CN109369795B - 一种调控巨噬细胞免疫功能活性的蛋白质及其应用 - Google Patents

一种调控巨噬细胞免疫功能活性的蛋白质及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种调控巨噬细胞免疫功能活性的蛋白质及其应用，属于生物技术领域。本发明蛋白质的氨基酸序列见序列表SEQ ID NO.1，本发明首次筛选并验证了PvEXP100蛋白在调节巨噬细胞免疫方面的应用，将PvEXP100蛋白作用于未活化的RAW264.7巨噬细胞，可显著增强RAW264.7巨噬细胞分泌NO、IL‑2、IL‑6、TNF‑α的能力，使IL‑6、TNFα、IL‑2和iNOS的mRNA水平分别上调8.2～47.72倍，具有广阔的应用前景。

Description

一种调控巨噬细胞免疫功能活性的蛋白质及其应用
技术领域
本发明涉及一种调控巨噬细胞免疫功能活性的蛋白质及其应用，属于生物技术领域。
背景技术
免疫是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质(如病菌等)，或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体的健康。抵抗或防止微生物或寄生物的感染或其它所不希望的生物侵入的状态。因此，免疫力被定义为人体识别和排除异己成分的生理反应，人体内执行这一功能是免疫系统。在当代社会，随着社会的进步发展，生活压力也进一步增加，很大一部分人群处于高幅度压力之下，长期会导致机体免疫功能下降，即免疫力降低。在此不健康状态下，机免疫系统不能正常发挥保护作用，极易招致细菌、病毒、真菌等感染，极易生病；机体的消耗加大，体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现，长此以往会导致身体和智力发育不良，还易诱发重大疾病。因此增强机体免疫功能是当今社会必须重视的一个现状问题。
巨噬细胞属免疫细胞，是一种极具异质性的细胞群体，广泛分布在机体组织器官中，在炎症反应、病原体防御和损伤修复中有均发挥重要作用，并能够作为抗原递呈细胞提呈抗原激活免疫应答。巨噬细胞存在一系列连续的功能状态，而M1和M2型巨噬细胞是这已连续状态的两个极端。其中M1型巨噬细胞通过分泌促炎症细胞因子，并专职提呈抗原，参与正向免疫应答，例如M1型巨噬细胞能够分泌NO、TNF-α、IL-6、IL-12等促炎因子，参与病原微生物的清除；而M2型通过分泌抑制性细胞因子IL-10和/或TGF-B等下调免疫应答,在免疫调节中发挥重要作用，例如，则大量分泌IL-10和TGF-β等抗炎因子，参与炎症的消解、组织重塑、血管生成。因此探索调控巨噬细胞定向极化靶点在临床治疗中有非常重要的意义。
疟疾是伴随人类出现最早的疾病，至今仍是全球范围内最重要的感染性疾病之一。目前关于疟疾的研究大多数集中在不同种属疟原虫入侵机制和疟疾疫苗的研发，而对疟原虫的药用价值或潜在的临床应用价值研究较少。疟原虫主要通过虫体表面或内部携带的蛋白与肝细胞或红细胞表面受体结合后侵入到机体内。本课题组在对间日疟原虫蛋白进行分析筛选发现PvEXP100是一个的输出蛋白，目前PvEXP100对巨噬细胞的作用尚未见相关研究。
发明内容
本发明的第一个目的是提供重组PvEXP100蛋白在制备调控巨噬细胞的产品方面的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述应用包括制备调控巨噬细胞的药物。
在本发明的一种实施方式中，所述应用包括促进未活化巨噬细胞向M1型方向极化。
在本发明的一种实施方式中，所述药物包括但不限于免疫调节剂。
在本发明的一种实施方式中，所述巨噬细胞为未活化的巨噬细胞，包括但不限于RAW264.7细胞。
本发明的第二个目的是提供制备PvEXP100重组蛋白的方法，所述方法是将来源于疟原虫的PvEXP100蛋白在体外表达。
在本发明的一种实施方式中，所述方法包括如下步骤：
(1)设计引物，扩增编码所述PvEXP100蛋白的基因，将该基因片段连接到载体上，获得重组质粒；
(2)将重组质粒转化到相应的表达细胞中，诱导目的蛋白表达。
在本发明的一种实施方式中，所述方法具体包括如下步骤：
(1)设计引物，用如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示引物扩增编码所述PvEXP100蛋白的基因片段，将扩增的基因片段连接到载体上，得到的重组质粒转化到克隆细胞中，提取重组质粒并测序；
(2)将测序正确含有目的基因的重组质粒转化到相应的表达细胞中，用IPTG诱导目的蛋白表达。
在本发明的一种实施方式中，所述表达载体可以为原核细胞表达载体、真核细胞表达载体或昆虫细胞表达载体。
在本发明的一种实施方式中，所述的表达细胞可以为原核表达细胞、真核表达细胞或昆虫细胞。
在本发明的一种实施方式中，所述表达载体为pET28a(+)，所述表达细胞为E.coliBL21(DE3)。
本发明的第三个目的是提供一种抗肿瘤的药物，其含有SEQ ID NO.1所示PvEXP100蛋白，及药学上可接受的载体。
本发明还要求保护所述PvEXP100蛋白在制备非医药用途的产品方面的应用。
有益效果：本发明首次筛选并验证了PvEXP100蛋白在调节巨噬细胞免疫方面的应用，Western Blot结果显示PvEXP100蛋白可显著的促进未活化的RAW264.7巨噬细胞向M1型巨噬细胞方向极化。将PvEXP100蛋白作用于未活化的RAW264.7巨噬细胞，可显著增强RAW264.7巨噬细胞分泌NO、IL-2、IL-6、TNF-α的能力，使IL-6、TNFα、IL-2和iNOS的mRNA水平分别上调8.2倍、9.4倍、11.87倍和47.72倍。
附图说明
图1为PvEXP100蛋白考马斯亮蓝染色示意图(A)和Western blotting检测图(B)；
图2为细胞流式法检测PvEXP100对RAW264.7细胞极化的影响；
图3为Elisa法检测PvEXP100对RAW264.7细胞分泌IL-2、IL-6、TNF-α的影响；
图4为Griess法检测PvEXP100对RAW264.7细胞分泌NO的影响；
图5为RT-PCR法检测PvEXP100对RAW264.7细胞iNOs、IL-2、IL-6、TNF-α基因表达量的影响。
具体实施方式
实施例1 PvEXP100重组质粒的构建
原核表达质粒pET28a(+)、宿主菌BL21(DE3)及诱导用的IPTG均购自北京全式金生物科技有限公司；限制性内切酶、T4DNA连接酶、pfu DNA聚合酶、dNTP均购自TakaRa公司。引物的合成和核苷酸序列测序均由苏州金唯智生物科技有限公司完成。琼脂糖亲和介质镍柱(Ni)购自QIAGEN公司。；His-Taq标签抗体购自Cell Signaling Technology公司。
设计引物通过PCR获取间日疟原虫PvEXP100蛋白的基因序列，引物如下：SEQ IDNO.3：GGATCCATGTTCTGGAAAGTAAAGGGG；SEQ ID NO.4：CTCGAGCAAAAGAAGGGCAACCATCAG，其中GGATCC为SEQ ID NO.3的酶切位点BamHⅠ；CTCGAG为SEQ ID NO.4的酶切位点XhoⅠ。
以间日疟原虫基因组为模板，通过PCR扩增获得间日疟原虫PvEXP100基因序列，扩增程序：94℃预变性3min，94℃变性10s、50℃退火30s、72℃延伸90s，循环35次，最后72℃延伸10min。
PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测目的基因扩增条带，然后经过胶回收后，用BamHⅠ及XhoⅠ限制性内切酶对PCR产物及pET28a(+)37℃酶切2h，通过T4连接酶将目的基因过夜连接到原核表达载体pET28a(+)。
将连接的重组质粒转化E.coli DH5α感受态细胞：
从-80℃取出E.coli DH5α细胞。立即放置于冰上,取连接的产物4μL加入到50μl感受态细胞中，混匀冰浴30min，42℃热激90后取出置于冰浴中2min。在管中加入无抗性的LB培养基1ml，放入37℃摇床中250rpm振荡培养1h。离心后取100μl培养基将菌体重悬，涂匀在含卡那霉素(50μg/ml)的LB平板上置于37℃孵箱中倒置培养过夜后观察菌落生长情况。挑取单克隆，提取质粒后进行测序。
实施例2重组蛋白PvEXP100的表达
将测序正确的阳性单克隆接种5ml含卡那霉素的LB培养基，37℃培养过夜，将菌液接种于新鲜500ml含卡那霉素的LB培养基中，当OD600为0.6-0.8时，加入1mmol/L IPTG，诱导8h。取诱导的PvEXP100进行超声破碎裂解，经10％SDS-PAGE电泳分析表明PvEXP100蛋白主要定位于包涵体中，分子量大小与预期相符。
通过8M尿素溶解包涵体释放PvEXP100蛋白，该蛋白在碳末端带有His-tag标签，因此采用GE公司的His-tag镍柱，按试剂盒说明书进行Ni2+亲和色谱纯化。用不同浓度的咪唑将蛋白提纯，咪唑的浓度分别为20mM、50mM、100mM、150mM和250mM，150mM咪唑洗下的蛋白经12％SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝染色验证分析。并进一步用Western Blot分析目的蛋白纯度。
考马斯亮蓝染色结果显示所得纯化产物为目的蛋白，分子量大小与预期相符。WesternBlot结果显示所表达蛋白的纯度较高、特异性强，见附图1。
实施例3 PvEXP100蛋白促进巨噬细胞RAW264.7极化
取对数期RAW264.7细胞用含有10％胎牛血清(FBS)的DMEM培养基调整细胞浓度为5×105个/mL，以每孔1mL接种于6孔板，置5％CO2，37℃培养箱中培养6h，待细胞贴壁后弃上清，PBS缓冲液清洗除去未贴壁细胞。样品组分别加入1mL 20μg/mL的PvEXP100，空白组加入等体积培养基。继续培养24h后，收集细胞，用AF647-CD80和PE-PD-L1进行荧光染色后，上机检测。结果见附图2，可见与空白对照组相比较，经PvEXP100处理过的巨噬细胞开始表达CD80和PD-L1，说明PvEXP100蛋白可显著的促进未活化的RAW264.7巨噬细胞向M1型巨噬细胞方向极化。
实施例4 PvEXP100蛋白促进RAW264.7细胞分泌NO、IL-2、IL-6、TNF-α
取对数期RAW264.7细胞用含有10％FBS的DMEM培养基调整细胞浓度为5×105个/mL，以每孔100μL接种于96孔板，置5％CO2，37℃培养箱中培养6h，待细胞贴壁后弃上清，PBS缓冲液清洗除去未贴壁细胞。样品组分别加入100μL不同浓度(5、10、20μg/mL)的PvEXP100，空白组加入等体积培养基。继续培养24h后，收集上清液，用相应Elisa试剂盒检测NO、IL-2、IL-6、TNF-α分泌量。在样品浓度范围内，与空白对照组相比较，实验组TNFα、IL-6、IL-2分泌量显著上调。实验组中TNFα和IL-6两种细胞因子的最大分泌量相比较空白组分泌提高了19.87倍和3.29倍；另外相比较空白组无分泌的情况，实验组中IL-2分泌量最高达到了3.21pg/mL(附图3)。实验组释放的NO相比较空白组提高了3.93倍(附图4)。
实施例5 PvEXP100蛋白促进RAW264.7细胞iNOs、IL-2、IL-6、TNF-α基因的表达
(1)取对数期RAW264.7用含有10％FBS的DMEM培养基调整细胞浓度为1×106个/mL，以每孔1mL接种于6孔板，置5％CO2，37℃培养箱中培养6h，待细胞贴壁后弃上清，PBS缓冲液清洗除去未贴壁细胞。样品组分别加入1mL 20μg/mL的PvEXP100，空白组加入等体积培养基。继续培养24h后，采用RNA提取试剂盒收集各组细胞RNA。进一步按照cDNA逆转录试剂盒说明书将RNA反转录合成DNA。
(2)参考文献合成如下引物
Figure GDA0002554873500000051
(3)RT-PCR
反应体系如下所示
SYBR Green 10μL
ROX 0.4μL
cDNA 1μL
上游引物 0.5μL
下游引物 0.5μL
ddH<sub>2</sub>O 补足20μL
PCR反应条件(两步法)：95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火及延伸30s，40个循环；溶解曲线10℃Hold；反应结束后，计算基因的相对表达量。
结果见附图5，相比较空白组，IL-6、TNFα、IL-2和iNOS的mRNA水平上调了8.2倍、9.4倍、11.87倍和47.72倍。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 江南大学
<120> 一种调控巨噬细胞免疫功能活性的蛋白质及其应用
<160> 4
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 936
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Met Phe Trp Lys Val Lys Gly Arg Ala Phe Ala Phe Val Phe Leu Ser
1 5 10 15
Tyr Ala Ser Phe Val His Ser Asp Lys Ala Val Asn Leu Gly Asn Ala
20 25 30
Leu Ala Gly Gly Ile Ser Gly Gly Ile Ser Gly Gly Ile Ser Gly Gly
35 40 45
Leu Ser Ser Gly Leu Ala Ser Gly Ile Ser Gly Gly Leu Ser Asn Ser
50 55 60
Ala Ala Ala Ser Thr Ala Leu Leu His Ala Ala Val Gly Lys Gly Pro
65 70 75 80
Asn Met His Thr Cys Gln Ser Ala Gly Cys Ala Ser Tyr Lys Ser Ile
85 90 95
Thr Pro Ser Asp Ala Gly Asp Cys Leu Asn Gly Phe Ile Cys Lys Glu
100 105 110
Cys Lys Arg Thr His Ala Lys Asn Pro Asn Ile Cys Phe Tyr Ser Ser
115 120 125
Leu Gln Gly Phe Glu Ser Leu Tyr Glu Ala His Leu Glu Asp Phe Thr
130 135 140
Gln Pro Thr Pro Tyr Asp Arg Phe Asn Val Pro Leu Val Lys Ser Ser
145 150 155 160
Lys Gly Glu Asn Asn Arg Gly Asp Ala Ser Ser Asp Ser Gly Arg Glu
165 170 175
Val Ser Pro Asn Asp Glu Ser Gly Asp His Arg Arg Gly Ser Leu Ser
180 185 190
Gln Gly Gly Asp Asp Asp Gly Glu Lys Gly Asp Leu Gln Arg Ser Gly
195 200 205
Arg Asp Gly Lys Ala Gly Gly Ser Arg Phe Pro Arg Ala Leu Glu Glu
210 215 220
Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ala
225 230 235 240
Lys Glu Lys Arg Gly Gly His Lys Gly Gly Asn Ser Pro Gln Gly Gly
245 250 255
Asn Asn Gly Gly Asn Asn Phe Asp Ala Gly Tyr Glu Thr Glu Ser Phe
260 265 270
Leu Gln Lys Ser Pro Asp His Val His Arg Lys Gly Asp Leu His Lys
275 280 285
Leu Ala Lys Glu Gly Gly Arg Glu Gln His Thr Asn Ala His Met His
290 295 300
Ile His Thr His Met His Thr His Thr His Asn Glu Leu Met Ser Gly
305 310 315 320
Lys Glu Gly Leu Leu Ser Ser Val Glu Thr His Val Arg Leu Gly Ile
325 330 335
Ser Glu Gly Gly Tyr Asn Arg Gly Ala Ser Glu Ser Pro Gly Arg His
340 345 350
Ser Gly Val Ser Ser Gly Ala Ser Val Ser Met Gly Thr Ala Ala His
355 360 365
Gly Gly Thr Ala Ala Glu Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Glu Ser Glu Arg
370 375 380
Gly Lys Glu Lys Ile Val Tyr Lys Arg Leu Lys Ile Ser Leu Asn Asn
385 390 395 400
His Glu Glu Tyr Phe Lys Ser Lys Met Asn Lys Cys His Val Gly Gly
405 410 415
Asp Gly Val Ala Thr Leu Tyr Val Lys Val Leu Leu Gln Ile Val Lys
420 425 430
Asp Lys Asn Asp Val Tyr Val Asp Val Ser Arg Arg Ser Gly Ser Ser
435 440 445
His Met Ser Pro Gly Ser Gly Gly Gln Lys Gly Lys Glu Gly Lys Lys
450 455 460
Ala Asn Gly Arg Ser Glu Ser Gly Lys Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp
465 470 475 480
Ala Glu Glu Ser Asp Asp Asp Glu Tyr Met Arg Lys Ser Gln Ser Ala
485 490 495
Met Gly Gly Gly Gly Tyr Gly Tyr Arg Ser Gly Ala Glu Thr Asp Ser
500 505 510
Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Gly Gly Arg Ala Ala Val Asn
515 520 525
Arg Tyr Ala Tyr Val Glu Leu His Gly Gly Ala Gln Asn Lys Ala Ala
530 535 540
Asn Glu Ala Ala Asn Asp Ala Ala Thr Trp Gly Ala Ala Lys Glu Pro
545 550 555 560
Leu Ser Leu Leu Gln Val Arg Glu Asp Leu Asp Gly Asp Ser Met Gly
565 570 575
Asn Tyr Tyr Lys Ser Arg Asn Gly Phe Phe Lys Ser Ile Phe Lys Arg
580 585 590
Val Phe Lys Lys Lys Gly Asp Ser Asp Glu Asp Ala Gly Gly Gly Asp
595 600 605
Asp Glu Asp Ser Asp Glu Glu Pro Gln Gly Gly Lys Lys Lys Arg Arg
610 615 620
Trp Arg Phe Pro Trp Lys Arg Arg Arg Gly Lys Gly Ser Gln Leu Gln
625 630 635 640
Gly Gly Asp Asp Asn Asp Asp Glu Gly Glu Ser Glu Asp Glu Ser Arg
645 650 655
Ser Thr Arg Arg Arg Arg Gly Gly Arg Arg Gly Leu Phe Gly Arg Ser
660 665 670
Asn Arg Lys Gly Arg Gly Lys Gly Arg Asp Glu Ser Asp Asp Gly Asp
675 680 685
Asp Gly Glu Glu Gly Glu Asp Ser Asp Asp Glu Glu Ala Ser Gly Gly
690 695 700
Ser Gly Gln Arg Gly Ala Lys Lys Gly Lys Arg Asn Gly Lys Gly Ser
705 710 715 720
Gly Thr Lys Gly Gly Arg Phe Glu Glu Thr Lys Ser Lys Met Gly Ser
725 730 735
Leu Phe Ala Lys Val Lys Arg Lys Ile Leu Pro Val Lys Gln Lys Leu
740 745 750
His Ile Glu Ala Phe Phe Asn Ser Ile Ile Val Lys Ser Cys Arg Asn
755 760 765
Ala Leu Lys Trp Glu Gly Asn Met Phe Arg Lys Gln Ser Leu Val Glu
770 775 780
Met Thr Leu Lys Val Pro Val Lys Leu Lys Tyr Ile Lys Gly Glu Pro
785 790 795 800
Leu His Phe Phe Arg Ser Gly Tyr Glu Val Ile Leu Thr Cys Arg Asn
805 810 815
Cys Asp Glu Val Leu Phe Asn Ser Cys Val Gln Val Tyr Cys Ala Lys
820 825 830
Arg Ala Ser Lys Glu Glu Arg Ala Val Ala His His Gly Gly His Ala
835 840 845
Asp Gly Gly Ala Leu Gly Ser Gly Ala Thr Ala Ala Ala Ile Thr Ala
850 855 860
Ala Ser Thr Ala Ala Ala Thr Ala Ala Ala Ser Pro Ala Ser Pro Tyr
865 870 875 880
Leu Tyr Ser Ala Ser Pro Ser Asp Val Ser Pro Leu Ala Met Ile His
885 890 895
Tyr Asn Gly Gln Tyr Phe Pro Gly Ser Val Thr Pro Glu Ala Asp Tyr
900 905 910
Phe Ser Ser Asp Gly His Met Cys Val Ser Tyr Ser Val Val Leu Val
915 920 925
Thr Leu Met Val Ala Leu Leu Leu
930 935
<210> 2
<211> 2811
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
atgttctgga aagtaaaggg gagggccttc gcgttcgtct tcctctcata cgccagcttc 60
gtgcattcgg ataaagcggt taacctgggg aatgcgctgg cgggggggat tagcgggggg 120
attagcggcg gaattagcgg cgggttgagc agcggtttgg ccagcggaat aagcggcgga 180
cttagcaact ccgccgccgc ttcgaccgcc ctgctgcacg cggccgtggg gaagggaccc 240
aacatgcaca cgtgccagtc ggccgggtgc gcctcataca agagcatcac gcccagcgat 300
gcaggagact gcctaaacgg gttcatctgc aaggagtgta aaagaaccca cgcgaagaac 360
ccaaacatct gcttctactc ctccctccaa ggatttgaaa gtttatatga agcacatcta 420
gaggatttta cacaaccaac gccctacgac cgtttcaacg tcccattggt taagtccagc 480
aaaggggaga acaacagggg ggacgcctca agtgacagtg gtagggaggt ctcccctaat 540
gacgaatcgg gggatcaccg cagaggcagt ctctcacaag gaggagacga cgatggagag 600
aagggggacc tccaacgcag tggcagggat ggcaaagcag gaggtagtcg cttcccacgg 660
gcgttagaag aagaggaaga agaagaggag gaggaggaag acgacgacga cgactctgcg 720
aaagaaaaac gtggtggaca taaagggggc aactcccctc agggggggaa caacggaggg 780
aacaatttcg acgcaggtta cgaaacggag tcatttctgc agaaatcgcc tgaccatgtt 840
catagaaaag gtgatctaca caagttggcg aaagaggggg ggcgggagca gcacacaaac 900
gctcacatgc atatacacac gcacatgcac actcacacgc ataacgaatt gatgtccgga 960
aaagagggac tccttagctc ggtggagacg cacgtgcggc ttggcatcag tgaggggggc 1020
tacaacaggg gagcgtccga atctccgggg aggcacagcg gcgtgagcag cggtgcctct 1080
gtcagcatgg gcaccgctgc tcatggaggc actgctgctg agagtggcta ctccttcgcc 1140
gagtccgagc ggggcaaaga aaaaatcgtc tacaagcgac tcaaaataag cctgaacaat 1200
cacgaggagt atttcaaaag caaaatgaat aagtgtcacg tgggggggga cggagtggcc 1260
actctgtatg tgaaggtgct gctgcagatt gttaaggata agaacgacgt ctatgtggac 1320
gtgagtagga ggagcggctc gtctcacatg agcccagggt cgggtgggca gaaggggaag 1380
gaagggaaga aggcaaacgg gaggagcgaa tcggggaagg aagaggagga agaagaggac 1440
gcggaagaga gtgacgacga tgagtacatg cggaagtctc aaagcgccat ggggggggga 1500
gggtacggtt accgctcagg cgcggagacg gacagcgata gcgacagcga cagcgacagc 1560
gatggggggc gcgcggcggt gaataggtac gcctacgtgg agctgcacgg gggggcgcaa 1620
aacaaagcgg cgaacgaagc ggcgaacgat gcggctacct ggggggcggc gaaggaaccg 1680
ctctccctcc tccaggtgag ggaggacctg gacggagact ccatggggaa ctactacaag 1740
tcgcgcaacg ggttcttcaa atcgattttc aaacgggttt ttaaaaaaaa aggagactcg 1800
gatgaagacg cagggggggg ggacgacgag gacagtgatg aggagcccca gggggggaag 1860
aagaagcgga ggtggagatt cccctggaag agacgaaggg ggaagggcag ccaactgcag 1920
ggcggcgacg acaatgacga cgagggcgag agcgaggatg agtcacgcag cacaagacgt 1980
aggaggggag gcaggcgggg gctattcggt cggtccaatc gaaagggcag aggcaaaggg 2040
agagacgaaa gtgatgatgg cgatgacggc gaagaaggcg aagactcaga cgatgaagag 2100
gccagtgggg gcagtggaca aaggggggca aaaaaaggaa aacgaaacgg taagggaagc 2160
ggaaccaagg ggggcagatt cgaggagacc aaatcaaaaa tgggtagcct ctttgccaaa 2220
gtgaagagga agattctccc cgtaaaacaa aaactacaca tagaggcgtt cttcaatagc 2280
atcatcgtaa agtcatgtag gaatgccctc aagtgggagg gcaacatgtt tcggaagcag 2340
tcgctcgtcg agatgactct caaggtcccg gttaaactga aatacataaa gggggagcct 2400
ctgcatttct tccgttcggg ctacgaagtc attttaactt gccgcaactg cgatgaggtt 2460
ctcttcaact cgtgtgtgca ggtctactgc gccaagcgag cgagcaaaga ggaacgggcg 2520
gtggcgcacc acggcgggca cgcggacgga ggagccctgg ggagcggcgc aaccgcagct 2580
gccattactg ccgcttccac tgctgccgcc actgccgctg cttcccccgc atcgccgtac 2640
ctttactcgg cgagcccgtc cgacgtctcc ccgctggcaa tgatccatta caacgggcag 2700
tacttccccg gcagtgtaac ccccgaggca gactacttca gcagcgatgg gcacatgtgc 2760
gttagctact cggtcgttct cgtcacgctg atggttgccc ttcttttgta g 2811
<210> 3
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ggatccatgt tctggaaagt aaagggg 27
<210> 4
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
ctcgagcaaa agaagggcaa ccatcag 27

Claims (3)

1.PvEXP100蛋白在制备促进未活化的巨噬细胞RAW264.7向M1型方向极化的产品方面的应用，其特征在于，所述PvEXP100蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为药物。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物包括但不限于免疫调节剂。
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