CN109374812B - 一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的检测方法 - Google Patents

一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109374812B
CN109374812B CN201811352646.0A CN201811352646A CN109374812B CN 109374812 B CN109374812 B CN 109374812B CN 201811352646 A CN201811352646 A CN 201811352646A CN 109374812 B CN109374812 B CN 109374812B
Authority
CN
China
Prior art keywords
fasudil hydrochloride
methyl sulfonate
solution
isoquinoline
detecting
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811352646.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109374812A (zh
Inventor
李宁
陈云建
刘世成
李剑峰
高宏涛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kunming Pharmaceutical Corp
Original Assignee
Kunming Pharmaceutical Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kunming Pharmaceutical Corp filed Critical Kunming Pharmaceutical Corp
Priority to CN201811352646.0A priority Critical patent/CN109374812B/zh
Publication of CN109374812A publication Critical patent/CN109374812A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109374812B publication Critical patent/CN109374812B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/89—Inverse chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8624—Detection of slopes or peaks; baseline correction
    • G01N30/8631—Peaks
    • G01N30/8634—Peak quality criteria

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Quality & Reliability (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明属于药物化学分析领域，具体地说，涉及一种盐酸法舒地尔中5‑异喹啉磺酸甲酯的检测方法。所述的方法为采用高效液相色谱‑质谱系统，分别将5‑异喹啉磺酸甲酯对照品溶液和盐酸法舒地尔供试品溶液进行检测。本发明的检测方法首先采用高效液相色谱法进行组分的分离，该色谱条件能够确定盐酸法舒地尔供试品溶液中5‑异喹啉磺酸甲酯色谱峰的位置，并将5‑异喹啉磺酸甲酯色谱峰与相邻的其他组分的色谱峰有效分离开来，且运行时间短；然后采用本发明的质谱条件进行高分辨一级质谱进行定量，其能够检测到ppm级别的5‑异喹啉磺酸甲酯，定量限可达ng/ml水平，因而能够对盐酸法舒地尔中的5‑异喹啉磺酸甲酯进行有效控制。

Description

一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的检测方法
技术领域
本发明属于药物化学分析领域，具体地说，涉及一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的检测方法。
背景技术
盐酸法舒地尔是一种新型异喹啉磺胺类衍生物，能够通过增加肌球蛋白轻链磷酸酶的活性扩张血管，降低内皮细胞的张力，改善脑组织微循环，保护缺血脑组织，同时可拮抗炎症因子，保护神经抗凋亡，促进神经再生。盐酸法舒地尔及其注射液于2004年在中国上市，主要用于蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛等引起的缺血性脑血管疾病症状的改善。
杂质控制是药品质量控制的重要内容之一，药品中的杂质是否能被全面准确地控制，直接关系到药品的质量的可控性与安全性。因此，规范地进行杂质研究，并将其控制在一个安全、合理的限度范围内，对药物的临床安全具有重要的意义。盐酸法舒地尔的合成路线会生成多种杂质，5-异喹啉磺酸甲酯是其中具有基因毒性作用的杂质，其可能在生产过程中传递到盐酸法舒地尔成品中，为保证产品的安全性和可靠性，需要对其进行相应的控制和检测。基因毒性杂质一般允许的含量限度很低，在ppm的水平，通常的检测方法难以达到检测限和定量限。目前，针对盐酸法舒地尔中杂质的检测通常是对一般物质的检测。如《中国药典》2015年版二部记载的盐酸法舒地尔中有关物质测定方法为HPLC法，具体为：有关物质取本品，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.3mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取对照溶液5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以1.0％(v/v)三乙胺水溶液(用盐酸调节pH至7.0)-甲醇(50：50)(v/v)为流动相；检测波长为275nm。理论板数按盐酸法舒地尔峰计算不低于3000。盐酸法舒地尔峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。取灵敏度溶液20μl，注入液相色谱仪，使主成分色谱峰的信噪比应不小于10。精密量取供试品溶液与对照品各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分色谱峰保留时间的5倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.1倍(0.1％)(w/w)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(1.0％)(w/w)。供试品溶液色谱图中小于灵敏度溶液主峰面积的色谱峰忽略不计(0.05％)(w/w)。
经研究发现，在实际操作过程中，上述方法存在以下不足：
(1)此条件下5-异喹啉磺酸甲酯和盐酸法舒地尔分离效果较差，色谱峰基本重叠在一起，不能达到基线分离；
(2)此条件下5-异喹啉磺酸甲酯吸收极弱，不能检出。
针对上述缺陷，申请人开发了HPLC法测定盐酸法舒地尔中基因毒性杂质的方法(李开凤等，HPLC法测定盐酸法舒地尔中基因毒性杂质，海峡药学，2018年02期)，该方法采用高效液相色谱法，色谱柱：Thermo Scientific Hypersil GOLS C8(4.6×150mm，3μm)，流动相：0.1％甲酸溶液-乙腈(98∶2)等度洗脱；检测波长：275nm，流速：0.9m L·min-1；进样量：20μL；柱温：30℃。该方法的定量浓度为0.337μg/ml，检测限浓度为0.084μg/ml，仍然较高，灵敏度不够，对盐酸法舒地尔中ppm水平的5-异喹啉磺酸甲酯不能有效检测。
有鉴于此特提出本发明。
发明内容
现有的检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，定量浓度为0.337μg/ml，检测限浓度为0.084μg/ml，对盐酸法舒地尔中ppm水平的5-异喹啉磺酸甲酯不能有效检测。针对这一问题，本发明的目的是提供一种检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其运行时间非常短，灵敏度更高，定量浓度和检测限度均达到ppm水平，从而能够对盐酸法舒地尔中的5-异喹啉磺酸甲酯进行非常有效的控制。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其中，所述的方法为采用高效液相色谱-质谱系统，分别将5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液和盐酸法舒地尔供试品溶液进行检测。
具体地说，所述的方法包括如下步骤：
1)取5-异喹啉磺酸甲酯的对照品，制备对照品溶液，用高效液相色谱-质谱系统进行检测，得到标准曲线；
2)取待检的盐酸法舒地尔样品，制备供试品溶液，用高效液相色谱-质谱系统进行检测；
3)计算供试品溶液中5-异喹啉磺酸甲酯的峰面积，代入标准曲线方程，计算盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的含量。
进一步的，所述的高效液相色谱-质谱系统中，高效液相色谱条件中采用梯度洗脱的方式；流动相为A：0.1％甲酸-水溶液，B：乙腈。
优选，所述梯度洗脱采用如下洗脱程序进行：
0.00min，流动相A相所占的体积比为98％，流动相B相所占的体积比为2％；
0.30min，流动相A相所占的体积比为98％，流动相B相所占的体积比为2％；
3.90min，流动相A相所占的体积比为2％，流动相B相所占的体积比为98％；
5.39min，流动相A相所占的体积比为2％，流动相B相所占的体积比为98％；
5.40min，流动相A相所占的体积比为98％，流动相B相所占的体积比为2％；
6.90min，流动相A相所占的体积比为98％，流动相B相所占的体积比为2％。
进一步的，所述的高效液相色谱-质谱系统中，质谱条件为：离子模式为ESI+；工作模式为：Full MS-SIM模式，扫描范围：m/z 223～225，分辨率：70000，以m/z 224.03759([M+H]+)为定量离子。
进一步的，所述的质谱参数为：鞘气流速63arb，辅助气流速19arb，吹扫气流速4arb，喷雾电压3.5kV，毛细管离子传输管温度294℃，S-lens电压50V，加热温度488℃，其中，所涉及参数上下浮动50％，优选上下浮动10％，更优选上下浮动5％；最优选所述的质谱参数为：鞘气流速63arb，辅助气流速19arb，吹扫气流速4arb，喷雾电压3.5kV，毛细管离子传输管温度294℃，S-lens电压50V，加热温度488℃。
进一步的，所述的盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为0.01-2mg/ml，优选为0.05-1.5mg/ml，更优选为0.1-1.0mg/ml，再优选为0.4-0.6mg/ml，再优选为0.5mg/ml。
进一步的，制备盐酸法舒地尔供试品溶液的溶剂为水-乙腈，其中水和乙腈的体积比为3：7。
制备盐酸法舒地尔供试品溶液采用体积比为3：7的水-乙腈作为溶剂，能够有效溶解盐酸法舒地尔，溶剂在5-异喹啉磺酸甲酯的保留时间处没有干扰，且5-异喹啉磺酸甲酯的信噪比大于10。
进一步的，5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的浓度为0.1-50ng/ml，优选为1-20ng/ml，更优选为5-10ng/ml，再优选为7.5ng/ml。
进一步的，所述的5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的溶剂为水-乙腈，其中水和乙腈的体积比为3：7。
进一步的，所述的高效液相色谱-质谱系统中，高效液相色谱条件中所用的色谱柱为反相液相色谱柱，优选为辛烷基硅烷键合硅胶，再优选为Thermo Scientific HypersilGOLD C8，长度为150mm，内径为4.6mm，填充剂粒径为3μm。
进一步的，所述的高效液相色谱-质谱系统中，高效液相色谱条件中流速为0.9ml/min，进样体积为20μl，运行时间在8min以内。
采用上述技术方案后，本发明与现有技术相比具有以下有益效果：
本发明的检测方法首先采用高效液相色谱法进行组分的分离，该色谱条件能够确定盐酸法舒地尔供试品溶液中5-异喹啉磺酸甲酯色谱峰的位置，并将5-异喹啉磺酸甲酯色谱峰与相邻的其他组分的色谱峰有效分离开来，且运行时间短；然后采用本发明的质谱条件进行高分辨一级质谱进行定量，其能够检测到ppm级别的5-异喹啉磺酸甲酯，定量限可达ng/ml水平，因而能够对盐酸法舒地尔中的5-异喹啉磺酸甲酯进行有效控制。
本发明的方法稳定可靠，且耗时短，专属性好，检测灵敏度高，5-异喹啉磺酸甲酯的检测限浓度可达0.34ng/ml，能够更好地控制盐酸法舒地尔中的基因毒性成分5-异喹啉磺酸甲酯，从而利于药物的安全性控制。
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的描述。
附图说明
图1是本发明实施例1中空白溶剂色谱图；
图2是本发明实施例1中专属性溶液色谱图；
图3是本发明实施例1中对照品溶液色谱图；
图4是本发明实施例2中样品201201-01供试品溶液色谱图。
需要说明的是，这些附图和文字描述并不旨在以任何方式限制本发明的构思范围，而是通过参考特定实施例为本领域技术人员说明本发明的概念。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
一、仪器与材料
1.主要仪器
质谱仪：ThermoScientific公司，Q ExactiveTM组合型四极杆Orbitrap质谱仪。
液相色谱仪：ThermoScientific公司，UltiMate3000型。
电子天平：METTLER公司，XP205型。
2.实验材料
乙腈：Fisher Scientific公司，LC-MS级。
5-异喹啉磺酸甲酯对照品：昆药集团股份有限公司提供，纯度100.00％。
盐酸法舒地尔原料药：昆药集团股份有限公司，批号为201201-01。
二、实验方法
1.溶液配制
1.1 0.1％甲酸-水溶液：精密移取1ml甲酸至1000ml水中，混匀。
1.2稀释剂：量取300ml水与700ml乙腈，混匀。
1.3对照品储备液(50ng/ml)：取5-异喹啉磺酸甲酯对照品约10mg，精密称定，置1000ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；精密移取1.0ml，置200ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。
1.4对照品溶液(7.5ng/ml)：精密移取3.0ml对照品储备液，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
1.5灵敏度溶液(1.0ng/ml)：精密移取2.0ml对照品储备液，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液。
1.6专属性溶液：取盐酸法舒地尔供试品约10mg，精密称定，置20ml量瓶中，精密加入1.0ml对照品储备液，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为专属性溶液。
1.7供试品溶液(0.5mg/ml)：取盐酸法舒地尔原料药10mg，精密称定，置20ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.方法参数
方法参数见表1。
表1
Figure BDA0001865258240000061
3.系统适用性试验
3.1取空白溶剂(稀释剂)注入液相色谱仪，记录色谱图(见图1)。空白溶剂在5-异喹啉磺酸甲酯的保留时间处没有干扰。
3.2取专属性溶液注入液相色谱仪，记录色谱图(见图2)。
3.3取对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图(见图3)。连续5针对照品溶液中5-异喹啉磺酸甲酯峰面积的RSD为3.1％，见表2。
表2、系统适用性试验结果－对照品溶液
Figure BDA0001865258240000071
结论：系统适用性满足要求，本方法的专属性良好。
4.线性范围
线性储备液(50ng/ml)：取对照品储备液作为线性储备液。
照表3制备线性测试液，注入色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归分析，得到线性回归方程，得出线性相关系数r及斜率，具体结果见表4。
表3、线性测试溶液制备
水平 浓度(ng/ml) 线性储备液(ml) 终体积(ml)
L1(2ppm) 1.0 1 50
L2(5ppm) 2.5 1 20
L3(10ppm) 5.0 2 20
L4(15ppm) 7.5 3 20
L5(20ppm) 10.0 2 10
L6(40ppm) 20.0 4 10
L7(60ppm) 30.0 6 10
表4、5-异喹啉磺酸甲酯线性结果
Figure BDA0001865258240000081
结果显示：5-异喹啉磺酸甲酯在1.01ng/ml～30.19ng/ml浓度范围内的线性方程为y＝505125x+42931，相关系数r为0.9983，斜率为505125。
结论：5-异喹啉磺酸甲酯在1.01ng/ml～30.19ng/ml浓度范围内线性关系良好。
5.定量限与检测限
定量限溶液：取4项下的2ppm的线性溶液作为定量限溶液。
检测限溶液：精密移取5.0ml定量限溶液置15ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为检测限溶液。
取上述溶液注入液相色谱-质谱仪，记录色谱图。结果见表5。
表5、5-异喹啉磺酸甲酯定量限和检测限结果
Figure BDA0001865258240000091
结果显示：5-异喹啉磺酸甲酯的定量限浓度为1.01ng/ml，浓度水平为2ppm，连续6针溶液峰面积的RSD为6.3％，信噪比均大于10；5-异喹啉磺酸甲酯的检测限浓度为0.34ng/ml，浓度水平为0.67ppm，信噪比为7。
结论：表明本方法的检测灵敏度可以满足要求。
6.准确度与精密度
配制准确度供试品溶液(5ppm)：取盐酸法舒地尔供试品约10mg，精密称定，置20ml量瓶中，精密加入1.0ml对照品储备液，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为准确度供试品溶液，平行配制6份。
将供试品溶液、对照品溶液、准确度供试品溶液注入液相色谱-质谱仪，记录色谱图，并计算回收率。结果见表6。
结果显示：6份加标样品中5-异喹啉磺酸甲酯的回收率在92.78％～98.24％范围内；平均回收率为95.4％，RSD为2.1％。
结论：表明该方法的准确度和精密度良好。
表6、盐酸法舒地尔基因毒性杂质5-异喹啉磺酸甲酯准确度&精密度结果
Figure BDA0001865258240000101
7.溶液稳定性
取对照品溶液，分装成两份，一份储存于室温下，另一份储存于4℃下，于1天后进样检测，并按照当天新配制的对照溶液计算对照品溶液的浓度。与0天数据进行对比，计算相对偏差，结果见下表7。
表7、对照品溶液稳定性试验结果
Figure BDA0001865258240000102
结果显示：对照品溶液在室温与4℃条件下保存1天，与0天数据相比5-异喹啉磺酸甲酯浓度的相对偏差小于10％。
结论：5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液在室温与4℃条件下1天内稳定。
实施例2、采用本发明方法对盐酸法舒地尔进行质量分析
盐酸法舒地尔原料药来自昆药集团股份有限公司，共6个批次，批号分别为201201-01、201201-02、201201-03、Y170508-2、Y170509-2、Y170510-2。
供试品溶液(0.5mg/ml)的制备：取盐酸法舒地尔原料药10mg，精密称定，置20ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
取上述供试品溶液注入高效液相色谱连用四极杆Orbitrap质谱仪，记录色谱图(201201-01批次的图谱见图4，其他批次的图谱与之类似)，按照4项下线性方程计算供试品中基因毒性杂质5-异喹啉磺酸甲酯的含量。结果见表8。
表8、盐酸法舒地尔基因毒性杂质5-异喹啉磺酸甲酯测定结果
样品批号 含量
201201-01 未检出
201201-02 未检出
201201-03 未检出
Y170508-2 未检出
Y170509-2 未检出
Y170510-2 未检出
结果显示：6批样品中，5-异喹啉磺酸甲酯的含量均小于15ppm。
实施例3
该实施例同实施例1，所不同的是盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为0.4mg/ml，5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的浓度为0.1ng/ml。
实施例4
该实施例同实施例1，所不同的是盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为0.6mg/ml，5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的浓度为50ng/ml。
实施例5
该实施例同实施例1，所不同的是盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为0.1mg/ml，5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的浓度为1ng/ml。
实施例6
该实施例同实施例1，所不同的是盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为1.0mg/ml，5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的浓度为20ng/ml。
实施例7
该实施例同实施例1，所不同的是盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为0.05mg/ml，5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的浓度为5ng/ml。
实施例8
该实施例同实施例1，所不同的是盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为1.5mg/ml，5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的浓度为10ng/ml。
实施例9
该实施例同实施例1，所不同的是盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为0.01mg/ml，5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的浓度为7.5ng/ml。
实施例10
该实施例同实施例1，所不同的是盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为2mg/ml。
实施例11
该实施例同实施例1，所不同的是所述的质谱参数为：鞘气流速94.5arb，辅助气流速28.5arb，吹扫气流速6arb，喷雾电压5.25kV，毛细管离子传输管温度441℃，S-lens电压75V，加热温度732℃。
实施例12
该实施例同实施例1，所不同的是所述的质谱参数为：鞘气流速31.5arb，辅助气流速9.5arb，吹扫气流速2arb，喷雾电压1.75kV，毛细管离子传输管温度147℃，S-lens电压25V，加热温度244℃。
实施例13
该实施例同实施例1，所不同的是所述的质谱参数为：鞘气流速50arb，辅助气流速15arb，吹扫气流速5arb，喷雾电压4.0kV，毛细管离子传输管温度300℃，S-lens电压45V，加热温度500℃。
通过对本发明方法的专属性、系统适用性、线性范围、定量限、检测限、准确度，精密度及溶液稳定性的方法学研究，表明本发明方法适用于盐酸法舒地尔基因毒性杂质5-异喹啉磺酸甲酯的检测，方法稳定可靠，检测时间短，灵敏度高。
以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本发明的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许变动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。

Claims (12)

1.一种检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：
1)取5-异喹啉磺酸甲酯的对照品，制备对照品溶液，用高效液相色谱-质谱系统进行检测，得到标准曲线；
2)取待检的盐酸法舒地尔样品，制备供试品溶液，用高效液相色谱-质谱系统进行检测；
3)计算供试品溶液中5-异喹啉磺酸甲酯的峰面积，代入标准曲线方程，计算盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的含量；
其中，高效液相色谱条件中所用的色谱柱为反相色谱柱，为Thermo ScientificHypersil GOLD C8，长度为150mm，内径为4.6mm，填充剂粒径为3μm；高效液相色谱条件中采用梯度洗脱的方式，流动相为A：0.1％甲酸-水溶液，B：乙腈；所述的梯度洗脱采用如下洗脱程序进行：
0.00min，流动相A相所占的体积比为98％，流动相B相所占的体积比为2％；
0.30min，流动相A相所占的体积比为98％，流动相B相所占的体积比为2％；
3.90min，流动相A相所占的体积比为2％，流动相B相所占的体积比为98％；
5.39min，流动相A相所占的体积比为2％，流动相B相所占的体积比为98％；
5.40min，流动相A相所占的体积比为98％，流动相B相所占的体积比为2％；
6.90min，流动相A相所占的体积比为98％，流动相B相所占的体积比为2％；
所述的高效液相色谱-质谱系统中所用的质谱仪为Q ExactiveTM组合型四极杆Orbitrap质谱仪，质谱条件为：离子模式为ESI+；工作模式为：Full MS-SIM模式，扫描范围：m/z 223～225，分辨率：70000，以m/z 224.03759[M+H]+为定量离子；
质谱参数为：鞘气流速63arb，辅助气流速19arb，吹扫气流速4arb，喷雾电压3.5kV，毛细管离子传输管温度294℃，S-lens电压50V，加热温度488℃。
2.根据权利要求1所述的检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其特征在于，所述的盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为0.01-2mg/ml。
3.根据权利要求2所述的检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其特征在于，所述的盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为0.05-1.5mg/ml。
4.根据权利要求3所述的检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其特征在于，所述的盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为0.1-1.0mg/ml。
5.根据权利要求4所述的检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其特征在于，所述的盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为0.4-0.6mg/ml。
6.根据权利要求5所述的检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其特征在于，所述的盐酸法舒地尔供试品溶液的浓度为0.5mg/ml。
7.根据权利要求1-6任意一项所述的检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其特征在于，制备盐酸法舒地尔供试品溶液的溶剂为水-乙腈，其中水和乙腈的体积比为3：7。
8.根据权利要求1所述的检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其特征在于，5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的浓度为0.1-50ng/ml。
9.根据权利要求8所述的检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其特征在于，5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的浓度为1-20ng/ml。
10.根据权利要求9所述的检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其特征在于，5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的浓度为5-10ng/ml。
11.根据权利要求10所述的检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其特征在于，5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的浓度为7.5ng/ml。
12.根据权利要求8-11任意一项所述的检测盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的方法，其特征在于，所述的5-异喹啉磺酸甲酯对照品溶液的溶剂为水-乙腈，其中水和乙腈的体积比为3：7。
CN201811352646.0A 2018-11-14 2018-11-14 一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的检测方法 Active CN109374812B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811352646.0A CN109374812B (zh) 2018-11-14 2018-11-14 一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811352646.0A CN109374812B (zh) 2018-11-14 2018-11-14 一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109374812A CN109374812A (zh) 2019-02-22
CN109374812B true CN109374812B (zh) 2020-11-03

Family

ID=65384958

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811352646.0A Active CN109374812B (zh) 2018-11-14 2018-11-14 一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109374812B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111624276B (zh) * 2020-05-18 2021-04-09 北京阳光诺和药物研究股份有限公司 同时检测盐酸法舒地尔中基因毒性杂质5-异喹啉磺酸甲酯和5-异喹啉磺酸乙酯的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102070612A (zh) * 2010-12-29 2011-05-25 武汉同源药业有限公司 一种化合物盐酸法舒地尔的制备方法
CN102731388A (zh) * 2012-07-05 2012-10-17 广州大学 一种（r）/（s）-6,6’-二羟基-5,5’-双喹啉的制备方法
WO2013010218A1 (en) * 2011-07-15 2013-01-24 Freie Universität Berlin Inhibition of clathrin
CN105168224A (zh) * 2015-09-24 2015-12-23 辰欣药业股份有限公司 一种盐酸法舒地尔注射液及其制备方法
CN108398507A (zh) * 2018-05-08 2018-08-14 山东新华制药股份有限公司 一种盐酸法舒地尔杂质5-异喹啉磺酸甲酯的高效液相色谱分析检测方法
CN108593831A (zh) * 2018-05-08 2018-09-28 山东新华制药股份有限公司 盐酸法舒地尔有关物质的hplc检测方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102070612A (zh) * 2010-12-29 2011-05-25 武汉同源药业有限公司 一种化合物盐酸法舒地尔的制备方法
WO2013010218A1 (en) * 2011-07-15 2013-01-24 Freie Universität Berlin Inhibition of clathrin
CN102731388A (zh) * 2012-07-05 2012-10-17 广州大学 一种（r）/（s）-6,6’-二羟基-5,5’-双喹啉的制备方法
CN105168224A (zh) * 2015-09-24 2015-12-23 辰欣药业股份有限公司 一种盐酸法舒地尔注射液及其制备方法
CN108398507A (zh) * 2018-05-08 2018-08-14 山东新华制药股份有限公司 一种盐酸法舒地尔杂质5-异喹啉磺酸甲酯的高效液相色谱分析检测方法
CN108593831A (zh) * 2018-05-08 2018-09-28 山东新华制药股份有限公司 盐酸法舒地尔有关物质的hplc检测方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HPLC法测定盐酸法舒地尔中基因毒性杂质;李开凤 等;《海峡药学》;20180228;第30卷(第2期);第45-48页 *
Identification and characterization of the process-related impurities in fasudil hydrochloride by hyphenated techniques using a quality by design approach;Min Song et al;《Journal of separation science》;20140220;第37卷(第7期);第758-763页 *
Simultaneous quantitative analysis of fasudil and its active metabolite in human plasma by liquid chromatography electro-spray tandem mass spectrometry;Huaying Chen et al;《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》;20091228;第52卷;第242-248页 *
盐酸法舒地尔中杂质和二聚体的HPLC法测定;郝全文 等;《现代药物与临床》;20130730;第28卷(第4期);第538-541页 *
盐酸法舒地尔有关物质的色谱-质谱结构鉴定;陈月琴 等;《药学学报》;20130312;第48卷(第3期);第401-405页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109374812A (zh) 2019-02-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109374811B (zh) 一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸乙酯的检测方法
CN109374812B (zh) 一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯的检测方法
CN113804792B (zh) 一种检测5-对硝基苯基糠醛有关物质的方法
CN110672734B (zh) 一种盐酸胺碘酮注射液中有关物质的分析方法
CN116773693A (zh) 液相色谱串联质谱法检测血液中11种抗高血压药物及1种代谢产物的方法及应用
CN113533574B (zh) 一种用于药物合成的组合物及其中对甲苯磺酰氯的检测方法
CN108593818B (zh) 一种测定尼麦角林有关物质的高效液相色谱方法
CN109856303B (zh) 泮托拉唑钠中基因毒性杂质的高灵敏度分析方法
CN110988158A (zh) 一种盐酸替罗非班注射液有关物质的检测方法
CN111624275A (zh) 一种高效液相色谱法测定吸入用复方异丙托溴铵溶液有关物质的方法
CN114689737B (zh) 一种s-邻氯苯甘氨酸甲酯酒石酸盐有关物质的分析方法
CN114166960B (zh) 一种依匹哌唑有关物质的检测方法
CN110836930A (zh) 气质联用法测定左乙拉西坦中二氯丁烷含量
CN110412164B (zh) 一种盐酸美西律的有关物质的检测方法
CN111812240A (zh) 一种缩宫素及三种杂质的分离方法和应用
CN114235972B (zh) 一种测定利格列汀杂质rbp-1含量的方法
CN112505196B (zh) 一种人血浆中硝酸异山梨酯、2-单硝酸异山梨酯和5-单硝酸异山梨酯的定量分析方法
CN107656005B (zh) 盐酸厄洛替尼与潜在杂质的分离与测定方法
CN113777180B (zh) 一种同时检测西他沙星及其多种异构体杂质的方法
CN110646519A (zh) 一种测定lcz696有关物质的方法
CN118169258A (zh) 一种盐酸环维黄杨星d中有关物质的检测方法
CN114062534B (zh) 一种枸橼酸爱地那非遗传毒性杂质检测方法
CN115754028A (zh) 一种分离检测氟伐替尼中苯胺类杂质的方法
CN107091895B (zh) 采用hplc分离测定利奥西呱原料药中有关物质的方法
CN111089906B (zh) 一种莫西沙星盐酸盐与莫西沙星酒石酸盐的分离方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant