CN109402206A - 一种疣荔枝螺降压肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，属于生物技术领域，该方法中：提供疣荔枝螺浆液，上述浆液为疣荔枝螺去杂后的匀浆；提供至少一种蛋白酶对上述浆液进行酶解，得到酶解液；提供超声波辅助上述酶解；提供脱苦和纯化处理上述酶解液，干燥即得降压肽；上述疣荔枝螺降压肽的分子量为250~2500Da。本发明还提供一种疣荔枝螺降压肽的用途，即在食品、保健品和医药领域的用途。本发明提供的疣荔枝螺降压肽的制备方法，条件温和，蛋白质水解率高，产物得率和纯度高，酶解死角少；所得降压肽降压效果好，对ACE抑制效用好，感官体验优良，稳定性高，可作为功能因子用于食品、保健品和医药领域，增加了疣荔枝螺的附加值。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种疣荔枝螺降压肽的制备方法。
背景技术
疣荔枝螺俗称辣玻螺、辣螺，腹足纲、新腹足目、骨螺科，贝壳小型，呈纺锤形，壳质坚厚，系广温性底栖贝类。在中国沿海均有分布，为岩相潮间带最习见螺类之一，是舟山群岛的重要经济贝类。疣荔枝螺具有清热消毒，软坚散结及降血压作用。据报道，疣荔枝螺的蛋白含量占其湿重的19％作用，每100g软体部干品的氨基酸含量达68g，其中赖氨酸、天冬氨酸、精氨酸等含量都较高。
高血压是对人类健康危害严重的一种疾病，也是引起心血管疾病的主要因素，其危害是造成脑、心、肾等重要器官的损害。脑卒中和冠心病是高血压最严重的并发症。资料表明，世界各国的平均发病率为10～20％，每年因高血压死亡的人数达1200万。目前，我国现有高血压患者已超过1.2亿人口。因此，治疗和预防高血压病是当今社会十分重要的课题。
现阶段高血压病的医学研究主要集中在ACE的抑制物质(ACEI)方面。目前，大多用化学合成的ACEI如卡托普利(Captopril)、依那普利(Enalapril)、赖诺普利(Listinopril)等药物来治疗高血压。这类药物具有作用时间短，停药后血压易反弹等缺点，以及引起咳嗽、味觉丧失、肾脏损伤及血管神经性水肿等副作用。血管紧张素源(RAS)和激肽源(KXS)在血压调节方面是一对相互拮抗的体系，其平衡失调被认为是高血压发病的重要因素，而血管紧张素转化酶(ACE)则对两者起到调控作用，现在科学研究普遍认为，ACE活力升高破坏了正常体液中升压和降压体系的平衡，是导致高血压病的根本病因，所以要从根本上控制甚至治疗高血压病，必须要从一定程度上抑制ACE的分泌。
降血压肽(ACEIP)，又称为ACE抑制肽，可通过酶解食源蛋白获得，其突出优点是只对高血压患者起到降压作用，对血压正常者无降压作用，不会有降压过度现象发生。除降压功能，ACEIP食用安全性高，较化学降压药物(如赖诺普利、培哚普利等)副作用小，还具有易消化吸收、免疫促进、抗凝血和抗肿瘤等功能。基于食源蛋白降压肽具有的降压效果显著、没有毒副作用、安全性高、成本低、易吸收等特点，天然动物的蛋白质序列中的某些活性降压肽段可以通过降解的方法获得，从食物源中获取降压肽已成为目前研究的热点，也成为预防和治疗高血压的又一新的途径，这些发现促使人们决心从天然食品中生产安全性基料，而不必再为合成过程中产生的各种副作用而担忧。本发明申请人研究发现，以疣荔枝螺为原料，利用超声波辅助酶解技术制备降压肽的工艺研究目前还未见报道。
现有技术如授权公告号为CN10398037B的中国发明专利公开了一种大黄鱼鱼鳔降压肽及其制备方法和用途，其采用胰蛋白酶和碱性蛋白酶依次酶解由鱼鳔提取得粗蛋白，所得酶解物经离心、超滤和色谱精制，可得到降压肽，虽然上述方法中利用蛋白酶制备降压肽，三废少，属于清洁工艺，产品安全性高，但其中分离技术主要为树脂层析法、凝胶柱层析法，从产品开发的角度来看，开发成本过高，不利于工业化生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种条件温和、蛋白质水解率高、产物得率和纯度高、酶解死角少的疣荔枝螺降压肽的制备方法，所得降压肽降压效果好，对ACE抑制效用好，感官体验优良，稳定性高，可作为功能因子用于食品、保健品和医药领域，增加了疣荔枝螺的附加值。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，该方法：
1)提供疣荔枝螺浆液，上述浆液为疣荔枝螺去杂后的匀浆；
2)提供至少一种蛋白酶对上述浆液进行酶解，得到酶解液；
3)提供超声波辅助上述酶解；
4)提供脱苦和纯化处理上述酶解液，干燥即得降压肽；
上述疣荔枝螺降压肽的分子量为250～2500Da。该方法所得降压肽源于食物蛋白中，对ACE有显著抑制效果，对高血压者能起到降压作用，而对血压正常者无降压作用，同时还具有抗氧化、促消化、降血糖、增强免疫等功效，这些肽是用食用级酶酶解制得的，安全性高、无毒副作用，同时具有较高的热稳定性、水溶性等优点，可作为功能因子添加到食品、保健品和医药中，附加值更高。
作为优选，去杂步骤为：向疣荔枝螺肉中加入浓度为1.5～2％的NaOH溶液浸泡1～2h后，水洗至中性，然后再加入浓度为5～7％的异丙醇溶液浸泡2～3h，洗净后破碎，再置于4500～6000r/min的匀浆机中匀浆10～20min，得到疣荔枝螺浆液。疣荔枝螺肉中含有很多杂蛋白及脂肪，所以要先进行前处理，来去除这些杂蛋白、脂肪及色素等，可减少此类物质对后续疣荔枝螺蛋白酶解的影响。
进一步优选，去杂步骤中NaOH溶液与疣荔枝螺肉的料液比为1:5～7，异丙醇溶液与疣荔枝螺肉的料液比为1:7～9；上述异丙醇溶液中含有0.34～0.45mM的4-甲基-2-戊醇，其中左旋体重量占比为43～48％。4-甲基-2-戊醇能去除与目标产物无关的物质，如油脂、小分子水溶性物质、微量元素等，还能破坏蛋白内部与N-H相关的氢键平衡，减少维持蛋白构象的分子间和分子内缔结氢键，使蛋白分子致密结构变得疏松，柔化其刚性结构，使内部非极性基团暴露到分子表面，增加了酶接触位点，有助提高酶的水解效率，进而提高降压肽得率，而左旋结构能提高蛋白中β-折叠结构对酶的敏感性，将蛋白的亚基优先解离出来，可使酶解产物水解度和得率大大提高。
作为优选，蛋白酶为中性蛋白酶或碱性蛋白酶；酶解反应加酶量为50～120KU/100g，温度为40～50℃，pH为7～9，反应时间为8～10.5h。
作为优选，酶解前需对疣荔枝螺浆液进行灭菌处理，灭菌温度为70～85℃，时间为10～15min。
作为优选，超声波辅助条件为：采用正弦态超声波，频率为30～40kHz，功率为200mW/cm2，同时辅以转速震荡的处理方式，转速为100～200rpm。超声波具有强烈的分散作用和空化效应，能使蛋白质结构完整性发生改变，分子间出现空穴，结构变得疏松，使得隐藏在蛋白内部的氨基酸呈现出来，再在蛋白酶的作用下水解成多肽，可显著提高蛋白的水解率，并能减少单一酶解产生的死角，多肽的得率因此提高。
作为优选，脱苦处理步骤为：向经煮沸灭酶的酶解液中加入0.5～1.0wt％的粉末活性炭，于45～55℃下吸附15～20min，然后离心取上清液备用。在未水解的蛋白质中，疏水性氨基酸基团被包埋在分子的内部，不与味蕾接触，因而苦味不能被感觉，经过水解，肽键被打开，这些疏水性氨基酸暴露在分子表面，因而能与味觉细胞接触产生苦味。随着水解度的增加，疏水性氨基酸暴露的程度越来越大，苦味越来越强，通过活性炭使苦味脱出，从而获得更好的感官体验。
作为优选，纯化处理步骤为：将酶解上清液用孔径为10μm的微孔滤膜微滤除杂后，过截留分子量为250Da和2500Da的超滤膜分级超滤后，收集分子量为250～2500Da的组分，即得超滤酶解液。酶解产物中含有不同分子量大小的多肽、未分解的蛋白质及游离氨基酸等多种混合物，而具有降压活性的多肽物质一般集中在分子量较小的范围内，因此对上清液进行纯化，可以得到纯度和抑制率都较高的降压肽。
作为优选，干燥处理采用喷雾干燥，上述喷雾干燥的出风温度为150～180℃，进风温度为80～95℃，喷雾压力为0.3～0.5MPa。降压肽分子具有较优的热稳定性，且冰冻会使其降压效果减小，而高温则对降压效果影响不大。
本发明中还公开了利用上述方法制备的疣荔枝螺降压肽的用途，该降压肽可作为原料或辅料，应用于食品、保健品和医药领域。
本发明的有益效果为：
1)本发明降压肽源于食物蛋白中，对高血压者能起到降压作用，对ACE的抑制率高，同时还具有抗氧化、促消化、降血糖、增强免疫等功效，安全性高、无毒副作用，具有较高的热稳定性、水溶性等优点，可作为功能因子添加到食品、保健品和医药中，增加了疣荔枝螺的附加值；
2)本发明中降压肽的制备方法简单可行，条件温和，操作易控，蛋白质水解率高，所得降压肽产物得率和纯度高，且具有较高的抑制率和更优的感官体验；
3)本发明中对疣荔枝螺酶解前进行了去杂去脂的预处理，保证了酶解产物的纯度，同时对酶解产生有益效果，提高了酶解效率和降压肽得率；
4)本发明中采用超声波辅助酶解的技术方案，利用超声波使得隐藏在蛋白内部的氨基酸呈现出来，再在蛋白酶作用下水解成肽，可显著提高蛋白的水解率和肽的得率，并能减少单一酶解产生的死角。
本发明采用了上述技术方案提供一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细描述：
实施例1：
一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，该方法：
1)提供疣荔枝螺浆液，上述浆液为疣荔枝螺去杂后的匀浆；
2)提供至少一种蛋白酶对上述浆液进行酶解，得到酶解液；
3)提供超声波辅助上述酶解；
4)提供脱苦和纯化处理上述酶解液，干燥即得降压肽；
上述疣荔枝螺降压肽的分子量为250～2500Da。该方法所得降压肽源于食物蛋白中，对ACE有显著抑制效果，对高血压者能起到降压作用，而对血压正常者无降压作用，同时还具有抗氧化、促消化、降血糖、增强免疫等功效，这些肽是用食用级酶酶解制得的，安全性高、无毒副作用，同时具有较高的热稳定性、水溶性等优点，可作为功能因子、原料或辅料，添加到食品、保健品和医药中，附加值更高。
去杂步骤为：向疣荔枝螺肉中加入浓度为1.5％的NaOH溶液浸泡1h后，水洗至中性，然后再加入浓度为5％的异丙醇溶液浸泡2h，洗净后破碎，再置于4500r/min的匀浆机中匀浆10min，得到疣荔枝螺浆液。疣荔枝螺肉中含有很多杂蛋白及脂肪，所以要先进行前处理，来去除这些杂蛋白、脂肪及色素等，可减少此类物质对后续疣荔枝螺蛋白酶解的影响。
上述去杂步骤中NaOH溶液与疣荔枝螺肉的料液比为1:5，异丙醇溶液与疣荔枝螺肉的料液比为1:7；上述异丙醇溶液中含有0.35mM的4-甲基-2-戊醇，其中左旋体重量占比为43.5％。4-甲基-2-戊醇能去除与目标产物无关的物质，如油脂、小分子水溶性物质、微量元素等，还能破坏蛋白内部与N-H相关的氢键平衡，减少维持蛋白构象的分子间和分子内缔结氢键，使蛋白分子致密结构变得疏松，柔化其刚性结构，使内部非极性基团暴露到分子表面，增加了酶接触位点，有助提高酶的水解效率，进而提高降压肽得率，而左旋结构能提高蛋白中β-折叠结构对酶的敏感性，将蛋白的亚基优先解离出来，可使酶解产物水解度和得率大大提高。
蛋白酶优选为中性蛋白酶或碱性蛋白酶，本实施例中选用碱性蛋白酶，酶解反应加酶量为50KU/100g，温度为50℃，pH为9，反应时间为10h。
酶解前需对疣荔枝螺浆液进行灭菌处理，灭菌温度为70℃，时间为15min。
超声波辅助条件为：采用正弦态超声波，频率为30kHz，功率为200mW/cm2，同时辅以转速震荡的处理方式，转速为100rpm。超声波具有强烈的分散作用和空化效应，能使蛋白质结构完整性发生改变，分子间出现空穴，结构变得疏松，使得隐藏在蛋白内部的氨基酸呈现出来，再在蛋白酶的作用下水解成多肽，可显著提高蛋白的水解率，并能减少单一酶解产生的死角，多肽的得率因此提高。
脱苦处理步骤为：向经煮沸灭酶的酶解液中加入0.5wt％的粉末活性炭，于45℃下吸附20min，然后离心取上清液备用。在未水解的蛋白质中，疏水性氨基酸基团被包埋在分子的内部，不与味蕾接触，因而苦味不能被感觉，经过水解，肽键被打开，这些疏水性氨基酸暴露在分子表面，因而能与味觉细胞接触产生苦味。随着水解度的增加，疏水性氨基酸暴露的程度越来越大，苦味越来越强，通过活性炭使苦味脱出，从而获得更好的感官体验。
纯化处理步骤为：将酶解上清液用孔径为10μm的微孔滤膜微滤除杂后，过截留分子量为250Da和2500Da的超滤膜分级超滤后，收集分子量为250～2500Da的组分，即得超滤酶解液。酶解产物中含有不同分子量大小的多肽、未分解的蛋白质及游离氨基酸等多种混合物，而具有降压活性的多肽物质一般集中在分子量较小的范围内，因此对上清液进行纯化，可以得到纯度和抑制率都较高的降压肽。
干燥处理采用喷雾干燥，上述喷雾干燥的出风温度为170℃，进风温度为95℃，喷雾压力为0.3MPa。降压肽分子具有较优的热稳定性，且冰冻会使其降压效果减小，而高温则对降压效果影响不大。
本实施例中疣荔枝螺酶解产物的水解度为79.68％，根据体外ACE抑制率测定，抑制率可达79.57％，其IC50为0.83mg/mL。
实施例2：
一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，其具体步骤如下：
1)向疣荔枝螺肉中按料液比为1:7加入浓度为2％的NaOH溶液浸泡1h后，水洗至中性，然后再按料液比为1:9加入浓度为7％的异丙醇溶液浸泡2h，洗净后破碎，再置于6000r/min的匀浆机中匀浆10min，得到疣荔枝螺浆液，上述异丙醇溶液中含有0.43mM的4-甲基-2-戊醇，其中左旋体重量占比为48％；
2)将疣荔枝螺浆液于85℃下灭菌10min，然后调节浆液pH为7，向浆液中加入中性蛋白酶，加酶量为110KU/100g，于50℃的温度下反应8.5h，同时辅以频率40kHz、功率200mW/cm2的正弦态超声波，及转速200rpm的震荡处理，酶解完成后，煮沸灭酶；
3)向经煮沸灭酶的酶解液中加入1.0wt％的粉末活性炭，于50℃下吸附20min，然后离心取上清液备用；
4)将酶解上清液用孔径为10μm的微孔滤膜微滤除杂后，过截留分子量为250Da和2500Da的超滤膜分级超滤后，收集分子量为250～2500Da的组分，即得超滤酶解液；
5)对超滤酶解液进行喷雾干燥，喷雾出风温度为150℃，进风温度为80℃，压力为0.5MPa，干燥完成后，即得疣荔枝螺降压肽。
本实施例中疣荔枝螺酶解产物的水解度为81.35％，根据体外ACE抑制率测定，抑制率可达80.27％，其IC50为0.81mg/mL。
实施例3：
一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，其具体步骤如下：
1)向疣荔枝螺肉中按料液比为1:6加入浓度为1.5％的NaOH溶液浸泡1.5h后，水洗至中性，然后再按料液比为1:7加入浓度为6％的异丙醇溶液浸泡2.5h，洗净后破碎，再置于5000r/min的匀浆机中匀浆15min，得到疣荔枝螺浆液，上述异丙醇溶液中含有0.38mM的4-甲基-2-戊醇，其中左旋体重量占比为45％；
2)将疣荔枝螺浆液于80℃下灭菌10min，然后调节浆液pH为7.5，向浆液中加入中性蛋白酶，加酶量为80KU/100g，于45℃的温度下反应9h，同时辅以频率40kHz、功率200mW/cm2的正弦态超声波，及转速100rpm的震荡处理，酶解完成后，煮沸灭酶；
3)向经煮沸灭酶的酶解液中加入0.5wt％的粉末活性炭，于55℃下吸附15min，然后离心取上清液备用；
4)将酶解上清液用孔径为10μm的微孔滤膜微滤除杂后，过截留分子量为250Da和2500Da的超滤膜分级超滤后，收集分子量为250～2500Da的组分，即得超滤酶解液；
5)对超滤酶解液进行喷雾干燥，喷雾出风温度为160℃，进风温度为85℃，压力为0.4MPa，干燥完成后，即得疣荔枝螺降压肽。
本实施例中疣荔枝螺酶解产物的水解度为82.75％，根据体外ACE抑制率测定，抑制率可达80.75％，其IC50为0.75mg/mL。
实施例4：
一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，对该方法中超声酶解步骤进行优化，具体优化措施如下：将疣荔枝螺浆液于80℃下灭菌10min，然后调节浆液pH为7.5，向浆液中加入中性蛋白酶，加酶量为80KU/100g，再添加中性蛋白酶重量0.32％的L-酪氨酸二钠盐和0.11％的绿原酸，于45℃的温度下反应9h，同时辅以频率40kHz、功率200mW/cm2的正弦态超声波，及转速100rpm的震荡处理，酶解完成后，煮沸灭酶，L-酪氨酸二钠盐和绿原酸的加入可以协助和促使蛋白酶快速地找到蛋白两端的端肽，进行切除和断裂，避免酶解在超声波产生空间膨胀的影响下中断，保证酶解高效持续地进行，同时能优先将酶解产物中的亲水性基团暴露出来，使其快速溶于水中，避免酶解产物积累而对酶产生竞争性抑制，使得酶解效率进一步提高，且可抑制疏水性基团生成，从而避免蛋白过分水解产生苦味肽，提高降压肽的口感。
本实施例是在实施例3的基础上进行优化试验，其他步骤与实施例3中一致，制备得疣荔枝螺降压肽。
本实施例中疣荔枝螺酶解产物的水解度为83.44％，根据体外ACE抑制率测定，抑制率可达81.12％，其IC50为0.71mg/mL。
实施例5：
一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，其中去杂处理步骤如下：向疣荔枝螺肉中按料液比为1:6加入浓度为1.5％的NaOH溶液浸泡1.5h后，水洗至中性，然后再按料液比为1:7加入浓度为6％的异丙醇溶液浸泡2.5h，洗净后破碎，再置于5000r/min的匀浆机中匀浆15min，得到疣荔枝螺浆液，上述异丙醇溶液中未添加4-甲基-2-戊醇。
本实施例是在实施例3的基础上进行对比试验，其他步骤与实施例3中一致，制备得疣荔枝螺降压肽。
本实施例中疣荔枝螺酶解产物的水解度为73.41％，根据体外ACE抑制率测定，抑制率可达75.35％，其IC50为1.38mg/mL。
实施例6：
一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，该方法中酶解步骤不使用超声波辅助，只进行单一酶解。
本实施例是在实施例3的基础上进行对比试验，其他步骤与实施例3中一致，制备得疣荔枝螺降压肽。
本实施例中疣荔枝螺酶解产物的水解度为68.54％，根据体外ACE抑制率测定，抑制率可达71.54％，其IC50为1.73mg/mL。
实施例7：
疣荔枝螺降压肽的动物体试验
1、急性毒性试验
根据GB15193.3-2003《急性毒性试验》中最大耐受剂量法中的小鼠试验：取15g实施例4所制降压肽样品定容于100mL无菌纯水中，配成浓度为0.15g/mL的样品溶液。给药前，测量每KM小鼠的体重。随机选取生长正常的小鼠20只，以灌胃的方式给药，2.0mL/只，0.4mL/次只，12h内分5次给药。观察7天，7天后计算其死亡率并称重。
疣荔枝螺降压肽毒性分析：20只小鼠均无异常反应，也无死亡，体重明显增加，毛被正常，半数致死剂量(LD50)＞15g/kg体重。根据急性毒性分级，本发明中所制得的疣荔枝螺降血压肽属于实际无毒物质。
2、动物降压试验
随机取正常健康兔子16只，雌雄各半，分为A1组、A2组，每组8只。随机取高血压模型造模成功的兔子24只，雌雄各半，分为B1组、B2组、B3组，每组8只。分组与试验情况如下表1。
表1试验动物分组与试验情况
1)一次给药试验
以灌胃的方式按表1中剂量进行一次性给药，观察各个试验组兔子随时间变化的血压值，每隔2h测定一次，每次取5个数据，最终取平均值，各组血压值变化结果如下表2。
表2一次给药试验中兔子血压值变化结果
由上表可知，疣荔枝螺降压肽对正常血压者的血压基本不会产生影响。疣荔枝螺降压肽和卡托普利片在一次给药后，对高血压兔子的血压值影响明显，都呈现明显的下降趋势，不同之处在于：卡托普利片的药效在4h时最明显，血压值能降至最低，之后会逐渐上升；实施例4所得降压肽在2h时降压效果最明显，血压能达到最低值，之后开始上升；总体上看，卡托普利片比实施例4所得降压肽的降压效果好，血压回升也较慢，但合成药物存在明显的副作用问题；实施例6所得降压肽效果明显较实施例4所得降压肽效果差，主要是酶解中没有超声波辅助，使得降压肽的得率和抑制率受到影响。
2)长期给药试验
按表1中剂量，每天给药一次，连续给药4周，给药期间，不使用抗生素等其他药物，每隔一周测定一次，每次取5个数据，最终取平均值，各组血压值变化结果如下表3。
表3长期给药试验中兔子血压值变化结果
由上表可知，各组的试验兔子在连续给药1周后，血压均有明显的下降，且随着给药时间的延长，血压呈下降趋势；而从连续给药第二周开始，血压下降的趋势都明显减缓，下降幅度大幅度减小，且呈较平缓的下降趋势。说明长期服用疣荔枝螺降血压肽不仅有明显的降压作用，而且可以达到稳定血压的效果。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。
Claims (10)
1.一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，其特征在于：
1）提供疣荔枝螺浆液，所述浆液为疣荔枝螺去杂后的匀浆；
2）提供至少一种蛋白酶对上述浆液进行酶解，得到酶解液；
3）提供超声波辅助上述酶解；
4）提供脱苦和纯化处理上述酶解液，干燥即得降压肽；
所述疣荔枝螺降压肽的分子量为250~2500Da。
2.根据权利要求1所述的一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，其特征在于：所述去杂步骤为：向疣荔枝螺肉中加入浓度为1.5~2%的NaOH溶液浸泡1~2h后，水洗至中性，然后再加入浓度为5~7%的异丙醇溶液浸泡2~3h，洗净后破碎，再置于4500~6000r/min的匀浆机中匀浆10~20min，得到疣荔枝螺浆液。
3.根据权利要求2所述的一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，其特征在于：所述去杂步骤中NaOH溶液与疣荔枝螺肉的料液比为1:5~7，异丙醇溶液与疣荔枝螺肉的料液比为1:7~9；所述异丙醇溶液中含有0.34~0.45mM的4-甲基-2-戊醇，其中左旋体重量占比为43~48%。
4.根据权利要求1所述的一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，其特征在于：所述蛋白酶为中性蛋白酶或碱性蛋白酶；所述酶解反应加酶量为50~120KU/100g，温度为40~50℃，pH为7~9，反应时间为8~10.5h。
5.根据权利要求1或4所述的一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，其特征在于：所述酶解前需对疣荔枝螺浆液进行灭菌处理；所述灭菌温度为70~85℃，时间为10~15min。
6.根据权利要求1所述的一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，其特征在于：所述超声波辅助条件为：采用正弦态超声波，频率为30~40kHz，功率为200mW/cm2，同时辅以转速震荡的处理方式，转速为100~200rpm。
7.根据权利要求1所述的一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，其特征在于：所述脱苦处理步骤为：向经煮沸灭酶的酶解液中加入0.5~1.0wt%的粉末活性炭，于45~55℃下吸附15~20min，然后离心取上清液备用。
8.根据权利要求1所述的一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，其特征在于：所述纯化处理步骤为：将酶解上清液用孔径为10μm的微孔滤膜微滤除杂后，过截留分子量为250Da和2500Da的超滤膜分级超滤后，收集分子量为250~2500Da的组分，即得超滤酶解液。
9.根据权利要求1所述的一种疣荔枝螺降压肽的制备方法，其特征在于：所述干燥处理采用喷雾干燥；所述喷雾干燥的出风温度为150~180℃，进风温度为80~95℃，喷雾压力为0.3~0.5MPa。
10.权利要求1~9任一项所述方法制备的疣荔枝螺降压肽的用途，其特征在于：所述降压肽在食品、保健品和医药领域的用途。
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