序排列)是P1、P2和P4。H358(肺)、M14(黑素瘤)、231(乳腺癌)、Panc1(胰腺)、HeLa(宫颈)、SK-OV-3(卵巢)、HepG2(肝脏)、HCT116(结肠)、T98G(多形性胶质母细胞瘤)、Jurkat(T细胞淋巴瘤)、DU-145(前列腺)或A549(肺)细胞培养物也可能出现类似的结果。。
实施例7：体内测量BAP混合物的细胞毒性
进行小鼠中肿瘤生长抑制的体内测量以确定BAP(+)、BAP(-)及其级分的功效。使用补充有20％胎牛血清、2％青霉素/链霉素和1.25％L-谷氨酰胺的高葡萄糖D-MEM培养基，在37℃、潮湿的5％CO2/95％空气气氛中培养人胰腺癌细胞系(Capan-2，得自EuropeanCollection of Cell Cultures，Salisbury UK)。应用前，通过胰蛋白酶消化30分钟收获细胞。将收获的Capan-2细胞作为1×107个细胞在与基底膜制剂(BD MATRIGEL，可从I.T.A.-Interact，Prague CZ获得)的混合物中皮下施用于每只小鼠。在Hsd：无胸腺裸-Fox n1nu小鼠(可从Anlab，Prague CZ获得)的右后侧给药。当每只小鼠的肿瘤达到约0.103-0.122cm3的体积时，通过口服施用0.1mL的在向日葵油载体中每种所列组分的30％(w/w)溶液开始测试每只小鼠的肿瘤生长抑制，每天一次，持续42天。
表12给出了与对照相比的肿瘤重量生长抑制百分比(％WGI)，包括BAP(-)、BAP(+)、合并的级分F1-F4、F5，包含合并富含更多PC的F5亚级分的组合物的各种BAP混合物(其包含饱和脂肪酸酰基残基(“F5A”))、包含富含更多包含不饱和脂肪酸酰基残基(“F5B”)的PC的F5亚级分的合并集合的级分，和可能富含LPC的BAP(+)(“F5C”)的级分。还评估了甘油磷酸胆碱(GPC)。包含鞘磷脂组分的唯一BAP(+)级分是级分F5和F5B。
表11
<u>样品</u> <u>％WGI</u>
F5 85.7％
BAP(+) 80.7％
F1+F2+F3+F4 78.3％
F5A 27.8％
F5B 24.9％
BAP(-) -8.8％
GPC -41.9％
F5C -109.2％
从表11中可以看出，体内实验证明了BAP(+)的特定混合物对肿瘤生长的抑制作用级分F5和BAPBAP(+)各自在抑制肿瘤生长方面具有高度活性。此外，单独的级分F5A和F5B对肿瘤生长的抑制行为显著低于级分F5(其含有F5A和F5B)。还观察到富含不饱和PC的级分F5A具有与富含饱和PC和SPH的级分F5B相当的活性，但是F5A和F5B的组合显然是最大功效所需要的。级分F5C(据信含有LPC)超过肿瘤大小的两倍。值得注意的是，BAP(-)不抑制肿瘤生长。
另外，对从实施例2的半制备中压色谱法(“MP1000”)分离的F5级分进行体内实验。在向日葵油中制备包含5％和30％重量浓度的给药溶液。给患有肿瘤的小鼠每天一次口服0.1mL MP1000溶液，持续42天。图6示出了这些实验的结果。可以看出，MP1000级分在每个时间点比BAP(-)和队长显著降低肿瘤重量。对每个时间点的数据进行t检验，分析来自向日葵油对照和5％重量MP1000的处理之间的统计学显著性(“*”表示p<0.05，“**”表示p<0.01，“***”表示p<0.001，“****”表示p<0.0001)。值得注意的是，即使MP1000和MP1000(-)具有与FAME分析所证实的相似的脂肪酸含量，包含MP1000(-)的BAP(-)也不会相对于对照减小肿瘤大小。
在癌细胞系MiaPaca(胰腺)和Panc-1(胰腺)的小鼠异种移植物中，以1％浓度(重量)和5％浓度(重量)浓度研究MP1000的抑制活性。如图7和8所示，与对照(向日葵油)相比，两种剂量在延迟肿瘤生长方面显著优越。在MiaPaca肿瘤的情况下，对于MP1000量的剂量反应显示出在20天后显著的趋势。如所示，每个MP1000样品显示出对向日葵油对照的统计学显著性(“*”表示p<0.05，“**”表示p<0.01，“***”表示p<0.001，和“****”表示p<0.0001)。
实施例8：激酶抑制。
使用荧光共振能量转移(FRET)分析测量各种激酶的抑制。简而言之，在每种测试级分的存在下，使用激酶将ATP的γ-磷酸转移至合成FRET-肽中的单个酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基。激酶抑制剂可以防止磷酸化。FRET-肽包含供体荧光团和受体荧光团，其中受体荧光团仅由于通过肽的共振能量转移而将从供体荧光团的激发波长经历荧光。显色试剂用于切割未磷酸化的FRET-肽。因此，未切割的FRET-肽(即磷酸化肽)将经历受体和供体两者的可测量的FRET，并指示激酶抑制。然而，FRET-肽(即，未磷酸化的肽)的切割破坏FRET-肽上的供体和受体荧光团之间的FRET，因此导致显著更少的受体荧光，并且表明很少激酶抑制。因为FRET-肽的磷酸化抑制了显色试剂的切割，所以使用在约400nm激发供体荧光团后供体发射与受体发射的比率的计算来定量反应进程。低比率表明FRET-肽被磷酸化(即，激酶抑制很少)，高比率表明FRET-肽被磷酸化(即激酶抑制)。因此，磷酸化百分比能够基于最大和最小磷酸化的对照的发射比来计算。可以基于每个级分的样品的磷酸化百分比与没有每个级分的磷酸化百分比来计算抑制百分比。
使用Life Technologies的SELECTSCREEN Kinase Profiling Service测量各种级分的各种10μM溶液的激酶抑制活性。除非另有说明，否则每个孔中ATP的浓度是Michaelis-Menten常数(Km值-当磷酸化反应速度等于反应最大速度的一半时ATP的浓度)。表13显示了各种级分的激酶抑制活性和相应的Z'值。Z'是统计效应大小的量度，用于评估测定的质量。Z'>0.5是与背景分离的指示性测量和可靠的测定结果。平均％抑制代表两次独立测量。
表12
*ATP浓度为100μM
**测试化合物显示可能与受体干扰
可以看出，与BAP(+)和BAP(-)相比，某些BAP级分可以更有效地抑制各种激酶。例如，使用级分F1-F4的组合产生比级分F5本身或F5的任何取代基显著更大的mTOR激酶抑制。此外，BAP(+)显示出相对于BAP(-)对各种激酶的显著抑制活性。例如，当BAP(-)或研究的任何其他级分没有时，BAP(+)显示出对SPHK1激酶的显著抑制行为(F1+F2+F3+F4级分在实验中与受体荧光团相互作用并且阻止任何发射得到％抑制率为100％)。
还通过将示踪剂与激酶结合并添加铕标记的抗标签抗体来测量各种激酶的抑制。当与相同的激酶结合时，示踪剂和铕通过FRET和荧光相互作用。示踪剂和抗体与激酶的结合导致高度的FRET，而用激酶抑制剂置换示踪剂导致FRET的损失。该测量方法消除了上述FRET测量中所需的切割步骤。
使用(可得自Life Technologies的LANTHASCREEN Eu Kinase Binding AssayProfiling Service)测量各种级分的各种10μM溶液的激酶抑制活性。在这些测量中，更高的置换百分比表明更高的激酶抑制表14显示了几种级分和BAP(+)和BAP(+-)的百分比位移值和相应的Z'值。平均％置换代表两次独立测量。
表13
可以看出，某些BAP(+)级分提供对各种激酶的抑制，包括癌症治疗剂如TTK的重要靶标。
如前所述，本发明提供在用于治疗各种癌症的药物组合物中有效的组合物。本文描述的实施例表明所述药物组合物可能产生的有益效果。然而，应该理解的是，这样的描述仅仅是为了方便和清楚，并不意在限制范围。

Claims (103)

1.一种药物组合物，包含多种衍生自鸡蛋黄的生物活性磷脂和一种或多种药学上可接受的稀释剂、赋形剂和/或载体，其中所述多种生物活性磷脂基本上不含N-酰基醚磷脂酰乙醇胺(NAEPE)。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂基本上不含甘油磷酸胆碱。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂基本上不含磷脂酰乙醇胺(PE)。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂基本上不含N-棕榈酰基PE。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂基本上不含具有式(IIIa)和/或式(IIIb)结构的化合物其药学上可接受的盐：
其中R10选自氢、甲基或C2-C18酰基；
R11和R12独立地选自氢或甲基，其中如果R10是酰基，则R11或R12不存在并且与R10键合的氮是不带电荷的；
R13独立地为氢或C2-C20酰基。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂还包含具有式(IIIa)和/或式(IIIb)结构的化合物其药学上可接受的盐：
其中R10选自氢、甲基或C2-C18酰基；
R11和R12独立地选自氢或甲基，其中如果R10是酰基，则R11或R12不存在并且与R10键合的氮是不带电荷的；
R13独立地为氢或C2-C20酰基。
7.根据权利要求5或6所述的药物组合物，其中R13是氢、棕榈酰基(C16:0)、硬脂酰基(C18:0)、油酰基(C18:1)、亚油酰基(C18:2)或花生四烯酰基(C20:4)。
8.根据权利要求5或6所述的药物组合物，其中R13是氢。
9.根据权利要求5-8中任一项所述的药物组合物，其中R10-12各自为甲基。
10.一种药物组合物，包含多种衍生自蛋黄的生物活性磷脂和一种或多种药学上可接受的稀释剂、赋形剂和/或载体，其中所述多种磷脂富含一种或多种选自由以下组成的组中的脂质：
(i)一种或多种具有以下结构的磷脂酰乙醇胺(PE)和/或磷脂酰胆碱(PC)衍生物、或其药学上可接受的盐：
其中R1或R2独立地选自氢、棕榈酰基(C16:0)、十六碳烯酰基(C16:1)、棕榈油酰基(C16:1)、硬脂酰基(C18:0)、十八碳烯酰基(C18:1)、油酰基(C18:1)、十八碳二烯酰基(C18:2)、亚油酰基(C18:2)、α-亚麻酰基(C18:3)、十八碳三烯酰基(C18:3)、花生四烯酰基(C20:4)、二十碳四烯酰基(C20:4)、二十二碳五烯酰基(C22:5)和二十二碳六烯酰基(C22:6)基团；
R3选自氢、甲基或C2-C18酰基；其中如果R3是酰基，则R4或R5不存在并且与R3键合的氮是不带电荷的；
R4和R5独立地选自氢或甲基；和/或
(ii)一种或多种具有以下结构的鞘磷脂(SPH)衍生物及其药学上可接受的盐
其中R6是棕榈酰基(C16:0)、硬脂酰基(C18:0)、油酰基(C18:1)、十四烷酰基(C14:0)、十七烷酰基(C17:0)、十九烷酰基(C19:0)、二十烷酰基(C20:0)、二十二烷酰基(C22:0)、二十二烷酰基(C22:1)、二十三烷酰基(C23:0)、二十四碳二烯酰基(C24:2)或二十四烷酰基(C14:0)。
11.根据权利要求10所述的药物组合物，其中R1和R2不是氢。
12.根据权利要求10所述的药物组合物，其中R1选自氢、C16或C18脂肪酸酰基。
13.根据权利要求10所述的药物组合物，其中R1选自氢、棕榈酰基(C16:0)、棕榈油酰基(C16:1)、硬脂酰基(C18:0)和油酰基(C18:1)。
14.根据权利要求10-13中任一项所述的药物组合物，其中R2选自C18脂肪酸酰基。
15.根据权利要求10-13中任一项所述的药物组合物，其中R2选自亚油酰基(C18:2)和油酰基(C18:1)。
16.根据权利要求10-15中任一项所述的药物组合物，其中R3、R4、R5各自为甲基。
17.根据权利要求10-16中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种磷脂酰胆碱(PC)衍生物共同包含至少约30％(w/w)的所述多种磷脂。
18.根据权利要求10-16中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种磷脂酰胆碱(PC)衍生物共同包含至少约50％(w/w)的所述多种磷脂。
19.根据权利要求10-16中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种磷脂酰胆碱(PC)衍生物共同包含至少约70％(w/w)的所述多种磷脂。
20.根据权利要求10-16中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种磷脂酰胆碱(PC)衍生物共同包含至少约90％(w/w)的所述多种磷脂。
21.根据权利要求10-20中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种鞘磷脂(SPH)衍生物共同包含约0.1％至50％(w/w)的所述多种磷脂。
22.根据权利要求10-21中任一项所述的药物组合物，其中R6是棕榈酰基(C16:0)。
23.根据权利要求10-22中任一项所述的药物组合物，其中所述多种磷脂富含一种或多种磷脂酰胆碱(PC)化合物和一种或多种鞘磷脂(SPH)化合物。
24.根据权利要求10-23中任一项所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂基本上不含N-酰基醚磷脂酰乙醇胺(NAEPE)。
25.根据权利要求10-24中任一项所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂基本上不含磷脂酰乙醇胺(PE)。
26.根据权利要求10-25中任一项所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂基本上不含N-棕榈酰基PE。
27.根据权利要求10-26中任一项所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂基本上不含具有以下结构的化合物及其药学上可接受的盐：
其中R10选自氢、甲基或C2-C18酰基；
R11和R12独立地选自氢或甲基，并且如果R10是酰基，则R11或R12不存在并且与R10键合的氮是不带电荷的；和
R13为氢或C2-C20酰基。
28.根据权利要求27所述的药物组合物，其中R13是氢、棕榈酰基(C16:0)、硬脂酰基(C18:0)、油酰基(C18:1)、亚油酰基(C18:2)或花生四烯酰基(C20:4)。
29.根据权利要求27或28所述的药物组合物，其中R13是氢。
30.根据权利要求27-29中任一项所述的药物组合物，其中R10-12各自为甲基。
31.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂基本上不含甘油磷酸胆碱。
32.根据权利要求10-26中任一项所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂还包含具有式(IIIa)和/或式(IIIb)结构的一种或多种化合物及其药学上可接受的盐：
其中R10选自氢、甲基或C2-C18酰基；
R11和R12独立地选自氢或甲基，其中如果R10是酰基，则R11或R12不存在并且与R10键合的氮是不带电荷的；
R13独立地为氢或C2-C20酰基。
33.根据权利要求32所述的药物组合物，其中R13是氢、棕榈酰基(C16:0)、硬脂酰基(C18:0)、油酰基(C18:1)、亚油酰基(C18:2)或花生四烯酰基(C20:4)。
34.根据权利要求32所述的药物组合物，其中R13是氢。
35.根据权利要求32-34中任一项所述的药物组合物，其中R10-12各自为甲基。
36.根据权利要求32所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂还包含甘油磷酸胆碱。
37.根据权利要求10-36中任一项所述的药物组合物，其中R1和R2各自独立地选自棕榈酰基(C16:0)、十六碳烯酰基(C16:1；顺式-9)、十八碳烯酰基(C18:0)、十八碳烯酰基(C18:1，顺式-9)、十八碳二烯酰基(C18:2，全顺式-9,12)、二十碳四烯酰基(C20:4，全顺式-5,8,11,14)、二十二碳六烯酰基(C22:6，全顺式-4,7,10,13,16,19)、十八碳三烯酰基(C18:3，全顺式-9,12,15)和二十二碳五烯酰基(C22:5，全顺式-7,10,13,16,19)。
38.根据权利要求10所述的药物组合物，其中，R3-R5为甲基，使得所述多种生物活性磷脂包含磷脂酰胆碱(PC)成分；其中至少50％(w/w)的所述磷脂酰胆碱(PC)组分包含一种或多种选自由下述组成的组中的化合物及其药学上可接受的盐：
1-棕榈酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-α-亚麻酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-亚油酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-α-亚麻酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈油酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-鰶油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈油酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-奥斯邦德酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1,2-双油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-硬脂酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-硬脂酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-羟基-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，和
1-油酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱。
39.根据权利要求38所述的药物组合物，其中在1-棕榈酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱、1-α-亚麻酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱、1-棕榈油酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱和1-油酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱中的所述二十二碳六烯酰基是(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酰基。
40.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂包含磷脂酰胆碱(PC)成分，其中至少50％(w/w)的所述磷脂酰胆碱(PC)组分包含一种或多种选自由下述组成的组中的化合物及其药学上可接受的盐：
1-棕榈酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈油酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-硬脂酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，和
1-羟基-2-棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱。
41.根据权利要求10-40中任一项所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂包含鞘磷脂(SPH)组分，其中至少50％(w/w)的所述鞘磷脂(SPH)组分包含一种或多种选自由下述组成的组中的化合物：
N-棕榈酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱，
N-硬脂酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱，和
N-油酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱。
42.根据权利要求41所述的药物组合物，其中所述鞘磷脂(SPH)组分包含N-棕榈酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱。
43.一种药物组合物，包含：多种磷脂酰胆碱(PC)化合物和一种或多种药学上可接受的稀释剂、赋形剂和/或载体；其中至少50％(w/w)的所述磷脂酰胆碱(PC)化合物选自由下述组成的组：
1-棕榈酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-α-亚麻酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-α-亚麻酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈油酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-鰶油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈油酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-奥斯邦德酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-油酰基-2-亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-硬脂酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-羟基-2-棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，
1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，和
1-油酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；和
其药学上可接受的盐。
44.根据权利要求43所述的药物组合物，其中在1-棕榈酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱、1-α-亚麻酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱、1-棕榈油酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱和1-油酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱中的所述二十二碳六烯酰基是(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酰基。
45.根据权利要求43或44所述的药物组合物，还包含鞘磷脂(SPH)组分，其中所述鞘磷脂(SPH)组分包含一种或多种选自由下述组成的组中的化合物：
N-棕榈酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱，
N-硬脂酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱，和
N-油酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱。
46.根据权利要求45所述的药物组合物，其中至少50％(w/w)的所述鞘磷脂(SPH)组分包含N-棕榈酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱。
47.根据权利要求45所述的药物组合物，其中至少80％(w/w)的所述鞘磷脂(SPH)组分包含N-棕榈酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱。
48.根据权利要求45所述的药物组合物，其中至少90％(w/w)的所述鞘磷脂(SPH)组分包含N-棕榈酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱。
49.一种药物组合物，包含多种鞘磷脂(SPH)化合物和一种或多种药学上可接受的稀释剂、赋形剂和/或载体；其中至少50％(w/w)的所述鞘磷脂(SPH)化合物选自：
N-棕榈酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱，
N-硬脂酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱，和
N-油酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱。
50.根据权利要求49所述的药物组合物，其中所述鞘磷脂(SPH)组分包含N-棕榈酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱。
51.根据权利要求49所述的药物组合物，其中所述鞘磷脂(SPH)组分由N-棕榈酰基-D-赤型-鞘氨醇磷酸胆碱组成或基本上由其组成。
52.根据权利要求1-51中任一项所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂通过醇提取衍生自鸡蛋黄。
53.根据权利要求1-52中任一项所述的药物组合物，其中所述多种生物活性磷脂衍生自已经与活化的羧酸物质反应的鸡蛋黄。
54.根据权利要求53所述的药物组合物，其中所述羧酸是脂肪酸。
55.根据权利要求53所述的药物组合物，其中所述生物活性磷脂的衍生包括化学反应的鸡蛋黄的一次或多次色谱分开。
56.根据权利要求55所述的药物组合物，其中所述色谱分开包括中压硅胶色谱。
57.根据权利要求55所述的药物组合物，其中所述色谱分开用至少一个二氧化硅柱和所述柱的次优流速进行。
58.根据权利要求57所述的药物组合物，其中所述流速小于最佳流速的约80％。
59.根据权利要求57所述的药物组合物，其中所述流速小于最佳流速的约50％。
60.根据权利要求55-59中任一项所述的药物组合物，其中所述色谱分开用一种或多种包含氯仿的洗脱液进行。
61.根据权利要求60所述的药物组合物，其中所述色谱分开用至少两种不同的洗脱液进行。
62.根据权利要求61所述的药物组合物，其中所述至少两种洗脱液中的一种是碱性的，而所述至少两种洗脱液中的另一种是醇类的。
63.根据权利要求62所述的药物组合物，其中所述碱性洗脱液包括氢氧化铵。
64.根据权利要求62或63所述的药物组合物，其中所述醇类洗脱液包括甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇或其组合。
65.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2-(((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酰基)氧基)-3-(棕榈酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC1”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
66.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2(R)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基)氧基)-3-((Z)-十六碳-9-烯酰基)氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC2”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
67.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2((9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯酰基)氧基)-3-((Z)-十六碳-9-烯酰基)氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC3”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
68.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2,3-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基)氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC4”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
69.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2-(((9Z,12Z,15Z)-十六碳-9,12,15-三烯酰基)氧基)-3-(油酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC5”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
70.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2((5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯酰基)氧基)-3-(棕榈酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC6”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
71.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2((7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-7,10,13,16,19-五烯酰基)氧基)-3-(棕榈酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC7”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
72.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2((5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯酰基)氧基)氧基)-3-(油酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC8”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
73.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基)氧基)-3-(棕榈酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC9”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
74.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2-((Z)-十八碳-9-烯酰基)氧基)-3-((Z)-十六碳-9-烯酰基)氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC10”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
75.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基)氧基)-3-(油酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC11”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
76.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2-(((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酰基)氧基)-3-(硬脂酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC12”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
77.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯酰基)氧基)-3-(硬脂酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC13”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
78.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2-(油酰氧基)-3-(棕榈酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC14”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
79.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基)氧基)-3-(硬脂酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC15”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
80.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2,3-双(油酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC16”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
81.一种药物组合物，其包含有效量的(R)-2-(油酰氧基)-3-(硬脂酰氧基)丙基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“MPC17”)和有效量的(2S,3R,E)-2-十七烷酰氨基-3-羟基十八碳-4-烯-1-基(2-(三甲基氨基)乙基)磷酸酯(“SPH1”)与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
82.根据权利要求65-81中任一项所述的药物组合物，其中所述有效量包含约1mg至约2000mg。
83.根据权利要求65-81中任一项所述的药物组合物，其中所述有效量包含约10mg至约1200mg。
84.根据权利要求65-81中任一项所述的药物组合物，其中所述有效量包含约100mg至约1000mg。
85.根据权利要求65-84中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物是口服剂型的形式。
86.根据权利要求85所述的药物组合物，其中所述口服剂型是胶囊形式。
87.一种治疗有此需要的人类患者的增殖性疾病的方法，包括给所述患者施用治疗有效量的根据权利要求1-82中任一项所述的药物组合物。
88.根据权利要求87所述的方法，其中所述增殖性疾病是癌症。
89.根据权利要求87所述的方法，其中所述增生性疾病是膀胱癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、食道癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、甲状腺癌或子宫癌。
90.根据权利要求87所述的方法，其中所述治疗有效量包括每日约100mg至约10g。
91.根据权利要求87所述的方法，其中所述药物组合物是口服给药。
92.根据权利要求91所述的方法，其中所述药物组合物是胶囊形式。
93.一种治疗有此需要的人类患者的炎症的方法，包括给所述患者施用治疗有效量的根据权利要求1-82中任一项所述的药物组合物。
94.一种从蛋黄中提取混合物生物活性磷脂的方法，包括通过硅胶色谱法和/或中压色谱法从所述蛋黄中分离所述混合物。
95.根据权利要求94所述的方法，其中所述色谱法用二氧化硅柱进行，并且流速对于所述柱尺寸是次优的。
96.根据权利要求95所述的方法，其中所述流速小于最佳流速的约80％。
97.根据权利要求95所述的方法，其中所述流速小于最佳流速的约50％。
98.根据权利要求94-97中任一项所述的方法，其中所述色谱法用一种或多种包含氯仿的洗脱液进行。
99.根据权利要求94-98中任一项所述的方法，其中所述色谱法用至少两种不同的洗脱液进行。
100.根据权利要求99所述的方法，其中所述至少两种洗脱液中的一种是碱性的，而所述至少两种洗脱液中的另一种是醇类的。
101.根据权利要求100所述的方法，其中所述碱性洗脱液包括氢氧化铵。
102.根据权利要求100或101所述的方法，其中所述醇类洗脱液包括甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇或其组合。
103.根据权利要求94-102中任一项所述的方法，还包括用包含氯仿的溶液提取所述分离的级分。
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