CN109371131A

CN109371131A - 一种诊断和治疗膀胱癌的分子标志物LncRNA DANCR及其用途

Info

Publication number: CN109371131A
Application number: CN201811441659.5A
Authority: CN
Inventors: 陈旭; 谢锐辉; 林天歆; 陈子月
Original assignee: Sun Yat Sen Memorial Hospital Sun Yat Sen University
Current assignee: Sun Yat Sen Memorial Hospital Sun Yat Sen University
Priority date: 2018-07-25
Filing date: 2018-11-28
Publication date: 2019-02-22
Anticipated expiration: 2038-11-28
Also published as: CN109371131B

Abstract

本发明公开了一种诊断和治疗膀胱癌的分子标志物，所述分子标志物为LncRNA DANCR。本发明还公开了所述分子标志物在筛选或制备用于诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂中的用途以及所述分子标志物在筛选或制备治疗膀胱癌药物中的用途。本申请发现LncRNA DANCR在淋巴结转移的膀胱癌病例中高表达，与患者总体生存预后呈负相关，是诊断膀胱癌、判断膀胱癌进展和生存预后的独立指标；且沉默LncRNA DANCR能够抑制膀胱癌细胞体外的增殖、细胞迁移和侵袭，以及体内的成瘤和淋巴转移。本申请首次证实LncRNA DANCR是膀胱癌的一个重要致癌因子，可作为膀胱癌预后诊断的分子标志物和治疗的新靶点。

Description

一种诊断和治疗膀胱癌的分子标志物LncRNA DANCR及其用途

技术领域

本发明属于分子诊断和生物医药技术领域，具体涉及一种诊断和治疗膀胱癌的分子标志物LncRNA DANCR及其用途。

背景技术

膀胱癌(Bladder Cancer，BCa)是我国泌尿男生殖系统最常见的恶性肿瘤。根据肿瘤细胞浸润深度分为非肌层浸润膀胱癌(Ta-1)和肌层浸润性膀胱癌(T2-4)，后者容易转移，进展和术后复发。膀胱癌致死的主要原因是转移，而淋巴转移是主要和首发的方式。淋巴转移是影响患者预后最重要的因素之一。一旦发生淋巴转移，5年生存率只有25-35％。因此，膀胱癌淋巴转移的早期诊断、准确预测和合理治疗对延长患者生存极为重要。虽然膀胱癌淋巴转移治疗取得了一些进展，但十几年来总体上患者生存率和生活质量提高并不明显。所以，临床上亟待发现预测膀胱癌淋巴转移和生存预后的标记物，以及开发减少或阻断膀胱癌转移的新治疗靶点。

近年来大量研究表明，长链非编码RNA(Long Noncoding RNA，lncRNA)是指转录本长度大于200个核苷酸、不编码蛋白的非编码RNA亚类。目前已知lncRNA作为功能蛋白质的诱导分子、诱饵分子、支架分子等多种方式，在染色质重构、基因转录、翻译及蛋白修饰等多重水平调控基因表达网络。lncRNA在多种恶性肿瘤中表达异常，并通过对下游靶基因的调控，在肿瘤发生、发展中行使着重要的癌基因或抑癌基因的功能。最近的研究发现lncRNA也在膀胱癌中发挥重要作用。例如linc-UNMIBC在膀胱癌中高表达而且与复发相关，linc-UNMIBC通过PRC2复合物调控调控细胞周期，促进膀胱癌细胞的增殖。linc-UBC1在膀胱癌组织中过表达，与淋巴结转移和生存预后密切相关，它通过PRC2复合物而促进膀胱癌细胞增殖和迁移能力。目前的研究虽然揭示了lncRNA参与了膀胱癌的增殖、转移、凋亡等生物学功能，但是仍未能清楚阐明膀胱癌淋巴转移的发生机制。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种诊断和治疗膀胱癌的分子标志物，所述分子标志物为LncRNA DANCR，本申请首次发现LncRNA DANCR是膀胱癌的一个重要致癌因子，可作为膀胱癌诊断和预后的分子标记物以及膀胱癌治疗的新靶点。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：LncRNA DANCR基因或其表达产物作为分子标志物在筛选或制备用于诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂或芯片中的用途。

所述LncRNA DANCR基因序列如SEQ ID NO:1所示，基因ID为57291。

本发明还提供了检测LncRNA DANCR基因表达产物的试剂在制备用于诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂盒中的用途。

优选地，所述检测LncRNA DANCR基因表达产物的试剂包括如SEQ ID NO:2所示的探针和/或如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的引物。

本发明还提供了一种诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂盒，包含如SEQ ID NO:2所示的探针和/或SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的引物。

本发明还提供了LncRNA DANCR基因或其表达产物作为靶点在筛选或制备用于治疗膀胱癌药物中的用途。

本发明还提供了LncRNA DANCR基因表达的抑制剂在制备治疗膀胱癌药物中的用途。

LncRNA DANCR基因表达的抑制剂，如小干扰RNA(siRNA),反义核苷酸(ASO)和CRISPR/Cas9基因编辑等，可通过抑制LncRNA DANCR基因表达或降低LncRNA DANCR表达水平来治疗膀胱癌。

优选地，所述抑制剂为抑制LncRNA DANCR基因表达的siRNA。

优选地，所述抑制LncRNA DANCR基因表达的siRNA选自siRNA1、siRNA2和siRNA3中的至少一种；所述siRNA1序列如SEQ ID NO:5所示；所述siRNA2的序列如SEQ ID NO:6所示；所述siRNA3的序列如SEQ ID NO:7所示。

本发明还提供了一种治疗膀胱癌的药物，所述药物包含LncRNA DANCR基因表达的抑制剂和药物学可接受的载体。

优选地，所述抑制剂为抑制LncRNA DANCR基因表达的siRNA。

优选地，所述治疗膀胱癌的药物的剂型包括注射剂型或口服剂型。

优选地，所述注射剂型包括注射液和冻干粉。

优选地，所述口服剂型包括片剂、粉剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂和溶液剂。

相对于现有技术，本发明的有益效果为：(1)本申请通过膀胱癌临床标本分析发现LncRNA DANCR在淋巴结转移的膀胱癌病例中高表达，与总体生存预后呈负相关，是诊断膀胱癌、判断膀胱癌进展和生存预后的独立指标；(2)通过体内外功能实验发现沉默LncRNADANCR能够抑制膀胱癌细胞体外的增殖、细胞迁移和侵袭，以及体内的成瘤和淋巴转移；(3)本申请首次发现LncRNA DANCR是膀胱癌的一个重要致癌因子，LncRNA DANCR可作为膀胱癌诊断和预后的分子标志物以及膀胱癌治疗的新靶点。

附图说明

图1为LncRNA DANCR在膀胱癌组织中的表达结果图，其中，图1A为LncRNA DANCR在膀胱癌组织和正常组织中的表达结果图；图1B为LncRNA DANCR在有淋巴结转移的膀胱癌组织和无淋巴结转移的膀胱癌组织中的表达结果图；图1C为LncRNA DANCR表达水平与膀胱癌患者存活率相关性分析结果图；图1D为LncRNA DANCR在细胞中的表达量和亚细胞定位结果图。

图2为沉默LncRNA DANCR抑制膀胱癌细胞的体外增殖能力结果图，其中，图2A为siRNA抑制LncRNA DANCR表达的实验结果图；图2B为MTT实验结果图；图2C为克隆形成实验结果图。

图3为沉默LncRNA DANCR抑制膀胱癌细胞体外的迁移和侵袭能力结果图，其中，图3A为细胞迁移实验结果图；图3B为细胞侵袭实验结果图。

图4为沉默LncRNA DANCR抑制膀胱癌细胞体内成瘤实验结果图，其中，图4A为肿瘤体积检测结果图；图4B为肿瘤重量检测结果图；图4C为肿瘤大小检测结果图。

图5为沉默LncRNA DANCR抑制膀胱癌细胞体内淋巴转移实验结果图，其中，图5A为阳性淋巴结检测结果图；图5B为肿瘤重量检测结果图。

具体实施方式

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

本申请中提及的细胞株及实验试剂等均有商品供应或以别的途径能为公众所得，它们仅做举例，对本发明不是唯一的，可分别用其他适合的工具和生物材料来代替。

实施例1LncRNA DANCR在膀胱癌中高表达，且与淋巴转移及预后不良相关

本实施例利用实时荧光定量PCR法和RNA荧光原位杂交法检测LncRNA DANCR在膀胱癌组织中的表达情况。

(一)RNA提取及逆转录-实时荧光定量PCR实验

1、总RNA提取：①组织RNA裂解：膀胱癌冰冻的新鲜组织是在液氮中研成小颗粒，再加1ml Trizol裂解液，轻轻吹打混匀使细胞充分裂解，裂解液转移至1.5ml EP管中，室温下静置5min。②细胞RNA裂解：吸去培养基，PBS洗2次，每10⁶个细胞加入1ml Trizol裂解液，轻轻吹打混匀使细胞充分裂解，裂解液转移至1.5ml EP管中，室温下静置5min。加入1/5体积的氯仿，剧烈振荡混匀，室温下静置至出现分层。12000rpm，4℃离心15min，此时EP管中的溶液分为三层，小心将最上层上清液(约400～500μl)转移至新的无RNA酶EP管，注意不要触及中间相和沉淀。沉淀RNA：加入与上清等体积的异丙醇(约400～500μl)，充分混匀后室温静置10min。4℃，12000rpm离心10min后弃去上清，得到RNA沉淀。加入75％乙醇1ml洗涤1次，4℃7500rpm离心5min，充分弃去乙醇，晾干至RNA完全变成透明。根据沉淀大小加入适量DEPC处理水，充分震荡混匀。RNA浓度和纯度检测：使用Nano drop 2000Spectrophotometer，首先用DEPC处理水调零，加入1μl RNA样品检测其浓度和纯度；如果OD260/OD280在1.9～2.1，说明RNA质量好，无蛋白质污染；如果OD260/OD280小于1.8，则表明RNA中存在蛋白质污染。

2、逆转录：采用逆转录试剂PrimerScript RT-PCR kit(TAKARA)进行。在无RNase的200μl PCR管中配制如表1所示的反应体系：

表1逆转录反应体系

上述溶液混匀后放入PCR仪中，温度设定为：37℃15min；85℃5s进行逆转录。产物用DEPC水稀释10倍后可用于后续PCR实验，可长期保存于-30℃。

3、荧光定量PCR：本实验采用Roche的SYBR Green PCR kit，LightCycler480Real-Time PCR仪进行荧光定量PCR实验。GAPDH为内参，定量方法选用2^-ΔΔct法。配制如表2所示的定量PCR体系。实验步骤：1)配总管：包括SYBR Green，水，上下游引物、充分混匀；2)总管内试剂加入96孔板中，每孔8μl；3)稀释后充分混匀的cDNA，每孔2μl；4)贴膜，离心，上机。反应条件：95℃预变性5min；45个扩增循环：95℃变性15s，56℃脱火15s，72℃延伸15s；72℃保持7min；溶解曲线：温度为55～95℃，1次/min。

表2荧光定量PCR反应体系

所述上游引物序列如SEQ ID NO:3所示；所述下游引物序列如SEQ ID NO:4所示：

SEQ ID NO:3：5’-TCGGAGGTGGATTCTGTTAGG-3’；

SEQ ID NO:4：5’-TCGGTGTAGCAAGTCTGGTGA-3’。

以此检测LncRNA DANCR基因的表达量。

检测结果如图1所示，LncRNA DANCR在膀胱癌组织表达高于正常组织(图1A)，在有淋巴结转移的癌组织中的表达高于无淋巴结转移的癌组织(图1B)；LncRNA DANCR表达水平较高的膀胱癌患者存活率相对较低(图1C)。上述结果表明，LncRNA DANCR基因的表达产物可作为诊断膀胱癌、判断膀胱癌进展和预后的分子标志物。

(二)RNA荧光原位杂交实验(RNA-FISH)

1、细胞培养：将细胞接种在共聚焦显微镜专用的10～15mm小皿中，实验前使细胞汇合度达到50％-60％。

2、细胞固定与通透：(1)1×PBS清洗细胞5min，1次；(2)4％多聚甲醛室温固定10min；(3)1×PBS清洗细胞共3次，每次5min；(4)每孔加入1mL预冷的0.5％Triton X-100的PBS，4℃静置10min；(5)弃去通透液后，加入1×PBS清洗细胞3次，每次5min。

3、探针杂交：(1)每孔加入200μL预杂交液，37℃预杂交30min；(2)预杂交期间，将杂交液在37℃预热；(3)避光，分别把2.5μL 20μM DANCR FISH探针储存液、2.5μL阳性对照18S FISH探针储存液加入到150μL杂交液中，充分混匀；(4)弃去预杂交液，加入150μL含有探针的杂交液，避光，37℃杂交过夜，注意保持杂交环境湿润；(5)避光，42℃，4×SSC，0.1％Tween-20洗涤细胞3次，每次5in；(6)避光，42℃，2×SSC洗涤细胞1次；(7)避光，42℃，1×SSC洗涤细胞1次；(8)避光，1×PBS洗涤细胞，室温摇动5min。

4、DNA染色、封片和拍照：(1)避光，DAPI染色液染色1min；(2)避光，1×PBS清洗细胞3次，每次5min；(3)彻底弃去PBS，滴加80μL荧光抗淬灭封片剂；(4)在荧光共聚焦显微镜63倍油镜下拍照。

所述DANCR FISH探针序列如SEQ ID NO:2所示：

SEQ ID NO:2：5’-GTGAACATGAAGCACCTGCT-3’。

以此检测LncRNA DANCR在细胞中的表达量和亚细胞定位。

检测结果如图1所示，LncRNA DANCR主要表达在膀胱癌细胞的胞浆位置(图1D)。

实施例2沉默LncRNA DANCR抑制膀胱癌细胞的体外增殖能力

本实施例分别利用siRNA1(si-DANCR-1)、siRNA2(si-DANCR-2)和siRNA3(si-DANCR-3)沉默LncRNA DANCR，同时利用si-Ctrl作为对照。所述siRNA1、siRNA2、siRNA3和si-Ctrl由上海吉玛合成。所述siRNA1序列如SEQ ID NO:5所示；所述siRNA2的序列如SEQID NO:6所示；所述siRNA3的序列如SEQ ID NO:7所示；所述si-Ctrl的序列如SEQ ID NO:8所示：

SEQ ID NO:5：5’-GCGUACUAACUUGUAGCAA-3’；

SEQ ID NO:6：5’-GAGCUAGAGCAGUGACAAU-3’；

SEQ ID NO:7：5’-GUUGACAACUACAGGCACA-3’；

SEQ ID NO:8：5’-CAACAAGAUGAAGAGCACC-3’。

1、膀胱癌细胞培养

膀胱癌细胞株UM-UC-3和T24购于美国模式培养物集存库(ATCC)，UM-UC-3使用DMEM培养基进行培养，T24使用RPMI-1640培养基进行培养。培养基中均含有10％的胎牛血清、50U/ml青霉素和50μg/ml链霉素。

2、细胞siRNA转染

用RNAiMAX Reagent试剂将siRNA1、siRNA2和siRNA3分别转染到膀胱癌细胞株UM-UC-3和T24细胞中，siRNA转染终浓度为75nM。具体步骤如下：

1)铺板：转染前24h，消化细胞，离心，重悬，计数。将细胞接种于6孔板中，每孔含完全培养基1.5ml，使转染前细胞汇合度达到50％～60％；

2)转染：将150pmol的siRNA加入125μl Opti-MEM I培养基中，震荡混匀；

3)吸取Lipofectamine RNAimax Reagent 5μl加入另一份125μl Opti-MEM培养基中混匀；

4)将上述两管液体震荡混匀，室温放置约15min；

5)将6孔板的培养基换为1ml完全培养基，上述250μl混合物加入上述6孔板中，液体总量为1250μl，siRNA浓度为75nM，加入后轻轻摇匀；

6)放置37℃，5％CO₂培养箱，第二天换液1次；继续孵育24～72h后进行后续实验；通过实时荧光定量PCR检测DANCR被抑制的效率，结果见图2A所示。

3、MTT实验

将转染或处理过的细胞用胰酶消化，离心，重悬，计数。UM-UC-3和T24细胞株每孔2×10³，100μl培养基接种于96孔板内，每组3个复孔，并另外设置1个只含培养基空白对照孔。加入MTS试剂20μl，避光继续培养2～4h。酶标仪(490nm波长)测每孔的OD值。每24h进行一次测量，总共6d。根据OD值绘制细胞增殖曲线，结果见图2B。

4、克隆形成实验

膀胱癌细胞株UM-UC-3和T24细胞转染、消化、离心、重悬、计数同前。制成单细胞悬液，每种细胞均以1000个/孔接种于6孔板中，每孔含2ml完全培养基培养，放入培养箱培养10-12d。10-12d后小心吸去培养基，多聚甲醛固定30min，然后用0.1％的结晶紫溶液(溶于纯水中)染色30min，用纯水冲洗干净，晾干。在40倍光学显微镜下拍摄图片用于计数和统计，结果见图2C。

实验结果如图2所示，由图2A可知，siRNA1、siRNA2和siRNA3均能显著沉默UM-UC-3和T24细胞中LncRNA DANCR的表达；由图2B和图2C可知，通过siRNA在膀胱癌细胞中沉默LncRNA DANCR表达后，能显著抑制膀胱癌细胞的体外增殖能力。

实施例3沉默LncRNA DANCR抑制膀胱癌细胞体外的迁移和侵袭能力

本实施例分别利用siRNA1(si-DANCR-1)、siRNA2(si-DANCR-2)和siRNA3(si-DANCR-3)沉默LncRNA DANCR，同时利用si-Ctrl作为对照。所述siRNA1、siRNA2、siRNA3和si-Ctrl同实施例2。

1、细胞迁移实验

(1)Transwell小室购自美国Corning公司，孔径为8μm，使用前先加入200μl含10％血清培养基到上室，使膜亲水化，加入细胞前吸去；

(2)对转染后48h的细胞培进行消化，用含1％血清的培养基重悬细胞，计数，调整浓度为4×10⁵/ml；

(3)在下室加入600μl含10％血清的培养基，上室加入200μl细胞悬液，继续在孵箱培养13小时；

(4)用镊子小心取出小室，吸干上室液体，移到预先加入约800μl多聚甲醛的孔中，室温固定30分钟；

(5)取出小室，吸干上室固定液，移到预先加入约800μl结晶紫染液的孔中，室温染色15-30分钟；

(6)轻轻用清水冲洗浸泡数次，取出小室，吸去上室液体，用湿棉棒小心擦去上室底部膜表面上的细胞；

(7)底面朝上晾干，显微镜下取5个随机视野计数，统计结果，结果见图3A。

2、细胞侵袭实验

(1)将基质胶(Matrigel，BD公司)在冰上融化，与含1％血清的培养基按1:3混合稀释，吸出80μl加入transwell的上室膜上，使铺均匀后吸出60μl。将小室放于37℃细胞培养箱约30分钟，基质胶凝固后方可使用；

(2)后续步骤与细胞迁移实验的(2)-(7)一致，结果见图3B。

实验结果如图3所示，通过siRNA在膀胱癌细胞中沉默LncRNA DANCR表达后，能显著抑制膀胱癌细胞的体外迁移能力(图3A)和侵袭能力(图3B)。

实施例4沉默LncRNA DANCR抑制膀胱癌细胞体内成瘤

本实施例以siRNA1(si-DANCR-1)为例，研究沉默LncRNA DANCR对膀胱癌细胞体内成瘤的抑制作用，同时利用si-Ctrl作为对照。所述siRNA1(si-DANCR-1)和si-Ctrl同实施例2。

动物实验获得中山大学动物伦理委员会的批准，在中山大学南校区实验动物中心屏障环境内进行。实验使用4-5周龄的裸鼠。UM-UC-3si-Ctrl和UM-UC-3si-DANCR-1细胞消化和使用PBS洗2次后进行计数，每只裸鼠予2×10⁶个细胞皮下注射，两组细胞各注射6只裸鼠。大约一周后可在皮下触及肿瘤小结节，此时开始每3天测量肿瘤长度、宽度和高度，并对应注射si-Ctrl和si-DANCR1。到第30d时使用颈椎脱臼处死裸鼠后，取出皮下肿瘤，并拍照、称重、记录。

实验结果如图4所示，结果表明，通过siRNA在膀胱癌细胞中沉默LncRNA DANCR表达后，能显著抑制裸鼠负荷的肿瘤生长；与对照组相比，肿瘤的体积(图4A)、重量(图4B)和大小(图4C)均被明显抑制。

实施例5沉默LncRNA DANCR抑制膀胱癌细胞体内淋巴转移

本实施例以siRNA1(si-DANCR-1)为例，研究沉默LncRNA DANCR对膀胱癌细胞体内淋巴转移的抑制作用，同时利用si-Ctrl作为对照。所述siRNA1(si-DANCR-1)和si-Ctrl同实施例2。

UM-UC-3si-Ctrl和UM-UC-3si-DANCR-1细胞消化和使用PBS洗2次后进行计数，每只小鼠予4×10⁶个细胞裸鼠下肢足垫注射，两组细胞各注射5只小鼠。大约一周后可在皮下触及足垫小结节，每3天对应注射si-Ctrl和si-DANCR-1。到第30d时使用颈椎脱臼处死裸鼠后，解剖取出腘窝淋巴结，并拍照、称重、记录，通过病理学分析明确有无淋巴结转移。

实验结果如图5所示，结果表明，通过siRNA在膀胱癌细胞中沉默LncRNA DANCR表达后，能显著抑制裸鼠体内的淋巴转移，阳性淋巴结数量显著下降(图5A)，肿瘤重量显著降低(图5B)。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 中山大学孙逸仙纪念医院

<120> 一种诊断和治疗膀胱癌的分子标志物LncRNA DANCR及其用途

<130> 2018.7.10

<160> 8

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 915

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

gcccttgccc agagtcttcc cgggattggc tgcgggcctc gcgaccctcc tgcttccctc 60

cccgccccgc gccgcctctc tggtttgtgc gcccgtcgca ggtcgcaggc ctctttgtca 120

gctggagttg cgcgggctga cgcgccacta tgtagcgggt ttcgggcggg ccacgcgtgc 180

gggacaggaa cccaacccca gccgaccttg agctccagga gttcgtctct tacgtctgcg 240

gaagtgcagc tgcctcagtt cttagcgcag gttgacaact acaggcacaa gccattgaag 300

ctggaatgtc ctgttgctgg tatttcaatt gacttaagcc aactatccct tcagttacaa 360

taggaaagtg cctctaataa ggccaaatat gcgtactaac ttgtagcaac cacgtgtccg 420

tgcagtgcca caggagctag agcagtgaca atgctggtgg caacagggca gtgtagcagg 480

tgcttcatgt tcaccttttc aaccttttca tttaattgtc acaactcgga ggtggattct 540

gttagggaca ggctgcccca ggaccactcc gcccccgcta actcaatgca gctgaccctt 600

accctgaata ctctgcagct gcattcctga accgttatct aggcgctata gcaaggtcac 660

cagacttgct acaccgaagc cctctgggtg gcacggggga ggtcatgaga aacgtggatt 720

acaccccctt gtaaattcct attttcacaa gataatatat tgtaagccgg tcatgagatt 780

atatgtggta aagttaattg actaacaacc ccagggtctc tctcccccat ataaacccct 840

cattttgtaa gctcagggct gccacctccg actggtggag aagcctggca ggttaataaa 900

cttacttggc ctgac 915

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 2

gtgaacatga agcacctgct 20

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<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 3

tcggaggtgg attctgttag g 21

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 4

tcggtgtagc aagtctggtg a 21

<210> 5

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工合成

<400> 5

gcguacuaac uuguagcaa 19

<210> 6

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工合成

<400> 6

gagcuagagc agugacaau 19

<210> 7

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工合成

<400> 7

guugacaacu acaggcaca 19

<210> 8

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工合成

<400> 8

caacaagaug aagagcacc 19

Claims

1.LncRNA DANCR基因或其表达产物作为分子标志物在筛选或制备用于诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂或芯片中的用途。

2.检测LncRNA DANCR基因表达产物的试剂在制备用于诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂盒中的用途。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述检测LncRNA DANCR基因表达产物的试剂包括如SEQ ID NO:2所示的探针和/或如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的引物。

4.一种诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂盒，其特征在于，包含如SEQ ID NO:2所示的探针和/或SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的引物。

5.LncRNA DANCR基因或其表达产物作为靶点在筛选或制备用于治疗膀胱癌药物中的用途。

6.LncRNA DANCR基因表达的抑制剂在制备治疗膀胱癌药物中的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述抑制剂为抑制LncRNA DANCR基因表达的siRNA。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述抑制LncRNA DANCR基因表达的siRNA选自siRNA1、siRNA2和siRNA3中的至少一种；所述siRNA1序列如SEQ ID NO:5所示；所述siRNA2的序列如SEQ ID NO:6所示；所述siRNA3的序列如SEQ ID NO:7所示。

9.一种治疗膀胱癌的药物，其特征在于，所述药物包含抑制LncRNA DANCR基因表达的抑制剂和药物学可接受的载体。

10.根据权利要求9所述的治疗膀胱癌的药物，其特征在于，所述抑制剂为抑制LncRNADANCR基因表达的siRNA。

11.根据权利要求10所述的治疗膀胱癌的药物，其特征在于，所述抑制LncRNA DANCR基因表达的siRNA选自siRNA1、siRNA2和siRNA3中的至少一种；所述siRNA1序列如SEQ ID NO:5所示；所述siRNA2的序列如SEQ ID NO:6所示；所述siRNA3的序列如SEQ ID NO:7所示。