CZ280686B6 - N-acylované fosfolipidy typu 1-0-alkyl-sn-glycero -3-fosfoethanolaminů a způsob jejich semisyntetické přípravy a použití - Google Patents

Abstract

Způsob semisyntetické přípravy N-acylovaných fosfolipidů typu 1-0-alkyl-sn-glycero-3-fosfo- ethanolaminů obecného vzroce I |- O(CH.sub.2.n.)n.sup.H.n. RO -| |- OPO(OH)O(CH.sub.2.n.)gNHCOR.sup.1 .n.(I) kde R je vodík nebo R.sup.2.n.CO, R.sup.1 .n.a R.sup.2 .n.jsou stejné nebo navzájem rozdílné radikály odvozené od uhlovodíku s 2 až 30 atomy uhlíku a n = 14 - 22, který spočívá v tom, že fosfatidylethanolaminy živočišného původu s výhodou hydrogenované nebo směs fosfolipidů živočišného původu obsahující fosfatidylethanolaminy výhodně hydrogenované acylují acylačním činidlem, jako je například směs karboxylové kyseliny a kondenzačního činidla nebo chlorid, anhydrid, aktivní ester, aktivní amid této kyseliny a následně při teplotách -40 až + 10 .sup.o.n.C se deacylují působením báze, načež se produkt z reakční směsi izoluje, například chromatograficky a popřípadě acyluje na 2-0 glyrerolové jednotky.ŕ

Description

(57) Anotace:

N-acylované fosfolipidy typu 1-O-alkyl-sn-glycero-3-fosfoethanolaminů obecného vzorce I kde R Je vodík nebo R²CO, R^{* 1} a R² jsou stejné nebo navzájem rozdílné radikály odvozené od uhlovodíku s 2 až 30 atomy uhlíku a n = 14 až 22. Způsob Jejich přípravy spočívá v tom, že se fosfatidylethanolaminy živočišného původu s výhodou hydrogenované nebo směs fosfollpldů živočišného původu obsahující fosfatldylethanolamlny výhodně hydrogenované acylují acylačním činidlem, jako je například směs karboxylové kyseliny a kondenzačního činidla nebo chlorid, anhydrld, aktivní ester, aktivní amid této kyseliny a následně při teplotách -40 až + 10 °C se deacylují působením báze, potom se produkt z reakční směsi izoluje, například chromatograflcky a popřípadě acyluje na 2-0 glycerolové Jednotky.

O(CH2)_nH

OPO(OH)0(CH₂)2NHCOR| f

N-acylované fosfolipidy typu l-0-alkyl-sn-glycero-3-fosfoethanolaminů, způsob jejich semisyntetické přípravy a použití

Oblast techniky

Vynález se týká N-acylovaných fosfolipidů typu 1-0-alkyl-sn-glycero-3-fosfoethanolaminů, způsobu jejich semisyntetické přípravy a jejich využití.

Dosavadní stav techniky

N-acylovaný fosfolipid struktury l-0-alkyl-2-0-oleoyl-sn-glycero-3-fosfo(N-palmitoyl)ethanolamin je znám jako hlavní účinná složka biopreparátu cACPL (J. Kára et al.: Neoplasma 33, 187 až 205 (1986)). Izolace uvedené látky z embryonálních slepičích vajec je popsána v čs. AO 252 177. Překážkou možné průmyslové realizace postupu izolace podle tohoto autorského osvědčení je nízký obsah látky v embryonálních vejcích. Jiný známý způsob přípravy l-0-alkyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-fosfo(N-palmitoyl)ethanolaminu využívá směsi fosfatidylethanolaminů z vaječných žloutků jako výchozího materiálu pro izolaci l-0-alkyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolaminu. Tato čistá, izolovaná látka je potom převedena na požadovaný produkt účinkem palmitoylimidazolu (čs. patent č. 275 396).

Nevýhodou dosud známých postupů je, že nejsou využity plasmalogeny, které mohou být převedeny na AAPE (l-0-alkyl-2-0-acyl-sn-glycero-3-fosfoethanolaminy). Další nevýhodou je, že dochází k částečnému odbourání AAPE a také to, že produkt nežádoucího odbourání - lyso-AAPE - není využit.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu jsou N-acylované fosfolipidy typu l-0-alkyl-sn-glycero-3-fosfoethanolaminů obecného vzorce I

0(CH₂)nH opo(oh)o(ch₂)₂nhcor¹ (I) kde R je vodík nebo R²C0,

R¹ a R² jsou stejné nebo navzájem rozdílné radikály odvozené od uhlovodíku s 2 až 30 atomy uhlíku a n = 14 až 22.

Způsob jejich semisintetické přípravy spočívá v tom, že se fosfatidylethanolaminy živočišného původu s výhodou hydrogenované nebo směs fosfolipidů živočišného původu obsahující fosfatidylethanolaminy výhodně hydrogenované acylují acylačním činidlem, jako je například směs karboxylové kyseliny a kondenzačního činidla nebo chlorid, anhydrid, aktivní ester, aktivní amid této kyseliny a následně při teplotách -40 až +10 ’C se deacylují

-1CZ 280686 B6 působením báze, potom se produkt z reakční směsi izoluje, například chromatografíčky a popřípadě acyluje až na 2 glycerolové j ednotky.

V případech, kdy v obecném vzorci I R = R²CO jedná se o látky typu I_a; jestliže R = H jedná se o 1^.

Postup podle vynálezu je tedy založen na izolaci látek typu I_a a I_b z reakční směsi po bází-mediované deacylaci N-acylovaných fosfatidylethanolaminů a na případné reacylaci látky typu I_b na Ia·

Zdrojem fosfatidylethanolaminů mohou být vaječné žloutky, jateční materiál, například nervová tkáň, srdce, erytrocyty a tkáně mořských živočichů. Rostlinné zdroje přírodních fosfolipidů, například sojové boby, pro přípravy látek I_a,_b nejsou vhodné. Izolace fosfatidylethanolaminů z uvedených zdrojů se provádí podle konvenčních postupů (extrakce, chromatografická separace, hydrogenace v přítomnosti vhodného hydrogenačního katalyzátoru).

Hydrogenací se přítomné plasmalogeny kefalinového typu převedou na AAPE (l-0-alkyl-2-0-acyl-sn-glycero-3-fosfoethanolaminy), čímž se odstraní a současně se ve výchozích fosfolipidech zvýší podstatně obsah AAPE.

Hydrogenací lze provést výhodně například v ethanolickém nebo methanolickém roztoku za atmosferického tlaku vodíku za katalytického účinku paládia na aktivním uhlí nebo kysličníku platičitého za laboratorní nebo zvýšené teploty.

Deacylace N-acylovaných fosfatidylethanolaminů se provádí působením bází (jako jsou například hydroxidy alkalických kovů, akoholáty nebo kvarterní amoniové hydroxidy) na roztok těchto látek ve vhodném rozpouštědle za nízké nebo snížené teploty. S výhodou lze deacylaci provést hydroxidem nebo alkoholátem sodným nebo draselným v prostředí nižšího alkoholu obsahujícího 1 až 3 atomy uhlíku při teplotě -20 až 0 °C. Za uvedených podmínek dochází k chemickému odlišení subspecies směsi N-acylovaných fosfatidylethanolaminů. Zatímco 1-0,2-0-diacyl-sn-glycero-3-fosfo(N-acyl)ethanolaminy se deacylují za vzniku sn-glycero-3-fosfo-(N-acyl)ethanolaminů, látky typu I_a přítomné ve směsi N-acylovaných fosfatidylethanolaminů za těchto podmínek nereagují nebo poskytují 1^. V závislosti na volbě konkrétních reakčních podmínek je hlavním produktem bud I_a, nebo I_b· Za nižších teplot, koncentrací báze a při kratší reakční době je přednostním produktem látka typu I_a, za vyšších teplot, koncentrací báze a při delší reakční době vzniká 1^. Experimentální provedení N-acylace fosfatidylethanolaminů a následné deacylace lze uspořádat tak, že oba stupně se provedou v jednom stepu (v jedné reakční nádobě) tj. bez nutnosti izolace N-acylovaných fosfatidylethanolaminů jako meziproduktu.

-2CZ 280686 B6

Typ I_a izolovaný z reakční směsi po deacylaci N-acylovaných fosfatidylethanolaminů není jednotný pokud se týká substituentu R². Protože přírodní fosfatidylethanolaminy jsou tvořeny směsí sloučenin s různými délkami řetězců, obsahuje takto připravený I_a až na 2 glycerolové jednotky acylovanou směs homologických acylů, jejichž zastoupení závisí na použitém zdroji. Například, u produktu připraveného z vaječných fosfatidylethanolaminů dominuje mezi acyly v této poloze stearoyl, u produktu připraveného z fosfatidylethanolaminů izolovaných z nervové tkáně jsou zastoupeny především vyšší mastné kyseliny s 20 až 24 atomy uhlíku v řetězci .

Aby byl získán I_a s jednotnou požadovanou skupinou R²CO, provede se deacylace tak, že výlučným produktem je I_b. Potom se působením vhodného acylačního činidla (jakým je například směs karboxylové kyseliny a kondenzačního činidla, nebo chlodrid, anhydrid, aktivní ester a aktivní amid karboxylolvé kyseliny) v aprotickém organickém rozpouštědle převede na I_a, s výhodou v přítomnosti acylačního katalyzátoru, jakým je například dimethylaminopyridin nebo pyrrolidinopyridin s výhodou při teplotě 40 až 70 C. Jako aprotické rozpouštědlo se s výhodou používá tetrachlormethan, chloroform, tetrahydrofuran, dioxan a podobně.

Uvedené látky jsou biologicky aktivní a lze je s výhodou používat jako prostředek k léčení neoplastických onemocnění vyšších organismů, zvláště savčích. Léčením se pro účely tohoto vynálezu rozumí inhibice charakteristických znaků a příznaků onemocnění biologických objektů nesoucích nádory, zejména inhibice růstu nádoru, prodlouženi doby přežíváni biologického objektu, inhibice zvyšování počtu a růstu nádorových buněk. Nádorový růst může být pozorován bud klinicky, nebo v pokusech na experimentálních zvířatech, nebo na modelech in vitro, například na tkáních a buňkách připravených z nádorů. Stanovení inhibice nádorového růstu může být prováděno měřením nádorové hmoty nebo efektivněji měřením radioaktivity po inkorporaci radioaktivně značených látek přirozeného původu, jako jsou například aminokyseliny nebo nukleosidy, postupem podle M. Mika (Cancer Res. 39., 4242 (1979), Neoplasma 26, 449 (1979), ibid 16., 161 (1969)) modifikovaným podle J. Matterna (Human Tumors in Short Term Culture, red. P.P. Dendy, Academie Press 1976).

Jak vyplývá z testů provedených s uvedenými látkami na kulturách savčích nádorových buněk (příklad 8), jsou tyto látky schopny účinně narušovat jejich nukleosyntézu a proteosyntézu. Inhibice těchto základních metabolických procesů u nádorových buněk se všeobecně považuje za průkaz účinnosti antineoplastických prostředků.

Způsob přípravy látek podle vynálezu je jednoduchý, ekonomicky výhodný a dosahuje se jím výrazného zvýšení výtěžku produktů oproti známým postupům, přičemž produkty nemohou obsahovat balastní látky typu plasmalogenů. Způsobem podle vynálezu lze připravit N-acylované alkylfosfolipidy s definovanou délkou řetězců na glycerolové jednotky 2-0- a N-acylu.

-3CZ 280686 B6

Způsob výroby sloučenin podle vynálezu a ilustrace jejich biologické aktivity jsou blíže objasněny v následujících příkladech provedení; těmito příklady není omezen rozsah vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Materiál

Fosfatidylethanolaminy použité pro preparace byly získány z přírodních zdrojů (vaječné žloutky, hovězí mozky, hovězí erytrocyty) obvyklým způsobem (extrakce, acetonová precipitace expraktu, chromatografická separace) a hydrogenovány v ethanolu při 65 °C v přítomnosti PtO₂ za atmosférického tlaku vodíku.

Příklad 1

N-acylace fosfatidylethanolaminů chloridem kys. palmitové

14,1 g fosfatidylethanolaminů a 14 g K₂CO₃ se smíchá s 60 ml CHC1₃, směs se ohřeje, aby se fosfatidylethanolaminy rozpustily. Potom se za míchání přikape 10,5 g palmitoylchloridu a směs se míchá dalších 10 minut. Potom se reakční směs ochladí, vyloučené soli se odstraní filtrací a filtrát se odpaří. Z odparku se N-palmitoyl-fosfatidylethanolaminy izolují chromatograficky na koloně silikagelu za použití směsi chloroform-methanol-amoniak jako elučního systému. Výtěžek je 18,1 g látky ve formě NH₄ ⁺ soli, tj. 96 % theorie.

N-acylované fosfatidylethanolaminy připravené podle uvedeného postupu obsahují látky typu I_a v množství, které závisí na zdroji fosfatidylethanolaminů. Aby bylo možné srovnávat efektivnost postupů podle vynálezu s výsledky dosud známé metody přípravy (čs. patent č. 275 396), všechny dále uvedené příklady jsou založeny na materiálu z vaječných žloutků.

Příklad 2

Příprava l-0-alkyl-sn-glycero-3-fosfo(N-palmitoyl)ethanolaminu (Ι^, R^CO = palmitoyl)

2,01 g N-palmitoylethanolaminů připravených postupem podle příkladu 1 se rozpustí v 50 ml chloroformu, roztok se ochladí na 0 °C a přidá se roztok 1,0 g NaOH ve 40 ml methanolu. Reakční směs se míchá 2 h při 0 °C. Potom se přidá zředěná kys. chlorovodíková do neutrální reakce. Vyloučené soli se odfiltrují a filtrát se odpaří. Z odparku se produkt izoluje chromatograficky obdobně jako v příkladu 1. Výtěžek je 106,5 mg látky ve formě NH₄ ⁺ soli, tj. 5,30 % hmot, výchozích N-palmitoyl-ethanolaminů ^XH NMR(CDC1₃) δ 0.880(br t,6H,UJ-CH₃), 1.257(br s,54H,(-CH₂-)n), 1.51-1.63(m,4H, -CH₂-CH₂O a -CH₂-CH₂CO), 2.189(t,2H,-CH₂-CONH),

-4CZ 280686 B6

3.35-3.46(m,6H, -CH₂-O-CH₂ a -CH₂-NHCO), 3.76-3.96(m,4H,-CH₂~OPO (o-)o-ch₂-) ¹³C NMR a APT(CDC1₃) δ 14.06q(W-CH₃ ) , 22.69t, 25.88t, 26.14t,

29.39t, 29.60t, 29.65-29.96t, 31.95t((-CH₂-)n), 36.51t(-CH₂-CONH), 40.18t(CH₂-NHCO), 64.55t, 67.73t(-CH₂~ glycerolové jednotky),

69.64d(-CH(OH)-), 71.60t(PO₄-CH₂-CH₂NH), 71.89t(O-CH₂)n),

174.44s(CO-NH)

Elementár. složení: 63.60% C, 11.64% H, 3.68% N, 4.18% P (theorie: 63.56% C, 11.35% H, 3.80% N, 4.20% P)

Příklad 3

Příprava l-0-alkyl-2-0-linoleyl-sn-glycero-3-fosfo(N-palmitoyl)ethanolaminu (I_a, R^CO = palmitoyl, R = linoleyl) mg 1^, připraveného postupem podle příkladu 2 se smíchá s 1,5 ml 0,359 M roztoku anhydridu kys. linolové v tetrachlormethanu a přidá se 30 mg pyrrolidinopyridinu. Směs se míchá 4 h při 55 C, potom se rozpouštědlo odpaří a z odparku se I_a izoluje chromatografíčky obdobně jako v příkladu 1. Produkt se získá ve formě NH₄ ⁺ soli ve výtěžku 102 mg, tj. 83 % theorie.

^τΗ NMR(CDC1₃) δ 0,879(br t, 9H ,ttf*-CH₃) , 1.252(br s,

68H,(-CH₂-)n), 1.52(m,2H,-CH₂-CH₂O), 1.58(m,4H,-CH₂-CH₂CO), 2.046 (q,4H,-CH₂-CH=CH), 2.184(t,2H,-CH₂-CONH), 2.25-2.37 (m,2H, -CH₂COO), 2.765(t,2H,CH=CH-CH₂-CH=CH), 3.33-3.47 (m,4H,

O-CH₂-(CH₂)n a -CH₂-NHCO), 3.50-3.57(m,2H,O-CH₂-CH(OCOR)),

3.81-3.99(m,4H,-CH₂-OPO(O-)O-CH₂-), 5.09-5.18(m,1H,-CH(OCOR)-), 5.27-5.4 2(m,4H,-CH=CH-) ¹³C NMR a APT(CDC1₃) δ 14.llq(O7-CH₃), 22.70t, 25.85t, 26.lit,

29.38t, 29.40t, 29.62-29.92t, 31.95t((-CH₂~)n), 36.44t (-CH₂-CONH), 40.03t(-CH₂NHC0), 64.17t(-CH₂- glycerolové jednotky), 69.18t(PO₄-CH₂-CH₂NH), 71.85t(O-CH₂-(CH₂)n), 72.20d (CH₂-CH(OCOR)-CH₂), 127.87d, 128.08d, 1129.93d,

130.22d(-CH=CH-), 174.06s(-C0-0), 174.35s(-CO-NH)

-5CZ 280686 B6

Příklad 4

Příprava l-0-alkyl-2-0-acyl-sn-glycero-3-fosfo(N-palmitoyl)ethanolaminu (I_a, R^ICO=palmitoyl, R=acyl)

3,89 g N-palmitoylethanolaminů připravených postupem podle příkladu 1 se rozpustí ve směsi 400 ml chloroformu a 250 ml methanolu a roztok se ochladí na 0 °C. Při této teplotě se přidá za míchání roztok 22 g NaOH v 500 ml methanolu. Reakční směs se míchá 20 minut při +1 °C. Potom se přidá zředěná kys. chlorovodíková do neutrální reakce. Vyloučené soli se odfiltrují a filtrát se odpaří. Z odparku se produkt izoluje chromatografíčky obdobně jako v příkladu 1. Výtěžek je 132,5 mg látky ve formě NH₄ ⁺ soli, tj. 3,40 % hmotnosti výchozích N-palmitoylethanolaminů. Produkt není jednotný pokud se týká substituentu R. Majoritním acylem R v produktu je stearoyl.

^XH a C NMR spektra produktu jsou shodná se spektry produktu připraveného podle příkladu 3, s absencí signálů 2.05, 2.77, 5.27-5.42(¼) resp. 127.9, 128.1, 129.9, 130.2 (¹³C).

Příklad 5

Jednostupňová příprava l-0-alkyl-sn-glycero-3-fosfo(N-palmitoyl) ethanolaminu(I , R¹CO=palmitoyl)

1,20 g fosfatidylethanolaminů a 1,2 g K₂CO₃ se smíchá s 6 ml chloroformu a směs se zahřeje, aby se fosfatidylethanolaminy rozpustily. Potom se za míchání přikape 0,9 g palmitoylchloridu a reakční směs se míchá dalších 10 minut. Po uplynutí reakční doby se přidá 40 ml chloroformu, směs se ochladí na 0 °C a přidá se roztok 1,0 g NaOH ve 40 ml methanolu. Směs se míchá 2 hodiny při 0 °C, okyselí se zředěnou kys. chlorovodíkovou, vyloučené soli se odfiltrují a filtrát se odpaří. Z odparku se I_b izoluje chromatografíčky obdobně jako v příkladu 1. I_b se získá ve formě NH₄ ⁺ soli ve výtěžku 86 mg, tj. 7,17 % hmot, výchozích fosfatidylethanolaminů. Produkt je identický s produktem připraveným postupem podle příkladu 2.

Příklad 6

Příprava l-0-alkyl-2-0-acyl-sn-glycero-3-fosfo(N-palmitoyl)ethanolaminu (I_a, R^ICO=palmitoyl, R = acyl) podle postupu použitého v čs. patentu č. 275 396

-6CZ 280686 B6

5,5 g přírodních fosfatidylethanolaminů, izolovaných z 500 g vaječných žloutků pomocí konvenčních postupů, se rozpustí ve směsi 10 ml chloroformu a 50 ml bezvodého methanolu. K tomuto roztoku se při teplotě 4 °C přidá 50 ml IN NaOH v bezvodém methanolu a směs se nechá při této teplotě reagovat 20 minut. Potom se reakční směs rozloží přídavkem 6N HC1 (po částech, až do dosažení neutrální reakce), přidá se 50 ml destilované vody a 200 ml chloroformu. Směs se protřepe, organická fáze se oddělí a vodná fáze se reextrahuje 50 ml chloroformu. Spojené organické fáze se přefiltrují přes dvojitou vrstvu filtračního papíru a odpaří se. Odparek se rozpustí v 1 ml směsi chloroform-methanol 2:1, nanese se na 2 preparativní chromatografické desky (Měrek, 20x20 cm, tloušťka vrstvy silikagelu 2 mm) a desky se vyvinou v soustavě chloroform- methanol-25 % NH-j-voda 65:25:4:1 (v/v) . Zóny obsahující l-0-alkyl-2-0-oleoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolamin se vyškrábou a obsažená látka se extrahuje směsí chloroform-methanol 2:1. Odpařením se získá 139 mg čistého meziproduktu (výtěžek činí 2,5 % hmot, výchozích fosfatidylethanolaminů). K roztoku 139 mg čistého l-0-alkyl-2-0-oleoyl-sn-glycero-3-fosfo-ethanolaminu v 3 ml bezvodého pyridinu se přidá roztok 52 mg N,N-dimethyl-4-amino-pyridinu v 1 ml bezvodého pyridinu a 10 ml benzenu. Potom se přidá roztok N-palmitoylimidazolu připravený čtyřhodinovým zahříváním směsi 56 mg kys. palmitové a 34 mg karbonyldiimidazolu v 30 ml bezvodého benzenu při 40 °C. Reakční směs se zahřívá v uzavřené nádobě na 40 °C po dobu 20 hodin. Potom se organická rozpouštědla odpaří. Odparek se dosuší v proudu dusíku, rozpustí se v 1 ml směsi chloroform-methanol 2:1 a nanese se na preparativní chromatografickou desku (Měrek, 20x20 cm, tloušťka vrstvy silikagelu 2 mm). Deska se vyvine v systému chloroform-methanol-25% NH₃-voda 65:24:4:1 (v/v). Zóna obsahující chloroform-methanol 2:1. Odpařením extraktu se získá 156 mg I_a. Výtěžek činí 2,84 % hmot, výchozích fosfatidylethanolaminů. Produkt není jednotný pokud se týká substituentu R. Majoritním acylem R v produktu je oleoyl.

Příklad 7

Jednostupňová příprava l-0-alkyl-2-0-acyl-sn-glycero-3-fosfo(N-palmitoyl)ethanolaminu (I_a, R^ICO=palmitoyl, R = acyl)

2,00 g fosfatidylethanolaminů a 2,0 g K₂CO₃ se smíchá s 8 ml chloroformu a směs se zahřeje, aby se fosfatidylethanolaminy rozpustily. Potom se za míchání přikape 1,5 g palitoylchloridu a reakční směs se míchá dalších 10 minut. Po uplynutí reakční doby se přidá 350 ml směsi chloroform-methanol (4:1, v/v) a směs se ochladí. Při teplotě -0,5 °C se přidá roztok 11,2 g NaOH v 210 ml methanolu. Směs se míchá 20 minut při teplotě -0,5 ’C, okyselí se zředěnou kys. chlorovodíkovou, vyloučené soli se odfiltrují a filtrát se odpaří. Z odparku se I_a izoluje chromatograf icky obdobně jako v příkladu 1. I_a se získá ve formě NH₄ ⁺ soli ve výtěžku 88,5 mg, tj. 4,43 % hmot, výchozích fosfatidylethanolaminů. Produkt je identický s produktem připraveným postupem podle příkladu 4.

-7CZ 280686 B6

Příklad 8

Antineoplastická účinnost látek I_a, I_b in vitro

Mírou antineoplastické aktivity sledovaných látek je stupeň ovlivnění inkorporace [6^-3H]thymidinu do frakce z buněk Erlichova karcinomu nerozpustné v kys. trichloroctové. Hodnota EC₅₀ je koncentrace antineoplastického prostředku, která zapříčiňuje snížení hodnoty relativní rychlosti inkorporace radioaktivní značky na 50 % oproti hodnotám u neovlivněných kontrolních buněk. Výsledky experimentu shrnuje následující tabulka:

Inhibice nukleosyntézy buněk Erlichova karcinomu látka

EC₅₀(p.g/ml)

I_a (R=sat. acyl, R¹CO=palmitoyl)

I_b (R^ICO=palmitoyl)

I_a (R=linoleyl, R¹CO=palmitoyl)

2,5 >40

Analogicky uspořádaný pokus se směsí [U-¹⁴C]aminokyselin vede k následujícím výsledkům:

Inhibice proteosyntézy buněk Erlichova karcinomu látka EC₅₀^g/ml)

I_a (R=sat. acyl, R¹CO=palmitoyl)1,0

I_b (R¹CO=palmitoyl)10,3

I_a (R=linoleyl, R¹CO=palmitoyl)26

Ve všech případech je u sledovaných látek prokazatelná statisticky významná závislost sledovaného parametru na koncentraci v rozmezí 0,6-40 μg/ml.

Průmyslová využitelnost

Látky podle vynálezu jsou biologicky aktivní a lze je s výhodou používat jako prostředek k léčení neoplastických onemocnění vyšších organismů, zvláště savčích.

Claims (9)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. N-acylované fosfolipidy typu l-0-alkyl-sn-glycero-3-fosfoethanolaminů obecného vzorce I

   RO f— O(CH₂)nH — OPO(OH)O(CH₂)₂NHCOR¹ (I) kde R je vodík nebo R²CO,

   R¹ a R² jsou stejné nebo navzájem rozdílné radikály odvozené od uhlovodíku s 2 až 30 atomy uhlíku a n = 14 až 22.
2. 2. Způsob semisyntetické přípravy N-acylovaných fosfolipidů podle nároku 1, vyznačený tím, že se fosfatidylethanolaminy živočišného původu nebo směs fosfolipidů živočišného původu obsahující fosfatidylethanol- aminy acylují acylačním činidlem a následně při teplotách -40 až +10 °C se deacylují působením silné báze, potom se produkt z reakční směsi izoluje.
3. 3. Způsob podle nároku 2, vyznačený tím, že deacylace se provádí hydroxidem nebo alkoholátem sodným nebo draselným v prostředí nižšího alkoholu obsahujícího 1 až 3 atomy uhlíku při teplotě -20 až 0 ’C.
4. 4. Způsob podle nároku 2, vyznačený tím, že produkt se acyluje až na 2 glycerové jednotky.
5. 5. Způsob podle nároků 2 až 4, vyznačený tím, že acylačním činidlem je směs karboxylové kyseliny a kondenzačního činidla nebo chlorid, anhydrid, aktivní ester, aktivní amid této kyseliny.
6. 6. Způsob podle nároků 2 až 5, vyznačený tím, že acylace produktu až na 2 glycerové jednotky se provádí působením anhydridu karboxylové kyseliny v přítomnosti acylačního katalyzátoru, jakým je pyrrolidinopyridin nebo dimethylaminpyridin v prostředí aprotického organického rozpouštědla.
7. 7. Způsob podle nároku 2, vyznačený tím, že N-acylace fosfatidylethanolaminů a jejich deacylace bází se provádí v jednom kroku.
8. 8. Způsob podle nároku 2, vyznačený tím, že fosfatidylethanolaminy živočišného původu se N-acylují chloridem karboxylové kyseliny v přítomnosti uhličitanu alkalického kovu v prostředí aprotického organického rozpouštědla.
9. 9. Použití N-acylovaných fosfolipidů podle nároku 1 jako antineoplastického prostředku.