CN109395055A - 一种具有修复关节软组织损伤作用的组合物及其制备方法 - Google Patents
一种具有修复关节软组织损伤作用的组合物及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109395055A CN109395055A CN201910011730.4A CN201910011730A CN109395055A CN 109395055 A CN109395055 A CN 109395055A CN 201910011730 A CN201910011730 A CN 201910011730A CN 109395055 A CN109395055 A CN 109395055A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- parts
- preparation
- composition
- collagen
- fructus rosae
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/73—Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
- A61K36/738—Rosa (rose)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/32—Burseraceae (Frankincense family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
- A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
- A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
- A61K38/014—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals from connective tissue peptides, e.g. gelatin, collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1664—Compounds of unknown constitution, e.g. material from plants or animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种具有修复关节软组织损伤作用的组合物及其制备方法,所述组合物主要由如下重量份的原料药所制成:胶原蛋白多肽70‑90份、玫瑰果籽提取物2‑6份、橄榄果提取物0.5‑1.0份、骨素1.0‑2.0份、乳酸钙0.5‑1.0份。所述的组合物的制备方法,包括以下步骤:按比例称取胶原蛋白多肽、玫瑰果籽提取物、橄榄果提取物、骨素、乳酸钙,进行预混合,将上述预混合后的物料粉碎,混合均匀,即得。与现有技术相比,本发明组合物用于修复关节软组织损伤,具有疗效好、无副作用等特点。其制备方法,简单快速、高效,易于操作。制备出的颗粒剂等携带方便,冲调后即可以口服,方便服用。
Description
技术领域
本发明属于关节炎治疗技术领域,具体涉及一种具有修复关节软组织损伤作用的组合物及其制备方法。
背景技术
目前中国磨损性关节炎患者人数已超1.5亿,每四个人中就有一个患有关节类疾病,而这一数据还在不断增加,对公众健康产生了重大影响。其中年龄的增长,营养物质的缺乏,肥胖超重,超负荷运动等都可能造成磨损性关节炎。不幸的是,截至目前很少有药物和治疗方案可以明显改善这类疾病。
目前市场上除了药物治疗外就是理疗,药物疗法只能减缓表面症状,不能阻止骨性关节炎的发展。非甾体类抗炎药(NSAIDs)和止痛药:有严重副作用(胃不适,胃肠道溃疡或出血)。部分病人可能出现过敏反应,包括皮疹、皮肤瘙痒和皮肤红斑。心血管系统有出现外周性水肿和心动过速的报道。中枢神经系统可见头痛和失眠。皮肤少见红斑和瘙痒;罕见注射部位疼痛。
目前还尚未有能完全根治骨性关节炎的药物。尽管多数药物能从表面上解除或减轻骨性关节炎患者的痛苦,但实质上是更加促进了关节软骨的降解。
中国发明专利(专利号:200610043717.X)和国际发明专利(PCT/CN2007/0001394)公开了一种抗关节炎的组合物,其包含胶原蛋白、氨基聚糖(硫酸软骨素、氨基葡萄糖、透明质酸)、其他糖蛋白等。然而,上述专利中的配料也只是简单混合,只是把软骨组织需要的成分进行添加,未能从人体自身的机能出发,而且配方中缺乏抗炎和补钙成分,这就在功效上大大折扣。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有修复关节软组织损伤作用的组合物。
本发明的另一个目的是提供所述组合物的制备方法。
技术方案:
一种具有修复关节软组织损伤作用的组合物,其主要由如下重量份的原料所制成:胶原蛋白多肽70-90份、玫瑰果籽提取物2-6份、橄榄果提取物0.5-1.0份、骨素1.0-2.0份、乳酸钙0.5-1.0份。
优选,其主要由如下重量份的原料药所制成:胶原蛋白多肽76.9份、玫瑰果籽提取物3.85份、橄榄果提取物0.77份、骨素1.54份、乳酸钙0.77份。
所述的组合物的制备方法,包括以下步骤:
按比例称取胶原蛋白多肽、玫瑰果籽提取物、橄榄果提取物、骨素、乳酸钙,进行预混合,将上述预混合后的物料粉碎,混合均匀,即得。
所述组合物制成的制剂,包含所述的具有修复关节软组织损伤作用的组合物,以及药学上可接受的辅料。
优选,所述制剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂或丸剂。
当所述制剂为颗粒剂时,所述颗粒剂包括如下重量份的原辅料:胶原蛋白76.9份、玫瑰果籽提取物3.85份、橄榄果提取物0.77份、骨素1.54份、乳酸钙0.77份、西柚果粉13.85份、蜂蜜粉1.54份。
当所述制剂为颗粒剂时,所述制剂的制备方法包括以下步骤:取胶原蛋白、玫瑰果籽提取物、橄榄果提取物、骨素和乳酸钙,加上辅料西柚果粉和蜂蜜粉,进行预混合,将上述预混合后的物料粉碎,混合均匀,然后按照常规方法制成颗粒剂。
本发明修复关节软组织损伤的组合物通过胶原蛋白(Collagen)、玫瑰果籽(Rosehip seed)提取物、橄榄果(Olive furit powder)提取物、骨素(Ostein)、乳酸钙(Calcium Lactate)的协同作用来实现修复软骨组织的损伤;
本发明组合物中胶原蛋白多肽是胶原蛋白酶水解的产物,主要由甘氨酸(Gly)、脯氨酸(Pro)和羟脯氨酸(HYP)组成。胶原蛋白多肽的氨基酸序列和分子量大小取决于原料来源和具体的生产工艺。肽值范围从500-13000道尔顿,人们发现胶原蛋白多肽几乎完全被小肠吸收。约10%的胶原蛋白片段以3~10kDa的大小的肽形式被摄取。这些多肽直接从胃肠道转移到血液中。本发明组合物应用时,胶原蛋白多肽主要积累在关节软骨中。其毒性(LD50>10g/kg)无毒,无诱变性,无副作用,过量服用并不会产生额外作用,目前还未发现与其他物质发生相冲。
含有多种营养成分,富含维生素C、饱和脂肪酸等物质,传统上被用来治疗各种疾病。近十年的临床研究中,发现玫瑰果除具有出色的效果,还对多种疾病有着非常显著的疗效。本发明组合物中玫瑰果籽提取物不仅自身具有修复关节软组织损伤的作用,同时,其能够与胶原蛋白多肽协同作用,两者同时使用,能够刺激细胞外基质生物合成及减少炎性和分解代谢过程。
本发明组合物中橄榄果提取物能够抗炎镇痛、羟基酪醇抗氧化、脂肪酸改善关节炎、能有效抑制5-LOX(5-脂肪氧化酶)&COX(环氧化酶),从而阻断PGs(前列腺素)和炎症反应。
乳酸钙用于预防和治疗钙缺乏症,骨质疏松,手足抽搐症,骨发育不全,佝偻病,绝经期妇女钙的补充。本发明组合物中乳酸钙与其他组分配合使用,能够起到有效修复关节软组织损失的作用。
骨素中硫酸软骨素含量>20%、Ⅱ骨胶原蛋白含量>60%,本发明组合物中应用骨素,可以减少疼痛及提升关节功能,显著缓解骨关节炎的症状,促进钙的吸收,并且可以缩小股骨-胫骨关节间隙。
有益效果:与现有技术相比,本发明组合物配伍合理,不仅各组分能充分发挥自身的抗炎和修复作用,同时玫瑰果籽提取物和胶原蛋白多肽同时使用,能够刺激细胞外基质生物合成及减少炎性和分解代谢过程,该组合物用于修复关节软组织损伤,具有疗效好、无副作用等特点。此外,其制备方法,简单快速、高效,易于操作。制备出的颗粒剂等携带方便,冲调后即可以口服,方便服用。
附图说明
图1为本发明组合物制成颗粒剂的生产工艺流程图;
图2为软骨细胞孵育3天后刺激胶原蛋白生成情况图(n=7),其中:对照组为空白(什么也不给);对照组+水解1型为水解胶原蛋白组;对照组+nutrifin motion为水解胶原蛋白+玫瑰果籽组合组;
图3为经胶原蛋白和玫瑰果籽处理后刺激ECM表达:软骨细胞经胶原蛋白和玫瑰果籽处理后,2型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖的表达显著增加。n>10的数据表示为平均值±SEM;*与未经处理的对照组相比,p<0.05(Mann-Whitney);
图4经胶原蛋白和玫瑰果籽处理后刺激ECM生物合成:经胶原蛋白和玫瑰果籽联合处理后,2型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖的合成显著增加。n>10的数据表示为平均值±SEM;*与未经处理的对照组相比,p<0.05(Mann-Whitney);
图5经胶原蛋白和玫瑰果子提取物处理后抑制炎性细胞因子:经胶原蛋白和玫瑰果籽处理后,软骨细胞中TNFα和IL-6的表达受到抑制。n>5的数据表示为平均值±SEM;*与未经处理的对照组相比,p<0.05(Mann-Whitney);
图6经胶原蛋白和玫瑰果籽处理后抑制基质金属蛋白酶:经胶原蛋白和玫瑰果籽处理后,软骨细胞中MMP-1和MMP-3的表达受到抑制。n>5的数据表示为平均值±SEM;*与未经处理的对照组相比,p<0.05(Mann-Whitney);
图7为不同浓度本发明组合物对软骨细胞C28/12增殖情况的显微镜观察;
图8为不同浓度本发明组合物对软骨细胞C28/12增殖的影响;
图9为人透明质酸(HA)标准曲线;
图10为不同浓度的本发明组合物对软骨细胞C28/12人透明质酸HA分泌的影响;
图11为人Ⅱ型胶原蛋白标准曲线;
图12为不同浓度的本发明组合物对软骨细胞C28/12人Ⅱ型胶原蛋白分泌的影响。
具体实施方式
以下通过对本发明具体实施方式的描述说明但不限制本发明。以下实施例中:玫瑰果籽提取物购自美町宝贸易(上海)有限公司;橄榄果提取物购自上海崴环贸易进出口有限公司;骨素(鸡胸软骨,食字号“硫酸软骨素”)购自上海辉文生物技术有限公司,胶原蛋白多肽购自德国GELITA AG。
实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
一种具有修复关节软组织损伤作用的颗粒剂(固体饮料),其由如下重量份的原辅料药所制成:胶原蛋白多肽76.9份、玫瑰果籽提取物3.85份、橄榄果提取物0.77份、骨素1.54份、乳酸钙0.77份、西柚果粉13.85份、蜂蜜粉1.54份。
所述具有修复关节软组织损伤作用的颗粒剂(固体饮料)的制备方法,包括以下步骤:
(1)配料预处理:
依据订单生产量和设备生产能力,将配方各组分各物料进行分锅称量;将分锅后的配方物料各组分进行预混合。
(2)粉碎:
将上述预混合后的分锅物料,进行粉碎(配80目筛网),得到均一粉末固体。
(3)制粒:
依据湿法制粒机的生产能力,将上述粉碎后的适量重量粉碎物料投入湿法制粒机中,开启设备,预先搅拌混合5分钟左右,慢速向其中加入适量95%乙醇搅拌制成软材;软材过20目摇摆颗粒机,得到湿颗粒。
关键控制点:95%乙醇的加入量约为粉体重量的20%~40%,95%乙醇加入的过程中应遵循少量、多次的原则(95%乙醇的单次加入量不超过粉体重量的5%),避免一次加入过量,造成软材过湿,给后续制粒和干燥造成困难。
(4)干燥:
依据沸腾干燥机的生产能力,将上述适量重量的湿颗粒置于沸腾干燥机中进行干燥,干燥过程进行物料水分的监控,干燥颗粒的水分小于5%。
干颗粒堆密度约为:0.30g/ml~0.35g/ml。
关键控制点:
(1)控制沸腾干燥的进风温度,进风温度应适宜,有利于湿颗粒的干燥,避免低熔点物质溶解。
(2)控制进气的压力,避免进气气流过大,造成湿颗粒在干燥的过程中被吹散成细粉;同时避免粉末在干燥过程的逸失;干燥收率应大于98%。
(3)利用快速水分测定仪对干燥过程进行水分的监控,确保干燥物料的水分应小于5%。
(5)整粒:
干燥合格的物料进行整粒(过20目),得到整粒后的均匀颗粒产品。
(6)混合:
将上述所得干颗粒产品进行总混,得到质量均一的产品,暂存、待包装。
产品取样,送检,测定:微生物(菌落总数、霉菌和酵母;大肠菌群),水分。
(7)分装:
将上述检验合格的产品利用自动颗粒包装机进行包装,包装方式:复合铝箔袋包装,三边封,每袋装量:6.5克;设置和复核生产日期打码应正确。
调整装量,进行制袋、灌装生产。
灌装过程应检查灌装后铝箔袋的密封性,应不漏气;装量差异应符合规定(JJF1070)。
(8)包装:
依据产品包装要求进行产品的外包装,外包装质量应符合该产品包装质量的要求。
成品检验、放行:
依据抽样规则,对包装后的成品进行取样,按该产品执行标准进行全项检验;检验合格后的产品依据产品审核放行管理的相关进行审核放行。
实施例2
组方:胶原蛋白多肽70份、玫瑰果籽提取物6份、橄榄果提取物1.0份、骨素2.0份、乳酸钙1.0份、西柚果粉13.85份、蜂蜜粉1.54份。
制备方法同实施例1。
实施例3
组方:胶原蛋白多肽90份、玫瑰果籽提取物2份、橄榄果提取物0.5份、骨素1.0份、乳酸钙0.5份、西柚果粉13.85份、蜂蜜粉1.54份。
制备方法同实施例1。
实验例4玫瑰果籽提取物和胶原蛋白多肽的协同作用
出乎意料的是,申请人发现同时给予胶原蛋白多肽和玫瑰果籽提取物可产生协同作用。联合使用时体外检出的胶原蛋白合成量比胶原蛋白单药高2倍,结果见附图2。
1、材料与方法:
在本研究中,联合使用了特定胶原蛋白水解产物(FORTIGELTM,德国GELITA AG)和经加工的水性玫瑰果籽提取物(nutriFinTM motion,德国FINZELBERG GmbH)
从软骨组织中分离得到成熟关节软骨细胞,在37℃、低氧(5%O2)条件下于培养基中培养这些细胞。细胞制备后3天,用0.5mg/mL FORTIGELTM和0.05mg/mL nutriFinTMmotion联合处理软骨细胞。在观察期结束时,定量测定软骨细胞的胶原蛋白和蛋白聚糖生物合成,并将结果与未经处理的对照细胞的相应数据进行比较。为证实对基质大分子合成的刺激作用,测定了聚集蛋白聚糖和2型胶原蛋白的mRNA表达情况。
而且,还检测了FORTIGELTM/nutriFinTM motion联用对抗炎细胞因子(TNFα、IL-6)和基质降解(MMP-1、MMP-3)的抑制作用。
2、结果:
联合补充FORTIGELTM/nutriFinTM motion对关节软骨细胞的细胞外基质合成产生了具有统计学意义(p<0.05)的刺激作用。与未经处理的对照细胞相比,2型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖的生物合成增加超过45%(图3和图4)。
而且,与未经处理的软骨细胞相比,在FORTIGELTM和nutriFinTM motion处理后,可观察到抗炎作用(图5)和对MMP-1和MMP-3表达(图6)的抑制作用。
3、结论:
结果表明,玫瑰果籽提取物和胶原蛋白多肽联合应用,具有刺激细胞外基质生物合成及减少炎性和分解代谢过程的作用。表明特定胶原蛋白水解产物与精制玫瑰果籽提取物联用对软骨细胞的细胞外基质维持有积极作用。
实施例5本发明组合物(小元肽)对软骨细胞C28/12增殖功效的研究
1.试验目的:
判断本发明组合物是否对软骨细胞C28/12的增殖起到促进作用
2.试验方法:
软骨细胞C28/12的培养:将分离得到的软骨细胞C28/12,转入T25细胞培养瓶中。
2.1设备与材料
2.1.1主要器材:生化培养箱(SANYO)、酶标仪(biorad)、倒置荧光显微镜(OLYMPUS)
2.1.2试验样品:本发明组合物(实施例1所制成的产品)
2.1.3试剂:软骨细胞C28/12,胎牛血清FBS(Gibco);DMEM培养基(Hyclone),CCK-8试剂盒,PBS缓冲液
2.2试验方法:
(1)细胞培养及样品处理
将分离得到的软骨细胞C28/12,转入T25细胞培养瓶中,37℃培养,待生长至80%左右将软骨细胞C28/12回收至离心管中,通过细胞计数仪计数,按照2.0~4.0x104cells/well接种至96孔细胞培养板中,培养24h。待测样品配置成相应浓度,0.22μm滤膜过滤除菌。
(2)实验分组
阴性对照:空白(不加本发明组合物)
样品浓度设置:本发明组合物1000μg/mL、100μg/mL、10μg/mL、1μg/mL
(3)取样品目标浓度加入软骨细胞C28/12中37℃培养箱中培养,于24H后加10μl的CCK-8,37℃培养箱继续孵育1-4h,检测OD450值。
3.试验结果:
本发明组合物对软骨细胞C28/12的增殖作用
实验结果中,把对照组的增值率设为100%,当本发明组合物浓度为1μg/mL时,软骨细胞C28/12增值率为102.68%,而浓度分别为10μg/mL,100μg/mL,100 0μg/mL时,增值率分别达到103.50%,104.05%,105.53%且细胞的增值率有显著性差异(P<0.05)结果见图7、图8。
实施例6本发明组合物(小元肽)对软骨细胞C28/12人透明质酸(HA)分泌的研究
1.试验目的:判断本发明组合物是否对软骨细胞C28/12的人透明质酸(HA)分泌起到促进作用
2.试验方法:
软骨细胞C28/12的培养:
将分离得到的软骨细胞C28/12,转入T25细胞培养瓶中,传代稳定后转入24孔板培养,ELISA试剂盒检测人透明质酸(HA)含量
2.2设备与材料
2.2.1主要器材:生化培养箱(SANYO)、酶标仪(biorad)、倒置荧光显微镜(OLYMPUS)
2.2.2试验样品:本发明组合物(实施例1所制成的产品)
2.2.3试剂:软骨细胞C28/12,胎牛血清FBS(Gibco);DMEM培养基(Hyclone),CCK-8试剂盒,PBS缓冲液,人透明质酸(HA)ELISA检测试剂盒(南京建成)
2.3试验方法
(1)细胞培养及样品处理
将分离得到的软骨细胞C28/12,转入T25细胞培养瓶中,37℃培养,待生长至80%左右将软骨细胞C28/12回收至离心管中,通过细胞计数仪计数,按照1.0~2.0x105cells/well接种至24孔细胞培养板中,培养24h。待测样品配置成相应浓度,0.22μm滤膜过滤除菌。
(2)实验分组
阴性对照:空白(不加本发明组合物和细胞)
样品浓度设置:本发明组合物1000μg/mL,100μg/mL、10μg/mL、1μg/mL
阳性对照:空白(不加本发明组合物)
(3)取样品目标浓度加入软骨细胞C28/12中37℃培养箱中培养,于24H后、取上清,3000转离心20min,收集上清液。
(4)按照试剂盒说明书,进行标准曲线的制备,同时按照说明书的步骤进行样品检测。
3.试验结果:
实验结果中,利用试剂盒中的标准品进行ELISA试验并测得标准曲线(图9),通过标准曲线计算各组细胞液中的人透明质酸(HA)含量。阴性对照组中未检出人透明质酸(HA),阳性对照组中人透明质酸(HA)为0.2098ng/ml,本发明组合物实验组中1,10,100,1000μg/mL添加量时,人透明质酸(HA)含量分别为0.2175ng/ml,0.3087ng/ml,0.3123ng/ml,0.3091ng/ml且实验组和阳性对照有显著性差异(P<0.05)结果见图10。
实施例7本发明组合物(小元肽)对软骨细胞C28/12人Ⅱ型胶原蛋白分泌的研究
1.试验目的:
判断本发明组合物是否对软骨细胞C28/12的人Ⅱ型胶原蛋白分泌起到促进作用
2.试验方法:
软骨细胞C28/12的培养:
将分离得到的软骨细胞C28/12,转入T25细胞培养瓶中,传代稳定后转入24孔板培养,ELISA试剂盒检测人Ⅱ型胶原蛋白含量
2.2设备与材料
2.2.1主要器材:生化培养箱(SANYO)、酶标仪(biorad)、倒置荧光显微镜(OLYMPUS)
2.2.2试验样品:本发明组合物(实施例1所制成的产品)
2.2.3试剂:软骨细胞C28/12,胎牛血清FBS(Gibco);DMEM培养基(Hyclone),CCK-8试剂盒,PBS缓冲液,人Ⅱ型胶原蛋白ELISA检测试剂盒(南京建成)
2.3试验方法
(1)细胞培养及样品处理
将分离得到的软骨细胞C28/12,转入T25细胞培养瓶中,37℃培养,待生长至80%左右将软骨细胞C28/12回收至离心管中,通过细胞计数仪计数,按照1.0~2.0x105cells/well接种至24孔细胞培养板中,培养24h。待测样品配置成相应浓度,0.22μm滤膜过滤除菌。
(2)实验分组
阴性对照:空白(不加本发明组合物和细胞)
样品浓度设置:本发明组合物1000μg/mL,100μg/mL、10μg/mL、1μg/mL
阳性对照:空白(不加本发明组合物)
(3)取样品目标浓度加入软骨细胞C28/12中37℃培养箱中培养,于24H后、取上清,3000转离心20min,收集上清液。
(4)按照试剂盒说明书,进行标准曲线的制备,同时按照说明书的步骤进行样品检测。
3.试验结果:
实验结果中,利用试剂盒中的标准品进行ELISA试验并测得标准曲线(图5),通过标准曲线计算各组细胞液中的人Ⅱ型胶原蛋白含量。阴性对照组中未检出人Ⅱ型胶原蛋白,阳性对照组中人Ⅱ型胶原蛋白为1.8005ng/ml,本发明组合物实验组中1,10,100,1000μg/mL添加量时,人Ⅱ型胶原蛋白含量分别为2.78ng/ml,3.055ng/ml,8.722ng/ml,6.462ng/ml,且实验组和阳性对照有显著性差异(P<0.05)结果见图6。
综上所述,本发明组合物会促进软骨细胞C18/12的增殖,当浓度为1000μg/ml时,增值率达到105.53%。同时本发明组合物也会促进软骨细胞C18/12Ⅱ型胶原蛋白和透明质酸(HA)的分泌,本发明组合物添加量为1000μg/ml时,Ⅱ型胶原蛋白分泌量达到3.998ng/ml,透明质酸分泌量高达到0.3091ng/ml。
Claims (7)
1.一种具有修复关节软组织损伤作用的组合物,其特征在于,其主要由如下重量份的原料所制成:胶原蛋白多肽70-90份、玫瑰果籽提取物2-6份、橄榄果提取物0.5-1.0份、骨素1.0-2.0份、乳酸钙0.5-1.0份。
2.根据权利要求1所述的具有修复关节软组织损伤作用的组合物,其特征在于,其主要由如下重量份的原料药所制成:胶原蛋白多肽76.9份、玫瑰果籽提取物3.85份、橄榄果提取物0.77份、骨素1.54份、乳酸钙0.77份。
3.权利要求1-2任意一项所述的组合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
按比例称取胶原蛋白多肽、玫瑰果籽提取物、橄榄果提取物、骨素、乳酸钙,进行预混合,将上述预混合后的物料粉碎,混合均匀,即得。
4.权利要求1-2任意一项所述的组合物制成的制剂,其特征在于,包含权利要求1~2任一项所述的具有修复关节软组织损伤作用的组合物,以及药学上可接受的辅料。
5.根据权利要求4所述的制剂,其特征在于,所述制剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂或丸剂。
6.根据权利要求5所述的制剂,其特征在于,当所述制剂为颗粒剂时,所述颗粒剂包括如下重量份的原辅料:胶原蛋白76.9份、玫瑰果籽提取物3.85份、橄榄果提取物0.77份、骨素1.54份、乳酸钙0.77份、西柚果粉13.85份、蜂蜜粉1.54份。
7.根据权利要求5所述的制剂,其特征在于,当所述制剂为颗粒剂时,所述制剂的制备方法包括以下步骤:取胶原蛋白、玫瑰果籽提取物、橄榄果提取物、骨素和乳酸钙,加上辅料西柚果粉和蜂蜜粉,进行预混合,将上述预混合后的物料粉碎,混合均匀,然后按照常规方法制成颗粒剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910011730.4A CN109395055A (zh) | 2019-01-07 | 2019-01-07 | 一种具有修复关节软组织损伤作用的组合物及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910011730.4A CN109395055A (zh) | 2019-01-07 | 2019-01-07 | 一种具有修复关节软组织损伤作用的组合物及其制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109395055A true CN109395055A (zh) | 2019-03-01 |
Family
ID=65462058
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910011730.4A Pending CN109395055A (zh) | 2019-01-07 | 2019-01-07 | 一种具有修复关节软组织损伤作用的组合物及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109395055A (zh) |
Citations (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005320264A (ja) * | 2004-05-06 | 2005-11-17 | Daiya Seiyaku Kk | 外用ゲル基剤及び容器充填型パッド材 |
WO2007142096A1 (ja) * | 2006-06-02 | 2007-12-13 | Organo Corporation | 誘導型一酸化窒素合成酵素の阻害剤、飲食品及び栄養補助食品 |
CN101516386A (zh) * | 2006-07-14 | 2009-08-26 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 包含玫瑰果和其它活性剂的用于治疗炎性病症的组合物 |
JP2010265183A (ja) * | 2009-05-12 | 2010-11-25 | Shodoshima Healty Land Kk | オリーブ果実エキス、該エキスを配合してなるヒト白血球エラスターゼ阻害剤及びオリーブ果実エキスの製造方法 |
CN101983722A (zh) * | 2010-10-20 | 2011-03-09 | 北京康比特体育科技股份有限公司 | 一种用于防治关节软组织损伤及并发炎症的组合物 |
US20110135721A1 (en) * | 2007-12-21 | 2011-06-09 | Finzelberg Gmbh & Co., Kg | Preparations with rosehip extracts, and method of producing rosehip extracts |
JP2012056887A (ja) * | 2010-09-09 | 2012-03-22 | National Institute Of Advanced Industrial Science & Technology | オリーブ糖脂質を含有する抗炎症剤 |
CN102573867A (zh) * | 2009-06-22 | 2012-07-11 | 格利达股份公司 | 用于治疗退行性关节病的组合物 |
CN102948732A (zh) * | 2011-08-22 | 2013-03-06 | 重庆市生物技术研究所有限责任公司 | 一种增加骨密度改善骨质疏松的保健食品 |
CN103300384A (zh) * | 2012-07-11 | 2013-09-18 | 张金荣 | 一种有益于关节的膳食补充剂及其制法 |
CN103494862A (zh) * | 2013-09-29 | 2014-01-08 | 西北师范大学 | 从油橄榄加工废液中提取橄榄多酚的方法 |
-
2019
- 2019-01-07 CN CN201910011730.4A patent/CN109395055A/zh active Pending
Patent Citations (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005320264A (ja) * | 2004-05-06 | 2005-11-17 | Daiya Seiyaku Kk | 外用ゲル基剤及び容器充填型パッド材 |
WO2007142096A1 (ja) * | 2006-06-02 | 2007-12-13 | Organo Corporation | 誘導型一酸化窒素合成酵素の阻害剤、飲食品及び栄養補助食品 |
CN101516386A (zh) * | 2006-07-14 | 2009-08-26 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 包含玫瑰果和其它活性剂的用于治疗炎性病症的组合物 |
US20110135721A1 (en) * | 2007-12-21 | 2011-06-09 | Finzelberg Gmbh & Co., Kg | Preparations with rosehip extracts, and method of producing rosehip extracts |
JP2010265183A (ja) * | 2009-05-12 | 2010-11-25 | Shodoshima Healty Land Kk | オリーブ果実エキス、該エキスを配合してなるヒト白血球エラスターゼ阻害剤及びオリーブ果実エキスの製造方法 |
CN102573867A (zh) * | 2009-06-22 | 2012-07-11 | 格利达股份公司 | 用于治疗退行性关节病的组合物 |
JP2012056887A (ja) * | 2010-09-09 | 2012-03-22 | National Institute Of Advanced Industrial Science & Technology | オリーブ糖脂質を含有する抗炎症剤 |
CN101983722A (zh) * | 2010-10-20 | 2011-03-09 | 北京康比特体育科技股份有限公司 | 一种用于防治关节软组织损伤及并发炎症的组合物 |
CN102948732A (zh) * | 2011-08-22 | 2013-03-06 | 重庆市生物技术研究所有限责任公司 | 一种增加骨密度改善骨质疏松的保健食品 |
CN103300384A (zh) * | 2012-07-11 | 2013-09-18 | 张金荣 | 一种有益于关节的膳食补充剂及其制法 |
CN103494862A (zh) * | 2013-09-29 | 2014-01-08 | 西北师范大学 | 从油橄榄加工废液中提取橄榄多酚的方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
BJÖRN FEISTEL 等: "A purified rose hip extract – effective in a new joint health concept", 《ZEITSCHRIFT FÜR PHYTOTHERAPIE》 * |
陈侯磬: "橄榄苦苷对破骨细胞分化以及骨吸收功能的影响", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Li et al. | Ovarian aging and osteoporosis | |
CN102318835B (zh) | 一种减少骨质流失的组合物及其制备方法 | |
CN102150836B (zh) | 氨糖多肽软胶囊 | |
US9687525B2 (en) | Cartilage product | |
CN102224896A (zh) | 用于增加人体免疫力及增加骨密度的保健食品及制备方法 | |
CN109364194A (zh) | 维持骨骼健康及治疗骨关节炎和关节的骨关节病的组合物 | |
CN108451979B (zh) | 一种具有辅助治疗前列腺癌的番茄红素复方制剂及其应用 | |
JP2006256968A (ja) | 骨代謝改善剤とその製造方法 | |
CN104605226A (zh) | 一种具有增加骨密度功能的保健品 | |
Feng et al. | Shell water-soluble matrix protein from oyster shells promoted proliferation, differentiation and mineralization of osteoblasts in vitro and vivo | |
CN109395055A (zh) | 一种具有修复关节软组织损伤作用的组合物及其制备方法 | |
Ruan et al. | The antiresoptive effects of recombinant Lingzhi-8 protein against retinoic acid-induced osteopenia | |
CN108653322A (zh) | 一种具有预防肿瘤转移的功能性保健品的组合物 | |
US11572421B2 (en) | Low molecular weight chondroitin sulfate, composition, preparation method and use thereof | |
Si et al. | Chinese Herbal Medicine Guilu Erxian Glue Inhibits Osteoclast Formation and Activity via Mc3t3-Derived Extracellular Vesicles in vitro. | |
CN105995980B (zh) | 一种具有体重管理作用的组合物及其制备方法 | |
CN113082059B (zh) | 一种防治骨质疏松症的组合物及其制备方法和应用 | |
CN114159451A (zh) | 一种抗骨质疏松药物组合物及其应用 | |
Wang et al. | Bushen Ningxin Decoction pharmacological serum promotes the proliferation and suppresses the apoptosis of murine osteoblasts through MAPK pathway | |
KR20120045122A (ko) | 관절염을 포함한 골 질환 예방 및 치료용 조성물 | |
JP2007302600A (ja) | イネ属植物材料由来の骨代謝改善用組成物とその製造方法 | |
CN109601880A (zh) | 一种增加骨密度的保健食品 | |
Morita et al. | Effect of the methanol extract of the Lion’s Mane mushroom, Hericium erinaceus, on bone metabolism in ovariectomized rats | |
Strus et al. | Study of Anti–Inflammatory Activity of Creams with Sapropel Extract | |
Yan et al. | Preparation and Characterization of Calcium‐Incorporated Rosa roxburghii Tratt and Its Efficacy on Bone Mineral Density in Rats |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190301 |