CN109394705A - 一种戈舍瑞林缓释微球冻干粉及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种冻干粉，尤其涉及一种水溶性多肽类药物缓释长效注射剂技术领域的，戈舍瑞林缓释微球冻干粉及其制备方法。冻干粉中的每个微球包括外壳，外壳包裹着内核，内核为温敏性凝胶，温敏性凝胶低于人体体温时流动性良好，在升温至体温后流动性降低进而胶凝，形成凝胶内核，外壳为生物可降解材料。本发明的优点效果：本发明包封率达到90%以上，释药由内部温敏凝胶内核和外部生物可降解缓释骨架材料共同控制，为双层释药系统。

Description

一种戈舍瑞林缓释微球冻干粉及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种冻干粉，尤其涉及一种水溶性多肽类药物缓释长效注射剂技术领域的，戈舍瑞林缓释微球冻干粉及其制备方法。
背景技术
戈舍瑞林是一种合成的、促黄体生成素释放激素的类似物，但与GnRH相比，其稳定性好、与GnRH受体亲和力强、半衰期长，其效价约是GnRH 的100倍。长期使用可抑制垂体的促黄体生成激素的分泌，从而引起男性血清睾酮和女性血清雌二醇的下降，停药后这一作用是可逆的。男性病人在第一次用药之后21日左右，睾酮浓度可降低到去势后的水平，在每28天用药1次的治疗过程中，睾酮浓度一直保持在去势后的浓度范围内。这种睾酮抑制作用可使大多数病人的前列腺肿瘤消退，症状改善。女性患者在初次用药后21日左右，血清雌二醇浓度受到抑制，并在以后每28天的治疗中维持在绝经后水平。这种抑制与激素依赖性的乳腺癌，子宫内膜异位症相关。
微球(microspheres)是指药物溶解或者分散在高分子材料基质中形成的微小球状实体，常见粒径一般在1～500μm之间，属于基质型骨架微粒。它用于药物载体的研究始于20 世纪70 年代中期，药物制成微球后，因其对特定器官和组织的靶向性及微粒中药物释放的缓释性，已经成为近年来新型释药系统研究的热点之一。生物可降解聚合物是指一些能够在水、酶作用下降解的高分子材料，他们作为微球、纳米粒的主要骨架材料，在多肽非经脉注射药物传递系统和长效注射剂领域都得到广泛的研究和应用。常用的生物可降解聚合物包括白蛋白、明胶、葡聚糖、淀粉、聚乳酸、聚内酯、聚乳酸－羟基乙酸、聚邻酯和聚酐等。目前最常用的为聚丙交酯（ployLactide）、聚丙交酯/乙交酯（poly Lactide -co-glycolide， PLCG）、聚乳酸（ploy lactic acid，PLA）、聚乳酸/羟基乙酸（poly lactic-co-glycolic acid，PLGA）、聚羟丁酸、聚己内酯（PCL）等。其中乳酸/羟基乙酸共聚物(PLGA)在体内能完全降解为乳酸和乙酸，再经过三羧酸循环转化为水和二氧化碳排至体外，其无毒且能在体内缓慢降解，大大改进了药物的输送方式，延长了药物释放时间，使药物达到了可控释放，因而提高了药效，保证了机体的安全。PLGA已经被美国FDA批准为可用于人体的药物输送系统载体材料，被广泛用于缓释长效注射剂的研究中。PLGA是由乳酸和羟基乙酸按一定比例聚合而成，可以通过调节PLGA分子量(Mw)、乳酸(LA)和羟基乙酸(GA)的比例，得到不同降解速率的载体材料。PLGA通过材料的表面融蚀和内部蚀解两种机制控制药物释放。缓释微球是以生物可降解聚合物为载体材料制成的微球，通过微球内部的孔道及高分子材料自身的融蚀降解，使药物通过扩散等方式在一定时间内，以恒定速率释放到环境中，来控制蛋白质在体内外的释放行为，达到缓慢释放的效果。最常见的缓释微球是使用生物可降解材料制备的PLGA微球。PLGA微球作为生物可降解型缓控释或定向给药体系的主要剂型早已成为国内外研究的重点，由于PLGA无毒、无刺激、无致癌性，同时又具有生物相容性和生物降解性，因此在缓控释或定向给药体系领域中应用极为广泛。PLGA微球体系能够控制微球大小、延缓药物降解、延长药物释放时间、靶向释放、降低药物毒性和刺激性等。
1960 年，Wichterle等在Nature杂志上首次报道将水凝胶应用于药物释放系统以来，水凝胶就成为生物医用材料学的研究热点。我们日常接触较多的成功例子就是接触性眼镜，另外，人们也将其应用于药物缓释系统上，现已成功研制出控释、脉冲释放、触发式释放等新型药物传递系统，包括多种抗癌药物，增强免疫药物等。水凝胶能在水中吸收大量水分膨胀而不溶解，亲水性的药物溶解在凝胶内部，药物在网络结构中能够受到很好的保护。温度敏感的凝胶可以随着温度的变化，发生相转变：泊洛沙姆（F127）水溶液低温时为流动性的粘性液体，随着温度升高粘度增大，成为半固体状的凝胶，待温度降低后，又恢复液体状；相反，高浓度的明胶溶液在低温时可能转变成固态或半固态的凝胶。在本发明中，我们将水凝胶药物缓释系统载入到微球中，制备凝胶内核微球。药物的释放行为一方面受水凝胶系统影响，另一方面也受PLGA微球的控制。
目前，上市的戈舍瑞林长效注射剂剂型为一种长效的植入剂，作用时间可维持一个月或三个月。戈舍瑞林现有长效注射剂只有植入剂，该长效注射剂血药浓度较为平稳，药效明显，临床反应良好。但是现有缓释植入剂有以下缺陷：首先，该长效注射剂是植入剂需要特殊的设备，以及专业的人员进行给药。其次，植入剂对患者的创伤较大，所以顺应性较差。因此，开发醋酸戈舍瑞林缓释植入剂的改良长效注射剂是很有必要的。
目前，戈舍瑞林长效注射剂专利中所涉及的制备方法如：水包油包水法-冻干成球（专利号CN 104840429 A，CN 101721370A，US 2009/0123556 A1，WO 2006/123361 A2），水包油包固法-冻干成球（US 2016/0022584 A1），以及喷雾干燥法（CN 101380308 A，CN101380307 A）等。突释大、包封率低是微球剂型应用与制备水溶性药物过程中最常见的问题。用复乳法（W/O/W法）制备戈舍瑞林微球，活性成分容易从球内部向外扩散迁移，在球的表面形成很多孔道，大量孔洞会导致突释加剧并且微球本身降解速率加快。水包油包固法（S/O/W法）制备戈舍瑞林微球，需要将原料药与泊洛沙姆等药用辅料通过冻干、喷干、热熔挤出等方法制成内固相，步骤相对复杂。而喷雾干燥法制备负载水溶性多肽类药物的微球，突释较为严重。
发明内容
为了解决上述技术问题本发明提供一种戈舍瑞林缓释微球冻干粉及其制备方法、检测方法，目的是延长水溶性多肽药物的作用周期，提高患者的顺应性；可释药一个月或三个月的缓释型戈舍瑞林微球供皮下注射或肌肉注射给药。
为达上述目的本发明一种戈舍瑞林缓释微球冻干粉，冻干粉中的每个微球包括外壳，外壳包裹着内核，内核为温敏性凝胶，温敏性凝胶低于人体体温时流动性良好，在升温至体温后流动性降低进而胶凝，形成凝胶内核，外壳为生物可降解材料。
所述的温敏性凝胶由戈舍瑞林或戈舍瑞林盐与药学上可接收的其他辅料均匀混合，加水形成；微球粒径在20-90μm之间。
通过200目-500目标准筛组合筛分控制粒径的粒度范围，使微球粒径均在25-74μm限度内；戈舍瑞林盐为醋酸盐、盐酸盐、乳酸盐或柠檬酸盐，其中戈舍瑞林醋酸盐化学名称，结构式，分子式如下：
醋酸戈舍瑞林，分子量1329.47，分子式[C59H84N18O14·(C2H4O3)x x=1-2.4]
醋酸戈舍瑞林的结构式如下：
L-GLu-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-D-Ser(But)-L-Leu-L-Arg-L-Pro-AzgLy-NH2Acetate。
所述的药学上可接收的其他辅料为泊洛沙姆，或泊洛沙姆与聚乙二醇的混合物，或不同型号泊洛沙姆混合物；所述的泊洛沙姆为聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，由适当量的聚氧丙烯与适当量的聚氧乙烯共聚成不同亲水亲油值的化合物，泊洛沙姆型号为泊洛沙姆124、泊洛沙姆188、泊洛沙姆237、泊洛沙姆228、泊洛沙姆407，泊洛沙姆188、泊洛沙姆237、泊洛沙姆228、泊洛沙姆407，最优选泊洛沙姆188和泊洛沙姆407；泊洛沙姆的HLB值为0.5-30。
所述的生物可降解材料为丙交酯-乙交酯共聚物，其分子量为5000-70000道尔顿，释药一个月剂量优选5000-30000道尔顿，最优选10000道尔顿；释药三个月剂量优选40000-70000道尔顿，最优选50000道尔顿。
一种戈舍瑞林缓释微球冻干粉的制备方法，其特征在于制备包括以下步骤：
步骤1）将占微球总重10%-20%的戈舍瑞林或戈舍瑞林盐与占微球重量10%-20%的药学上可接收的其他辅料加水混合，2-6摄氏度条件下低温溶胀8-12小时形成凝胶，配成药物溶液A；将占微球总重60%-80%的丙交酯-乙交酯共聚物加二氯甲烷配成质量浓度为50mg/mL-800mg/mL的溶液B；
步骤2）将药物溶液A加入溶液B中，探头超声或高速剪切形成W/O型初乳，将初乳加入浓度在0.5%-5%的聚乙烯醇溶液中，高压均质或高速剪切形成W/O/W型复乳，初乳与聚乙烯醇溶液体积比在1:5-1:20之间；
步骤3）将盐溶液加入复乳中，减压蒸馏或低速搅拌除去有机溶剂，使微球固化；
步骤4）低速离心得到微球，将其水洗3次，冻干24小时；
步骤5）冻干后的微球200目-500目组合标准筛，辐照60Co-γ射线灭菌，微球无菌分装成实际载药量一个月缓释3.6mg或三个月缓释10.8mg剂量。
步骤2）中探头超声制备初乳，超声功率在15%-50%，优选20-40%，最优选30%；时间在2-6min之间，优选2-4min，最优选3min；高速剪切转速在6000-20000rpm之间，优选10000-15000rpm，最优选12000rpm；时间在2-5min之间，优选2.5-4.6min，最优选3min。
步骤3）加入盐溶液为氯化钠，醋酸钠，柠檬酸钠盐，浓度在1%-10%之间，优选2%-5%，最优选3%；使用减压蒸馏方法固化，温度在35-70℃之间，优选40-50℃；减压蒸馏时间在10-30min之间；使用低速搅拌方法固化，温度为20-50℃，搅拌时间在1-3小时之间。
一种戈舍瑞林微球冻干粉的检测方法，采用超高效液相色谱法：色谱柱：C18烷基键合相硅胶色谱柱，流动相为乙腈-水-磷酸，乙腈与水的比例为25:75，另加入0.5%磷酸防止色谱峰拖尾。流速0.3mL/min，检测波长220nm，柱温40℃，进样体积10μL。
本发明的优点效果：本发明包封率达到90%以上，释药由内部温敏凝胶内核和外部生物可降解缓释骨架材料共同控制，为双层释药系统。首日内突释低于1%，通过控制丙交酯-乙交酯共聚物的分子量可达到缓释时间一个月至三个月的效果，大大减少水溶性多肽类药物的给药次数，提高病人的顺应性，方便患者用药，适合临床上的推广应用。本发明提供的戈舍瑞林缓释微球采用皮下或肌肉注射。应用本发明中公开的超高效液相检测方法，对戈舍瑞林含量测定，特异性高，出峰时间较高效液相色谱法缩短了5倍，大大提高了检测释放及包封率的效率。本发明所述微球在保证90%以上包封率的同时，可将实际载药量提高至20%以内，而现有专利中S/O/W法制备的微球实际载药量为10%以下，在体外释药行为方面，本发明中所述的微球体外释放平台期较短。
本发明中涉及的载药量、包封率计算公式如下：载药量=微球中药量/微球重×100%。包封率=实际含药量/理论含药量×100%。
附图说明
图1为本发明涉及的醋酸戈舍瑞林的结构式。
图2 为本发明实施例1所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的一个月的体外累积释放图。
图3为本发明实施例2所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的一个月的体外累积释放图。
图4为本发明实施例3所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的一个月的体外累积释放图。
图5为本发明实施例4所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的一个月的体外累积释放图。
图6为本发明实施例5所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的一个月的体外累积释放图。
图7为本发明实施例6所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的三个月的体外累积释放图。
图8为本发明实施例6所制得的戈舍瑞林微球样品与现有专利S/O/W法制得的微球样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的三个月的体外累积释放图。
图9为本发明实施例7所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的三个月的体外累积释放图。
图10为本发明实施例8所制得的戈舍瑞林微球冻干样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的三个月的体外累积释放图。
图11为本发明实施例1-5所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在大鼠体内得到的一个月释放图。
图12为本发明实施例6-7所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在大鼠体内得到的三个月释放图。
图13为本发明微球结构示意图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图，详细说明本发明的技术方案。
实施例1
称取100mg醋酸戈舍瑞林，150mg泊洛沙姆188，50mg聚乙二醇4000溶于0.6mL水，泊洛沙姆的HLB值为11，4摄氏度条件下低温溶胀10小时形成凝胶，作为药物溶液A。称取0.8g丙交酯-乙交酯共聚物（分子量为5000道尔顿）溶解于5mL二氯甲烷作为溶液B。药物溶液A加入溶液B中，冰水浴下高速剪切形成初乳，高速剪切转速为12000rpm，时间3min；将初乳倒入100mL 3%聚乙烯醇溶液中，高速剪切形成复乳，高速剪切转速为15000rpm，时间4min。复乳倒入200mL 5% NaCl溶液中，于40℃下减压蒸馏30min，离心，水洗三次，冻干24小时得到微球，微球粒径均在20-90μm，冻干后的微球过200目、400目和500目组合标准筛得到微球粒径均在25-74μm限度内，用60Co-γ射线灭菌，无菌分装一个月缓释3.6mg剂量。每月一个剂量皮下注射一次。该制剂载药量9.09%，包封率90.04%，首日突释2.96%。
制得的微球冻干粉中每个微球包括外壳1，外壳包裹着内核2，内核为温敏性凝胶，温敏性凝胶低于人体体温时流动性良好，在升温至体温后流动性降低进而胶凝，形成凝胶内核，外壳为生物可降解材料。戈舍瑞林醋酸盐化学名称，结构式，分子式如下：
如图1所示醋酸戈舍瑞林，分子量1329.47，分子式[C59H84N18O14·(C2H4O3)x x=1-2.4]
醋酸戈舍瑞林的结构式如下：
L-GLu-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-D-Ser(But)-L-Leu-L-Arg-L-Pro-AzgLy-NH2Acetate。
所述实例1所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的一个月的体外累积释放如图2所示。
实施例2
称取120mg醋酸戈舍瑞林，110mg泊洛沙姆188，50mg泊洛沙姆407，溶于0.9mL水，泊洛沙姆的HLB值为5，5摄氏度条件下低温溶胀8小时形成凝胶，作为药物溶于A。称取1.2g丙交酯-乙交酯共聚物（分子量为10000道尔顿)溶解与5mL二氯甲烷作为溶液B。药物溶液A加入溶液B中，冰水浴下高速剪切形成初乳，高速剪切转速为10000rpm，时间4.6min；将初乳倒入100mL 5%聚乙烯醇溶液中，高速剪切形成复乳，高速剪切转速为20000rpm，时间2min。复乳倒入200mL 2%NaCl溶液中，于70℃下减压蒸馏10min，离心，水洗三次，冻干24小时得到微球，微球粒径均在20-90μm，冻干后的微球过200目、300目和500目组合标准筛得到微球粒径均在25-74μm限度内，用60Co-γ射线灭菌，无菌分装三个月缓释10.8mg剂量每三个月一个剂量肌肉注射一次。该制剂载药量8.11%，包封率95.71%，首日突释0.74%。
制得的微球冻干粉中每个微球包括外壳，外壳包裹着内核，内核为温敏性凝胶，温敏性凝胶低于人体体温时流动性良好，在升温至体温后流动性降低进而胶凝，形成凝胶内核，外壳为生物可降解材料。戈舍瑞林醋酸盐化学名称，结构式，分子式如下：
醋酸戈舍瑞林，分子量1329.47，分子式[C59H84N18O14·(C2H4O3)x x=1-2.4]
醋酸戈舍瑞林的结构式如下：
L-GLu-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-D-Ser(But)-L-Leu-L-Arg-L-Pro-AzgLy-NH2Acetate。
所述实例2所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的一个月的体外累积释放如图3所示。
实施例3
称取200mg醋酸戈舍瑞林，170mg泊洛沙姆237，20mg泊洛沙姆228溶于1mL水，泊洛沙姆的HLB值为20，2摄氏度条件下低温溶胀12小时形成凝胶，作为药物溶液A。称取1.6g丙交酯-乙交酯共聚物（分子量为30000道尔顿）溶解于5mL二氯甲烷作为溶液B。药物溶液A加入溶液B中，冰水浴下高速剪切形成初乳，高速剪切转速为6000rpm，时间5min；将初乳倒入100mL3%聚乙烯醇溶液中，高速剪切形成复乳，高速剪切转速为17000rpm，时间2.5min；复乳倒入200mL 3% NaCl溶液中，于35℃下减压蒸馏20min，离心，水洗三次，冻干24小时得到微球，微球粒径均在20-90μm，冻干后的微球过200目、250目和500目组合标准筛得到微球粒径均在25-74μm限度内，用60Co-γ射线灭菌，无菌分装一个月缓释3.6mg剂量，每一个月一个剂量肌肉注射一次。该制剂载药量10.05%，包封率92.43%，首日突释1.85%。
制得的微球冻干粉中每个微球包括外壳，外壳包裹着内核，内核为温敏性凝胶，温敏性凝胶低于人体体温时流动性良好，在升温至体温后流动性降低进而胶凝，形成凝胶内核，外壳为生物可降解材料。戈舍瑞林醋酸盐化学名称，结构式，分子式如下：
醋酸戈舍瑞林，分子量1329.47，分子式[C59H84N18O14·(C2H4O3)x x=1-2.4]
醋酸戈舍瑞林的结构式如下：
L-GLu-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-D-Ser(But)-L-Leu-L-Arg-L-Pro-AzgLy-NH2Acetate。
所述实施例3所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的一个月的体外累积释放如图4所示。
实施例4
称取250mg盐酸戈舍瑞林，200mg泊洛沙姆124，50mg泊洛沙姆407溶于1.2mL水，泊洛沙姆的HLB值为25，6摄氏度条件下低温溶胀8小时形成凝胶，作为药物溶液A。称取1.4g丙交酯-乙交酯共聚物（50/50，分子量为20000道尔顿）溶解于6mL二氯甲烷作为溶液B。药物溶液A加入溶液B中，冰水浴下探头超声形成初乳，超声功率在30%，时间在3min，将初乳倒入100mL0.5%聚乙烯醇溶液中，高速剪切形成复乳，高速剪切转速为8000rpm，时间3min。复乳倒入300mL 1% NaCl溶液中，于20摄氏度低速搅拌两小时固化，离心，水洗三次，冻干24小时得到微球，微球粒径均在20-90μm，冻干后的微球过200目、250目和800目组合标准筛得到微球粒径均在25-80μm限度内，用60Co-γ射线灭菌，无菌分装一个月缓释3.6mg剂量，每月一个剂量皮下一次。该制剂载药量13.15%，包封率90.23%，首日突释2.70%。
制得的微球冻干粉中每个微球包括外壳，外壳包裹着内核，内核为温敏性凝胶，温敏性凝胶低于人体体温时流动性良好，在升温至体温后流动性降低进而胶凝，形成凝胶内核，外壳为生物可降解材料。戈舍瑞林盐酸盐化学名称，结构式，分子式如下：
盐酸戈舍瑞林，分子量1305.5，分子式[C59H84N18O14·HCl]
盐酸戈舍瑞林的结构式如下：
L-GLu-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-D-Ser(But)-L-Leu-L-Arg-L-Pro-AzgLy-NH2’HCl。
所述实施例4所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的一个月的体外累积释放如图5所示。
实施例5
称取150mg乳酸戈舍瑞林， 200mg泊洛沙姆407，20mgPEG4000，溶于0.8mL水，泊洛沙姆的HLB值为2，6摄氏度条件下低温搅拌后于低温静置10h，作为药物溶液A。称取0.9g丙交酯-乙交酯共聚物（分子量为8000道尔顿）溶解于4mL二氯甲烷作为溶液B。冰水浴下探头超声形成初乳，超声功率在50%，时间在2min，将初乳倒入100mL 2%聚乙烯醇溶液中，探头超声形成复乳，超声功率在15%，时间在6min。复乳倒入150mL 10%醋酸钠溶液中，于50摄氏度低速搅拌1小时固化，离心，水洗三次，冻干24小时得到微球，微球粒径均在20-90μm，冻干后的微球过200目、250目和800目组合标准筛得到微球粒径均在25-80μm限度内，用60Co-γ射线灭菌，无菌分装三个月缓释10.8mg剂量，每三个月一个剂量皮下注射一次。该制剂载药量11.81%，包封率90.37%，首日突释1.84%。
制得的微球冻干粉中每个微球包括外壳，外壳包裹着内核，内核为温敏性凝胶，温敏性凝胶低于人体体温时流动性良好，在升温至体温后流动性降低进而胶凝，形成凝胶内核，外壳为生物可降解材料。戈舍瑞林醋酸盐化学名称，结构式，分子式如下：
乳酸戈舍瑞林，分子量1359.08，分子式[C59H84N18O14·(C3H6O3)x x=1-2.4]
乳酸戈舍瑞林的结构式如下：
L-GLu-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-D-Ser(But)-L-Leu-L-Arg-L-Pro-AzgLy-NH2. LacticAcid。
所述实施例5所制得的戈舍瑞林微球冻干粉在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的一个月的体外累积释放如图6所示。
实施例6
称取200mg戈舍瑞林，250mg泊洛沙姆407，溶于1mL水，泊洛沙姆的HLB值为0.5，5摄氏度条件下低温搅拌后于低温静置8h，作为药物溶于A。称取1.2g丙交酯-乙交酯共聚物（分子量为40000道尔顿)溶解与5mL二氯甲烷作为溶液B。冰水浴下探头超声形成初乳，超声功率20%，时间2min，将初乳倒入100mL 2%聚乙烯醇溶液中，探头超声形成复乳，超声功率40%，时间4min。复乳倒入200mL 7%柠檬酸钠盐溶液中，于40摄氏度低速搅拌3小时固化，离心，水洗三次，冻干24小时得到微球，微球粒径均在20-90μm，冻干后的微球过200目、250目和800目组合标准筛得到微球粒径均在25-80μm限度内，用60Co-γ射线灭菌，无菌分装三个月缓释10.8mg剂量，每三个月一个剂量肌肉注射一次。该制剂载药量12.12%，包封率91.71%，首日突释2.74%。
制得的微球冻干粉中每个微球包括外壳，外壳包裹着内核，内核为温敏性凝胶，温敏性凝胶低于人体体温时流动性良好，在升温至体温后流动性降低进而胶凝，形成凝胶内核，外壳为生物可降解材料。戈舍瑞林化学名称，结构式，分子式如下：
戈舍瑞林，分子量1269，分子式[C59H84N18O14]
戈舍瑞林的结构式如下：
L-GLu-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-D-Ser(But)-L-Leu-L-Arg-L-Pro-AzgLy-NH2。
所述实施例6所制得的戈舍瑞林微球冻干粉H7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的三个月的体外累积释放如图7所示。
实施例6所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品（Hydrogel）与现有专利（S/O/W）（专利号WO 2006/123361 A2）在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的三个月的体外累积释放对比图如图8所示。
实施例7
称取170mg柠檬酸戈舍瑞林，170mg泊洛沙姆188，50mg泊洛沙姆407溶于0.8mL水，泊洛沙姆的HLB值为30，5摄氏度条件下低温搅拌后于低温静置8h，作为药物溶液A。称取1.2g丙交酯-乙交酯共聚物（分子量为50000道尔顿）溶解于5mL二氯甲烷作为溶液B。冰水浴下探头超声形成初乳，超声功率20%，时间3min，将初乳倒入100mL 3%聚乙烯醇溶液中，探头超声形成复乳，超声功率25%，时间4min。复乳倒入150mL 8% NaCl溶液中，于35摄氏度低速搅拌2小时固化，离心，水洗三次，冻干24小时得到微球，微球粒径均在20-90μm，冻干后的微球过200目、250目和800目组合标准筛得到微球粒径均在25-80μm限度内，得到微球，用60Co-γ射线灭菌，无菌分装三个月缓释10.8mg剂量，每三个月一个剂量肌肉注射一次。该制剂载药量10.69%，包封率92.77%，首日突释1.34%。
制得的微球冻干粉中每个微球包括外壳，外壳包裹着内核，内核为温敏性凝胶，温敏性凝胶低于人体体温时流动性良好，在升温至体温后流动性降低进而胶凝，形成凝胶内核，外壳为生物可降解材料。柠檬酸戈舍瑞林化学名称，结构式，分子式如下：
柠檬酸戈舍瑞林，分子量1288.14，分子式[C59H84N18O14·(C6H8O7)x x=1-2.4]
柠檬酸戈舍瑞林的结构式如下：
L-GLu-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-D-Ser(But)-L-Leu-L-Arg-L-Pro-AzgLy-NH2.CitricAcid。
所述实施例7所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的三个月的体外累积释放如图9所示。
实施例8
称取300mg醋酸戈舍瑞林，172mg泊洛沙姆188，48mg泊洛沙姆407溶于0.8mL水，泊洛沙姆的HLB值为30，5摄氏度条件下低温搅拌后于低温静置8h，作为药物溶液A。称取1g丙交酯-乙交酯共聚物（分子量为70000道尔顿）溶解于3mL二氯甲烷作为溶液B。冰水浴下探头超声形成初乳，超声功率20%，时间3min，将初乳倒入100mL 3%聚乙烯醇溶液中，探头超声形成复乳，超声功率25%，时间4min。复乳倒入150mL 8% NaCl溶液中，于35摄氏度低速搅拌2小时固化，离心，水洗三次，冻干24小时得到微球，微球粒径均在20-90μm，冻干后的微球过200目、250目和800目组合标准筛得到微球粒径均在25-80μm限度内，得到微球，用60Co-γ射线灭菌，无菌分装三个月缓释10.8mg剂量，每三个月一个剂量肌肉注射一次。该制剂载药量19.73%，包封率92.77%，首日突释1.34%。
本发明实施例8所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中得到的三个月的体外累积释放如图10所示。
图11为本发明实施例1-5所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在大鼠体内得到的一个月释放图。图12为本发明实施例6和7所制得的戈舍瑞林微球冻干粉样品在大鼠体内得到的三个月释放图。
每个实施例制得的检测方法如下：采用超高效液相色谱法：色谱柱：C18烷基键合相硅胶色谱柱，流动相为乙腈-水-磷酸，乙腈：水=25:75，另加入0.5%磷酸改善峰拖尾。流速0.3mL/min，检测波长220nm，柱温40℃，进样体积10μL。
本发明形成核-壳双层控释的独特结构，内核为泊洛沙姆温敏凝胶，其作用为负载戈舍瑞林原料药，使其在内核部位缓慢释放。外壳为丙交酯-乙交酯共聚物组成的生物可降解控释壳层，利用自身的溶蚀控制原料药的释放，双层释药模型能达到药物平稳、长效释放的效果。本发明双层控释微球包封率达到90%以上，首日内突释低于3%，通过控制丙交酯-乙交酯共聚物的分子量可达到缓释时间一个月至三个月的效果，大大减少水溶性多肽类药物的给药次数，提高病人的顺应性，方便患者用药，适合临床上的推广应用。本发明提供的戈舍瑞林缓释微球采用皮下或肌肉注射。应用本发明中公开的超高效液相检测方法，对戈舍瑞林含量测定，特异性高，出峰时间较高效液相色谱法缩短了5倍，大大提高了检测释放及包封率的效率。

Claims (8)

1.一种戈舍瑞林缓释微球冻干粉，其特征在于冻干粉中的每个微球包括外壳，外壳包裹着内核，内核为温敏性凝胶，温敏性凝胶低于人体体温时流动性良好，在升温至体温后流动性降低进而胶凝，形成凝胶内核，外壳为生物可降解材料。
2.根据权利要求1所述的一种戈舍瑞林缓释微球冻干粉，其特征在于所述的温敏性凝胶由戈舍瑞林或戈舍瑞林盐与药学上可接收的其他辅料均匀混合，加水形成；微球粒径在20-90μm之间。
3. 根据权利要求2所述的一种戈舍瑞林缓释微球冻干粉，其特征在于通过200目-500目标准筛组合筛分控制粒径的粒度范围，使微球粒径均在25-74μm限度内；戈舍瑞林盐为醋酸盐、盐酸盐、乳酸盐或柠檬酸盐，其中戈舍瑞林醋酸盐化学名称，结构式，分子式如下：
醋酸戈舍瑞林，分子量1329.47，分子式[C59H84N18O14·(C2H4O3)x x=1-2.4]
醋酸戈舍瑞林的结构式如下：
L-GLu-L-Trp-L-Ser-L-Tyr-D-Ser(But)-L-Leu-L-Arg-L-Pro-AzgLy-NH2Acetate。
4.根据权利要求2所述的一种戈舍瑞林缓释微球冻干粉，其特征在于所述的药学上可接收的其他辅料为泊洛沙姆，或泊洛沙姆与聚乙二醇的混合物，或不同型号泊洛沙姆混合物；所述的泊洛沙姆为聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，由适当量的聚氧丙烯与适当量的聚氧乙烯共聚成不同亲水亲油值的化合物，泊洛沙姆型号为泊洛沙姆124、泊洛沙姆188、泊洛沙姆237、泊洛沙姆228、泊洛沙姆407，泊洛沙姆188、泊洛沙姆237、泊洛沙姆228、泊洛沙姆407，最优选泊洛沙姆188和泊洛沙姆407；泊洛沙姆的HLB值为0.5-30。
5.根据权利要求1所述的一种戈舍瑞林缓释微球冻干粉，其特征在于所述的生物可降解材料为丙交酯-乙交酯共聚物，其分子量为5000-70000道尔顿，释药一个月剂量优选5000-30000道尔顿，最优选10000道尔顿；释药三个月剂量优选40000-70000道尔顿，最优选50000道尔顿。
6.一种戈舍瑞林缓释微球冻干粉的制备方法，其特征在于制备包括以下步骤：
步骤1）将占微球总重10%-20%的戈舍瑞林或戈舍瑞林盐与占微球重量10%-20%的药学上可接收的其他辅料加水混合，2-6摄氏度条件下低温溶胀8-12小时形成凝胶，配成药物溶液A；将占微球总重60%-80%的丙交酯-乙交酯共聚物加二氯甲烷配成质量浓度为50mg/mL-800mg/mL的溶液B；
步骤2）将药物溶液A加入溶液B中，探头超声或高速剪切形成W/O型初乳，将初乳加入浓度在0.5%-5%的聚乙烯醇溶液中，高压均质或高速剪切形成W/O/W型复乳，初乳与聚乙烯醇溶液体积比在1:5-1:20之间；
步骤3）将盐溶液加入复乳中，减压蒸馏或低速搅拌除去有机溶剂，使微球固化；
步骤4）低速离心得到微球，将其水洗3次，冻干24小时；
步骤5）冻干后的微球过200目-500目组合标准筛，辐照60Co-γ射线灭菌，微球无菌分装成实际载药量一个月缓释3.6mg或三个月缓释10.8mg剂量。
7.根据权利要求6所述的一种戈舍瑞林缓释微球冻干粉的制备方法，其特征在于步骤2）中探头超声制备初乳，超声功率在15%-50%，优选20-40%，最优选30%；时间在2-6min之间，优选2-4min，最优选3min；高速剪切转速在6000-20000rpm之间，优选10000-15000rpm，最优选12000rpm；时间在2-5min之间，优选2.5-4.6min，最优选3min。
8.根据权利要求6所述的一种戈舍瑞林缓释微球冻干粉的制备方法，其特征在于步骤3）加入盐溶液为氯化钠，醋酸钠，柠檬酸钠盐，浓度在1%-10%之间，优选2%-5%，最优选3%；使用减压蒸馏方法固化，温度在35-70℃之间，优选40-50℃；减压蒸馏时间在10-30min之间；使用低速搅拌方法固化，温度为20-50℃，搅拌时间在1-3小时之间。
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