CN109371133B

CN109371133B - 一组与胰腺癌相关的LncRNA分子标记物及其应用

Info

Publication number: CN109371133B
Application number: CN201811465298.8A
Authority: CN
Inventors: 徐岷; 龚爱华; 冯雯; 凌陈; 周改; 刘雅雯; 蒋小猛; 徐萍; 陈宝定; 黄红梅; 王慧之
Original assignee: Affiliated Hospital of Jiangsu University
Current assignee: Affiliated Hospital of Jiangsu University
Priority date: 2018-12-03
Filing date: 2018-12-03
Publication date: 2021-11-30
Anticipated expiration: 2038-12-03
Also published as: CN109371133A

Abstract

本发明涉及生物检测领域，具体涉及生物的分子检测，更具体涉及一组与胰腺癌相关的LncRNA标记物及其应用。本发明所提供的长链非编码RNA分子标记物包括ABHD11‑AS1、LINC00176以及SNHG11。含有本发明所述分子标记物的产品可以更加准确、快速的判断受试者是否已患有胰腺癌或对是否存在患有胰腺癌的风险提供信息评估，以实现对结直肠癌的早发现、早治疗；在制备胰腺癌早期评估产品或筛选胰腺癌的肿瘤诊断药物中具有重要的应用前景。

Description

一组与胰腺癌相关的LncRNA分子标记物及其应用

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及生物的分子检测，更具体涉及与胰腺癌相关的LncRNA分子标记物及其应用。

背景技术

胰腺癌是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一，也是我国最常见的恶性肿瘤之一，胰腺癌早期一般难以发现，大多数胰腺癌患者在疾病进入晚期阶段仍然没有出现明显症状，出现临床症状就诊时往往已丧失手术时机，且由于其转移倾向以及对细胞毒性化疗药物产生耐受性，而导致传统非手术疗法通常无效，预后极差。因此，提高胰腺癌早期诊断水平、寻找可靠的观察指标是提高胰腺癌生存率的一个关键因素。

目前常规的生物标志物如糖类抗原（CA199）和癌胚抗原（CEA）是经常用于诊断胰腺癌患者的经典肿瘤标志物。然而，由于假阳性和阴性结果，这些肿瘤标志物在胰腺癌的早期诊断的应用价值有限。因此，现迫切需要一种非侵入性的，操作简便且特异性及灵敏度均较高的早期评估方法。

有研究表明，长链非编码RNA（LncRNA）可调控从胚胎干细胞多能性，细胞周期到疾病如癌症，以及参与基因组印记及染色质修饰、转录激活、转录后调控、蛋白功能调节等多种重要的信号转导调控过程，并可通过表观遗传等调控方式影响肿瘤细胞的生长、凋亡、耐药与转移。血液中LncRNA检测具有标本采集方便、检测手段简便等优点，目前有关外周循环血中在胰腺癌中特征性表达的LncRNA方面的研究尚未见有报道，LncRNA标记物在胰腺癌调控机制中的研究还处于起步阶段。因此，通过分析、研究LncRNA在胰腺癌的发生发展机制，对胰腺癌的早期筛查具有重要作用，并且为胰腺癌的基因靶向治疗提供可能。

发明内容

本发明的目的是提供一类在胰腺癌患者的血液中高表达的LncRNA标记物，本发明提供的LncRNA标记物，作为一种非创伤性替代指标，能实现胰腺癌早期检测筛查辅助评估或辅助诊断结直肠癌进程，对预后判断、疗效评估等具有临床意义。

本发明的另一目的在于提供一种具有高敏感性与特异性的用于早期筛查与诊断胰腺癌的产品。

为了实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一组在胰腺癌患者血液中高表达的LncRNA标记物，所述LncRNA标记物包括：ABHD11-AS1、LINC00176和/或SNHG11中的一种或多种的组合。其中，ABHD11-AS1的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所述； LINC00176的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所述； SNHG11的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：3所述。

本发明还提供了上述在胰腺癌患者的血液中高表达的LncRNA标记物的特异性引物对，具体地，所述LncRNA标记物ABHD11-AS1的特异性引物对上游引物序列如序列表中SEQ ID NO：4所述，其下游引物核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：5所述； LINC00176的特异性引物对上游引物序列如序列表中SEQ ID NO：6所述，其下游引物核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：7所述； SNHG11的特异性引物对上游引物序列如序列表中SEQ ID NO：8所述，其下游引物核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：9所述。

所述引物对是采用PCR技术，经过大量筛选试验，根据LncRNA标记物的核苷酸序列，所设计的特异性引物。

本发明还提供了所述的LncRNA标记物的应用，所述LncRNA标记物在制备胰腺癌早期辅助评估产品或筛选胰腺癌肿瘤诊断信息产品中应用。

本发明还提供了所述的LncRNA标记物的应用，所述LncRNA标记物在制备胰腺癌患者术后疗效评估产品或辅助评估信息收集产品中的应用。

优选地，本发明中所述产品包括试剂盒、检测试纸或检测试剂。进一步地，所述产品包括用荧光定量PCR方法、RNA测序技术、核酸杂交技术和/或核酸扩增技术检测待测样品中LncRNA标记物的相对量来诊断胰腺癌。

另一方面，本发明还提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括特异性扩增LncRNA标记物ABHD11-AS1、LINC00176和/或SNHG11的一组或多组的引物序列。

本发明所公开的试剂盒还包括：RNA稳定溶液、异丙醇、三氯甲烷、Trizol试剂、无酶水、随机逆转录引物、逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、逆转录酶、5SRNA内参特异性引物。

更进一步地，本发明所述试剂盒，用于获取胰腺癌早期检测筛查辅助评估或胰腺癌预后判断评估信息的收集。

与现有技术相比，本发明有益效果是：

本发明公开了一组与胰腺癌相关的LncRNA标记物ABHD11-AS1、LINC00176和/或SNHG11，检测出所述标记物在胰腺癌患者血液中高表达性，本发明提供的标记物可应用于制备胰腺癌辅助评估或胰腺癌早期评估和/或预后效果评估产品中，有利于进一步阐明胰腺癌中的发生发展机理、信号通路等，极具应用前景和理论价值。本发明提供的所述标记物的特异性引物可以有效检测出所述标记物在胰腺癌患者血液中高表达性，改进现有的肿瘤标记物所难以克服的低特异性和低灵敏度的问题，单独使用或是与现有常规肿瘤标记物结合使用具有很好的标记效果。

附图说明

图1是LncRNA标记物ABHD11-AS1、LINC00176和SNHG11在样本血浆中验证分析图；

图2是LncRNA标记物ABHD11-AS1、LINC00176和SNHG11的胰腺癌的价值分析结果图；

图3是ABHD11-AS1与常规肿瘤标志物CEA、CA199和CA125的胰腺癌诊断价值分析图；

图4是LINC00176与常规肿瘤标志物CEA、CA199和CA125的胰腺癌诊断价值分析图；

图5是SNHG11与常规肿瘤标志物诊断胰腺癌价值比较图；

图6是LncRNA标记物ABHD11-AS1、LINC00176和SNHG11在正常对照组、为非癌对照组、早期胰腺癌患者（I期、II期）中表达量的差异图；

图7是ABHD11-AS1与常规肿瘤标志物对早期胰腺癌的价值比较图；

图8是ABHD11-AS1与常规肿瘤标志物对非癌对照组与正常对照组的诊断价值比较图；

图9是ABHD11-AS1表达量与胰腺癌预后的相关性分析图。

具体实施方式

下面结合附图，进一步阐释本发明，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明范围；实施例中未注明具体条件的实验方法，均按照常规条件，实施例中所使用的试剂盒试剂的量仅是示例性的，本领域技术人员可以根据实际情况作相应调整；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

本发明实施例中所用样本包括健康体检人群血液46例，作为正常对照组；所述健康体检人群为无肿瘤病史，无慢性疾病病史，其中男性17例，女性29例，平均年龄62.35岁；慢性胰腺炎患者血液97例，作为非癌对照组；其中33例男性，64例女性，平均年龄51.64；胰腺癌患者血液114例，作为癌症组；均未行特殊治疗，其中48例男性，66例女性，平均年龄55.25。所述胰腺癌患者样品中，肿瘤最大直径<5cm有38例，占33.3%；I期患者8例（7.0%），II期77例（67.5%），III期14例（12.3%）。病理分期显示中分化67例（58.8%），低分化3例（2.6%）；肿瘤指标CEA(>5ug/L)，CA199(>37U/mL)和CA125(>U/ml)阳性各占66(57.9%)，88(77.2%)和24(21.1%)。三组标本在年龄性别之间均无差异。以上所有样本均来自上海第二军医大学，该研究符合第二军医大学伦理方案，所有样本的取得均通过医院组织伦理委员会的同意并且在采集血标本之前已获得每位参与者书面知情同意书。

实施例一：

血液中长链非编码RNA的RT-PCR实验，具体步骤为：

1．样本收集：

各取15例正常对照组、非癌对照组和癌症组的血液样本置于EDTA抗凝收集管中离心，转速1200g，10min，移液器吸取上清血浆置于2ml无酶离心管；再次离心，12000g，10min，收集上清血浆于新的2ml无酶离心管，弃底层沉淀，-80℃冰箱保存。

2. RNA的抽提：

取5mL全血置于EDTA抗凝收集管中，颠倒6~9次后将收集管置于离心机离心，-4℃离心10min，转速1200g；轻轻取出收集管，移液器吸取上清液转移至1.5ml无核酸酶管；再次离心，转速12000g离心10min；将上清吸入一个新的无核酸酶管，置于-80℃冰箱或液氮罐保存。Trizol试剂提取血液总RNA，按照Life公司的Trizol使用说明书进行提取。

（1）将血浆样本从-80℃冰箱中取出，在冰上缓慢溶解至液体状态后，取200μl血浆转移至一个新的1.5ml无核酸酶管，加入200ulTrizol，置于涡旋仪剧烈涡旋20s；室温静置5min。

（2）加入200μl氯仿；上下颠倒，剧烈振荡15s，室温静置3min；

（3）提前开启离心机使其预冷至-4℃，放入无核酸酶管，12000g离心15min；

将离心管小心转移至离心管架，避免下层溶液晃动，使用移液器吸取层无色水相转移到新的无核酸酶管，加入等体积(500ul)异丙醇，柔和地颠倒混匀，室温静置15min；

（4）再次离心，4℃，12000g,离心10min，弃上清；

（5）加1ml75%乙醇洗涤，颠倒混匀，4℃,7500g，离心5min；

（6）弃上清，干燥10min，加15ul-40ul焦碳酸二乙酯(DEPC)水溶解，轻轻混匀，60℃孵育10min测浓度，-80℃低温冰箱保存；

（7）NanoDrop2000分光光度计检测血浆总RNA的含量及纯度。

3.制备cDNA样品：

通过RNA逆转录反应得到cDNA。逆转录的反应体系包括RNA模板1.2μg、随引物机1μl、4μl10*MMLV逆转录酶(Takara公司）、1μl脱氧核糖核苷三磷酸(10mM)（Takara公司）、1μlM-MLV(H)ReverseTranscriptase（诺唯赞公司）、1μlRNaseInhibitor（诺唯赞公司）以及无核酸酶水(Takara公司）加至20μl，反应步骤为25℃孵育10分钟，42℃反应45分钟，70℃孵育15分钟；

4.聚合酶链反应：

利用PrimerPremier5.0进行荧光定量PCR引物设计，得到其引物序列如下：ABHD11-AS1的特异性引物对上游引物序列如序列表中 SEQ ID NO：4所述，其下游引物核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：5所述； LINC00176的特异性引物对上游引物序列如序列表中SEQ ID NO：6所述，其下游引物核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：7所述； SNHG11的特异性引物对上游引物序列如序列表中SEQ ID NO：8所述，其下游引物核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：9所述。

将cDNA稀释至45μl后使用，取1μl稀释后的cDNA，5μlSYBRGreen(Takara公司），1μlPrimerMix(5uM)（上海生工），3μl无核酸酶水；反应步骤为：95℃5min，一个循环；95℃变性10s，60℃退火30s，95℃延伸15s,40个循环；60℃1min，一个循环；95℃15s一个循环。

5.内参RNA：

内参基因5sRNA核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：10所述。取1μl内参正反向引物复合物，加入1μl稀释后的cDNA，5μl SYBRGreen(Takara公司），3μl 无酶水(Takara公司）。

反应步骤为：95℃5min，一个循环；95℃变性10s，60℃退火30s，95℃延伸15s,40个循环；60℃1min，一个循环；95℃15s一个循环。

6.-2ΔΔCT指标的测定：

实验采用相对定量的分析方法，5sRNA作为内参基因，数据利用软件GraphPadPrism进行分析。使用2-ΔΔCT法处理数据，其中每个LncRNA相对于标准内参的表达量用方程2-ΔΔCT表示，以参照基因作为标准进行相对定量，以5sRNA为参照基因，对目标LncRNAs进行归一化处理，通过荧光定量PCR检测目标LncRNA在不同样本中的相对表达量。表达量倍数的变化的公式为：ΔΔCT=ΔCT(胰腺癌)-ΔCT（正常），ΔCT=CT(LncRNA)-CT（5sRNA）

图1是LncRNA标记物ABHD11-AS1、LINC00176和SNHG11在样本血浆中验证分析图；其中，图（a）是LncRNA标记物ABHD11-AS1，（b）是LncRNA标记物LINC00176，（c）是LncRNA标记物SNHG11；ΔCT值越小，LncRNA的表达量越高，如图1所示，ABHD11-AS1、LINCO00176在正常对照组、非癌对照组、胰腺癌三组中表达量呈升高趋势，同时正常对照组与非癌对照组(P<0.01)，正常对照组与胰腺癌(P<0.01)，非癌对照组与胰腺癌(P<0.05)两两之间差异均有统计学意义；SNHG11在正常对照组中表达量低于非癌对照组（P<0.05）和胰腺癌组(P<0.01)，而非癌对照组与胰腺癌组表达量无明显差异。

实施例二：

LncRNA标记物ABHD11-AS1、LINC00176和SNHG11评估价值初步分析；通过受试者工作特征曲线(ROC)的曲线下面积值（AUC）评价LncRNA的三种标记物ABHD11-AS1、LINC00176和SNHG11区别正常健康人和胰腺癌的能力。图2是LncRNA标记物ABHD11-AS1、LINC00176和SNHG11的胰腺癌的价值分析结果图；其中，图（a）是LncRNA标记物ABHD11-AS1，（b）是LncRNA标记物LINC00176，（c）是LncRNA标记物SNHG11；通过ROC曲线的曲线下面积值（AUC）评价了LncRNA标记物ABHD11-AS1、LINC00176和SNHG11区别正常健康人和胰腺癌的能力。如图2所示，ABHD11-AS1的AUC值为0.887（95％置信区间（CI）：0.839-0.936，P<0.0001），LINC00176的AUC值为0.707（95％CI：0.614-0.800，P<0.0001），SNHG11的AUC值为0.79（95％CI：0.728-0.867，P<0.0001）。基于以上结果可知，ABHD11-AS1、LINC00176和SNHG11都能有效区分正常对照组和胰腺癌患者，其中，ABHG11-AS1在三者中AUC值最高，具有较好的诊断价值，LINC00176和SNHG11具有一定的诊断价值。

实施例三：

LncRNA标记物ABHD11-AS1、LINC00176和SNHG11与常规肿瘤指标的诊断价值比较

图3是ABHD11-AS1与常规肿瘤标志物CEA、CA199和CA125的胰腺癌诊断价值分析图；其中，图（a）是ABHD11-AS1与CEA的诊断分析图，（b）是ABHD11-AS1与CA199的诊断分析图，图（c）是ABHD11-AS1与CA125的诊断分析图；如图3所示，ABHD11-AS1的AUC为0.888（95％CI：0.838-0.942，P<0.0001）,CEA的AUC为0.826（95％CI：0.759-0.893，P<0.0001），CA199的AUC为0.886（95％CI：0.829），CA125的AUC为0.861（95％CI：0.785-0.937，P<0.0001），由此可见，ABHD11-AS1的诊断价值高于现有的肿瘤标志物。

LncRNA标记物ABHD11-AS1与CEA、CA199、CA125这些肿瘤标志物相结合，为诊断胰腺癌提供了更有效的诊断价值。

ABHD11-AS1和CEA联合的AUC为0.943（95％CI：0.909-0.978，P<0.0001），ABHD11-AS1和CA199的AUC为0.982（95％CI：0.961-0.999，P<0.0001），ABHD11-AS1和CA125的AUC为0.914（95％CI：0.857-0.970，P<0.0001），与单独的ABHD11-AS1或CEA，CA199，CA125相比，标记物ABHD11-AS1与CEA、CA199、CA125联合应用对胰腺癌的诊断价值明显提升，以上结果表明，单一的ABHD11-AS1具有较好的诊断价值，且高于肿瘤指标CEA，CA199，CA125，与肿瘤指标联合后，诊断价值提高，具有高度精确性。

图4是LINC00176与常规肿瘤标志物CEA、CA199和CA125的胰腺癌诊断价值分析图；其中，图（a）是LINC00176与CEA的诊断分析图，（b）是LINC00176与CA199的诊断分析图，图（c）是LINC00176与CA125的诊断分析图；如图4所示，LINC00176的诊断价值一般，AUC为0.692，低于CEA0.826,CA1990.886，CA1250.941；但LINC00176和CEA联合的AUC为0.847（95％CI：0.783-0.911，P<0.0001），LINC00176和CA199联合的AUC0.941（95％CI：0.903-0.980，P<0.0001），LINC00176和CA125联合诊断的AUC为0.862（95％CI：0.784-0.940，P<0.0001），诊断价值明显提高，高于单一的LINC00176以及单一的肿瘤指标CEA，CA199，CA125。

SNHG11也有与LINC00176相类似的结论，图5是SNHG11与常规肿瘤标志物诊断胰腺癌价值比较图；其中，图（a）是SNHG11与CEA的诊断分析图，（b）是SNHG11与CA199的诊断分析图，图（c）是SNHG11与CA125的诊断分析图；由图5可见，单一诊断价值虽然低于常规肿瘤指标，但与常规肿瘤指标联合应用后的胰腺癌诊断价值明显提高。

由上可知，血浆ABHD11-AS1对胰腺癌具有很好的标记作用，其效果优于现有的常规胰腺癌肿瘤指标CEA、CA199和CA125；与常规肿瘤指标联合应用后诊断价值进一步地提高；而LINC00176，SNHG11虽然单一的诊断价值较低，但联合肿瘤标志物后诊断价值较好，高于单一的肿瘤指标CEA，CA199，CA125。

实施例四:

LncRNA标记物ABHD11-AS1、LINC00176和SNHG11与正常对照组、非癌对照组和早期胰腺癌患者中表达量差异分析

图6是LncRNA标记物ABHD11-AS1、LINC00176和SNHG11在正常对照组（Control）、为非癌对照组（CP）、早期胰腺癌患者I期（PC-stageI）、I早期胰腺癌患者I期（PC-stageII）中表达量的差异图；其中，图（A）是LncRNA标记物ABHD11-AS1，（B）是LncRNA标记物LINC00176，（C）是LncRNA标记物SNHG11；由图6可见，ABHD11-AS1的血浆表达量在四组中呈现逐步增加趋势。与正常对照组相比，早期胰腺癌I期（P=0.206）和早期胰腺癌II期（P<0.0001）患者的ABHD11-AS1表达增加。与非癌对照组患者相比，早期胰腺癌I期(P=0.999)和早期胰腺癌II期(P=0.185)患者的血浆ABHD11-AS1表达水平也有增加的趋势，早期胰腺癌II期与早期胰腺癌I期相比ABHD11-AS1表达量也呈增高趋势（P=0.805）。LncRNA标记物LINC00176在正常对照组、为非癌对照组、早期胰腺癌I期、II期中表达量整体也呈增高趋势。而SNHG1在四组中的表达水平相差不大。基于以上结果说明，ABHD11-AS1和LINC00176在正常对照组、为非癌对照组、早期胰腺癌I期、早期胰腺癌II期中表达量逐渐升高。

实施例五：

ABHD11-AS1在早期胰腺癌患者中的诊断能力的评估

图7是ABHD11-AS1与常规肿瘤标志物诊断早期胰腺癌的价值比较图；其中，图（A）是ABHD11-AS1与CEA的价值比较图，（B）是ABHD11-AS1与CA199的价值比较图，图（C）是ABHD11-AS1与CA125的价值比较图；如图7所示，ABHD11-AS1的AUC值0.947（95％CI：0.908-0.985，P<0.001），能够很好地区分早期胰腺癌患者和正常个体，且高于CEA的AUC值0.826（95％CI：0.751-0.901，P<0.001），CA199的0.925（95％CI：0.869-0.980，P<0.001）和CA125的0.855（95％CI：0.771-0.939，P<0.0001）。

表1. ABHD11-AS1、常规肿瘤标记物及ABHD11-AS1与常规肿瘤标记物联合后的早期胰腺癌筛查试验评价表

标记物	灵敏度（Sensitivity）	特异度（Specificity）	约登指数（Youden index）
				ABHD11-AS1	0.894	0.886	0.780
CEA	0.530	0.977	0.508
				CA199	0.879	1.000	0.879
CA125	0.704	0.935	0.639
				ABHD11-AS1+CEA	0.894	1.000	0.894
ABHD11-AS1+CA199	0.985	1.000	0.985
				ABHD11-AS1+CA125	0.815	1.000	0.815

由表1可见， ABHD11-AS1与常规肿瘤指标联合后，诊断价值进一提升，与CEA联合AUC值为0.990（95％CI：0.978-0.999，P<0.0001），与CA199联合AUC值为0.998（95％CI：0.869-0.980，P<0.0001），与CA125联合AUC值为0.980（95％CI：0.957-0.999，P<0.0001）。以上结果表明，ABHD11-AS1能够很好地在区分早期胰腺癌和正常人，且诊断价值高于现有常规肿瘤标志物CEA、CA199和CA125，与肿瘤指标联合后，诊断价值更高，其中以ABHD11-AS1和CA199的联合诊断价值最高。

图8是ABHD11-AS1与常规肿瘤标志物对非癌对照组与正常对照组的诊断价值比较图；其中，图（A）是ABHD11-AS1与CEA的价值比较图，（B）是ABHD11-AS1与CA199的价值比较图，图（C）是ABHD11-AS1与CA125的价值比较图；如图8所示， ABHD11-AS1的AUC面积为0.678(95%CI:0.592–0.764,P<0.001)，CEA的AUC为0.639(95%CI:0.545–0.734,P<0.008))，CA1990.727(95%CI:0.6450.809，P<0.0001)，CA1250.621(95%CI:0.498–0.743,P<0.063)。可见，ABHD11-AS1在区分慢性胰腺炎和正常健康人的能力不如CA199，但超过CEA，CA125，与肿瘤指标CA199联合后的诊断价值明显提高，AUC面积为0.862(95%CI:0.803–0.921,P<0.001)。所以ABHD11-AS1在慢性胰腺炎和正常健康人诊断价值高于CEA，CA125，低于CA199，与CA199联合后诊断价值明显提高。

实施例六：

LncRNA标记物ABHD11-AS1表达量与胰腺癌预后的相关性分析

利用Oncolnc网站（http://www.oncolnc.org/）对肿瘤基因组图谱（TCGA）数据库进行了分析，对174名胰腺癌患者进行了生存分析，评估了候选LncRNA表达量与胰腺癌患者预后的相关性。图9是ABHD11-AS1表达量与胰腺癌预后的相关性分析图；如图9所示，卡普兰一梅尔估计量(Kaplan-Meier)生存分析曲线显示，低表达（n=57）ABHD11-AS1组的患者总生存率明显高于高表达者(n=117)（Logrank P-value=0.00343）；表明ABHD11-AS1可以作为胰腺癌的预后信息判断指标。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 江苏大学附属医院

<120> 一组与胰腺癌相关的LncRNA分子标记物及其应用

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 932

<212> DNA

<213> 人源(Homo sapiens)

<400> 1

ccctaagtcc cagcccttga gggtaagtgt tcttctgaac acagctgcct cgtccttccc 60

tgatgactgg gtgagaattc tttgctccct ggaggtccaa ataccctgcc cacgctgctt 120

gcattgaggc caggcagtgg ccacaccatc cacctcctct tcctttccat aggtccatga 180

gactggggca gcagcagggg caggtacaga gcacctcagc cgcctctcca cctgacagca 240

acatcaaagc cgaggccaag gcgggagggc ccagagtgag acacctcttc cagacaagac 300

ttggtcgctg cctcctcctc tgtcaccctg cgacacagcc cagagtacca ggcggctgga 360

gcactggggg acacccggac agaaccctcc ctggaccaag tcctccagga acgggatgaa 420

gccattgcca agtaagggga agctgctttt gggggctggg aggggagttg ggggctcccc 480

tgcagggcct tgtcctgcta atggaggagc ggggggctag tcaggcattc tggaaggaaa 540

gccacacaac cagctgccct tcactgaggc gggggctgtg gccatactcg tccaccccca 600

ggacctcaca accagaccca cagggtccga gcctcagcta ctctctctgc cacccacagg 660

aagcaggcgg tggaggcgga gctgcagaga tgcaaagcca ggctacacgc catggaggcc 720

cagctgctgg aggtcctgga ggagaaactg aggctgaggc gggagctgga ggcctgggag 780

gtaggggaat gccatcaggg cctgggaggt gtggggaaag agggcacagg ctcagccttg 840

aacctgctct cctgtccaca ggaggacgtg cagcagctgg tgtggcagca ggtccagaat 900

cagctgcaga gagaggccaa gggtactcgg gg 932

<210> 2

<211> 2669

<212> DNA

<213> 人源(Homo sapiens)

<400> 2

aaactcctga cctcaggtga tccatctgcc tcagcttccc aaagtgctgg gattacaggc 60

gtgagccacc gcacccggcc gttgaacgtt gatcacccga gagacttggc ttctcttcag 120

ccttagctgt gcaacctggg gtccagctca aatcgttgga atgtggaagt ccttcctctc 180

gccccgtcct gaggagcagc tgcaggagct tcatgagtgt tttcactgga acttgtggag 240

gagtttcctt tgatccctca tggagagacg gaagcatgag ggagccctca acatttattc 300

tgaagatgaa gagagtcctg cagctttttg gagtttgtga agtcagcccg gccctgtaca 360

gatgtggaaa ccgaggccca ggaagtttgt gagccagccc ggccctgtac aggtgtggaa 420

accgaggccc aggaagtttg tgagccagcc cggccctgta cagatgtgga aaccgaggcc 480

caggaagttt gtgagccagc ctggccctgt acagatgtgg aaaccgaggc gtaggaagga 540

agcccttctc tgacctcaga gctgaaatgg ccagtgctgg gtgggcattg aggggtcaca 600

cagaaaagaa tgtttcaggc catgttcagg ggatacttcc tgcagggccc ttggaaagtt 660

ccggagcgct tacattgtcc atgtgtgagt gtctcctctt tcttgcctgt gtggggtttt 720

ctcaaatgct ttgagttggc caaaccacag ttgtgcgcca cttaacagtg cggatacatt 780

ctgagaaaaa cctcgttagg tgatgtcgtc ttgcaaacat taaagagtgc atttacacaa 840

ggctggcagg cacggcctcc tgcaccccca ggctgtgtgc ccgggtgcca gagcctgggg 900

ctcctgggct gcagacctgc acagcctgtc acagcattta atcacatcca aacacggaaa 960

aggcaaaaac gtaaagatgc agtgttacaa tcctagggga ctcctgtcac ctgtgtggtc 1020

tgttcttgac tattgtgagt cactgacttt tccccctggg aaactacctt aacttgtctt 1080

caactgaaat tttttcagcc tgcaaagatg agttgtgcct cagaggttgc tcgtgttctg 1140

aggtgcctct tcaccactgc ctgtcaggct gctaaccaga gtgccccaga ccacagcaga 1200

agcgacagca gccaaggatc gggggagccc accctgctcc tgggtatctt tacggcaggc 1260

agcagagtaa cagcctcaga cttacctctt cagccagaga cccctcagcc caggaggagt 1320

gaggccgggc cagcagcggg ggcccgggaa gccccatgtc ttgggacctg ctggggcagg 1380

gccccctgga tgtcaggctg caggtccggc agctggggag gggatgaggg cctcccacca 1440

gctctgccca tcagccagat ccctgggaga ggcagcactt gctggccaca gagtcggccc 1500

cagtctcacc tggctcccct cccccaccag ctgggccctg cactgcccca gcccacgcgg 1560

cgcctcaccc ctccttgaca gaacagtatc tctgggacgg acaagttaat ccaagaccca 1620

cagtagccct ggatcccctg ggagaggtgg ctgcccagct ccagggccag cttggaggag 1680

ccaacttcaa aagcctccgc ctggcctgcc cctctgcagt cctccaggca gcctgtccag 1740

ggaagcggtt ggctggtgtt ggacctggtg cggcagtgca caccctgccc aaggacccca 1800

ggatcatgtg cgtggcctgc tggcgggagt gagggagggc aagaccctga aaggcccatg 1860

gtacccccta agcctgcact ctgggcgctc ctgctggcgc tgctggggac cgcgccaagc 1920

cgcgcctatt ccccggcctg cagcgtcccc gacgtgctcc gccactatcg cgccatcatc 1980

ttcgaggatc tgcaggccgc cgtgaagtgg ggcggggcgg gggccgaaaa gaccaggcca 2040

ggctccagac actttcattt catacagaaa aacctgacta gacccgggag ctcgggacgg 2100

cggggacggc ctcgggcctc ctgtggcgcc cagaaggagc acagtatcct cctgtccatc 2160

tcgtccctgg gtcggaccct gcgcggggcg gtggccgggg gccgccgcgg ggccctggag 2220

agagctgctt ggaccgtggc tgtgcgcacc gaggcggtga tgcggcgcca ctgcaggacg 2280

ctgcgccagc ggagccggcg gcccaagatg cgccctgccc ggcgtcgcgg cggccgaagg 2340

cagctcctgc tgcgcgccct ggacgccgtc gccacctgct gggagaagct cttcgcgctg 2400

cgcgccccgg cctccaggga ctcctagcgc ggcccgtcct ggccctgcgc ggggaggaga 2460

accagcgggg ccgcggcaga gcctggagac gcgcctcgtt ctgtagactt gttggtgacc 2520

tcggcccctc gctcgacgca gcccgcgctc cccggagggc ccaggacttg gagaagggag 2580

cgcgcctggc cgccgctggg tcacggagga ggcccgccct ccacgcgccg aaggcctcaa 2640

taaacggagc tggcgctgcg ggtccggca 2669

<210> 3

<211> 1101

<212> DNA

<213> 人源(Homo sapiens)

<400> 3

gcagccgcgc ccccagccgt atttccgcgg gcgctgagca ctagagagag cgtcttgtgg 60

ctgcggcctg cccctcagcc tcctccgcgc ggttacccct gtacccgccg ccatccgtcc 120

tggcgctccg gatgagtcaa tgaggggcag ggcccgagga gtggtcttcc caagaacccc 180

tggtggcctc ccaaggccgg tgctgtgtac ctcctccccg acaaaagggg aaactgaggc 240

cccgagggga gtgggaagag ccggctggac gtcaggccca gccgctggtg cagtggtccg 300

tcccctctgc cggggtgggc ccctcgggtt tcgcgtgtcc tcgggaaaga gactggcggg 360

cctcgtgggc tgtgcggcta tcctggagac agatgacagc tctcccttgg atggctttgc 420

tggttccgca ccagccagcg cccccatttt tcctgcagca ccctgatctg cactccctga 480

ggggctccca ctgtccgcgg tgtgaggatg tccctggata gtccactgtg tgcagaggca 540

tgggagttgt catgttggga acatgctaga cctcagtatc cttgagggat gctgccttgg 600

gtctggaaac tgttagagga aaccccaaga ggtgcaggca ctgagcctct caggacaatg 660

acctggggtc ccagctcccc tggaggggcc tcctcatgat tgtttggggg ttgatcacag 720

accaagagtg acgagtgatg tcaccctgtg actcatggct ggaccttctt gcccctattg 780

tctcagcaca acattattcg acttttccct cagcgtgggt gggcagagga aaagccctgt 840

ggctctgggg acttgggatc cagagttgaa gacccttcag ctggctctgc cctgccagtg 900

ccacagagtg ccatggccca ggaagacagg ttttcttcca tctaggccag gccatccagt 960

ggccatcctc cgtgtcctcc cgcctcctcc tggtgtgact tctgaaaacc aagaatttgt 1020

tcctgttgac tttttctgtg ctatggacca ttgtcctctc acccactcaa taaatcttga 1080

aacatgcaaa aaaaaaaaaa a 1101

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

atgaagccat tgccaagaag 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gcctctctct gcagctgatt 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

ccagctcaaa tcgttggaat 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

aactccaaaa agctgcagga 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

cgacaaaagg ggaaactgag 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

tccaagggag agctgtcatc 20

<210> 10

<211> 121

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

tattctggtg tcctaggcgt agaggaacca caccaatcca tcccgaactt ggtggttaaa 60

ctctactgcg gtgacgatac tgtaggggag gtcctgcgga aaaatagctc gacgccagga 120

t 121

Claims

1.LncRNA标记物在制备胰腺癌早期评估产品或筛选胰腺癌肿瘤诊断信息产品中的应用，其特征在于，所述的LncRNA标记物包括ABHD11-AS1和/或LINC00176，所述ABHD11-AS1的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示；所述LINC00176的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO：2所示。

2.根据权利要求1所述的应用，所述的LncRNA标记物还包括SNHG11，所述SNHG11的核苷酸序列如序列表中SEQ.ID.NO：3所示。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的ABHD11-AS1的特异性引物对，其上游引物核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：4所示，其下游引物核苷酸序列如序列表中SEQID NO：5所示。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的LINC00176的特异性引物对，其上游引物核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：6所示，其下游引物核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO：7所示。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的SNHG11的特异性引物对，其上游引物核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：8所示，其下游引物核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO：9所示。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括用荧光定量PCR方法、RNA测序技术、核酸杂交技术和/或核酸扩增技术检测待测样品中LncRNA标记物的相对量来诊断胰腺癌。

7.LncRNA标记物在制备胰腺癌患者术后疗效评估产品或辅助评估信息收集产品中的应用，其特征在于，所述LncRNA标记物为ABHD11-AS1，所述ABHD11-AS1的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。

8.LncRNA标记物在制备胰腺癌早期检测筛查辅助评估试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒包括特异性扩增LncRNA标记物ABHD11-AS1和/或LINC00176的一组或多组引物序列；所述ABHD11-AS1的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，所述LINC00176的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示。

9.LncRNA标记物在制备胰腺癌预后判断评估信息收集试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒包括特异性扩增LncRNA标记物ABHD11-AS1的引物序列，所述ABHD11-AS1的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。

10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括RNA稳定溶液、异丙醇、三氯甲烷、Trizol试剂、无酶水、随机逆转录引物、逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、逆转录酶和5SRNA内参特异性引物。